RU2663720C1 - Probiotic based on bacterial strain bacillus subtilis mg-8 vkpm v-12476 and method of application probiotic for prevention of gastrointestinal diseases in agricultural animals and poultry - Google Patents
Probiotic based on bacterial strain bacillus subtilis mg-8 vkpm v-12476 and method of application probiotic for prevention of gastrointestinal diseases in agricultural animals and poultry Download PDFInfo
- Publication number
- RU2663720C1 RU2663720C1 RU2017127670A RU2017127670A RU2663720C1 RU 2663720 C1 RU2663720 C1 RU 2663720C1 RU 2017127670 A RU2017127670 A RU 2017127670A RU 2017127670 A RU2017127670 A RU 2017127670A RU 2663720 C1 RU2663720 C1 RU 2663720C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vkpm
- feed
- probiotic
- strain
- subtilis
- Prior art date
Links
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 84
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 47
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 44
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims abstract description 41
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 30
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title abstract description 38
- 244000144977 poultry Species 0.000 title abstract description 8
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 title abstract description 5
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims abstract description 20
- 206010028520 Mycotoxicosis Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 231100000006 Mycotoxicosis Toxicity 0.000 claims abstract description 12
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 claims description 31
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 30
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 26
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 25
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 24
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 24
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 17
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 13
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 10
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 abstract description 9
- 206010017964 Gastrointestinal infection Diseases 0.000 abstract description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 28
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 24
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 22
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 21
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 15
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 12
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 8
- 241000588749 Klebsiella oxytoca Species 0.000 description 8
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 8
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 8
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 7
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 7
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 6
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 241000122692 Fusarium avenaceum Species 0.000 description 5
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 5
- 241000232939 Fusarium redolens Species 0.000 description 5
- 241000427940 Fusarium solani Species 0.000 description 5
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 5
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 5
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 5
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 5
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 5
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 5
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 241000213004 Alternaria solani Species 0.000 description 4
- 241000266349 Alternaria tenuissima Species 0.000 description 4
- 241001123534 Colletotrichum coccodes Species 0.000 description 4
- 241001079987 Doratomyces sp. Species 0.000 description 4
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 4
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 4
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 4
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 4
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 4
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 4
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 4
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 4
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 4
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 4
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000297434 Stenotarsus subtilis Species 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 description 2
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 2
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000037358 bacterial metabolism Effects 0.000 description 2
- 241000385736 bacterium B Species 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 2
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 2
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 2
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000266327 Alternaria alternariae Species 0.000 description 1
- 235000005744 Bacillus subtilis subsp subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000948854 Bacillus subtilis subsp. subtilis Species 0.000 description 1
- 108700003860 Bacterial Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N Lincomycin Natural products CN1CC(CCC)CC1C(=O)NC(C(C)O)C1C(O)C(O)C(O)C(SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 241001467018 Typhis Species 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940023064 escherichia coli Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N lincomycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N 0.000 description 1
- 229960005287 lincomycin Drugs 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 229960001019 oxacillin Drugs 0.000 description 1
- UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N oxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=CC=CC=C1 UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009374 poultry farming Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001331 thermoregulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960000707 tobramycin Drugs 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к области удовлетворения жизненных потребностей человека, а именно - к микробиологии и биотехнологиям применительно к животноводству. Может быть использовано в биотехнологиях промышленного производства средств профилактики желудочно-кишечных инфекций и растройств у сельскохозяйственных животных и птиц.The present invention relates to the field of meeting the vital needs of a person, namely to microbiology and biotechnology in relation to animal husbandry. It can be used in biotechnologies of industrial production of means for the prevention of gastrointestinal infections and disorders in farm animals and birds.
Пробиотики и пребиотики - определение, общая характеристика.Probiotics and prebiotics - definition, general description.
Согласно ВОЗ, пробиотики - это непатогенные для человека и животных микроорганизмы, способные восстанавливать нормальную микрофлору органов, а также губительно воздействовать на патогенные и условно-патогенные бактерии. Иными словами, пробиотиками называют микробы, которые в норме составляют микрофлору различных органов человека и животных. Пребиотиками, согласно определению ВОЗ, называют вещества, которые не всасываются в тонкой кишке, но создают благоприятные условия и стимулируют рост нормальной микрофлоры толстого кишечника [http://www.tiensmed.ru/news/probiotik-prebiotik-ab1.html].According to the WHO, probiotics are microorganisms that are non-pathogenic for humans and animals, capable of restoring the normal microflora of organs, as well as destructively affecting pathogenic and conditionally pathogenic bacteria. In other words, microbes are called probiotics, which normally make up the microflora of various organs of humans and animals. Prebiotics, according to the WHO definition, are substances that are not absorbed in the small intestine, but create favorable conditions and stimulate the growth of normal microflora of the large intestine [http://www.tiensmed.ru/news/probiotik-prebiotik-ab1.html].
Препараты-пробиотики на основе спорообразующих бактерий применяют в ветеринарии в качестве кормовой добавки для сельскохозяйственных животных и птиц. Инфекционные заболевания людей и сельскохозяйственных животных лечат антибиотиками. Проблемы применения антибиотиков заключаются в возникновении устойчивости у энтеропатогенных микроорганизмов к данным антибиотикам, а также в возникновении дисбактериоза и расстройств желудочно-кишечного тракта (далее - ЖКТ). Также известно, что микромицеты родов Fusarium и Alternaria, являющиеся распространенными фитопатогенами сельскохозяйственных культур, способны синтезировать широкий спектр микотоксинов (выделяемых грибами ядовитых веществ). Растительные корма, зараженные спорами грибов родов Fusarium и Alternaria способны вызывать отравления и стать причиной микотоксикозов сельскохозяйтвенных животных. Во избежание ведущего к существенным убыткам у фермеров микотоксикозов и дисбактериоза, актуальным является совместное применение пробиотиков на основе бактерий-антагонистов фитопатогенных грибов и бактерий кишечной группы. Эти пробиотики используют и при лечении животных, птиц с применением антибиотиков - в качестве средства антибиотикотерапии.Probiotics based on spore-forming bacteria are used in veterinary medicine as a feed additive for farm animals and birds. Infectious diseases of humans and farm animals are treated with antibiotics. The problems with the use of antibiotics are the emergence of resistance in enteropathogenic microorganisms to these antibiotics, as well as the occurrence of dysbiosis and disorders of the gastrointestinal tract (hereinafter - the gastrointestinal tract). It is also known that micromycetes of the genera Fusarium and Alternaria, which are common phytopathogens of agricultural crops, are able to synthesize a wide range of mycotoxins (toxic substances secreted by fungi). Vegetable feed contaminated with spores of fungi of the genera Fusarium and Alternaria can cause poisoning and cause mycotoxicosis of agricultural animals. In order to avoid the mycotoxicosis and dysbiosis leading to significant losses for farmers, the joint use of probiotics based on bacteria-antagonists of phytopathogenic fungi and bacteria of the intestinal group is relevant. These probiotics are also used in the treatment of animals, birds with the use of antibiotics - as a means of antibiotic therapy.
Из исследованного уровня техники известно изобретение по патенту РФ №2509149 штамм Bacillus subtilis subsp. subtilis BKM в-2711D, обладающий выраженным антагонизмом по отношению к Escherichia coli, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes и резистентностью к стрептомицину и тетрациклину, сущностью является «Штамм Bacillus subtilis BKM В-2711D обладающий выраженным антагонизмом по отношению к Escherichia coli, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes и резистентностью к стрептомицину и тетрациклину». Штамм может быть использован в микробиологической промышленности для получения пробиотического препарата, применяемого в ветеринарии при лечении и профилактике желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц.From the studied prior art, the invention is known according to the patent of the Russian Federation No. 2509149 strain of Bacillus subtilis subsp. subtilis BKM b-2711D, which has a pronounced antagonism against Escherichia coli, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes and resistance to streptomycin and tetracycline, the essence is the strain of Bacillus subtilis BKM B-2711D Escherichia coli expressed typhi, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes and resistance to streptomycin and tetracycline. " The strain can be used in the microbiological industry to obtain a probiotic preparation used in veterinary medicine in the treatment and prevention of gastrointestinal diseases of farm animals and birds.
Недостатком известного технического решения по патенту РФ №2509149 является отсутствие бактерицидной (антибактериальной) активности в отношении распространенных условно-патогенных штаммов бактерий, например - Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Proteus mirabilis, т.к. известное техническое решение не предназначено для подавления активности указанных микроорганизмов, что ограничивает область применения известного технического решения.A disadvantage of the known technical solution according to RF patent No. 2509149 is the lack of bactericidal (antibacterial) activity against common opportunistic bacterial strains, for example, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Proteus mirabilis, because The known technical solution is not intended to suppress the activity of these microorganisms, which limits the scope of the known technical solution.
Из исследованного уровня техники известно изобретение по патенту РФ №2130316 «Лечебно-профилактический биопрепарат "Бактиспорин», сущностью является биопрепарат, включающий биомассу штамма Bacillus subtilis 3Н (ГИСК №248), отличающийся тем, что он дополнительно содержит наполнитель при следующем соотношении компонентов, масс. %:From the studied prior art, the invention is known according to the patent of the Russian Federation No. 2130316 "Bactisporin" therapeutic and prophylactic biological product, the essence is a biological product comprising the biomass of the strain Bacillus subtilis 3H (GISK No. 248), characterized in that it additionally contains a filler in the following ratio of components, masses .%:
1) Биомасса штамма Bacillus subtilis 3Н (ГИСК N 248) - живых микробных клеток (1…5)⋅109 в 1 мл растворителя - 92…95;1) The biomass of the strain Bacillus subtilis 3H (GISK N 248) - live microbial cells (1 ... 5) ⋅ 10 9 in 1 ml of solvent - 92 ... 95;
2) наполнитель - 5…8.2) filler - 5 ... 8.
Штамм Bacillus subtilis 3Н характеризуется антагонистической активностью в отношении широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, а именно - Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Escherichia coli, Candida albicans, устойчивостью к ряду антибиотиков, а именно - полимиксину, рифампицину, пенициллину, линкомицину, стрептомицину. В препарате наполнитель содержит 5% лактозы или 8% сахарозожелатиновой смеси.The strain Bacillus subtilis 3H is characterized by antagonistic activity against a wide range of pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms, namely, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Escherichia coli, Candida albicans, resistance to a number of antibiotics, namely polymyxin, rifenicin, rifeniampin, rifeniampin lincomycin, streptomycin. In the preparation, the filler contains 5% lactose or 8% sugar-gelatin mixture.
В качестве основы биопрепарата бактиспорин используют штамм Bacillus subtilis 3Н по патенту РФ №2067616 «Штамм бактерий Bacillus subtilis, несущий свойство антибиотикорезистентности, используемый для получения препарата Бактиспорин» депонированный в коллекции ФГБУ "Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени Л.А. Тарасевича" Минздрава РФ под №248.Bactisporin strain Bacillus subtilis 3H is used as the basis of the biopreparation according to RF patent No. 2067616 “Bacillus subtilis bacterial strain carrying the antibiotic resistance property used to obtain the bactisporin preparation” deposited in the collection of the State Research Institute for Standardization and Control of Medical Biological Products named after L. A. Tarasevich "Ministry of Health of the Russian Federation under No. 248.
Недостатком известного технического решения по патенту РФ №2067616 является отсутствие у штамма бактерицидной (антибактериальной) активности в отношении широко распространенных и вредоносных условно-патогенных штаммов Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, т.к. известное техническое решение не предназначено для подавления активности указанных микроорганизмов, что ограничивает область применения известного технического решения по патенту РФ №2067616.A disadvantage of the known technical solution according to RF patent No. 2067616 is the lack of bactericidal (antibacterial) activity of the strain against widespread and harmful opportunistic strains of Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, because The known technical solution is not intended to suppress the activity of these microorganisms, which limits the scope of the known technical solution according to the patent of the Russian Federation No. 2067616.
Наиболее близким по наибольшему количеству совпадающих признаков с заявленным техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является изобретение по патенту РФ №2169767 «Штамм бактерий Bacillus subtilis, обладающий широким спектром антагонистической активности и устойчивостью к антибиотикам», задепонированный в ФБГУ ВГНКИ (Всероссийский государственный научно исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов).The closest in the greatest number of coinciding features to the claimed technical solution, selected as a prototype, is the invention according to RF patent No. 2169767 "Bacillus subtilis bacterial strain having a wide spectrum of antagonistic activity and antibiotic resistance", deposited at the All-Russian State Scientific Research University Institute of Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines).
Прототип изготовлен на основе штамма бактерий Bacillus subtilis 12В-ДЕП (далее по тексту S. subtilis 12В-ДЕП), обладает антагонистической активностью по отношению к 21 видам болезнетворных бактерий, а именно - Shigella sonne 2586, Shigella HK 65, Proteus mirabilis 40, Proteus mirabilis 36, Proteus mirabilis 35, Proteus vulgaris 12, Proteus vulgaris 48, Proteus vulgaris 41, Pseudomonas aeruginosa 126, Pseudomonas aeruginosa 8, Escherihia coli 154, Escherihia coli 140, Streptococcus 321, Streptococcus 325, Streptococcus 191, Staphylococcus aureus 66, Staphylococcus aureus 67, Staphylococcus aureus 80, Paratyhv 269, Paratyhv 15, Hexaere II 1230 и антибиотикоустойчивостью к 6 видам антибиотиков, а именно - полимиксин, оксациллин, ампицилин, тобрамицин, бензилпенициллин, стрептомицин.The prototype is based on the bacterial strain Bacillus subtilis 12B-DEPT (hereinafter referred to as S. subtilis 12B-DEPT), has antagonistic activity against 21 types of pathogenic bacteria, namely, Shigella sonne 2586, Shigella HK 65, Proteus mirabilis 40, Proteus mirabilis 36, Proteus mirabilis 35, Proteus vulgaris 12, Proteus vulgaris 48, Proteus vulgaris 41, Pseudomonas aeruginosa 126, Pseudomonas aeruginosa 8, Escherihia coli 154, Escherihia coli 140, Streptococcus 321, Streptococcus 325, Stptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325, Streptococcus 325 67, Staphylococcus aureus 80, Paratyhv 269, Paratyhv 15, Hexaere II 1230 and antibiotic resistance to 6 types of antibiotics, namely polymyxin, oxacillin, ampicillin, tobramycin, benz lpenitsillin, streptomycin.
Недостатком прототипа по патенту РФ №2169767 является весьма ограниченная устойчивость к современным антибиотикам, полное отсутствие антагонистической активности штамма В. subtilis 12 В-ДЕП к микромицетам (грибам и грибообразным организмам микроскопических размеров) - возбудителям микотоксикозов сельскохозяйственных животных и птиц. Таким образом, прототип не способен защитить животных и птиц, в том числе - применяемых в сельскохозяйственной деятельности, от вызываемых микромицетами микотоксикозов (отравлений), т.к. штамм В. subtilis 12 В-ДЕП не продуцирует вещества с антигрибковой активностью, то есть имеет ограниченную область применения. Кроме того в описании прототипа отсутствуют способы применения пробиотика на основе штамма B. subtilis 12 В-ДЕП. В описании прототипа присутствует лишь упоминание о том, что штамм «…создает возможность конструирования на его основе препаратов-пробиотиков для сочетанного использования с антибиотиками», причем отсутствуют какие-либо из технических и технологических показателей, необходимых для конструирования и применения этих возможных препаратов-пробиотиков.The disadvantage of the prototype according to the patent of the Russian Federation No. 2169767 is its very limited resistance to modern antibiotics, the complete absence of antagonistic activity of the strain B. subtilis 12 B-DEPT for micromycetes (fungi and mushroom-like organisms of microscopic sizes) - pathogens of mycotoxicoses of farm animals and birds. Thus, the prototype is not able to protect animals and birds, including those used in agricultural activities, from mycotoxicoses caused by micromycetes (poisoning), because B. subtilis strain 12 B-DEPT does not produce substances with antifungal activity, that is, it has a limited scope. In addition, in the description of the prototype there are no methods of using a probiotic based on the B. subtilis 12 B-DEPT strain. In the description of the prototype there is only a mention that the strain "... creates the possibility of constructing probiotic preparations for its combined use with antibiotics", and there are no technical and technological indicators necessary for the construction and use of these possible probiotic preparations .
Недостаток существенно ограничивает применение прототипа по патенту РФ №2169767 в животноводстве.The disadvantage significantly limits the use of the prototype according to the patent of the Russian Federation No. 2169767 in animal husbandry.
Целью предполагаемого изобретения является пробиотик на основе штамма бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476, устойчивый к антибиотикам, обладающий широким спектром антагонистического воздействия в отношении патогенных и условно-патогенных бактерий, микромицетов и способ применения этого пробиотика для профилактики кишечных инфекций, микотоксикозов и кишечных расстройств у сельскохозяйственных животных и птиц.The aim of the proposed invention is a probiotic based on a bacterial strain of the genus Bacillus species Bacillus subtilis MG-8 VKPM B-12476, resistant to antibiotics, with a wide spectrum of antagonistic effects against pathogenic and conditionally pathogenic bacteria, micromycetes and a method for using this probiotic for the prevention of intestinal infections , mycotoxicosis and intestinal disorders in farm animals and birds.
Заявленные цели достигают тем, что применяют пробиотик на основе бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis штамма MG-8 ВКПМ В-12476, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-12476, устойчивого к антибиотикам и обладающего широким спектром антагонистического воздействия в отношении патогенных и условно-патогенных бактерий, микромицетов. Способ применения пробиотика на основе бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis штамма MG-8 ВКПМ В-12476 для профилактики кишечных инфекций, микотоксикозов и кишечных расстройств у сельскохозяйственных животных заключается в получении биомассы, содержащей бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis штамма MG-8 ВКПМ В-12476 и продукты метаболизма бактерий, смешивании биомассы с полнорационным комбикормом в соотношении (1,0±0,3) литра культуральной жидкости на 100 килограммов комбикорма, скармливании этого комбикорма в количестве (0,1…1,0) % от живой массы животного в течение 1…10 суток с последующим перерывом в 15…25 суток и ежемесячным повторением этого курса профилактики в течение всего периода содержания животных. Способ применения пробиотика на основе бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis штамма MG-8 ВКПМ В-12476 для профилактики кишечных инфекций, микотоксикозов и кишечных расстройств у сельскохозяйственных птиц заключается в получении биомассы, содержащей бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis штамма MG-8 ВКПМ В-12476 и продукты метаболизма бактерий, смешивании биомассы с полнорационным комбикормом в соотношении (1,0±0,5) литра культуральной жидкости на 100 килограммов комбикорма, скармливании этого комбикорма в количестве (1,0…2,0) % от живой массы птицы в течение всего периода содержания птицы.The stated goals are achieved by using a probiotic based on a bacterium of the genus Bacillus species Bacillus subtilis strain MG-8 VKPM B-12476, deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms under the number VKPM B-12476, which is resistant to antibiotics and has a wide spectrum of antagonistic effect against pathogenic and opportunistic bacteria, micromycetes. A method of using a probiotic based on a bacterium of the Bacillus genus of the species Bacillus subtilis strain MG-8 VKPM B-12476 for the prevention of intestinal infections, mycotoxicosis and intestinal disorders in farm animals consists in obtaining biomass containing bacteria of the genus Bacillus species of Bacillus subtilis strain MG-8 VKPM B- 12476 and products of bacterial metabolism, mixing biomass with full feed in the ratio of (1.0 ± 0.3) liters of culture fluid per 100 kilograms of feed, feeding this feed in the amount of (0.1 ... 1.0)% of the animal’s live weight t
Таким образом, сущностью заявленного технического решения является пробиотик на основе бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis штамма MG-8 ВКПМ В-12476, обладающий широким спектром антагонистической активности по отношению к микромицетам, например - Alternaha alternate ТП 712, Alternaria solani 12РKЛ15, Alternaria tenuissima, Colletotrichum coccodes 14raKK6, Doratomyces sp. 14 raKKLD, Fusarium spp., Fusarium avenaceum, Fusarium oxysporum, Fusarium redolens, Fusarium solani и по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, например - Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis. Кроме того, пробиотик по сравнению с прототипом обладает более высокой устойчивостью к антибиотикам: карбеницилин, рифампицин, неомицин, канамицин, левомицетин. Кроме того, заявленное техническое решение от прототипа отличается антагонистической активностью по отношению к микромицетам (у прототипа полностью отсутствует антагонистическая активность по отношению к микромицетам), что существенно увеличивает его конкурентоспособность на рынке как России, так и зарубежных стран.Thus, the essence of the claimed technical solution is a probiotic based on a bacterium of the genus Bacillus of the species Bacillus subtilis strain MG-8 VKPM B-12476, which has a wide spectrum of antagonistic activity against micromycetes, for example, Alternaha alternate TP 712, Alternaria solani 12PKL15, Alternaria tenuissima, Colletotrichum coccodes 14raKK6, Doratomyces sp. 14 raKKLD, Fusarium spp., Fusarium avenaceum, Fusarium oxysporum, Fusarium redolens, Fusarium solani, and in relation to pathogenic and opportunistic microorganisms, for example, Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonasomasulugius aerugius aerugius aerugius In addition, the probiotic in comparison with the prototype has a higher resistance to antibiotics: carbenicillin, rifampicin, neomycin, kanamycin, chloramphenicol. In addition, the claimed technical solution from the prototype differs in antagonistic activity against micromycetes (the prototype completely lacks antagonistic activity in relation to micromycetes), which significantly increases its competitiveness in the market of both Russia and foreign countries.
Заявленное техническое решение иллюстрируется Таблицами 1, 2, 3, представленными на Фиг. 1, 2, 3 соответственно:The claimed technical solution is illustrated by Tables 1, 2, 3, presented in FIG. 1, 2, 3, respectively:
На Фиг. 1 приведена антагонистическая активность штамма B.subtilis MG-8 В-12476 в отношении микромицетов Alternaria alternate ТП 712, Alternaria solani 12РKЛ15, Alternaria tenuissima, Colletotrichum coccodes 14raKK6, Doratomyces sp. 14 raKKLD, Fusarium spp., Fusarium avenaceum, Fusarium oxysporum, Fusarium redolens, Fusarium solani - возбудителей микотоксикозов.In FIG. 1 shows the antagonistic activity of the strain B.subtilis MG-8 B-12476 against micromycetes Alternaria alternate TP 712, Alternaria solani 12PKL15, Alternaria tenuissima, Colletotrichum coccodes 14raKK6, Doratomyces sp. 14 raKKLD, Fusarium spp., Fusarium avenaceum, Fusarium oxysporum, Fusarium redolens, Fusarium solani - pathogens of mycotoxicosis.
На Фиг. 2 приведена бактерицидная (антибактериальная) активность штамма B.subtilis MG-8 В-12476 в отношении патогенных и условно-патогенных Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis.In FIG. 2 shows the bactericidal (antibacterial) activity of the strain B.subtilis MG-8 B-12476 against pathogenic and opportunistic Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis.
На Фиг. 3 приведена антибиотикочувствительность штамма B.subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 в отношении следующих антибиотиков: ампицилин, карбеницилин, полимиксин, стрептомицин, рифампицин, гентамицин, левомицетин, тетрациклин, неомицин, канамицин, эритромицин.In FIG. 3 shows the antibiotic sensitivity of the strain B.subtilis MG-8 VKPM B-12476 in relation to the following antibiotics: ampicillin, carbenicillin, polymyxin, streptomycin, rifampicin, gentamicin, levomycetin, tetracycline, neomycin, kanamycin, erythromycin.
На Фиг. 4 приведена справка о депонировании штамма B.subtilis MG-8 ВКПМ В-12476.In FIG. 4 provides information on the deposition of the strain B.subtilis MG-8 VKPM B-12476.
Для получения пробиотика на первом этапе получают биомассу штамма бактерий 6. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 путем посева штамма в бульоне LB, далее выращивают эту биомассу в течение (72±24) час при температуре плюс 30±6°C с постоянным перемешиванием (200±20) об/мин) на инкубаторе-качалке (для аэрации). Продолжительность культивирования зависит от температуры и интенсивности перемешивания, при этом отклонение от оптимального значения температуры (+30°С) и интенсивности аэрации путем перемешивания (200 об/мин) увеличивает продолжительность времени культивирования. Далее культуральную жидкость, содержащую биомассу вегетативных клеток и спор S. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476, продукты метаболизма бактерии, остатки питательной среды смешивают с полнорационным комбикормом из расчета (1,0±0,3) литра культуральной жидкости на 100 килограммов комбикорма.To obtain a probiotic in the first stage, the biomass of the
Техническим результатом заявленного технического решения является пробиотик на основе бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis штамма MG-8 ВКПМ В-12476, устойчивый к антибиотикам и обладающий широким спектром действия в отношении патогенных и условно-патогенных бактерий, например: Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis, микромицетов, например: Fusarium spp., Fusarium avenaceum, Fusarium oxysporum, Fusarium redolens, Fusarium solani, Alternaria alternate ТП 712, Alternaria solani 12РKЛ15, Alternaria tenuissima, Colletotrichum coccodes 14raKK6, Doratomyces sp. 14 raKKLD и способ применения этого пробиотика для профилактики кишечных инфекций, микотоксикозов и кишечных расстройств, возникающих у сельскохозяйственных животных и птиц вследствие действия микотоксинов из-за наличия в корме микромицетов.The technical result of the claimed technical solution is a probiotic based on a bacterium of the genus Bacillus species Bacillus subtilis strain MG-8 VKPM B-12476, resistant to antibiotics and having a wide spectrum of action against pathogenic and conditionally pathogenic bacteria, for example: Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis, micromycetes, for example: Fusarium spp., Fusarium avenaceum, Fusarium oxysporum, Fusarium redolens, Fusarium solani, Alternaria alternate TP 712, Alternaria solani 12PKL15, Alternaria tenuissima cocodratomy, Colletratomy. 14 raKKLD and the use of this probiotic for the prevention of intestinal infections, mycotoxicoses and intestinal disorders that occur in farm animals and birds due to the action of mycotoxins due to the presence of micromycetes in the feed.
Технический результат достигают применением пробиотика на основе штамма бактерий Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476, обладающего высокой антибиотикоустойчивостью, а также бактерицидной (антибактериальной), антагонистической активностью против микромицетов, патогенных и условно-патогенных (клинических) микроорганизмов, выделенных из животных с нарушениями деятельности желудочно-кишечного тракта.The technical result is achieved by using a probiotic based on the bacterial strain Bacillus subtilis MG-8 VKPM B-12476, which has high antibiotic resistance, as well as bactericidal (antibacterial), antagonistic activity against micromycetes, pathogenic and conditionally pathogenic (clinical) microorganisms isolated from animals with disorders activity of the gastrointestinal tract.
Штамм бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 выделен из почв Республики Татарстан (Россия) и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФБГУ «ГосНИИгенетика» Минобрнауки России под номером ВКПМ В-12476 [Справка №12476 о национальном патентном депонировании].The strain of the bacterium of the genus Bacillus species Bacillus subtilis MG-8 VKPM B-12476 was isolated from the soils of the Republic of Tatarstan (Russia) and deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms (VKPM) of the Federal State Institution GosNIIgenetika of the Ministry of Education and Science of the Russian Federation under the number VKPM B-12476 [Information No. 12476 on national patent deposit].
Идентификация штамма осуществлена на основании гомологии гена 16 S рРНК и гена субъединицы В (бета)- гиразы, одного из самых консервативных генов бактерий.The strain was identified based on the homology of the 16 S rRNA gene and the B (beta) subunit gene - gyrase, one of the most conserved bacterial genes.
Штамм бактерии Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476, используемый в качестве основы пробиотика, обладает нижеследующими основными свойствами:The bacterial strain Bacillus subtilis MG-8 VKPM B-12476, used as the basis of the probiotic, has the following basic properties:
Морфологические признаки: клетки палочковидные, в основном одиночные, реже соединены в короткие цепочки, грамположительные, образуют овальные споры, не превышающие диаметра клеток. Свободные споры появляются на 24…36 час роста (не более 5…7%), далее их (спор) количество нарастает и достигает максимального значения (до 70%) на 60-й час культивирования. Величина клеток односуточной культуры на бульоне Лурия-Бертони (далее по тексту - LB), следующего состава: (г/л): триптон - 10,0; дрожжевой экстракт - 5,0; NaCl - 5,0; размер клеток (1,1…2,2)×(0,5…0,6) мкм.Morphological signs: rod-shaped cells, mostly single, less often connected in short chains, gram-positive, form oval spores that do not exceed the diameter of the cells. Free spores appear at 24 ... 36 hours of growth (no more than 5 ... 7%), then their number (spore) increases and reaches its maximum value (up to 70%) at the 60th hour of cultivation. The size of the cells of a one-day culture on Luria-Burtoni broth (hereinafter - LB), the following composition: (g / l): tryptone - 10.0; yeast extract - 5.0; NaCl - 5.0; cell size (1.1 ... 2.2) × (0.5 ... 0.6) microns.
Культуральные признаки: при росте на агаризованной среде Лурия-Бертони (далее по тексту - LA), следующего состава: (г/л): триптон - 10,0; дрожжевой экстракт - 5,0; NaCl - 5,0; агар (2%) - 200; (через 24 часа роста при плюс 30°С) колонии имеют круглую форму, белую окраску, гладкую блестящую поверхность и слегка волнистые края; пигмент не образуют. Консистенция вязкая слизистая. На агаризованной среде LA (через 24 ч, +30°С) образует белые гладкие, блестящие колонии с неправильными круглыми краями, слизистой консистенции. Колонии дают обильный рост. При росте на LB-бульоне (24 ч, +30°С) в процессе роста среда мутнеет, появляется осадок. На поверхности образуется серовато-белая пленка.Cultural traits: when growing on an agar medium Luria-Bertoni (hereinafter - LA), the following composition: (g / l): tryptone - 10.0; yeast extract - 5.0; NaCl - 5.0; agar (2%) - 200; (after 24 hours of growth at plus 30 ° C) the colonies are round in shape, white in color, smooth shiny surface and slightly wavy edges; pigment does not form. The consistency is viscous mucosa. On an agar medium, LA (after 24 hours, + 30 ° C) forms white smooth, shiny colonies with irregular round edges, mucous consistency. Colonies give abundant growth. When growing on LB broth (24 h, + 30 ° С) during growth, the medium becomes turbid, and a precipitate appears. A grayish-white film forms on the surface.
1. Экспериментально установлено, что штамм S. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 обладает антагонистической активностью против микромицетов, продуцирующих микотоксины. Антагонистическая активность штамма 6. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 была исследована в отношении следующих микромицетов: Alternaria alternate ТП 712, Alternaria solani 12РKЛ15, Alternaria tenuissima, Colletotrichum coccodes 14raKK6, Doratomyces sp. 14 raKKLD, Fusarium spp., Fusarium avenaceum, Fusarium oxysporum, Fusarium redolens, Fusarium solani.1. It was experimentally established that the strain S. subtilis MG-8 VKPM B-12476 has antagonistic activity against micromycetes producing mycotoxins. The antagonistic activity of
Исследование осуществляют известным методом блоков [Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках [Текст] / Егоров, Н.С. // М: Наука, 2004. - 528 с. - ISBN: 5-211-04669-2]. Для этого на поверхность среды Чапека следующего состава: (г/л) глюкоза - 14,0; СаСО3 - 0,70; KNO3 - 0,70; MgSO4 - 0,35; NaCl - 0,35; K2HPO4 - 0,35; FeSO4 - следы; агар - 20,00 шпателем засевают микромицеты. Чашки помещают в термостат при температуре плюс 30°C на 120…168 час (5…7 суток). Продолжительность культивирования штамма на чашке Петри зависит от температуры в диапазоне плюс (20…40)±2°C, причем чем ниже температура, тем продолжительнее культивирование. Оптимальная для культивирования температура плюс 30°С.The study is carried out by a known method of blocks [Egorov, N.S. Fundamentals of the doctrine of antibiotics [Text] / Egorov, N.S. // M: Nauka, 2004 .-- 528 p. - ISBN: 5-211-04669-2]. To do this, on the surface of the Chapek medium of the following composition: (g / l) glucose - 14.0; CaCO 3 - 0.70; KNO 3 0.70; MgSO 4 0.35; NaCl - 0.35; K 2 HPO 4 0.35; FeSO 4 - traces; agar - 20.00 micromycetes are inoculated with a spatula. Cups are placed in a thermostat at a temperature of plus 30 ° C for 120 ... 168 hours (5 ... 7 days). The duration of strain cultivation on a Petri dish depends on temperature in the range of plus (20 ... 40) ± 2 ° C, and the lower the temperature, the longer the cultivation. The optimum temperature for cultivation is plus 30 ° C.
Кроме того, для выявления свойств штамм В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 засевают газоном на поверхность среды LA. Посевы инкубируют в течение 24 час при температуре +30°С. Стерильным пробочным сверлом вырезают блоки микромицетов и помещают их в центр чашки Петри на среду Чапека. На расстоянии 20…25 мм от блока с микромицетом размещают 2 (два) блока с бактериями-антагонистами. В качестве контроля инкубируют чашки с микромицетами при отсутствии штамма В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476. Культуры инкубируют при +30°C в течение 120…240 час (5…10 суток). Полученные результаты исследования Ингибирующей Способности (ИС) представлены в Таблице 1 (Фиг. 1). ИС штамма определяют величиной усредненного, например - по результатам 6-ти разнонаправленных измерений, диаметра зоны задержки роста в миллиметрах (мм) на поверхности питательной среды в чашке Петри.In addition, to identify the properties of the strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 seeded with a lawn on the surface of the medium LA. Crops are incubated for 24 hours at a temperature of + 30 ° C. Blocks of micromycetes are cut with a sterile cork drill and placed in the center of the Petri dish on Chapek's medium. At a distance of 20 ... 25 mm from the micromycete block, 2 (two) blocks with antagonist bacteria are placed. As a control, plates with micromycetes are incubated in the absence of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 strain. The cultures are incubated at + 30 ° C for 120 ... 240 hours (5 ... 10 days). The results of the study of Inhibitory Ability (IP) are presented in Table 1 (Fig. 1). The strain IP is determined by the average value, for example, according to the results of 6 differently directed measurements, of the diameter of the growth inhibition zone in millimeters (mm) on the surface of the nutrient medium in a Petri dish.
Как видно из Фиг. 1 (Таблицы 1), существенным свойством заявленного штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 является высокая антагонистическая активность в отношении микромицетов - возбудителей микотоксикозов сельскохозяйственных животных и птиц, причем - при полном отсутствии антагонистической активности в отношении микромицетов у прототипа - штамма бактерий В. subtilis 12 В-ДЕП. Так, заявленный штамм бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 проявляет высокую антагонистическую активность, например - в отношении возбудителей микотоксикозов - микромицетов Fusarium spp., Fusarium avenaceum, Fusarium oxysporum, Fusarium redolens, Fusarium solani, Alternaria alternate ТП 712, Alternaria solani 12РKЛ15, Alternaha tenuissima, Colletotrichum coccodes 14raKK6, Doratomyces sp. 14 raKKLD, тогда как у прототипа такая антагонистическая активность полностью отсутствует.As can be seen from FIG. 1 (Table 1), an essential property of the claimed strain of bacteria B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 is a high antagonistic activity against micromycetes - pathogens of mycotoxicoses of farm animals and birds, and in the complete absence of antagonistic activity against micromycetes in the prototype strain bacteria B. subtilis 12 B-DEPT. So, the claimed bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 exhibits high antagonistic activity, for example, against pathogens of mycotoxicoses - micromycetes Fusarium spp., Fusarium avenaceum, Fusarium oxysporum, Fusarium redolens, Fusarium solani,
Антагонистическая активность заявленного штамма не ограничивается приведенными примерами микромицетов, ибо авторы и заявитель ограничились перечнем наиболее распространенных вредоносных микромицетов региона Среднего Поволжья России. Принимая во внимание общеизвестность отсутствия существенных отличий микромицетов региона Среднего Поволжья России от аналогичных микромицетов любых других регионов представляется возможным использование заявляемого технического решения в любых регионах с природными условиями, подобными условиям Среднего Поволжья России.The antagonistic activity of the claimed strain is not limited to the given examples of micromycetes, because the authors and the applicant limited themselves to the list of the most common harmful micromycetes of the Middle Volga region of Russia. Taking into account the well-known absence of significant differences between micromycetes of the Middle Volga region of Russia from similar micromycetes of any other regions, it seems possible to use the claimed technical solution in any regions with natural conditions similar to the conditions of the Middle Volga Russia.
2. Культура штамма B. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 характеризуется антагонистической активностью в отношении широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.2. The culture of B. subtilis strain MG-8 VKPM B-12476 is characterized by antagonistic activity against a wide range of pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms.
Для исследования бактерицидной (антибактериальной) активности используют известный диско-диффузионный метод [Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках [Текст] / Егоров, Н.С. // М: Наука, 2004. - 528 с. - ISBN: 5-211-04669-2]. В качестве патогенных и условно-патогенных микроорганизмов тест-культур используют распространенные в природе микроорганизмы кишечной группы: Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis. На поверхность LA среды на чашке Петри наносят 0,1 мл бактериальной суспензии тестируемого патогенного и условно-патогенного микроорганизма в концентрации 1×107 колониеобразующих единиц на миллилитр (далее по тексту КОЕ/мл) среды и засевают шпателем Дригальского. Бактерии Bacillus (далее по тексту - В.) subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 культивируют на среде LB в течение 72 час при +30°С на качалке с постоянным перемешиванием при 200 оборотов в минуту (далее по тексту об/мин). Супернатант получают центрифугированием культуральной жидкости В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 при 13000 об/мин в течение 5 мин при +4°С. Стерильные бумажные диски диаметром 6 мм пропитывают супернатантом В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476. Пропитанные диски помещают на поверхность LA среды, засеянной тестируемыми патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis. Диффузия супернатанта В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 в агар приводит к формированию зоны подавления роста исследуемых патогенных и условно-патогенных микроорганизмов: Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis вокруг дисков. Антагонистическую активность В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 оценивают по величине зоны задержки роста исследуемых патогенных и условно-патогенных микроорганизмов вокруг диска, пропитанной супернатантом B. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476.To study the bactericidal (antibacterial) activity using the well-known disco-diffusion method [Egorov, N.S. Fundamentals of the doctrine of antibiotics [Text] / Egorov, N.S. // M: Nauka, 2004 .-- 528 p. - ISBN: 5-211-04669-2]. Common pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms of the test cultures are microorganisms of the intestinal group, common in nature: Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis. On the surface of the LA medium on a Petri dish, 0.1 ml of a bacterial suspension of the test pathogenic and conditionally pathogenic microorganism is applied at a concentration of 1 × 10 7 colony forming units per milliliter (hereinafter referred to as CFU / ml) of the medium and inoculated with a Drigalski trowel. Bacillus bacteria (hereinafter referred to as B.) subtilis MG-8 VKPM B-12476 was cultured on LB medium for 72 hours at + 30 ° C on a rocking chair with constant stirring at 200 rpm (hereinafter referred to as rpm). The supernatant is obtained by centrifugation of the culture fluid of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 at 13000 rpm for 5 min at + 4 ° C. Sterile paper discs with a diameter of 6 mm are impregnated with B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 supernatant. The impregnated discs are placed on the surface of an LA medium seeded with test pathogenic and opportunistic microorganisms: Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis. Diffusion of the supernatant of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 into agar leads to the formation of a zone of growth inhibition of the studied pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms: Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis The antagonistic activity of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 is estimated by the size of the growth inhibition zone of the studied pathogenic and opportunistic microorganisms around the disk, impregnated with the supernatant of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476.
Ингибирующую Способность (ИС) штамма определяют величиной усредненного, например - по результатам 6-ти разнонаправленных измерений, диаметра зоны задержки роста в миллиметрах (мм) на поверхности питательной среды в чашке Петри. Оценку ИС заявленного штамма Bacillus subtilis MG-8 В-12476 выполняют по формуле (1)The inhibitory ability (IS) of a strain is determined by the average value, for example, according to the results of 6 multidirectional measurements, the diameter of the growth inhibition zone in millimeters (mm) on the surface of the nutrient medium in a Petri dish. Evaluation of the IP of the claimed strain of Bacillus subtilis MG-8 B-12476 is performed according to the formula (1)
Полученные результаты исследования представлены в Таблице №2 (Фиг. 2). Анализ указанной Таблицы 2 позволяет сделать вывод о том, что штамм В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 проявляет высокую антагонистическую активность в отношении бактерий Escherichia coli (зона задержки роста = 14…16 мм), Pseudomonas aeruginosa (16…18 мм), в сравнении с антагонистической активностью штамма-прототипа В. subtilis 12 В-ДЕП, активного в отношении Escherichia coli 154 (зона задержки роста = 10…12 мм), Pseudomonas aeruginosa 8 (12…15 мм).The results of the study are presented in Table No. 2 (Fig. 2). Analysis of the indicated Table 2 allows us to conclude that the B. subtilis strain MG-8 VKPM B-12476 exhibits high antagonistic activity against Escherichia coli bacteria (growth inhibition zone = 14 ... 16 mm), Pseudomonas aeruginosa (16 ... 18 mm) , in comparison with the antagonistic activity of the prototype strain B. subtilis 12 B-DEPT, active against Escherichia coli 154 (growth inhibition zone = 10 ... 12 mm), Pseudomonas aeruginosa 8 (12 ... 15 mm).
Таким образом, заявляемый штамм В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 проявляет полностью отсутствующую у прототипа антагонистическую активность по отношению к бактериям Salmonella typhimurium (14…16 мм), Klebsiella oxytoca (12…14 мм) и более высокую, по сравнению с прототипом, антагонистическую активность в отношении бактерий Escherichia coli 154 (10…12 мм), Pseudomonas aeruginosa 8 (12…15 мм).Thus, the claimed strain of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 is completely antagonistic to the prototype against bacteria Salmonella typhimurium (14 ... 16 mm), Klebsiella oxytoca (12 ... 14 mm) and higher compared to prototype, antagonistic activity against bacteria Escherichia coli 154 (10 ... 12 mm), Pseudomonas aeruginosa 8 (12 ... 15 mm).
Антагонистическая активность заявленного штамма не ограничивается приведенными примерами условно-патогенных бактерий, ибо авторы и заявитель в примерах ограничились перечнем наиболее распространенных возбудителей кишечных расстройств животных и птиц в Российской Федерации.The antagonistic activity of the claimed strain is not limited to the given examples of opportunistic bacteria, because the authors and the applicant in the examples limited themselves to the list of the most common pathogens of intestinal disorders of animals and birds in the Russian Federation.
3. Определение устойчивости штамма В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 к антибиотикам изучают известным диско-диффузионным методом [Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках [Текст] / Егоров, Н.С. // М: Наука, 2004. - 528 с. - ISBN: 5-211-04669-2], используя стандартные диски, пропитанные антибиотиками. С помощью шпателя Дригальского штамм В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 засевают газоном на LA среду на чашку Петри. На поверхность LA среды, засеянной культурой В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 раскладывают коммерческие диски с ветеринарными антибиотиками: ампицилин, карбеницилин, полимиксин, стрептомицин, рифампицин, гентамицин, левомицетин, тетрациклин, неомицин, канамицин, эритромицин. Посевы штамма бактерий 6. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 инкубируют при плюс (26…34)°С в течение 24 ч. Оптимальная температура культивирования штамма плюс 30°С. Устойчивость культуры к антибиотикам выражают в [мм] диаметра зон задержки роста. Устойчивыми к антибиотикам считают штаммы, диаметр зоны задержки роста которых составляет (0…10) мм; менее устойчивыми - (10…20) мм, неустойчивыми - (20…30) мм (Таблица 3, Фиг. 3). Из данных Таблицы 3 следует, что штамм бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 обладает отсутствующей у прототипа абсолютной устойчивостью к антибиотику: рифампицин, и более устойчива, чем прототип, к антибиотикам карбеницилин, левомицетин, неомицин, канамицин.3. The determination of the resistance of the strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 to antibiotics is studied by the known disco-diffusion method [Egorov, N.S. Fundamentals of the doctrine of antibiotics [Text] / Egorov, N.S. // M: Nauka, 2004 .-- 528 p. - ISBN: 5-211-04669-2] using standard antibiotic-soaked discs. Using a spatula of Drigalski, strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 is seeded with a lawn on LA medium in a Petri dish. Commercial disks with veterinary antibiotics are placed on the surface of the LA medium seeded with B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 culture: ampicillin, carbenicillin, polymyxin, streptomycin, rifampicin, gentamicin, levomycetin, tetracycline, neomycin, kanamycin, erythromycin. Crops of the
3. Культура штамма проверена на безвредность (вирулентность, токсичность и токсигенность).3. The strain culture is tested for harmlessness (virulence, toxicity and toxigenicity).
В, subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 является безопасным для животных, птиц и не обладает вирулентностью, токсигенностью и токсичностью по отношению к ним.B, subtilis MG-8 VKPM B-12476 is safe for animals, birds and does not have virulence, toxigenicity and toxicity to them.
Для исследования вирулентности штамма В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476, культуру выращивают в среде LB в течение 18 час при температуре +30°С при 200 об/мин перемешивающего питательную среду шейкера. Выросшую биомассу штамма центрифугируют при 13000 об/мин в течении 20 мин и суспензируют 0,9%-ным раствором натрия хлорида. Готовят бактериальные суспензии штамма В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 с концентрацией клеток от 1,0 млн до 1,0 млрд в мл. Полученные суспензии вводят беспородистым белым мышам (в количестве 6 шт) массой (16±1) г для каждой концентрации клеток, двумя способами: однократно внутрибрюшинно и перорально. Контрольным вариантом служит физиологический раствор, не содержащий клеток бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476.To study the virulence of strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476, the culture was grown in LB medium for 18 hours at a temperature of + 30 ° C at 200 rpm of a shaker that mixes the nutrient medium. The grown biomass of the strain is centrifuged at 13,000 rpm for 20 minutes and suspended with 0.9% sodium chloride solution. Bacterial suspensions of B. subtilis strain MG-8 VKPM B-12476 are prepared with a cell concentration of 1.0 million to 1.0 billion per ml. The resulting suspensions are administered to outbred white mice (in the amount of 6 pieces) weighing (16 ± 1) g for each cell concentration, in two ways: once intraperitoneally and orally. A control solution is a physiological solution that does not contain bacterial cells of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476.
Для исследования токсичности штамма В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 культуру выращивают в бульоне LB в течение 18 ч при температуре +30°С, центрифугируют при 13000 об/мин в течении 20 мин и суспензируют 0,9%-ным раствором хлорида натрия, готовят суспензию, содержащую от 1,0 млн до 1,0 млрд клеток в 1 мл, которые затем инактивируют прогреванием в течение 90 мин при +75°С. Суспензию вводят однократно внутрибрюшинно и перорально. Контрольным вариантом служит физраствор, не содержащий клеток бактерий.To study the toxicity of strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476, the culture was grown in LB broth for 18 h at a temperature of + 30 ° C, centrifuged at 13000 rpm for 20 min and suspended with a 0.9% chloride solution sodium, prepare a suspension containing from 1.0 million to 1.0 billion cells in 1 ml, which are then inactivated by heating for 90 minutes at + 75 ° C. The suspension is administered once intraperitoneally and orally. The control option is saline solution that does not contain bacterial cells.
Для изучения токсигенности штамма B. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 культуру выращивают в течение 168 час (7 суток) в бульоне LB при температуре +30°C с постоянным перемешиванием (200 об/мин) на инкубаторе-качалке. Затем культуральную жидкость освобождают от бактериальных клеток центрифугированием при 13000 об/мин в течение 20 мин. Для введения мышам используют надосадочную жидкость. Контрольным вариантом служила группа мышей, получивших стерильный LB бульон.To study the toxigenicity of B. subtilis strain MG-8 VKPM B-12476, the culture was grown for 168 hours (7 days) in LB broth at a temperature of + 30 ° C with constant stirring (200 rpm) on a rocking incubator. The culture fluid is then freed from the bacterial cells by centrifugation at 13,000 rpm for 20 minutes. For administration to mice, a supernatant is used. A control group was a group of mice that received sterile LB broth.
Наблюдения за всеми группами животных проводят на протяжении 30 суток после инъекций или перорального введения. В этот период все животные оставались активными, хорошо поедали пищевые рационы, прибавляли в весе, физиологические отправления и поведенческие реакции у них не изменялись. Полученные данные свидетельствуют как о высокой эффективности, так и высокой безопасности заявленного технического решения.Observations of all groups of animals are carried out for 30 days after injection or oral administration. During this period, all animals remained active, ate well-fed diets, gained weight, physiological functions and behavioral reactions did not change. The data obtained indicate both high efficiency and high safety of the claimed technical solution.
Далее приведен способ получения биомассы штамма бактерий 6. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 и примеры его использования в кормлении животных и птиц.The following is a method for producing biomass of a
Пример 1. Получение биомассы штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 в лаборатории.Example 1. Obtaining the biomass of the bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 in the laboratory.
Для получения биомассы с концентрацией 1×109 KOE/мл питательной среды, полученный из хранилища ВКПМ штамм бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 выращивают в течение 72 ч (3 суток) в бульоне LB при температуре плюс 30°C с постоянным перемешиванием (200 об/мин) на инкубаторе-качалке. Полученную культуральную жидкость, содержащую биомассу вегетативных клеток и спор B. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476, а также остатки питательной среды по потребности смешивают с полнорационным комбикормом из расчета 1 литр культуральной жидкости на 100 килограммов комбикорма.To obtain biomass with a concentration of 1 × 10 9 KOE / ml of culture medium, the bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 obtained from the VKPM storage facility was grown for 72 h (3 days) in LB broth at a temperature of + 30 ° C s constant stirring (200 rpm) on a rocking incubator. The resulting culture fluid containing biomass of vegetative cells and spores of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476, as well as the rest of the nutrient medium, are mixed as needed with full feed at the rate of 1 liter of culture fluid per 100 kilograms of feed.
Пример 2. Получение пробиотика на основе биомассы штамма бактерий B. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 для промышленного применения.Example 2. Obtaining a probiotic based on the biomass of the bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 for industrial use.
Пробиотик на основе бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis штамма MG-8 ВКПМ В-12476 для применения получают, например, следующим путем. Из хранилища Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) берут задепонированный штамм бактерий рода Bacillus вида Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476, например в питательной среде, объемом 0,5 литров. Берут биореактор с регулятором температуры, например - производства фирмы ИТП "ПРОМБИОФИТ" (Россия, г. Москва, Клары Цеткин ул., д. 4), емкостью 10 литров. Готовят известную питательную среду Лурия-Бертани (далее по тексту - LB) состава (г/л): триптон - 10,0; дрожжевой экстракт - 5,0; NaCl - 5,0; pH 8,5. Питательную среду LB заливают в реактор, терморегулирующую автоматику биореактора регулируют на поддержание оптимальной температуры питательной среды в биореакторе, например - на рекомендованные паспортом штамма плюс 37°C, запускают биореактор и прогревают питательную среду. При этом с использованием мешалки биореактора питательную среду (в биореакторе) перемешивают, через каждые три минуты замеряя температуру питательной среды. После достижения температуры питательной среды в биореакторе +37°C при работающей мешалке, например с частотой 1 оборот в минуту, производят постепенный посев (выливают) ранее полученный штамм в питательной среде на питательную среду в биореакторе. Перемешивание содержимого биореактора после завершения посева штамма продолжают, например, в течение 30 мин. Затем мешалку работающего биореактора останавливают, включая ее через каждые 4 часа и перемешивая содержимое биореактора. Работу биореактора в этом режиме, при температуре +37°C культуральной среды в биореакторе, продолжают, например - в течение 72 час (3 суток) и получают готовую к применению биомассу (готовый к применению продукт), содержащую бактерии В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 и продукты метаболизма бактерии. Готовую к использованию биомассу сливают в стерильные емкости, например - в пластиковые бутыли емкостью 1 л, хранят в темном прохладном помещении, например - при температуре не выше +10°C, и применяют по потребности. Срок хранения готовой к применению биомассы - не более 30 суток. Перед применением емкость с готовой биомассой (продуктом) встряхивают, например - в течение 30 сек.A probiotic based on a bacterium of the genus Bacillus species Bacillus subtilis strain MG-8 VKPM B-12476 for use is obtained, for example, in the following way. From the repository of the All-Russian collection of industrial microorganisms (VKPM) take a deposited strain of bacteria of the genus Bacillus species Bacillus subtilis MG-8 VKPM B-12476, for example in a nutrient medium with a volume of 0.5 liters. Take a bioreactor with a temperature regulator, for example, manufactured by ITP "PROMBIOFIT" (Russia, Moscow, Klara Zetkin St., 4), with a capacity of 10 liters. Prepare a well-known nutrient medium Luria-Bertani (hereinafter referred to as LB) composition (g / l): tryptone - 10.0; yeast extract - 5.0; NaCl - 5.0; pH 8.5. The nutrient medium LB is poured into the reactor, the thermoregulatory automation of the bioreactor is adjusted to maintain the optimum temperature of the nutrient medium in the bioreactor, for example, to the strain recommended by the passport plus 37 ° C, the bioreactor is started and the nutrient medium is heated. At the same time, using a bioreactor mixer, the nutrient medium (in the bioreactor) is mixed, measuring the temperature of the nutrient medium every three minutes. After reaching the temperature of the nutrient medium in the bioreactor + 37 ° C with a working stirrer, for example, with a frequency of 1 revolution per minute, the previously obtained strain is gradually seeded (poured) in the nutrient medium onto the nutrient medium in the bioreactor. Stirring of the contents of the bioreactor after completion of seeding of the strain is continued, for example, for 30 minutes Then the stirrer of the working bioreactor is stopped, turning it on every 4 hours and mixing the contents of the bioreactor. The bioreactor in this mode, at a temperature of + 37 ° C of the culture medium in the bioreactor, is continued, for example, for 72 hours (3 days) and a ready-to-use biomass (ready-to-use product) containing B. subtilis MG-8 bacteria is obtained VKPM B-12476 and metabolic products of bacteria. Ready-to-use biomass is poured into sterile containers, for example, in 1 liter plastic bottles, stored in a cool, dark room, for example, at a temperature not exceeding + 10 ° C, and used as needed. The shelf life of ready-to-use biomass is no more than 30 days. Before use, the container with the finished biomass (product) is shaken, for example, for 30 seconds.
Пример 3. Применение пробиотика на основе штамма бактерий 6. subtilis MG-8 В-12476 для кормления крупного рогатого скота (КРС), например - дойных коров, в личном подсобном хозяйстве.Example 3. The use of a probiotic based on a
По Примеру 2 готовят биомассы штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476. Полученную биомассу смешивают с полнорационным комбикормом из расчета 1 литр культуральной жидкости на 100 килограммов комбикорма.In Example 2, the biomass of the bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 is prepared. The resulting biomass is mixed with full feed at the rate of 1 liter of culture fluid per 100 kilograms of feed.
Дойных коров кормят штатным кормом с добавлением комбикорма, обработанного культуральной жидкостью из расчета 1 литр культуральной жидкости на 100 килограммов комбикорма. К массе основного корма обработанный культуральной жидкостью комбикорм добавляют из расчета 1 кг на 100 кг живой массы (в количестве 1% от массы) животного в сутки. Кормление комбикормом, обработанным суспензией клеток В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 проводили ежедневно в течение 10 дней подряд, делали перерыв и далее курс профилактики повторяли ежемесячно. Испытания заявленного технического решения проводились в условиях действующего личного подсобного хозяйства течение 1,5 лет.Dairy cows are fed regular feed with the addition of mixed feed treated with culture fluid at the rate of 1 liter of culture fluid per 100 kilograms of mixed feed. The feed treated with the culture fluid is added to the mass of the main feed at the rate of 1 kg per 100 kg of live weight (in the amount of 1% by weight) of the animal per day. Feeding with compound feed treated with a suspension of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 cells was performed daily for 10 consecutive days, a break was made, and then the prophylaxis was repeated monthly. Tests of the claimed technical solution were carried out in the conditions of the current personal subsidiary plots for 1.5 years.
При апробации заявляемого способа применения штамма бактерий 6. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 наблюдалось полное отсутствие случаев расстройств желудочно-кишечного тракта дойных коров.When testing the proposed method of using the
При этом, расчетная норма в (1,0±0,3) л на 100 кг комбикорма является оптимальным соотношением для наиболее эффективной профилактики от патогенных и условно патогенных бактерий и микромицетов, при этом превышения указанной нормы может привести к негативным последствиям в силу возможности угнетения собственной микрофлоры дойных коров, а значительное снижение расчетной нормы может привести к уменьшению эффективности при использовании заявленного технического решения по назначению.Moreover, the calculated norm of (1.0 ± 0.3) L per 100 kg of feed is the optimal ratio for the most effective prevention of pathogenic and conditionally pathogenic bacteria and micromycetes, while exceeding this norm can lead to negative consequences due to the possibility of inhibition own microflora of dairy cows, and a significant decrease in the estimated norm can lead to a decrease in efficiency when using the claimed technical solution for the intended purpose.
Пример 4. Применение пробиотика на основе штамма бактерий B. subtilis MG-8 В-12476 для кормления молодняка крупного рогатого скота (КРС), например - телят в возрасте от 1-го до 6 месяцев.Example 4. The use of a probiotic based on the bacterial strain B. subtilis MG-8 B-12476 for feeding young cattle (cattle), for example, calves aged 1 to 6 months.
По Примеру 2 готовят биомассы штамма бактерий B. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476. Полученную биомассу смешивают с полнорационным комбикормом из расчета 1 литр культуральной жидкости на 100 килограммов комбикорма для молодняка. Телят кормят штатным кормом с добавлением комбикорма, обработанного культуральной жидкостью из расчета 1 литр культуральной жидкости на 100 килограммов комбикорма. К массе основного корма обработанный культуральной жидкостью комбикорм добавляют из расчета 1 кг на 100 кг живой массы (в количестве 1% от массы) животного в сутки. Кормление комбикормом, обработанным суспензией клеток В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 проводили ежедневно в течение 10 дней подряд, делали перерыв и далее курс профилактики повторяли ежемесячно. В течение 1,5 лет апробации заявляемого способа применения штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 полностью отсутствуют случаи расстройств желудочно-кишечного тракта животных. Испытания заявленного технического решения проводились в условиях действующего личного подсобного хозяйства.In Example 2, the biomass of the bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 is prepared. The resulting biomass is mixed with full feed at the rate of 1 liter of culture fluid per 100 kilograms of feed for young animals. Calves are fed regular feed with the addition of compound feed treated with culture fluid at the rate of 1 liter of culture fluid per 100 kilograms of compound feed. The feed treated with the culture fluid is added to the mass of the main feed at the rate of 1 kg per 100 kg of live weight (in the amount of 1% by weight) of the animal per day. Feeding with compound feed treated with a suspension of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 cells was performed daily for 10 consecutive days, a break was made, and then the prophylaxis was repeated monthly. Within 1.5 years of testing the proposed method for the use of the strain of bacteria B. subtilis MG-8 VKPM B-12476, there were no cases of disorders of the gastrointestinal tract of animals. Tests of the claimed technical solution were carried out in the conditions of the current personal subsidiary plots.
При этом, расчетная норма в (1,0±0,2) л на 100 кг комбикорма является оптимальным соотношением для наиболее эффективной профилактики от патогенных и условно патогенных бактерий и микромицетов, при этом превышения указанной нормы может привести к негативным последствиям в силу возможности угнетения собственной микрофлоры телят, а значительное снижение расчетной нормы может привести к уменьшению эффективности при использовании заявленного технического решения по назначению.Moreover, the calculated norm of (1.0 ± 0.2) l per 100 kg of feed is the optimal ratio for the most effective prevention of pathogenic and conditionally pathogenic bacteria and micromycetes, while exceeding this norm can lead to negative consequences due to the possibility of inhibition own microflora of calves, and a significant decrease in the design norm can lead to a decrease in efficiency when using the claimed technical solution for the intended purpose.
Пример 5. Применение пробиотика на основе штамма бактерий вида В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 для кормления овец.Example 5. The use of a probiotic based on a bacterial strain of the species B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 for feeding sheep.
По Примеру 2 готовят биомассу штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476. Полученную биомассу смешивают с полнорационным комбикормом из расчета 1 литр культуральной жидкости на 100 килограммов комбикорма. Овец кормят штатным кормом с добавлением комбикорма, обработанным культуральной жидкостью В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 из расчета: молодняку возрастом 10-14 дней суточная доза комбикорма составляет 0,1-0,3% от живой массы; 14-30 дней - 0,3-0,5% от живой массы, возрастом 1-4 месяца - 0,5-1,0% от живой массы. От 4 месяцев кормление овец корбикормом, обработанным суспензией клеток бактерии В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 проводили ежедневно в концентрации 1,0% от живой массы в сутки в течение 10 дней подряд, делали перерыв и далее курс профилактики повторяли ежемесячно. В течение 1,5 лет апробации заявляемого способа применения штамма бактерии В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 полностью отсутствуют случаи расстройств желудочно-кишечного тракта животных - овец. Испытания заявленного технического решения проводились в условиях действующего личного подсобного хозяйства.In Example 2, the biomass of the bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 is prepared. The resulting biomass is mixed with full feed at the rate of 1 liter of culture fluid per 100 kilograms of feed. Sheep is fed regular feed with the addition of feed, treated with culture liquid B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 based on: young animals aged 10-14 days daily dose of feed is 0.1-0.3% of live weight; 14-30 days - 0.3-0.5% of live weight, age 1-4 months - 0.5-1.0% of live weight. From 4 months old, the sheep were fed with feed treated with a suspension of B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 bacterial cell suspension daily at a concentration of 1.0% of live weight per day for 10 consecutive days, a break was made, and then the prophylaxis was repeated monthly. Within 1.5 years of testing the proposed method for the use of the strain of the bacterium B. subtilis MG-8 VKPM B-12476, there were no cases of disorders of the gastrointestinal tract of animals - sheep. Tests of the claimed technical solution were carried out in the conditions of an operating personal subsidiary farm.
При этом, расчетная норма в (1,0±0,2) л на 100 кг комбикорма является оптимальным соотношением для наиболее эффективной профилактики от патогенных и условно патогенных бактерий и микромицетов, при этом превышения указанной нормы может привести к негативным последствиям в силу возможности угнетения собственной микрофлоры животного, а значительное снижение расчетной нормы может привести к уменьшению эффективности при использовании заявленного технического решения по назначению.Moreover, the calculated norm of (1.0 ± 0.2) l per 100 kg of feed is the optimal ratio for the most effective prevention of pathogenic and conditionally pathogenic bacteria and micromycetes, while exceeding this norm can lead to negative consequences due to the possibility of inhibition own microflora of the animal, and a significant decrease in the calculated norm can lead to a decrease in efficiency when using the claimed technical solution for the intended purpose.
Пример 6. Применение пробиотика на основе штамма бактерий вида В. subtilis MG-8 В-12476 для кормления цыплят-бройлеров.Example 6. The use of a probiotic based on a bacterial strain of the species B. subtilis MG-8 B-12476 for feeding broiler chickens.
По Примеру 2 готовят биомассы штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476.In Example 2, the biomass of the bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 is prepared.
Способ кормления цыплят-бройлеров включает вскармливание цыплят начиная с суточного возраста до убоя полнорационным комбикормом с добавлением В. subtilis MG-8 В-12476.A method of feeding broiler chickens involves feeding chickens from day old to slaughter with full feed with the addition of B. subtilis MG-8 B-12476.
Птиц - цыплят-бройлеров кормили полнорационным комбикормом, с добавлением суспензии клеток В. subtilis MG-8 В-12476 из расчета в количестве 2,0% от живой массы птиц, поедающих этот корм в сутки. В течение 1 года апробации заявляемого способа применения штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 полностью отсутствуют случаи расстройств желудочно-кишечного тракта цыплят-бройлеров. Испытания заявленного технического решения проводилось в птицефабрике «Йошкар-Олинская» течение 1,5 лет.Broiler chickens were fed complete feed, supplemented with a suspension of B. subtilis MG-8 B-12476 cells at a rate of 2.0% of the live weight of birds eating this feed per day. Within 1 year of testing the proposed method for the use of the bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476, there were no cases of disorders of the gastrointestinal tract of broiler chickens. Tests of the claimed technical solution was carried out in the poultry farm "Yoshkar-Ola" for 1.5 years.
При этом, расчетная норма в (1,0±0,5) л на 100 кг комбикорма является оптимальным соотношением для наиболее эффективной профилактики от патогенных и условно патогенных бактерий и микромицетов, при этом превышения указанной нормы может привести к негативным последствиям в силу возможности угнетения собственной микрофлоры цыплят-бройлеров, а значительное снижение расчетной нормы может привести к уменьшению эффективности при использовании заявленного технического решения по назначению.Moreover, the calculated norm of (1.0 ± 0.5) l per 100 kg of feed is the optimal ratio for the most effective prevention of pathogenic and conditionally pathogenic bacteria and micromycetes, while exceeding this norm can lead to negative consequences due to the possibility of inhibition own microflora of broiler chickens, and a significant decrease in the design norm can lead to a decrease in efficiency when using the claimed technical solution for the intended purpose.
Пример 7. Применение пробиотика на основе штамма бактерий вида В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 для кормления уток, гусей.Example 7. The use of a probiotic based on a bacterial strain of the species B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 for feeding ducks, geese.
Способ кормления уток и гусей включает вскармливание с первых суток жизни непрерывным циклом на весь период откорма полнорационным комбикормом с добавлением В. subtilis MG-8 В-12476.The method of feeding ducks and geese involves feeding from the first day of life a continuous cycle for the entire period of feeding with full feed with the addition of B. subtilis MG-8 B-12476.
Птиц - уток и гусей кормят полнорационным комбикормом, с добавлением пробиотика на основе бактерии В. subtilis MG-8 В-12476 из расчета в количестве (1,2…1,5) % от живой массы птиц, поедающих этот корм в сутки.Birds - ducks and geese are fed with complete feed, with the addition of a probiotic based on the bacterium B. subtilis MG-8 B-12476 at the rate of (1.2 ... 1.5)% of the live weight of birds eating this food per day.
В течение 1 года апробации заявляемого способа применения штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 полностью отсутствуют случаи расстройств желудочно-кишечного тракта уток и гусей. Испытания заявленного технического решения проводилось в птицефабрике «Йошкар-Олинская» течение 1,5 лет.Within 1 year of testing the proposed method for the use of the strain of bacteria B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 there were no cases of disorders of the gastrointestinal tract of ducks and geese. Tests of the claimed technical solution was carried out in the poultry farm "Yoshkar-Ola" for 1.5 years.
При этом, расчетная норма в (1,0±0,3) л на 100 кг комбикорма является оптимальным соотношением для наиболее эффективной профилактики от патогенных и условно патогенных бактерий и микромицетов, при этом превышения указанной нормы может привести к негативным последствиям в силу возможности угнетения собственной микрофлоры уток и гусей, а значительное снижение расчетной нормы может привести к уменьшению эффективности при использовании заявленного технического решения по назначению.Moreover, the calculated norm of (1.0 ± 0.3) L per 100 kg of feed is the optimal ratio for the most effective prevention of pathogenic and conditionally pathogenic bacteria and micromycetes, while exceeding this norm can lead to negative consequences due to the possibility of inhibition own microflora of ducks and geese, and a significant decrease in the estimated norm can lead to a decrease in efficiency when using the claimed technical solution for the intended purpose.
Расчетные нормы в примерах применения пробиотика на основе штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 получены опытным путем, с учетом строения желудочно-кишечного тракта и физиологии животных и птиц.The design norms in examples of the application of a probiotic based on the bacterial strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 were obtained experimentally, taking into account the structure of the gastrointestinal tract and the physiology of animals and birds.
Необходимо отметить полное отсутствие зараженности яиц у получавших заявляемый пробиотик птиц (кур, уток, гусей) опасным для людей сальмонеллезом, что можно интерпретировать как результат проявления антагонистической активности пробиотика к наиболее часто инфицирующим яйца бактериям Salmonella typhimurium.It should be noted that there is a complete absence of infection of eggs in birds that received the claimed probiotic (chickens, ducks, geese), Salmonellosis dangerous for humans, which can be interpreted as a result of the manifestation of the antagonistic activity of the probiotic to Salmonella typhimurium bacteria that most often infect eggs.
Приведенные примеры использования предлагаемого технического решения показывают достигнутость заявленных целей, а именно - пробиотик на основе штамма бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 обладает:The examples of the use of the proposed technical solution show the achievement of the stated goals, namely, a probiotic based on a bacterial strain of the genus Bacillus species Bacillus subtilis MG-8 VKPM B-12476 has:
- отсутствующей у прототипа абсолютной устойчивостью к антибиотику рифампицин, и более устойчив, чем прототип, к антибиотикам карбеницилин, левомицетин, неомицин, канамицин;- absent in the prototype absolute resistance to rifampicin antibiotic, and more resistant than the prototype to antibiotics carbenicillin, chloramphenicol, neomycin, kanamycin;
- полностью отсутствующей у прототипа антагонистической активностью по отношению к патогенным и условно патогенным (клиническим) бактериям Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca и более высокую, по сравнению с прототипом, антагонистическую активность в отношении клиническим бактериям Escherichia coli 154, Pseudomonas aeruginosa 8;- completely absent in the prototype antagonistic activity against pathogenic and conditionally pathogenic (clinical) bacteria Salmonella typhimurium, Klebsiella oxytoca and higher, compared with the prototype, antagonistic activity against clinical bacteria Escherichia coli 154,
- высокой антагонистической активностью в отношении микромицетов - возбудителей микотоксикозов (активностью, полностью отсутствующей у прототипа);- high antagonistic activity against micromycetes - pathogens of mycotoxicosis (activity completely absent in the prototype);
С использованием характерных особенностей штамма бактерии рода Bacillus вида Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 разработан пробиотик и эффективные способы применения этого пробиотика для профилактики кишечных инфекций, микотоксикозов и кишечных расстройств у сельскохозяйственных животных и птиц.Using the characteristics of a bacterial strain of the genus Bacillus species Bacillus subtilis MG-8 VKPM B-12476, a probiotic and effective methods of using this probiotic for the prevention of intestinal infections, mycotoxicosis and intestinal disorders in farm animals and birds have been developed.
Таким образом, заявленное техническое решение доказывает его полезность для использования в сельскохозяйственной деятельности, ветеринарии в качестве средства профилактики и лечения инфекций и кишечных расстройств у сельскохозяйственных животных и птиц. Штамм В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 обладает устойчивостью к применяемым в ветеринарии антибиотикам, имеет антагонистическую активность в отношении широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и микромицетов -продуцентов микотоксинов, вызывающих заболевания и кишечные расстройства у сельскохозяйственных животных и птиц. То есть, заявленное техническое решение обладает позитивными свойствами, отсутствующими у прототипа.Thus, the claimed technical solution proves its usefulness for use in agricultural activities, veterinary medicine as a means of prevention and treatment of infections and intestinal disorders in farm animals and birds. The strain B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 is resistant to antibiotics used in veterinary medicine, has antagonistic activity against a wide range of pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms and micromycetes producing mycotoxins that cause diseases and intestinal disorders in farm animals and birds. That is, the claimed technical solution has positive properties that are absent in the prototype.
Предполагаемое изобретение удовлетворяет критерию новизны, так как при определении уровня техники не обнаружено средство, которому присущи признаки, идентичные (то есть совпадающие по исполняемой ими функции и форме выполнения этих признаков) всем признакам штамма бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476.The alleged invention meets the criterion of novelty, since when determining the prior art, no means was found that has characteristics that are identical (that is, they coincide in the function they perform and the form in which these characters are performed) to all the characteristics of the B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 bacterial strain.
Предполагаемое изобретение удовлетворяет критерию изобретательский уровень, потому что является не очевидным для специалиста в указанной области деятельности, т.к. наряду с проявляемой антибактериальной активностью является эффективным средством профилактики и лечения от микотоксикозов, являющихся весьма серьезной проблемой животноводства и птицеводства, т.к. из-за микотоксикозов наблюдается смертность молодняка животных и птиц.The alleged invention meets the criterion of inventive step, because it is not obvious to a person skilled in the specified field of activity, because Along with the manifested antibacterial activity, it is an effective means of prevention and treatment of mycotoxicoses, which are a very serious problem of livestock and poultry farming, as due to mycotoxicosis, mortality of young animals and birds is observed.
Таким образом, примеры применения пробиотика на основе бактерий В. subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 доказывают, что пробиотик на основе штамма может быть в воспроизведен в промышленных масштабах с использованием стандартного оборудования и материалов. Пробиотик является полезным для применения в сельскохозяйственной деятельности для профилактики широкого спектра заболеваний.Thus, examples of the application of the probiotic based on bacteria B. subtilis MG-8 VKPM B-12476 prove that the probiotic based on the strain can be reproduced on an industrial scale using standard equipment and materials. Probiotic is useful for agricultural applications for the prevention of a wide range of diseases.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017127670A RU2663720C1 (en) | 2017-08-01 | 2017-08-01 | Probiotic based on bacterial strain bacillus subtilis mg-8 vkpm v-12476 and method of application probiotic for prevention of gastrointestinal diseases in agricultural animals and poultry |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017127670A RU2663720C1 (en) | 2017-08-01 | 2017-08-01 | Probiotic based on bacterial strain bacillus subtilis mg-8 vkpm v-12476 and method of application probiotic for prevention of gastrointestinal diseases in agricultural animals and poultry |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2663720C1 true RU2663720C1 (en) | 2018-08-08 |
Family
ID=63142569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017127670A RU2663720C1 (en) | 2017-08-01 | 2017-08-01 | Probiotic based on bacterial strain bacillus subtilis mg-8 vkpm v-12476 and method of application probiotic for prevention of gastrointestinal diseases in agricultural animals and poultry |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2663720C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2770481C1 (en) * | 2021-06-25 | 2022-04-18 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Казанский (Приволжский) федеральный университет» (ФГАОУ ВО КФУ) | Method for obtaining the total fraction of lipopeptides of bacteria bacillus subtilis mg-8 vkpm b-12476 and its use as a prophylactic against diseases of poultry |
| RU2833079C1 (en) * | 2024-04-24 | 2025-01-14 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение "Эко Ойл Сервис" | Probiotic fodder additive |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2130316C1 (en) * | 1997-01-23 | 1999-05-20 | Государственное предприятие НПО. "Иммунопрепарат" | Curative-prophylactic biopreparation "bactisporin" |
| RU2169767C1 (en) * | 1999-11-03 | 2001-06-27 | Дочернее предприятие "Биофаг" государственного унитарного предприятия "Иммунопрепарат" | Strain of bacterium bacillus subtilis showing broad spectrum of antagonistic activity and resistance to antibiotics |
| RU2440121C2 (en) * | 2009-09-23 | 2012-01-20 | Александр Владимирович Диковский | Veterinary pharmaceutical composition and method (versions) for prevention and treatment of gastrointestinal diseases and intoxications of various aetiologies in animals |
| RU2543353C1 (en) * | 2014-01-09 | 2015-02-27 | Марк Абович Малков | Prophylaxis method of toxicoses of farm animals and poultry |
-
2017
- 2017-08-01 RU RU2017127670A patent/RU2663720C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2130316C1 (en) * | 1997-01-23 | 1999-05-20 | Государственное предприятие НПО. "Иммунопрепарат" | Curative-prophylactic biopreparation "bactisporin" |
| RU2169767C1 (en) * | 1999-11-03 | 2001-06-27 | Дочернее предприятие "Биофаг" государственного унитарного предприятия "Иммунопрепарат" | Strain of bacterium bacillus subtilis showing broad spectrum of antagonistic activity and resistance to antibiotics |
| RU2440121C2 (en) * | 2009-09-23 | 2012-01-20 | Александр Владимирович Диковский | Veterinary pharmaceutical composition and method (versions) for prevention and treatment of gastrointestinal diseases and intoxications of various aetiologies in animals |
| RU2543353C1 (en) * | 2014-01-09 | 2015-02-27 | Марк Абович Малков | Prophylaxis method of toxicoses of farm animals and poultry |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ПОХИЛЕНКО В.Д., ПЕРЕЛЫГИН В.В. Пробиотики на основе спорообразующих бактерий и их безопасность. Химическая и биологическая безопасность, 2007, N 2, с. 20-41. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2770481C1 (en) * | 2021-06-25 | 2022-04-18 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Казанский (Приволжский) федеральный университет» (ФГАОУ ВО КФУ) | Method for obtaining the total fraction of lipopeptides of bacteria bacillus subtilis mg-8 vkpm b-12476 and its use as a prophylactic against diseases of poultry |
| RU2833079C1 (en) * | 2024-04-24 | 2025-01-14 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение "Эко Ойл Сервис" | Probiotic fodder additive |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Koshchaev et al. | Screening of microorganism symbiont strains as a base of probiotics for poultry industry | |
| Penders et al. | Antibiotic resistance of motile aeromonads in indoor catfish and eel farms in the southern part of The Netherlands | |
| Lamari et al. | Selection of lactic acid bacteria as candidate probiotics and in vivo test on Artemia nauplii | |
| CN101991611B (en) | Active biological antibacterial and production method thereof | |
| Golić et al. | In vitro and in vivo antagonistic activity of new probiotic culture against Clostridium difficile and Clostridium perfringens | |
| RU2580002C1 (en) | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli | |
| CN109055268A (en) | A kind of compound micro-ecological preparation and its application during bee raising | |
| Markov et al. | Production Technique of Bifido bacterium's Exo-metabolites with High Antimicrobial Activity towards Staphylococcus aureus. | |
| Luneva et al. | Probiotic potential of microorganisms obtained from the intestines of wild birds | |
| Aleksandrova et al. | Intestinal microbiocenosis and fodder digestibility in broiler chickens when using probiotics | |
| Gibbs et al. | Identification, antimicrobial resistance profiles, and virulence of members from the family Enterobacteriaceae from the feces of yellow-headed blackbirds (Xanthocephalus xanthocephalus) in North Dakota | |
| Fuller | Basis and efficacy of probiotics | |
| RU2663720C1 (en) | Probiotic based on bacterial strain bacillus subtilis mg-8 vkpm v-12476 and method of application probiotic for prevention of gastrointestinal diseases in agricultural animals and poultry | |
| RU2398872C1 (en) | Bacillus licheniformis BACTERIA STRAIN USED FOR MAKING PROBIOTIC SUPPLEMENT FEED USED FOR PRODUCING HIGH-QUALITY FODDER IMPROVING PERFORMANCE AND REDUCING RISK OF GASTROINTESTINAL DISTURBANCES IN ANIMALS, BIRDS AND FISHES | |
| RU2723411C2 (en) | Bacillus cereus strain rcam04578, a biologically active compounds producer having probiotic properties | |
| Zhumakayeva et al. | Efficiency of probiotic culture consortium application for disinfection of dairy farm premises and prevention of mastitis in cows | |
| Chechet et al. | Antagonistic properties of a probiotic preparation containing bacteria of the genera Bacillus and Enterococcus | |
| Lakho et al. | Efficacy of quinolones and cephalosporins against antibiogram of Escherichia coli isolated from chickens | |
| RU2768281C1 (en) | Combined probiotic for aquaculture based on spore-forming bacteria of the genus bacillus and a method for production thereof | |
| RU2292156C1 (en) | Method for rearing in broilers | |
| RU2203947C1 (en) | Strain of bacterium bacillus licheniformis used for preparing probiotic preparation designated for prophylaxis and treatment of gastroenteric diseases in animals, poultry and fishes | |
| RU2845425C1 (en) | Probiotic feed additive for fish based on bacillary strains exhibiting antagonism to pathogens | |
| KR102788023B1 (en) | Novel bacteriophage effective for controlling Salmonella Typhimurium and its derived biofilm, and an antibacterial composition comprising the same | |
| Sidorova | Results of the study on the antimicrobial activity of probiotic strains of lactobacilli and their potential application in feed formulations for aquaculture species | |
| EA030625B1 (en) | Synbiotic composition for correction of dysbiotic disorders of gastrointestinal tract microbiocenosis |