RU2607944C2

RU2607944C2 - Синергические композиции ингибиторов pi3k и мек

Info

Publication number: RU2607944C2
Application number: RU2014112198A
Authority: RU
Inventors: Кристин Фритч; Сичжун Хуан; Маркус БЕМ; ТОМАЗО Эмманюэлль ДИ; Ян ГСЕ КОСАРТ
Original assignee: Новартис Аг
Priority date: 2011-08-31
Filing date: 2012-08-30
Publication date: 2017-01-11
Also published as: US20140179744A1; CN103764144A; WO2013066483A1; AU2012333092A1; CN103764144B; US9675595B2; BR112014004587A2; JP6058009B2; RU2014112198A; CA2846454A1; MX2014002471A; AU2012333092B2; KR20140072028A; JP2014525454A; EP2750675A1

Abstract

Группа изобретений относится к фармацевтике. Описана фармацевтическая композиция и комбинация ингибитора фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) и ингибитора митоген-активируемой протеинкиназы (MEK) для лечения колоректального рака, имеющего BRAF мутацию, KRAS мутацию, PIK3CA мутацию или их сочетание и не имеющего PTEN мутацию; рака поджелудочной железы, имеющего KRAS мутацию; немелкоклеточного рака легких, имеющего KRAS мутацию; или меланомы, имеющей PTEN мутацию. В качестве ингибитора PI3K используется 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)-2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль. В качестве ингибитора МЕК – (2-гидроксиэтокси)-амид (S)-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3Н-бензоимидазол-5-карбоновую кислоту или его фармацевтически приемлемую соль. Также описан способ лечения указанных заболеваний комбинацией и применение указанной комбинации для получения лекарственного препарата для лечения указанных заболеваний. Применение двух указанных ингибиторов обеспечивает синергетический эффект от использования такой композиции или комбинации. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 пр.

Description

ОБЛАСТЬ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Фармацевтическая комбинация, содержащая (a) соединение ингибитора фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере одно соединение ингибитора митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), выбранное из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4- (метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167, или RG7420, или их фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель; применения такой комбинации для лечения или предупреждение пролиферативных заболеваний, таких как рак; и способы лечения субъекта, страдающего пролиферативным заболеванием, таким как рак, включающим введение терапевтически эффективного количества такой комбинации.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Передача сигналов через путь миоген-активируемой протеинкиназы (MAP) и фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K)/AKT запускается внеклеточной стимуляцией и регулирует разнообразные биологические процессы, такие как пролиферация, дифференциация и гибель клеток. Оба пути часто активируются при многих формах рака мутациями или сверхэкспрессией молекул выше по ходу транскрипции. Эти пути взаимодействуют друг с другом для регуляции опухолевого роста и, таким образом, они являются потенциальными мишенями при лечении рака.

Фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) включают семейство липидных киназ, которые катализируют перенос фосфата в положение D-3’ инозитол-содержащих липидов для получения фосфоинозитол-3-фосфат (PIP), фосфоинозитол-3,4-дифосфат (PIP2) и фосфоинозитол-3,4,5-трифосфат (PIP3), которые, в свою очередь, действуют в качестве вторых посредников при передаче каскадов сигналов докинг-белков, содержащих домен гомологии к плекстрину, FYVE, Phox и другие связывающие фосфолипиды домены, в разнообразные комплексы передачи сигналов, часто в плазматической мембране (Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001); Katso et al, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615 (2001)). Из двух PI3Ks класса 1, PI3Ks класса 1A представляют собой гетеродимеры, составленные из каталитической субъединицы p110 (изоформы α, β, δ), конститутивно связанные с регуляторной субъединицей, которая может представлять собой p85α, p55α, p50α, ρ85β или ρ55γ. Подкласс IB класса имеет одного члена семейства, гетеродимер, составленный из каталитической субъединицы p110γ, связанной с одной из двух регуляторных субъединиц, p101 или p84 (Fruman et al, Annu Rev. Biochem. 67:481 (1998); Suire et al, Curr. Biol. 15:566 (2005)). Модулярные домены субъединиц p85/55/50 включают домены гомологии к Src (SH2), которые связывают остатки фосфотирозина в контексте специфической последовательности на активированных рецепторных и цитоплазматических тирозинкиназах, приводя к активации и локализации PI3Ks класса 1A. PI3K класса IB активируется непосредственно связанными с белком G рецепторами, которые связывают разнообразные репертуары пептидных и не пептидных лигандов (Stephens et al, Cell 89: 105 (1997)); Katso et al, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615-675 (2001)). Следовательно, полученные в результате фосфолипидные продукты PI3K класса I связывают расположенные выше по ходу транскрипции рецепторы с расположенными ниже по ходу транскрипции видами клеточной активности, включая пролиферацию, выживание, хемотаксис, направленную миграцию клеток, подвижность, метаболизм, воспалительные и аллергические реакции, транскрипцию и трансляцию (Cantley et al., Cell 64:281 (1991); Escobedo и Williams, Nature 335:85 (1988); Fantl et al, Cell 69:413 (1992)).

PIP2 и PIP3 часто вовлекают Akt, продукт человеческого гомолога вирусного онкогена v-Akt, в плазматическую мембрану, где он действует в качестве узловой точки для многих внутриклеточных путей передачи сигналов, важных для роста и выживания (Fantl et al., Cell 69:413-423(1992); Bader et al, Nature Rev. Cancer 5:921 (2005); Vivanco и Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)). Аберрантная регуляция PI3K, которая часто увеличивает выживание через активацию Akt, представляет собой одно из наиболее превалирующих явлений при злокачественных заболеваниях у людей, и, как было показано, происходящее на множественных уровнях. Ген-супрессор опухолей PTEN, который дефосфорилирует фосфоинозитиды в положении 3’ кольца инозитола, и при этом противодействует активности PI3K, функционально делетируется при разнообразных опухолях. При других опухолях гены для изоформы p110α, PIK3CA, и для Akt амплифицируются, и увеличенная экспрессия белков их генных продуктов была продемонстрирована при нескольких формах рака у людей. Кроме того, мутации и транслокации p85α, которые служат для стимуляции комплекса p85-p110, были описаны при онкологических заболеваниях у людей. Наконец, соматические бессмысленные мутации в PIK3CA, которые активируют пути передачи сигналов ниже по ходу транскрипции, были описаны как значительно часто наблюдавшиеся при широком разнообразии злокачественных заболеваний у людей (Kang at el, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802 (2005); Samuels et al, Science 304:554 (2004); Samuels et al, Cancer Cell 7:561-573 (2005)). Эти наблюдения показывают, что нарушение регуляции фосфоинозитол-3-киназы и находящихся выше и ниже по ходу транскрипции компонентов этого пути передачи сигналов представляет собой один из наиболее часто встречающихся видов нарушения регуляции, связанных с онкологическими и пролиферативными заболеваниями у людей (Parsons et al, Nature 436:792 (2005); Hennessey at el, Nature Rev. Drug Disc. 4:988-1004 (2005)).

Кроме того, известно, что избыточная активация каскада миоген-активируемой протеинкиназы (MAP) играет важную роль в клеточной пролиферации и дифференциации. Этот путь может активироваться, когда фактор роста связывается с тирозинкиназой его рецепторов. Это взаимодействие стимулирует ассоциацию RAS с RAF и инициирует каскад фосфорилирования через митоген-активируемую протеинкиназу (MEK) в ERK. Представляется, что фосфорилирование MEK увеличивает ее аффинитет и ее каталитическую активность в отношении ERK, а также ее аффинитет в отношении АТФ.

Регуляция пути MAP киназы нарушается, часто посредством мутаций, которые приводят к эктопической активации белка грубо при 1/3 форм рака у людей. Это нарушение регуляции в свою очередь приводит к широкому ряду клеточных изменений, которые составляют неотъемлемую часть этиологии и поддержания канкрозного фенотипа, включая без ограничения стимуляцию пролиферации и избегание апоптоза (Dhillon et al., Oncogene, 2007, 26: 3279-3290). Известно, что ингибирование этого пути благоприятно при пролиферативных заболеваниях. MEK представляет собой привлекательную терапевтическую мишень, поскольку единственными известными субстратами для фосфорилирования MEK являются MAP киназы, ERK1 и ERK2. MEK часто активируется в опухолях, которые имеют мутации в онкогенах RAS или RAF. Конститутивная активация MEK/ERK была обнаружена в образцах первичных опухолей поджелудочной железы, ободочной кишки, легких, почек и яичников.

Было показано, что ингибирование MEK имеет потенциальный благоприятный эффект при различных заболеваниях в нескольких исследованиях, таких как: (a) Tumor и Leukemia: Evidence of Efficacy in Tumor Models (Опухоль и лейкоз: доказательство эффективности на моделях опухолей) (Nature-Medicine 5(7): 810-816, 1999; Tracet et al, AACR April 6-10, 2002, Poster #5426; Tecle, H. IBC 2^nd International Conference of Protein Kinases, September 9-10, 2002, J. Clin. Invest. 108(6), 851-859, 2001), (b) Pain: Evidence of Efficacy in Pain Models (Боль: доказательство эффективности на моделях боли) (J. Neurosci. 22:478, 2002; Acta Pharmacol Sin. 26:789 2005; Expert Opin Ther Targets. 9:699, 2005; Mol. Pain. 2:2, 2006), (c) Stroke: Evidence of Efficacy in Stroke Models Significant Neuroprotection against Ischemic Brain Injury by Inhibition of MEK (Инсульт: доказательство эффективности на моделях инсульта вследствие значимой нейропротекции против ишемического повреждения мозга ингибированием MEK) (J. Pharmacol. Exp. Ther. 304: 172, 2003; Brain Res. 996:55, 2004), (d) Diabetes: Evidence In Diabetic Complications. (Сахарный диабет: доказательство эффективности при осложнениях сахарного диабета) (Am. J. Physiol. Renal. 286, F120 2004), (e) Inflammation: Evidence of Efficacy in Inflammation Models. (Воспаление: доказательство эффективности на моделях воспаления.) (Biochem Biophys Res. Com. 268:647, 2000), и (f) Arthritis: Evidence of efficacy in experimental osteoarthritis. (Артрит: доказательство эффективности при экспериментальном остеоартрите) (Arthritis & (J. Clin. Invest. 116: 163. 2006).

Путь PI3K активно взаимодействует с путем MAPK. Эти пути разделяют общие активаторы выше по ходу транскрипции, и они оба активируются онкогенным RAS, и, как представляется, обеспечивают некоторую компенсаторную передачу сигналов, когда один или другой ингибируется.

Несмотря на многочисленные возможности лечения страдающих раком пациентов, сохраняется потребность в эффективных и безопасных терапевтических средствах и потребность в новых способах комбинированной терапии, которые может проводиться для эффективного долгосрочного лечения злокачественных заболеваний. К удивлению, было обнаружено, что комбинация эффективного количества ингибитора p110α-специфической фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K), соединения 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты, с эффективным количеством по меньшей мере одного ингибитора MEK, соединения по настоящему изобретению, в частности, (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2- фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновойкислоты или (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида, приводит к неожиданному улучшению при лечении пролиферативных заболеваний, в частности, рака. При одновременном введении, последовательно или раздельно, это соединение, специфический ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K), и соединение ингибитор MEK по настоящему изобретению взаимодействуют синергическим образом для сильного ингибирования клеточной пролиферации. Эта неожиданная синергическая реакция обеспечивает возможность снижения дозы, требуемой для каждого соединения, приводящему к снижению побочных эффектов и повышению долгосрочной клинической эффективности соединений при лечении.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к фармацевтической комбинации, содержащей: (a) соединение ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере один ингибитор митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), выбранный из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель для одновременного, раздельного или последовательного введения, в частности, для лечения или профилактики пролиферативного заболевания.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, ингредиентами комбинации являются (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемая соль, и (b) по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK, выбранное из группы, состоящей из (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединения B) или (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (соединения C) или его фармацевтически приемлемой соли.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, ингредиентами комбинации являются (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемая соль, и (b) по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B) или его фармацевтически приемлемая соль.

Настоящее изобретение дополнительно относится к комбинированному препарату или фармацевтической композиции, содержащим (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере один ингибитор MEK, выбранный из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167, или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель. В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к комбинированному препарату, который содержит: (a) одну или несколько стандартных лекарственных форм ингредиента комбинации (a), и (b) одну или несколько стандартных лекарственных форм ингредиента комбинации (b).

Настоящее изобретение относится к фармацевтической комбинации, содержащей (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере один ингибитор MEK, выбранный из группы, состоящей из (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединения B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (соединения C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420 или их фармацевтически приемлемой соли, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, применяемой для лечения или профилактики пролиферативного заболевания у нуждающегося в этом индивида.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической комбинации, содержащей (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере один ингибитор MEK, выбранный из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167, или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, и необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель для применения при получении для применения при получении фармацевтической композиции или лекарственного препарата для лечения или профилактики пролиферативного заболевания у нуждающегося в этом индивида.

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению соединения ингибитора PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединения A) или его фармацевтически приемлемой соли, в комбинации по меньшей мере с одним ингибитором MEK, выбранном из группы, включающей (2- гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167, или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, для получения фармацевтической композиции или лекарственного препарата для лечения или профилактики пролиферативного заболевания.

Настоящее изобретение относится к способу лечения индивида, имеющего пролиферативное заболевание, включающему введение указанному индивиду комбинации, содержащей (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере один ингибитор MEK, выбранный из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, и необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель в количестве, которое совместно терапевтически эффективно против пролиферативного заболевания.

Настоящее изобретение дополнительно относится к коммерческой упаковке, содержащей в качестве терапевтических средств комбинацию, содержащую (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) по меньшей мере один ингибитор MEK, выбранный из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167, или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, вместе с инструкциями по одновременному, раздельному или последовательному их введению для применения для задержки прогрессирования или для лечения пролиферативного заболевания.

ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фиг.1 показан контур изоболограммы при 50% ингибировании для комбинации с 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединением A) и (2-гидроксиэтокси)-амидом 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединением B) на линиях клеток немелкоклеточного рака легких NCI-H2122.

На Фиг.2 показан контур изоболограммы при 50% ингибировании для комбинации с 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединением A) и (2-гидроксиэтокси)-амидом 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединением B) на линиях клеток немелкоклеточного рака легких NCI-H2122 по данным с высоким разрешением, полученным в отдельном исследовании.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к фармацевтической комбинации, содержащей: (a) соединение ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (далее в настоящем описании именуемое «соединением A») или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере один ингибитор митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), соединение, выбранное из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, и необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель для одновременного, раздельного или последовательного введения, в частности, для применения при лечении или профилактике пролиферативного заболевания.

Пока нет ясных иных указаний, общие термины, используемые в настоящем описании, определяются следующими значениями:

Пока не отмечено иным образом, термины «содержащие» и «включающие» используются в настоящем описании в их допускающем изменения и не ограничивающем смысле.

Пока в настоящем описании не указано иного или это ясно ни противоречит контексту, термины с неопределенными и определенными артиклями и подобными ссылками в контексте описания изобретения (в частности, в контексте слекдующей формулы изобретения) следует рассматривать как охватывающие формы и единственного, и множественного числа. Когда форма множественного числа используется для соединений, солей и тому подобного, это также предназначено для обозначения одного соединения, соли или тому подобного.

Термин «комбинация» или «фармацевтическая комбинация» определяется в настоящем описании как относящийся или к фиксированной комбинации в одной стандартной лекарственной форме, не фиксированной комбинации или набору частей для комбинированного введения, где соединение или его фармацевтически приемлемая соль и по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK или его фармацевтически приемлемая соль могут вводиться одновременно, независимо в одно и то же время или раздельно в пределах интервалов времени, которые обеспечивают возможность компонентам комбинации проявить совместный, например, синергический эффект. Термин «фиксированная комбинация» означает, что активные ингредиенты, например, и соединение, и второй компонент комбинации вводятся пациенту одновременно в виде одной лекарственной формы или дозировки. Термин «не фиксированная комбинация» означает, что активные ингредиенты, например, и соединение по настоящему изобретению и второй компонент комбинации вводятся пациенту в виде отдельных лекарственных форм или одновременно, параллельно или последовательно без определенных ограничений времени, причем такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни двух компонентов в организме пациента. Последнее также относится к смешанной терапии, например, введению трех или более активных ингредиентов.

Термин «ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы» определяется в настоящем описании как относящийся к соединению, которое нацелено, снижает уровень или ингибирует PI 3-киназу. Было показано, что активность PI 3-киназы увеличивается в ответ на ряд гормональных и ростовых факторных стимулов, включая инсулин, тромбоцитарный фактор роста, инсулиноподобный фактор роста, эпидермальный фактор роста, колониестимулирующий фактор и фактор роста гепатоцитов, и его связывали с процессами, относящимися к клеточному росту и трансформации.

Термин «ингибитор MEK» определяется здесь как относящийся к соединению, которое нацелено, уменьшает содержание или ингибирует киназную активность MAP киназы, MEK. Мишень ингибитора MEK включает без ограничения ERK. Косвенная мишень ингибитора MEK включает без ограничения циклин D1.

Термин «фармацевтическая композиция» определяется здесь как относящийся к смеси или раствору, содержащему по меньшей мере одно терапевтическое средство, подлежащее введению индивиду например, млекопитающему или человек, для профилактики или лечения определенного заболевания или состояния, поражающего млекопитающее.

Термин «фармацевтически приемлемые» определяется здесь как относящийся к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые в пределах объема здравого медицинского суждения пригодны для контакта с тканями индивида, например, млекопитающего или человека, без избыточной токсичности, раздражения, аллергических реакций и других проблемных осложнений, соизмеримо с целесообразным отношением выгоды/риска.

Термины «совместное введение» или «комбинированное введение», используемые здесь, определяются, как охватывающие введение выбранных терапевтических средств одному пациенту и предназначены для включения схем лечения, в которых средства необязательно вводятся одним и тем же путем введения или в одно и то же время.

Используемый здесь термин «лечение» включает лечение, облегчающее, уменьшающее или облегчающее по меньшей мере один симптом у индивида, или осуществляющее задержку прогрессирования заболевания. Например, лечение может представлять собой уменьшение одного или нескольких симптомов расстройства или полное устранение расстройства, такого как рак. В пределах значения настоящего изобретения, термин «лечить» также обозначает остановку, задержку начала (т.е. период перед клиническим проявлением заболевания) и/или снижение риска развития или усугубления течения заболевания. Термин «защитить» используется здесь для обозначения предотвращения, задержки или лечения или при целесообразности для достижения всех этих эффектов, в отношении развития или продолжения или усугубления тяжести заболевания у индивида.

Используемый здесь термин «предотвращать», «предотвращение» или «профилактика» включает предотвращение по меньшей мере одного симптома, связанного или вызванного предотвращаемым состоянием, заболеванием или расстройством.

Используемый здесь термин «совместно терапевтически активные» или «совместный терапевтический эффект» означает, что терапевтические средства могут вводиться раздельно (хронологически отсроченным образом, в частности, в определенной последовательности) через предпочтительные интервалы времени подлежащему лечению теплокровному животному, в частности, человеку, но все же проявляют (предпочтительно, синергическое) взаимодействие (совместный терапевтический эффект). Так ли это, наряду с другими способами, может быть продемонстрировано следующими уровнями в крови, показывающими, что оба соединения присутствуют в крови подлежащего лечению человека по меньшей мере в течение определенных интервалов времени.

Термин «фармацевтически эффективное количество» или «клинически эффективное количество» комбинации терапевтических средств представляет собой количество, достаточное для обеспечения заметного улучшения относительно исходных клинически наблюдаемых признаков и симптомов расстройства, подвергаемого лечению комбинацией.

Используемый здесь термин «синергический эффект» относится к действию двух терапевтических средств, таких как, например, соединение формулы (I), например, соединения A, и по меньшей мере одного соединения ингибитора MEK по настоящему изобретению, обеспечивающему эффект, например, замедления прогрессирования симптомов пролиферативного заболевания, в частности, рака, или его симптома, причем достигнутый эффект больше, чем простое добавление эффектов каждого из лекарственных средств, введенных раздельно. Синергический эффект может быть рассчитан, например, с использованием пригодных способов, таких как уравнение сигмоидной функции Emax (Holford, N. H. G. and Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453 (1981)), уравнение аддитивности Леве (Loewe, S. and Muischnek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326 (1926)) и уравнение медианного эффекта (Chou, T. C. and Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)). Каждое указанное выше уравнение может применяться к экспериментальным данным для построения соответствующего графика для содействия в оценке эффектов лекарственной комбинации. Соответствующие графики, связанные с указанными выше уравнениями, представляют собой кривую «концентрация-эффект», кривую изоболограммы и кривую комбинированного показателя, соответственно.

Используемый здесь термин «индивид» или «пациент» включает животных, которые могут страдать или поражаться онкологическими заболеваниями или любым расстройством, включающим, прямо или опосредованно, рак. Примеры индивидов включают млекопитающих, например, людей, собак, коров, лошадей, свиней, овец, коз, кошек, мышей, кроликов, крыс и трансгенных животных, кроме человека. В предпочтительном варианте осуществления, индивид представляет собой человека, например, человека, страдающего, имеющего риск развития или потенциально подверженного возникновению онкологических заболеваний.

Термин «примерно» или «приблизительно» должны иметь значение в пределах 10%, предпочтительнее, в пределах 5% данной величины или диапазона.

Фармацевтические комбинации по настоящему изобретению включают соединение ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (далее именуемое («соединение A»). Соединение A представляет собой p110α-селективный ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K), соединение формулы I

Соединение A было первоначально описано в заявке на Международный патент WO 2010/029082, где был описан синтез его формы свободного основания. Синтез соединения A описан, например, в заявке на Международный патент WO 2010/029082, которая полностью включена в настоящее описание путем ссылки в виде примера 15.

При ссылке на соединение A, термин «соль» или «соли» следует понимать как представляющий соль соединения A, которая может присутствовать отдельно или в смеси со свободным соединением формулы (I), и соли предпочтительно представляют собой фармацевтически приемлемые соли. Такие соли образуются, например, в виде кислотно-аддитивных солей, предпочтительно с органическими или неорганическими кислотами, из соединения формулы (I) с основным атомом азота, в частности, фармацевтически приемлемые соли. Пригодными неорганическими кислотами являются, например, галогеновые кислоты, такие как хлористоводородная кислота, серная кислота или фосфорная кислота. Пригодными органическими кислотами являются, например, карбоновые кислоты или сульфоновые кислоты, такие как фумаровая кислота или метансульфоновая кислота. В целях выделения или очистки, возможно также использование фармацевтически неприемлемых солей, например, пикратов или перхлоратов. Для терапевтического применения используются только фармацевтически приемлемые соли или свободные соединения (где применимо, в форме фармацевтических препаратов), и поэтому они предпочтительны. Ввиду тесной связи между новыми соединениями в свободной форме и соединениями в форме их солей, включая те соли, которые могут использоваться в качестве промежуточных соединений, например при очистке или идентификации новых соединений, любую ссылку в настоящем описании на свободное соединение следует понимать как относящуюся также к соответствующим солям в соответствии с пригодностью и целесообразностью. Соли соединения A представляют собой предпочтительно фармацевтически приемлемые соли; пригодные противоионы, образующие фармацевтически приемлемые соли, известны в данной области техники.

Фармацевтические комбинации по настоящему изобретению содержат по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK, выбранное из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSKl120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль.

Соединение ингибитор MEK (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B) представляет собой соединение формулы (II)

Соединение ингибитор MEK (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B), описано в заявке PCT на Международный патент WO 03/077914, и способы его получения были описаны, например, в примере 18 настоящего описания.

Кроме того, что описано здесь, соединения, применяемые в настоящем изобретении, могут обладать одним или несколькими асимметричными центрами и могут быть получены в виде отдельных (R)- или (S)-стереоизомеров или в виде их смесей, как описано в заявке PCT на Международный патент № WO03/077914. Кроме указанного иным образом, описание или название конкретного соединения в описании и формуле изобретения предназначено для включения и отдельных энантиомеров, и диастереомерных смесей, рацемических или иных их смесей. Соответственно, настоящее изобретение также включает все такие изомеры, включая диастереомерные смеси и разделенные энантиомеры соединений по настоящему изобретению. Диастереомерные смеси могут быть разделены на их отдельные диастереомеры на основании их физико-химических различий способами, известными специалистам в данной области, например, хроматографией или фракционной кристаллизацией. Энантиомеры могут быть разделены превращением энантиомерной смеси в диастереомерную смесь реакцией с соответствующим оптически активным соединением (например, спиртом), разделением диастереомеров и превращением (например, гидролизом) отдельных диастереомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Способы определения стереохимии и разделения стереоизомеров хорошо известны в данной области техники (см. обсуждение в главе 4 руководства «Advanced organic Chemistry» («Достижения органической химии»), 4^th edition, J. March. John Wiley и Sons, New York, 1992).

Соединение ингибитор MEK (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C) представляет собой соединение формулы (III)

Соединение ингибитор MEK (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C) описано в примере 25-BB заявки PCT на Международный патент № WO2007/044084, и способы его получения были описаны в ней.

Дополнительные ингибиторы MEK, которые могут использоваться в комбинации по настоящему изобретении, включают без ограничения PD0325901 (Pfizer) (см. опубликованную заявку PCT на Международный патент № WO02/06213), PD-184352 (Pfizer), RDEA119 (Ardea Biosciences), GSK1120212 (GlaxoSmithKline) (см. опубликованную заявку PCT на Международный патент № WO05/121142), XL518 (Exelexis), AS-701255 (Merck Serono), AS-701173 (Merck Serono), AS703026 (Merck Serono), RDEA436 (Ardea Biosciences, E6201 (Eisai) (см. публикацию Goto et al, Journal of Pharmacology и Experimental Therapeutics, 3331(2): 485-495 (2009)), R04987655 (Hoffmann-La Roche), JTP-74057, RG7167, и/или RG7420.

Предпочтительно соединение ингибитор MEK, применяемое в комбинации по настоящему изобретению, выбрано из группы, состоящей из (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединения B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (соединения C) или его фармацевтически приемлемой соли.

В отношении ингибиторов MEK, пока нет иных указаний, термин «соль» или «соли» включает соли кислотных и основных групп, которые могут присутствовать в соединениях по настоящему изобретению. Соединения по настоящему изобретению, которые являются основными по природе, способны образовывать широкое разнообразие солей с различными неорганическими и органическими кислотами. Кислоты, которые могут использоваться для получения фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей таких основных соединений по настоящему изобретению, представляют собой те, которые образуют нетоксичные кислотно-аддитивные соли, т.е. соли, содержащие фармацевтически приемлемые анионы, такие как ацетат, бензоат, бромид, хлорид, цитрат, фумарат, гидробромид, гидрохлорид, йодид, лактат, малеат, манделат, нитрат, оксалат, салицилат, сукцинат и тартрат. Поскольку одно соединение по настоящему изобретению может включать несколько кислотных или основных составляющих, соединения по настоящему изобретению могут включать моно-, ди- или три-соли в одном в одном соединении.

В случае кислотной составляющей, в соединении по настоящему изобретению, соль может быть образована обработкой соединения по настоящему изобретению с основным соединением, в частности, неорганическим основанием. Предпочтительными неорганическими солями являются те, которые образованы со щелочными и щелочноземельными металлами, такими как литий, натрий, калий, барий и кальций. Предпочтительные соли органических оснований включают, например, аммоний, дибензиламмоний, бензиламмоний, 2- гидроксиэтиламмоний, бис(2-гидроксиэтил)аммоний, фенилэтилбензиламин, дибензилэтилендиамин и подобные соли. Другие соли кислотных составляющих могут включать, например, те соли, которые образованы с прокаином, хинином и N-метилглюкозамином, плюс соли, образованные с основными аминокислотами, такими как глицин, орнитин, гистидин, фенилглицин, лизин и аргинин. Особенно предпочтительной солью является натриевая или калиевая соль соединения по настоящему изобретению.

В отношении основных составляющих, соль образуется обработкой соединения по настоящему изобретению кислотным соединением, в частности, неорганической кислотой. Предпочтительные неорганические соли данного типа могут включать, например, соли, образованные с хлористоводородной, бромистоводородной, серной, фосфорной или подобными кислотами. Предпочтительные органические соли данного типа могут включать, например, соли, образованные с уксусной, янтарной, лимонной, малеиновой, фумаровой, D-глутаминовой, гликолевой, бензойной, коричной и подобными органическими кислотами. Особенно предпочтительной солью этого типа является гидрохлорид или сульфат соединения B по настоящему изобретению.

Дополнительные фармацевтически приемлемые соли соединения B и соединения C, пригодные для настоящего изобретения, включают соли, описанные в заявке PCT на Международный патент № WO 03/077914 и в заявке PCT на Международный патент № WO2007/044084, которые обе включены в настоящее описание путем ссылки.

Пока нет иных определений или ясных указаний текстом, ссылка на терапевтические средства, используемые в фармацевтической комбинации по настоящему изобретению, включают и свободное основание соединений, и все фармацевтически приемлемые соли соединений.

Стуктура соединений, идентифицированных кодовыми номерами, генерические и торговые названия можно взять из действительного издания стандартного справочника «Merck Index» или из баз данных, например, Patents International (IMS World Publications). Их соответствующее содержание включено в настоящее изобретением путем ссылки.

В каждом случае, где выше приводятся ссылки на патентные заявки, предмет, относящийся к соединениям, включен в настоящую заявку путем ссылки. Соединения, применяемые в качестве терапевтических средств в фармацевтических комбинаций по настоящему изобретению, могут быть получены и вводиться соответственно, как описано в цитируемых документах. Также в пределы объема настоящего изобретения входит комбинация двух отдельных терапевтических средств, как описано выше, т.е. фармацевтическая комбинация в пределах объема настоящего изобретения может включать три терапевтических средства или более.

Фармацевтическая комбинация, которая содержит (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK, выбранное из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, далее в настоящем описании будет именоваться комбинацией по изобретению.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, компонентами комбинации являются (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK, выбранное из группы, состоящей из (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединения B) или (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (соединения C) или его фармацевтически приемлемой соли.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, компонентами комбинации являются (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемая соль и (b) по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B) или его фармацевтически приемлемая соль.

Настоящее изобретение также относится к комбинированному препарату или фармацевтической композиции, содержащей (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере один ингибитор MEK, выбранный из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к комбинированному препарату, который содержит: (a) одну или несколько стандартных лекарственных форм компонентов комбинации (a) и (b) одну или несколько стандартных лекарственных форм компонентов комбинации (b).

Настоящее изобретение, в частности, относится к комбинации по изобретению, используемой для лечения или профилактики пролиферативного заболевания у нуждающегося в этом индивида. В данном варианте осуществления настоящего изобретения, комбинация по изобретению применяется для лечения или профилактики пролиферативного заболевания, включающего введение индивиду терапевтической комбинации, содержащей эффективное количество соединения ингибитора PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединения A) или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере одного соединения ингибитора MEK, выбранного из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или их фармацевтически приемлемую соль. Предпочтительно соединение ингибитора MEK вводится в терапевтически эффективных дозировках, которые при комбинировании обеспечивают благоприятный эффект. Введение может быть одновременным или последовательным.

Пролиферативное заболевание, лечение или профилактика которого осуществляется комбинацией по изобретению, представляет собой главным образом опухоль и/или рак. Примеры пролиферативных заболеваний включают меланому, рак легких, колоректальный рак (CRC), рак молочных желез, рак почек, такой как, например, почечноклеточная карцинома (RCC), рак печени или печеноклеточная карцинома, острый миелогенный лейкоз (AML), миелодиспластические синдромы (MDS), немелкоклеточный рак легких (NSCLC), рак щитовидной железы, рак поджелудочной железы, пищевода и нейрофиброматоз.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, пролиферативное заболевание представляет собой солидную опухоль. Термин «солидная опухоль», в частности, меланому, рак щитовидной железы, рак молочных желез, рак поджелудочной железы, рак яичников, рак ободочной кишки и в целом ЖК (желудочно-кишечного) тракта, рак шейки матки, рак почек, такой как, например, почечноклеточная карцинома (RCC), рак печени или печеноклеточную карциному, рак легких, в частности, мелкоклеточный рак легких и немелкоклеточный рак легких, рак головы и шеи, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак пищевода или саркому Капоши. Комбинация по настоящему изобретению ингибирует рост солидных опухолей, но также жидких опухолей. Кроме того, в зависимости от типа опухоли и конкретной используемой комбинации может быть получено уменьшение объема опухоли. Комбинации, описанные здесь, также пригодны для предотвращения метастатического распространения опухолей и роста или развития микрометастазов. Комбинации по настоящему изобретению, в частности, пригодны для лечения пациентов с неблагоприятным прогнозом, в частности, таких пациентов с неблагоприятным прогнозом, у которых имеется метастатическая меланома или рак поджелудочной железы.

Подлежащий лечению рак может иметь сверхэкспрессию или амплификацию PI3K альфа, мутации PIK3CA, и/или генетическое изменение пути передачи сигналов MAP, такие как, например, мутация HRAS, KRAS, NRAS или BRAF или амплификация гена. В одном варианте осуществления, подлежащий лечению рак имеет мутацию KRAS, например, рак поджелудочной железы с мутированным KRAS, рак ободочной железы, рак легких (например, NSCLC) или лейкозы.

В еще одном варианте осуществления, пролиферативное заболевание представляет собой рак поджелудочной железы, колоректальный рак, меланому, рак пищевода или легких, в частности, немелкоклеточный рак легких.

Следует понимать, что комбинация по изобретению может применяться исключительно для лечения пролиферативного заболевания в соответствии с настоящим изобретением.

Было обнаружено, что комбинированная терапия, включающая соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK, выбранное из группы, включающей (2- гидроксиэтокси)-амид, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, в частности, (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B) или (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C) или его фармацевтически приемлемую соль, приводит к неожиданному улучшению лечения или профилактике пролиферативных заболеваний, по сравнению с монотерапией. При одновременном, последовательном или раздельном введении, соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) и ингибитор MEK синергически взаимодействуют для ингибирования клеточной пролиферации. Комбинация по изобретению, в частности, подходит для лечения пациентов на поздних стадиях рака, у которых стандартная системная терапия была безуспешной. В эту группу входят пациенты, имеющие опухоль, которая проявляет устойчивость к монотерапии, или проявляет устойчивость к комбинациям, отличным от тех, которые описаны в настоящей заявке.

Природа пролиферативных заболеваний является многофакторной. В определенных обстоятельствах, лекарственные средства с различными механизмами действия могут комбинироваться. Однако только рассмотрение любой комбинации терапевтических средств, имеющих различный тип действия, необязательно приводит к получению комбинаций с преимущественными эффектами.

Введение фармацевтической комбинации по изобретению может привести не только к благоприятному эффекту, например, синергическому терапевтическому эффекту, например, в отношении облегчения, задержки прогрессирования или ингибирования симптомов, но также к дополнительным удивительным благоприятным эффектам, например меньшему числу побочных эффектов, улучшенному качеству жизни или уменьшенной заболеваемости, по сравнению с монотерапией с применением только одного из фармацевтических терапевтических средств, используемых в комбинации по изобретению.

Дополнительное преимущество состоит в том, что могут применяться более низкие дозы терапевтических средств комбинации по изобретению, например, в том, что дозировки не только часто должны быть меньше, но также применяются менее часто, или могут применяться для уменьшения частоты побочных эффектов, наблюдавшихся при использовании одного из компонентов комбинации раздельно. Это соответствует желаниям и потребностям подлежащих лечению пациентов.

Принятыми моделями тестирования может быть показано, что комбинация по изобретению приводит к достижению описанных выше благоприятных эффектов. Специалист в данной области техники вполне способен выбрать релевантную модель тестирования для обеспечения таких благоприятных эффектов. Фармакологическая активность комбинации по изобретению может быть, например, продемонстрирована в клиническом исследовании или в процедуре тестирования, как по существу описано ниже в настоящей заявке.

Подходящие клинические исследования представляют собой, в частности, например, открытые исследования с увеличением дозы у пациентов с пролиферативными заболеваниями. Такие исследования, в частности, доказывают синергизм терапевтических средств комбинации по изобретению. Благоприятные эффекты на пролиферативные заболевания могут быть определены непосредственно по результатам этих исследований, которые в сущности известны специалисту в данной области техники. Такие исследования могут быть, в частности, пригодны для сравнения эффектов монотерапии с использованием каждого из терапевтических средств и комбинации по изобретению.

В одном варианте осуществления, дозу соединения ингибитора PI3K повышают до достижения максимально переносимой дозы, и по меньшей мере одно соединение ингибитора MEK по настоящему изобретению вводят в фиксированной дозе. Альтернативно, соединение ингибитор PI3K может вводиться в фиксированной дозе, а доза по меньшей мере одного ингибитора MEK по настоящему изобретению может увеличиваться. Каждый пациент может получать дозы соединения ингибитора PI3K и/или по меньшей мере одного ингибитор MEK по настоящему изобретению или ежедневно, или периодически. Эффективность лечения можно определить в таких исследованиях, например, через 12, 18 или 24 недель оценкой симптомов в баллах через каждые 6 недель.

В предпочтительном варианте осуществления, ингибитор MEK представляет собой соединение B или соединение C или их фармацевтически приемлемую соль.

Определение синергического взаимодействия между одним или несколькими компонентами, оптимального диапазона для эффекта и диапазонов абсолютных доз каждого компонента для эффекта можно окончательно измерить введением компонентов по различным диапазонам отношения масс./масс. и доз нуждающимся в лечении пациентам. Для людей, сложность и затраты при проведении клинических исследований на пациентах может сделать непрактичным использование этой формы тестирования в качестве первичной модели для определения синергии. Однако наблюдение синергии у одного вида может прогнозировать эффект у другого вида, и существуют экспериментальные модели на животных, как описано в настоящей заявке, для измерения синергического эффекта, и результаты таких исследований могут также использоваться для прогнозирования диапазонов эффективной дозы и концентрации в плазме и абсолютных доз и концентраций в плазме, требуемых у других видов, путем применения фармакокинетических/ фармакодинамических методов. Установленные корреляции между моделями опухолей и эффектами, наблюдавшимися у людей, свидетелсьтвуют о том, что синергия у животных может быть, например, продемонстрирована на мутанте BRAF: SW1417, COLO205, LS41 IN, HCT-29 и RKO; мутанте KRAS: NCI-H23, NCI-H2122, NCI-H358, NCI-H460, HCT-15, SW480, SW620, SW837, COLO-678, LS123, NCI-H747, HCT-116, T84, LS180, SW948 и GP2d; мутанте PIK3CA: NCI-H460, HCT-15, HCT-116, HCT-29, RKO, T84, SW48; и мутанте TP53: C2BBel моделях раковых опухолей, как описано в разделе «Примеры» ниже.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, комбинация по изобретению содержит соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK, выбранное из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединение B), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (соединение C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 и/или RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль, для применения при лечении или профилактике пролиферативного заболевания, предпочтительно рака, проявляющего сверхэкспрессию или амплификацию PI3K альфа мутации PIK3CA и/или мутацию HRAS, KRAS, NPvAS или BPvAF. Предпочтительно онкологическое заболевание, проявляющее сверхэкспрессию или амплификацию PI3K альфа, мутации PIK3CA и/или мутацию HRAS, KRAS, NRAS или BRAF, представляет собой меланому рак поджелудочной железы, колоректальный рак, рак пищевода или легких.

В одном аспекте, настоящее изобретение относится к синергической комбинации для введения людям, содержащей (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK по настоящему изобретению, предпочтительно соединение B или его фармацевтически приемлемую соль, в диапазоне комбинации (масс./масс.), который соответствует диапазонам, наблюдавшимся на модели опухоли, например, как описано в примерах ниже, использованных для идентификации синергического взаимодействия. Подходяще, чтобы диапазон соотношения у людей соответствовал диапазону у животных, выбранному из диапазона от 50:1 до 1:50 частей по массе, от 50:1 до 1:20, от 50:1 до 1:10, от 50:1 до 1:1, от 20:1 до 1:50, от 20:1 до 1:20, от 20:1 до 1:10, от 20:1 до 1:1, от 10:1 до 1:50, от 10:1 до 1:20, от 10:1 до 1:10, от 10:1 до 1:1, от 1:1 до 1:50, от 1:1 до 1:20 и от 1:1 до 1:10. Более подходяще, диапазон у людей соответствует диапазону у животных порядка от 10:1 до 1:1, от 5:1 до 1:1 или от 2:1 до 1:1 частей по массе.

В другом аспекте, настоящее изобретение относится к синергической комбинации для введения людям, содержащей (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK по настоящему изобретению, предпочтительно соединение B или его фармацевтически приемлемую соль, в диапазоне комбинации (масс./масс.), который соответствует диапазонам, наблюдавшимся на модели опухоли, например, как описано в примерах ниже, использованных для идентификации синергического взаимодействия.

В соответствии с дополнительным аспектом, настоящее изобретение относится к синергической комбинации для введения людям, содержащей (a) соединение ингибитор PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере одно соединение ингибитор MEK по настоящему изобретению, предпочтительно соединение B или его фармацевтически приемлемую соль, где диапазон доз каждого компонента соответствует синергическим диапазонам, наблюдавшимся на подходящей модели опухоли, например, моделях опухолей, описанных ниже в примерах, в первую очередь, использованных для идентификации синергического взаимодействия.

Одной целью настоящего изобретения является получение фармацевтической композиции, содержащей количество, которое совместно терапевтически эффективно против пролиферативного заболевания, содержащей комбинацию по изобретению. В этой композиции, компоненты комбинации (a) и (b) могут вводиться или в одной препаративной форме или стандартной лекарственной форме, вводиться одновременно или раздельно любым подходящим путем, или вводиться последовательно любым подходящим путем. Стандартная лекарственная форма может также представлять собой фиксированную комбинацию.

Фармацевтические композиции для раздельного введения обоих компонентов комбинации или для введения в фиксированной комбинации, т.е. одной галеновой композиции, содержащей комбинацию по изобретению, могут быть получены по существу известным образом и представляют собой те, которые подходят для энтерального, например, перорального или ректального, и парентерального введения млекопитающим (теплокровным животным), включая людей, содержащие терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного фармакологически активного компонента комбинации отдельно, например, как указано выше, или в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, в частности, пригодными для энтерального или парентерального применения.

Новая фармацевтическая композиция может содержать от примерно 0,1% до примерно 99,9%, предпочтительно от примерно 1% до примерно 60% терапевтического средства (средств).

Пригодные фармацевтические композиции для комбинированной терапии для энтерального или парентерального введения представляют собой, например, те, которые представлены в стандартных лекарственных формах, таких как покрытые сахаром таблетки, таблетки, капсулы или суппозитории или ампулы. Если нет иных указаний, их получают по существу известным образом, например, посредством различных обычных способов смешивания, измельчения, прямого прессования, гранулирования, покрытия сахаром, растворения, лиофилизации или технологий получения, вполне очевидных специалистам в данной области техники. Следует понимать, что единицы содержания компонента комбинации, содержащегося в отдельной дозе каждой лекарственной формы, само по себе не должно составлять эффективное количество, поскольку необходимое эффективное количество может быть достигнуто введением множества лекарственных форм.

Стандартная лекарственная форма, содержащая комбинацию средств или отдельных средств комбинации средств, может быть представлена в форме микротаблеток, заключенных внутрь капсулы, например, желатиновой капсулы. Для этого, может применяться желатиновая капсула, используемая в фармацевтических препаративных формах, такая как твердая желатиновая капсула, известная как Capsugel, выпускаемая компанией Pfizer.

Стандартные лекарственные формы по настоящему изобретению могут необязательно дополнительно содержать дополнительные обычные носители или эксципиенты, используемые для фармацевтических препаратов. Примеры таких носителей включают без ограничения разрыхлители, связывающие агенты, смазывающие вещества, глянцеватели, стабилизаторы и наполнители, разбавители, красящие агента, отдушки и консерванты. Средний специалист в данной области техники может выбрать один или несколько указанных выше носителей в отношении конкретных желаемых свойств лекарственной формы обычным экспериментированием и без какой-либо ненужной сложности. Количество каждого из используемых носителей может варьироваться в пределах диапазонов, обычных в данной области техники. В следующих ссылках, которые все включены в настоящее описание путем ссылки, описаны технологии и эксципиенты, используемые для составления пероральных лекарственных форм. См. руководства The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4^th edition, Rowe et al, Eds., American Pharmaceuticals Association (2003); и Remington: the Science и Practice of Pharmacy, 20^th edition, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2003).

Эти необязательные дополнительные обычные носители могут быть включены в пероральную лекарственную форму или включением одного или нескольких обычных носителей в первоначальную смесь перед или во время гранулирования, или комбинированием одного или нескольких обычных носителей с гранулами, содержащими комбинацию средств или отдельных средств комбинации средств в пероральной лекарственной форме. В последнем из указанных вариантов осуществления, комбинированная смесь может дополнительно смешиваться, например, с помощью V-блендера, и в последующем прессоваться или формоваться в таблетку, например, монолитную таблетку, инкапсулированную в капсулу, или заполняться в саше.

Примеры фармацевтически приемлемых разрыхлителей включают без ограничения крахмалы; глины; целлюлозы; альгинаты; смолы; поперечно сшитые полимеры, например, поперечно сшитый поливинилпирролидон или кросповидон, например, Polyplasdone XL от компании International Specialty Products (Wayne, NJ); поперечно сшитую карбоксиметилцеллюлозу натрия или кроскармеллозу натрия, например, AC-DI-SOL от компании FMC; и поперечно сшитую карбоксиметилцеллюлозу кальция; полисахариды сои; и гуаровую камедь. Разрыхлитель может присутствовать в количестве от примерно 0% до примерно 10% масс. композиции. В одном варианте осуществления, разрыхлитель присутствует в количестве от примерно 0,1% до примерно 5% масс. композиции. Примеры фармацевтически приемлемых связывающих агентов включают без ограничения крахмалы; целлюлозы и их производные, например, микрокристаллическую целлюлозу, например, AVICEL PH от компании FMC (Philadelphia, PA), гидроксипропилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу и гидроксипропилметилцеллюлозу METHOCEL от компании Dow Chemical Corp. (Midland, MI); сахарозу; дектрозу; кукурузный сироп; полисахариды и желатин. Связывающий агент может присутствовать в количестве от примерно 0% до примерно 50%, например, 2-20% масс. композиции.

Примеры фармацевтически приемлемых связывающих веществ и фармацевтически приемлемых глянцевателей включают без ограничения коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, крахмалы, тальк, трехосновный фосфат кальция, стеарат магния, стеарат алюминия, стеарат кальция, карбонат магния, оксид магния, полиэтиленгликоль, порошковую целлюлозу и микрокристаллическую целлюлозу. Смазывающее средство может присутствовать в количестве от примерно 0% до примерно 10% масс. композиции. В одном варианте осуществления, смазывающее веещство может присутствовать в количестве от примерно 0,1% до примерно 1,5% масс. композиции. Глянцеватель может присутствовать в количестве от примерно 0,1% до примерно 10% масс.

Примеры фармацевтически приемлемых наполнителей и фармацевтически приемлемых разбавителей включают без ограничения кондитерский сахар, прессуемый сахар, декстраты, декстрин, декстрозу, лактозу, маннит, микрокристаллическую целлюлозу, порошковую целлюлозу, сорбит, сахарозу и тальк. Наполнитель и/или разбавитель, например, может присутствовать в количестве от примерно 0% до примерно 80% масс. композиции.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение также относится к комбинации по изобретению для применения при получении фармацевтической композиции или лекарственного препарата для лечения или профилактики пролиферативного заболевания у нуждающегося в этом индивида.

В дополнительном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к применению соединения ингибитора PI3K 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)–2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты (соединения A) или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) по меньшей мере одного соединения ингибитора MEK, выбранного из группы, включающей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, R04987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или их фармацевтически приемлемую соль, для получения фармацевтической композиции или лекарственного препарата для лечения или профилактики пролиферативного заболевания у нуждающегося в этом индивида. Предпочтительным является ингибитор MEK, выбранный из (2-гидроксиэтокси)амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (соединения B) или (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (соединения C).

В соответствии с настоящим изобретением, терапевтически эффективное количество каждого из компонентов комбинации по изобретению может вводиться одновременно или последовательно в любом порядке, и компоненты могут вводиться раздельно или в виде фиксированной комбинации. Например, способ лечения пролиферативного заболевания в соответствии с изобретением может включать (i) введение первого средства (a) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и (ii) введение средства (b) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, одновременно или последовательно в любом порядке, в совместно терапевтически эффективных количествах, предпочтительно в синергически эффективных количествах, например, в ежедневных или прерывисто вводимых дозировках, соответствующих количествам, описанным здесь. Отдельные компоненты комбинации по изобретению могут вводиться в различные точки времени в течение курса лечения или одновременно в раздельных или единых комбинированных формах. Кроме того, термин «введение» также включает применение пролекарства компонента комбинации, которое превращается in vivo в сам компонент комбинации. Поэтому, настоящее изобретение следует понимать как охватывающее все такие схемы одновременного или чередующегося лечения, и термин «введения» следует интерпретировать соответствующим образом.

Эффективная дозировка каждого из компонентов комбинации, используемая в комбинации по изобретению, может варьироваться, в зависимости от конкретного используемого соединения или фармацевтической композиции, способа введения, подлежащего лечению состояния и тяжести подвергаемого лечению состояния. Так, схему введения комбинации по изобретению выбирают в соответствии с разнообразными факторами, включая путь введения и почечную и печеночную функцию пациента. Клиницист или врач средней квалификации может легко определить и назначить эффективное количество отдельных терапевтических средств, требуемое для облегчения течения, противодействия или прекращения прогрессирования состояния.

Оптимальные отношения, отдельные и комбинированные дозировки и концентрации компонентов комбинации (a) и (b) комбинации по изобретению, которые обеспечивают эффективность без токсичности, основаны на кинетике доступности терапевтических средств для участков-мишеней, и определяются с использованием способов, известных специалистам в данной области.

Эффективная дозировка каждого из компонентов комбинации может потребовать более частого введения одного из соединения (соединений), по сравнению с другим(и) соединением (соединениями) в комбинации. Поэтому, для обеспечения возможности введения соответствующей дозы, упакованные фармацевтические продукты могут содержать одну или несколько лекарственных форм, которые содержат комбинацию соединений, и одну или несколько лекарственных форм, которые содержат одно из комбинации соединений, но не другое соединение (соединения) комбинации.

Когда компоненты комбинации, которые используются в комбинации по изобретению, применяются в форме, поступающей в продажу в виде отдельных лекарственных средств, их дозировка и способ введения могут соответствовать информации, представленной на вкладыше упаковки соответствующего продаваемого лекарственного средства, если в описании нет иных указаний.

Ингибитор PI3K, соединение A, можно вводить получающему лечение индивиду ежедневно в одной или дробных дозах в эффективной дозировке в диапазоне от примерно 0,05 до примерно 50 мг на 1 кг массы тела в день, предпочтительно примерно 0,1-25 мг/кг/день, предпочтительнее, примерно от 0,5 до 10 мг/кг/день, в одной или дробных дозах. Для человека с массой тела 70 кг, это составило бы предпочтительный диапазон дозировки примерно 35-700 мг в день.

Ингибитор MEK, соединение B, можно вводить подлежащему лечению индивиду ежедневно в одной или дробных дозах в эффективной дозировке в диапазоне от примерно 0,001 до примерно 100 мг на кг массы тела в день, предпочтительно от примерно 1 до примерно 35 мг/кг/день, в одной или дробных дозах. Для человека с массой тела 70 кг, это составило бы предпочтительный диапазон дозировки примерно от 0,05 до 7 г/день, предпочтительно от примерно 0,05 до примерно 2,5 г/день.

Ингибитор MEK, соединение C, можно вводить подлежащему лечению индивиду ежедневно в одной или дробных дозах в эффективной дозировке в диапазоне от примерно 0,001 до примерно 100 мг на кг массы тела в день, предпочтительно от примерно 1 мг/кг/день до примерно 35 мг/кг/день, в одной или дробных дозах. Для человека с массой тела 70 кг, это составило бы предпочтительный диапазон дозировки примерно от 0,07 до 2,45 г/день, предпочтительно от примерно 0,05 до примерно 1,0 г/день.

Оптимальная дозировка каждого компонента комбинации для лечения пролиферативного заболевания может быть определена эмпирически для каждого индивида с использованием известных способов и зависит от разнообразных факторов, включая без ограничения степень прогрессирования заболевания, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и рацион питания индивида; время и путь введения и другие медикаментозные средства, принимаемые индивидом. Оптимальные дозировки могут быть установлены с использованием обычного тестирования и процедур, которые хорошо известны в данной области техники.

Количество каждого компонента комбинации, которое может комбинироваться с материалами носителя для получения одной лекарственной формы, будут варьироваться в зависимости от получающего лечение индивида и конкретного вида введения. В некоторых вариантах осуществления, стандартные лекарственные формы, содержащие комбинацию средств, как описано в настоящей заявке, содержат количества каждого средства комбинации, которые обычно вводятся, когда средства вводятся раздельно.

Частота введения может варьироваться в зависимости от используемого соединения и конкретного состояния, подлежащего лечению или профилактике. В целом, предпочтительно применение минимальной дозировки, которая достаточна для обеспечения эффективной терапии. В целом, может проводиться мониторинг пациентов для определения терапевтической эффективности с использованием анализов, пригодных для подлежащего лечению или профилактике состояния, что знакомо средним специалистам в данной области техники.

Настоящее изобретение относится к способу лечения индивида, имеющего пролиферативное заболевание, включающему введение указанному индивиду комбинации по изобретению в количестве, которое совместно терапевтически эффективно против пролиферативного заболевания. В частности, пролиферативное заболевание, подлежащее лечению комбинацией по изобретению, представляет собой меланому, колоректальный рак или рак легких, в частности немелкоклеточный рак легких. Кроме того, лечение может включать хирургическое вмешательство или лучевую терапию.

Настоящее изобретение дополнительно относится к комбинации по изобретению для применения при лечении пролиферативного заболевания, в частности рака.

Настоящее изобретение дополнительно относится к продаваемой упаковке, содержащей в качестве терапевтических средств комбинацию по изобретению, вместе с инструкциями для их одновременного, раздельного или последовательного введения для применения при задержки прогрессирования или лечении пролиферативного заболевания у индивид, нуждающегося в них.

Следующие примеры иллюстрируют описанное выше изобретение; они, однако, ни в коей мере не предназначены для ограничения объема изобретения. Благоприятные эффекты фармацевтической комбинации по настоящему изобретению могут быть также определены другими моделями тестирования, по существу известными специалисту в данной области техники.

ПРИМЕР 1

Материалы и методы

Линии клеток колоректального рака SW1417, COLO 205, LS4IIN, HT-29, RKO, OUMS-23, SW620, LoVo, SW480, SW837, COLO-678, LS123- NCI-H747, HCT-15, HCT116, DLD-1, T84, SW948, LS180, GP2d, HuTu 80, CW-2, SW48, NCI-H716, C2Bbel, SNU-C1 и KM12 получали из Американской Коллекции Типовых Культур (ATCC) и поддерживали в их соответствующей культуральной среде в соответствии со спецификацией поставщика. Эти линии клеток колоректального рака имеют следующий статус мутации:

Мутация (mut) и дикий тип (wt) представляют известные функционально релевантные мутации. Mut^§ основана на отсутствии экспрессии по анализу. Mut^# обозначает мутацию с известным функциональным значением. Nd обозначает отсутствие данных. * обозначает повторный эксперимент, выполненный в конце исследования, где данные были исключены из расчета медианы и средней величины. ** обозначает точки данных в двух повторениях и дозозависимую реакцию, которая проявляет некоторый разброс.

Для оценки эффекта комбинации клетки высевали в 384-луночные планшеты с плотностью 500 клеток/лунку и инкубировали в течение ночи. Содержимое контрольных планшетов с соединением предварительно разбавляли 1:200 (1 мкл раствора соединения в 200 мкл клеточной культуральной среды RPMI-160, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки) перед переносом 5 мкл этого предварительного разведения в клеточные планшеты, содержащие 20 мкл клеточной культуральной среды для достижения целевых конечных концентраций соединения, а также концентрации носителя (DMSO) 0,09%.

Эффекты отдельных средств, а также их расположенных в шахматном порядке комбинаций на жизнеспособность клеток оценивали после 72 часов инкубации при 37°C/5% CO₂ количественным анализом уровней клеточного АТФ (CellTiterGlo, Promega) с использованием 25 мкл реагента/лунку и n=2 повторений на одно условие инкубации. Аналогичным образом оценивали число/ жизнеспособность клеток во время добавления соединения и использовали при оценке времени удвоения популяции конкретной линии клеток. Величины IC50 отдельных средств рассчитывали, используя подгонку с помощью стандартной четырехпараметрической кривой (SLFit, модель 205). Потенциальные синергические взаимодействия между комбинациями соединений оценивали, используя двухмерную матрицу избыточного ингибирования в соответствии с моделью аддитивности Леве, и представляли в виде балльной оценки синергии. Кроме того, комбинации соединений оценивали анализом комбинированного показателя, выведенного по графикам изоболограммы при ингибировании на 50%, и представляли в виде показателя наилучшей комбинации (CI), который соответствует самой низкой величине на изоболограмме. Все расчеты синергии выполняли, используя программное обеспечение CHALICE (Lehar et al, Nat Biotechnol. (July 2009), 27(4): 69:66). Интерпретация величин по комбинированному показателю и балльной оценке синергии представлена ниже:

Комбинированныйо показатель (CI)	Балльная оценка синергии
CI = 1 → Добавка дозы	S ~ 0 → Добавка дозы
CI < 0,5 → «действительная» синергия (сдвиг дозы 2х)	S > 2 σ_s → Выявленная действительная синергия
CI < 0,3 → «полезная» синергия (сдвиг 3х)	S > 1 → Обычно указывающая на синергию
CI < 0,1 → «сильная» синергия (сдвиг 10х)

Попарные множественные сравнения групп результатов выполняли однопутевым ANOVA (анализом дисперсии) (методом Neuman-Keuls) с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 5 (GraphPad Software Inc.).

Результаты

Для этого исследования, итог основных результатов во всех колоректальных клеточных линиях показан ниже:

Название линии клеток	Соединение В IC50 [нМ]	Соединение А IC50 [нМ]	Балльная оценка синергии	Наилучший C.I. (при ингибированк на 50%)	Описание и эффекта
SW1417	53,9	7850	3,15	0,25	Синергия
COLO205	34,4	>10800	2,68	0,62	Аддитивный/ Синергия
LS411N	54,7	8670	2,89	0,52	Аддитивный/ Синергия
HT-29	84,0	5200	4,57	0,35	Синергия
НТ-29*	66,5	4280	4,68	0,39	Синергия
RKO	>2700	6730	4,08	0,25	Синергия
OUMS-23	>2700	>10800	0,20	Не рассчитывалось	Не оценивалось
SW620	26,9	>10800	2,93	0,36	Синергия
LoVo	148	8660	1,61	1,15	Аддитивный
SW480	2030	9350	1,95	0,37	Аддитивный/ Синергия
SW837	557	7280	2,39	0,54	Аддитивный/ Синергия
COLO-678	1710	>10800	2,06	0,31	Синергия
LS123	2280	7250	3,02	0,36	Синергия
NCI-H747	153	6210	4,07	0,30	Синергия
НСТ-15	>2700	6720	2,04	0,56	Аддитивный/ Синергия
НСТ 116	881	9420	6,53	0,13	Синергия
НСТ 116*	735	8320	7,67	0,13	Синергия
DLD-1	>2700	>10800	1,99	Не рассчитывалось	Не оценивалось
Т$4**	12800	4160	5,39	0,40	Синергия
SW948**	89,8	1190	4,36	0,60	Аддитивный/ Синергия
LS180	143	5080	3,89	0,40	Синергия
GP2d	756	698	4,79	0,11	Синергия
HuTu 80	>2700	8840	1,68	0,96	Аддитивный
CW-2	>2700	>10800	1,19	Не рассчитывалось	Не оценивалось
SW48	78,4	1410	7,89	0,24	Синергия
NCI-H716	>2700	>10800	3,91	0,22	Синергия
C2BBel	1580	9200	2,17	0,42	Синергия
SNU-C1	15,1	2430	3,66	0,39	Синергия
KM12	339	>10800	049	0,99	Аддитивный
Медиана	76	8660	2,93	0,38
Средняя	1160	7510	3,17	0,45

Ингибитор PI3K соединение A и ингибитор MEK соединение B проявляют синергические взаимодействия на 17 из 27 тестированных линий клеток колоректального рака. В среднем, самая высокая степень синергии выявлена в линиях клеток с мутациями PIK3CA. За исключением клеточных линий нулевых в отношении PTEN, мутационный статус ключевых знаков пути MAP киназы (BRAF/KRAS) или PI3K (PIK3CA/PTEN) не имел статистически значимого влияния на наблюдаемую балльную оценку синергии. Подводя итого, эти результаты свидетельствуют о синергическом взаимодействии соединения A и соединения B в линиях колоректальных клеток дикого типа или мутированных в отношении BRAF, KRAS и PIK3CA, но не тех, которые являются нулевыми в отношении PTEN.

ПРИМЕР 2

Материал и методы

Линии клеток, использованные в данном исследовании, закупали у Американской Коллекции Типовых Культур, включая линии клеток немелкоклеточного рака легких NCI-H23 и NCI-H2122 (которые несут мутации и KRAS, и LKB1), NCI-H358 (которая несет мутацию KRAS), NCI-H460 (которая несет мутации KRAS, LKB1 и PIK3CA), и линию клеток колоректального рака SW480 (которая несет мутацию KRAS), HCT-15 (которая несет мутации KRAS PIK3CA). Все линии клеток культивировали при 37°C в инкубаторе с 5% CO₂ в среде RPMI 1640 (ATCC #30-2001) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, 2 ммоль/л глутамина и 1% пирувата натрия.

Анализ клеточной пролиферации: Жизнеспособность клеток определяли измерением клеточного содержания АТФ с использованием люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (Promega #G7573) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, 500-900 клеток/лунку высевали в 384-луночные черные планшеты с прозрачным дном (Greiner#781091) в четырех повторениях или двух повторениях с 30 мкл/лунку ростовой среды, клеткам давали возможность прикрепиться в течение ночи с последующей инкубацией в течение 72 часов с различной концентрацией лекарственных средств или комбинаций лекарственных средств (10 мкл/лунку), в конце обработки лекарственным средством, 30 мкл/лунку реагента CellTiter-Glo добавляли в каждую лунку для лизиса клеток, и сигналы люминесценции регистрировали на планшетном ридере Envision.

Способ расчета эффекта комбинации.

Для нетенденционной оценки эффекта комбинации соединения B и соединения A и для идентификации синергического эффекта при всех возможных концентрациях, исследования комбинации проводили «дозовой матрицей», где комбинацию тестировали при всех возможных пермутациях доз серийно разведенных средств, содержащих или одно соединение B, или одно соединение A; во всех анализах комбинаций соединения наносили одновременно. Это «матрица доз» представляла собой следующее: соединение B подвергали 11 серийным разбавлениям доз 2X с самой высокой дозой при 5 мкМ и низкой дозе примерно при 5 нМ, и соединение A подвергали 9 серийным разбавлениям доз 2X с высокой дозой при 5 мкМ и низкой дозой примерно при 20 нМ. Все кривые реакции на дозы, IC₅₀, IC₉₀ и синергию анализировали, используя программное обеспечение Chalice (CombinatoRx, Cambridge MA). Синергию рассчитывали сравнением реакции на комбинацию с реакциями на ее отдельные средства, в отношении модели сравнения лекарственного средства с его собственной аддитивной дозой. Отклонения от добавок доз можно оценивать визуально на изоболограмме или в цифровом выражении Комбинационным показателем. Сравнение избыточного ингибирования с аддитивными дозами может также наноситься на график в виде диаграммы матрицы полной дозы для выявления того, где происходят синергии. Для количественного определения общей силы комбинации эффектов рассчитывается также объемная оценка

между данными и поверхностью самая высокая доза - одно средство, нормализуется по факторам разбавления одиночного средства ƒxƒy.

Результаты анализа клеточной пролиферации: Подводя итог, синергию наблюдали на всех шести исследованных линиях клеток, продуцируемые балльные оценки синергии находились в диапазоне от 2,09 до 5,49, синергические области были широкими и обычно наблюдались для соединения A в дозе выше 150 нМ и для соединения B в дозах 80 нМ и выше. Эти результаты свидетельствуют о потенциале синергического взаимодействия для соединения B и соединения A на линиях клеток CRC и NSCLC, которые несут мутации KRAS.

Линия клеток	Балльная оценка синергии
НСТ-15	3,05
NCI-H358	4,26
NCI-H23	3,50
SW480	2,09
NCI-H2122	5,49
NCI-H460	3,11

ПРИМЕР 3

Материал и методы

Тестирование на линиях клеток: Комбинацию соединения ингибитора PI3K и ингибитора MEK соединения B, как определено выше, тестировали на 38 линиях клеток из трех типов ткани (7 поджелудочной железы, 10 легких и 21 меланомы). Каждую комбинацию тестировали в частично заполненной «дозовой матрице», сконструированной следующим образом: Каждое отдельное лекарственное средство подавали в ростовую среду при верхнем уровне концентрации (11 мкМ для соединения A или 2,7 мкМ для соединения B), и серийно разбавляли в 3 раза для получения 7-точечной серии, охватывающей фактор 729 в концентрации. Затем соединения комбинировали во всех парах со 2-ой по 6-ую концентрации, и эту дозовую матрицу расширяли также комбинированием верхней и нижней концентраций друг с другом. Тестирование с более высоким разрешением также выполняли на тех же линиях клеток NSCLC, тестируя 9 доз соединения A и 11 доз соединения B, в каждом случае используя разведения 2x, начиная при 5 мкМ. Все линии клеток культивировали при 37°C в инкубаторе с 5% CO₂ в среде RPMI 1640 (из Американской Коллекции Типовых Культур под № 30-2001) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, 2 ммоль/л глутамина и 1% пирувата натрия. Каждую такую дозовую матрицу тестировали в трех повторениях на отдельных аналитических планшетах. Для идентификации цитотоксических обработок, заявители также определяли клеточные популяции «0-го дня» в начале обработки лекарственным средством.

Измерение эффектов комбинации.

Клеточные реакции при каждой обработке измеряли, используя простые ингибирования I = 1-T/V, где T обозначает реакцию ряда обработанных лунок и V обозначает медианный уровень необработанных клеток между лунками для повторных тестов на планшете. Измерения цитотоксичности проводили, используя «Ингибирование роста» GI = 1-(T-V₀)/[T< V₀? V₀: (V-V₀)], где V₀ обозначает медиану уровня необработанных клеток в 0-ой день, и обозначение [C?A:B] дает A, когда состояние C является истинным, и B, когда оно является ложным. GI = 0, 1, и 2 соответствует неэффективным, цитостатическим и полностью цитостатическим обработкам, соответственно. Используя программное обеспечение анализа Chalice (CombinatoRx, Cambridge MA), реакции на средства подгоняли к сигмоидной функции с дозой, параметризованной максимальным эффектом A_max при высоких дозах, переходной концентрации EC₅₀ и коэффициенте Хилла для крутизны этого перехода, интерполированного к точке пересечения 50% ингибирования IC₅₀. Эффект комбинации описывали, используя максимальное ингибирование и величину GI в дозовой матрице, и путем сравнения реакций на комбинацию с реакциями на ее отдельные средства, посредством модели аддитивной дозы Леве. «Балльную оценку» Леве S_Loewe=Σ_X,Y Inƒ_xInƒ/γmax(0,I_data)max(0,I_data-I_Loewe) рассчитывали по разностям между данными I_data и дозо-аддитивной поверхностью I_Loewe, по всем комбинированным концентрациям X,Y, и взвешивали измеренным ингибированием и факторами разбавления одного средства ƒ_x,ƒ_Y. В дополнение к синергии, смещение дозы при 50% ингибировании определяли, используя комбинационный показатель CI₅₀ = C_X/IC_50X + C_Y/IC_50Y, где C_X,C_Y обозначают самые низкие концентрации отдельных средств, которые дают 50% ингибирование в комбинации, по сравнению с величинами IC₅₀ каждого соединения.

Результаты анализа пролиферации клеток

Итоговые эффекты комбинации по тестированным линиям клеток показаны в таблице ниже, наряду с линией дифференцировки и мутационным статусом для каждой линии клеток (mut = известное запускающее поражение, mut? = неизвестное поражение, wt = дикий тип).

Линия клеток	Линия дифференцировки	PIK3CA	PTEN	KRAS	NRAS	BRAF	Балльная оценка синергии	Наилучшая CI (Ингибирование = 0,5)	Максимальное ингибирование	Максимальная GI
AsPC-1	Поджелудочная железа	wt	wt	mut	wt	wt	3,45	0,18	0,73	0,80
BxPC-3	Поджелудочная железа	wt	wt	wt	wt	wt	4,15	0,28	0,88	0,97
HPAC	Поджелудочная железа	wt	wt	mut	wt	wt	5,01	0,20	0,92	1,59
L3.3	Поджелудочная железа	mut?	wt	mut	wt	wt	3,43	0,44	0,86	1,3
MIA PaCa-2	Поджелудочная железа	wt	wt	mut	wt	wt	4,15	0,27	0,81	0,84
PANC-1	Поджелудочная железа	wt	wt	mut	wt	wt	1,28		0,55	0,57
SU.86.86	Поджелудочная железа	wt	wt	mut	wt	wt	1,85	0,59	0,79	1,18
A549	Легкие	wt	wt	mut	wt	wt	1,56		0,66	0,76
Calu-6	Легкие	wt	wt	mut	wt	wt	1,97		0,72	1,21
NCI-H1792	Легкие	wt	wt	mut	wt	wt	1,73	0,65	0,71	1,03
NCI-H2030	Легкие	wt	wt	mut	wt	wt	2,12	0,05	0,64	0,91
NCI-H2122	Легкие	wt	wt	mut	wt	wt	2,47	0,28	0,97	1,8
(высокое разрешение)							5,49	0,29	0,98
NCI-H23	Легкие	wt	wt	mut	wt	wt	2,12	0,20	0,65	1,28
(высокое разрешение)							3,51	0,01	0,78
NCI-H358	Легкие	wt	wt	mut	wt	wt	3,74	0,48	0,89	1,72
(высокое разрешение)							4,26	0,08	0,84

NCI-H441	Легкие	wt	wt	mut	wt	wt	0,56		0,39	0,63
NCI-H460	Легкие	mut?	wt	mut	wt	wt	3,97	0,22	0,68	0,84
(высокое разрешение)							3,11	0,12	0,74
SK-LU-1	Легкие	wt	mut?	mut	wt	wt	1,13		0,56	0,74
COLO 792	Кожа	wt	wt		wt	wt	4,89	0,24	0,98	1,92
MeWo	Кожа	wt	wt	wt	wt	wt	2,21	0,39	0,76	0,90
HMCB	Кожа			wt	mut?	wt			0,53	0,62
Hs 944.T	Кожа	wt	wt	wt	mut	wt	1,44	0,69	0,77	0,75
IPC-298	Кожа	wt	wt	wt	mut	wt	0,55	0,84	0,85	0,92
MEL-JUSO	Кожа	wt	wt	wt	mut	wt	2,11	0,68	0,86	0,92
SK-MEL-2	Кожа	wt	wt	wt	mut	wt	2,63	0,48	0,89	1,64
SK-MEL-30	Кожа	wt	wt	wt	mut	wt	0,56	1,94	0,8	1,38
A-375	Кожа	wt	wt	wt	wt	mut	1,32	1,28	0,89	1,57
COLO 741	Кожа	wt	wt	wt	wt	mut	1,4	0,47	0,73	0,83
COLO-800	Кожа	wt	wt	wt	wt	mut	1,43	0,94	0,97	1,65
IGR-1	Кожа	wt	wt	wt	wt	mut	0,89	0,76	0,83	0,87
LOXIMVI	Кожа	wt	wt	wt	wt	mut	3,19		0,81	0,88
IGR-37	Кожа	wt	mut?	wt	wt	mut	1,42	0,95	0,77	1,45
K029AX	Кожа	wt	mut?	wt	wt	mut	1,09	0,90	0,91	1,15
A2058	Кожа	wt	mut	wt	wt	mut	0,60		0,63	0,89
IGR-39	Кожа	wt	mut	wt	wt	mut	0,16		0,32	0,50
RPMI-7951	Кожа	wt	mut	wt	wt	mut	0,32		0,45	0,66
SK-MEL-24	Кожа	wt	mut	wt	wt	mut	0,71		0,50	1,11
UACC-62	Кожа	wt	mut	wt	wt	mut	0,97	0,87	0,81	0,89
SK-MEL-31	Кожа	wt	mut	wt	wt	wt	0,36		0,39	0,5

Балльные оценки для матриц лекарственного средства с собственной дозой (исследуемые в качестве контроля), ввиду того, что они должны иметь нулевую синергию по определению, проявляют уровень, который согласуется в экспериментальными ошибками. Стандартное отклонение балльных оценок синергии лекарственного средства с собственной дозой составило -0,4, поэтому комбинации с величиной S_Loewe > 1 могут считаться значимо синергическими. Синергические композиции со сдвигами доз при CI₅₀ = 0,3 могут легко возникнуть в результате небольших изменений полученных заявителями данных (поскольку дозовые матрицы имеют трехкратные разведения), поэтому они только считают, что CI₅₀ < 0,3 свидетельствует о полезной экономии дозы. Наконец, полезные комбинации должны оказывать существенное ингибирование в комбинации, поэтому требуется I_max > 0,8, и заявители считают, что особенно перспективно GI_max > 1,5.

Линии клеток поджелудочной железы.

В линии клеток поджелудочной железы, почти все из которых представляют собой мутанты KRAS, комбинация соединения A + соединения B была однотипно синергической и проявила полезный сдвиг дозы в четырех из семи случаев. Наилучшим примером синергии является HPAC, который проявляет выраженную синергию при пятикратном снижении дозы в комбинации {CI₅₀ = 0,2), и значимо за пределы цитостаза {GI_max>1,5) при самых высоких концентрациях (Фиг.1). К удивлению, в BxPC-3, одной линии KRAS дикого типа, тип синергии очень похож на тип синергии, наблюдаемый в HPAC. Самая слабая синергия была обнаружена для PANC-1, которая по всей дозовой матрице никогда не ингибировалась больше чем на 50% (Фиг.2).

Линии легочных клеток NSCLC.

В линиях клеток немелкоклеточного рака легких, все из которых являются мутантами KRAS, снова синергия была однородно сильной при сдвиге дозы ~5x {CI₅₀~0,2) в большинстве случаев, в которых имелись значительные уровни ингибирования (см. Фиг.1). Ввиду того, что многие из наилучших комбинационных эффектов проявили экспериментальные артефакты при реакциях NSCLC, данные высокого разрешения из отдельного исследования были также включены в анализ (см. Фиг.2), который во всех случаях подтвердил и усилил определение синергии.

Линии клеток меланомы.

Линии клеток меланомы проявили разнообразие типов взаимодействия в зависимости от их генетического фона (Фиг.3). Синергия была в целом обнаружено для клеток с активацией мутации NRAS и для мутантов BRAF. Однако эти фоны проявили слабые реакции на соединение A в качестве одного средства, и синергия была на гораздо более низких уровнях, чем наблюдавшиеся для мутантов KRAS в раковых опухолях поджелудочной железы и легких, и обычно ограничивались очень высокими концентрациями комбинированных лекарственных средств. Выраженная синергия наблюдалась в COLO 792 и MeWo, обеих дикого типа, в Ras, BRAF, и PTEN, но при отчетливых типах взаимодействия вследствие их очень различающихся чувствительностях к одиночным средствам. Синергия полностью отсутствовала для мутантов. Наконец, специфическая линия клеток LOX IMVI имела реакции на одно средство, очень отличающиеся от других мутантов BRAF, и, за исключением самых высоких комбинированных концентраций, взаимодействие выглядит в большей степени подобно комбинациям мутантной PTEN.

В целом, эти результаты показывают, что имеется разнообразие взаимодействий, которые зависят от генетического фона каждой линии клеток. Однако, в частности, мутанты KRAS в линиях NSCLC и поджелудочной железы имеют тенденцию проявлять достаточную синергию с полезным сдвигом доз и некоторую возникающую цитотоксичность в ответ на комбинацию соединения A + соединения B.

Claims

1. Фармацевтическая комбинация, содержащая:

(a) ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K), представляющий собой 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)-2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль, и

(b) ингибитор митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), представляющий собой (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3Н-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль,

и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель для одновременного, раздельного или последовательного введения для лечения колоректального рака, имеющего BRAF мутацию, KRAS мутацию, PIK3CA мутацию или их сочетание и не имеющего PTEN мутацию; рака поджелудочной железы, имеющего KRAS мутацию; немелкоклеточного рака легких, имеющего KRAS мутацию; или меланомы, не имеющей PTEN мутацию.

2. Фармацевтическая комбинация по п.1, помещенная в упаковку вместе с инструкциями для одновременного, раздельного или последовательного введения для применения для задержки прогрессирования или лечении рака.

3. Применение комбинации по п. 1 для получения лекарственного препарата для лечения колоректального рака, имеющего BRAF мутацию, KRAS мутацию, PIK3CA мутацию или их сочетание и не имеющего PTEN мутацию; рака поджелудочной железы, имеющего KRAS мутацию; немелкоклеточного рака легких, имеющего KRAS мутацию; или меланомы, не имеющей PTEN мутацию.

4. Способ лечения колоректального рака, имеющего BRAF мутацию, KRAS мутацию, PIK3CA мутацию или их сочетание и не имеющего PTEN мутацию; рака поджелудочной железы, имеющего KRAS мутацию; немелкоклеточного рака легких, имеющего KRAS мутацию; или меланомы, не имеющей PTEN мутацию, включающий одновременное, раздельное или последовательное введение терапевтически эффективного количества ингибитора PI3K, представляющего собой 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)-2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль, в комбинации с ингибитором МЕК, представляющим собой (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3Н-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль страдающему раком пациенту, нуждающемуся в таком лечении.

5. Фармацевтическая композиция, содержащая:

(a) ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K), представляющий собой 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилзтил)-пиридин-4-ил]-тиазол-2-ил}-амид)-2-амид (S)-пирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль,

(b) ингибитор MEK, представляющий собой (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3Н-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль, предназначенная для лечения колоректального рака, имеющего BRAF мутацию, KRAS мутацию, PIK3CA мутацию или их сочетание и не имеющего PTEN мутацию; рака поджелудочной железы, имеющего KRAS мутацию; немелкоклеточного рака легких, имеющего KRAS мутацию; или меланомы, не имеющей PTEN мутацию.

6. Фармацевтическая композиция по п. 5, отличающаяся тем, что ингибитор PI3K и ингибитор MEK представлены в синергически эффективных количествах для лечения рака.