RU2530592C2 - Способ подавления роста опухолей - Google Patents
Способ подавления роста опухолей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2530592C2 RU2530592C2 RU2012130891/15A RU2012130891A RU2530592C2 RU 2530592 C2 RU2530592 C2 RU 2530592C2 RU 2012130891/15 A RU2012130891/15 A RU 2012130891/15A RU 2012130891 A RU2012130891 A RU 2012130891A RU 2530592 C2 RU2530592 C2 RU 2530592C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gly
- asp
- cys
- trail
- recombinant
- Prior art date
Links
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 17
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 27
- RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N Cys-Arg Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 claims 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 claims 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 claims 1
- 102000046283 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Human genes 0.000 abstract description 27
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 abstract description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 18
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 230000035515 penetration Effects 0.000 abstract description 10
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 abstract description 9
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 abstract description 9
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 abstract 2
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 26
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 24
- 229940080607 nexavar Drugs 0.000 description 23
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 5
- 101000610604 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Proteins 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- 101000972324 Cynodon dactylon Leaf protein Proteins 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 231100000028 nontoxic concentration Toxicity 0.000 description 3
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical group NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 101000610602 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10C Proteins 0.000 description 2
- 101000610609 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10D Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010000449 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000002259 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102100040115 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10C Human genes 0.000 description 2
- 102100040110 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10D Human genes 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 1
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 101150111869 FIBH gene Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102100028762 Neuropilin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000772 Neuropilin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000008649 adaptation response Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 108010077182 raf Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000009929 raf Kinases Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 108010002164 tyrosine receptor Proteins 0.000 description 1
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006444 vascular growth Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биологии и медицине и направлено на повышение эффективности подавления роста опухолей с применением рекомбинантных человеческих белков, связывающихся с рецепторами цитокина TRAIL/Apo2L и запускающих апоптотическую гибель опухолевых клеток, не повреждая при этом нормальные клетки. Подробнее изобретение относится к способу подавления роста опухолей. Изобретение состоит в том, что указанные рекомбинантные белки, связывающиеся с рецепторами цитокина TRAIL/Apo2L, применяют в сочетании с веществами, подавляющими резистентность опухолевых клеток к белкам TRAIL, и в дополнении к этому используют циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys. Предполагается, что указанный пептид усиливает проникновение TRAIL из сосудов к опухолевым клеткам. Применение сочетания рекомбинантных белков TRAIL и веществ, повышающих чувствительность опухолевых клеток к ним, в комбинации с указанным пептидом по данному изобретению позволяет повысить эффективность подавления опухолевого роста. 3 ил., 3 пр.
Description
Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине, а именно к способам подавления опухолевого роста с использованием рекомбинантного белка, связывающегося с рецепторами (DR4 и DR5) цитокина TRAIL/Apo2L, и запускающего апоптотическую гибель опухолевых клеток, не повреждая при этом нормальные клетки.
Рекомбинантные белки человека, разработанные на основе цитокина TRAIL/Apo2L как и моноклональные антитела к рецепторам DR4 и DR5 этого цитокина, избирательно вызывают гибель опухолевых клеток, не повреждая нормальные клетки здоровых тканей. Это дает уникальную возможность создания на основе таких белков противоопухолевых препаратов, избирательно повреждающих опухолевые клетки и не оказывающих токсического действия на организм больного (см. Srivastava R.K., Neoplasia 2001, 3 (6), 535-546; Wang S., Oncogene, 2008, 27, 6207-6215).
Известен способ подавления роста опухолей путем применения рекомбинантных пептидов, связывающихся с рецепторами (DR4 и DR5) цитокина TRAIL/Apo2L и запускающих апоптотическую гибель опухолевых клеток (Патент США №6046048, 04-04-2000).
Недостатком известного способа является то, что клетки некоторых опухолей обладают слабой чувствительностью к действию TRAIL/Apo2L. Кроме того, опухолевые клетки различного происхождения могут приобретать резистентность к белкам TRAIL/Apo2L в результате адаптивного ответа на ухудшение условий околоклеточного микроокружения.
Известен способ подавления опухолевого роста путем применения рекомбинантных пептидов, связывающихся с рецепторами (DR4 и DR5) цитокина TRAIL/Apo2L и запускающих апоптотическую гибель опухолевых клеток, в котором для преодоления резистентности опухолевых клеток к TRAIL-опосредованному апоптозу выполняется мутация в рекомбинантном белке TRAIL, в результате которой снижается эффективность связывания белка с рецепторами-ловушками DcR1 и DcR2 для цитокина TRAIL/Apo2L, понижающих чувствительность клеток к этому цитокину. В результате такой мутации повышается эффективность связывания рекомбинантного белка с рецепторами гибели DR4 и DR5, что может способствовать повышению эффективности повреждающего действия белка на опухолевые клетки (Патент РФ 24005038, 29-07-2009).
Недостатком известного способа является то, что резистентность опухолевых клеток к TRAIL индуцированному апоптозу обусловлена различными механизмами, и повышенное количество рецепторов является только одним из таких механизмов, который не является основным для большинства опухолевых клеток. Это снижает возможности применения мутантного рекомбинантного белка TRAIL, имеющего низкую афинность к рецепторам-ловушкам DcR1 и DcR2, для подавления роста опухолей.
Наиболее близким, принятым за прототип, является способ повышения эффективности применения рекомбинантных белков TRAIL за счет их сочетания с веществами, понижающими резистентность опухолевых клеток посредством воздействия на молекулярные мишени клеток, ответственные за их выживаемость, в частности с препаратом нексавар, который является ингибитором RAF киназы и тирозиновых рецепторных киназ (Clin Cancer Res., 2010, 16(21); 5189-99).
Недостатком способа, принятого за прототип, является ограниченное проникновение рекомбинантного белка TRAIL в опухолевую ткань, что снижает противоопухолевый эффект сочетания белков TRAIL с сенситизирующими к нему веществами in vivo. Недостаточно эффективное проникновение веществ к опухолевым клеткам является одной из основных проблем онкологии, которая обусловлена бурным размножением опухолевых клеток, опережающим рост сосудов, повышенным интерстициальным давлением в паренхиме опухолевой ткани. Особенно значительна проблема ограничения скорости переноса к опухолевым клеткам для белковых субстанций, имеющих низкий коэффициент диффузии и быстрое время удаления их из кровотока.
Задачей предлагаемого изобретения была разработка способа повышения эффективности противоопухолевого эффекта сочетаний рекомбинантных белков TRAIL с веществами, подавляющими резистентность опухолевых клеток к повреждающим воздействиям, за счет их применения с субстанциями, обеспечивающими повышение эффективности их проникновения в опухолевую ткань.
Для решения этой задачи предложен способ подавления опухолевого роста с применением рекомбинантных белков TRAIL в комбинации с веществами, подавляющими резистентность опухолевых клеток к апоптогенному действию белков TRAIL, в котором дополнительно к указанному сочетанию веществ применяют циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys. Применение этого пептида обеспечивает повышение эффективности подавления роста опухолей указанными сочетаниями рекомбинантного белка TRAIL с веществами, повыщающими чувствительность к нему опухолевых клеток.
Проблема повышения эффективности проникновения противоопухолевых препаратов в паренхиму опухолевой ткани является одной из наиболее актуальных в онкологии. Утверждения о том, что сосуды в опухолевой ткани значительно фенестрированы, то есть имеются зазоры между эндотелиальными клетками, и поэтому высокопроницаемы для препаратов согласно многочисленным экспериментальным исследованиям не соответствуют действительности. Ранее было предложено использование специфических пептидов для повышения эффективности проникновения препаратов в опухолевую ткань (US Patent Application 20090246133). Способ основан на использовании пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys, имеющего в своем составе мотив Arg-Gly-Asp (последовательность аминокислот аргинин-глицин-аспарагиновая кислота), обеспечивающего его преимущественное связывание с эндотелиальными клетками сосудов в опухолевой ткани, и мотив Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly, который после протеолиза пептида освобождается и, связываясь с рецептором нейропилином 1 на поверхности эндотелиальных клеток, повышает эффективность проникновения веществ из сосудов к опухолевым клеткам. Используя модельные опухоли человека в иммунодефицитных мышах, было показано, что введение в кровоток пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys в дополнении к доксорубицину усиливало проникновение цитостатика в опухолевую ткань. Также при этом было показано подавление роста экспериментальных опухолей в животных, однако эффект был небольшой. Более значительный эффект авторы получили при введении пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys с препаратом Bortuzomab, который является антителами против рецептора Нег2 new. Однако механизм повышения эффективности проникновения препаратов через сосуды в опухолевую ткань при использовании пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys остается неизвестными, как об этом пишут авторы. Более того, остается неизвестно, в сочетании с какими противоопухолевыми препаратами указанный пептид способен повышать эффективность их проникновения в опухоль и соответственно противоопухолевую активность. Соответственно этому неизвестно, будет ли эффективным применение пептидов Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys в дополнение к рекомбинантным белкам TRAIL. Ниже представлены примеры реализации предложенного способа на моделях человеческих опухолей в иммунодефицитных мышах.
Материалы и методика испытаний.
Испытание предложенного способа проводили на моделях человеческих опухолей в иммунодефицитных мышах BALB/c nude. Для этого использовали мышей возрастом 7-8 недель весом 20-22 г, взятых из питомника лабораторных животных «Пущино» (ФИБХ РАН, г.Пущино). Для индукции опухолей клетки фибросаркомы (линия НТ-1080) или карциномы легкого человека (линия A 549) выращивали in vitro и вводили под кожу мышам в объеме 0.3 мл питательной среды ДМЕМ по 1×106 клеток НТ-1080 на мышь либо по 3×106 клеток А 549 на мышь. Протокол испытаний был одобрен этическими комитетами Московского научно-исследовательского института онкологии им. П.А.Герцена и Института теоретической и экспериментальной биофизики РАН.
Рекомбинантный человеческий белок izTRAIL, модифицированный изолейциновым зиппером для увеличения активности, получали в ИТЭБ РАН. Белок izTRAIL вызывал апоптотическую гибель клеток А 549, НТ-1080 и многих других опухолевых клеток in vitro, начиная с концентрации 0.1-5 нг/мл, и не вызывал гибель нормальных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека in vitro при концентрациях 20 мкг/мл.
Для подавления резистентности опухолевых клеток применяли химиотерапевтический препарат доксорубицин и таргетный противоопухолевый препарат «Нексавар». Действующая субстанция препарата «Нексавар» - сорафениб является ингибитором внутриклеточных киназ (Raf, тирозинкиназных рецепторов) и согласно нашим данным, подавляет резистентность опухолевых клеток А 549, НТ-1080 к рекомбинантным белкам TRAIL in vitro
Циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys получали в ФИБХ РАН. Пептид в концентрации 4 мкг/мл был нетоксичен для используемых опухолевых клеток in vitro.
Противоопухолевый эффект оценивали по торможению роста опухоли. Показатель торможения роста опухоли (ТРО) вычисляли по формуле:
ТРО(%)=[(Vконтроль-Vопыт)/Vконтроль]×100, где V - объем опухоли в мм3
Минимально значимые критерии активности по ТРО считали при превышении 50% (Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ. / Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К. и др // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: ИИА Ремедиум, 2000, с.319) Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя критерий Уитни - Манна (p<0.05).
Пример 1
Испытание предложенного способа проводили на модели человеческой опухоли, инициированной введением под кожу мышам клеток фибросаркомы человека, линия НТ-1080. Через 7 суток после инъекции опухолевых клеток животных случайным образом делили на следующие группы:
1 - контрольная группа, в которой, начиная с 7 дня роста опухоли, вводили внутриорбитально (внутривенно) физиологический раствор (0,3 мл) в те же сроки, что белок izTRAIL и пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys.
2 - мышам этой группы вводили препарат «Нексавар» перорально в разовой дозе по 50 мг сорафениба (действующее вещество препарата «Нексавар») на 1 кг веса животных ежедневно в течение 24 дней.
3 - мышам этой группы рекомбинантный белок izTRAIL вводили внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 15 мг/кг в те же сроки, что и «Нексавар».
4 - в этой группе рекомбинантный белок izTRAIL вводили внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 15 мг/кг через 3 часа после введения препарата «Нексавар».
5 - мышам этой группы пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 4 мг/кг через 3 часа после введения препарата «Нексавар».
6 - мышам этой группы вводили пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 4 мг/кг вместе с белком izTRAIL (15 мг/кг) через 3 часа после введения препарата «Нексавар».
Данные, характеризующие противоопухолевую эффективность комплексного лечения мышей BALB/c nude с человеческой саркомой НТ-1080 с применением рекомбинантного белка izTRAIL, таргетного препарата «Нексавар», а также пептида Cys-Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys представлены на фиг.1.
Как видно из фиг.1, представляющей рост опухолей в указанных группах, рекомбинантный противоопухолевый белок в дозе 15 мг/кг, в 15000 раз превышающей эффективные концентрации этого белка на клетки НТ-1080 in vitro, в моноварианте был неэффективен и ТРО составлял около 10%. Препарат «Нексавар» в концентрациях, токсичных для этих клеток in vitro, был слабоэффективен (ТРО около 35%) и пептид в нетоксичной концентрации не усиливал его действие. Рекомбинантный белок izTRAIL в сочетании с препаратом «Нексавар» неаддитивным образом тормозил рост опухоли до 55%, а дополнительное применение с ними пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys усиливало торможение роста опухоли до 80%. Повышение коэффициента торможения роста опухоли за счет добавления циклического пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys к сочетанию рекомбинантного белка izTRAIL и препарата «Нексавар» было достоверным согласно критерию Уитни-Манна (p<0.05).
Пример 2
Испытание предложенного способа проводили на модели человеческой опухоли, инициированной введением под кожу клеток карциномы A 549. Через 21 сутки после инъекции опухолевых клеток, когда появлялась возможность выявить опухоли и определить их размер (около 4 мм в диаметре), животных случайным образом делили на следующие группы:
1 - контрольная группа, в которой, начиная с 21 дня роста опухоли, вводили внутривенно (хвостовая вена) физиологический раствор (0,3 мл) в те же сроки, что и белок izTRAIL.
2 - препарат «Нексавар» вводили мышам перорально в разовой дозе по 50 мг сорафениба (действующее вещество препарата «Нексавар») на 1 кг веса животных ежедневно.
3 - мышам этой группы рекомбинантный белок izTRAIL вводили внутривенно (хвостовая вена) в разовой дозе 10 мг/кг в те же сроки, что и «Нексавар».
4 - рекомбинантный белок izTRAIL вводили внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 15 мг/кг через 2 часа после введения препарата «Нексавар».
5 - пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили внутривенно в разовой дозе 4 мг/кг через 2 часа после введения препарата «Нексавар».
6 - в этой группе пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили мышам внутривенно в разовой дозе 4 мг/кг вместе с белком izTRAIL (10 мг/кг) через 2 часа после введения препарата «Нексавар».
Как видно из фиг.2, представляющей рост опухолей в указанных группах, рекомбинантный противоопухолевый белок в дозе 10 мг/кг, в 1500 раз превышающей эффективные концентрации этого белка на клетки А549 in vitro, в моноварианте был неэффективен для подавления роста опухолей (ТРО - 15-20%). Препарат «Нексавар» в концентрации 10 мкг/мл был токсичен для этих клеток in vitro, но оказывал слабый противоопухолевый эффект (ТРО составлял около 35%). Пептид в нетоксичной концентрации не усиливал его действие. Рекомбинантный белок izTRAIL в сочетании с препаратом «Нексавар» неаддитивным образом тормозил рост опухоли до 50%, а дополнительное применение с ними пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys усиливало торможение роста опухоли до 75%. Повышение коэффициента торможения роста опухоли за счет добавления циклического пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys к сочетанию рекомбинантного белка izTRAIL и препарата «Нексавар» было достоверным согласно статистике Уитни-Манна (p<0.05).
Пример 3
Испытание предложенного способа проводили на модели человеческой опухоли, инициированной введением под кожу клеток карциномы А 549. Через 21 сутки после инъекции опухолевых клеток, когда появлялась возможность выявить опухоли и определить их размер (около 4 мм в диаметре), животных случайным образом делили на следующие группы:
1 - контрольная группа, в которой, начиная с 21 дня роста опухоли, вводили внутривенно (хвостовая вена) физиологический раствор (0,3 мл) в те же сроки, что и белок izTRAIL.
2 - группа, в которой препарат доксорубицин вводили, начиная с 21 дня роста опухолей, внутривенно (хвостовая вена) в разовой дозе по 2 мг на 1 кг веса животных с интервалом 7 дней.
3 - рекомбинантный белок izTRAIL вводили в разовой дозе 10 мг/кг через 2 часа (внутрибрюшинно), 24 и 48 часов (внутривенно) после введения препарата доксорубицин по схеме группы 2.
4 - рекомбинантный белок izTRAIL вводили в разовой дозе 10 мг/кг в те же сроки и таким же образом, как в группе 3, но без введения препарата доксорубицин.
5 - циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили в разовой дозе 4 мг/кг вместе с белком izTRAIL (10 мг/кг) по схеме группы 3 после введения препарата доксорубицин.
6 - циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили по той же схеме, что и в группе 5, после введения препарата «Нексавар», но без izTRAIL.
Из фиг.3, представляющей рост опухолей, видно, что рекомбинантный противоопухолевый белок в дозе 10 мг/кг, в 1500 раз превышающей эффективные концентрации этого белка на клетки А549 in vitro, в моноварианте был неэффективен (ТРО - 5-10%). Доксорубицин в терапевтической дозе вызывал значительное торможение роста опухоли (ТРО достигало 60%). Пептид в нетоксичной концентрации не усиливал противоопухолевый эффект доксорубицина. Рекомбинантный белок izTRAIL в сочетании с доксорубицином неаддитивным образом подавлял рост опухоли (увеличение ТРО до 75%). Дополнительное применение пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys в сочетании с izTRAIL и доксорубициномом усиливало торможение роста опухоли до 90%. Повышение коэффициента торможения роста опухоли за счет добавления циклического пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys к сочетанию рекомбинантного белка izTRAIL и доксорубицина было достоверным согласно статистике Уитни-Манна (p<0.05)
Таким образом, предлагаемый способ подавления роста опухолей, в котором применение рекомбинантного белка TRAIL в сочетании с противоопухолевыми препаратами и таргетными субстанциями дополняют циклическим пептидом Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys, позволяет повысить эффективность торможения роста опухолей.
Claims (1)
- Способ подавления роста опухолей с применением рекомбинантных белков, связывающихся с рецепторами цитокина TRAIL/Apo2L и обладающих избирательной токсичностью против опухолевых клеток, в комбинации с веществами, подавляющими резистентность опухолевых клеток к повреждающему действию этих белков, отличающийся тем, что дополнительно используют циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012130891/15A RU2530592C2 (ru) | 2012-07-20 | 2012-07-20 | Способ подавления роста опухолей |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012130891/15A RU2530592C2 (ru) | 2012-07-20 | 2012-07-20 | Способ подавления роста опухолей |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012130891A RU2012130891A (ru) | 2014-01-27 |
| RU2530592C2 true RU2530592C2 (ru) | 2014-10-10 |
Family
ID=49956908
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012130891/15A RU2530592C2 (ru) | 2012-07-20 | 2012-07-20 | Способ подавления роста опухолей |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2530592C2 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115466311A (zh) * | 2021-06-10 | 2022-12-13 | 首都医科大学 | 抗粘附迁移和侵袭的18β-甘草次酸-RGDK,其合成,抗癌转移活性和应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2316337C2 (ru) * | 2001-04-24 | 2008-02-10 | Мерк Патент Гмбх | КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ, ИСПОЛЬЗУЮЩАЯ АНТИАНГИОГЕННЫЕ СРЕДСТВА И TNF-α |
| US20090226372A1 (en) * | 2008-02-21 | 2009-09-10 | Burnham Institute For Medical Research | Methods and compositions related to peptides and proteins with c-terminal elements |
-
2012
- 2012-07-20 RU RU2012130891/15A patent/RU2530592C2/ru active IP Right Revival
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2316337C2 (ru) * | 2001-04-24 | 2008-02-10 | Мерк Патент Гмбх | КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ, ИСПОЛЬЗУЮЩАЯ АНТИАНГИОГЕННЫЕ СРЕДСТВА И TNF-α |
| US20090226372A1 (en) * | 2008-02-21 | 2009-09-10 | Burnham Institute For Medical Research | Methods and compositions related to peptides and proteins with c-terminal elements |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KUEN-FENG CHEN ET AL., Sorafenib Overcomes TRAIL Resistance of Hepatocellular Carcinoma Cells through the Inhibition of STAT3. Clin. Cancer Res., 2010, 16(21), PP. 5189-5199 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012130891A (ru) | 2014-01-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Batlevi et al. | ENGAGE-501: phase II study of entinostat (SNDX-275) in relapsed and refractory Hodgkin lymphoma | |
| Weide et al. | Intralesional treatment of metastatic melanoma: a review of therapeutic options | |
| JP7780444B2 (ja) | ＩＦＮ－γの抗腫瘍補助薬の調製への応用 | |
| CN111343984A (zh) | 包含链黑菌素及雷帕霉素作为有效成分的癌症预防或治疗用药学组合物 | |
| Luo et al. | Fucoidan inhibits EGFR redistribution and potentiates sorafenib to overcome sorafenib-resistant hepatocellular carcinoma | |
| CN112569360A (zh) | 一种基于阻断pd-1/pd-l1的抗肿瘤药物组合物及其应用 | |
| Xu et al. | Inhibition of NLRP3 inflammasome activation in myeloid-derived suppressor cells by andrographolide sulfonate contributes to 5-FU sensitization in mice | |
| JP2020512978A5 (ru) | ||
| RU2530592C2 (ru) | Способ подавления роста опухолей | |
| EP3518953A1 (en) | Therapeutic multi-targeting constructs and uses thereof | |
| Martinez et al. | 392 Phase 1 study of CI-8993 anti-VISTA antibody in patients with advanced solid tumor malignancies | |
| Jedrzejewski et al. | Polysaccharide peptide induces a tumor necrosis factor-α-dependent drop of body temperature in rats | |
| Li et al. | Delicaflavone reactivates anti-tumor immune responses by abrogating monocytic myeloid cell-mediated immunosuppression | |
| KR20080099234A (ko) | 콤브레타스타틴 및 항암제를 포함하는 조합물 | |
| CN117866069B (zh) | 一种碘-131标记的小分子多肽tfmp-y4及其制备方法和应用 | |
| Wei et al. | Plasmid co-expressing siRNA-PD-1 and Endostatin carried by attenuated Salmonella enhanced the anti-melanoma effect via inhibiting the expression of PD-1 and VEGF on tumor-bearing mice | |
| Gentimir et al. | Biochemical effects of some tyrosine kinase inhibitors on pro-B cells-induced apoptosis | |
| JP2008507499A (ja) | 併用抗癌療法とその医薬組成物 | |
| Zhou et al. | Effects of Exercise Intensity and Time on Efficacy of Paclitaxel and Doxorubicin and Immune Microenvironment in the 4T1 Breast Cancer Model | |
| Pak | Alpha-Fetoprotein: A revolutionary anti-cancer drug | |
| CN108992671A (zh) | 一种药物组合物及其制备治疗肝损伤的药物中的用途 | |
| Chen et al. | Enhanced effect of radiofrequency ablation on HCC by siRNA-PD-L1-endostatin Co-expression plasmid delivered | |
| Sacks | Chang et al. | |
| CN116531395B (zh) | 含青蒿素类衍生物的组合物及在制备治疗白血病药物中的应用 | |
| JP7407452B2 (ja) | がんの治療及び／又は予防のための医薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160721 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20171222 |