RU2531945C2 - Medication against hiv/aids transmission through sexual contact - Google Patents
Medication against hiv/aids transmission through sexual contact Download PDFInfo
- Publication number
- RU2531945C2 RU2531945C2 RU2013103411/15A RU2013103411A RU2531945C2 RU 2531945 C2 RU2531945 C2 RU 2531945C2 RU 2013103411/15 A RU2013103411/15 A RU 2013103411/15A RU 2013103411 A RU2013103411 A RU 2013103411A RU 2531945 C2 RU2531945 C2 RU 2531945C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hiv
- drug
- medication
- cells
- nas
- Prior art date
Links
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 title claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 52
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 51
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 title description 5
- 239000004021 humic acid Substances 0.000 claims description 23
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 claims description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 18
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 14
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 13
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 13
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 12
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 11
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 239000003077 lignite Substances 0.000 claims description 5
- 230000005582 sexual transmission Effects 0.000 claims description 4
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019841 confectionery fat Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 101100347993 Caenorhabditis elegans nas-1 gene Proteins 0.000 description 28
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 13
- 230000003641 microbiacidal effect Effects 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 12
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 12
- 229940124561 microbicide Drugs 0.000 description 12
- QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2,3-dicarboxylic acid Chemical compound C1C2C=CC1C(C(=O)O)C2(C(O)=O)[N+]([O-])=O QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 7
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 239000002855 microbicide agent Substances 0.000 description 7
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 6
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 6
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 6
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 229920004918 nonoxynol-9 Polymers 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 229960004556 tenofovir Drugs 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- FBWNMEQMRUMQSO-UHFFFAOYSA-N tergitol NP-9 Chemical compound CCCCCCCCCC1=CC=C(OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO)C=C1 FBWNMEQMRUMQSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 3
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229940087419 nonoxynol-9 Drugs 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 229940079920 digestives acid preparations Drugs 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920000847 nonoxynol Polymers 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO)C=C1 HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMXDTPBZWZGMMO-UHFFFAOYSA-N 4-(2-methyl-5-propan-2-ylcyclohexyl)phenol Chemical compound C1C(C(C)C)CCC(C)C1C1=CC=C(O)C=C1 NMXDTPBZWZGMMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILAYIAGXTHKHNT-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(2,4,6-trimethyl-phenylamino)-pyrimidin-2-ylamino]-benzonitrile Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1NC1=CC=NC(NC=2C=CC(=CC=2)C#N)=N1 ILAYIAGXTHKHNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010089814 Plant Lectins Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N adenosine monophosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(OP(O)(O)=O)C1O LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000006364 cellular survival Effects 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229960001112 menfegol Drugs 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229940042402 non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002726 nonnucleoside reverse transcriptase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229940098514 octoxynol-9 Drugs 0.000 description 1
- 229920002114 octoxynol-9 Polymers 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000003726 plant lectin Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003860 topical agent Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, иммунологии, гинекологии, фармакологии и биотехнологии, и может быть использовано при создании вагинальных и ректальных микробицидов - препаратов местного применения, предотвращающих передачу возбудителя СПИДа (вируса иммунодефицита человека, ВИЧ) половым путем.The invention relates to medicine, namely to virology, immunology, gynecology, pharmacology and biotechnology, and can be used to create vaginal and rectal microbicides - topical preparations that prevent the transmission of the AIDS pathogen (human immunodeficiency virus, HIV) through sexual contact.
СПИД представляет собой заболевание со 100%-ной летальностью, существующая терапия не приводит к удалению вируса из организма и излечению, а потому требует пожизненного применения, токсична, приводит к селекции резистентных к лечению форм вируса. Характерной особенностью ВИЧ-инфекции/СПИДа, важной для социальных, экономических и демографических последствий, является то, что, в отличие от рака и сердечно-сосудистых заболеваний, ВИЧ-инфекция поражает, главным образом, молодое трудоспособное сексуально активное население.AIDS is a disease with a 100% mortality rate, the existing therapy does not remove the virus from the body and cure, and therefore requires lifelong use, toxic, leads to the selection of treatment-resistant forms of the virus. A characteristic feature of HIV / AIDS, which is important for social, economic and demographic consequences, is that, unlike cancer and cardiovascular diseases, HIV infection affects mainly young, able-bodied sexually active people.
Половой путь является основным путем передачи ВИЧ-инфекции [Доклад ЮНЭЙДС, 2010. Доклад ЮНЭЙДС о глобальной эпидемии СПИДа, 2010, UNAIDS Report on the global AIDS epidemic-2010, www/unaids.org/ru]. На половые контакты в мире приходится более 80% новых ВИЧ-инфекций [Доклад ЮНЭЙДС о глобальной эпидемии СПИДа, 2010, UNAIDS Report on the global AIDS epidemic-2010, www/unaids.org/ru]. В связи с этим среди комплекса мер по противодействию эпидемии ВИЧ-инфекции/СПИДа важнейшими являются профилактические меры, направленные на пресечение полового пути передачи. К этим мерам относятся разработка и использование микробицидов - средств местного применения для предотвращения передачи ВИЧ-инфекции половым путем.The sexual route is the main route of HIV transmission [UNAIDS Report, 2010. UNAIDS Report on the Global AIDS Epidemic, 2010, UNAIDS Report on the global AIDS epidemic-2010, www / unaids.org / en]. More than 80% of new HIV infections account for worldwide sex [UNAIDS Report on the global AIDS epidemic, 2010, UNAIDS Report on the global AIDS epidemic-2010, www / unaids.org / ru]. In this regard, among the complex of measures to counteract the HIV / AIDS epidemic, the most important are preventive measures aimed at suppressing the sexual transmission. These measures include the development and use of microbicides, topical agents to prevent sexual transmission of HIV.
Известны неспецифические микробициды, включающие субстанции, действующие как спермициды или поверхностные дезинфектанаты, такие, как Nonoxynol-9 (N-9), octoxynol-9, benzalkonium chloride, menfegol [WHO/CONRAD Technical Consultation on Nonoxynol-9, WHO, Geneva, 9-10 - October 2001, Summary Report.WHO/CONRAD, 2001]. Однако клинические испытания ноноксинола показали, что он не способен препятствовать трансмиссии ВИЧ, поскольку ноноксинол вызывает физические повреждения влагалищного эпителия [Phillips D.M., et al, 2000 Phillips D.M., Taylor C.L., Zacharopoulos V.R., Maguire R.A. Nonoxinol-9 causes rapid exfoliation of sheets of rectal epithelium. Contraception, 2000 Sep; 62(3): 149-54]. Это привело к более частому заражению ВИЧ в группе женщин, применяющих N-9, по сравнению с контрольной группой [WHO/CONRAD 2001, Summary Report WHO/CONRAD Technical Consultation on Nonoxynol-9, WHO, Geneva, 9-10 - October 2001, Summary Report. WHO/CONRAD, 2001].Non-specific microbicides are known including substances acting as spermicides or surface disinfectants such as Nonoxynol-9 (N-9), octoxynol-9, benzalkonium chloride, menfegol [WHO / CONRAD Technical Consultation on Nonoxynol-9, WHO, Geneva, 9 -10 - October 2001, Summary Report.WHO / CONRAD, 2001]. However, clinical trials of nonoxynol have shown that it is not able to inhibit HIV transmission, since nonoxynol causes physical damage to the vaginal epithelium [Phillips D.M., et al, 2000 Phillips D.M., Taylor C.L., Zacharopoulos V.R., Maguire R.A. Nonoxinol-9 causes rapid exfoliation of sheets of rectal epithelium. Contraception, 2000 Sep; 62 (3): 149-54]. This led to a more frequent HIV infection in the group of women using N-9 compared to the control group [WHO / CONRAD 2001, Summary Report WHO / CONRAD Technical Consultation on Nonoxynol-9, WHO, Geneva, 9-10 - October 2001, Summary Report. WHO / CONRAD, 2001].
Известны экспериментальные микробициды на основе специфических антиретровирусных препаратов, например, аналога аденозинмонофосфата, Тенофовира. Обычно такие препараты применяются перорально в ходе специфической высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ). Клинические исследования Тенофовира (CAPRISA-004, фаза IIb) показали, что вагинальный микробицид в форме 1%-ного Тенофовира (TDF) оказался способен на 39% снизить число случаев заражения в группе из 889 женщин из ЮАР, входящих в группу высокого риска инфицирования [Abdool Karim Q. et al., 2010 Abdool Karim Q, Abdool Karim SS, Frohlich JA, Grobler AC, Baxter C, Mansoor LE, Kharsany AB, Sibeko S, Mlisana KP, Omar Z, Gengiah TN, Maarschalk S, Arulappan N, Mlotshwa M, Morris L, Taylor D; CAPRISA 004 Trial Group. Effectiveness and Safety of Tenofovir Gel, an Antiretroviral Microbicide, for the Prevention of HIV Infection in Women // Science. 2010; 329(5996): 1168-1174. doi:10.1126/science.1193748]. Однако в процессе проведения других клинических испытаниях подобного препарата - VOICE - часть исследований, в которых проводились испытания 1%-ного геля Тенофовира - была досрочно прекращена, поскольку не была обнаружена разница по числу новых случаев заражения по сравнению с группой плацебо [http://data.avac.org/TrialDetailReport.aspx?TrialID=141]. Потенциальной опасностью использования микробицидов на основе специфических антиретровирусных препаратов является возможность образования лекарственно устойчивых форм вируса.Experimental microbicides based on specific antiretroviral drugs, for example, an analog of adenosine monophosphate, Tenofovir, are known. Typically, such drugs are administered orally during specific highly active antiretroviral therapy (HAART). Clinical studies of Tenofovir (CAPRISA-004, phase IIb) showed that a vaginal microbicide in the form of 1% Tenofovir (TDF) was able to reduce the number of infections in a group of 889 women from South Africa at high risk of infection by 39% [ Abdool Karim Q. et al., 2010 Abdool Karim Q, Abdool Karim SS, Frohlich JA, Grobler AC, Baxter C, Mansoor LE, Kharsany AB, Sibeko S, Mlisana KP, Omar Z, Gengiah TN, Maarschalk S, Arulappan N, Mlotshwa M, Morris L, Taylor D; CAPRISA 004 Trial Group. Effectiveness and Safety of Tenofovir Gel, an Antiretroviral Microbicide, for the Prevention of HIV Infection in Women // Science. 2010; 329 (5996): 1168-1174. doi: 10.1126 / science.1193748]. However, in the course of other clinical trials of such a drug - VOICE - part of the studies that tested the Tenofovir 1% gel - was terminated early because there was no difference in the number of new infections compared with the placebo group [http: // data.avac.org/TrialDetailReport.aspx?TrialID=141]. The potential danger of using microbicides based on specific antiretroviral drugs is the possibility of drug-resistant forms of the virus.
В патенте US 2004/0137085 A1 [US Patent, МПК А61К 35/78, U.S. Cl. 424/725, опубл. 15 июля 2004 г.] предложено применение природных коммерчески доступных препаратов гуминовой кислоты, выделенных из почвы, для лечения ВИЧ-инфекции благодаря показанному автором анти-ВИЧ-действию in vitro, действию, направленному против образования синцитиев и/или иммуностимулирующему действию препарата. В последнем случае показано усиление под действием препарата синтеза интерлейкина-2 (IL-2) лимфоцитами периферической крови человека, стимулированными in vitro растительными лектинами (фитогемагглютинином или конканавалином А). Обсуждается метод подавления ВИЧ-инфекции при контакте лейкоцитов ВИЧ-инфицированного человека с препаратом гуминовой кислоты, метод иммуностимуляции IL-2, метод усиления иммунного ответа на вакцинацию с использованием гуминовой кислоты в качестве адъюванта при вакцинации пациента с ВИЧ-инфекцией или СПИДом или пациента со сниженной функцией иммунной системы. В качестве предпочтительного способа введения обсуждается внутривенное введение препарата, хотя не исключаются и другие методы, например, пероральный, вагинальный и ректальный и внутримышечный. Однако использование препаратов гуминовой кислоты в качестве активной субстанции микробицида в виде суппозитория не рассматривается.US 2004/0137085 A1 [US Patent, IPC A61K 35/78, U.S. Cl. 424/725, publ. July 15, 2004] proposed the use of natural commercially available humic acid preparations isolated from the soil for the treatment of HIV infection due to the in vitro anti-HIV action shown by the author, the action against the formation of syncytia and / or the immunostimulating effect of the drug. In the latter case, an increase in the synthesis of interleukin-2 (IL-2) by human peripheral blood lymphocytes stimulated in vitro by plant lectins (phytohemagglutinin or concanavalin A) was shown to be enhanced. A method for suppressing HIV infection by contacting an HIV-infected person’s white blood cells with a humic acid preparation is discussed, an IL-2 immunostimulation method, a method of enhancing the immune response to vaccination using humic acid as an adjuvant when vaccinating a patient with HIV infection or AIDS or a patient with reduced function of the immune system. As a preferred route of administration, intravenous administration of the drug is discussed, although other methods, such as oral, vaginal and rectal and intramuscular, are not excluded. However, the use of humic acid preparations as the active substance of a microbicide in the form of a suppository is not considered.
Наиболее близким к настоящему изобретению является документ ЕА 11298 от 27.02.2009, где раскрыто лекарственное микробицидное средство против передачи или заражения ВИЧ, которые происходят через половую связь при интимном контакте партнеров, которое может быть выполнено в виде суппозитория, и содержит фармакологически активное вещество (4-[[4-[(2,4,6-триметилфенил)амино]-2-пиримидинил]амино]бензонитрила) и фармацевтически приемлемый носитель. Способ профилактики заражения ВИЧ заключается во введении указанного средства интравагинально за 15-20 мин до полового контакта. Однако используемое в этом патенте средство включает синтетическое фармакологически активное вещество, которое наряду с микробицидным действием может вызывать нежелательные побочные эффекты. Активная субстанция является ненуклеозидным ингибитором обратной транскриптазы, представляет собой лекарственное средство для специфической антиретровирусной терапии, при применении такого препарата для профилактики (как и для терапии) существует значительный риск образования лекарственно устойчивых форм вируса, причем возникновение резистентности является неизбежным следствием монотерапии.Closest to the present invention is document EA 11298 of 02.27.2009, which discloses a microbicidal drug against HIV transmission or infection that occurs through sexual intercourse during intimate contact of partners, which can be made in the form of a suppository, and contains a pharmacologically active substance (4 - [[4 - [(2,4,6-trimethylphenyl) amino] -2-pyrimidinyl] amino] benzonitrile) and a pharmaceutically acceptable carrier. A method for the prevention of HIV infection is the introduction of the indicated agent intravaginally 15-20 minutes before sexual contact. However, the agent used in this patent includes a synthetic pharmacologically active substance, which, along with a microbicidal action, can cause undesirable side effects. The active substance is a non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor, it is a drug for specific antiretroviral therapy, when using such a drug for prevention (as for therapy), there is a significant risk of the formation of drug-resistant forms of the virus, and the emergence of resistance is an unavoidable consequence of monotherapy.
Таким образом, технический результат, получаемый при реализации настоящего изобретения, состоит в создании безопасного микробицида с анти-ВИЧ-активностью - средства против передачи ВИЧ/СПИД половым путем на основе веществ, выделенных из природных источников.Thus, the technical result obtained by the implementation of the present invention is to create a safe microbicide with anti-HIV activity - a means against sexual transmission of HIV / AIDS based on substances isolated from natural sources.
Для решения поставленной задачи создания анти-ВИЧ-микробицида используются суппозитории, активной субстанцией которых является средство с анти-ВИЧ-активностью - фракция гуминовых кислот, выделенных из окисленного бурого угля.To solve the task of creating an anti-HIV microbicide, suppositories are used, the active substance of which is an agent with anti-HIV activity - a fraction of humic acids isolated from oxidized brown coal.
Указанный технический результат достигается тем, что микробицид содержит в качестве активной субстанции с анти-ВИЧ-активностью фракцию гуминовых кислот, выделенных из окисленного бурого угля, и фармакологически приемлемую основу, а в качестве основы содержит масло какао или кондитерский жир и эмульгатор. Еще одним из аспектов изобретения является способ профилактики ВИЧ-инфекции путем введения суппозитория, отличающийся тем, что суппозиторий, содержащий гуминовое вещество с анти-ВИЧ-активностью, вводят интравагинально за 30 мин до полового контакта. Изобретение иллюстрируется следующим примером.The specified technical result is achieved in that the microbicide contains, as an active substance with anti-HIV activity, a fraction of humic acids isolated from oxidized brown coal and a pharmacologically acceptable base, and contains cocoa butter or confectionery fat and an emulsifier as the base. Another aspect of the invention is a method for preventing HIV infection by administering a suppository, characterized in that the suppository containing a humic substance with anti-HIV activity is administered intravaginally 30 minutes before sexual contact. The invention is illustrated by the following example.
Фракцию гуминовых кислот выделяют из высоко окисленного бурого угля путем добавления раствора гидроксида натрия и с последующим прогреванием на кипящей водяной бане. После охлаждения содержимое центрифугируют, раствор декантируют, нерастворившийся остаток промывают раствором гидроксида натрия и вновь центрифугируют, собирая основной экстракт и промывные воды в один приемник. К полученному раствору добавляют раствор концентрированной соляной кислоты до pH 2 для осаждения гуминовых кислот. Образовавшийся осадок гуминовых кислот отделяют центрифугированием и обессоливают с помощью диализа. Полученный препарат гуминовых кислот высушивают при 80°C в сушильном шкафу.The humic acid fraction is isolated from highly oxidized brown coal by adding sodium hydroxide solution and then heating in a boiling water bath. After cooling, the contents are centrifuged, the solution is decanted, the insoluble residue is washed with sodium hydroxide solution and centrifuged again, collecting the main extract and washings in one receiver. To the resulting solution was added a solution of concentrated hydrochloric acid to pH 2 to precipitate humic acids. The resulting precipitate of humic acids is separated by centrifugation and desalted using dialysis. The resulting preparation of humic acids is dried at 80 ° C in an oven.
Готовят раствор сухого препарата в воде с концентрацией 10 мг/мл, стерилизуют фильтрацией через фильтр 0,25 mµ, готовят разведения и используют для определения цитотоксичности и анти-ВИЧ-активности.A solution of the dry preparation in water with a concentration of 10 mg / ml is prepared, sterilized by filtration through a 0.25 mµ filter, dilutions are prepared and used to determine cytotoxicity and anti-HIV activity.
Оценку цитотоксичности и анти-ВИЧ-активности проводят в культуре in vitro. Цитотоксические свойства препаратов определяют колориметрическим методом MTT по Mossman и по результатам окрашивания трипановым синим.Assessment of cytotoxicity and anti-HIV activity is carried out in an in vitro culture. The cytotoxic properties of the preparations are determined by the MTT colorimetric method according to Mossman and by the results of trypan blue staining.
Анти-ВИЧ-активность препарата определяют по ингибированию развития инфекции в клетках, зараженных ВИЧ. Клетки человека, чувствительные к ВИЧ, инкубируют in vitro с различными концентрациями препарата (фракции гуминовых кислот), а затем заражают вирусом. Уровень ингибирования инфекции в опытных образцах по отношению к контролю инфекции (без препарата) определяют с помощью p24 ИФА (иммуноферментного анализа для определения содержания основного белка вириона ВИЧ1 - маркера ВИЧ-инфекции капсидного белка р24).Anti-HIV activity of the drug is determined by inhibiting the development of infection in cells infected with HIV. HIV-sensitive human cells are incubated in vitro with various drug concentrations (humic acid fractions) and then infected with the virus. The level of infection inhibition in experimental samples in relation to infection control (without drug) is determined using p24 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay to determine the content of the main protein of the virion HIV1 - a marker of HIV infection of the capsid protein p24).
Ниже представлены примеры реализации описываемого изобретения, где в примере 1 показан способ получения фракции гуминовых кислот, в примерах 2-6 показаны результаты определения цитотоксических свойств и анти-ВИЧ-активности, а в примере 7 описано приготовление суппозиториев, содержащих препарат фракции гуминовых кислот.The following are examples of the implementation of the described invention, where Example 1 shows a method for producing a fraction of humic acids, Examples 2-6 show the results of determining cytotoxic properties and anti-HIV activity, and Example 7 describes the preparation of suppositories containing a preparation of a fraction of humic acids.
Здесь и далее препарат обозначен как HAC-1 (от humic acid coal).Hereinafter, the drug is designated as HAC-1 (from humic acid coal).
Примеры конкретного осуществления изобретенияExamples of specific embodiments of the invention
Пример 1. Выделение фракции гуминовых кислот (НАС-1) из высоко окисленного бурого угляExample 1. The selection of the fraction of humic acids (NAS-1) from highly oxidized brown coal
Навеску угля (2-5 г) помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл, приливают 100 мл 1%-го раствора гидроксида натрия и нагревают в течение 2 часов на кипящей водяной бане (при температуре 80°C). После охлаждения содержимое колбы центрифугируют, раствор декантируют, нерастворившийся остаток промывают один - два раза 100 мл 1%-ого раствора гидроксида натрия и вновь центрифугируют, собирая основной экстракт и промывные воды в один приемник. К полученному раствору добавляют раствор концентрированной соляной кислоты до pH 2 для осаждения гуминовых кислот. Образовавшийся осадок гуминовых кислот отделяют центрифугированием и обессоливают с помощью диализа. Полученный препарат гуминовых кислот высушивают при 80°C в сушильном шкафу.A portion of coal (2-5 g) is placed in a conical flask with a capacity of 250 ml, 100 ml of a 1% sodium hydroxide solution are poured and heated for 2 hours in a boiling water bath (at a temperature of 80 ° C). After cooling, the contents of the flask are centrifuged, the solution is decanted, the insoluble residue is washed once or twice with 100 ml of 1% sodium hydroxide solution and centrifuged again, collecting the main extract and washing water in one receiver. To the resulting solution was added a solution of concentrated hydrochloric acid to pH 2 to precipitate humic acids. The resulting precipitate of humic acids is separated by centrifugation and desalted using dialysis. The resulting preparation of humic acids is dried at 80 ° C in an oven.
Пример 2. Определение цитотоксичности препарата НАС-1 Example 2. Determination of cytotoxicity of the drug NAS-1
Цитотоксическое действие препарата оценивают, сравнивая жизнеспособность клеток в присутствии различных доз препарата с жизнеспособностью клеток без препарата. Клетки вносят в стерильный 96-луночный планшет в концентрации 450×103 и культивируют в присутствии различных доз соединений в течение 3-4 дней. Для каждой концентрации выполняют три параллельных определения (3 лунки). По истечении указанных сроков определяют жизнеспособность клеток колориметрическим методом МТТ по T. Mossmann [Mosmann, Т. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays// J. Immunol. Methods - 1983. - 65:55-63] и по результатам окрашивания трипановым синим.The cytotoxic effect of the drug is evaluated by comparing cell viability in the presence of various doses of the drug with cell viability without the drug. Cells are introduced into a sterile 96-well plate at a concentration of 450 × 10 3 and cultured in the presence of various doses of the compounds for 3-4 days. Three parallel determinations (3 wells) are performed for each concentration. At the end of these periods, cell viability is determined by the MTT colorimetric method according to T. Mossmann [Mosmann, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays // J. Immunol. Methods - 1983. - 65: 55-63] and according to the results of staining with trypan blue.
Определение цитотоксических свойств препаратов колориметрическим методом МТТDetermination of cytotoxic properties of drugs by MTT colorimetric method
Суть метода МТТ заключается в способности живых клеток превращать хорошо растворимый желтый бромид 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ) в нерастворимые внутриклеточные кристаллы МТТ-формазана. Эффективность такого превращения отражает общий уровень дегидрогеназной активности исследуемых клеток и в известных пределах пропорциональна концентрации живых (но не мертвых) клеток.The essence of the MTT method is the ability of living cells to convert the readily soluble yellow 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) into insoluble intracellular MTT-formazan crystals. The effectiveness of this transformation reflects the general level of dehydrogenase activity of the studied cells and, within certain limits, is proportional to the concentration of living (but not dead) cells.
В лунки 96-луночного планшета с исследуемым материалом вносят 20 мкл раствора МТТ (с концентрацией 11 мг/мл в ФСБ) и помещают на 3 часа в термостат при 37°C, 5% CO2. Из лунок отбирают 175 мкл супернатанта, вносят по 175 мкл DMSO (для растворения кристаллов МТТ-формазана) и помещают на 20-30 мин в термостат при 37°C, 5% CO2. После растворения кристаллов измеряют оптическую плотность при 630 нм (ОП630, OD630) на спектрофотометре-ридере ImmunoChem-2100 Microplate Reader (США).20 μl of MTT solution (with a concentration of 11 mg / ml in PBS) was added to the wells of a 96-well plate with the test material and placed for 3 hours in a thermostat at 37 ° C, 5% CO 2 . 175 μl of the supernatant were taken from the wells, 175 μl of DMSO were added (to dissolve the crystals of MTT-formazan) and placed for 20-30 minutes in a thermostat at 37 ° C, 5% CO 2 . After the crystals are dissolved, the absorbance is measured at 630 nm (OD 630 , OD 630 ) with an ImmunoChem-2100 Microplate Reader spectrophotometer reader (USA).
За 100% принимают оптическую плотность в МТТ-тесте, установленную для контрольных клеток (без препарата), и определяют жизнеспособность клеток, культивировавшихся в присутствии различных доз препаратов по формуле 1:The optical density in the MTT test established for control cells (without the drug) is taken as 100%, and the viability of the cells cultured in the presence of various doses of the preparations is determined by the formula 1:
Формула 1Formula 1
где ОП630 образец - среднее значение для трех параллельных определений (лунок) с данной концентрацией анализируемого препарата, аwhere OD 630 sample is the average value for three parallel determinations (wells) with a given concentration of the analyzed drug, and
ОП630 контроль - среднее значение для параллельных определений (лунок) без анализируемого препарата (не менее трех параллельных определений).OP 630 control - the average value for parallel determinations (wells) without the analyzed drug (at least three parallel determinations).
Рассчитывают 50%-ную токсическую дозу препарата. 50%-ная цитотоксическая доза (TD50) - доза, при которой 50% исследуемых клеток сохраняют жизнеспособность.Calculate a 50% toxic dose of the drug. A 50% cytotoxic dose (TD 50 ) is the dose at which 50% of the test cells remain viable.
Определение жизнеспособности клеток по окрашиванию трипановым синимDetermination of cell viability by trypan blue staining
Исследуемые растворы потенциальных активных субстанций микробицидов могут быть окрашены. Эта окрашенность может исказить результаты колориметрического теста МТТ. В связи с этим жизнеспособность клеток при наиболее высокой (1000 мкг/мл) концентрации веществ дополнительно определяют путем подсчета живых и мертвых клеток в камере Горяева после окрашивания 0.2% раствором трипанового синего. Раствор трипанового синего 0,4% смешивают в лунке 96-ти луночного планшета с равным объемом клеточной суспензии и 10 мкл смеси с помощью микропипетки вносят в камеру Горяева. Трипановый синий проникает в мертвые клетки, окрашивая их в голубой цвет. Соотношение живых и мертвых клеток при подсчете 100 единиц определяет жизнеспособность клеток в процентах.Test solutions of potential active substances of microbicides can be stained. This coloration may distort the results of the MTT colorimetric test. In this regard, cell viability at the highest (1000 μg / ml) concentration of substances is additionally determined by counting living and dead cells in the Goryaev chamber after staining with 0.2% trypan blue solution. A solution of trypan blue 0.4% is mixed in a well of a 96-well plate with an equal volume of cell suspension, and 10 μl of the mixture are introduced into the Goryaev chamber using a micropipette. Trypan blue penetrates dead cells, staining them in blue. The ratio of living and dead cells when counting 100 units determines the cell viability in percent.
Пример 3. Определение цитотоксичности препарата НАС-1 для клеток СЕМ SSExample 3. Determination of the cytotoxicity of the drug NAS-1 for cells CEM SS
Клетки CEM SS представляют собой перевиваемую суспензионную Т-лимфобластоидную линию клеток человека. Клетки вносят в стерильный 96-луночный планшет в концентрации 300-500 тысяч и культивируют в присутствии различных доз препарата в течение 3 дней. По истечении этого срока определяют жизнеспособность клеток методом МТТ, как указано в примере 2. Результаты показаны в таблицах 1 и 2.CEM SS cells are a transplantable suspension T-lymphoblastoid human cell line. Cells are introduced into a sterile 96-well plate at a concentration of 300-500 thousand and cultured in the presence of various doses of the drug for 3 days. After this period, determine the viability of the cells by MTT, as described in example 2. The results are shown in tables 1 and 2.
Таким образом, препарат фракции гуминовых кислот НАС-1, являющийся предметом данного изобретения, характеризуется низкой цитотоксичностью: жизнеспособность культивируемых клеток СЕМ SS снижается менее чем на 5%. Thus, the preparation of the NASA-1 humic acid fraction, which is the subject of this invention, is characterized by low cytotoxicity: the viability of cultured CEM SS cells decreases by less than 5%.
Пример 4. Определение цитотоксичности препарата НАС-1 для мононуклеаров периферической крови человека (МПК)Example 4. Determination of cytotoxicity of the drug NAS-1 for mononuclear cells of human peripheral blood (IPC)
Мононуклеары выделяют из венозной крови человека путем центрифугирования в одноступенчатом градиенте плотности фиколл d=1.077 по обычной методике [Boyum А. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. //Scand. J. Clin, and Lab. Invest. - 1968. - Vol.21, Suppl. 97 - P.77-821]. Вакутайнеры с антикоагулянтом (ЭДТА), содержащие 10 мл донорской крови, центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин. После отделения плазмы клетки стерильно собирают в 50 мл центрифужные пробирки и разводят 1:1 фосфатно-солевым буфером без Mg2+ и Ca2+ (ФСБ). Клетки наслаивают на фиколл и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 30 мин при комнатной температуре. После центрифугирования на границе раздела фаз наблюдается кольцо лимфоцитов. Собранные МПК помещают в стерильную пробирку, разбавляют ФСБ, суспендируют и центрифугируют при 1000 об/мин при 4°C в течение 10 мин. Осадок клеток собирают и повторяют отмывку еще раз. Осадок клеток суспендируют в ростовой среде (полной питательной среде, в состав которой входит среда RPMI, дополненная 10% фетальной телячьей сывороткой, 2 mM L-глутамина, 20 mM HEPES-буфера pH 7,4 и 10 мкг/мл гентамицина). Выделенные лимфоциты в полной питательной среде помещают в 25-мл культуральные флаконы из расчета 1-2×106 кл/мл, добавляют митогенный стимулятор фитогемагглютинин (ФГА) из расчета 5 мкг/мл и инкубируют 72 час при 37°C и 5% CO2. Затем лимфоциты переводят в ростовую среду, содержащую 200 ед/мл интерлейкина-2 (ИЛ-2). Замену среды проводят каждые 3-4 дня.Mononuclear cells are isolated from human venous blood by centrifugation in a single-stage density gradient ficoll d = 1.077 according to the usual method [Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. // Scand. J. Clin, and Lab. Invest. - 1968. - Vol. 21, Suppl. 97 - P.77-821]. Anticoagulant vaktuiner (EDTA) containing 10 ml of donated blood, centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes After plasma separation, the cells are sterilely collected in 50 ml centrifuge tubes and diluted 1: 1 with phosphate-buffered saline without Mg 2+ and Ca 2+ (PBS). Cells are layered on ficoll and centrifuged at 2000 rpm for 30 min at room temperature. After centrifugation, a ring of lymphocytes is observed at the phase boundary. The collected MICs are placed in a sterile tube, diluted with PBS, suspended and centrifuged at 1000 rpm at 4 ° C for 10 minutes. The cell pellet was collected and the washing was repeated again. The cell pellet is suspended in a growth medium (complete culture medium containing RPMI medium supplemented with 10% fetal calf serum, 2 mM L-glutamine, 20 mM HEPES buffer pH 7.4 and 10 μg / ml gentamicin). The isolated lymphocytes in a complete nutrient medium are placed in 25 ml culture bottles at a rate of 1-2 × 10 6 cells / ml, a mitogenic stimulator phytohemagglutinin (PHA) is added at a rate of 5 μg / ml and incubated for 72 hours at 37 ° C and 5% CO 2 . Then the lymphocytes are transferred to a growth medium containing 200 units / ml of interleukin-2 (IL-2). Replace the medium every 3-4 days.
Результаты определения цитотоксичности препарата НАС-1 для МПК человека приведены в таблицах 3 и 4.The results of determining the cytotoxicity of the drug NAS-1 for human IPC are shown in tables 3 and 4.
Таким образом, препарат фракции гуминовых кислот НАС-1, являющийся предметом данного изобретения, характеризуется низкой цитотоксичностью: жизнеспособность МПК даже при самой высокой концентрации препарата снижается примерно на 5%.Thus, the preparation of the NASA-1 humic acid fraction, which is the subject of this invention, is characterized by low cytotoxicity: the viability of BMD, even at the highest concentration of the drug, decreases by about 5%.
В культуре МПК 50%-ная цитотоксическая доза препарата НАС-1 не была достигнута. Препарат нетоксичен для МПК даже при концентрациях 1000 мкг/мл.In the IPC culture, a 50% cytotoxic dose of NAS-1 was not achieved. The drug is nontoxic for MPC even at concentrations of 1000 μg / ml.
Пример 5. Анти-ВИЧ-активность препарата НАС-1 на модели HIV-1BRU/CEM SSExample 5. Anti-HIV activity of the drug NAS-1 on the model of HIV-1 BRU / CEM SS
Модель представляет собой Т-лимфобластоидную линию CD4+ клеток СЕМ SS, в которых активно реплицируется референс-штамм ВИЧ HIV-1BRU.The model is a T-lymphoblastoid CD4 + line of CEM SS cells in which the HIV-1 BRU reference strain of HIV is actively replicated.
Клетки СЕМ SS в течение 2 часов инкубируют при 37°C с различными концентрациями НАС-1, а затем заражают вирусом HTV-1BRU с множественностью заражения 100 TCID50. Через 24 часа планшеты центрифугируют для удаления несвязавшегося вируса при 1200 об/мин 10 мин, и к клеткам добавляют свежую ростовую среду с соответствующими концентрациями НАС-1. Аналогичную процедуру проводят на вторые и третьи сутки. За развитием инфекции наблюдают визуально, оценивая цитопатическое действие.CEM SS cells were incubated for 2 hours at 37 ° C with various concentrations of HAC-1, and then infected with HTV-1 BRU virus with a multiplicity of infection of 100 TCID 50 . After 24 hours, the plates are centrifuged to remove unbound virus at 1200 rpm for 10 minutes, and fresh growth medium with the appropriate concentrations of HAC-1 is added to the cells. A similar procedure is carried out on the second and third days. The development of infection is observed visually, evaluating the cytopathic effect.
На 6-7-е сутки отбирают пробы надосадочной жидкости и определяют уровень ингибирования инфекции в опытных образцах по отношению к контролю инфекции (без препарата) на основании данных р24 ИФА по формуле 2.On the 6-7th day, samples of the supernatant are taken and the level of inhibition of infection in the test samples is determined relative to the infection control (without the drug) based on the data of p24 ELISA according to formula 2.
Формула 2Formula 2
ОП450 опыт - оптическая плотность в ИФА в лунке с препаратом,OP 450 experience - optical density in ELISA in the well with the drug,
ОП450 контроль инфекции - оптическая плотность в ИФА в лунке без добавления препаратаOD 450 infection control - optical density in ELISA in the well without the addition of the drug
ОП450 контроль клеток - оптическая плотность в ИФА в лунке без добавления вируса.OD 450 cell control — optical density in ELISA in a well without virus addition.
Постановку анализа р24 ИФА выполняют в соответствии с инструкцией производителя диагностических наборов. В каждую постановку включают положительный контроль (К+) из набора и две параллели отрицательного контроля (К-) из набора.The analysis of p24 ELISA is performed in accordance with the manufacturer's instructions for diagnostic kits. Each setting includes a positive control (K +) from the set and two parallels of the negative control (K-) from the set.
Результаты определения анти-ВИЧ-активности препарата НАС-1 на модели HIV-1BRU/CEM SS приведены в таблице 5.The results of determining the anti-HIV activity of NAS-1 on the HIV-1 BRU / CEM SS model are shown in Table 5.
Как видно из таблицы 5, препарат НАС-1 в концентрации 10 мкг/мл подавляет ВИЧ-инфекцию в культуре in vitro на 96,9% и в концентрации 1 мкг/мл - на 95,6. В культуре СЕМ SS 50%-ная цитотоксическая доза препарата НАС-1 не была достигнута. Для него характерна низкая цитотоксичность. Препарат нетоксичен для клеток СЕМ SS при концентрации 1000 мкг/мл. Значение IS находится в пределах 2000 - 4000.As can be seen from table 5, the drug NAS-1 at a concentration of 10 μg / ml suppresses HIV infection in culture in vitro by 96.9% and at a concentration of 1 μg / ml - by 95.6. In a CEM SS culture, a 50% cytotoxic dose of NAS-1 was not achieved. It is characterized by low cytotoxicity. The drug is nontoxic for CEM SS cells at a concentration of 1000 μg / ml. The IS value is between 2000 and 4000.
Таким образом, препарат фракции гуминовых кислот НАС-1, являющийся предметом данного изобретения, проявляет сильную анти-ВИЧ-активность при низкой цитотоксичности.Thus, the preparation of the fraction of humic acids HAC-1, which is the subject of this invention, exhibits strong anti-HIV activity with low cytotoxicity.
Пример 6. Анти-ВИЧ-активность препарата НАС-1 на модели первичный изолят ВИЧ1/МПКExample 6. Anti-HIV activity of the drug NAS-1 in the model of primary isolate HIV1 / IPC
МПК получают и стимулируют, как описано в примере 4. МПК, полученные от трех здоровых неинфицированных ВИЧ доноров, смешивают непосредственно перед заражением, инкубируют с различными концентрациями препарата и заражают клиническим изолятом с множественностью инфекции 100 TCID50. Культивирование и определение ингибирования инфекции выполняют, как описано в примере 5. Результаты определения анти-ВИЧ-активности препарата НАС-1 на модели первичный изолят ВИЧ1/МПК приведены в табл.6.MICs are prepared and stimulated as described in Example 4. MICs obtained from three healthy uninfected HIV donors are mixed immediately before infection, incubated with various drug concentrations and infected with a clinical isolate with a multiplicity of infection of 100 TCID 50 . The cultivation and determination of the inhibition of infection is performed as described in example 5. The results of determining the anti-HIV activity of NAS-1 in the primary HIV1 / MPC isolate model are shown in Table 6.
Как видно из таблицы 6, препарат НАС-1 на модели первичный изолят ВИЧ1/МПК подавляет ВИЧ-инфекцию в культуре in vitro в концентрации 10 мкг/мл на 98% и при концентрации 1 мкг/мл на 95,6%. Значение индекса селективности (IS), который представляет собой отношение 50-процентной токсической дозы к 50-процентной эффективной дозе (TD50/ED50) и отражает терапевтическую ценность препарата, превышает 3000.As can be seen from table 6, the drug NAS-1 in the model of primary HIV1 / MPC isolate inhibits HIV infection in vitro at a concentration of 10 μg / ml by 98% and at a concentration of 1 μg / ml by 95.6%. The value of the selectivity index (IS), which is the ratio of a 50 percent toxic dose to a 50 percent effective dose (TD 50 / ED 50 ) and reflects the therapeutic value of the drug, exceeds 3000.
Таким образом, препарат фракции гуминовых кислот НАС-1, являющийся предметом данного изобретения, является малотоксичным и обладает высоким ингибирующим действием на ВИЧ-инфекцию.Thus, the preparation of the fraction of humic acids NAS-1, which is the subject of this invention, is low toxic and has a high inhibitory effect on HIV infection.
Пример 7. Приготовление суппозиториев, содержащих препарат НАС-1Example 7. Preparation of suppositories containing the drug NAS-1
Суппозитории массой 1,3 г готовят на основе масла какао или твердого кондитерского жира с эмульгатором, которые легко высвобождают активную субстанцию при температуре тела человека. С учетом того, что доза активной субстанции (препарата НАС-1) 100 мкг/мл нетоксична и эффективна in vitro, эта доза может быть рекомендована для использования в составе суппозиториев.Suppositories weighing 1.3 g are prepared on the basis of cocoa butter or solid confectionery fat with an emulsifier, which easily release the active substance at human body temperature. Given that a dose of the active substance (NAS-1 preparation) of 100 μg / ml is non-toxic and effective in vitro, this dose can be recommended for use in suppositories.
Предыдущие описания и примеры приведены в качестве иллюстрации и не исчерпывают возможностей данного изобретения.The previous descriptions and examples are given by way of illustration and do not exhaust the scope of this invention.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013103411/15A RU2531945C2 (en) | 2013-01-25 | 2013-01-25 | Medication against hiv/aids transmission through sexual contact |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013103411/15A RU2531945C2 (en) | 2013-01-25 | 2013-01-25 | Medication against hiv/aids transmission through sexual contact |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013103411A RU2013103411A (en) | 2014-07-27 |
| RU2531945C2 true RU2531945C2 (en) | 2014-10-27 |
Family
ID=51264746
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013103411/15A RU2531945C2 (en) | 2013-01-25 | 2013-01-25 | Medication against hiv/aids transmission through sexual contact |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2531945C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2678986C1 (en) * | 2018-03-23 | 2019-02-05 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Antiviral agent based on humic acids |
| RU2752872C1 (en) * | 2020-11-03 | 2021-08-11 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | SARS-CoV-2 CORONAVIRUS REPLICATION INHIBITOR BASED ON HUMIC SUBSTANCES |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6630179B1 (en) * | 1998-09-23 | 2003-10-07 | Enerkom (Proprietary) Limited | Oxihumic acid and its use in the treatment of various conditions |
| RU2241471C1 (en) * | 2004-02-03 | 2004-12-10 | Аввакумова Надежда Петровна | Suppository for treatment of chronic prostatitis |
-
2013
- 2013-01-25 RU RU2013103411/15A patent/RU2531945C2/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6630179B1 (en) * | 1998-09-23 | 2003-10-07 | Enerkom (Proprietary) Limited | Oxihumic acid and its use in the treatment of various conditions |
| RU2241471C1 (en) * | 2004-02-03 | 2004-12-10 | Аввакумова Надежда Петровна | Suppository for treatment of chronic prostatitis |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Гумивит" Рег. уд. МЗ РФ N001636.Р.643.06.2000. ТУ 9197-011-46184368-99 [онлайн]. * |
| ЧУЕШОВ В.И. "Промышленная технология лекарств", том 2, Харьков, 2002 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2678986C1 (en) * | 2018-03-23 | 2019-02-05 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Antiviral agent based on humic acids |
| RU2752872C1 (en) * | 2020-11-03 | 2021-08-11 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | SARS-CoV-2 CORONAVIRUS REPLICATION INHIBITOR BASED ON HUMIC SUBSTANCES |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013103411A (en) | 2014-07-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Enria et al. | Antiviral treatment of Argentine hemorrhagic fever | |
| KR20210014601A (en) | Composition for preventing or treating coronavirus infection | |
| EP0739208A1 (en) | Flavin derivatives as anti-viral agents | |
| RU2531945C2 (en) | Medication against hiv/aids transmission through sexual contact | |
| JP7317309B2 (en) | Autophagic cell death inducer | |
| KR19990044834A (en) | Negative Factor Inhibitor | |
| KR102548616B1 (en) | Composition comprising compound from extract of Dryopteris crassirhizoma for preventing or treating coronavirus infection | |
| CA2120001C (en) | Flavopereirine-based pharmaceutical composition and use thereof for treating hiv | |
| US20120289487A1 (en) | Pharmaceutical Use of Multicyclic Compounds as Anti-Aids Agents | |
| RU2678986C1 (en) | Antiviral agent based on humic acids | |
| US9084758B2 (en) | Antiviral compositions comprising ethanol extract of Tetracera scandens and use thereof | |
| WO2006104292A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising arsenic acid, meta-arsenite, and pharmaceutically acceptable salts | |
| WO2018145364A1 (en) | Use of 3,4,7-trihydroxyisoflavone or 3-methoxy daidzein in preparation of medicaments for inhibiting platelet aggregation and thrombosis | |
| CN107320471B (en) | A kind of cycloserine pharmaceutical composition for treating tuberculosis and its application | |
| Nunn et al. | Influence of vaginal microbiota on the diffusional barrier properties of cervicovaginal mucus | |
| WO1999051249A1 (en) | Herbal composition for the prophylaxis and treatment of aids | |
| KR102405447B1 (en) | 5-(2-Aminoethyl)-dibenzo[cd,f]-indol-4(5H)-one derivatives compound, preparation method thereof, and pharmaceutical composition for anti HIV-1 containing the same as an active ingredient | |
| Khales et al. | Amlodipine and diltiazem significantly repress human rotavirus infection in vitro | |
| WO2013120414A1 (en) | Hiv microbicide and use thereof | |
| CN108553472A (en) | Applications of the NF546 in preparation multiple-effect microbicide and HIV spread through sex intercourse blocking agent | |
| CN102727523A (en) | Medicine possessing anti-HIV latent effect and its application | |
| LANGE et al. | Modulation of alpha interferon levels by AZT treatment in HIV-seropositive patients | |
| EP3054941B1 (en) | Pharmaceutical composition comprising diphenyleneiodonium for treating diseases caused by the parasites belonging to the family trypanosomatidae | |
| JPS63307821A (en) | Pharmaceutical preparation for treating aids virus infection | |
| de Oliveira et al. | Antiretroviral agents against human immunodeficiency virus: an overview of current drugs and new perspectives |