RU2660343C1

RU2660343C1 - Method for determining the concentration of peptides in suppositories

Info

Publication number: RU2660343C1
Application number: RU2017122094A
Authority: RU
Inventors: Ирина Алексеевна Лагерева
Priority date: 2017-06-22
Filing date: 2017-06-22
Publication date: 2018-07-05

Abstract

FIELD: chemistry.

SUBSTANCE: invention relates to analytical chemistry, namely the analysis of pharmaceutical preparations, and can be used to quantify the content of bioregulatory peptides in suppositories based on polyethylene glycol (PEG). For this suppositories are ground and dissolved in physiological saline when heated in a water bath to a temperature of no higher than 70 °C. PEG is then extracted from the resulting aqueous solution with an organic solvent, which can be benzene, chloroform, methylene chloride, acetonitrile, carbon tetrachloride or dimethylformamide. Content of peptides in the aqueous phase is determined spectrophotometrically at a wavelength of 750 nm relative to the standard albumin solution.

EFFECT: invention provides an increase in the accuracy of quantitative determination of the content of bioregulatory peptides in suppositories.

1 cl, 1 tbl, 1 ex

Description

Заявляемое изобретение относится к измерениям и испытаниям, в частности к получению и подготовке образцов пептидов для количественного определения их содержания в суппозиториях.The claimed invention relates to measurements and tests, in particular to the preparation and preparation of samples of peptides for the quantitative determination of their content in suppositories.

Комплекс биорегуляторных пептидов, выделяемых из семенников крупного рогатого скота (молодых бычков), применяется как средство для лечения заболеваний предстательной железы как в виде раствора для инъекций и таблеток, так и (чаще всего) в форме суппозиториев. Суппозитории могут быть изготовлены на жировой основе или на водорастворимой полимерной, например на основе полиэтиленгликоля (ПЭГ). Производитель подвергает изготовленные суппозитории анализу на содержание лекарственного вещества, в данном случае - комплекса биорегуляторных пептидов, выделенных из семенников крупного рогатого скота.A complex of bioregulatory peptides secreted from the testes of cattle (young calves) is used as a means for treating prostate diseases both in the form of an injection and tablets, and (most often) in the form of suppositories. Suppositories can be made on a fat basis or on a water-soluble polymer, for example based on polyethylene glycol (PEG). The manufacturer subjects the manufactured suppositories to an analysis of the content of the drug substance, in this case, the complex of bioregulatory peptides isolated from the testes of cattle.

Известен способ определения концентрации пептидов в суппозиториях, изготовленных с использованием носителя - полиэтиленгликоля, основанный на том, что пептиды нерастворимы в органических растворителях. Способ включает измельчение определенного количества суппозиториев, расплавление измельченной массы нагревом на водяной бане, экстракцию из расплава полиэтиленгликоля с помощью органического растворителя, например хлороформа, отделение пептидов фильтрованием, растворение осажденных на фильтре пептидов в воде и УФ-спектрофотометрическое определение их содержания [Фармакопейная статья предприятия ЛС-000925-04041].A known method for determining the concentration of peptides in suppositories made using a carrier - polyethylene glycol, based on the fact that the peptides are insoluble in organic solvents. The method includes grinding a certain number of suppositories, melting the crushed mass by heating in a water bath, extraction of polyethylene glycol from the melt with an organic solvent, for example chloroform, filtering off the peptides, dissolving the peptides deposited on the filter in water, and UV spectrophotometric determination of their content [Pharmacopoeia article of the pharmaceutical company -000925-04041].

Однако указанный способ дает существенный разброс результатов в параллельных пробах, что можно объяснить только тем, что пептиды и ПЭГ образуют связь (ПЭГелирование пептидов), в результате чего пептиды частично экстрагируются в органическую фазу из расплава вместе с ПЭГ, а это искажает результаты количественного определения (не выполняются критерии правильности и сходимости).However, this method gives a significant scatter of results in parallel samples, which can only be explained by the fact that peptides and PEG form a bond (pegylation of peptides), as a result of which the peptides are partially extracted into the organic phase from the melt along with PEG, and this distorts the results of quantitative determination ( criteria of correctness and convergence are not fulfilled).

Результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в повышении точности количественного определения содержания биорегуляторных пептидов в суппозиториях на основе ПЭГ.The result, the achievement of which the claimed invention is directed, is to increase the accuracy of the quantitative determination of the content of bioregulatory peptides in suppositories based on PEG.

Указанная цель достигается тем, что в способе определения концентрации биорегуляторных пептидов в суппозиториях, в которых носителем является полиэтиленгликоль (ПЭГ), включающем измельчение суппозиториев, экстракцию ПЭГ органическим растворителем и количественное определение пептидов в водной фазе методом УФ-спектрофотометрии, измельченные суппозитории предварительно растворяют в физиологическом растворе при нагревании на водяной бане до температуры не выше 70°С и экстрагируют ПЭГ органическим растворителем из полученного водного раствора.This goal is achieved by the fact that in the method for determining the concentration of bioregulatory peptides in suppositories in which the carrier is polyethylene glycol (PEG), including grinding suppositories, extraction of PEG with an organic solvent and quantitative determination of peptides in the aqueous phase by UV spectrophotometry, the ground suppositories are pre-dissolved in physiological the solution when heated in a water bath to a temperature of no higher than 70 ° C and extracted with PEG organic solvent from the resulting aqueous solution.

В качестве органического растворителя, экстрагирующего ПЭГ из водного раствора, можно использовать бензол, метиленхлорид, хлороформ, ацетонитрил, четыреххлористый углерод и диметилформамид, преимущественно хлороформ и метиленхлорид.As an organic solvent extracting PEG from an aqueous solution, benzene, methylene chloride, chloroform, acetonitrile, carbon tetrachloride and dimethylformamide, mainly chloroform and methylene chloride, can be used.

Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.

Тщательно измельчают 20 суппозиториев.Thoroughly crush 20 suppositories.

Около 3,8 г (точная навеска) измельченных суппозиториев помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл физиологического раствора (0,9%-ный раствор NaCl в воде), нагревают на водяной бане при температуре 70°С до расплавления основы, перемешивают и дают остыть до комнатной температуры. Доводят объем раствора до метки и плавно перемешивают, не допуская образования пены. В делительную воронку помещают 25 мл растворителя, например метиленхлорида, прибавляют испытуемый раствор и экстрагируют ПЭГ, используя шейкер, в течение 5 минут со скоростью 100 об/мин. После разделения слоев нижний органический слой отбрасывают. Далее в воронку прибавляют новую порцию метиленхлорида и повторяют экстракцию при тех же условиях еще 5 раз, каждый раз добавляя 25 мл метиленхлорида. Водный раствор сливают в мерную колбу вместимостью 50 мл, через фильтр «желтая лента», предварительно смоченный водой, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.About 3.8 g (accurately weighed) of the crushed suppositories are placed in a 50 ml volumetric flask, 20 ml of physiological saline (0.9% NaCl solution in water) are added, heated in a water bath at a temperature of 70 ° C until the base melts, mix and allow to cool to room temperature. Bring the volume of the solution to the mark and mix gently, avoiding the formation of foam. 25 ml of a solvent, for example methylene chloride, is placed in a separatory funnel, the test solution is added and the PEG is extracted using a shaker for 5 minutes at a speed of 100 rpm. After separation of the layers, the lower organic layer is discarded. Next, a new portion of methylene chloride is added to the funnel and the extraction is repeated under the same conditions an additional 5 times, each time adding 25 ml of methylene chloride. The aqueous solution is poured into a volumetric flask with a capacity of 50 ml, through the filter "yellow tape", pre-moistened with water, bring the volume of the solution with water to the mark and mix.

Содержание пептидов определяют спектрофотометрически при длине волны 750 нм относительно стандартного раствора альбумина.The peptide content is determined spectrophotometrically at a wavelength of 750 nm relative to a standard albumin solution.

В таблице приведены данные определения биорегуляторных пептидов в девяти пробах одной партии суппозиториев заявляемым способом; для сравнения в таблице приведены также данные испытаний девяти проб той же партии суппозиториев, выполненные в соответствии с Фармакопейной статьей предприятия ЛС-000925-04041.The table shows the data for the determination of bioregulatory peptides in nine samples of one batch of suppositories of the claimed method; for comparison, the table also shows the test data of nine samples of the same batch of suppositories, performed in accordance with the Pharmacopoeia article of the enterprise LS-000925-04041.

Из представленных в таблице результатов анализа видно, что заявляемый способ определения биорегуляторных пептидов отличается большей точностью, поскольку при растворении суппозиториев в физиологическом растворе, по-видимому, происходит разрыв связей между пептидами и ПЭГ, и полное высвобождение пептидов позволяет определять их содержание с меньшим искажением и разбросом результатов.From the analysis results presented in the table, it can be seen that the inventive method for determining bioregulatory peptides is more accurate, since when the suppositories are dissolved in physiological saline, bonds between the peptides and PEG are apparently broken, and the peptides are completely released, which allows determining their content with less distortion and scatter of results.

Claims

1. The method of determining the concentration of peptides in suppositories in which the carrier is polyethylene glycol (PEG), including grinding suppositories, extraction of PEG with an organic solvent and quantitative determination of peptides in the aqueous phase by UV spectrophotometry, characterized in that the crushed suppositories are pre-dissolved in physiological saline when heating in a water bath to a temperature not exceeding 70 ° C and extracted with PEG organic solvent from the resulting aqueous solution.

2. The method according to p. 1, characterized in that the organic solvent is a solvent selected from the group consisting of benzene, chloroform, methylene chloride, acetonitrile, carbon tetrachloride and dimethylformamide.