RU2577242C1 - Способ создания модели транзиторной ишемии сетчатки - Google Patents
Способ создания модели транзиторной ишемии сетчатки Download PDFInfo
- Publication number
- RU2577242C1 RU2577242C1 RU2015114834/14A RU2015114834A RU2577242C1 RU 2577242 C1 RU2577242 C1 RU 2577242C1 RU 2015114834/14 A RU2015114834/14 A RU 2015114834/14A RU 2015114834 A RU2015114834 A RU 2015114834A RU 2577242 C1 RU2577242 C1 RU 2577242C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- eye
- needle
- retina
- solution
- ischemia
- Prior art date
Links
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 208000032253 retinal ischemia Diseases 0.000 title claims description 10
- 102100033902 Endothelin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 101800004490 Endothelin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 abstract description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 13
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 abstract description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 14
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 5
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 4
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 4
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 4
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 4
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 4
- 210000001210 retinal vessel Anatomy 0.000 description 4
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 3
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 3
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 3
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 3
- 210000001927 retinal artery Anatomy 0.000 description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 101001010792 Homo sapiens Transcriptional regulator ERG Proteins 0.000 description 2
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 2
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 2
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 2
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 2
- TYNVOQYGXDUHRX-UHFFFAOYSA-N 1-nitropyrazole Chemical class [O-][N+](=O)N1C=CC=N1 TYNVOQYGXDUHRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000002862 Angle-Closure Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 208000005590 Choroidal Neovascularization Diseases 0.000 description 1
- 206010060823 Choroidal neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009552 doppler ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000002497 edematous effect Effects 0.000 description 1
- 206010014801 endophthalmitis Diseases 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000007654 ischemic lesion Effects 0.000 description 1
- 208000018769 loss of vision Diseases 0.000 description 1
- 231100000864 loss of vision Toxicity 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N minocycline Chemical compound C([C@H]1C2)C3=C(N(C)C)C=CC(O)=C3C(=O)C1=C(O)[C@@]1(O)[C@@H]2[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C1=O DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N 0.000 description 1
- 229960004023 minocycline Drugs 0.000 description 1
- 230000033040 negative regulation of metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004386 ocular blood flow Effects 0.000 description 1
- 210000001636 ophthalmic artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000012014 optical coherence tomography Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003534 oscillatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000004243 retinal function Effects 0.000 description 1
- 210000003994 retinal ganglion cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000004644 retinal vein occlusion Diseases 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000006439 vascular pathology Effects 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной офтальмологии, и может быть использовано для моделирования транзиторной ишемии сетчатки. Моделирование осуществляют путем введения в глаз крысы раствора эндотелина-1 (ЭТ-1). Для этого выполняют вкол инсулиновой иглы размером 0,4×13 мм (27G) при развороте среза иглы к верхнему веку в область экватора глаза верхне-наружного квадранта конъюнктивы. Проводят иглу субконъюнктивально не менее чем на половину ее длины в направлении заднего полюса глаза. Вводят по игле 0, 2 мл 4·10-6 М раствора ЭТ-1 в фосфатном буфере, имеющем pH 7,4. Способ обеспечивает адекватную воспроизводимость транзиторной ишемии сетчатки в эксперименте без повреждений тканей глаза и при уменьшении дозы вводимого препарата. 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной офтальмологии, и может быть использовано для моделирования ишемических состояний сетчатки на крысах, в том числе транзиторной окклюзии глазной артерии и ее ветвей, и изучения на моделях методов коррекции данных патологических состояний.
Транзиторная ретинальная ишемия - частая причина снижения и потери зрения, возникающая на фоне сосудистых заболеваний (оптические нейропатии, окклюзии ретинальных сосудов и каротидных артерий, острый приступ закрытоугольной глаукомы и т.д.). Ретинальная ишемия возникает на фоне гипоксии, когда недостаточное содержание кислорода приводит к угнетению метаболических процессов в тканях глаза и апоптозу клеток сетчатки, при этом ее наружные слои более резистентны к гипоксическому стрессу [Janáky М., Grósz A., Tóth Е., Benedek К., Benedek G. Hypobaric hypoxia reduces the amplitude of oscillatory potentials in the human ERG. Doc Ophthalmol. 2007; 114 (1): 45-51; Tinjust D., Kergoat H., Lovasik J. V. Neuroretinal function during mild systemic hypoxia. Aviat Space Environ Med. 2002; 73 (12): 1189-94]. В связи с этим остается актуальным вопрос разработки и выбора экспериментальных моделей сосудистой патологии глаз, что имеет теоретическое значение для расширения понимания механизмов нарушения кровообращения и практическую значимость для оценки эффективности лечения сосудистых заболеваний сетчатки и зрительного нерва.
Для оценки микроциркуляции глаза у животных можно использовать разных животных, например кроликов [Xuan В., Wang Т., Chiou G. С., Dalinger I., Shkineva Т. К., Shevelev S. A. Effects of N-nitropyrazoles on ocular blood flow of rabbits and retinal function recovery of rat eyes after ischemic insults J Ocul Pharmacol Ther. 2001; 17(6): 505-15], но их ретинальные сосуды развиты слабо, и кровоснабжение глаза осуществляется преимущественно из системы хориоидальных сосудов.
У крысы, как и у человека, отмечается преобладание ретинального кровотока, за счет которого осуществляется питание большей части сетчатки, поэтому крысы являются наилучшим объектом для моделирования ишемического поражения сетчатки [Liu Т., Hui L., Wang Y.S., Guo J.Q., Li R., Su J.B., Chen J.K., Xin X.M., Li W.H. In-vivo investigation of laser-induced choroidal neovascularization in rat using spectral-domain optical coherence tomography (SD-OCT). Graefes Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 2013; 251(5): 1293-1301; Sun C., Li X.X., He X. J, Zhang Q., Tao Y. Neuroprotective effect of minocycline in a rat model of branch retinal vein occlusion. Exp Eye Res. 2013; 113: 105-116.].
Известно, что эндотелин -1 (ЭТ-1) - самый мощный из известных сосудосуживающих агентов, состоит из 21 аминокислоты и играет ключевую роль в гомеостазе кровеносных сосудов. Связываясь со специфическими рецепторами клеточных мембран (ЕТА и ЕТВ), эндотелин-1 повышает внутриклеточную концентрацию ионов Ca2+, что ведет к усилению сокращения гладких мышц сосудистой стенки.
Доказано, что повышенный уровень ЭТ-1 в крови связан с увеличением частоты развития ишемии. Введение ЭТ-1 внутрь глаза с целью моделирования ишемии впервые было предложено в 1993 году K. Takei и соавт.[Takei K., Sato Т., Nonoyama Т., Miyauchi Т., Goto К., Hommura S. А new model of transient complete obstruction of retinal vessels induced by endothelin-1 injection into the posterior vitreous body in rabbits. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 1993; 231(8): 476-81]. После инъекции ЭТ-1 в стекловидное тело или зрительный нерв у животных возникали клеточные повреждения, обструкция ретинального кровотока, повышение скотопической b-волны ЭРГ и апоптоз клеток в ганглиозном слое сетчатки [Lau J., Dang М., Hockmann K., Ball А. К. Effects of acute delivery of endothelin-1 on retinal ganglion cell loss in the rat. Exp Eye Res. 2006; 82(1): 132-145].
Введение препарата в стекловидное тело имеет несколько недостатков: возможность перфорации глаза, повреждения хрусталика, развития эндофтальмита.
В исследовании B.C. Chauhan и соавт. [Chauhan В.С, LeVatte Т.L., Jollimore С.A., Yu Р. K., Reitsamer Н.A., Kelly М.Е., Yu D.Y., Tremblay F., Archibald M. L. Model of endothelin-1-induced chronic optic neuropathy in rat. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2004; 45(1): 144-52] после длительного ретробульбарного введения ЭТ-1 крысам с помощью микропомпы, установленной на 84 дня, отмечали снижение ретинального кровотока в среднем на 68% и уменьшение толщины слоя ганглиозных клеток. Недостатком методики является дополнительная травма от хирургического вмешательства, необходимого для установки микропомпы, трудности правильной ее установки и дороговизна. Кроме того, постепенное выделение препарата рассчитано на моделирование хронической ишемии.
Наименее инвазивным и простым методом краткосрочной ишемии считают временную окклюзию сосудов глаза с помощью субконьюнктивального введения ЭТ-1.
Ближайшим аналогом (прототипом) предлагаемого изобретения является модель, которую предложили К. Masuzawa и соавт. [Masuzawa К., Jesmin S., Maeda S., Kaji Y., Oshika Т., Zaedi S., Shimojo N., Yaji N., Miyauchi Т., Goto K. A model of retinal ischemia-reperfusion injury in rats by subconjunctival injection of endothelin-1. Exp Biol Med (Maywood). 2006; 231(6): 1085-9]. Они использовали субконъюнктивальное введение ЭТ-1 крысам в дозе 0,3 мл 4*105 М, при этом перфузия восстанавливалась в течение 5-35 минут после инъекции. Были получены доказательства, что высокие дозы ЭТ-1 при субконъюнктивальной инъекции вызывают окклюзию ЦАС с потерей ганглиозных и активацией глиальных клеток без повреждения других тканей.
Модель легко воспроизводима, не требует операционной и риск возникновения инфекции минимален. Существенным недостатком является необходимость высокой дозы ЭТ-1 для моделирования ишемии, поэтому нельзя исключить вероятность побочных эффектов со стороны системной циркуляции и повреждения других тканей, а также высокую экономическую стоимость такого исследования.
Задачей изобретения является создание простого, воспроизводимого и экономичного способа моделирования транзиторной ишемии ретинальных сосудов у крыс.
Технический результат заключается в профилактике осложнений, обусловленных нарушением системной циркуляции крови, и повреждений тканей глаза экспериментального животного; повышении экономичности; упрощении способа за счет уменьшения дозы сосудосуживающего препарата путем оптимизации пути его введения при сохранении адекватной воспроизводимости модели транзиторной ишемии сетчатки.
Нами установлено, что благодаря оригинальному пути введения препарата, обеспечивающему усиленное воздействие на ретробульбарные сосуды, предлагаемый способ позволяет в сравнении с прототипом уменьшить как дозу действующего вещества в десять раз, так и объем вводимого раствора на 1/3 при моделировании транзиторной ишемии сетчатки.
Сущность изобретения состоит в следующем.
Моделирование транзиторной ишемии сетчатки осуществляют путем введения крысе раствора ЭТ-1. Новым является то, что введение ЭТ-1 осуществляют следующим образом. Выполняют вкол инсулиновой иглы размером 0,4×13 мм (27G) при развороте среза иглы к верхнему веку в область экватора глаза верхне-наружного квадранта конъюнктивы. Проводят иглу субконъюнктивально не менее чем на половину ее длины в направлении заднего полюса глаза. Вводят по игле 0, 2 мл 4·10-6 М раствора ЭТ-1 в фосфатном буфере, имеющем pH 7,4.
Способ осуществляют следующим образом.
1. Готовят раствор ЭТ-1 из сухого вещества. В ампуле ЭТ-1 (Sigma-Aldrich) содержится 0, 1 мг ЭТ-1 в виде белого порошка. Его Mr=2491,9, значит 1 моль вещества = 2491,9 г.
Если 2491,9 г - 1 моль, то 1 г вещества=1 г*1 моль/2491,9 г=0,0004 моль=4*10-4 моль.
1 г (1000 мг) - 4*10-4 моль.
0,1 мг ЭТ-1 во флаконе = х моль.
х=0,1 мг * 4*10-4 моль/ 1000 мг=4*10-8 моль ЭТ-1 во флаконе.
Разводим сухое вещество ЭТ-1 в 10 мл 0,05 М стерильного раствора калиевого фосфатного буфера, имеющего pH 7,4. Могут быть использованы, например, следующие фосфатные буферы: нитратный, магниевый, калиевый, натриевый.
Если в 10 мл - 4*10-8 моль ЭТ-1,
то в 1000 мл (1 л) - х моль/л (М),
х=4*10-6 моль/л(М).
Таким образом, в результате проведенных расчетов определена концентрация вещества в полученном растворе.
Набирают инсулиновым шприцем 0,2 мл полученного раствора ЭТ-1.
2. После анестезии (системный наркоз в сочетании с местным анестетиком), делают вкол инсулиновой иглы размером 0,4×13 мм (27G) субконъюнктивально (срез иглы, направляют к верхнему веку) в экватор глаза, расположенный в верхне-наружном квадранте конъюнктивы. Проводят иглу субконъюнктивально не менее чем на половину ее длины в направлении заднего полюса глаза.
Медленно вводят 0,2 мл 4*10-6 М раствора ЭТ-1 в калиевом фосфатном буфере 0,05 М, имеющем pH 7,4. Через несколько секунд отмечают побледнение конъюнктивальных сосудов, еще через несколько секунд начинается исчезновение рефлекса с глазного дна. Полное прекращение тока крови может быть подтверждено офтальмоскопически. Извлекают иглу и наносят на глаз гелевый слезозаменитель или кератопротекор.
По данным ультразвукового дуплексного сканирования в режимах цветового допплеровского энергетического картирования и импульсной допплерографии на 20 крысах породы Wistar 200-250 г (20 глаз) после введения 0,2 мл 4*10-6 М раствора ЭТ-1 в калиевом фосфатном буфере с рН=7,4 по предложенному способу отмечалось полное прекращение кровотока в ретробульбарных сосудах с частичным восстановлением кровотока (реперфузией) в течение 5-50 минут. Эти данные подтверждают эффективность модели транзиторной ишемии.
Морфологические изменения сетчатки при исследовании энуклеированных глаз после моделирования по предлагаемому способу на 7 день после создания модели: сетчатка резко отечная, складчатая, увеличение толщины слоя внутренних волокон за счет отека. Визуализируются сосуды с утолщенной стенкой за счет отека и клеточной гиперплазии. Также некоторые ядра клеток частично ориентированы перпендикулярно просвету сосуда, что свидетельствует о сохраняющемся спазме гладких мышц. На внутренней поверхности сетчатки скопления детрита из разрушенных гемолизированных эритроцитов. Вокруг обилие макрофагов с большой цитоплазмой, заполненной гомогенизированным содержимым. Просвет центральной артерии сетчатки сохранен, в то время как в мелких артериях просвет отсутствует. Вокруг зрительного нерва кровоизлияние. Такие изменения свидетельствуют об ишемическом повреждении сетчатки вследствие транзиторной ишемии по механизму спазма глазных сосудов.
Таким образом, предлагаемая нами концентрация ЭТ-1 в сочетании со способом введения раствора этого вещества в верхне-наружний квадрант (ближе к ретробульбарным сосудам) показала свою эффективность в создании экспериментальной модели транзиторной ишемии сетчатки у крыс.
Эффективность модели подтверждена с помощью ультразвукового дуплексного сканирования в режимах цветового допплеровского энергетического картирования и импульсной допплерографии пораженного и парного глаза на системе Voluson и патогистологического исследования сетчатки и сосудистой оболочки с помощью светового микроскопа на микросистеме Leica на базе ФГБУ «МНИИГБ им. Гельмгольца» Минздрава России.
Пример 1.
Крысе массой 230 г введен интраперитонеально анестетик общего действия. Наркоз наступил через 5 минут. Сделали вкол инсулиновой иглой 0,4×13 мм (27 G) субконъюнктивально срезом иглы, направленным к верхнему веку, в верхние-наружний квадрант в область экватора глаза, к заднему полюсу глаза на ½ длины иглы согласно предлагаемому способу моделирования. Медленно ввели 0,2 мл 4*10-6 М раствора ЭТ-1 в калиевом фосфатном буфере, pH последнего 7,4. Через несколько секунд отмечалось побледнение конъюнктивальных сосудов, еще через несколько секунд пропал рефлекс с глазного дна. Полное прекращение тока крови подтвердили офтальмоскопически. На роговицу нанесен гелевый слезозаменитель видисик.
По данным ультразвукового дуплексного сканирования в режимах цветового допплеровского энергетического картирования и импульсной допплерографии сразу после введения отмечалось полное прекращение кровотока в ретробульбарных сосудах с частичным восстановлением кровотока, который начался через 30 минут.
Морфологические изменения сетчатки при исследовании энуклеированного глаза на 7 день: сетчатка резко отечная, складчатая, увеличение толщины слоя внутренних волокон за счет отека. Визуализируются сосуды с утолщенной стенкой за счет отека и клеточной гиперплазии. Также некоторые ядра клеток частично ориентированы перпендикулярно просвету сосуда, что свидетельствует о сохраняющемся спазме гладких мышц. На внутренней поверхности сетчатки скопления детрита из разрушенных гемолизированных эритроцитов. Вокруг обилие макрофагов с большой цитоплазмой, заполненной гомогенизированным содержимым. Просвет центральной артерии сетчатки сохранен, в то время как в мелких артериях просвет отсутствует. Вокруг зрительного нерва кровоизлияние.
Пример 2.
Крысе массой 250 г введен интраперитонеально анестетик общего действия. Наркоз наступил через 4 минуты. В левый глаз инсталляция на конъюнктиву местный анестетик (инокаин). Игла введена субконъюнктивально по предлагаемому способу. Медленно ввели 0,2 мл 4*10-6 М раствора ЭТ-1 в калиевом фосфатном буфере, pH последнего 7,4. Через несколько секунд побледнели конъюнктивальные сосуды, еще через несколько секунд пропал рефлекс с глазного дна. Полное прекращение тока крови подтвердили офтальмоскопически. На роговицу нанесен гелевый слезозаменитель видисик.
По данным ультразвукового дуплексного сканирования в режимах цветового допплеровского энергетического картирования и импульсной допплерографии сразу после введения отмечалось полное прекращение кровотока в ретробульбарных сосудах с частичным восстановлением кровотока, который начался через 50 минут.
Морфологические изменения сетчатки при исследовании энуклеированного глаза на 7 день: сетчатка резко отечная и складчатая, увеличение толщины слоя внутренних волокон за счет отека. Ядра клеток некоторых сосудов частично ориентированы перпендикулярно просвету сосуда, что свидетельствует о сохраняющемся спазме гладких мышц. На внутренней поверхности сетчатки скопления детрита из разрушенных гемолизированных эритроцитов. Вокруг обилие макрофагов с большой цитоплазмой, заполненной гомогенизированным содержимым. Просвет центральной артерии сетчатки сохранен, в то время как в мелких артериях просвет отсутствует. Вокруг зрительного нерва кровоизлияние.
Таким образом, мы провели моделирование по предлагаемому способу на 20 крысах породы Wistar массой 200-250 г (20 глаз) Во всех случаях получена транзиторная ишемия сетчатки, подтвержденная подобными у всех животных изменениями кровотока по данным УЗИ и морфологии.
Claims (1)
- Способ моделирования транзиторной ишемии сетчатки путем введения крысе раствора эндотелина-1 (ЭТ-1), отличающийся тем, что выполняют вкол инсулиновой иглы размером 0,4×13 мм (27G) при развороте среза иглы к верхнему веку в область экватора глаза верхне-наружного квадранта конъюнктивы, проводят иглу субконъюнктивально не менее чем на половину ее длины в направлении заднего полюса глаза и вводят по ней 0,2 мл 4-10-6 М раствора ЭТ-1 в фосфатном буфере, имеющем рН 7,4.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015114834/14A RU2577242C1 (ru) | 2015-04-21 | 2015-04-21 | Способ создания модели транзиторной ишемии сетчатки |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015114834/14A RU2577242C1 (ru) | 2015-04-21 | 2015-04-21 | Способ создания модели транзиторной ишемии сетчатки |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2577242C1 true RU2577242C1 (ru) | 2016-03-10 |
Family
ID=55654460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015114834/14A RU2577242C1 (ru) | 2015-04-21 | 2015-04-21 | Способ создания модели транзиторной ишемии сетчатки |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2577242C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2614937C1 (ru) * | 2016-04-12 | 2017-03-30 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) | Способ моделирования гипоксического поражения тканей глаза с активацией апоптоза |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2284582C2 (ru) * | 2004-06-10 | 2006-09-27 | Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца Минздрава РФ | Способ моделирования токсической ретинопатии |
| RU2313312C1 (ru) * | 2006-05-03 | 2007-12-27 | Федеральное государственное учреждение "МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЛАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ имени ГЕЛЬМГОЛЬЦА ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ" | Способ моделирования ишемии сетчатки глаза |
| EP1059925B1 (en) * | 1997-11-21 | 2009-04-08 | Allergan, Inc. | Ep2-receptor agonists as neuroprotective agents for the eye |
-
2015
- 2015-04-21 RU RU2015114834/14A patent/RU2577242C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1059925B1 (en) * | 1997-11-21 | 2009-04-08 | Allergan, Inc. | Ep2-receptor agonists as neuroprotective agents for the eye |
| RU2284582C2 (ru) * | 2004-06-10 | 2006-09-27 | Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца Минздрава РФ | Способ моделирования токсической ретинопатии |
| RU2313312C1 (ru) * | 2006-05-03 | 2007-12-27 | Федеральное государственное учреждение "МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЛАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ имени ГЕЛЬМГОЛЬЦА ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ" | Способ моделирования ишемии сетчатки глаза |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MASUZAWA К. et al. A model of retinal ischemia-reperfusion injury in rats by subconjunctival injection of endothelin-1. Exp Biol Med (Maywood). 2006; 231(6): 1085-9. * |
| ГУНДОРОВА Р. А. Модель ишемии сетчатки. Вестник офтальмологии, 2008, Т. 124, N 3, С. 18-23. STECK J et al. Retinal vessel pathologies in a rat model of periventricular leukomalacia: a new model for retinopathy of prematurity? Invest Ophthalmol Vis Sci. 2015 Feb 19;56(3):1830-41. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2614937C1 (ru) * | 2016-04-12 | 2017-03-30 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) | Способ моделирования гипоксического поражения тканей глаза с активацией апоптоза |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chiang et al. | The suprachoroidal space as a route of administration to the posterior segment of the eye | |
| Bravo-Osuna et al. | Microspheres as intraocular therapeutic tools in chronic diseases of the optic nerve and retina | |
| Chiang et al. | Circumferential flow of particles in the suprachoroidal space is impeded by the posterior ciliary arteries | |
| Jin et al. | Vitreous hemorrhage | |
| Tansatit et al. | An anatomic basis for treatment of retinal artery occlusions caused by hyaluronic acid injections: a cadaveric study | |
| EP3474836B1 (en) | Salbutamol-containing ophthalmic medicament | |
| RU2577242C1 (ru) | Способ создания модели транзиторной ишемии сетчатки | |
| US20190282792A1 (en) | Compounds for use in methods for treating glaucoma and retinal diseases | |
| RU2368359C1 (ru) | Способ лечения возрастной макулярной дегенерации | |
| RU2577449C1 (ru) | Способ моделирования транзиторной ишемии сетчатки у крыс | |
| Ferreira et al. | New pathways for drug and gene delivery to the eye: a mathematical model | |
| RU2575966C2 (ru) | Способ лечения неоваскулярной глаукомы | |
| Gil-Carrasco et al. | Comparative study of the safety and efficacy of the Ahmed glaucoma valve model M4 (high density porous polyethylene) and the model S2 (polypropylene) in patients with neovascular glaucoma | |
| Goldstein | Achieving drug delivery via the suprachoroidal space | |
| Johnston et al. | Systemic candidiasis with cataract formation in a premature infant | |
| Skolnick et al. | Tissue plasminogen activator to treat impending pupillary block glaucoma in patients with acute fibrinous HLA-B27 positive iridocyclitis | |
| RU2707279C1 (ru) | Способ лечения передних увеитов животных и птиц легкой и средней степени тяжести | |
| RU2220690C1 (ru) | Способ лечения закрытоугольной и смешанной глаукомы | |
| RU2198641C2 (ru) | Способ лечения глазных болезней | |
| WO2015081850A1 (zh) | 一种新型鼠神经生长因子玻璃体腔注射给药系统及其应用 | |
| Landholm et al. | Experimental retinal detachment with a sulfated polysaccharide | |
| RU2801496C1 (ru) | Способ лечения глаукомной оптической нейропатии | |
| Patel et al. | Supportive care for toxicities in children undergoing radiation therapy | |
| Narang et al. | Double-infusion cannula technique for glued fixation of intraocular lens with endothelial keratoplasty | |
| RU2576785C1 (ru) | Способ комбинированного лечения глаукомной оптической нейропатии |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170422 |