RU2766292C1 - Состав вакцины против covid-19 - Google Patents
Состав вакцины против covid-19 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2766292C1 RU2766292C1 RU2021123376A RU2021123376A RU2766292C1 RU 2766292 C1 RU2766292 C1 RU 2766292C1 RU 2021123376 A RU2021123376 A RU 2021123376A RU 2021123376 A RU2021123376 A RU 2021123376A RU 2766292 C1 RU2766292 C1 RU 2766292C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- cov
- composition
- sars
- solution
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 94
- 229940022962 COVID-19 vaccine Drugs 0.000 title description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 28
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N squalane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 20
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims abstract description 19
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims abstract description 18
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 18
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 16
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 14
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 claims abstract description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims abstract description 11
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 9
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 10
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 9
- 108091006197 SARS-CoV-2 Nucleocapsid Protein Proteins 0.000 claims description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 5
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 claims description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 abstract description 13
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 abstract 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 abstract 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 13
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 7
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 7
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 7
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- -1 SB3-10 Chemical compound 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 4
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 2
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 2
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DSNRWDQKZIEDDB-SQYFZQSCSA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-(1'-sn-glycerol) Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC DSNRWDQKZIEDDB-SQYFZQSCSA-N 0.000 description 1
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 229940015297 1-octanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- GUQQBLRVXOUDTN-XOHPMCGNSA-N 3-[dimethyl-[3-[[(4r)-4-[(3r,5s,7r,8r,9s,10s,12s,13r,14s,17r)-3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]propyl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC(O)CS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 GUQQBLRVXOUDTN-XOHPMCGNSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 241000008904 Betacoronavirus Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 1
- 108010061994 Coronavirus Spike Glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N Dimethyl dicarbonate Chemical compound COC(=O)OC(=O)OC GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 108010035713 Glycodeoxycholic Acid Proteins 0.000 description 1
- WVULKSPCQVQLCU-UHFFFAOYSA-N Glycodeoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 WVULKSPCQVQLCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010035737 Pneumonia viral Diseases 0.000 description 1
- 229920001363 Polidocanol Polymers 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920002701 Polyoxyl 40 Stearate Polymers 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 229920002642 Polysorbate 65 Polymers 0.000 description 1
- 206010056342 Pulmonary mass Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 101710137302 Surface antigen S Proteins 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000002588 alveolar type II cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009529 body temperature measurement Methods 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- NFCRBQADEGXVDL-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride monohydrate Chemical compound O.[Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 NFCRBQADEGXVDL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical class C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPHQZTVXXXJVHI-UHFFFAOYSA-N dimyristoyl phosphatidylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC BPHQZTVXXXJVHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L disodium;2,2-dioctyl-3-sulfobutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCCCCC(C([O-])=O)(C(C([O-])=O)S(O)(=O)=O)CCCCCCCC YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCO SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N glycodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WVULKSPCQVQLCU-BUXLTGKBSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229950006462 lauromacrogol 400 Drugs 0.000 description 1
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M lithium;dodecyl sulfate Chemical class [Li+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- WUOSYUHCXLQPQJ-UHFFFAOYSA-N n-(3-chlorophenyl)-n-methylacetamide Chemical compound CC(=O)N(C)C1=CC=CC(Cl)=C1 WUOSYUHCXLQPQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007908 nanoemulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000008180 pharmaceutical surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001816 polyoxyethylene sorbitan tristearate Substances 0.000 description 1
- 235000010988 polyoxyethylene sorbitan tristearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099429 polyoxyl 40 stearate Drugs 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 229940099511 polysorbate 65 Drugs 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 229940124272 protein stabilizer Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ADWNFGORSPBALY-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[dodecyl(methyl)amino]acetate Chemical class [Na+].CCCCCCCCCCCCN(C)CC([O-])=O ADWNFGORSPBALY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical compound CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 210000001944 turbinate Anatomy 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 208000009421 viral pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описана фармацевтическая композиция, предназначенная для индукции специфического иммунного ответа против вируса острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащая нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2. Вакцина имеет следующий состав на 1 мл: нуклеокапсидный белок NSARS-CoV-2, имеющий аминокислотную последовательность SEQIDNO: 1 20-100 мкг; сквалан 15-40 мг; α-токоферол 5-15 мг; полисорбат 80 1-10 мг; натрий фосфорно-кислый двузамещенный 0,1-2,0 мг; калий фосфорнокислый однозамещенный 0,01-0,25 мг; калия хлорид 0,01-0,2 мг; натрия хлорид 0,1-8,5 мг; вода для инъекций до 1 мл. Также представлен способ получения указанной композиции, который включает: обеспечение нуклеокапсидного белка NSARS-CoV-2, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, в количестве от 20 до 100 мкг/мл; растворение белка в водном растворителе и доведение содержания белка N в растворе до требуемой концентрации; приготовление водного раствора адъюванта; смешение водного раствора, содержащего белок N, и водного раствора адъюванта; гомогенизация полученной смеси до получения однородного по цвету раствора; регулирование полученной композиции рН до 7,2-7,6. Изобретение позволяет получить стабильную композицию, способную при ее введении в организм вызвать иммунный ответ и индуцировать специфический иммунный ответ против SARS-CoV-2. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 8 табл., 7 пр.
Description
Область техники
Изобретение относится к биотехнологии, иммунологии и вирусологии. Создана фармацевтическая композиция для индукции специфического иммунитета против вируса острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащая нуклеокапсидный белок NSARS-CoV-2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, в количестве от 20 до
100 мкг/мл и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, выбранные из группы, включающей буферные агенты, поверхностно-активные вещества, адъювант, изотонический агент в фармацевтически приемлемых количествах.
100 мкг/мл и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, выбранные из группы, включающей буферные агенты, поверхностно-активные вещества, адъювант, изотонический агент в фармацевтически приемлемых количествах.
Предшествующий уровень техники
В 2019 г. в Китае был обнаружен новый одноцепочечный РНК-содержащий вирус, относящимся к семейству Coronaviridae, к линии Beta-CoV B. Новый коронавирус быстро распространился по всем континентам, вызывая тяжелые состояния: вирусную пневмонию, сосудистые нарушения, усугубление хронических заболеваний. В феврале 2020 г. Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) присвоила новому вирусу официальное название SARS-CoV-2, а болезнь в случае этого вируса - название COVID-19 («Coronavirusdisease 2019»).
В настоящее время проблема профилактики инфекции коронавируса SARS-CoV-2 является большой проблемой, т.к. эффективного лекарственного средства до сих пор не разработано. Основным профилактическим средством в случае вирусных инфекцией является вакцина – средство, включающее антиген, который вызывает иммунную реакцию организма и приводит к индукции более сильного вторичного иммунного ответа. Таким образом, вакцинированный пациент либо не заражается инфекцией либо в организме происходит реакция быстрой элиминации вируса, что позволяет в этом случае переносить заболевание в более легкой форме.
Известны различные композиции вакцин для индукции иммунного ответа в случае коронавирусных инфекций нового типа.
Так, например, согласно патенту RU 2709659 известно иммунобиологическое средство на основе рекомбинантного аденовируса человека 5-го серотипа или рекомбинантного аденовируса человека 26-го серотипа, содержащее оптимизированную под экспрессию в клетках млекопитающих консенсусную последовательность полного протективного антигена S коронавируса на основании последовательностей генов белка S современных штаммов вируса 2015-2017 гг. с определенной последовательностью.
Также из патента US 10953089 известна вакцина, включающая наночастицы с гликопротеином S коронавируса SARS-CoV-2 и ядро из неионогенное ПАВ, а также буфер и адъювант на основе сапонина. Предлагаемые частицы обладают стабильностью и лучшей презентацией эпитопа антигена.
Патент CN111944064 описывает вакцину, включающую белок S-S-RBD, белок домена сборки, сигнальные белки, а также адъювант на основе сквалена. Полученная композиция представляет собой наноэмульсию «вода-в-масле».
Таким образом, техническая задача состоит в разработке и получении стабильной композиции, способной при ее введении в организм вызывать иммунный ответ и индуцировать специфический иммунитет против SARS-CoV-2. Поставленная задача решается получением композиции, содержащей нуклеокапсидный белок N SARS-CoV-2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, в количестве от 20 до 100 мкг/мл и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, выбранные из группы, включающей буферные агенты, поверхностно-активные вещества, адъювант, изотонические агенты в фармацевтически приемлемых количествах. При этом полученная композиция обладает стабильностью, способностью вызывать стойкий и длительный иммунный ответ, с высоким титром антител к инфекции коронавируса SARS-CoV-2, а также композицию можно достаточно просто получить с технологической точки зрения.
Описание фигур
На Фиг. 1 представлены примеры выявленных изменений в легком: показано развитие тяжелой интерстициальной пневмонии и некроз эпителия, при исследовании согласно примеру 7, группа 8.
На Фиг. 2 представлены примеры выявленных изменений легких: показаны выраженные гиперплазия альвеолярных эпителиальных клеток II типа, а также смешанная выраженная смешанно клеточная воспалительная инфильтрация, при исследовании согласно примеру 7, группа 8.
На Фиг. 3 показано нормальное строение легкого, спустя 2 недели после выздоровления животных, при исследовании согласно примеру 7, группа 7.
Подробное описание изобретения
Вакцины, как правило, представляют собой композицию, включающую антиген в виде белка или смеси белков, а также вспомогательные веществ.
Антиген является фармацевтически активной субстанцией, ответственной за развитие иммунного ответа в организме пациента. Однако, по различным причинам, вводимый антиген может быть нестабильным, например, его невозможно хранить и технологически обрабатывать без потери активности в течение определенного времени, под воздействием окружающей среды. Кроме того, при введении в организм антиген может разрушаться под действием ферментов или иных веществ организма (например, среды кровотока).
Согласно настоящему изобретению, предложена фармацевтическая композиция, предназначенная для индукции специфического иммунного ответа против вируса острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащая нуклеокапсидный белок NSARS-CoV-2, имеющий аминокислотную последовательность SEQIDNO: 1, в количестве от 20 до 100 мкг/мл и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, выбранные из группы, включающей буферные агенты, поверхностно-активные вещества, адъюванты, изотонические агенты. Данные вспомогательные вещества, как правило, содержатся в композиции в фармацевтически приемлемых количествах. В одном из вариантов реализации, композиция согласно изобретению содержит нуклеокапсидный белок NSARS-CoV-2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, в количестве от 20 до 50 мкг/мл.
В еще одном варианте реализации композиция согласно изобретению в качестве адъюванта содержит токоферол, сквалан или их комбинацию. В другом варианте реализации композиция согласно изобретению может содержать в качестве буферных агентов любой фармацевтически приемлемый буфер, который может быть использован для поддержания рН около 7, например, фосфатно-солевой буфер, малеатный буфер, тетрабутиламмония буферный раствор, боратный буфер, HEPES буфер, трис(гидроксиметил)аминометана буферный раствор, или любой другой физиологически приемлемый буфер, используемый для поддержания рН в диапазоне 7-8, предпочтительно, в диапазоне 7,2-7,6.
Также композиция согласно изобретению может содержать фармацевтические приемлемые поверхностно-активные вещества (ПАВ), например, полисорбаты, твины, сорбитаны и другие подходящие ПАВ, например, лаурилсульфата натрия, диоктилсульфосукцината натрия, диоктилсульфоната натрия, хенодезоксихолевой кислоты, натриевой соли N-лаурилсаркозина, додецилсульфата лития, натриевой соли 1-октансульфокислоты, гидрата холата натрия, дезоксихолата натрия, натриевой соли гликодезоксихолевой кислоты, бензалконийхлорида илибензетонийхлорида, моногидрата цетилпиридинийхлорида, гексадецилтриметиламмония бромида,CHAPS, CHAPSO, SB3-10, SB3-12, дигитонина, Тритона Х-100, Тритона Х-114, лауромакрогола 400,полиоксил-40-стеарата, полиоксиэтилен гидрогенизированного касторового масла 10, 40, 50 и 60, моностеаратаглицерина, полисорбата 20, 40, 60, 65 и 80, лецитина из сои, DOPC, DMPG, DMPC и DOPG; эфира сахарозы и жирных кислот, метилцеллюлозы и карбоксиметилцеллюлозы. Предпочтительная концентрация ПАВ может составлять от 0,005 до 5% масс, или, например, 1-10 мг на 1 мл. Также в композиции могут содержаться изотонические агенты, например, калия хлорид, натрия хлорид. Изотонический агент действует не только для поддержания подходящего осмотического давления, но и может выполнять функции вспомогательного стабилизатора белка в жидкой форме иди лиофилизате. Примеры изотонического агента включают растворимые в воде неорганические соли, например, хлорид натрия, сульфат натрия, цитрат натрия, хлорид кальция и их комбинация. Наиболее предпочтительным является хлорид натрия. Предпочтительно концентрация изотонического агента составляет порядка от 5 до 200 мМ, или, например, 0,1-8,5 мг на мл. В пределах данного диапазона концентрация изотонического агента может регулироваться в соответствии с видами и количествами содержащихся компонентов, с тем чтобы жидкая композиция была изотонической.
Адъюванты представляют собой компоненты, используемые в композициях вакцин, которые потенцируют иммунный ответ на антиген, и/или модулирующий его с целью получения требуемого иммунного ответа. В качестве адъювантов могут использоваться минеральные соли, например, гели алюминия гидроксида и алюминия или кальция фосфата; препараты на основе масляных эмульсий и сурфактантов, например, MF59 (микросжиженный детергент, стабилизированный в эмульсии «масло в воде»), QS21 (очищенный сапонин), AS02 [SBAS2] (эмульсия «масло в воде» + MPL + QS-21), монтанид ISA-51 и ISA-720 (стабилизированная эмульсия «вода в масле»), дисперсные адъюванты, например, виросомы (однослойные липосомальные носители, включающие гемагглютинин гриппа), AS04 ([SBAS4] соль Al с MPL), ИСКОМы (структурный комплекс сапонинов и липидов), полилактид ко-гликолид (PLG), микробные производные (естественные и синтетические), например, монофосфориллипид A (MPL), детокс (MPL + скелет клеточной стенки M. phlei), AGP [RC-529] (синтетический ацилированный моносахарид), DC_Chol (липоидные иммуностимуляторы, способные к самоорганизации в липосомы), OM-174 (производное липида A), CpG-последовательности (синтетические олигонуклеотиды, содержащие CpG-последовательности с иммуностимулирующей активностью), токоферол, сквален и сквалан и их производные, модифицированные LT и CT (генетически модифицированные бактериальные токсины для обеспечения нетоксичного действия адъювантов), эндогенные иммуномодуляторы человека, например, ГМ-КСФ человека и ИЛ-12 человека (цитокины, которые можно вводить в виде белка или кодировать плазмидами), иммудаптин (C3d тандемный повтор), инертные носители, такие как частицы золота. В предпочтительном варианте реализации композиция согласно изобретению включает в качестве адъюванта α-токоферол, сквалан и их комбинации.
В предпочтительном варианте реализации композиция согласно изобретению имеет следующий состав на 1 мл:
| Нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2, имеющий аминокислотную последовательность SEQIDNO: 1 | 20- 100 мкг |
| Сквалан | 15-40 мг |
| α-токоферол | 5- 15 мг |
| Полисорбат 80 | 1-10 мг |
| Натрий фосфорнокислый двузамещенный | 0,1- 2,0 мг |
| Калий фосфорнокислый однозамещенный | 0,01-0,25 мг |
| Калия хлорид | 0,01-0,2 мг |
| Натрия хлорид | 0,1-8,5 мг |
| Вода для инъекций | до 1 мл |
В более предпочтительном варианте реализации композиция согласно изобретению имеет следующий состав на 1 мл:
| Нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2, имеющий аминокислотную последовательность SEQIDNO: 1 | 50-100 мкг |
| Сквалан | 24-36 мг |
| α-токоферол | 8-12 мг |
| Полисорбат 80 | 10-12 мг |
| Натрий фосфорнокислый двузамещенный | 1,5-1,8 мг |
| Калий фосфорнокислый однозамещенный | 0,1-0,122 мг |
| Калия хлорид | 0,1-0,21 мг |
| Натрия хлорид | 4-8,1 мг |
| Вода для инъекций | до 1 мл |
Композиции согласно изобретению могут представлять собой раствор, эмульсию или лиофилизат. Лиофилизат может быть получен из раствора или эмульсии стандартными для этого способами, например из раствора при лиофилизации.
Композиция согласно изобретению может применяться для профилактики или индукции специфического иммунитета против вируса острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, т.е. использоваться в качестве вакцины. При этом содержание белка N в композиции согласно изобретению может варьироваться в зависимости от требуемой дозы для вакцинации, возраста пациента и других клинических факторов.
Применение указанной композиции для профилактики против вируса острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 включает однократно или двукратно введение композиции. Решение об однократном или двукратном введении принимает терапевт, с учетом возраста, анамнеза пациента, наличия хронических заболеваний и иных клинических факторов. В случае двукратного введения композиция может вводиться 2 раза последовательно с интервалом не менее 2 недель, с одинаковым или различным содержанием нуклеокапсидного белка N в композиции.
Далее изобретение также предлагает способ получения композиции, содержащей белок N, который включает:
1) обеспечение нуклеокапсидного белка NSARS-CoV-2, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, в количестве от 20 до 100 мкг/мл;
2) растворение белка в водном растворителе и доведение содержания белка N в растворе до требуемой концентрации;
3) приготовление водного раствора адъюванта;
4) смешение водного раствора, содержащего белок N, и водного раствора адъюванта;
5) гомогенизация полученной смеси до получения однородного по цвету раствора;
6) регулирование полученного композиции рН до 7,2-7,6.
В одном из вариантов реализации способ получения композиции может дополнительно включать лиофилизацию полученной композиции с получением лиофилизата, используемого для восстановления растворителем перед введением пациенту. В некоторых вариантах реализация полученная композиция представляет собой эмульсию, например, типа «вода-в-масле», или «масло-в-воде».
Далее композиция согласно изобретению будет описана в примерах, которые не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
Примеры
Пример 1
Получение плазмиды, содержащей ген белка
Плазмиду, содержащую ген белка N (Genbank YP_009724397.2), использовали для получения модифицированной оптимизированной по кодонам нуклеотидной последовательности с использованием CodonAdaptationIndex (http://genomes.urv.es/OPTIMIZER/). Кодоны выбраны таким образом, чтобы по возможности использовались наиболее часто встречающиеся у E. coli кодоны, а также содержание нуклеотидов гуанин и цитозин был в диапазоне 50-55%. Последовательность на 5’ и 3’ концах фланкировалась последовательностями для распознавания эндонуклеазами NcoI (CCATGG) и XhoI (CTCGAG), соответственно. Синтез гена и клонирование по указанным сайтам рестрикции в плазмиду без вставки pET-28a(+) были заказаны на коммерческой основе. Полученную плазмиду секвенировали с помощью праймеров T7_promotor (TAATACGACTCACTATAGGG), fwd_122 (GCCTTATGGTGCAAATAAGG) и fwd_300 (AAACATTGGCCGCAGATTGC) для подтверждения нуклеотидной последовательности и проверки на однонуклеотидные мутации.
Нуклеотидная последовательность соответствовала последовательности
SEQ ID NO:2.
SEQ ID NO:2.
Пример 2
Получение клеточной линии E. coli, модифицированной плазмидой
Клеточную линию E. coli трансформировали по следующему протоколу. Пробирку с компетентными клетками извлекали из морозильной камеры хранения на -80°C. Давали оттаять льду в течение 10 мин. Далее вносили
1 мкл, содержащий 1 пкг-100 нг плазмиды. Аккуратно перемешивали пробирку 4-5 раз. Полученную смесь помещали на лёд на 30 мин. Далее смесь подвергали тепловому шоку при 42°C на 30-60 c. Полученную обработанную смесь помещали на лёд на 5 мин. Вносили 950 мкл среды SOC при комнатной температуре. Инкубировали при 30°C-37°C в течение 1 - 2 ч при перемешивании 250 оборотов в минуту. Высевали 10-50 мкл на чашку с твердой селективной средой, содержащей антибиотик канамицин. Инкубировали при 30°C-37°C в течение ночи. Выросшие колонии содержат клетки E. coli, трансформированные плазмидой, несущей искусственный ген нуклеокапсидного белка N.
1 мкл, содержащий 1 пкг-100 нг плазмиды. Аккуратно перемешивали пробирку 4-5 раз. Полученную смесь помещали на лёд на 30 мин. Далее смесь подвергали тепловому шоку при 42°C на 30-60 c. Полученную обработанную смесь помещали на лёд на 5 мин. Вносили 950 мкл среды SOC при комнатной температуре. Инкубировали при 30°C-37°C в течение 1 - 2 ч при перемешивании 250 оборотов в минуту. Высевали 10-50 мкл на чашку с твердой селективной средой, содержащей антибиотик канамицин. Инкубировали при 30°C-37°C в течение ночи. Выросшие колонии содержат клетки E. coli, трансформированные плазмидой, несущей искусственный ген нуклеокапсидного белка N.
Таким образом получали клеточную линию E. coli с включением искусственного гена согласно изобретению.
Данная клеточная линия была депонирована во ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт сельско-хозяйственной микробиологии (ФГБНУ ВНИИСХМ) под номером RCAM05390 (от 14.05.2021 г.).
Пример 3
Получение рекомбинантного белка N SARS-CoV-2
Биомассу E. coli, содержащую экспрессированный белок N, ресуспендировали в буфере для лизиса (Трис-HCl 50 мM, pH 9) и гомогенизировали с помощью лабораторного гомогенизатора, например, GEA Panda 1000. Все буферы, кроме буферов для хроматографии на третьей стадии очистки, содержали ингибиторы протеаз ЭДТА и ФМСФ. Затем нерастворимую фракцию биомолекул осаждали центрифугированием при 20000 x g, 4°C, 30 мин. Растворимую фракцию переносили в чистую посуду, и к ней добавляли 20% (по массе на объем) сульфата аммония для осаждения белка N. Осажденную фракцию собирали центрифугированием при 20000 x g, 4°C, 30 мин, с последующим растворением в буфере Трис-HCl 50 мM, pH 9. После фильтрации через мембрану с диаметром пор 0,22 мкм раствор использовали для хроматографической очистки. Первую стадию очистки на анион-обменной хроматографии проводили в режиме проскока (буфер Трис-HCl 50 мM, pH 9). Вторую стадию очистки на катион-обменной хроматографии проводили в режиме захвата с элюцией градиентом NaCl от 0 M до 1 M (буфер Трис-HCl 50 мM, pH 9). Третью стадию очистки на гидрофобной хроматографии проводили в режиме захвата с элюцией градиентом сульфата аммония от 1 M до 0 M (буфер NaH2PO4 50 мM, pH 7,5).
Далее проводили процесс диализа в диализных кассетах в 5 л фосфатно-солевом буфере. Процесс проходил при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем проводили замену буфера на 5 л свежего буфера и проводили процесс при +4°С в течение 10 ч.
После окончания диализа белок извлекали из диализных кассет и фильтровали. Полученный осадок растворяли в воде для инъекций для получения лиофилизата или полученный раствор белка доводили до нужной концентрации белка путем добавления ранее полученного лиофилизата.
Полученный раствор исследовали по следующим показателям: содержание белка, рН, механические включения, прозрачность, стерильность, размер частиц. Для этого использовали стандартные методики анализа.
Пример 4
Приготовление композиции согласно изобретению
Получали водный раствор, содержащий белок N, полученный согласно примеру 3, с различными концентрациями белка: 20 мкг/мл, 30 мкг/мл, 40 мкг/мл, 50 мкг/мл, 60 мкг/мл, 70 мкг/мл, 80 мкг/мл, 90 мкг/мл, 100 мкг/мл.
В отдельную емкость помещали в зависимости от содержания белка рассчитанное количество токоферола, сквалана и полисорбата 80, частями добавляли фосфатно-солевой буфер, при постоянном перемешивании. Например, при содержании 20 мкг/мл использовали 45 г токоферола, 15 г полисорбата 80, и 15 г сквалана и 750 мл буферного раствора. После растворения полученный раствор (раствор адъюванта) разделяли на равные части и обрабатывали ультразвуком. Затем обработанные растворы объединяли в один стакан и перемешивали. Далее проводили фильтрацию раствора через мембрану 0,22 мкм. Полученный отфильтрованный раствор объединяли с растворов белка N и перемешивали до гомогенного раствора.
В некоторых случаях образовывалась эмульсия белого или желтоватого цвета.
Полученный раствор, содержащий белок N и адъювант, доводили до
рН 7,2-7,6 раствором гидроксида натрия или хлороводородной кислотой. Далее, полученный раствор разливали по стерильным флаконам и закупоривали. При необходимости, из раствора получали лиофилизат путем лиофилизации в аппарате. Для восстановления раствора для вакцинирования использовали воду для инъекций или стерильный физиологический раствор.
рН 7,2-7,6 раствором гидроксида натрия или хлороводородной кислотой. Далее, полученный раствор разливали по стерильным флаконам и закупоривали. При необходимости, из раствора получали лиофилизат путем лиофилизации в аппарате. Для восстановления раствора для вакцинирования использовали воду для инъекций или стерильный физиологический раствор.
Пример 5
Анализ свойств композиций согласно изобретению
Для исследования свойств композиции согласно изобретению были получены следующие составы (представлены в таблице ниже).
Таблица 1
| № композиции | Содержание | ||||||||
| Белка, мкг | сквалана, мг | токоферола, мг | поли-сорбата 80, мг | Na2HPO4, мг | KH2PO4, мг | KCl, мг | NaCl, мг | воды для инъекций | |
| 1 | 20 | 15 | 5 | 1 | 0,1 | 0,01 | 0,01 | 0,1 | До 1 мл |
| 2 | 50 | 25 | 10 | 5 | 0,71 | 0,122 | 0,101 | 4,003 | До 1 мл |
| 3 | 100 | 40 | 10 | 10 | 1,42 | 0,244 | 0,2 | 8,005 | До 1 мл |
| 4 | 0 | 25 | 10 | 5 | 0,71 | 0,212 | 0,101 | 4,003 | До 1 мл |
Композиции с различным содержанием белка, полученные согласно примеру 5, исследовали на стабильность перед началом исследования и по истечении 6 недель хранения в стресс-условиях (условия «ускоренного хранения»). Перед началом исследования измеряли рН, содержание белка, визуально оценивали прозрачность, гомогенность, если композиция представлял собой эмульсию. Композиции с различным содержанием нуклеокапсидного белка N разливали по стерильным флаконам, закупоривали и помещали в камеру ускоренного хранения для испытания на стабильность. В камере поддерживали температуру +20°С в течение 6 недель. По истечении времени флаконы извлекали и проводили анализ на рН и содержание белка нуклеокапсидного N. Измерение рН проводили непосредственно в растворе с помощью рН-метра. Анализ на содержание белка проводили методом спектрофотометрии, при длине волны 280 нм. Далее высчитывали снижение концентрации нуклеокапсидного белка N в исследуемом растворе после хранения в течение 6 недель по отношению к первоначальному значению.
Результаты представлены в таблице ниже.
Таблица 2
| № композиции | Стабильность в течение 2 недель | рН | Содержание белка (% от исходного содержания) | Выводы |
| 1 | Стабильна, осадка или изменения цвета не выявлено | 7,5 | 99,25% | Стабильна |
| 2 | Стабильна, осадка или изменения цвета не выявлено | 7,4 | 99,13% | Стабильна |
| 3 | Стабильна, осадка или изменения цвета не выявлено | 7,5 | 99,37% | Стабильна |
| 4 | Стабильна, осадка или изменения цвета не выявлено | 7,3 | 99,27% | Стабильна |
Таким образом, на основании полученных результатов можно заключить, что полученные композиции, содержащие нуклеокапсидный белок N в концентрации от 20 мкг/мл до 100 мкг/мл, являются стабильными.
Пример 6
Исследование иммуногенных свойств полученных композиций
Полученные композиции исследовали на возможность индукции специфического иммунитета (иммуногенность)
Животных вида хомячки сирийские (самки) в количестве 240 шт. случайным образом делили на следующие равные группы:
Группа № 1 – вводили композицию, содержащую 20 мкг/ мл белка.
Группа № 2 – вводили композицию, содержащую 50 мкг/ мл белка.
Группа № 3 – вводили композицию, содержащую 100 мкг/ мл белка.
Группа № 4 – вводили композицию, не содержащую белок (плацебо).
Более подробные данные по составу представлены в таблице ниже.
Таблица 3
| Группа | Содержание | ||||||||
| Белка, мкг | сквалана, мг | токоферола, мг | поли-сорбата 80, мг | Na2HPO4, мг | KH2PO4, мг | KCl, мг | NaCl, мг | воды для инъекций | |
| 1 | 20 | 15 | 5 | 1 | 0,1 | 0,01 | 0,01 | 0,1 | До 1 мл |
| 2 | 50 | 25 | 10 | 5 | 0,71 | 0,122 | 0,101 | 4,003 | До 1 мл |
| 3 | 100 | 40 | 10 | 10 | 1,42 | 0,244 | 0,2 | 8,005 | До 1 мл |
| 4 | 0 | 25 | 10 | 5 | 0,71 | 0,212 | 0,101 | 4,003 | До 1 мл |
* - все значения приведены в расчете на 1 мл композиции.
На момент начала эксперимента возраст животных составлял 6-8 недель, диапазон массы – 56,37-149,28 г. Адаптационный период составлял 5 дней, при ежедневном осмотре животных (состояние, измерение температуры). Животных содержали в стандартных условиях в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и совета Европейского союза от 22.09.2010 г. по охране животных, используемых в научных целях.
Композиции вводили внутримышечно, в дозе по 0,5 мл на животное, при этом использовали дробное введение, с перерывом на 14 дней (введение в 1 день и в 15 день).
Схема эксперимента представлена в таблице ниже.
Таблица 4
| Манипуляции | Дни эксперимента |
| Внутримышечное дробное введение исследуемых объектов | 1-й и 15-й день |
| Регистрация массы тела животных | 1-й (до введения исследуемых объектов), 15-й, 29-й, 43-й, 57-й, 71-й, 85-й, 99-й, 113-й, 127-й, 141-й, 155-й, 169-й, 183-й, 197-й, 211-й, 225-й, 239-й, 253-й, 267-й, 281-й, 295-й, 309-й, 323-й, 337-й, 351-й, 365-й, 379-й |
| Регистрация отклонений в общем состоянии животных и летальности | Ежедневно |
| Клинический осмотр животных | 2-й, 15-й, 29-й, 43-й, 57-й, 71-й, 85-й, 99-й, 113-й, 127-й, 141-й, 155-й, 169-й, 183-й, 197-й, 211-й, 225-й, 239-й, 253-й, 267-й, 281-й, 295-й, 309-й, 323-й, 337-й, 351-й, 365-й, 379-й |
| Эвтаназия по 5 животных каждой группы с последующим взятием образцом крови из сердца для проведения иммуноферментного анализа (ИФА) | 1-й (до введения исследуемых объектов), далее – на 8-й, 15-й, 22-й, 29-й, 43-й, 162-й и 386-й. |
Анализ ИФА на специфические антитела проводили по следующей методике.
После иммунизации композициями 1-4 мышей типа Balb/c, в возрасте 6-8 недель, дозой в объёме 500 мкл, по 250 мкл в каждое заднее бедро.
Далее, на 42 сутки после введения второй дозы мышей усыпляли в камере, наполненной CO2 газом. Далее осуществляли забор крови на содержание специфических антител и внутренних органов на гистологические анализы.
Кровь помещали в пробирки типа Eppendorf, содержащие ЭДТА в концентрации 1-2 мг/мл. Пробирки с кровью и ЭДТА центрифугировали при +4°C, в течение 20 минут. Супернатант переносили в чистые пробирки в ламинарном боксе. Полученную плазму замораживали.
Процедура: проведение иммуноферментного анализа (ИФА)
Использовали следующие реагенты:
посадочные антигены, 1 мкг/мл, 100 мкл/лунку; блокировку 0,5 % молоком в отмывочном буфере (20 мMTрис, 150 мМ NaCl, 0,05 % полисорбат 20, рН 7,4±0,1), 300 мкл/лунку.
Отмывку проводили следующим образом: сливали содержимое планшета, планшет промывали 4 раза по 300 мкл на лунку отмывочным буфером (20 мM Tрис, 150 мМ NaCl, 0,05 % полисорбат 20, рН 7,4±0,1), лунки тщательно осушали, избегая образования пузырей, путем постукивания планшета о салфетку.
При нанесении сывороток подбирали титр для каждой отдельной сыворотки, 100 мкл/лунку, термостатировали и центрифугировали.
Нанесение вторичных антител проводили при исходном разведении 1:64000, 100 мкл/лунку, с термостатированием и перемешиванием.
Отмывку проводили следующим образом: сливали содержимое планшета, планшет промывали 4 раза по 300 мкл на лунку отмывочным буфером (20 мM Трис, 150 мМ NaCl, 0,05 % полисорбат 20, рН 7,4±0,1), лунки тщательно осушали, избегая образования пузырей, путем постукивания планшета о салфетку.
Добавляли раствора хромогена, 100 мкл/лунку, 12 минут в защищенном от света месте. Далее вносили стоп-раствор, 50 мкл/лунку. Съем результатов проводили при длине волны 450 нм, референс 620 нм. Результаты считались приемлемыми, если выполнены критерии пригодности и критерии приемлемости.
Согласно IUPAC, предел обнаружения рассчитывают по стандартному отклонению холостой пробы. Для этого измеряют величину аналитического сигнала для достаточного количества холостых проб и рассчитывают стандартное отклонение их значений.
Как правило, используется формула (Kaiser H. Zurdefinitiondernachweisgrenze, dergarantiegrenzeundderdabeibenutztenbegriffe, Дёрффель К. Статистика в аналитической химии):
LOD = Average+k*SD,
где k = 3
Предел обнаружения (LOD) рассчитывают по оптической плотности блокирующего буфера по формуле:
LOD = Average+10*SD,
где average – среднее значение оптической плотности блокирующего буфера,
SD - среднеквадратичное отклонение оптической плотности блокирующего буфера,
Принимается, что в образце присутствуют специфичные антитела, если средняя оптическая плотность образца больше, чем Сut-off, при этом Сut-off = LOD + 20% (20% соответствуют критерию пригодности иммуноферментной системы для оптической плотности на уровне поглощения блокирующего буфера (бланка)):
Cut-off = 1,2* LOD = 1,2*(Average+10*SD).
Титром сыворотки считается крайнее разведение, при котором оптическая плотность превышает сигнал дискриминационного уровня (cut-off), используется усредненная оптическая плотность.
Результаты по определению титра специфических антител IgG белок представлены в таблице ниже.
Таблица 5
| № группы | Средний титр антител на | |||||
| 1-й* | 8-й | 15-й | 22-й | 29-й | 43-й | |
| 1 | Nd | 1:16000 | 1:16000 | 1:16000 | 1:32000 | 1:32000 |
| 2 | Nd | 1:64000 | 1:64000 | 1:64000 | 1:64000 | 1:64000 |
| 3 | Nd | 1:64000 | 1:64000 | 1:64000 | 1:128000 | 1:128000 |
| 4 | Nd | 2 из 5 позитивный (1 случай титра 800)** |
2 из 5 позитивный (1 случай титра 800)** |
2 из 5 позитивный (1 случай титра 800)** |
2 из 5 позитивный (1 случай титра 800)** |
2 из 5 позитивный (1 случай титра 800)** |
* - измерение до введения.
** - обнаружены титры неспецифических антител, характерных для данного вида животных.
Nd – не определено, титр отсутствует.
Выраженный иммунный ответ регистрировали при однократном и двукратном внутримышечном введении композиций в группах №№ 1-3 в дозе 0,5 мл/животное с пиком титра специфических антител на 22-й день эксперимента и с сохранением до 43-го дня в диапазоне 1:32000-1:17800. Появление специфических антител регистрировали через 15 дней после первой вакцинации животных.
Пример 7
Исследование иммуногенных свойств полученных композиций (протективность)
Полученные композиции исследовали на возможность индукции специфического иммунитета (протективность).
Оценку протективных свойств композиций оценивали после двухкратной вакцинации и заражения культурой коронавируса.
Для выработки иммунитета использовали композиций и схему вакцинации, как описано в примере 5. Для иммунизации использовали композиции, содержащие белок N в различной концентрации, а также плацебо (композицию, не содержащую белок и содержащую только растворитель и вспомогательные вещества).
Композиции для вакцинации представлены в таблице ниже.
Таблица 6
| Группа | Содержание | ||||||||
| Белка, мкг | сквалана, мг | токоферола, мг | поли-сорбата 80, мг | Na2HPO4, мг | KH2PO4, мг | KCl, мг | NaCl, мг | воды для инъекций | |
| 5 | 20 | 15 | 5 | 1 | 0,1 | 0,01 | 0,01 | 0,1 | До 1 мл |
| 6 | 50 | 25 | 10 | 5 | 0,71 | 0,122 | 0,101 | 4,003 | До 1 мл |
| 7 | 100 | 40 | 10 | 10 | 1,42 | 0,244 | 0,2 | 8,005 | До 1 мл |
| 8 | 0 | 25 | 10 | 5 | 0,71 | 0,212 | 0,101 | 4,003 | До 1 мл |
* - все значения приведены в расчете на 1 мл композиции.
Самок сирийских хомячков в количестве 50 шт. рандомно разделили на 5 групп, содержащих по 10 особей. Группы животных сначала иммунизировали на 1-й и 15-й день композициями с различным содержанием белка. Далее на 29-й день животных заражали вирусом SARS-CoV-2и регистрировали клинические проявления заболевания и выздоровления.
Обозначение группы в зависимости от введенной композиции и заражения вирусом приведены в таблице ниже.
Таблица 7
| Группа № | Введение композиции | Заражение |
| 5 | Введение 20 мкг/мл белка | 50 мкл в дозе 5 lgTCID50 на животное |
| 6 | Введение 50 мкг/мл белка | |
| 7 | Введение 100 мкг/мл белка | |
| 8 | Введение 0 мкг/мл белка | |
| 9 | Интактная группа (не вводили композицию или плацебо), не заражали инфекцией |
С целью формирования патологии животным под общим наркозом интраназально однократно вводили вирус SARS-CoV-2 (паспортизированный штамм ФГБНУ «ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН» №ПИК35 GISAID ID EPI_ISL_428852) в объеме 50 мкл в дозе 5 lgTCID50 на животное. На протяжении эксперимента у животных контролировали общее состояние и массу тела. Эвтаназию животных проводили на 3-й и 7-й дни после заражения. Легкие фотографировали и взвешивали для дальнейшей оценки массового коэффициента. Макроскопически проведена оценка изменений цвета и структуры легочной ткани. Правое легкое использовали для оценки микроскопических изменений. Гистологический анализ включал в себя оценку трех признаков: воспаление легких, клеточный инфильтрат и отек. Левое легкое и ткани носовых раковин использовали для оценки количества РНК вируса SARS-CoV-2 методом ОТ-ПЦР по показателю Ct.
В период иммунизации не отмечено патологических изменений в общем состоянии экспериментальных животных и снижения массы тела.
Фотографии патологий представлены на Фиг. 1-2.
Общие результаты представлены в таблице ниже.
Таблица 8
| Группа № | Массовый коэффициент легких (среднее) | Выздоровление |
| 5 | 0,81±0,0,092 | На 5-й день |
| 6 | 0,83±0,0121 | На 5-й день |
| 7 | 0,80±0,0,097 | На 5-й день |
| 8 | 0,91±0,192 | На 18-й день |
| 9 | 0,75±0,046 | На 20-й день |
После заражения вирусом у животных отмечали: снижение массы на 10-15% входе инфекционного процесса, наличие клинической симптоматики, накопление РНКвируса в нижних и верхних дыхательных путях на 3-й день инфекции, макро- и микроскопическими изменения легких, наиболее выраженные на 7-й день развития патологии, увеличением массового коэффициента легких в 1,5 раза.
Гистологические исследования легких представлены на Фиг. 1-3.
В соответствии с полученными данными установлено, что введение композиции № 8 не привело к развитию фармакологических эффектов на течение коронавирусной инфекции у сирийских хомячков. Введение композиций, содержащих белок, №№ 5, 6, 7 оказало положительное влияние на инфекционный процесс в виде тенденции к увеличению массы тела и улучшению общего самочувствия животных на 5-й день патологии, и уменьшения выраженности гистологических изменений легочной ткани на 7-й день после заражения.
В ходе данного исследования было показано, что композиции, содержащие белок N в различных концентрациях и адъювант, обладают протективными свойствами при заражении инфекцией SARS-CoV-2. Обнаруженные свойства проявляются в виде сокращения периода болезни по полному отсутствию клинических признаков инфекции к 5-му дню после заражения, достоверного увеличения массы тела на 6-7-й дни развития инфекции с практически полным восстановлением до исходного уровня, тенденции к увеличению показателя Ct в легочной ткани на 3-й день, снижения выраженности макро- и микроскопических изменений в легочной ткани.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ФГУП СПбНИИВС ФМБА России
<120> СОСТАВ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ COVID-19
<160> NUMBER OF SEQ ID NOS: 3
<210> SEQIDNO 1
<211> 420
<212> искусственная последовательность
<213> искусственная аминокислотная последовательность
<400> SEQUENCE1:
MGSDNGPQNQRNAPRITFGGPSDSTGSNQN 30
GERSGARSKQRRPQGLPNNTASWFTALTQH 60
GKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRR 90
ATRRIRGGDGKMKDLSPRWYFYYLGTGPEA 120
GLPYGANKDGIIWVATEGALNTPKDHIGTR 150
NPANNAAIVLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGG 180
SQASSRSSSRSRNSSRNSTPGSSRGTSPAR 210
MAGNGGDAALALLLLDRLNQLESKMSGKGQ 240
QQQGQTVTKKSAAEASKKPRQKRTATKAYN 270
VTQAFGRRGPEQTQGNFGDQELIRQGTDYK 300
HWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGMEVTPSGT 330
WLTYTGAIKLDDKDPNFKDQVILLNKHIDA 360
YKTFPPTEPKKDKKKKADETQALPQRQKKQ 3900
QTVTLLPAADLDDFSKQLQQSMSSADSTQA 420
<160> SEQIDNO: 2
<210> 3
<211> 6496
<212> DNA
<213> искусственная последовательность
<400> искусственная нуклеотидная последовательность
tggcgaatgggacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcg 60
cagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttc 120
ctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagg 180
gttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgattagggtgatggttc 240
acgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgtt 300
ctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcggtctattc 360
ttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgattta 420
acaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaatttcaggtggcacttt 480
tcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgta 540
tccgctcatgaattaattcttagaaaaactcatcgagcatcaaatgaaactgcaatttat 600
tcatatcaggattatcaataccatatttttgaaaaagccgtttctgtaatgaaggagaaa 660
actcaccgaggcagttccataggatggcaagatcctggtatcggtctgcgattccgactc 720
gtccaacatcaatacaacctattaatttcccctcgtcaaaaataaggttatcaagtgaga 780
aatcaccatgagtgacgactgaatccggtgagaatggcaaaagtttatgcatttctttcc 840
agacttgttcaacaggccagccattacgctcgtcatcaaaatcactcgcatcaaccaaac 900
cgttattcattcgtgattgcgcctgagcgagacgaaatacgcgatcgctgttaaaaggac 960
aattacaaacaggaatcgaatgcaaccggcgcaggaacactgccagcgcatcaacaatat 1020
tttcacctgaatcaggatattcttctaatacctggaatgctgttttcccggggatcgcag 1080
tggtgagtaaccatgcatcatcaggagtacggataaaatgcttgatggtcggaagaggca 1140
taaattccgtcagccagtttagtctgaccatctcatctgtaacatcattggcaacgctac 1200
ctttgccatgtttcagaaacaactctggcgcatcgggcttcccatacaatcgatagattg 1260
tcgcacctgattgcccgacattatcgcgagcccatttatacccatataaatcagcatcca 1320
tgttggaatttaatcgcggcctagagcaagacgtttcccgttgaatatggctcataacac 1380
cccttgtattactgtttatgtaagcagacagttttattgttcatgaccaaaatcccttaa 1440
cgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttga 1500
gatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcg 1560
gtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagc 1620
agagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaag 1680
aactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgcc 1740
agtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcg 1800
cagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctac 1860
accgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggaga 1920
aaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagctt 1980
ccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgag 2040
cgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcg 2100
gcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgttctttcctgcgtta 2160
tcccctgattctgtggataaccgtattaccgcctttgagtgagctgataccgctcgccgc 2220
agccgaacgaccgagcgcagcgagtcagtgagcgaggaagcggaagagcgcctgatgcgg 2280
tattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatatatggtgcactctcagta 2340
caatctgctctgatgccgcatagttaagccagtatacactccgctatcgctacgtgactg 2400
ggtcatggctgcgccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtct 2460
gctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagag 2520
gttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgaggcagctgcggtaaagctcatcagcgtggtc 2580
gtgaagcgattcacagatgtctgcctgttcatccgcgtccagctcgttgagtttctccag 2640
aagcgttaatgtctggcttctgataaagcgggccatgttaagggcggttttttcctgttt 2700
ggtcactgatgcctccgtgtaagggggatttctgttcatgggggtaatgataccgatgaa 2760
acgagagaggatgctcacgatacgggttactgatgatgaacatgcccggttactggaacg 2820
ttgtgagggtaaacaactggcggtatggatgcggcgggaccagagaaaaatcactcaggg 2880
tcaatgccagcgcttcgttaatacagatgtaggtgttccacagggtagccagcagcatcc 2940
tgcgatgcagatccggaacataatggtgcagggcgctgacttccgcgtttccagacttta 3000
cgaaacacggaaaccgaagaccattcatgttgttgctcaggtcgcagacgttttgcagca 3060
gcagtcgcttcacgttcgctcgcgtatcggtgattcattctgctaaccagtaaggcaacc 3120
ccgccagcctagccgggtcctcaacgacaggagcacgatcatgcgcacccgtggggccgc 3180
catgccggcgataatggcctgcttctcgccgaaacgtttggtggcgggaccagtgacgaa 3240
ggcttgagcgagggcgtgcaagattccgaataccgcaagcgacaggccgatcatcgtcgc 3300
gctccagcgaaagcggtcctcgccgaaaatgacccagagcgctgccggcacctgtcctac 3360
gagttgcatgataaagaagacagtcataagtgcggcgacgatagtcatgccccgcgccca 3420
ccggaaggagctgactgggttgaaggctctcaagggcatcggtcgagatcccggtgccta 3480
atgagtgagctaacttacattaattgcgttgcgctcactgcccgctttccagtcgggaaa 3540
cctgtcgtgccagctgcattaatgaatcggccaacgcgcggggagaggcggtttgcgtat 3600
tgggcgccagggtggtttttcttttcaccagtgagacgggcaacagctgattgcccttca 3660
ccgcctggccctgagagagttgcagcaagcggtccacgctggtttgccccagcaggcgaa 3720
aatcctgtttgatggtggttaacggcgggatataacatgagctgtcttcggtatcgtcgt 3780
atcccactaccgagatatccgcaccaacgcgcagcccggactcggtaatggcgcgcattg 3840
cgcccagcgccatctgatcgttggcaaccagcatcgcagtgggaacgatgccctcattca 3900
gcatttgcatggtttgttgaaaaccggacatggcactccagtcgccttcccgttccgcta 3960
tcggctgaatttgattgcgagtgagatatttatgccagccagccagacgcagacgcgccg 4020
agacagaacttaatgggcccgctaacagcgcgatttgctggtgacccaatgcgaccagat 4080
gctccacgcccagtcgcgtaccgtcttcatgggagaaaataatactgttgatgggtgtct 4140
ggtcagagacatcaagaaataacgccggaacattagtgcaggcagcttccacagcaatgg 4200
catcctggtcatccagcggatagttaatgatcagcccactgacgcgttgcgcgagaagat 4260
tgtgcaccgccgctttacaggcttcgacgccgcttcgttctaccatcgacaccaccacgc 4320
tggcacccagttgatcggcgcgagatttaatcgccgcgacaatttgcgacggcgcgtgca 4380
gggccagactggaggtggcaacgccaatcagcaacgactgtttgcccgccagttgttgtg 4440
ccacgcggttgggaatgtaattcagctccgccatcgccgcttccactttttcccgcgttt 4500
tcgcagaaacgtggctggcctggttcaccacgcgggaaacggtctgataagagacaccgg 4560
catactctgcgacatcgtataacgttactggtttcacattcaccaccctgaattgactct 4620
cttccgggcgctatcatgccataccgcgaaaggttttgcgccattcgatggtgtccggga 4680
tctcgacgctctcccttatgcgactcctgcattaggaagcagcccagtagtaggttgagg 4740
ccgttgagcaccgccgccgcaaggaatggtgcatgcaaggagatggcgcccaacagtccc 4800
ccggccacggggcctgccaccatacccacgccgaaacaagcgctcatgagcccgaagtgg 4860
cgagcccgatcttccccatcggtgatgtcggcgatataggcgccagcaaccgcacctgtg 4920
gcgccggtgatgccggccacgatgcgtccggcgtagaggatcgagatctcgatcccgcga 4980
aattaatacgactcactataggggaattgtgagcggataacaattcccctctagaaataa 5040
ttttgtttaactttaagaaggagatataccatgggcagcgataatggcccgcagaatcag 5100
cgtaatgcaccgcgtattacctttggcggcccgagtgatagtaccggtagtaatcagaat 5160
ggtgaacgcagtggtgcacgtagcaaacagcgccgcccgcagggcctgcctaataatacc 5220
gccagttggtttaccgccctgacccagcatggcaaagaagatctgaaatttccgcgcggt 5280
cagggcgtgccgattaataccaatagcagtccggatgatcagattggctattatcgccgc 5340
gccacccgccgcattcgcggtggtgacggtaaaatgaaagatctgagcccgcgttggtat 5400
ttttattatctgggcaccggcccggaagccggtctgccttatggtgcaaataaggatggt 5460
attatttgggtggcaaccgaaggtgcactgaataccccgaaagatcatattggtacccgt 5520
aatccggcaaataatgcagcaattgttctgcagctgccgcagggtaccaccctgccgaaa 5580
ggcttttatgccgaaggcagtcgcggcggcagtcaggctagtagccgtagcagtagccgt 5640
agtcgcaatagcagtcgcaatagtaccccgggcagcagccgtggcaccagtcctgctcgt 5700
atggcaggtaatggtggtgacgccgccctggcactgctgctgctggatcgcctgaatcag 5760
ctggaaagcaaaatgagtggtaaaggccagcagcagcagggccagaccgtgaccaaaaaa 5820
tctgcagcagaagcaagcaaaaaaccgcgccagaaacgtaccgcaaccaaagcatataat 5880
gtgacccaggcctttggtcgtcgtggtccggaacagacccagggcaattttggcgatcag 5940
gaactgattcgccagggcaccgattataaacattggccgcagattgcccagtttgccccg 6000
agcgcaagcgcatttttcggcatgagtcgcattggcatggaagttaccccgagcggtacc 6060
tggctgacctataccggtgcaattaagctggatgataaagatccgaattttaaagatcag 6120
gttattctgctgaacaaacatattgatgcctataaaaccttcccgccgaccgaaccgaaa 6180
aaagataaaaagaaaaaggcagatgagacccaggcactgccgcagcgtcagaaaaaacag 6240
cagaccgtgacactgctgccggcagccgatctggatgattttagtaaacagctgcagcag 6300
agtatgagtagcgcagatagtacccaggcataactcgagcaccaccaccaccaccactga 6360
gatccggctgctaacaaagcccgaaaggaagctgagttggctgctgccaccgctgagcaa 6420
taactagcataaccccttggggcctctaaacgggtcttgaggggttttttgctgaaagga 6480
ggaactatatccggat 6496
<---
Claims (18)
1. Фармацевтическая композиция, предназначенная для индукции специфического иммунного ответа против вируса острого респираторного синдрома SARS-CoV-2, содержащая нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2, имеющий аминокислотную последовательность SEQIDNO: 1, и имеющая следующий состав на 1 мл:
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что имеет рН от 7,2 до 7,6.
3. Композиция по пп. 1, 2, отличающаяся тем, что имеет следующий состав на 1 мл:
4. Композиция по пп. 1-3, отличающаяся тем, что представляет собой раствор, эмульсию или лиофилизат.
5. Композиция по п. 4, отличающаяся тем, что представляет собой эмульсию.
6. Применение композиции по пп. 1-5 для профилактики или индукции специфического иммунитета против вируса острого респираторного синдрома SARS-CoV-2.
7. Применение по п. 6, включающее введение композиции 2 раза последовательно с интервалом не менее 2 недель.
8. Способ получения композиции по пп. 1-5, который включает:
1) обеспечение нуклеокапсидного белка N SARS-CoV-2, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, в количестве от 20 до 100 мкг/мл;
2) растворение белка в водном растворителе и доведение содержания белка N в растворе до требуемой концентрации;
3) приготовление водного раствора адъюванта;
4) смешение водного раствора, содержащего белок N, и водного раствора адъюванта;
5) гомогенизация полученной смеси до получения однородного по цвету раствора;
6) регулирование полученной композиции рН до 7,2-7,6.
9. Способ по п. 8, дополнительно включающий лиофилизацию полученного раствора с получением лиофилизата, используемого для восстановления растворителем перед введением пациенту.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что полученная композиция представляет собой эмульсию.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021123376A RU2766292C1 (ru) | 2021-08-05 | 2021-08-05 | Состав вакцины против covid-19 |
| PCT/RU2022/050154 WO2023014245A1 (ru) | 2021-08-05 | 2022-05-13 | Состав вакцины против covid-19 vaccine composition against covid-19 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021123376A RU2766292C1 (ru) | 2021-08-05 | 2021-08-05 | Состав вакцины против covid-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2766292C1 true RU2766292C1 (ru) | 2022-03-14 |
Family
ID=80736505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2021123376A RU2766292C1 (ru) | 2021-08-05 | 2021-08-05 | Состав вакцины против covid-19 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2766292C1 (ru) |
| WO (1) | WO2023014245A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2812347C1 (ru) * | 2023-10-31 | 2024-01-30 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения бактериального продуцента рекомбинантного белка нуклеокапсида nc вируса sars-cov-2 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA011419B1 (ru) * | 2005-03-23 | 2009-02-27 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Поливалентная противогриппозная иммуногенная композиция |
| RU2502520C2 (ru) * | 2007-07-30 | 2013-12-27 | Хилор Лтд. | Фармацевтическая композиция и относящиеся способы |
| RU2519051C2 (ru) * | 2008-06-25 | 2014-06-10 | Брааш Биотех Ллк | Композиции и способы для улучшенной иммуногенности соматостатина в лечении дефицита гормона роста и инсулиноподобного фактора роста |
| RU2016118518A (ru) * | 2016-05-12 | 2017-11-16 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Противохламидийная вакцина и способ ее получения |
| US10973909B1 (en) * | 2020-04-03 | 2021-04-13 | Peptc Vaccines Limited | Coronavirus vaccine |
| US11020475B1 (en) * | 2020-08-14 | 2021-06-01 | The Industry & Academic Cooperation In Chungnam National University (Iac) | Cold-adapted live attenuated severe acute respiratory syndrome coronavirus and vaccine containing the same |
-
2021
- 2021-08-05 RU RU2021123376A patent/RU2766292C1/ru active
-
2022
- 2022-05-13 WO PCT/RU2022/050154 patent/WO2023014245A1/ru not_active Ceased
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA011419B1 (ru) * | 2005-03-23 | 2009-02-27 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Поливалентная противогриппозная иммуногенная композиция |
| RU2502520C2 (ru) * | 2007-07-30 | 2013-12-27 | Хилор Лтд. | Фармацевтическая композиция и относящиеся способы |
| RU2519051C2 (ru) * | 2008-06-25 | 2014-06-10 | Брааш Биотех Ллк | Композиции и способы для улучшенной иммуногенности соматостатина в лечении дефицита гормона роста и инсулиноподобного фактора роста |
| RU2016118518A (ru) * | 2016-05-12 | 2017-11-16 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Противохламидийная вакцина и способ ее получения |
| US10973909B1 (en) * | 2020-04-03 | 2021-04-13 | Peptc Vaccines Limited | Coronavirus vaccine |
| US11020475B1 (en) * | 2020-08-14 | 2021-06-01 | The Industry & Academic Cooperation In Chungnam National University (Iac) | Cold-adapted live attenuated severe acute respiratory syndrome coronavirus and vaccine containing the same |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Полисорбат 80 (polysorbate 80/tween 80) - золотой стандарт вспомогательного вещества для гриппозных инактивированных вакцин, ISRAFILOV AZAMAT, KALININ S.P. и др., Башкирский Государственный Медицинский Университет, 14.08.2018 [найдено в интернет 28.10.2021], https://studfile.net/preview/6881885/page:3/. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2812347C1 (ru) * | 2023-10-31 | 2024-01-30 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения бактериального продуцента рекомбинантного белка нуклеокапсида nc вируса sars-cov-2 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023014245A1 (ru) | 2023-02-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6096839B2 (ja) | 単純ヘルペスウイルス２型に対するワクチン：免疫応答を誘発する組成物および方法 | |
| JP5420842B2 (ja) | 水疱−帯状疱疹ウイルスワクチン | |
| US20190183998A1 (en) | Mycobacterium Antigenic Composition | |
| CA2836098C (en) | Hendra and nipah virus g glycoprotein immunogenic compositions | |
| CN107913396B (zh) | 脑膜炎萘瑟氏菌rLP2086抗原的稳定制剂 | |
| JP6261647B2 (ja) | 新規組成物 | |
| KR101361769B1 (ko) | Ｈｐｖ-16 ｌ1 ｖｌｐ 및 ｈｐｖ-18 ｌ1 ｖｌｐ 백신 | |
| KR20170097116A (ko) | 구제역 백신 | |
| CN102802660A (zh) | 具有低氯化钠浓度的免疫原性组合物 | |
| JP2006503017A (ja) | Ｉｌ−１３要素及びｔ細胞エピトープを含む免疫原組成物並びにその治療上の使用 | |
| AU2014366281A1 (en) | Hendra and Nipah virus G glycoprotein immunogenic compositions | |
| KR20220070279A (ko) | 면역원성 조성물 | |
| JP2006501249A (ja) | ワクチン | |
| RU2766292C1 (ru) | Состав вакцины против covid-19 | |
| US20240189410A1 (en) | Immunogenic compositions and methods for eliciting an immune response against clostridioides (clostridium) difficile | |
| US20090221804A1 (en) | GBS Toxin Receptor Compositions and Methods of Use | |
| US10525127B2 (en) | P14.7 protein and uses thereof as vaccine adjuvant | |
| WO2025257712A1 (en) | Immunogenic compositions and methods for eliciting an immune response against clostridioides (clostridium) difficile | |
| US8609614B2 (en) | GBS toxin receptor compositions and methods of use | |
| EA048463B1 (ru) | Иммуногенные композиции | |
| HK1254329B (zh) | 使免疫原性组合物中的lp2086(fhbp)亚族b多肽的效力稳定化的方法 | |
| HK1247083B (en) | Stable formulations of neisseria meningitidis rlp2086 antigens | |
| JP2021504478A (ja) | 生殖管感染症に対する併用療法と予防 |