RU2846108C1 - Способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови - Google Patents

Abstract

Группа изобретений относится к способам получения богатой тромбоцитами плазмы крови. Способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови, характеризующийся взятием венозной крови в объеме 11 мл, смешиванием венозной крови в первичных пробирках с ингибитором коагуляции цитратом натрия 3,2 % объемом 1 мл; затем первичные пробирки подвергают первому этапу центрифугирования с центробежной силой 115 G в течение 5 минут, при этом первичные пробирки устанавливают в центрифуге напротив друг друга по диагонали; в течение 1 минуты после первого этапа центрифугирования из первичных пробирок извлекают плазму, готовую рабочую форму плазмы переносят в шприцы перед введением в ткани. Способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови, характеризующийся взятием венозной крови в объеме 22 мл в две первичные пробирки, смешиванием венозной крови в первичных пробирках с ингибитором коагуляции цитратом натрия 3,2 % объемом 1 мл, которые затем подвергают первому этапу центрифугирования, после которого из первичных пробирок извлекают плазму с высоким содержанием тромбоцитов объемом по 2-3 мл во вторичные пробирки, которые подвергают второму этапу центрифугирования с центробежной силой 1000 G в течение 12 минут; после окончания второго этапа центрифугирования полученную плазму разделяют вертикально на 3 части, нижнюю 1/3 часть плазмы подвергают суспендированию, в течение 1 минуты после суспендирования из вторичных пробирок извлекают плазму; готовую рабочую форму плазмы затем переносят в шприцы перед введением в ткани. Указанная группа изобретений позволяет увеличить концентрацию тромбоцитов в плазме крови от 3 до 8 раз по сравнению с их концентрацией в циркулирующем кровотоке и получить концентрат плазмы в конечном объёме не менее 6% от исходного объёма взятой венозной крови без использования дополнительных компонентов или соблюдения определённых температурных режимов. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности, к способу получения богатой тромбоцитами плазмы [A61K35/16; A61K 35/19].

Из уровня техники известен СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БОГАТОЙ ТРОМБОЦИТАМИ ПЛАЗМЫ [RU2717448C1, опубл. 23.03.2020], включающий взятие венозной крови в пробирку без антикоагулянта и активаторов свертывания, ее охлаждение посредством размещения в камере при температуре 8-12°С с возможностью поддержания указанной температуры до 60 мин, центрифугирование образца крови с ускорением 300g в течение 5 мин при температуре в камере 8-12°С и отбором богатой тромбоцитами плазмы из нижней части пробирки в объеме 1/10 от исходного количества крови в пробирке.

Недостатком данного способа соблюдение температурного режима от 8 до 12°С и ограничения времени обработки до 60 минут, что усложняет процесс и создает риск оседания тромбоцитов вместе с эритроцитами, снижая эффективность их выделения и концентрации в конечной плазме.

Также из уровня техники известен СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОБОГАЩЕННОЙ ТРОМБОЦИТАМИ ПЛАЗМЫ [CN114010659A, опубл. 08.02.2022], характеризующийся следующими этапами: размещают периферическую венозную кровь в пробирке для сбора крови с разделительным гелем, содержащим антикоагулянт, и равномерно перемешивают; проводят первое центрифугирование в течение 9–11 минут при центробежной силе 300 G; проводят второе центрифугирование в течение 9-11 мин при центробежной силе 1200 G и после центрифугирования плазма делится на три слоя: самый нижний слой – эритроциты, верхний слой – плазма, бедная тромбоцитами, а пространство между ними заполнено слоем плазмы, богатой тромбоцитами; и извлекают сыворотку из плазмы, богатой тромбоцитами, на верхний слой разделительного геля для получения готового продукта.

Недостатком данного способа является вероятность отсутствия четкой границы между слоями эритроцитов и тромбоцитов, что усложняет точное отделение богатой тромбоцитами плазмы без включения лейкоцитов или эритроцитов, что может уменьшить чистоту конечного продукта.

Наиболее близким по технической сущности является СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОБОГАЩЕННОЙ ТРОМБОЦИТАМИ ПЛАЗМЫ [CN111407778A, опубл14.07.2020], характеризующийся следующими этапами: берут образцы крови и добавляют антикоагулянт, проводят первичное центрифугирование и собирают жидкость без клеток крови в верхнем слое, проводят вторичное центрифугирование жидкости с использованием центробежной силы, в 4-7 раз превышающей первичную центробежную силу, и отсасывают плазму из верхнего слоя, пока оставшаяся в нижнем слое жидкость не составит 4-5% от объёма образцов крови, чтобы получить обогащённую тромбоцитами плазму.

Основной технической проблемой прототипа, является ограничение объема конечной дозы концентрата плазмы, который составляет 4-5% от объема взятой венозной крови, при увеличении содержания тромбоцитов в плазме в 4-7 раз относительно объема взятой венозной крови, что может быть недостаточным для некоторых медицинских применений.

Задачей изобретения является устранение недостатков прототипа.

Технический результат заключается в увеличении концентрации тромбоцитов в плазме крови от 3 до 8 раз по сравнению с их концентрацией в циркулирующем кровотоке, при этом конечный объем полученного концентрата плазмы составляет не менее 6% от исходного объема взятой венозной крови и достигается без использования дополнительных компонентов или соблюдения определенных температурных режимов.

Указанный технический результат достигается за счет того, что способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови, характеризующийся взятием венозной крови, смешиванием венозной крови в первичных пробирках с ингибитором коагуляции, которые затем подвергают первому этапу центрифугирования, после которого из первичных пробирок готовую рабочую форму плазмы переносят в шприцы перед введением в ткани.

Также указанный технический результат достигается за счет того, что способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови, характеризующийся взятием венозной крови, смешиванием венозной крови в первичных пробирках с ингибитором коагуляции, которые затем подвергают первому этапу центрифугирования, после которого из первичных пробирок извлекают плазму во вторичные пробирки, которые подвергают второму этапу центрифугирования; после окончания второго этапа центрифугирования полученную плазму разделяют вертикально на 3 части, нижнюю 1/3 часть плазмы подвергают суспендированию, готовую рабочую форму плазмы затем переносят в шприцы перед введением в ткани.

В частном случае, взятие крови осуществляют в стерильные и апирогенные вакуумные пластиковые первичные пробирки размером 120/16 и общим объемом по 12 мл каждая первичная пробирка.

В частном случае, каждая первичная пробирка содержит ингибитор коагуляции цитрат натрия 3,2 % объемом по 1 мл каждая и не содержит никаких дополнительных компонентов, включая разделительный гель.

В частном случае, первый этап центрифугирования выполняют с центробежной силой 115 G в течение 5 минут.

В частном случае, после первого этапа центрифугирования полученную плазму от 2 до 3 мл в каждой первичной пробирке переносят в стерильные и апирогенные пластиковые вторичные пробирки размером 120/16 и общим объемом по 12 мл каждая вторичная пробирка, без ингибитора коагуляции и разделительного геля.

В частном случае, второй этап центрифугирования выполняют с центробежной силой 1000 G в течение 12 минут.

В частном случае, после второго этапа центрифугирования с помощью шприца объемом 2 мл системы Луер - лок и иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ – 60 mm отбирают верхние 2/3 части плазмы.

В частном случае, нижнюю 1/3 часть плазмы подвергают суспендированию в течение 1 минуты.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 представлена схема получения плазмы крови с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP и формы Extra PRP.

Способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови осуществляется следующим образом.

Предварительно осуществляют взятие венозной крови у пациента в стерильные и апирогенные вакуумные пластиковые первичные пробирки. Каждая первичная пробирка размером 120/16 и общим объемом по 12 мл содержит ингибитор коагуляции цитрат натрия 3,2 % объемом по 1 мл каждая и не содержит никаких дополнительных компонентов, включая разделительный гель. Для получения одной конечной дозы готового концентратора плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP (High Potencial Platelet Rich Plasma) объемом от 3 до 4 мл осуществляют взятие венозной крови у пациента в объеме 11 мл в одной первичной пробирке. Взятие крови производится системой для вакуумного взятия крови с Луер - адаптером и холдером, маркировка иглы 21Gx3/4’’, длина катетера 17 см. Объем венозной крови в каждой первичной пробирке должен быть одинаковым. Использование стерильных и апирогенных пробирок указанного объема снижает риск загрязнения и обеспечивает оптимальное соотношение крови и ингибитора коагуляции, что положительно сказывается на сохранении тромбоцитов в активной форме и предотвращает их потерю в процессе центрифугирования. Цитрат натрия 3,2 % предотвращает свертывание крови, что позволяет сохранить тромбоциты в активной форме и распределить их равномерно в плазме перед центрифугированием. Соотношение венозной крови к цитрату натрия в пробирках выбрано таким образом, чтобы обеспечить оптимальный баланс антикоагулянтного эффекта, что позволяет стабилизировать кровь на время обработки, предотвращая свертывание без повреждения клеток. Отсутствие геля и других дополнительных компонентов также исключает возможное взаимодействие химических компонентов с тромбоцитами, что способствует сохранению их структурной целостности и активности. Такая среда предотвращает агрегацию или разрушение тромбоцитов, обеспечивая их более высокую концентрацию и функциональность в конечном продукте.

После взятия крови в первичных пробирках смешивают венозную кровь с ингибитором коагуляции покачиванием от 4 до 5 раз с амплитудой от 15 до 20°, что минимизирует вероятность агрегации тромбоцитов и увеличивает их выживаемость.

Далее каждую первичную пробирку, заполненную венозной кровью с ингибитором коагуляции, размещают в центрифуге ELMI CM - 6M standart напротив друг друга по диагонали, соблюдая принцип баланса и исключения излишней вибрации при центрифугировании. В случае, если для получения необходимого количества конечных доз готового концентратора плазмы получили нечетное количество пробирок, то используют противовес, представляющий собой пробирку, идентичную первичной пробирке и заполненную физиологическим раствором NaCl 0,9%. Объем физиологического раствора в пробирке – противовесе должен быть соизмерим с объемом венозной крови с ингибитором коагулянта в первичной пробирке, для сравнения объемов используют лабораторные весы I специального класса точности по ГОСТ Р 53228-2008. Затем выполняют первый этап центрифугирования с центробежной силой 115 G, что соответствует примерно 790 об/мин, в течение 5 минут при комнатной температуре. Указанный режим первого этапа центрифугирования обеспечивает оптимальное соотношение центробежной силы и времени проведения центрифугирования, при котором происходит эффективное разделение плазмы с осаждением эритроцитов и лейкоцитов, при этом тромбоциты остаются в верхнем слое плазмы, что обеспечивает их высокую концентрацию.

После окончания первого этапа центрифугирования устанавливают первичные пробирки в штатив и аккуратно отбирают из каждой первичной пробирки слой полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP и тромбоциты с уровня лейкоцитарно – тромбоцитарной пленки. Отбор слоя плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP осуществляют с помощью шприца объемом 5 мл системы луер - лок и иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ - 60 mm с применением техники «торнадо», которая предполагает вращение иглой для взятия слоя плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP для создания воронки и захвата максимально возможного количества тромбоцитов с уровня лейкоцитарно – тромбоцитарной пленки. Отбор слоя плазмы с высоким содержанием тромбоцитов HP PRP должен быть выполнен в течение 1 минуты после первого этапа центрифугирования, поскольку клеточные элементы продолжают оседать и конечная концентрация тромбоцитов в слое плазмы может быть измененной от ожидаемой. Объем полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP составляет от 3 до 4 мл из каждой первичной пробирки. Конечная доза готового концентратора плазмы формы HP PRP имеет концентрацию тромбоцитов, соответствующую кратному увеличению от 3 до 4 раз относительно концентрации тромбоцитов в циркулирующем кровотоке.

Перед введением в ткани шприц объемом 5 мл системы Луер - лок подвергается механическому воздействию в виде покачивания для равномерного распределения клеточных элементов и осуществляют перенос в шприцы для инъекций объемом 1 мл с помощью адаптера Combifix, количество шприцов соответствует объему полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP.

Для получения одной конечной дозы готового концентратора плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы Extra PRP (Extra Platelet Rich Plasma) объемом от 1,3 до 2,0 мл используют две первичные пробирки, заполненные венозной кровью с ингибитором коагулянта, суммарный объем венозной крови для одной конечной дозы составляет 22 мл. После первого этапа центрифугирования извлекают плазму с высоким содержанием тромбоцитов из двух первичных пробирок. Для чего устанавливают первичные пробирки в штатив и аккуратно отбирают из каждой первичной пробирки плазму с высоким содержанием тромбоцитов в стерильные и апирогенные пластиковые вторичные пробирки размером 120/16 и общим объемом по 12 мл каждая вторичная пробирка, без ингибитора коагуляции и разделительного геля. Перенос в стерильные и апирогенные пробирки без антикоагулянта позволяет минимизировать примеси и создать условия для максимального осаждения тромбоцитов на следующем этапе. Объем полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP составляет от 2 до 3 мл в каждой вторичной пробирке. Объем плазмы в каждой вторичной пробирке должен быть идентичным, чтобы избежать излишней вибрации при центрифугировании.

Далее каждую вторичную пробирку, заполненную плазмой с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP, размещают в центрифуге ELMI CM - 6M standart напротив друг друга по диагонали и выполняют второй этап центрифугирования с центробежной силой 1000 G, что соответствует примерно 2330 об/мин, в течение 12 минут при комнатной температуре. Указанный режим второго этапа центрифугирования обеспечивает оптимальное соотношение центробежной силы и времени проведения центрифугирования для максимального осаждения тромбоцитов в нижний слой плазмы, что также препятствует агрегации или повреждению тромбоцитов, сохраняя их функциональность и эффективность плазмы.

После окончания второго этапа центрифугирования устанавливают вторичные пробирки в штатив и визуально делят каждую вторичную пробирку с полученной плазмой вертикально на 3 части. После чего с помощью шприца объемом 2 мл системы луер – лок и иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ – 60 mm отбирают верхние 2/3 части плазмы, содержащие 0,2 % тромбоцитов относительно исходной концентрации тромбоцитов в циркулирующем кровотоке. Нижнюю 1/3 часть плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы Extra PRP подвергают суспендированию с помощью шприца, объемом 2 мл системы Луер - лок и иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ - 60 mm в течение 1 минуты для равномерного распределения в рабочей дозе тромбоцитов, сконцентрированных после жесткого центрифугирования на дне пробирки. Конечная доза готового концентратора плазмы формы Extra PRP имеет концентрацию тромбоцитов, соответствующую кратному увеличению от 6 до 8 раз относительно концентрации тромбоцитов в циркулирующем кровотоке.

Перед введением в ткани готовую рабочую форму плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы Extra PRP в течение 1 минуты после суспендирования отбирают с помощью иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ – 60 mm в шприцы системы луер - лок, объемом 1 мл, количество шприцов соответствует объему полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы Extra PRP.

Введение в ткани проводят в соответствии с показаниями для данной формы плазмы с применением игл с маркировкой 30 G x1/2’’ - 13 mm или 30 G x1/2’’ - 25 mm; или 32 G 0,23 – 6 mm супрапериостально или интралигаментарно, или внутримышечно, или подкожно, или внутрикожно.

Введение в ткани плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP и формы Extra PRP возможно в различных областях медицины для восстановления и стимуляции регенеративных процессов.

Применение инъекций плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP показано для стимуляции ангиогенеза и восстановления функций соединительной ткани, включая активизацию фибробластов, остеобластов и хондробластов. В хирургии метод используется для лечения хронических трофических язв артериального и венозного генеза, особенно у пациентов с сахарным диабетом, а также для подготовки донорского ложе при кожных трансплантациях и повышения биосовместимости и гемосовместимости трансплантата. В ортопедии и травматологии метод показан для внутрисуставных инъекций, лечения разрывов связок в остром периоде, а также для терапии фасций, сухожилий и других соединительных структур, способствуя улучшению трофики тканей и усилению регенеративных процессов в мышечной и соединительной тканях. В дентальной имплантологии и оперативной стоматологии плазма HP PRP способствует ускоренному восстановлению объема костной ткани, особенно в сочетании с применением искусственной кости.

В других областях медицины, таких как гинекология, введение в ткани плазмы формы HP PRP применяются для повышения чувствительности клитора и улучшения оргастической функции. В неврологии метод помогает восстановить трофику и чувствительность тканей, регенерировать нервные волокна и устранить гипертонус мышц. В пластической хирургии инъекции плазмы используются для подготовки и реабилитации пациентов, а также для сочетания с процедурами, такими как липофилинг (fat grafting). В урологии метод показан для лечения эректильной дисфункции у мужчин, а в колопроктологии — для лечения анальных трещин.

Плазма формы Extra PRP, благодаря еще более высокой концентрации тромбоцитов, также подходит для всех указанных областей применения, но её уникальные свойства делают её предпочтительной в случаях, требующих экстренного вмешательства и максимально ускоренного заживления. Extra PRP особо показана при таких состояниях, как ангиопатия, атрофические язвы, диабетическая стопа, некроз, ишемия, а также при осложнениях после ботулинотерапии и пластической хирургии. Высокая концентрация тромбоцитов в Extra PRP способствует интенсивной стимуляции регенеративных процессов, что особенно важно в ситуациях с острой нехваткой кровоснабжения или выраженным повреждением тканей.

Для анализа количественного содержания тромбоцитов в готовом конечном концентрате плазмы была проведена экспериментальная работа в лаборатории экспериментальных исследований Национального Медицинского Университета им. А.А. Богомольца. Для исследования использовали образцы венозной крови 27 доноров-добровольцев в возрасте от 18 до 65 лет и разного пола (14 мужчин и 13 женщин). Факторы исключения из исследования – тяжелые или нестабильные соматические заболевания (сахарный диабет, рефрактерная сердечно-сосудистая и почечная недостаточность и т.д.), применение пациентом тромболитиков.

У каждого донора взяли венозную кровь из кубитальной вены в 5 стерильные и апирогенные вакуумные пластиковые пробирки объемом по 12 мл каждая, содержащие 1 мл цитрата натрия 3,2%, смешивали содержимое пробирок покачиванием с амплитудой от 15° до 20° в течение 4 – 5 раз. Из каждой пробирки отбирали небольшие аликвоты (10–50 мкл) для оценки исходного качества тромбоцитов доноров, затем пробирки распределяли по трем опытным группам с тем, чтобы в каждой группе были пробирки от каждого донора.

В первой опытной группе получали плазму с тромбоцитами в соответствии с решением согласно прототипу [CN111407778A, опубл14.07.2020] из двух образцов крови каждого донора, суммарный объем крови каждого донора составил 22 мл. Каждую пробирку размещали в центрифуге ELMI CM - 6M standart и проводили первый этап центрифугирования с центробежной силой 200 G в течение 8 минут, после чего переносили верхний слой плазмы в сухую стерильную и апирогенную пробирку и проводили второй этап центрифугирования с центробежной силой 1000 G в течение 10 минут. При этом каждый этап центрифугирования проводился в 5 очередей, в 4 из которых размещали по 12 пробирок с образцами материалов 6 доноров, а в 5 очереди размещали 6 образцов, равномерно распределенных в центрифуге с соблюдением баланса, с биоматериалами 3 доноров. После окончания второго этапа центрифугирования отбирали нижнюю часть плазмы с высоким содержанием тромбоцитов. Конечная доза готового концентратора плазмы прототипа составила от 0,9 до 1,1 мл.

Во второй опытной группе проводили разделения из одной пробирки образца венозной крови каждого донора на компоненты и получения плазмы с тромбоцитами формы HP PRP с верхнего слоя плазмы и с уровня лейкоцитарно – тромбоцитарной пленки согласно заявленному способу. Каждую пробирку образца крови размещали в центрифуге ELMI CM - 6M standart и проводили первый этап центрифугирования с центробежной силой 115 G в течение 5 минут. Центрифугирование проводили в три очереди по 9 образцов крови и 3 пробирки–противовеса, заполненными физиологическим раствором NaCl 0,9%, для соблюдения принципа баланса. Конечная доза готового концентратора плазмы формы HP PRP составила от 3 до 4 мл.

В третьей опытной группе получали плазму с тромбоцитами формы Extra PRP из двух образцов крови каждого донора, суммарный объем крови каждого донора составил 22 мл. Каждую пробирку размещали в центрифуге ELMI CM - 6M standart и проводили первый этап центрифугирования с центробежной силой 115 G в течение 5 минут, после чего переносили верхний слой плазмы в сухую стерильную и апирогенную пробирку без ингибитора коагуляции и других добавок и проводили второй этап центрифугирования с центробежной силой 1000 G в течение 12 минут. При этом каждый этап центрифугирования проводился в 5 очередей, в 4 из которых размещали по 12 пробирок с образцами материалов 6 доноров, а в 5 очереди размещали 6 образцов, равномерно распределенных в центрифуге с соблюдением баланса, с биоматериалами 3 доноров. После окончания второго этапа центрифугирования полученную плазму разделяли вертикально на 3 части, нижнюю 1/3 часть плазмы подвергали суспендированию в течение 1 минуты. Конечная доза готового концентратора плазмы формы Extra PRP составила от 1,3 до 2,0 мл.

Отбор плазмы и ее перемещение во всех случаях проводили одноразовыми стерильными шприцами объемом 2 мл системы Луер – лок через одноразовые стерильные иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ – 60 mm. На протяжении всего эксперимента осуществлялся контроль за сохранением стабильной комнатной температуры и влажности в лаборатории для чистоты эксперимента.

Концентрацию тромбоцитов в крови и плазме определяли на лабораторном гематологическом анализаторе HemaLite 3000, также рассчитывали общее количество тромбоцитов в каждом образце (см. таблицу 1).

Таблица 1 – Характеристика образцов плазмы, выделенной из крови пациента

№ образца	Изменение значения параметра для образца относительно параметров цельной крови
	Прототип CN111407778A (1 группа)				плазма формы HP PRP (2 группа)				плазма формы Extra PRP (3 группа)
	Концентрация тромбоцитов	Общее число тромбоцитов	Общее число тромбоцитов с гранулами	Объем конечной дозы концентратора плазмы	Концентрация тромбоцитов	Общее число тромбоцитов	Общее число тромбоцитов с гранулами	Объем конечной дозы концентратора плазмы	Концентрация тромбоцитов	Общее число тромбоцитов	Общее число тромбоцитов с гранулами	Объем конечной дозы концентратора плазмы
	698	362	381	6,81	319	343	382	27,3	680	552	558	7,68
	406	400	384	6,60	335	334	594	35,23	685	632	429	6,27
	597	356	331	6,86	372	304	391	30,57	723	544	564	6,15
	665	303	436	4,81	386	312	408	32,27	749	567	477	7,43
	412	338	386	5,97	325	343	609	30,96	748	535	476	7,73
	699	313	478	4,06	359	337	587	35,61	674	614	590	6,78
	508	363	383	4,16	345	319	449	35,8	684	610	413	7,75
	692	323	427	4,71	349	351	492	34,29	736	603	457	6,97
	560	344	361	5,25	319	274	471	32,52	679	544	440	7,7
	551	332	433	6,31	378	325	618	27,35	712	559	428	6,71
	596	378	322	6,80	313	353	443	32,42	758	595	485	7,75
	479	341	327	5,50	382	331	469	32,39	662	611	547	6,35
	503	382	356	4,57	304	299	412	33,76	600	588	436	7,14
	673	414	386	5,54	330	317	545	30,35	630	531	493	7,5
	460	311	321	5,19	369	341	650	32,24	672	536	574	6,66
	454	369	332	5,81	314	342	493	30,25	786	580	542	6
	605	369	469	4,80	301	346	491	33,51	753	628	531	6,67
	539	396	367	5,31	369	348	606	35,84	797	575	577	6,65
	424	343	325	6,97	363	343	437	29,28	703	621	462	6,9
	636	332	339	5,05	365	276	514	31,06	793	553	418	7,86
	407	347	431	5,37	355	331	472	33,82	624	557	420	7,49
	613	405	325	5,98	355	321	629	33,86	730	622	423	7,54
	455	392	342	6,63	318	351	517	27,58	785	601	486	7,52
	591	342	326	5,57	393	271	423	27,81	684	628	423	6,21
	650	354	417	4,71	308	276	447	29,74	674	575	523	7,01
	500	412	350	4,91	325	318	664	33,9	750	610	431	7,55
	698	333	369	6,99	330	281	541	33,84	778	627	551	7,74
Ср. знач.	558	358	374	5,60	344	322	509	31,98	713	585	487	7,10
Мин. знач.	406	303	321	4,06	301	271	382	27,30	600	531	413	6,00
Макс. знач.	699	414	478	6,99	393	353	664	35,84	797	632	590	7,86

Проведенное исследование показало, что применяемые режимы центрифугирования для получения богатой тромбоцитами плазмы демонстрируют различия в качестве и количестве тромбоцитов в плазме.

Способ получения плазмы с высоким содержанием тромбоцитов согласно прототипу обеспечивает увеличение концентрации тромбоцитов в плазме на 406–699 % относительно концентрации в исходной дозе забранной крови, что превосходит результат концентрации тромбоцитов в плазме по форме HP PRP, который демонстрирует увеличение концентрации на 301 – 393 %, но уступает максимальному результату концентрации тромбоцитов в плазме по форме Extra PRP, который демонстрирует увеличение концентрации на 600 – 797 %. Однако, способ получения плазмы с высоким содержанием тромбоцитов по прототипу требует большего объема цельной крови, что может служить ограничением в клинической практике, где доступное количество крови может быть ограничено.

По общему числу тромбоцитов в плазме способ согласно прототипу и форма HP PRP согласно заявленному решению показали близкие результаты, однако способ по прототипу также требует большего объема цельной крови. В то же время общее число тромбоцитов в плазме по форме Extra PRP согласно заявленному решению превышает общее число тромбоцитов в плазме полученной по способу согласно прототипу в 1,28 – 2,09 раз. Таким образом, плазма по форме HP PRP и по форме Extra PRP согласно заявленному решению имеют больший терапевтический потенциал препарата за счет факторов роста и других биологически активных молекул, которые способствуют заживлению, регенерации и восстановлению тканей.

Также общее число тромбоцитов с гранулами в плазмах по форме HP PRP и по форме Extra PRP согласно заявленному решению превышают данный показатель для плазмы полученной по способу согласно прототипу, что указывает на более качественное сохранение тромбоцитарной массы, содержащей биологические активные вещества, такие как тромбоцитарные факторы роста (PDGF, TGF-β), факторы ангиогенеза (VEGF) и молекулы, стимулирующие рост и восстановление клеток.

Таким образом, заявленное изобретение позволяет обеспечить высокую концентрацию тромбоцитов, в том числе тромбоцитов с гранулами, в конечном продукте, что значительно расширяет его терапевтический потенциал и повышает эффективность применения для стимуляции процессов восстановления и заживления тканей в медицинской практике. Кроме того, увеличение концентрации тромбоцитов в плазме крови в 3–8 раз по сравнению с их содержанием в циркулирующем кровотоке, а также получение конечного объема плазменного концентрата не менее 6% от исходного объема забираемой венозной крови достигается без использования дополнительных компонентов и без необходимости соблюдения температурных режимов, что делает способ более универсальным и простым в применении, а также повышает его доступность для клинической практики.

Claims (15)

1. Способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови, характеризующийся взятием венозной крови в объеме 11 мл, смешиванием венозной крови в первичных пробирках с ингибитором коагуляции цитратом натрия 3,2% объемом 1 мл;

затем первичные пробирки подвергают первому этапу центрифугирования с центробежной силой 115 G в течение 5 минут, при этом первичные пробирки устанавливают в центрифуге напротив друг друга по диагонали;

в течение 1 минуты после первого этапа центрифугирования из первичных пробирок извлекают плазму,

готовую рабочую форму плазмы переносят в шприцы перед введением в ткани.

2. Способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови, характеризующийся взятием венозной крови в объеме 22 мл в две первичные пробирки, смешиванием венозной крови в первичных пробирках с ингибитором коагуляции цитратом натрия 3,2% объемом 1 мл;

которые затем подвергают первому этапу центрифугирования,

после которого из первичных пробирок извлекают плазму с высоким содержанием тромбоцитов объемом по 2-3 мл во вторичные пробирки,

которые подвергают второму этапу центрифугирования с центробежной силой 1000 G в течение 12 минут;

после окончания второго этапа центрифугирования полученную плазму разделяют вертикально на 3 части, нижнюю 1/3 часть плазмы подвергают суспендированию,

в течение 1 минуты после суспендирования из вторичных пробирок извлекают плазму;

готовую рабочую форму плазмы затем переносят в шприцы перед введением в ткани.

3. Способ по п. 1 или по 2, отличающийся тем, что взятие крови осуществляют в стерильные и апирогенные вакуумные пластиковые первичные пробирки размером 120/16 и общим объемом по 12 мл каждая первичная пробирка.

4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что после первого этапа центрифугирования полученную плазму от 2 до 3 мл в каждой первичной пробирке переносят в стерильные и апирогенные пластиковые вторичные пробирки размером 120/16 и общим объемом по 12 мл каждая вторичная пробирка без ингибитора коагуляции и разделительного геля.

5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что после второго этапа центрифугирования с помощью шприца объемом 2 мл системы Луер-Лок и иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ - 60 mm отбирают верхние 2/3 части плазмы.

6. Способ по п. 2, отличающийся тем, что нижнюю 1/3 часть плазмы подвергают суспендированию в течение 1 минуты.