RU2530592C2 - Method of suppressing tumour growth - Google Patents
Method of suppressing tumour growth Download PDFInfo
- Publication number
- RU2530592C2 RU2530592C2 RU2012130891/15A RU2012130891A RU2530592C2 RU 2530592 C2 RU2530592 C2 RU 2530592C2 RU 2012130891/15 A RU2012130891/15 A RU 2012130891/15A RU 2012130891 A RU2012130891 A RU 2012130891A RU 2530592 C2 RU2530592 C2 RU 2530592C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gly
- asp
- cys
- trail
- recombinant
- Prior art date
Links
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 17
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 27
- RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N Cys-Arg Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 claims 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 claims 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 claims 1
- 102000046283 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Human genes 0.000 abstract description 27
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 abstract description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 18
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 230000035515 penetration Effects 0.000 abstract description 10
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 abstract description 9
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 abstract description 9
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 abstract 2
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 26
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 24
- 229940080607 nexavar Drugs 0.000 description 23
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 5
- 101000610604 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Proteins 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- 101000972324 Cynodon dactylon Leaf protein Proteins 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 231100000028 nontoxic concentration Toxicity 0.000 description 3
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical group NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 101000610602 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10C Proteins 0.000 description 2
- 101000610609 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10D Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010000449 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000002259 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102100040115 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10C Human genes 0.000 description 2
- 102100040110 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10D Human genes 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 1
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 101150111869 FIBH gene Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102100028762 Neuropilin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000772 Neuropilin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000008649 adaptation response Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 108010077182 raf Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000009929 raf Kinases Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 108010002164 tyrosine receptor Proteins 0.000 description 1
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006444 vascular growth Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине, а именно к способам подавления опухолевого роста с использованием рекомбинантного белка, связывающегося с рецепторами (DR4 и DR5) цитокина TRAIL/Apo2L, и запускающего апоптотическую гибель опухолевых клеток, не повреждая при этом нормальные клетки.The present invention relates to biology and medicine, and in particular to methods of suppressing tumor growth using a recombinant protein that binds to the receptors (DR4 and DR5) of the TRAIL / Apo2L cytokine and starts the apoptotic death of tumor cells without damaging normal cells.
Рекомбинантные белки человека, разработанные на основе цитокина TRAIL/Apo2L как и моноклональные антитела к рецепторам DR4 и DR5 этого цитокина, избирательно вызывают гибель опухолевых клеток, не повреждая нормальные клетки здоровых тканей. Это дает уникальную возможность создания на основе таких белков противоопухолевых препаратов, избирательно повреждающих опухолевые клетки и не оказывающих токсического действия на организм больного (см. Srivastava R.K., Neoplasia 2001, 3 (6), 535-546; Wang S., Oncogene, 2008, 27, 6207-6215).Human recombinant proteins developed on the basis of the TRAIL / Apo2L cytokine, as well as monoclonal antibodies to the DR4 and DR5 receptors of this cytokine, selectively cause the death of tumor cells without damaging normal healthy tissue cells. This provides a unique opportunity to create antitumor drugs based on such proteins that selectively damage tumor cells and do not have a toxic effect on the patient's body (see Srivastava RK, Neoplasia 2001, 3 (6), 535-546; Wang S., Oncogene, 2008, 27, 6207-6215).
Известен способ подавления роста опухолей путем применения рекомбинантных пептидов, связывающихся с рецепторами (DR4 и DR5) цитокина TRAIL/Apo2L и запускающих апоптотическую гибель опухолевых клеток (Патент США №6046048, 04-04-2000).A known method of suppressing tumor growth by using recombinant peptides that bind to the receptors (DR4 and DR5) of the TRAIL / Apo2L cytokine and trigger apoptotic death of tumor cells (US Patent No. 6046048, 04-04-2000).
Недостатком известного способа является то, что клетки некоторых опухолей обладают слабой чувствительностью к действию TRAIL/Apo2L. Кроме того, опухолевые клетки различного происхождения могут приобретать резистентность к белкам TRAIL/Apo2L в результате адаптивного ответа на ухудшение условий околоклеточного микроокружения.The disadvantage of this method is that the cells of some tumors have a weak sensitivity to the action of TRAIL / Apo2L. In addition, tumor cells of various origins can become resistant to TRAIL / Apo2L proteins as a result of an adaptive response to worsening conditions of the pericellular microenvironment.
Известен способ подавления опухолевого роста путем применения рекомбинантных пептидов, связывающихся с рецепторами (DR4 и DR5) цитокина TRAIL/Apo2L и запускающих апоптотическую гибель опухолевых клеток, в котором для преодоления резистентности опухолевых клеток к TRAIL-опосредованному апоптозу выполняется мутация в рекомбинантном белке TRAIL, в результате которой снижается эффективность связывания белка с рецепторами-ловушками DcR1 и DcR2 для цитокина TRAIL/Apo2L, понижающих чувствительность клеток к этому цитокину. В результате такой мутации повышается эффективность связывания рекомбинантного белка с рецепторами гибели DR4 и DR5, что может способствовать повышению эффективности повреждающего действия белка на опухолевые клетки (Патент РФ 24005038, 29-07-2009).A known method of suppressing tumor growth by using recombinant peptides that bind to the receptors (DR4 and DR5) of the TRAIL / Apo2L cytokine and trigger apoptotic death of tumor cells, in which to overcome the resistance of tumor cells to TRAIL-mediated apoptosis, mutation is performed in the recombinant TRAIL protein, which decreases the efficiency of protein binding to DcR1 and DcR2 trap receptors for the TRAIL / Apo2L cytokine, which reduce the sensitivity of cells to this cytokine. As a result of this mutation, the efficiency of binding of the recombinant protein to the death receptors of DR4 and DR5 is increased, which may contribute to increasing the effectiveness of the damaging effect of the protein on tumor cells (RF Patent 24005038, 29-07-2009).
Недостатком известного способа является то, что резистентность опухолевых клеток к TRAIL индуцированному апоптозу обусловлена различными механизмами, и повышенное количество рецепторов является только одним из таких механизмов, который не является основным для большинства опухолевых клеток. Это снижает возможности применения мутантного рекомбинантного белка TRAIL, имеющего низкую афинность к рецепторам-ловушкам DcR1 и DcR2, для подавления роста опухолей.The disadvantage of this method is that the resistance of tumor cells to TRAIL-induced apoptosis is due to various mechanisms, and an increased number of receptors is only one of such mechanisms, which is not the main one for most tumor cells. This reduces the possibilities of using the mutant recombinant protein TRAIL, which has low affinity for the DcR1 and DcR2 trap receptors, to suppress tumor growth.
Наиболее близким, принятым за прототип, является способ повышения эффективности применения рекомбинантных белков TRAIL за счет их сочетания с веществами, понижающими резистентность опухолевых клеток посредством воздействия на молекулярные мишени клеток, ответственные за их выживаемость, в частности с препаратом нексавар, который является ингибитором RAF киназы и тирозиновых рецепторных киназ (Clin Cancer Res., 2010, 16(21); 5189-99).The closest adopted for the prototype is a way to increase the efficiency of the use of recombinant TRAIL proteins by combining them with substances that reduce the resistance of tumor cells by affecting the molecular targets of the cells responsible for their survival, in particular with the nexavar drug, which is an inhibitor of RAF kinase and tyrosine receptor kinases (Clin Cancer Res., 2010, 16 (21); 5189-99).
Недостатком способа, принятого за прототип, является ограниченное проникновение рекомбинантного белка TRAIL в опухолевую ткань, что снижает противоопухолевый эффект сочетания белков TRAIL с сенситизирующими к нему веществами in vivo. Недостаточно эффективное проникновение веществ к опухолевым клеткам является одной из основных проблем онкологии, которая обусловлена бурным размножением опухолевых клеток, опережающим рост сосудов, повышенным интерстициальным давлением в паренхиме опухолевой ткани. Особенно значительна проблема ограничения скорости переноса к опухолевым клеткам для белковых субстанций, имеющих низкий коэффициент диффузии и быстрое время удаления их из кровотока.The disadvantage of the method adopted for the prototype is the limited penetration of the recombinant TRAIL protein into the tumor tissue, which reduces the antitumor effect of the combination of TRAIL proteins with sensitizing substances in vivo. Insufficiently effective penetration of substances to tumor cells is one of the main problems of oncology, which is caused by rapid multiplication of tumor cells, outstripping vascular growth, and increased interstitial pressure in the tumor tissue parenchyma. Particularly significant is the problem of limiting the rate of transfer to tumor cells for protein substances having a low diffusion coefficient and a quick time to remove them from the bloodstream.
Задачей предлагаемого изобретения была разработка способа повышения эффективности противоопухолевого эффекта сочетаний рекомбинантных белков TRAIL с веществами, подавляющими резистентность опухолевых клеток к повреждающим воздействиям, за счет их применения с субстанциями, обеспечивающими повышение эффективности их проникновения в опухолевую ткань.The objective of the invention was to develop a method for increasing the antitumor effect of combinations of recombinant TRAIL proteins with substances that suppress the resistance of tumor cells to damaging effects due to their use with substances that increase the efficiency of their penetration into tumor tissue.
Для решения этой задачи предложен способ подавления опухолевого роста с применением рекомбинантных белков TRAIL в комбинации с веществами, подавляющими резистентность опухолевых клеток к апоптогенному действию белков TRAIL, в котором дополнительно к указанному сочетанию веществ применяют циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys. Применение этого пептида обеспечивает повышение эффективности подавления роста опухолей указанными сочетаниями рекомбинантного белка TRAIL с веществами, повыщающими чувствительность к нему опухолевых клеток.To solve this problem, a method for suppressing tumor growth using recombinant TRAIL proteins in combination with substances that suppress the resistance of tumor cells to the apoptogenic effect of TRAIL proteins is proposed, in addition to the indicated combination of substances, the cyclic peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly is used -Pro-Asp-Cys. The use of this peptide provides an increase in the efficiency of suppressing tumor growth by the indicated combinations of the recombinant protein TRAIL with substances that increase the sensitivity of tumor cells to it.
Проблема повышения эффективности проникновения противоопухолевых препаратов в паренхиму опухолевой ткани является одной из наиболее актуальных в онкологии. Утверждения о том, что сосуды в опухолевой ткани значительно фенестрированы, то есть имеются зазоры между эндотелиальными клетками, и поэтому высокопроницаемы для препаратов согласно многочисленным экспериментальным исследованиям не соответствуют действительности. Ранее было предложено использование специфических пептидов для повышения эффективности проникновения препаратов в опухолевую ткань (US Patent Application 20090246133). Способ основан на использовании пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys, имеющего в своем составе мотив Arg-Gly-Asp (последовательность аминокислот аргинин-глицин-аспарагиновая кислота), обеспечивающего его преимущественное связывание с эндотелиальными клетками сосудов в опухолевой ткани, и мотив Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly, который после протеолиза пептида освобождается и, связываясь с рецептором нейропилином 1 на поверхности эндотелиальных клеток, повышает эффективность проникновения веществ из сосудов к опухолевым клеткам. Используя модельные опухоли человека в иммунодефицитных мышах, было показано, что введение в кровоток пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys в дополнении к доксорубицину усиливало проникновение цитостатика в опухолевую ткань. Также при этом было показано подавление роста экспериментальных опухолей в животных, однако эффект был небольшой. Более значительный эффект авторы получили при введении пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys с препаратом Bortuzomab, который является антителами против рецептора Нег2 new. Однако механизм повышения эффективности проникновения препаратов через сосуды в опухолевую ткань при использовании пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys остается неизвестными, как об этом пишут авторы. Более того, остается неизвестно, в сочетании с какими противоопухолевыми препаратами указанный пептид способен повышать эффективность их проникновения в опухоль и соответственно противоопухолевую активность. Соответственно этому неизвестно, будет ли эффективным применение пептидов Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys в дополнение к рекомбинантным белкам TRAIL. Ниже представлены примеры реализации предложенного способа на моделях человеческих опухолей в иммунодефицитных мышах.The problem of increasing the efficiency of penetration of antitumor drugs into the parenchyma of tumor tissue is one of the most relevant in oncology. Allegations that the vessels in the tumor tissue are significantly fenestrated, that is, there are gaps between the endothelial cells, and therefore are highly permeable to the preparations according to numerous experimental studies, are not true. The use of specific peptides has previously been proposed to increase the efficiency of drug penetration into tumor tissue (US Patent Application 20090246133). The method is based on the use of the Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys peptide incorporating the Arg-Gly-Asp motif (amino acid sequence arginine-glycine-aspartic acid), which provides its primary binding to endothelial vascular cells in the tumor tissue, and the Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly motif, which is released after proteolysis of the peptide and, by binding to the
Материалы и методика испытаний.Materials and test methods.
Испытание предложенного способа проводили на моделях человеческих опухолей в иммунодефицитных мышах BALB/c nude. Для этого использовали мышей возрастом 7-8 недель весом 20-22 г, взятых из питомника лабораторных животных «Пущино» (ФИБХ РАН, г.Пущино). Для индукции опухолей клетки фибросаркомы (линия НТ-1080) или карциномы легкого человека (линия A 549) выращивали in vitro и вводили под кожу мышам в объеме 0.3 мл питательной среды ДМЕМ по 1×106 клеток НТ-1080 на мышь либо по 3×106 клеток А 549 на мышь. Протокол испытаний был одобрен этическими комитетами Московского научно-исследовательского института онкологии им. П.А.Герцена и Института теоретической и экспериментальной биофизики РАН.The test of the proposed method was carried out on models of human tumors in immunodeficient mice BALB / c nude. For this, mice of 7-8 weeks of age weighing 20-22 g were taken from the Pushchino laboratory animal nursery (FIBH RAS, Pushchino). To induce tumors, fibrosarcoma cells (NT-1080 line) or human lung carcinomas (A 549 line) were grown in vitro and injected under the skin of mice with 0.3 ml of DMEM nutrient medium, 1 × 10 6 NT-1080 cells per mouse or 3 × 10 6 A 549 cells per mouse. The test report was approved by the ethics committees of the Moscow Research Institute of Oncology. P.A. Herzen and the Institute of Theoretical and Experimental Biophysics RAS.
Рекомбинантный человеческий белок izTRAIL, модифицированный изолейциновым зиппером для увеличения активности, получали в ИТЭБ РАН. Белок izTRAIL вызывал апоптотическую гибель клеток А 549, НТ-1080 и многих других опухолевых клеток in vitro, начиная с концентрации 0.1-5 нг/мл, и не вызывал гибель нормальных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека in vitro при концентрациях 20 мкг/мл.The recombinant human protein izTRAIL, modified with isoleucine zipper to increase activity, was obtained at the ITEB RAS. The izTRAIL protein caused apoptotic death of A 549, HT-1080 cells and many other tumor cells in vitro, starting from a concentration of 0.1-5 ng / ml, and did not cause the death of normal mesenchymal stem cells from human bone marrow in vitro at concentrations of 20 μg / ml.
Для подавления резистентности опухолевых клеток применяли химиотерапевтический препарат доксорубицин и таргетный противоопухолевый препарат «Нексавар». Действующая субстанция препарата «Нексавар» - сорафениб является ингибитором внутриклеточных киназ (Raf, тирозинкиназных рецепторов) и согласно нашим данным, подавляет резистентность опухолевых клеток А 549, НТ-1080 к рекомбинантным белкам TRAIL in vitroTo suppress the resistance of tumor cells, the chemotherapeutic drug doxorubicin and the targeted antitumor drug Nexavar were used. The active substance of the Nexavar preparation, sorafenib, is an inhibitor of intracellular kinases (Raf, tyrosine kinase receptors) and, according to our data, inhibits the resistance of tumor cells A 549, HT-1080 to recombinant TRAIL proteins in vitro
Циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys получали в ФИБХ РАН. Пептид в концентрации 4 мкг/мл был нетоксичен для используемых опухолевых клеток in vitro.The cyclic peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys was obtained at the FIBCH RAS. The peptide at a concentration of 4 μg / ml was non-toxic to the used in vitro tumor cells.
Противоопухолевый эффект оценивали по торможению роста опухоли. Показатель торможения роста опухоли (ТРО) вычисляли по формуле:The antitumor effect was evaluated by inhibition of tumor growth. Tumor growth inhibition (TPO) was calculated by the formula:
ТРО(%)=[(Vконтроль-Vопыт)/Vконтроль]×100, где V - объем опухоли в мм3 SRW (%) = [(V control-V experiment) / V control] × 100, where V is the tumor volume in mm 3
Минимально значимые критерии активности по ТРО считали при превышении 50% (Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ. / Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К. и др // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: ИИА Ремедиум, 2000, с.319) Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя критерий Уитни - Манна (p<0.05).The minimum significant activity criteria for SRW were considered in excess of 50% (Guidelines for the study of the antitumor activity of pharmacological substances. / Treschalina EM, Zhukova OS, Gerasimova GK and others // Guide to experimental (preclinical) study new pharmacological substances. M: IIA Remedium, 2000, p. 319) Statistical processing of the results was carried out using the Whitney – Mann test (p <0.05).
Пример 1Example 1
Испытание предложенного способа проводили на модели человеческой опухоли, инициированной введением под кожу мышам клеток фибросаркомы человека, линия НТ-1080. Через 7 суток после инъекции опухолевых клеток животных случайным образом делили на следующие группы:Testing of the proposed method was carried out on a model of a human tumor initiated by the introduction of human fibrosarcoma cells under the skin of mice, the NT-1080 line. 7 days after the injection of tumor cells, the animals were randomly divided into the following groups:
1 - контрольная группа, в которой, начиная с 7 дня роста опухоли, вводили внутриорбитально (внутривенно) физиологический раствор (0,3 мл) в те же сроки, что белок izTRAIL и пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys.1 - a control group in which, starting from the 7th day of tumor growth, was injected intraorbitally (intravenously) with physiological saline (0.3 ml) at the same time as the izTRAIL protein and the Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly- peptide Pro-Asp-Cys.
2 - мышам этой группы вводили препарат «Нексавар» перорально в разовой дозе по 50 мг сорафениба (действующее вещество препарата «Нексавар») на 1 кг веса животных ежедневно в течение 24 дней.2 - Nexavar was administered orally in mice of this group in a single dose of 50 mg of sorafenib (active ingredient of Nexavar) per 1 kg of animal weight daily for 24 days.
3 - мышам этой группы рекомбинантный белок izTRAIL вводили внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 15 мг/кг в те же сроки, что и «Нексавар».3 - to mice of this group, the recombinant izTRAIL protein was administered intraorbitally (intravenously) in a single dose of 15 mg / kg at the same time as Nexavar.
4 - в этой группе рекомбинантный белок izTRAIL вводили внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 15 мг/кг через 3 часа после введения препарата «Нексавар».4 - in this group, the recombinant izTRAIL protein was administered intraorbitally (intravenously) in a single dose of 15 mg /
5 - мышам этой группы пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 4 мг/кг через 3 часа после введения препарата «Нексавар».5 - to mice of this group, the Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys peptide was administered intraorbitally (intravenously) in a single dose of 4 mg /
6 - мышам этой группы вводили пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 4 мг/кг вместе с белком izTRAIL (15 мг/кг) через 3 часа после введения препарата «Нексавар».6 - the mice of this group were injected with the peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys intraorbitally (intravenously) in a single dose of 4 mg / kg together with izTRAIL protein (15 mg / kg) 3 hours after administration the drug "Nexavar".
Данные, характеризующие противоопухолевую эффективность комплексного лечения мышей BALB/c nude с человеческой саркомой НТ-1080 с применением рекомбинантного белка izTRAIL, таргетного препарата «Нексавар», а также пептида Cys-Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys представлены на фиг.1.Data characterizing the antitumor efficacy of the complex treatment of BALB / c nude mice with human NT-1080 sarcoma using the izTRAIL recombinant protein, the Nexavar targeted preparation, as well as the Cys-Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp peptide -Cys are shown in FIG.
Как видно из фиг.1, представляющей рост опухолей в указанных группах, рекомбинантный противоопухолевый белок в дозе 15 мг/кг, в 15000 раз превышающей эффективные концентрации этого белка на клетки НТ-1080 in vitro, в моноварианте был неэффективен и ТРО составлял около 10%. Препарат «Нексавар» в концентрациях, токсичных для этих клеток in vitro, был слабоэффективен (ТРО около 35%) и пептид в нетоксичной концентрации не усиливал его действие. Рекомбинантный белок izTRAIL в сочетании с препаратом «Нексавар» неаддитивным образом тормозил рост опухоли до 55%, а дополнительное применение с ними пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys усиливало торможение роста опухоли до 80%. Повышение коэффициента торможения роста опухоли за счет добавления циклического пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys к сочетанию рекомбинантного белка izTRAIL и препарата «Нексавар» было достоверным согласно критерию Уитни-Манна (p<0.05). As can be seen from figure 1, representing the growth of tumors in these groups, a recombinant antitumor protein at a dose of 15 mg / kg, 15,000 times higher than the effective concentration of this protein on NT-1080 cells in vitro, was not effective in the monovariant and the TPO was about 10% . The Nexavar preparation in concentrations toxic to these cells in vitro was poorly effective (TPO about 35%) and the peptide in non-toxic concentration did not enhance its effect. The recombinant izTRAIL protein in combination with the Nexavar preparation nonadditively inhibited tumor growth to 55%, and the additional use of the Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys peptide enhanced tumor growth inhibition by 80%. The increase in the tumor growth inhibition coefficient due to the addition of the cyclic peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys to the combination of the recombinant izTRAIL protein and the Nexavar preparation was significant according to the Whitney-Mann test (p <0.05).
Пример 2Example 2
Испытание предложенного способа проводили на модели человеческой опухоли, инициированной введением под кожу клеток карциномы A 549. Через 21 сутки после инъекции опухолевых клеток, когда появлялась возможность выявить опухоли и определить их размер (около 4 мм в диаметре), животных случайным образом делили на следующие группы:The test of the proposed method was carried out on a model of a human tumor initiated by the introduction of A 549 carcinoma cells under the skin. 21 days after the injection of the tumor cells, when it became possible to identify the tumors and determine their size (about 4 mm in diameter), the animals were randomly divided into the following groups :
1 - контрольная группа, в которой, начиная с 21 дня роста опухоли, вводили внутривенно (хвостовая вена) физиологический раствор (0,3 мл) в те же сроки, что и белок izTRAIL.1 - control group, in which, starting from the 21st day of tumor growth, saline (0.3 ml) was injected intravenously (tail vein) at the same time as the izTRAIL protein.
2 - препарат «Нексавар» вводили мышам перорально в разовой дозе по 50 мг сорафениба (действующее вещество препарата «Нексавар») на 1 кг веса животных ежедневно.2 - the Nexavar preparation was administered to mice orally in a single dose of 50 mg of sorafenib (the active substance of the Nexavar preparation) per 1 kg of animal weight daily.
3 - мышам этой группы рекомбинантный белок izTRAIL вводили внутривенно (хвостовая вена) в разовой дозе 10 мг/кг в те же сроки, что и «Нексавар».3 - to mice of this group, the recombinant izTRAIL protein was administered intravenously (tail vein) in a single dose of 10 mg / kg at the same time as Nexavar.
4 - рекомбинантный белок izTRAIL вводили внутриорбитально (внутривенно) в разовой дозе 15 мг/кг через 2 часа после введения препарата «Нексавар».4 - recombinant izTRAIL protein was administered intraorbitally (intravenously) in a single dose of 15 mg /
5 - пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили внутривенно в разовой дозе 4 мг/кг через 2 часа после введения препарата «Нексавар».5 - Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys peptide was administered intravenously in a single dose of 4 mg /
6 - в этой группе пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили мышам внутривенно в разовой дозе 4 мг/кг вместе с белком izTRAIL (10 мг/кг) через 2 часа после введения препарата «Нексавар».6 - in this group, the peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys was administered to mice intravenously in a single dose of 4 mg / kg together with izTRAIL protein (10 mg / kg) 2 hours after the administration of the drug " Nexavar. "
Как видно из фиг.2, представляющей рост опухолей в указанных группах, рекомбинантный противоопухолевый белок в дозе 10 мг/кг, в 1500 раз превышающей эффективные концентрации этого белка на клетки А549 in vitro, в моноварианте был неэффективен для подавления роста опухолей (ТРО - 15-20%). Препарат «Нексавар» в концентрации 10 мкг/мл был токсичен для этих клеток in vitro, но оказывал слабый противоопухолевый эффект (ТРО составлял около 35%). Пептид в нетоксичной концентрации не усиливал его действие. Рекомбинантный белок izTRAIL в сочетании с препаратом «Нексавар» неаддитивным образом тормозил рост опухоли до 50%, а дополнительное применение с ними пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys усиливало торможение роста опухоли до 75%. Повышение коэффициента торможения роста опухоли за счет добавления циклического пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys к сочетанию рекомбинантного белка izTRAIL и препарата «Нексавар» было достоверным согласно статистике Уитни-Манна (p<0.05). As can be seen from figure 2, which represents the growth of tumors in these groups, a recombinant antitumor protein at a dose of 10 mg / kg, 1,500 times higher than the effective concentration of this protein on A549 cells in vitro, was not effective in the monovariant to suppress tumor growth (TPO - 15 -twenty%). The drug Nexavar at a concentration of 10 μg / ml was toxic to these cells in vitro, but had a weak antitumor effect (TPO was about 35%). The peptide in non-toxic concentration did not enhance its effect. The recombinant izTRAIL protein in combination with the Nexavar preparation nonadditively inhibited tumor growth by up to 50%, and the additional use of the Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys peptide enhanced tumor growth inhibition by 75%. The increase in the tumor growth inhibition coefficient due to the addition of the cyclic peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys to the combination of the recombinant izTRAIL protein and the Nexavar preparation was significant according to Whitney-Mann statistics (p <0.05).
Пример 3Example 3
Испытание предложенного способа проводили на модели человеческой опухоли, инициированной введением под кожу клеток карциномы А 549. Через 21 сутки после инъекции опухолевых клеток, когда появлялась возможность выявить опухоли и определить их размер (около 4 мм в диаметре), животных случайным образом делили на следующие группы:The test of the proposed method was carried out on a model of a human tumor initiated by the introduction of A 549 carcinoma cells under the skin. 21 days after the injection of the tumor cells, when it became possible to identify the tumors and determine their size (about 4 mm in diameter), the animals were randomly divided into the following groups :
1 - контрольная группа, в которой, начиная с 21 дня роста опухоли, вводили внутривенно (хвостовая вена) физиологический раствор (0,3 мл) в те же сроки, что и белок izTRAIL.1 - control group, in which, starting from the 21st day of tumor growth, saline (0.3 ml) was injected intravenously (tail vein) at the same time as the izTRAIL protein.
2 - группа, в которой препарат доксорубицин вводили, начиная с 21 дня роста опухолей, внутривенно (хвостовая вена) в разовой дозе по 2 мг на 1 кг веса животных с интервалом 7 дней.2 - a group in which the drug doxorubicin was administered, starting from 21 days of tumor growth, intravenously (tail vein) in a single dose of 2 mg per 1 kg of animal weight with an interval of 7 days.
3 - рекомбинантный белок izTRAIL вводили в разовой дозе 10 мг/кг через 2 часа (внутрибрюшинно), 24 и 48 часов (внутривенно) после введения препарата доксорубицин по схеме группы 2.3 - recombinant izTRAIL protein was administered in a single dose of 10 mg /
4 - рекомбинантный белок izTRAIL вводили в разовой дозе 10 мг/кг в те же сроки и таким же образом, как в группе 3, но без введения препарата доксорубицин.4 - recombinant izTRAIL protein was administered in a single dose of 10 mg / kg at the same time and in the same manner as in
5 - циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили в разовой дозе 4 мг/кг вместе с белком izTRAIL (10 мг/кг) по схеме группы 3 после введения препарата доксорубицин.5 - cyclic peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys was administered in a single dose of 4 mg / kg together with izTRAIL protein (10 mg / kg) according to the
6 - циклический пептид Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys вводили по той же схеме, что и в группе 5, после введения препарата «Нексавар», но без izTRAIL.6 - cyclic peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys was introduced according to the same scheme as in
Из фиг.3, представляющей рост опухолей, видно, что рекомбинантный противоопухолевый белок в дозе 10 мг/кг, в 1500 раз превышающей эффективные концентрации этого белка на клетки А549 in vitro, в моноварианте был неэффективен (ТРО - 5-10%). Доксорубицин в терапевтической дозе вызывал значительное торможение роста опухоли (ТРО достигало 60%). Пептид в нетоксичной концентрации не усиливал противоопухолевый эффект доксорубицина. Рекомбинантный белок izTRAIL в сочетании с доксорубицином неаддитивным образом подавлял рост опухоли (увеличение ТРО до 75%). Дополнительное применение пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys в сочетании с izTRAIL и доксорубициномом усиливало торможение роста опухоли до 90%. Повышение коэффициента торможения роста опухоли за счет добавления циклического пептида Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys к сочетанию рекомбинантного белка izTRAIL и доксорубицина было достоверным согласно статистике Уитни-Манна (p<0.05)From figure 3, representing the growth of tumors, it is seen that a recombinant antitumor protein at a dose of 10 mg / kg, 1,500 times higher than the effective concentration of this protein on A549 cells in vitro, was not effective in the monovariant (TPO - 5-10%). Doxorubicin at a therapeutic dose caused significant inhibition of tumor growth (TPO reached 60%). The peptide in non-toxic concentration did not enhance the antitumor effect of doxorubicin. The recombinant izTRAIL protein in combination with doxorubicin non-additively suppressed tumor growth (increase of TPO up to 75%). The additional use of the peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys in combination with izTRAIL and doxorubicin enhanced tumor growth inhibition by 90%. The increase in the tumor growth inhibition coefficient due to the addition of the cyclic peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys to the combination of the recombinant izTRAIL protein and doxorubicin was significant according to Whitney-Mann statistics (p <0.05)
Таким образом, предлагаемый способ подавления роста опухолей, в котором применение рекомбинантного белка TRAIL в сочетании с противоопухолевыми препаратами и таргетными субстанциями дополняют циклическим пептидом Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys, позволяет повысить эффективность торможения роста опухолей.Thus, the proposed method of suppressing tumor growth, in which the use of the recombinant protein TRAIL in combination with antitumor drugs and targeted substances supplemented with the cyclic peptide Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys, allows to increase the efficiency of inhibition of tumor growth .
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012130891/15A RU2530592C2 (en) | 2012-07-20 | 2012-07-20 | Method of suppressing tumour growth |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012130891/15A RU2530592C2 (en) | 2012-07-20 | 2012-07-20 | Method of suppressing tumour growth |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012130891A RU2012130891A (en) | 2014-01-27 |
| RU2530592C2 true RU2530592C2 (en) | 2014-10-10 |
Family
ID=49956908
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012130891/15A RU2530592C2 (en) | 2012-07-20 | 2012-07-20 | Method of suppressing tumour growth |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2530592C2 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115466311A (en) * | 2021-06-10 | 2022-12-13 | 首都医科大学 | 18 beta-glycyrrhetinic acid-RGDK resisting adhesion migration and invasion, and its synthesis, anticancer metastasis activity and application |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2316337C2 (en) * | 2001-04-24 | 2008-02-10 | Мерк Патент Гмбх | Combined therapy by using antiangiogenic agents and tnf-alpha |
| US20090226372A1 (en) * | 2008-02-21 | 2009-09-10 | Burnham Institute For Medical Research | Methods and compositions related to peptides and proteins with c-terminal elements |
-
2012
- 2012-07-20 RU RU2012130891/15A patent/RU2530592C2/en active IP Right Revival
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2316337C2 (en) * | 2001-04-24 | 2008-02-10 | Мерк Патент Гмбх | Combined therapy by using antiangiogenic agents and tnf-alpha |
| US20090226372A1 (en) * | 2008-02-21 | 2009-09-10 | Burnham Institute For Medical Research | Methods and compositions related to peptides and proteins with c-terminal elements |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KUEN-FENG CHEN ET AL., Sorafenib Overcomes TRAIL Resistance of Hepatocellular Carcinoma Cells through the Inhibition of STAT3. Clin. Cancer Res., 2010, 16(21), PP. 5189-5199 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012130891A (en) | 2014-01-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wang et al. | Breakthrough of solid tumor treatment: CAR-NK immunotherapy | |
| Batlevi et al. | ENGAGE-501: phase II study of entinostat (SNDX-275) in relapsed and refractory Hodgkin lymphoma | |
| Weide et al. | Intralesional treatment of metastatic melanoma: a review of therapeutic options | |
| JP7780444B2 (en) | Application of IFN-γ to the preparation of antitumor adjuvant drugs | |
| CN111343984A (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising streptonigrin and rapamycin as active ingredients | |
| Luo et al. | Fucoidan inhibits EGFR redistribution and potentiates sorafenib to overcome sorafenib-resistant hepatocellular carcinoma | |
| CN112569360A (en) | Anti-tumor medicine composition based on blocking PD-1/PD-L1 and application thereof | |
| Xu et al. | Inhibition of NLRP3 inflammasome activation in myeloid-derived suppressor cells by andrographolide sulfonate contributes to 5-FU sensitization in mice | |
| KR20100031123A (en) | Antitumor combinations containing a vegf inhibiting agent and irinotecan | |
| JP2020512978A5 (en) | ||
| RU2530592C2 (en) | Method of suppressing tumour growth | |
| WO2018061004A1 (en) | Therapeutic multi-targeting constructs and uses thereof | |
| Martinez et al. | 392 Phase 1 study of CI-8993 anti-VISTA antibody in patients with advanced solid tumor malignancies | |
| Jedrzejewski et al. | Polysaccharide peptide induces a tumor necrosis factor-α-dependent drop of body temperature in rats | |
| KR20080099234A (en) | Combination comprising Combretastatin and Anticancer Agent | |
| CN117866069B (en) | A small molecule polypeptide TFMP-Y4 labeled with iodine-131 and its preparation method and application | |
| Li et al. | Delicaflavone reactivates anti-tumor immune responses by abrogating monocytic myeloid cell-mediated immunosuppression | |
| JP2008507499A (en) | Combined anticancer therapy and pharmaceutical composition thereof | |
| Pak | Alpha-Fetoprotein: A revolutionary anti-cancer drug | |
| CN108992671A (en) | A kind of purposes in pharmaceutical composition and its drug of preparation treatment hepatic injury | |
| Li et al. | The regulatory effects and applications of TIGIT/CD155 on the tumor microenvironment in HCC | |
| Zhou et al. | Effects of Exercise Intensity and Time on Efficacy of Paclitaxel and Doxorubicin and Immune Microenvironment in the 4T1 Breast Cancer Model | |
| Chen et al. | Enhanced effect of radiofrequency ablation on HCC by siRNA-PD-L1-endostatin Co-expression plasmid delivered | |
| Sacks | Chang et al. | |
| CN116531395B (en) | Composition containing artemisinin derivatives and application of composition in preparation of medicines for treating leukemia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160721 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20171222 |