RU2784538C2 - Кристаллическая форма соединения 1h-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3h)-она и способ ее получения - Google Patents
Кристаллическая форма соединения 1h-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3h)-она и способ ее получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2784538C2 RU2784538C2 RU2020127989A RU2020127989A RU2784538C2 RU 2784538 C2 RU2784538 C2 RU 2784538C2 RU 2020127989 A RU2020127989 A RU 2020127989A RU 2020127989 A RU2020127989 A RU 2020127989A RU 2784538 C2 RU2784538 C2 RU 2784538C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compound
- crystalline form
- solvent
- water
- crystal form
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title abstract description 17
- PGDIPOWQYRAOSK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroimidazo[4,5-b]pyridin-2-one Chemical compound C1=CN=C2NC(=O)NC2=C1 PGDIPOWQYRAOSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 2
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 claims abstract description 86
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 41
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims abstract description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000001938 differential scanning calorimetry curve Methods 0.000 claims description 5
- 238000001757 thermogravimetry curve Methods 0.000 claims description 5
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 abstract description 44
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 9
- 239000013078 crystal Substances 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 101100296720 Dictyostelium discoideum Pde4 gene Proteins 0.000 abstract description 7
- 101100082610 Plasmodium falciparum (isolate 3D7) PDEdelta gene Proteins 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 abstract 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 37
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- IMOZEMNVLZVGJZ-QGZVFWFLSA-N apremilast Chemical compound C1=C(OC)C(OCC)=CC([C@@H](CS(C)(=O)=O)N2C(C3=C(NC(C)=O)C=CC=C3C2=O)=O)=C1 IMOZEMNVLZVGJZ-QGZVFWFLSA-N 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 229960001164 apremilast Drugs 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 8
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 8
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 8
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 241001111421 Pannus Species 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 6
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 6
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 6
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 6
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 5
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 5
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 5
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 101710170231 Antimicrobial peptide 2 Proteins 0.000 description 4
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 4
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 4
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 4
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 4
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 4
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 4
- 229920001684 low density polyethylene Polymers 0.000 description 4
- 239000004702 low-density polyethylene Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 102100028712 Cytosolic purine 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 3
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 3
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 3
- 210000001872 metatarsal bone Anatomy 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012112 Alexa Fluor 633 Substances 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 210000005091 airway smooth muscle Anatomy 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000003797 carpal joint Anatomy 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 2
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- QCSLIRFWJPOENV-UHFFFAOYSA-N (2-fluorophenyl)boronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=CC=C1F QCSLIRFWJPOENV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDBQJSCPCGTAFG-QHCPKHFHSA-N 4,4-difluoro-N-[(1S)-3-[4-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)piperidin-1-yl]-1-pyridin-3-ylpropyl]cyclohexane-1-carboxamide Chemical compound FC1(CCC(CC1)C(=O)N[C@@H](CCN1CCC(CC1)N1C(=NN=C1C)C(C)C)C=1C=NC=CC=1)F WDBQJSCPCGTAFG-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- BWGRDBSNKQABCB-UHFFFAOYSA-N 4,4-difluoro-N-[3-[3-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl]-1-thiophen-2-ylpropyl]cyclohexane-1-carboxamide Chemical compound CC(C)C1=NN=C(C)N1C1CC2CCC(C1)N2CCC(NC(=O)C1CCC(F)(F)CC1)C1=CC=CS1 BWGRDBSNKQABCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 101100296719 Caenorhabditis elegans pde-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 1
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000988424 Homo sapiens cAMP-specific 3',5'-cyclic phosphodiesterase 4B Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 101000909851 Mycobacterium tuberculosis (strain ATCC 25618 / H37Rv) cAMP/cGMP dual specificity phosphodiesterase Rv0805 Proteins 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000544 articulatio talocruralis Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000005800 cardiovascular problem Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000006041 cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- SNRCKKQHDUIRIY-UHFFFAOYSA-L cyclopenta-1,4-dien-1-yl(diphenyl)phosphane;dichloromethane;dichloropalladium;iron(2+) Chemical compound [Fe+2].ClCCl.Cl[Pd]Cl.C1=C[CH-]C(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1.C1=C[CH-]C(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1 SNRCKKQHDUIRIY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000003811 finger Anatomy 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 102000048114 human PDE4B Human genes 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 210000000281 joint capsule Anatomy 0.000 description 1
- 208000018937 joint inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 210000003789 metatarsus Anatomy 0.000 description 1
- JWBHQSKFWKPHBH-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanetriol tetrahydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.CNC(O)(O)O JWBHQSKFWKPHBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 description 1
- 229920000259 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 102000037983 regulatory factors Human genes 0.000 description 1
- 108091008025 regulatory factors Proteins 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N triphosgene Chemical compound ClC(Cl)(Cl)OC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к кристаллической Форме A соединения 1, где кристаллическая Форма A характеризуется рентгеновской порошковой дифрактограммой, имеющей характеристические дифракционные пики при следующих углах 2θ: 10,69±0,2°, 12,31±0,2°, 13,45±0,2°, 14,10±0,2°, 14,62±0,2°, 19,07±0,2°, 20,33±0,2°, 21,79±0,2°. Кристаллическую форму A соединения 1 получают путем добавления соединения 1 в спиртовой растворитель, кетоновый растворитель, смешанный растворитель, состоящий из спиртового растворителя и воды, смешанный растворитель, состоящий из кетонового растворителя и воды; спиртовой растворитель выбран из группы, состоящей из метанола, этанола; кетоновый растворитель выбран из группы, состоящей из ацетона и нагревания для растворения и затем охлаждение для кристаллизации с получением кристаллической Формы A. При этом смешанный растворитель, состоящий из спиртового растворителя и воды, состоит из смешанного растворителя, состоящего из этанола и воды. Технический результат – кристаллическая форма А соединения 1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-она (1), обладающая хорошей стабильностью, предназначенная для применения при получении лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с PDE4 рецептором. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 4 ил., 10 табл., 9 пр.
(1)
Description
Перекрестная ссылка на родственную заявку
По настоящей заявке испрашивается приоритет следующей заявки:
китайская заявка № 201810085704.1, поданная 29 января 2018 года.
Область техники, к которой относится изобретение
Представлены кристаллическая Форма соединения 1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-она и способ ее получения, а также применение кристаллической формы для получения лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с PDE4.
Предпосылки создания изобретения
Фактор некроза опухоли (TNFα) представляет собой цитокин, высвобождаемый преимущественно моноцитами и макрофагами в ответ на иммунную стимуляцию. TNFα может промотировать большинство процессов клеточной дифференциации, рекрутинга, пролиферации и разрушения белка. TNFα имеет защитный эффект против инфекционных агентов, опухолей и повреждения ткани при низком уровне. Однако чрезмерное высвобождение TNFα может также вызывать заболевание. Например, при введении млекопитающим или человеку TNFα может вызывать или обострять воспаление, лихорадку, сердечно-сосудистые проблемы, кровотечение, свертывание крови и острые реакции, подобные острой инфекции и шоку. Продукция избыточного или неконтролируемого TNFα у животных или людей часто указывает на следующие заболевания: эндотоксемия и/или синдром токсического шока, кахексия, респираторный стресс-синдром у взрослых, рак (такой как солидные опухоли и гематологические опухоли), болезнь сердца (такая как застойная сердечная недостаточность), вирусная инфекция, генетическое заболевание, воспалительное заболевание, аллергическое заболевание или аутоиммунное заболевание.
Рак представляет собой заболевание с особой деструктивностью, и повышение уровня TNFα в крови указывает на риск рака или метастазирования. Как правило, раковые клетки не могут выжить в системе кровообращения здорового субъекта, и одна из причин заключается в том, что внутренняя стенка кровеносных сосудов служит барьером для экстравазации раковых клеток. Исследования показали, что ELAM-1 на эндотелиальных клетках может опосредовать адгезию клеток рака толстой кишки к эндотелию, подвергаемому действию цитокинов.
Циклический аденозинмонофосфат (cAMP) играет роль во многих заболеваниях и расстройствах. Увеличение концентрации cAMP в лейкоцитах в процессе воспаления подавляет активацию лейкоцитов и впоследствии высвобождает воспалительные регуляторные факторы, включая TNFα и NF-κB. Повышенный уровень cAMP также приводит к релаксации гладких мышц дыхательных путей.
Основной клеточный механизм инактивации cAMP обусловлен разрушением cAMP семейством изозимов, называемых циклическими нуклеотидфосфодиэстеразами (PDE). Известно, что семейство PDE включает 11 членов. К настоящему времени доказано, что ингибирование фермента PDE4 является особенно эффективным для ингибирования высвобождения медиаторов воспаления и релаксации гладких мышц дыхательных путей, и поэтому фермент PDE4 стал одной из популярных мишеней для лекарственных средств. Согласно другому генетическому кодированию, семейство PDE-4 можно разделить на 4 подтипа (PDE-4A, B, C, D). Среди них экспрессия PDE-4A, PDE-4B и PDE-4D в воспалительных клетках (таких как B-клетки, T-клетки и нейтрофилы) сильнее, чем в PDE-4C. Ингибирование фермента PDE4 приводит к повышению уровней cAMP, регулируя тем самым уровень TNFα так, чтобы лечить заболевания.
Сущность изобретения
В одном аспекте представлена кристаллическая Форма A соединения 1, где кристаллическая Форма A имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, имеющую характеристические дифракционные пики при следующих углах 2θ: 14,10±0,2°, 19,07±0,2°, 21,79±0,2°.
Соединение 1
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием кристаллическая Форма A соединения 1 имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, имеющую характеристические дифракционные пики при следующих углах 2θ: 10,69±0,2°, 12,31±0,2°, 13,45±0,2°, 14,10±0,2°, 14,62±0,2°, 19,07±0,2°, 20,33±0,2°, 21,79±0,2°.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием кристаллическая Форма A соединения 1 имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, имеющую характеристические дифракционные пики при следующих углах 2θ: 6,25±0,2°, 8,93±0,2°, 10,69±0,2°, 12,31±0,2°, 13,45±0,2°, 14,10±0,2°, 14,62±0,2°, 18,16±0,2°, 19,07±0,2°, 20,33±0,2°, 21,79±0,2°.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием кристаллическая Форма A соединения 1 имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, показанную на Фиг. 1.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием кристаллическая Форма A соединения 1 имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму с данными анализа, показанными в Таблице 1
| Таблица 1 Данные анализа рентгеновской порошковой дифрактограммы кристаллической Формы A соединения 1 |
|||||||
| № | Угол 2θ (°) |
Межплоскостное
расстояние (Å) |
Относительная интенсивность (%) | № | Угол 2θ (°) |
Межплоскостное
расстояние (Å) |
Относительная интенсивность (%) |
| 1 | 6,250 | 14,1293 | 21,2 | 21 | 24,713 | 3,5995 | 17,3 |
| 2 | 8,932 | 9,8927 | 19,2 | 22 | 24,930 | 3,5686 | 14,4 |
| 3 | 9,425 | 9,3754 | 9,8 | 23 | 25,622 | 3,4739 | 14,8 |
| 4 | 10,690 | 8,2687 | 45,3 | 24 | 26,922 | 3,3090 | 14,6 |
| 5 | 12,306 | 7,1868 | 45,9 | 25 | 27,220 | 3,2734 | 10,6 |
| 6 | 12,660 | 6,9865 | 29,3 | 26 | 28,010 | 3,1829 | 22,1 |
| 7 | 13,449 | 6,5783 | 38,0 | 27 | 28,324 | 3,1483 | 26,0 |
| 8 | 14,098 | 6,2769 | 100,0 | 28 | 29,410 | 3,0344 | 7,5 |
| 9 | 14,615 | 6,0558 | 28,8 | 29 | 29,942 | 2,9817 | 11,6 |
| 10 | 15,162 | 5,8386 | 11,5 | 30 | 30,854 | 2,8957 | 5,3 |
| 11 | 17,417 | 5,0874 | 5,7 | 31 | 31,459 | 2,8414 | 2,1 |
| 12 | 18,162 | 4,8805 | 24,3 | 32 | 32,250 | 2,7735 | 3,0 |
| 13 | 18,796 | 4,7173 | 28,0 | 33 | 32,725 | 2,7342 | 2,5 |
| 14 | 19,072 | 4,6496 | 72,4 | 34 | 33,082 | 2,7056 | 2,2 |
| 15 | 20,333 | 4,3639 | 32,1 | 35 | 33,379 | 2,6822 | 3,6 |
| 16 | 20,728 | 4,2817 | 27,7 | 36 | 34,167 | 2,6221 | 3,6 |
| 17 | 21,794 | 4,0746 | 68,2 | 37 | 35,525 | 2,5249 | 2,7 |
| 18 | 22,739 | 3,9074 | 9,9 | 38 | 35,902 | 2,4993 | 3,0 |
| 19 | 22,998 | 3,8639 | 13,1 | 39 | 36,988 | 2,4283 | 2,6 |
| 20 | 24,261 | 3,6656 | 20,0 | 40 | 37,462 | 2,3987 | 3,3 |
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием кристаллическая Форма A соединения 1 имеет кривую дифференциальной сканирующей калориметрии, имеющую точку начала эндотермического пика при 201,70°C±2°C.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием кристаллическая Форма A соединения 1 имеет кривую DSC, показанную на Фиг. 2.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием кристаллическая Форма A соединения 1 имеет кривую термогравиметрического анализа, где потеря массы при 100,00±2°C составляет 0,02039%.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием кристаллическая Форма A соединения 1 имеет кривую TGA, показанную на Фиг. 3.
В другом аспекте представлен способ получения кристаллической Формы A, включающий добавление соединения 1 в спиртовой растворитель, кетоновый растворитель, эфирный растворитель, смешанный растворитель, состоящий из спиртового растворителя и воды, смешанный растворитель, состоящий из кетонового растворителя и воды, или смешанный растворитель, состоящий из эфирного растворителя и воды; нагревание для растворения и затем охлаждение для кристаллизации с получением кристаллической Формы A.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием спиртовой растворитель выбран из группы, состоящей из метанола, этанола и изопропанола.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием кетоновый растворитель выбран из группы, состоящей из ацетона и бутанона.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием эфирный растворитель выбран из группы, состоящей из диметилового эфира гликоля.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием смешанный растворитель, состоящий из спиртового растворителя и воды, выбран из группы, состоящей из смешанного растворителя, состоящего из этанола и воды.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием в смешанном растворителе, состоящем из спиртового растворителя и воды, объемное соотношение спиртового растворителя и воды выбрано из группы, состоящей из 1:0,2-1,5.
Еще в одном аспекте представлено применение кристаллической формы A соединения 1 для получения лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с PDE4 рецептором.
В некоторых вариантах осуществления в соответствии с настоящим раскрытием заболевание, связанное с PDE4, включает псориаз, псориатический артрит, хроническую обструктивную пневмонию, анкилозирующий спондилит, воспалительное заболевание кишечника.
Технический эффект
Кристаллическая Форма A соединения 1 обладает хорошей стабильностью, низкой гигроскопичностью и потенциальной возможностью создания лекарства. Кристаллическая Форма A соединения 1 демонстрирует хорошую стабильность в спиртовом растворителе, ацетонитриле, ацетоне, этилацетате, тетрагидрофуране, смешанном растворителе, состоящем из спиртового растворителя и воды, смешанном растворителе, состоящем из ацетонитрила и воды, или смешанном растворителе, состоящем из ацетона и воды. Кристаллическая Форма A соединения 1 демонстрирует хорошую стабильность в условиях ускоренного испытания 40ºC/относительной влажности 75%. кристаллическая Форма A соединения 1 демонстрирует хорошую стабильность в условиях долгосрочного хранения при 25ºC/относительной влажности 60%.
Соединение 1 демонстрирует отличную активность in vitro, направленную на ингибирование фосфодиэстеразы подтипа 4B (PDE4B). Кроме того, соединение 1 демонстрирует отличную активность in vitro, направленную на ингибирование продукции TNFα в hPBMC, которая выше, чем у Апремиласта. Соединение 1 в трех дозовых группах 0,3, 1 и 3 мг/кг существенно улучшает симптомы коллаген-индуцированного артрита. Кроме того, соединение 1 в дозовых группах 1 мг/кг и 3 мг/кг демонстрирует существенное улучшение патологии артрита. Эти три дозовые группы демонстрируют очевидную взаимосвязь доза-эффект при оценке патологии артрита. Терапевтический эффект соединения 1 при 3 мг/кг (клиническая оценка и оценка патологии артрита) лучше, чем у Апремиласта при 5 мг/кг.
Общие определения
Если не указано иное, следующие термины и фразы имеют следующие определения. Конкретный термин или фраза не должны рассматриваться как неопределенные или неясные без конкретного определения и должны пониматься в соответствии с обычными значениями. Используемое торговое наименование должно относиться к соответствующему изделию или активному ингредиенту.
Промежуточные соединения могут быть получены различными способами синтеза, хорошо известными специалистам в данной области, включая конкретные варианты осуществления, перечисленные ниже, варианты осуществления в комбинации с другими способами химического синтеза и эквивалентные альтернативы, хорошо известные специалистам в данной области техники. Предпочтительные варианты осуществления включают, но не ограничиваются этим, Примеры, представленные ниже.
В конкретных вариантах осуществления химическую реакцию осуществляют в подходящем растворителе, и растворитель должен быть подходящим для химических изменений настоящего раскрытия и требуемых реагентов и материалов. Для получения соединения по настоящему изобретению специалист в данной области может модифицировать или выбрать стадию синтеза или схему реакции на основе представленных вариантов осуществления.
Настоящее раскрытие будет описано подробно, и Примеры не должны рассматриваться как его ограничение.
Растворители, используемые в настоящем изобретении, являются коммерчески доступными и могут использоваться без дальнейшей очистки.
Используются следующие аббревиатуры: DMF: диметилформамид; MsOH: метансульфоновая кислота; EtOH: этанол; NaOH: гидроксид натрия.
Соединения названы вручную или с использованием программного обеспечения ChemDraw®. Провайдеры используют названия соединений по каталогу.
Рентгеновский порошковый дифрактометр, XRPD
Устройство: Рентгеновский дифрактометр BRUKER D8 advance
Метод испытания: Для XRPD детекции используют около 10-20 мг образца.
Конкретные XRPD параметры являются следующими:
Излучающая трубка: Cu, kα, (λ=1,54056Ǻ).
Напряжение излучающей трубки: 40 кВ, ток излучающей трубки: 40 мА
Щель расходимости: 0,60 мм
Щель детектора: 10,50 мм
Антирассеивающая щель: 7,10 мм
Диапазон сканирования: 4-40 град.
Размер шага: 0,02 град.
Время/шаг: 0,12 сек
Скорость вращения предметного столика: 15 об/мин
Дифференциальный сканирующий калориметр, DSC
Устройство: Дифференциальный сканирующий калориметр TA Q2000
Метод испытания: Образец (около 1 мг) помещают в DSC алюминиевую чашу для испытания, под 50 мл/мин потоком N2, нагревают от 25°C до 350°C при скорости нагрева 10°C/мин.
Термогравиметрический анализатор, TGA
Устройство: Термогравиметрический анализатор TA Q5000IR
Метод испытания: Образец (2-5 мг) помещают в TGA платиновую чашу для испытания, под 25 мл/мин потоком N2, нагревают от комнатной температуры до 350°C при скорости нагрева 10°C/мин.
Динамическая сорбция паров, DVS
Устройство: Анализатор динамической сорбции паров SEM Advantage-1
Условия испытания: Образец (10-20 мг) помещают в DVS диск образцов для испытания.
Конкретные DVS параметры являются следующими:
Температура: 25°C
Весы: dm/dt=0,01%/мин (мин.: 10 мин, макс.: 180 мин)
Сушка: сушка при 0% RH в течение 120 мин
RH (%) тестируемый градиент: 10%
RH (%) тестируемый диапазон градиента: 0% - 90% - 0%
Гигроскопичность подразделяют на следующие категории:
| Категория гигроскопичности | ΔW% |
| Переход в жидкое состояние | Абсорбирование достаточного количества воды для образования жидкости |
| Очень гигроскопичный | ΔW% ≥ 15% |
| Гигроскопичный | 15% > ΔW% ≥ 2% |
| Слегка гигроскопичный | 2% > ΔW% ≥ 0,2% |
| Негигроскопичный или немного гигроскопичный | ΔW% < 0,2% |
| Примечание: ΔW% относится к гигроскопичному увеличению массы испытываемого образца при 25±1°C и 80±2% RH | |
Метод определения содержания
Устройство: Высокоэффективный жидкостный хроматограф Agilent 1260 с DAD детектором или высокоэффективный жидкостный хроматограф Shimadzu LC-20A с PDA детектором
Конкретные хроматографические параметры являются следующими:
Хроматографическая колонка: Agilent Eclipse plus C18 (4,6мм × 150мм, 3,5мкм)
Температура колонки: 40°C
Скорость потока: 1,0 мл/мин
Длина волны детектора: 230 нм
Объем вводимой пробы: 10 мкл
Время регистрации хроматограммы: 60 мин
Подвижная фаза A: 0,04% водный раствор трифторуксусной кислоты (об/об)
Подвижная фаза B: ацетонитрил
Разбавитель: ацетонитрил:очищенная вода=3:1(об/об)
Раствор для промывки: ацетонитрил:очищенная вода =3:1(об/об)
Процедура градиентного элюирования:
| Время (мин) | Подвижная фаза A (%) | Подвижная фаза B (%) |
| 0,00 | 85 | 15 |
| 30,00 | 70 | 30 |
| 50,00 | 30 | 70 |
| 55,00 | 15 | 85 |
| 55,01 | 85 | 15 |
| 60,00 | 85 | 15 |
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 демонстрирует рентгеновскую порошковую дифрактограмму, полученную с использованием Cu-Kα излучения, кристаллической формы A соединения 1.
Фиг. 2 демонстрирует кривую DSC кристаллической формы A соединения 1.
Фиг. 3 демонстрирует кривую TGA кристаллической формы A соединения 1.
Фиг. 4 демонстрирует кривую DVS кристаллической формы A соединения 1.
Примеры
Следующие Примеры представлены для лучшей иллюстрации для лучшего понимания настоящего изобретения. Конкретные варианты осуществления не следует рассматривать как ограничение настоящего изобретения.
Пример 1: Получение кристаллической Формы A соединения 1
Стадия 1: Синтез соединения 3
При комнатной температуре соединение b (10,00 г, 39,77 ммоль), соединение 2 (9,78 г, 35,79 ммоль) и диизопропиламин (10,28 г, 79,53 ммоль, 13,89 мл) растворяли в N,N-диметилформамиде (200,00 мл), смесь продували азотом три раза и реакционную смесь нагревали до 120°C в защитной атмосфере азота при перемешивании в течение 16 ч. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (400 мл) и экстрагировали этилацетатом (200 мл ×3). Органические фазы объединяли и промывали насыщенным солевым раствором (100 мл ×3), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали для удаления осушителя. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток подвергали колоночной хроматографии (элюент: этилацетат/петролейный эфир=1/4-1/2, объемное отношение) с получением целевого соединения 3.
MS-ESI m/z: 509,8 [M+Na]+, 511,8 [M+Na+2]+. 1H ЯМР (400МГц, CDCl3) δ: 8,27 (с, 1H), 7,27 (д, J=6,8 Гц, 1H), 6,90-6,86 (м, 2H), 6,81 (д, J=8,0 Гц, 1H), 5,72 (кв., J=6,4 Гц, 1H), 4,04 (кв., J=6,8 Гц, 2H), 3,80 (с, 3H), 3,68 (дд, J=6,6, 14,6 Гц, 1H), 3,40 (дд, J=6,4, 14,8 Гц, 1H), 2,52 (с, 3H), 2,45 (с, 3H), 1,40 (т, J=7,0 Гц, 3H).
Стадия 2: Синтез соединения 4
При комнатной температуре соединение 3 (12,10 г, 24,78 ммоль) и o-фторфенилбороновую кислоту (5,20 г, 37,17 ммоль) растворяли в диоксане (150,00 мл) и воде (50,00 мл), затем добавляли карбонат калия (10,27 г, 74,34 ммоль) и комплекс дихлорида [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия с дихлорметаном (2,02 г, 2,48 ммоль) в защитной атмосфере азота. Реакционную смесь нагревали в защитной атмосфере азота до 80°C при перемешивании в течение 14 ч. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (500 мл) и экстрагировали этилацетатом (300 мл ×3). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали для удаления осушителя. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток подвергали колоночной хроматографии (элюент: этилацетат/петролейный эфир=1/10-1/4, объемное отношение) с получением целевого соединения 4.
MS-ESI m/z: 504,1 [M+H]+. 1H ЯМР (400МГц, CDCl3) δ: 8,07 (с, 1H), 7,42 (д, J=6,8 Гц, 1H), 7,38-7,30 (м, 1H), 7,18-7,06 (м, 3H), 6,98-6,89 (м, 2H), 6,83 (д, J=8,4 Гц, 1H), 5,82 (кв., J=6,6 Гц, 1H), 4,13-4,00 (м, 3H), 3,81 (с, 3H), 3,43 (дд, J=6,4, 14,7 Гц, 1H), 2,55 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 1,41 (т, J=7,0 Гц, 3H).
Стадия 3: Синтез соединения 5
При комнатной температуре к соединению 4 (9,20 г, 18,27 ммоль) и хлориду аммония (9,77 г, 182,70 ммоль) добавляли метанол (200,00 мл) и добавляли цинковый порошок (11,95 г, 182,70 ммоль) 20 партиями при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 16 ч. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали для удаления цинкового порошка и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток растворяли в дихлорметане (200 мл). Суспензию фильтровали для удаления нерастворимых веществ и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 5.
MS-ESI m/z: 474,0 [M+H]+. 1H ЯМР (400МГц, CDCl3) δ: 7,55 (с, 1H), 7,42-7,32 (м, 1H), 7,20 (д, J=4,8 Гц, 2H), 7,13 (т, J=9,0 Гц, 1H), 7,08-7,03 (м, 2H), 6,88 (д, J=8,8 Гц, 1H), 5,70 (с, 1H), 4,19-4,07 (м, 2H), 4,00-3,90 (м, 1H), 3,87 (с, 3H), 3,58 (дд, J=6,0, 14,4 Гц, 1H), 2,78 (с, 3H), 2,05 (с, 3H), 1,47 (т, J=7,2 Гц, 3H).
Стадия 4: Синтез соединения 1
При комнатной температуре соединение 5 (9,30 г, 19,64 ммоль) и триэтиламин (19,87 г, 196,40 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (200,00 мл). Реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли по каплям раствор трифосгена (2,33 г, 7,86 ммоль) в тетрагидрофуране (50,00 мл). Тетрагидрофурановый (50,00 мл) раствор добавляли по каплям к описанному выше реакционному раствору. После добавления реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 3 ч в защитной атмосфере азота. После завершения реакции к реакционной смеси добавляли воду (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл ×3). Органические фазы объединяли, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали для удаления осушителя. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток подвергали колоночной хроматографии (элюент: этилацетат/петролейный эфир=1/3-2/1, объемное отношение) с получением соединения 1.
1H ЯМР (400МГц, CDCl3) δ: 10,13-10,01 (м, 1H), 7,87 (с, 1H), 7,39-7,32 (м, 1H), 7,31 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,18-7,15 (м, 3H), 7,11 (т, J=9,2 Гц, 1H), 6,74 (д, J=8,4 Гц, 1H), 6,14 (дд, J=4,8, 9,6 Гц, 1H), 4,86 (дд, J=9,4, 14,6 Гц, 1H), 4,09-3,97 (м, 2H), 3,88 (дд, J=4,4, 14,8 Гц, 1H), 3,76 (с, 3H), 2,70 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 1,35 (т, J=7,0 Гц, 3H).
Стадия 5: Получение кристаллической Формы A соединения 1
При комнатной температуре к соединению 1 (6,45 г, 12,91 ммоль) добавляли воду (160,00 мл) и этанол (170,00 мл) и реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 0,5 ч. Реакционный раствор постепенно становился прозрачным в процессе перемешивания. Реакционную смесь медленно охлаждали до 20°C при перемешивании и перемешивание продолжали при 20°C в течение 16 ч, в течение этого времени осаждалось много белых твердых частиц. Белые твердые частицы собирали фильтрованием и сушили в вакуумной печи при 45°C в течение 18 ч с получением кристаллической Формы A соединения 1.
MS-ESI m/z: 500,2 [M+H]+. 1H ЯМР (400МГц, CDCl3) δ: 9,97 (с, 1H), 7,94 (с, 1H), 7,46-7,39 (м, 1H), 7,38 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,26-7,22 (м, 3H), 7,17 (т, J=9,0 Гц, 1H), 6,81 (д, J=8,0 Гц, 1H), 6,22 (дд, J=4,8, 9,6 Гц, 1H), 4,93 (дд, J=9,6, 14,8 Гц, 1H), 4,13-4,03 (м, 2H), 3,95 (дд, J=4,8, 14,8 Гц, 1H), 3,83 (с, 3H), 2,77 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 1,42 (т, J=7,0 Гц, 3H).
Экспериментальный пример 1: Испытания стабильности кристаллической Формы A в различных растворителях
50 мг кристаллической Формы A несколькими порциями добавляли в один растворитель или смешанные растворители, указанные в следующей таблице, перемешивали при 40°C в течение 2 дней и центрифугировали. Твердые вещества во всех образцах собирали и сушили в вакуумной сушильной печи (40°C) в течение ночи. Кристаллические формы тестировали для XRPD. Результаты показаны в Таблице 2.
| Таблица 2 Испытания стабильности кристаллической Формы A в различных растворителях |
||||
| № | Растворитель | Добавленный растворитель (мл) | Состояние (через 2 дня) | Кристаллическая форма |
| 1 | Метанол | 0,4 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
| 2 | Этанол | 0,4 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
| 3 | Ацетонитрил | 0,4 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
| 4 | Ацетон | 0,4 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
| 5 | Этилацетат | 0,4 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
| 6 | Тетрагидрофуран | 0,3 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
| 7 | Метанол:Вода (3:1) | 0,4 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
| 8 | Этанол:Вода (3:1) | 0,4 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
| 9 | Ацетонитрил:Вода (1:1) | 0,4 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
| 10 | Ацетон:Вода (1:2) | 0,4 | Суспензия | Кристаллическая Форма A |
Заключение: Кристаллическая Форма A соединения 1 демонстрирует хорошую стабильность в спиртовом растворителе, ацетонитриле, ацетоне, этилацетате, тетрагидрофуране, смешанном растворителе, состоящем из спиртового растворителя и воды, смешанном растворителе, состоящем из кетонового растворителя и воды, смешанном растворителе, состоящем из ацетонитрила и воды, или смешанном растворителе, состоящем из ацетона и воды.
Экспериментальный пример 2: Испытание на гигроскопичность кристаллической Формы A соединения 1
Материалы:
Анализатор динамической сорбции паров SEM DVS Advantage-1
Процедуры:
10-20 мг кристаллической Формы A соединения 1 помещали в диск для образцов DVS для испытания.
Результаты:
DVS кривая кристаллической Формы A соединения 1 показана на Фиг. 4, △W= 0,08%.
Заключение:
Кристаллическая Форма A соединения 1 имела гигроскопичное увеличение массы 0,08% при 25°C и 80% RH, что было меньше 0,2%, показывая отсутствие гигроскопичности или небольшую гигроскопичность.
Экспериментальный пример 3: Испытания стабильности в твердом состоянии кристаллической Формы A соединения 1 при высокой температуре, высокой влажности и в условиях сильного освещения.
В соответствии с "Guidelines for Stability Test of APIs and Preparations" (Chinese Pharmacopoeia 2015 Edition Four General Principles 9001), кристаллическую Форму A соединения 1 испытывали на стабильность при высокой температуре (60°C, открытый образец), высокой влажности (комнатная температура/относительная влажность 92,5%, открытый образец) и сильного освещения (4500±500люкс, 90мквт/см2, плотно закрыт).
Отвешивали 1,5 г кристаллической Формы A соединения 1 и помещали на открытое предметное стекло и распределяли тонким слоем. Образцы помещали в условия высокой температуры и высокой влажности в эксикатор для контроля и образцы брали на 5, 10 и 30 день для испытания и результаты испытаний сравнивали с исходными результатами испытаний дня 0. Образцы, которые помещали в условия сильного освещения, закрывали прозрачной крышкой с герметизирующей пленкой и образцы брали на 5 и 10 день для испытания и результаты испытаний сравнивали с исходными результатами испытаний в день 0. Результаты испытаний показаны в следующей Таблице 3.
| Таблица 3 Результаты испытаний стабильности в твердом состоянии кристаллической Формы A соединения 1 в условиях высокой температуры, высокой влажности и сильного освещения |
||||
| Условия испытания | Время взятия образцов | Внешний вид | Содержание | Общее количество примесей |
| - | День 0 | Белый порошок | 99,5% | 0,11% |
| Высокая температура (60°C, открытый образец) | День 5 | Белый порошок | 99,2% | 0,16% |
| День 10 | Белый порошок | 98,8% | 0,16% | |
| День 30 | Белый порошок | 99,0% | 0,16% | |
| Высокая влажность (комнатная температура/относительная влажность 92,5%, открытый образец) | День 5 | Белый порошок | 99,0% | 0,16% |
| День 10 | Белый порошок | 98,9% | 0,16% | |
| День 30 | Белый порошок | 99,0% | 0,16% | |
| Сильное освещение (4500±500люкс,90мквт/см2, плотно закрыт) | День 5 | Белый порошок | 98,8% | 0,11% |
| День 10 | Белый порошок | 98,6% | 0,11% | |
Заключение: Кристаллическая Форма A соединения 1 показала хорошую стабильность в условиях высокой температуры, высокой влажности или сильного освещения
Экспериментальный пример 4: Испытание стабильности в твердом состоянии кристаллической Формы A соединения 1 в условиях ускоренного испытания
В соответствии с "Guidelines for Stability Test of APIs and Preparations" (Chinese Pharmacopoeia 2015, Volume IV, General Principles 9001), кристаллическую Форму A соединения 1 испытывали на стабильность в условиях ускоренных испытаний при высокой температуре и высокой влажности (40°C/относительная влажность 75%, образец плотно закрыт).
Отвешивали 1,4 г кристаллической Формы A соединения 1 и помещали в двухслойный низкой плотности полиэтиленовый пакет. Каждый слой полиэтиленового пакета с низкой плотностью загибали и запечатывали соответственно и затем пакет помещали в пакет из алюминиевой фольги и запечатывали термосваркой. Образцы брали на 1, 2, 3 и 6 месяц для испытания и результаты испытаний сравнивали с исходными результатами испытаний дня 0. Испытание повторяли три раза, каждый раз с другой партией кристаллической Формы A соединения 1. Результаты испытаний показаны в следующей Таблице 4.
| Таблица 4 Результаты испытаний стабильности в твердом состоянии кристаллической Формы A соединения 1 в условиях ускоренного испытания (40°C/относительная влажность 75%, плотно закрытый образец) |
||||||
| Условия испытания | Партия | Время взятия образцов | Внешний вид | Содержание | Общее количество примесей | Кристаллическая форма (XRPD) |
| - | 1 | День 0 | Белый порошок | 99,4% | 0,09% | Кристаллическая Форма A |
| 40°C/относительная влажность 75%, плотно закрытый образец | 1-й месяц | Белый порошок | 99,3% | 0,09% | Не определяли | |
| 2-й месяц | Белый порошок | 99,1% | 0,09% | Не определяли | ||
| 3-й месяц | Белый порошок | 99,5% | 0,09% | Не определяли | ||
| 6-й месяц | Белый порошок | 100,1% | 0,10% | Кристаллическая Форма A | ||
| - | 2 | День 0 | Белый порошок | 99,4% | 0,10% | Кристаллическая Форма A |
| 40°C /относительная влажность 75%, плотно закрытый образец | 1-й месяц | Белый порошок | 99,1% | 0,11% | Не определяли | |
| 2-й месяц | Белый порошок | 99,0% | 0,11% | Не определяли | ||
| 3-й месяц | Белый порошок | 99,2% | 0,10% | Не определяли | ||
| 6-й месяц | Белый порошок | 100,5% | 0,12% | Кристаллическая Форма A | ||
| - | 3 | День 0 | Белый порошок | 99,5% | 0,11% | Кристаллическая Форма A |
| 40°C /относительная влажность 75%, плотно закрытый образец | 1-й месяц | Белый порошок | 98,8% | 0,16% | Не определяли | |
| 2-й месяц | Белый порошок | 98,9% | 0,16% | Не определяли | ||
| 3-й месяц | Белый порошок | 99,2% | 0,16% | Не определяли | ||
| 6-й месяц | Белый порошок | 100,0% | 0,11% | Кристаллическая Форма A | ||
Заключение: Кристаллическая Форма A соединения 1 показала хорошую стабильность в условиях ускоренного испытания 40°C/относительная влажность 75%.
Экспериментальный пример 5: Испытание стабильности в твердом состоянии кристаллической Формы A соединения 1 в условиях долгосрочного хранения
В соответствии с "Guidelines for Stability Test of APIs and Preparations" (Chinese Pharmacopoeia 2015, Volume IV, General Principles 9001), кристаллическую Форму A соединения 1 испытывали на стабильность в условиях долгосрочного хранения (25°C/относительная влажность 60%, плотно закрытый образец).
Отвешивали 1,4 г кристаллической Формы A соединения 1 и помещали в двухслойный низкой плотности полиэтиленовый пакет. Каждый слой полиэтиленового пакета с низкой плотностью загибали и запечатывали соответственно и затем пакет помещали в пакет из алюминиевой фольги и запечатывали термосваркой. Образцы брали на 3, 6, 9, 12 и 18 месяц для испытания и результаты испытаний сравнивали с исходными результатами испытаний дня 0. Испытание повторяли три раза, каждый раз с другой партией кристаллической Формы A соединения 1. Результаты испытаний показаны в следующей Таблице 5.
| Таблица 5 Результаты испытаний стабильности в твердом состоянии кристаллической Формы A соединения 1 в условиях долгосрочного хранения (25°C/относительная влажность 60%, плотно закрытый образец) |
||||||
| Условия испытания | Партия | Время взятия образцов | Внешний вид | Содержание | Общее количество примесей | Кристаллическая форма (XRPD) |
| - | 1 | День 0 | Белый порошок | 99,4% | 0,09% | Кристаллическая Форма A |
| 25°C/относительная влажность 60%, плотно закрытый образец | 3-й месяц | Белый порошок | 99,0% | 0,09% | Не определяли | |
| 6-й месяц | Белый порошок | 101,4% | 0,09% | Кристаллическая Форма A | ||
| 9-й месяц | Белый порошок | 99,6% | 0,09% | Не определяли | ||
| 12-й месяц | Белый порошок | 98,8% | 0,08% | Кристаллическая Форма A | ||
| 18-й месяц | Белый порошок | 97,3% | 0,10% | Не определяли | ||
| - | 2 | День 0 | Белый порошок | 99,4% | 0,10% | Кристаллическая Форма A |
| 25°C/относительная влажность 60%, плотно закрытый образец | 3-й месяц | Белый порошок | 100,5% | 0,11% | Не определяли | |
| 6-й месяц | Белый порошок | 100,1% | 0,12% | Кристаллическая Форма A | ||
| 9-й месяц | Белый порошок | 99,6% | 0,11% | Не определяли | ||
| 12-й месяц | Белый порошок | 98,2% | 0,09% | Кристаллическая Форма A | ||
| 18-й месяц | Белый порошок | 99,1% | 0,11% | Не определяли | ||
| - | 3 | День 0 | Белый порошок | 99,5% | 0,11% | Кристаллическая Форма A |
| 25°C/относительная влажность 60%, плотно закрытый образец | 3-й месяц | Белый порошок | 98,9% | 0,16% | Не определяли | |
| 6-й месяц | Белый порошок | 98,5% | 0,12% | Кристаллическая Форма A | ||
| 9-й месяц | Белый порошок | 99,2% | 0,11% | Не определяли | ||
| 12-й месяц | Белый порошок | 98,4% | 0,10% | Кристаллическая Форма A | ||
| 18-й месяц | Белый порошок | 99,7% | 0,17% | Не определяли | ||
Заключение: Кристаллическая Форма A соединения 1 показала хорошую стабильность в условиях долгосрочного хранения 25°C/относительная влажность 60%.
Пример испытаний 1: Ингибиторная активность соединения 1 в отношении фосфодиэстеразы подтипа 4B (PDE4B фермент)
Этот биологический эксперимент, основанный на поляризации флуоресценции, использовали для определения экспрессии AMP/GMP, т.е. для демонстрации активности фермента путем отслеживания связывания антител AMP/GMP.
Агенты:
Экспериментальный буферный раствор: 10 мМ буферного раствора тригидроксиметиламинометан-хлористоводородная кислота (Tris-HCl) (pH 7,5), 5 мМ MgCl2, 0,01% полиоксиэтиленлаурилового эфира (Brij 35), 1 мМ дитиотреитола (DTT) и 1% DMSO.
Ферменты: Рекомбинантный гуманизированный PDE4B (Genebank Accession Number NM_002600; amino acid 305 terminal) экспрессировали с использованием бакуловируса в клетках насекомого Sf9 с использованием N-концевой GST метки. Мол.масса=78 кДа.
Субстрат фермента: 1 мкМ cAMP
Детекция: Transcreener®AMP2/GMP2 антитело и AMP2/GMP2 AlexaFluor633 мечение.
Процедуры:
1. Растворение рекомбинантного человеческого PDE4B фермента и субстрата фермента (1 мкМ cAMP) в свежеприготовленном экспериментальном буфере;
2. Перенос полученного буферного раствора PDE4B фермента в реакционные лунки;
3. Добавление соединения 1, растворенного при помощи 100% DMSO, в реакционную лунку с буферным раствором PDE4B фермента акустическим методом (эхо 550 нанолитровый диапазон) и осуществление инкубации в течение 10 минут при комнатной температуре;
4. Затем добавление буферного раствора субстрата фермента в указанные реакционные лунки для инициирования реакции;
5. Осуществление инкубации в течение 1 ч при комнатной температуре;
6. Добавление смеси для детекции (Transcreener®AMP2/GMP2 антитело и AMP2/GMP2 AlexaFluor633 метка) для остановки реакции и осуществление инкубации в течение 90 мин при медленном перемешивании. Диапазон определения поляризации флуоресценции возбуждение/эмиссия=620/688.
Анализ данных: Сигнал поляризации флуоресценции преобразовывали в нМ в соответствии с AMP/GMP стандартной кривой и контрольной % активностью фермента относительно DMSO, рассчитанной с использованием программы Excel. Подгонку кривой осуществляли с использованием программы GraphPad Prism (графически представляющей медицинские данные).
| Таблица 6 Результаты in vitro скринингового теста соединения в соответствии с настоящим раскрытием |
|
| Соединение | IC50 (нМ) |
| Соединение 1 | 0,685 |
Заключение: Соединение 1 показало отличную in vitro активность ингибирования фосфодиэстеразы подтипа 4B (PDE4B).
Пример испытаний 2: Оценка ингибирования продукции TNFα в мононуклеарных клетках периферической крови человека (hPBMC) in vitro
Активность соединения 1, направленная на ингибирование липополисахарид (LPS)-индуцированной продукции TNFα в человеческих мононуклеарных клетках периферической крови.
Процедуры:
1. Сбор нормальной цельной крови человека, которую подвергали антикоагуляционной обработке с использованием пробирки с антикоагулянтом EDTA-K2;
2. Отделение PBMC центрифугированием в градиенте плотности фиколла, подсчет и доведение клеточной концентрации до 2×106/мл;
3. В U-донный 96-луночный планшет добавляли 2×105 клеток/лунка, добавляли LPS 1 нг/мл, различные концентрации соединения при 100 мкМ, 10 мкМ, 1 мкМ, 100 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 100 пМ, 10 пМ, 200 мкл системы/лунка, в дублируемые лунки;
4. Осуществление инкубации в течение 24 ч, сбор супернатанта;
5. Детекция уровня TNFα в супернатанте методом ELISA, подгонка кривой ингибирования и расчет IC50 с использованием программы Graphpad Prism.
| Таблица 7 Ингибиторная активность соединения в соответствии с настоящим раскрытием в отношении продукции TNFα в hPBMC |
|||
| Соединение | IC50(нМ) | Соединение | IC50(нМ) |
| Апремиласт | 16,5 (n=3) | Соединение 1 | 0,56 (n=2) |
| n представляет количество испытаний | |||
Заключение: Соединение 1 показало отличную in vitro активность ингибирования продукции TNFα в hPBMC, которая была выше, чем у Апремиласта.
Пример испытаний 3: Модель CIA in vivo
Цель:
Модель коллаген-индуцированного артрита у мышей представляет собой животную модель, используемую для оценки эффективности лекарственного лечения псориатического артрита, и патогенез и симптомы в значительной степени коррелируют с псориатическим артритом. Ряд симптомов, подобных псориатическому артриту человека, таких как покраснение и отек сустава, повреждение суставного хряща и повреждение суставной капсулы, вызывается в модели путем инъекции коллагена типа II для активации реактивности В-клеток, Т-клеток на костный коллаген, и активированные В-клетки и Т-клетки проникают в суставы, вызывая воспаление суставов. При доклинической оценке соединений-кандидатов для лечения псориатического артрита часто используют коллаген-индуцированный артрит у мышей для оценки эффективности.
Целью этого эксперимента было исследование терапевтического эффекта соединения 1 на коллаген-индуцированный артрит у мышей для предоставления соответствующей доклинической фармакодинамической информации для последующих клинических исследований.
Процедуры:
1. Иммунизация с использованием коллагена II типа/полного адъюванта Фрейнда
Получение уксусной кислоты: Разбавление уксусной кислоты до 100 мМ, фильтрование через 0,22 мкм мембранный фильтр и хранение при 4°C.
Раствор бычьего коллагена II типа: Растворение бычьего коллагена II типа (CII) в растворе уксусной кислоты, который хранили при 4°C в течение ночи.
Получение эмульсии: Смешивание CII раствора, который хранили в течение ночи, с равным объемом полного адъюванта Фрейнда и гомогенизация смеси с использованием высокоскоростного гомогенизатора до образования стабильной эмульсии из раствора.
Получение липополисахарида (LPS): Отвешивание LPS, добавление нормального солевого раствора и смешивание до получения стабильного раствора с концентрацией 0,3 мг/кг.
2. Индукция артрита:
Мышей рандомизированно разделяли на разные группы обработки. День первой иммунизации определяли как день 0, а последующие дни обозначали последовательно.
После того, как DBA/1 мышей анестезировали изофлураном, полученную эмульсию коллагена вводили подкожно в хвост.
В день 23 интраперитонеально вводили 100 мкл раствора LPS.
Мышам в нормальной группе иммунизацию не осуществляли.
3. Введение и схема введения доз
В день 27, когда средняя клиническая оценка достигала примерно 1, отбирали 60 мышей с умеренным началом заболевания и их снова рандомизированно разделяли в соответствии с массой тела и оценкой, по 10 мышей в каждой группе.
В CIA модели обычно используют дексаметазон в качестве положительного контрольного лекарственного средства в 0,3 мг/кг дозовой группе. Кроме того, соответствующую схему введения доз соединения 1 и контрольного соединения Апремиласта определяли в соответствии с результатами предварительных экспериментов. Группа 1 включала нормальных мышей без какой-либо обработки; Группа 2 представляла собой контрольную группу введения носителя; Группа 3 представляла собой группу введения дексаметазона при дозе 0,3 мг/кг; Группа 4 представляла собой группу введения Апремиласта при дозе 5 мг/кг; Группа 5, Группа 6 и Группа 7 представляли собой группы введения Соединения 1 при дозах 0,3, 1 и 3 мг/кг, соответственно. Введение осуществляли один раз в день всего в течение 11 дней. Объем внутрижелудочного введения составлял 10 мл/кг.
| Таблица 8 Группы и схема введения доз |
||||||
| Группа | Испытываемое лекарственное средство | Количество | Путь введения | Концентрация | Доза | Частота введения |
| мг/мл | мг/кг | |||||
| 1 | Нормальная группа | 5 | N/A. | N/A | N/A | N/A |
| 2 | Носитель | 10 | Через желудочный зонд | N/A | N/A | 1/день, 11 дней |
| 3 | Дексаметазон | 10 | Через желудочный зонд | 0,03 | 0,3 | 1/день, 11 дней |
| 4 | Апремиласт | 10 | Через желудочный зонд | 0,5 | 5 | 1/день, 11 дней |
| 5 | Соединение 1 | 10 | Через желудочный зонд | 0,03 | 0,3 | 1/день, 11 дней |
| 6 | Соединение 1 | 10 | Через желудочный зонд | 0,1 | 1 | 1/день, 11 дней |
| 7 | Соединение 1 | 10 | Через желудочный зонд | 0,3 | 3 | 1/день, 11 дней |
4. Определение показателя инцидентности артрита
Клиническое наблюдение: от 7 дней до иммунизации до 23 дней после иммунизации основное состояние здоровья и изменения массы тела мышей DBA/1 наблюдали ежедневно (регистрировали один раз в неделю). После 23-го дня состояние здоровья, заболеваемость и изменение массы тела мышей наблюдали ежедневно (регистрировали не менее трех раз в неделю) до конца эксперимента.
Клиническая оценка: после инъекции LPS заболеваемость мышей наблюдали каждый день. После начала заболевания у мышей (клинические симптомы артрита) их оценивали в соответствии с тяжестью состояния (покраснение и отек, деформация суставов) в соответствии с 0-4-балльным стандартом, с максимальной оценкой 4 для каждой конечности и максимальной оценкой 16 для каждого животного. Стандарт оценки показан в Таблице 9. Оценку осуществляли по меньшей мере три раза в неделю.
| Таблица 9 Стандарт клинической оценки артрита |
|
| Оценка | Клинические симптомы |
| 0 | Отсутствие эритемы, покраснения и отека |
| 1 | Эритема или небольшое покраснение и отек около предплюсневой кости или голеностопного сустава или плюсневой кости, 1 палец с покраснением и отеком |
| 2 | Небольшая эритема и отек голеностопного сустава и плюсневой кости, или более чем два пальца с покраснением и отеком |
| 3 | Умеренная эритема и отек голеностопного сустава, запястного сустава и плюсневой кости |
| 4 | Сильное покраснение и отек всех голеностопных суставов, запястных суставов, плюсневой кости и пальцев |
Патология: На 38 день мышь умерщвляли. Брали две задние конечности мыши, пропитывали 10% раствором формалина, декальцинировали раствором муравьиной кислоты, заливали парафином, делали срезы, окрашивали гематоксилин-эозином (HE) и наблюдали микрофотографическим методом. Степень повреждения сустава оценивали по четырем параметрам: инфильтрация воспалительными клетками, образование паннуса, повреждение хряща и резорбция кости, и оценивали по 0-4 балльному стандарту. Стандарт оценки представлен в таблице 10:
| Таблица 10 Стандарт оценки патологии артрита |
||
| Поражение | Характеристики поражения | Оценка |
| Инфильтрация воспалительными клетками | Отсутствие видимых воспалительных клеток | 0 |
| Фиброз клеток под синовиальной оболочкой, с минимальной клеточной инфильтрацией | 1 | |
| Гиперплазия синовиальных клеток, с небольшим количеством инфильтрации моноцитами | 2 | |
| Гиперплазия синовиальных клеток, с массивной инфильтрации моноцитами, клетками плазмы, лимфоцитами | 3 | |
| Инфильтрация большим количеством воспалительных клеток вокруг сустава, фиброз ткани, утолщение синовиальной оболочки | 4 | |
| Образование паннуса | Отсутствие видимого образования паннуса | 0 |
| Минимальное образование паннуса у края хряща | 1 | |
| Гиперплазия фиброзной ткани между хрящами, с небольшим образованием паннуса у края сустава | 2 | |
| Образование паннуса на 50% поверхности суставного хряща | 3 | |
| Образование паннуса на всей поверхности суставного хряща | 4 | |
| Повреждение хряща | Отсутствие видимого повреждения хряща | 0 |
| Гиперплазия суставных хондроцитов | 1 | |
| Потеря матрицы хондроцитов, с небольшим количеством разрушенных хондроцитов | 2 | |
| Гиперплазия фиброзной ткани вокруг суставов, с большим количеством разрушенных хондроцитов | 3 | |
| Большая гиперплазия фиброзной ткани между суставными хрящами, с эрозией хрящей | 4 | |
| Резорбция кости | Отсутствие видимой резорбции кости | 0 |
| Минимальная резорбция кости у края синовиальной оболочки | 1 | |
| Образование небольшого количества остеокластов для небольшого количества костной ткани | 2 | |
| Костная ткань под очаговым суставным хрящом, с резорбцией кости | 3 | |
| Резорбция кости для широкого ряда костных тканей, с эрозией хрящей | 4 | |
5. Статистическая обработка
Экспериментальные данные выражали как среднее значение ± стандартная ошибка (Среднее значение ± SEM), массу тела и клиническую оценку анализировали с использованием двухфакторного дисперсионного анализа, патологическую оценку и AUC анализировали с использованием t-критерия, и значение p <0,05 считалось значимым.
Экспериментальные результаты:
1. Клиническая оценка:
В день 25 после первой иммунизации (День 2 после второй иммунизации) у мышей начиналось развитие клинических симптомов артрита. Введение начинали на 27 день. Средняя клиническая оценка контрольной группы введения носителя постепенно повышалась и достигала 8,3 пунктов в день 36, указывая на успешное установление модели коллаген-индуцированного артрита.
По сравнению с контрольной группой введения носителя, соединение 1 при 0,3, 1 и 3 мг/кг может существенно снижать клиническую оценку артрита у мышей в конечной точке эксперимента (день 37), и клинические средние оценки при трех дозах падали до 3,6 (p<0,0001), 4,3 (p<0,001) и 3,5 (p<0,0001). Следовательно, соединение 1 может эффективно уменьшать коллаген-индуцированный артрит при такой низкой дозе как 0,3 мг/кг. В группе введения 0,3 мг/кг дексаметазона могла существенно подавляться клиническая оценка коллаген-индуцированного артрита. С дня 30 клиническая оценка поддерживалась при 0, что существенно отличалось от контрольной группы введения носителя (p<0,0001), и оставалась на этом уровне до конца эксперимента. В группе введения 5 мг/кг Апремиласта также подавлялось повышение клинической оценки, и было показано существенное отличие от контрольной группы введения носителя с дня 33, и оно продолжалось до конца эксперимента. До дня 37 средняя оценка клинических симптомов составляла 4,2, что было ниже на 3,7 (p<0,001) по сравнению с контрольной группой введения носителя.
Путем анализа кривой клинической оценки каждого животного в каждой группе рассчитывали площадь под кривой (AUC). С использованием среднего значения площади под кривой между группами рассчитывали процент ингибирования в каждой дозовой группе относительно контрольной группы введения носителя. По сравнению с контрольной группой введения носителя, в группе введения дексаметазона и группе введения Апремиласта существенно снижались клинические оценки артрита у животных, и проценты ингибирования составили 96,4% (p<0,0001) и 41,3% (p<0,05), соответственно. Соединение 1 при трех дозах 0,3, 1 и 3 мг/кг может существенно уменьшать площадь под кривой клинической оценки артрита у животных, и проценты ингибирования составили 43,9% (p<0,05), 39,4% (p<0,05) и 51,7% (p<0,01), соответственно. Группа введения соединения 1 при 1 мг/кг имела процент ингибирования, сопоставимый с группой введения Апремиласта при 5 мг/кг (p<0,05 для обеих групп), тогда как группа введения соединения 1 при 3 мг/кг имела лучшие проценты ингибирования, чем группа введения Апремиласта при 5 мг/кг (p значения были < 0,01 и <0,05, соответственно)
2. Гистопатологическая оценка
Две задние конечности из каждой группы мышей брали в виде срезов для H.E. окрашивания, и получали общую оценку обеих задних конечностей. Артрит у мышей в контрольной группе введения носителя имел общую патологическую оценку 20,20±1,15. По сравнению с контрольной группой введения носителя, контрольное соединение Апремиласт при дозе 5 мг/кг также существенно снижало патологическую оценку артрита у мышей, которая могла снижаться до 13,90±1,89 (p<0,05). Соединение 1 при дозе 1 и 3 мг/кг могло существенно снижать патологические оценки артрита у мышей, которые могли снижаться до 14,00±2,43 (p<0,05) и 9,20±1,83 (p<0,0001), соответственно. Группа введения соединения 1 при 1 мг/кг имела патологическую оценку артрита, сопоставимую с группой введения Апремиласта при 5 мг/кг (p<0,05 для обеих групп), тогда как группа введения соединения 1 при 3 мг/кг имела лучшую патологическую оценку артрита, чем в группе введения Апремиласта при 5 мг/кг (p значения <0,0001 и <0,05, соответственно).
3. Заключение
Соединение 1 в трех дозовых группах 0,3, 1 и 3 мг/кг существенно улучшало симптомы коллаген-индуцированного артрита.
Было существенное улучшение патологии артрита в 1 мг/кг и 3 мг/кг дозовых группах, и эти три дозовые группы показали очевидную взаимосвязь доза-эффект в патологической оценке артрита. Терапевтический эффект соединения 1 при 3 мг/кг (клиническая оценка и патологическая оценка артрита) был лучше, чем у Апремиласта при 5 мг/кг.
Claims (20)
1. Кристаллическая Форма A соединения 1, где
кристаллическая Форма A характеризуется рентгеновской порошковой дифрактограммой, имеющей характеристические дифракционные пики при следующих углах 2θ: 10,69±0,2°, 12,31±0,2°, 13,45±0,2°, 14,10±0,2°, 14,62±0,2°, 19,07±0,2°, 20,33±0,2° 21,79±0,2°
Соединение 1.
2. Кристаллическая Форма A соединения 1 по п. 1, где
кристаллическая Форма A характеризуется рентгеновской порошковой дифрактограммой, имеющей характеристические дифракционные пики при следующих углах 2θ: 6,25±0,2°, 8,93±0,2°, 10,69±0,2°, 12,31±0,2°, 13,45±0,2°, 14,10±0,2°, 14,62±0,2°, 18,16±0,2°, 19,07±0,2°, 20,33±0,2°, 21,79±0,2°.
3. Кристаллическая Форма A соединения 1 по п. 2, где
кристаллическая Форма A характеризуется рентгеновской порошковой дифрактограммой, показанной на Фиг. 1.
4. Кристаллическая Форма A соединения 1 по любому из пп. 1-3, где
кристаллическая Форма A характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, имеющую точку начала эндотермического пика при 201,70°C±2°C.
5. Кристаллическая Форма A соединения 1 по п. 4, где кристаллическая Форма A характеризуется кривой DSC, показанной на Фиг. 2.
6. Кристаллическая Форма A соединения 1 по любому из пп. 1-3, где кристаллическая Форма A характеризуется кривой термогравиметрического анализа, где потеря массы при 100,00±2°C составляет 0,02039%.
7. Кристаллическая Форма A соединения 1 по п. 6, где кристаллическая Форма A характеризуется кривой TGA, показанную на Фиг. 3.
8. Способ получения кристаллической Формы A соединения 1 по п. 1, включающий
добавление соединения 1 в спиртовой растворитель, кетоновый растворитель, смешанный растворитель, состоящий из спиртового растворителя и воды, смешанный растворитель, состоящий из кетонового растворителя и воды; спиртовой растворитель выбран из группы, состоящей из метанола, этанола; кетоновый растворитель выбран из группы, состоящей из ацетона и
нагревание для растворения и затем охлаждение для кристаллизации с получением кристаллической Формы A.
9. Способ получения кристаллической Формы A соединения 1 по п. 8, где
смешанный растворитель, состоящий из спиртового растворителя и воды, выбран из группы, состоящей из смешанного растворителя, состоящего из этанола и воды.
10. Способ получения кристаллической Формы A соединения 1 по п. 9, где
в смешанном растворителе, состоящем из спиртового растворителя и воды, объемное отношение спиртового растворителя к воде выбрано из группы, состоящей из 1:0,2-1,5.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810085704.1 | 2018-01-29 | ||
| CN201810085704 | 2018-01-29 | ||
| PCT/CN2019/073701 WO2019144970A1 (zh) | 2018-01-29 | 2019-01-29 | 一种1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮类化合物的晶型及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020127989A RU2020127989A (ru) | 2022-02-28 |
| RU2784538C2 true RU2784538C2 (ru) | 2022-11-28 |
Family
ID=
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006025991A3 (en) * | 2004-07-28 | 2006-08-24 | Celgene Corp | Isoindoline compounds and methods of making and using the same |
| WO2011021678A1 (ja) * | 2009-08-21 | 2011-02-24 | 武田薬品工業株式会社 | 縮合複素環化合物 |
| US20110319394A1 (en) * | 2010-06-24 | 2011-12-29 | Takahiko Taniguchi | Fused heterocyclic compounds |
| US20120178708A1 (en) * | 2011-01-10 | 2012-07-12 | Celgene Corporation | Phenethylsulfone isoindoline derivatives and their use |
| WO2015175956A1 (en) * | 2014-05-16 | 2015-11-19 | Celgene Corporation | Compositions and methods for the treatment of atherosclerotic cardiovascular diseases with pde4 modulators |
| CN105407888A (zh) * | 2013-06-21 | 2016-03-16 | 齐尼思表观遗传学公司 | 新双环溴结构域抑制剂 |
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006025991A3 (en) * | 2004-07-28 | 2006-08-24 | Celgene Corp | Isoindoline compounds and methods of making and using the same |
| WO2011021678A1 (ja) * | 2009-08-21 | 2011-02-24 | 武田薬品工業株式会社 | 縮合複素環化合物 |
| US20110319394A1 (en) * | 2010-06-24 | 2011-12-29 | Takahiko Taniguchi | Fused heterocyclic compounds |
| US20120178708A1 (en) * | 2011-01-10 | 2012-07-12 | Celgene Corporation | Phenethylsulfone isoindoline derivatives and their use |
| CN105407888A (zh) * | 2013-06-21 | 2016-03-16 | 齐尼思表观遗传学公司 | 新双环溴结构域抑制剂 |
| WO2015175956A1 (en) * | 2014-05-16 | 2015-11-19 | Celgene Corporation | Compositions and methods for the treatment of atherosclerotic cardiovascular diseases with pde4 modulators |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MINO R. CAIRA: "Crystalline Polymorphism of Organic Compounds", TOPICS IN CURRENT CHEMISTRY, 1998, vol.198, pp.163-208. BARBARA RODRIGUEZ-SPONG et al.: "General principles of pharmaceutical solid polymorphism: a supramolecular perspective", ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, 2004, 56, p.241-274. Дж. Бернштейн "Полиморфизм молекулярных кристаллов" Москва, Наука, 2007, гл. 7.3.2.Биодоступность, с.324-330. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2694895C2 (ru) | Нацеленные на белки соединения, их композиции, способы и применения | |
| JP2950616B2 (ja) | トリテルペン誘導体 | |
| JP5351078B2 (ja) | 炎症反応を阻害又は増強するための組成物及び方法 | |
| CN105399694B (zh) | 药物Lesinurad轴手性对映体 | |
| EA028550B1 (ru) | Ингибитор грелин-o-ацилтрансферазы | |
| TW201120042A (en) | N-((1R,2S,5R)-5-(tert-butylamino)-2-((S)-3-(7-tert-butylpyrazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-ylamino)-2-oxopyrrolidin-1-yl)cyclohexyl)acetamide, a dual modulator of chemokine receptor activity, crystalline forms and processes | |
| US11325907B2 (en) | Crystal form of 1H-imidazo[4,5-b]pyridine-2(3H)-one compound and preparation process therefor | |
| RU2784538C2 (ru) | Кристаллическая форма соединения 1h-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3h)-она и способ ее получения | |
| US20250353845A1 (en) | Thyroid hormone beta receptor agonist, crystal form, preparation method and use | |
| WO2016192523A1 (zh) | 阿特匹灵c及其类似物在制备防治代谢性疾病的药物中的应用 | |
| JPS6110596A (ja) | 新規ペプタイド | |
| CN114409673B (zh) | 一种吗啡喃类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN114409597B (zh) | 一种青藤碱衍生物及其制备方法与应用 | |
| AU774981B2 (en) | Thiazolopyrimidines useful as TNFalpha inhibitors | |
| TW201813640A (zh) | 含ｓｒｃ同源區２蛋白酪胺酸磷酸酶－１增效劑用於改善纖維化之用途 | |
| HK40036985A (en) | Crystal form of 1h-imidazo[4,5-b]pyridine-2(3h)-one compound and preparation method therefor | |
| RU2814498C2 (ru) | Кристаллическая форма ингибитора фосфодиэстеразы, способ ее получения и ее применение | |
| CN113730419B (zh) | 20S,24R-环氧-达玛烷-3β,12β,25-三醇衍生物与其药物组合物 | |
| HK40036985B (en) | Crystal form of 1h-imidazo[4,5-b]pyridine-2(3h)-one compound and preparation method therefor | |
| CN114072382B (zh) | 一种苯并咪唑-2-酮类化合物的晶型、溶剂化物、溶剂化物的晶型及它们的制备方法 | |
| JP2025540242A (ja) | 甲状腺ホルモンβ受容体作動薬、結晶形、製造方法及びその用途 | |
| CN110066258A (zh) | 噻唑-5-甲酸衍生物及其制备方法与应用 | |
| WO2024141104A1 (zh) | 一种新型哒嗪类化合物及其药物组合物和用途 | |
| JPH0434541B2 (ru) | ||
| JPH0873453A (ja) | サイトカイン阻害剤 |