RU2538685C1 - Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах - Google Patents
Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах Download PDFInfo
- Publication number
- RU2538685C1 RU2538685C1 RU2013148042/15A RU2013148042A RU2538685C1 RU 2538685 C1 RU2538685 C1 RU 2538685C1 RU 2013148042/15 A RU2013148042/15 A RU 2013148042/15A RU 2013148042 A RU2013148042 A RU 2013148042A RU 2538685 C1 RU2538685 C1 RU 2538685C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- immune complexes
- cholesterol
- peg
- cics
- buffer
- Prior art date
Links
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 title claims abstract description 44
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 23
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 9
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 abstract description 11
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 abstract description 11
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 abstract description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 6
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 3-cholesterol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к лабораторной диагностике и может быть использовано для экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах (ХИК). Сущность изобретения состоит в том, что преципитат иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности из сыворотки крови человека готовят путем обработки ее буфером, содержащим 10%-ый ПЭГ 3350, в соотношении 1:3, инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Преципитат, содержащий ХИК, отделяют центрифугированием при 3100 g в течение 10 мин при 23°C, растворяют в буфере без ПЭГ, определяют содержание холестерина с использованием ферментативного набора и при уровне содержания ХИК свыше 8,4 мг/дл констатируют повышенный уровень. Изобретение позволяет повысить точность количественного определения ХИК, проводить широкие скрининговые исследования для выявления атеросклероза как на доклинической стадии, так и контролировать эффективность проводимой терапии. 2 табл.
Description
Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для определения холестерина в иммунных комплексах (ХИК) в сыворотке крови человека.
В настоящее время в клинической лабораторной практике отсутствуют доступные для рутинных исследований методы определения ХИК. Учитывая важную патогенетическую роль иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ммЛПНП), при атеросклерозе, остается актуальной разработка простых, доступных для лабораторных исследований способов определения ХИК [1, 4].
Известны способы определения ХИК в сыворотке крови преципитацией их 2,5%, 3,5% и 4% растворами полиэтиленгликоля с молекулярной массой 6000 (ПЭГ-6000). Агрегированные иммунные комплексы, содержащие множественно модифицированные ЛПНП (ммЛПНП), осаждают центрифугированием, промывают преципитат буфером, содержащим соответствующую концентрацию ПЭГ-6000 и определяют в преципитате холестерин после экстракции [2,5-7].
Недостатком приведенных способов является длительность процедуры, неполная преципитация иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности, и как следствие - низкие значения ХИК.
В качестве прототипа использован способ определения уровня циркулирующих иммунных комплексов с использованием полиэтиленгликоля с молекулярной массой 3350 [3].
Задачей настоящего изобретения является разработка простого способа экспресс-определения уровня холестерина в иммунных комплексах для рутинных исследований с высокой точностью и с минимальной затратой времени.
Эта задача решается тем, что специфическую преципитацию циркулирующих иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП (ЦИК-ммЛПНП), проводят путем обработки сыворотки крови человека буферным раствором, содержащим препарат ПЭГ-3350, инкубируют в течение 10 минут при комнатной температуре, затем образовавшиеся агрегаты ЦИК-ммЛПНП осаждают центрифугированием, декантируют, полученный преципитат растворяют в буфере без ПЭГ-3350 и определяют содержание холестерина в преципитированных иммунных комплексах с использованием ферментативного набора. При уровне содержания ХИК свыше 8,4 мг/дл констатируют повышенный уровень.
Способ определения ХИК включает:
1. Буфер-1 для преципитации ХИК содержит 10% полиэтиленгликоль с молекулярной массой 3350 в 0,01 М трис-HCl-буфере с pH 7,4, содержащем 0,15 М NaCl;
2. Буфер-2 для растворения преципитата ХИК - 0,01 М Трис-HCl-буфер, pH 7,4, содержащий 0,15 М NaCl.
Способ экспресс-определения холестерина иммунных комплексов осуществляют следующим образом. Проводят забор крови натощак из локтевой вены человека, отделяют сыворотку и определяют уровень холестерина в иммунных комплексах путем обработки сыворотки крови Буфером-1 для преципитации ХИК в соотношении 1:3, инкубацией в течение 10 мин при комнатной температуре, осаждением преципитата центрифугированием, декантацией и последующим растворением его в исходном объеме Буфера-2. Содержание ХИК определяют с использованием ферментативного набора «Холестерин» и при содержании ХИК свыше 8,4 мг/дл констатируют повышенный уровень.
Комплемент-связывающую способность иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные ЛПНП, исследуют гемолитическим методом с использованием комплемента морской свинки, стандартизованных (1,5×108 кл/мл) эритроцитов барана, сенсибилизированных кроличьими антителами (EA), в вероналовом солевом буфере, содержащем 0,5 мМ MgCl2 и 0,15 мМ CaCl2 (VBS2+).
Содержание IgG в составе преципитата определяют с использованием реакции торможения гемагглютинации (РТГА) эритроцитов барана, сенсибилизированных гетерофильными антителами человека, антителами барана против IgG человека. В качестве стандарта используют препарат человеческого IgG с концентрацией 1 мг/мл.
Этап 1. Подбор оптимальной концентрации ПЭГ-3350 для осаждения циркулирующих иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные ЛПНП (ЦИК-ммЛПНП) из пулированной сыворотки крови здоровых доноров.
1.1. Приготовление преципитата сыворотки крови при возрастающих концентрациях ПЭГ-3350. К 100 мкл пулированной сыворотки крови здоровых доноров добавляют от 100 до 500 мкл раствора Буфера-1, тщательно перемешивают и инкубируют 10 мин при комнатной температуре. Образовавшиеся агрегаты иммунных комплексов осаждают центрифугированием при 3100 g в течение 5 мин при 23°C. Супернатант тщательно декантируют и преципитат растворяют в 100 мкл Буфера-2.
1.2. Определение холестерина в ПЭГ-преципитатах. В преципитатах после растворения в 100 мкл Буфера-2 определяют содержание холестерина с использованием наборов реагентов фирмы «ЗАО Эколаб» (Россия). Полученные результаты представлены в таблице 1.
1.3. Определение степени связывания комплемента морской свинки циркулирующими иммунными комплексами в преципитатах, приготовленных при возрастающих концентрациях ПЭГ-3350. К 10 мкл растворов преципитатов, разбавленных в соотношении 1:99 буфером VBS2+ добавляют 20 мкл раствора разбавленного 1:19 раствора комплемента морской свинки. Общий объем доводят до 0,3 мл буфером VBS2+,и инкубируют 20 мин при 37°C. После предварительной инкубации добавляют 200 мкл EA и повторно инкубируют 30 мин при 37°C. После 30-минутной инкубации реакцию останавливают добавлением 2,5 мл холодного раствора 0,15 М NaCl, центрифугируют и определяют величину лизиса эритроцитов по выходу гемоглобина в супернатант. Контрольная проба не содержит преципитата иммунных комплексов. Пониженный гемолиз в опытных пробах по сравнению с контролем свидетельствует о наличии связывания комплемента циркулирующими иммунными комплексами. Степень лизиса эритроцитов (Y) определяют по формуле:
Y(%)=[(X-R)/(H-R)×100],
где H, R и X - величины оптической плотности A405 в гемолитических системах контрольной пробы, в контроле спонтанного лизиса EA и в опытной пробе, соответственно. Степень связывания комплемента (ССК) определяют по формуле:
CCK(%)=100-Y.
Полученные результаты представлены в таблице 1.
1.4. Определение содержания IgG в ПЭГ-преципитате.
Предварительно титруют преципитаты иммунных комплексов, разведенные 1:99, на 12 лунок в 96-луночных круглодонных иммунологических плашках. В качестве стандарта титруют препарат IgG с исходной концентрацией 1 мг/мл. После титрования преципитатов и стандартного препарата IgG добавляют равный объем разбавленного раствора антител против IgG человека, содержащего 4 гемагглютинирующие единицы (ГАЕ), т.е. препарат антител был разбавлен 1:8100. Тщательно перемешивают и добавляют равный объем 1% суспензии иммунных комплексов эрироцитов барана, сенсибилизированных антителами человека (EAч), тщательно перемешивают и инкубируют в течение 1-1,5 ч при комнатной температуре. После инкубации определяют для каждой пробы лунку, где наблюдается торможение гемагглютинации. Расчеты проводят с использованием результатов по торможению гемагглютинации стандартным раствором IgG человека. Полученные данные представлены в таблице 1.
Из данных, представленных в таблице 1, следует, что при концентрации от 7,5% до 8,0% ПЭГ-3350 в сыворотке наблюдается агрегация иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины (ммЛПНП). Дальнейшее увеличение концентрации ПЭГ-3350 выше 8,0% в системе приводит к агрегации и преципитации нативных ЛПНП. Сохранение степени связывания комплемента на уровне 80% и возрастание концентрации холестерина в преципитатах при увеличении концентрации ПЭГ-3350 (более 7,5%) свидетельствует, с одной стороны, о полной агрегации иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП, с другой стороны, об агрегации нативных ЛПНП, которые не обладают комплемент связывающей способностью. Наличие IgG в преципитахах, приготовленных в присутствии ПЭГ, свидетельствует об иммунных комплексах, содержащих ммЛПНП, также как постоянный уровень IgG в преципитатах, полученных при концентрации ПЭГ от 7,5% и выше, свидетельствует о специфической преципитации иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП.
Таким образом, при концентрации ПЭГ-3350 от 7,5% до 8,0% наблюдается избирательная агрегация и преципитация иммунных комплексов, содержащих ммЛПНП, и не наблюдается агрегация и преципитация как нативных ЛПНП, так и свободных IgG.
Этап 2. Определение содержания холестерина в иммунных комплексах в сыворотках крови доноров и неврологических больных с атеросклерозом каротидных артерий.
2.1. Приготовление преципитата сыворотки крови при условиях 7,5% ПЭГ-3350. К 100 мкл сыворотки крови больных с атеросклерозом каротидных артерий и относительно здоровых доноров добавляли 300 мкл буфера-1 и инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Образовавшиеся агрегаты иммунных комплексов осаждали центрифугированием при 23°C в течение 5 мин при 3100 g. Супернатант декантировали и осадок растворяли в 100 мкл буфера-2. Полученные результаты представлены в таблице 2.
Как видно из данных, представленных в таблице 2, в группе относительно здоровых доноров средний уровень холестерина в иммунных комплексах составил 6,2±1,7 мг/дл при колебаниях от 2,3 до 8,4 мг/дл. Следовательно, уровень ХИК до 8,4 мг/дл можно предварительно считать нормальным уровнем у здоровых людей при использовании условий, разработанных в предлагаемом способе. В группе неврологических больных с инструментально подтвержденным атеросклерозом каротидных артерий в 100% случаев определяется повышенный уровень ХИК, и колебания составили от 11,0 до 38,0 мг/дл.
Таким образом, способ позволяет повысить точность количественного определения холестерина в циркулирующих иммунных комплексах сыворотки крови человека. Выявление повышенного уровня ХИК при широких скрининговых обследованиях может быть предиктором атеросклероза на доклинической стадии. Доступность реагентов и простота способа определения ХИК в лабораторной практике позволит проводить углубленное исследование патогенеза атеросклеротических заболеваний. С другой стороны, реализация изобретения позволит как контролировать эффективность проводимого лечения, так и выявлять доклинические состояния атеросклероза.
Литература
1. Собенин И.А., Карагодин В.П., Мельниченко А.А., Орехов А.Н. Холестерин иммунных комплексов как индикатор атеросклероза // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2012. - №3. - С.99-103.
2. Тертов В.В., Качарава А.Г., Саядян Х.С.и др. Холестеринсодержащие циркулирующие иммунные комплексы - компонент сыворотки крови больных с ишемической болезнью сердца, обуславливающий ее атерогенность // Кардиология. - 1989. - Т.29, №8. - С.35-38.
3. Шойбонов Б.Б., Борголов В.М., Баронец В.Ю., Панченко Л.Ф., Кубатиев А.А. Способ и тест-система определения циркулирующих иммунных комплексов // Патент РФ №2452962 от 10.06.2012 г. Бюл. №16.
4. Burut D.F.P., Karim Y., Ferns G.A.A. The Role of Immune Complexes in Atherosclerosis // Angiology. - 2010. - V.61, №7. - P.679-689.
5. Lopes-Virella M.F., Brent McHenry M., Lipsitz S., et al. Immune complexes containing modified lipoproteins are related to the progression of internal carotid intima-media thickness in patients with type 1 diabetes // Atherosclerosis. - 2007. - V.190. - P.359-369.
6. Szondy E., Mezey Z., Fust G. et al. Serial measurement of circulating immune complexes in myocardial infarction // Br Heart J. - 1981. - V.46, - P.93-98.
7. Virella G., Carter R.E., Saad A., et al. Distribution of IgM and IgG antibodies to oxidiesed LDL in immune complexes isolated from patients with type 1 diabetes and its relationship with nephropathy // Clin. Immunol. - 2008. - V.127, №3. - P.394-400.
| Таблица 1 | |||||||||
| Содержание холестерина, IgG в преципитатах и степень связывания комплемента (CCK) иммунными комплексами, содержащими ммЛПНП, приготовленными из пулированной сыворотки крови доноров, в зависимости от концентрации ПЭГ-3350 | |||||||||
| Концентрация ПЭГ-3350, % | 5 | 6 | 6,7 | 7,1 | 7,5 | 7,8 | 8,0 | 8,2 | 8,3 |
| Холестерин, мг/дл | 3,0 | 6,9 | 9,3 | 11,0 | 13,1 | 14,2 | 14,5 | 20,0 | 21,8 |
| IgG мг/мл | 0,163 | 0,324 | 0,648 | 0,648 | 0,648 | 0,648 | 0,648 | 0,648 | 0,648 |
| CCK, % | 19 | 20 | 61 | 69 | 80 | 80 | 77 | 87 | 85 |
| Таблица 2 | |||
| Содержание холестерина иммунных комплексов (ХИК) в сыворотках крови доноров и неврологических больных | |||
| Доноры | ХИК, мг/дл | Больные | ХИК, мг/дл |
| 1 | 5,2 | 1 | 11,0 |
| 2 | 6,4 | 2 | 26,1 |
| 3 | 2,3 | 3 | 20,9 |
| 4 | 4,5 | 4 | 15,9 |
| 5 | 9,2 | 5 | 18,5 |
| 6 | 6,4 | 6 | 20,4 |
| 7 | 5,0 | 7 | 10,6 |
| 8 | 6,0 | 8 | 24,9 |
| 9 | 5,3 | 9 | 21,0 |
| 10 | 5,7 | 10 | 18,3 |
| 11 | 6,8 | 11 | 20,6 |
| 12 | 7,8 | 12 | 31,3 |
| 13 | 8,4 | 13 | 10,6 |
| 14 | 6,2 | 14 | 14,0 |
| 15 | 7,4 | 15 | 38,0 |
| M±m | 6,2±1,7 | M±m | 20,1±7,7 |
Claims (1)
- Способ экспресс-определения уровня холестерина в иммунных комплексах (ХИК), включающий приготовление преципитата из сыворотки крови человека в растворе полиэтиленгликоля, его центрифугирование, растворение, определение содержания холестерина с использованием стандартных ферментативных наборов, отличающийся тем, что преципитат готовят путем обработки сыворотки крови буфером для преципитации ХИК, содержащим 10% ПЭГ 3350, в соотношении 1:3, инкубацией в течение 10 мин при комнатной температуре, центрифугировании при 3100 g в течение 10 мин при 23°C, и при уровне содержания ХИК свыше 8,4 мг/дл констатируют повышенный уровень.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013148042/15A RU2538685C1 (ru) | 2013-10-29 | 2013-10-29 | Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах |
| PCT/RU2014/000738 WO2015065238A1 (ru) | 2013-10-29 | 2014-10-01 | Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013148042/15A RU2538685C1 (ru) | 2013-10-29 | 2013-10-29 | Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2538685C1 true RU2538685C1 (ru) | 2015-01-10 |
Family
ID=53004688
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013148042/15A RU2538685C1 (ru) | 2013-10-29 | 2013-10-29 | Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2538685C1 (ru) |
| WO (1) | WO2015065238A1 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110124119A1 (en) * | 2009-09-18 | 2011-05-26 | Lopes-Virella Maria F | Methods For Assessing Modified LDL Immune Complexes in Subjects Having or at Risk of Coronary Artery Disease |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2413952C2 (ru) * | 2009-02-02 | 2011-03-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ определения фракций модифицированных липопротеинов крови |
| RU2452962C2 (ru) * | 2010-08-24 | 2012-06-10 | Учреждение Российской Академии Медицинских Наук Нии Общей Патологии И Патофизиологии Рамн | Способ и тест-система определения циркулирующих иммунных комплексов |
-
2013
- 2013-10-29 RU RU2013148042/15A patent/RU2538685C1/ru not_active IP Right Cessation
-
2014
- 2014-10-01 WO PCT/RU2014/000738 patent/WO2015065238A1/ru not_active Ceased
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110124119A1 (en) * | 2009-09-18 | 2011-05-26 | Lopes-Virella Maria F | Methods For Assessing Modified LDL Immune Complexes in Subjects Having or at Risk of Coronary Artery Disease |
Non-Patent Citations (2)
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2015065238A1 (ru) | 2015-05-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Oni et al. | Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria: evidence for monoclonal origin of abnormal red cells | |
| Larcom et al. | Erythrocytes in urinary sediment: Identification and normal limits: With a note on the nature of granular casts | |
| CN108828225A (zh) | 血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法 | |
| Obaid et al. | Red blood cells alloimmunization and autoimmunization among transfusion-dependent beta-thalassemia patients in Alexandria province, Egypt | |
| RU2437098C1 (ru) | Способ экспресс-определения атерогенности крови (варианты) | |
| RU2444014C1 (ru) | Среда и способ определения множественно модифицированных липопротеинов сыворотки крови человека | |
| RU2530627C2 (ru) | Экспресс-способ определения холестерина в иммунных комплексах | |
| RU2538685C1 (ru) | Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах | |
| RU2549467C1 (ru) | Способ определения атерогенности иммунных комплексов | |
| RU2452962C2 (ru) | Способ и тест-система определения циркулирующих иммунных комплексов | |
| Cooper et al. | Family history of hypertension and red cell cation transport in high school students | |
| Danaei et al. | Evaluation of G6PD deficiency in malaria patients in the south-east of Iran | |
| RU2549466C1 (ru) | Экспресс-способ определения атерогенности иммунных комплексов сыворотки крови человека | |
| Kwansa‐Bentum et al. | Elevation of free triiodothyronine (fT3) levels by Plasmodium falciparum independent of thyroid stimulating hormone (TSH) in children with uncomplicated malaria | |
| RU2526820C1 (ru) | Способ титрования групповых антител системы аво | |
| RU2137420C1 (ru) | Способ выявления "группы опухолевого риска" и скрининга ранних стадий опухолевых заболеваний | |
| RU2632118C1 (ru) | Способ выделения и исследования атерогенности иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины | |
| Dohan et al. | Haematological and Demographic Study in Children Infected with Enterobiasis in Al Diwaniyah Province, Iraq | |
| RU2680848C1 (ru) | Способ оценки характера аутоиммунной реакции организма человека на множественно модифицированные липопротеины низкой плотности в литическом тесте | |
| Cassidy et al. | Calcium and magnesium contents of gastrointestinal tissues in six species | |
| RU2343484C2 (ru) | Способ определения циркулирующих иммунных комплексов | |
| RU2612010C1 (ru) | Способ определения угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, подавляющей активность SH-групп в эритроцитах и приводящей к снижению оксигенации гемоглобина | |
| US20240118210A1 (en) | Ffn fluorescence release assay (ffra) and methods of using same | |
| Rahman et al. | Serum erythropoietin level in chronic kidney disease patients with anemia: A baseline study at Chittagong medical college, Chittagong, Bangladesh | |
| RU2422831C1 (ru) | Экспресс-способ определения нарушения иммунного статуса организма человека |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181030 |