RU2404138C2 - Method of obtaining biopreparation for sea water purification from oil (versions) - Google Patents
Method of obtaining biopreparation for sea water purification from oil (versions) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2404138C2 RU2404138C2 RU2008131657/13A RU2008131657A RU2404138C2 RU 2404138 C2 RU2404138 C2 RU 2404138C2 RU 2008131657/13 A RU2008131657/13 A RU 2008131657/13A RU 2008131657 A RU2008131657 A RU 2008131657A RU 2404138 C2 RU2404138 C2 RU 2404138C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- oil
- obtaining
- cultivation
- medium
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 239000013535 sea water Substances 0.000 title claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000004546 suspension concentrate Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241001135317 Phyllobacterium myrsinacearum Species 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 claims description 8
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 7
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 5
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 5
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 241000209149 Zea Species 0.000 claims 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 16
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 6
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 abstract description 5
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 239000002283 diesel fuel Substances 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000218592 Acidovorax delafieldii Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108010048581 Lysine decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108700005126 Ornithine decarboxylases Proteins 0.000 description 1
- 102000052812 Ornithine decarboxylases Human genes 0.000 description 1
- 241001135342 Phyllobacterium Species 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005553 drilling Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000012851 eutrophication Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000008236 heating water Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000005341 metaphosphate group Chemical group 0.000 description 1
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 1
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002826 nitrites Chemical class 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 239000003129 oil well Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Water Treatment By Sorption (AREA)
- Removal Of Floating Material (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии и касается способа получения высокоэффективного биопрепарата для очистки морской воды от нефти на основе углеводородокисляющего штамма Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1. Способ получения жидкой формы биопрепарата включает в себя наращивание биомассы штамма на среде с пептоном, сахарозой, источниками фосфора, калия, магния и последующее культивирование на среде того же состава, заменяя пептон кукурузным экстрактом, после чего полученный концентрат разводят стерильной дистиллированной водой, в которую добавляют (г/л): концентрат бактериальной суспензии - 100,0; меласса - 20,0; K2HPO4 - 1,5; KH2PO4 - 1,5; MgSO4 - 1,5. Сухую форму биопрепарата получают путем инокуляции стерильного субстрата-носителя адсорбента вермикулитового вспученного в герметичных пакетах смесью концентрата суспензии штамма, 15% стерильного раствора мелассы и воды, взятых в соотношении 1:1:1 и дополнительного поверхностного культивирования.The invention relates to the field of biotechnology, microbiology and relates to a method for producing a highly effective biological product for the purification of sea water from oil based on the hydrocarbon-oxidizing strain of Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1. A method of obtaining a liquid form of a biological product includes increasing the biomass of the strain on a medium with peptone, sucrose, sources of phosphorus, potassium, magnesium and subsequent cultivation on a medium of the same composition, replacing peptone with corn extract, after which the resulting concentrate is diluted with sterile distilled water, to which is added (g / l): bacterial suspension concentrate - 100.0; molasses - 20.0; K 2 HPO 4 - 1.5; KH 2 PO 4 - 1.5; MgSO 4 - 1.5. A dry form of a biological product is obtained by inoculation of a sterile substrate carrier of a vermiculite adsorbent swollen in sealed bags with a mixture of a suspension suspension concentrate, 15% sterile molasses solution and water taken in a ratio of 1: 1: 1 and additional surface cultivation.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDESCRIPTION OF THE INVENTION
Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии и предназначено для решения экологических проблем с помощью микробиологических методов, в частности, изобретение может быть использовано для получения биопрепарата, предназначенного для очистки загрязненной нефтью морской воды.The invention relates to the field of biotechnology, microbiology and is intended to solve environmental problems using microbiological methods, in particular, the invention can be used to obtain a biological product intended for the treatment of oil-contaminated sea water.
Известен способ получения биопрепарата для очистки водной среды от нефтяного загрязнения, предусматривающий наращивание биомассы бактерий Pseudomonas putida - 36 ЦМПМ В-2443 и ее последующее высушивание [а.с. СССР №1076446, кл. C02F 3/34, 1982].A known method of obtaining a biological product for cleaning the aquatic environment from oil pollution, involving the growth of the biomass of bacteria Pseudomonas putida - 36 CMPM V-2443 and its subsequent drying [and.with. USSR No. 1076446, cl. C02F 3/34, 1982].
Однако полученный таким образом бактериальный препарат не дает возможности быстрого удаления нефтяной пленки с поверхности воды, что особенно важно при аварийных разливах нефти. Обязательным условием максимальной эффективности данного препарата является значительное увеличение плотности бактерий в очищаемой среде (не менее 1,5·10 кл/мл), что достигается не ранее чем на 7 сутки. Недостатками способа является то, что максимальная эффективность данного препарата достигается лишь при предварительном "оживлении" биомассы подогревом воды (5 м3) до t=18-28°С, аэрировании 12-16 часов и перемешивании, что является достаточно трудоемкими процессами. Препарат не плавуч, сразу же оседает на дно, и только после постепенного увеличения биомассы бактерий проявляется его деструктивная способность.However, the bacterial preparation thus obtained does not allow the rapid removal of the oil film from the surface of the water, which is especially important during emergency oil spills. A prerequisite for the maximum effectiveness of this drug is a significant increase in the density of bacteria in the medium being cleaned (at least 1.5 · 10 cells / ml), which is achieved no earlier than 7 days. The disadvantages of the method is that the maximum effectiveness of this drug is achieved only by preliminary “revitalizing” the biomass by heating water (5 m 3 ) to t = 18-28 ° C, aerating for 12-16 hours and mixing, which is quite time-consuming processes. The drug is not buoyant, immediately settles to the bottom, and only after a gradual increase in the biomass of bacteria does its destructive ability appear.
Известны также способы получения биопрепаратов для очистки объектов окружающей среды от нефти и нефтепродуктов, включающие культивирование нефтеокисляющих бактерий на питательной среде, внесение минеральных добавок и использование в качестве носителя стерильного торфа (патент РФ №2053205, кл. В09С 1/10, 1996; патент РФ №2116145, кл. В09С 1/10, C02F 3/34, 1998). Недостатком этих способов является использование в качестве носителя торфа, так как он является доступным для микроорганизмов веществом и будет потребляться ими в первую очередь, что увеличит срок очистки от нефти в целом. Кроме того, торф может стать источником эвтрофирования в районах применения биопрепаратов.There are also known methods for producing biological products for cleaning environmental objects from oil and oil products, including cultivating oil-oxidizing bacteria on a nutrient medium, adding mineral additives and using sterile peat as a carrier (RF patent No. 2053205, class B09C 1/10, 1996; RF patent No. 21116145, class B09C 1/10, C02F 3/34, 1998). The disadvantage of these methods is the use of peat as a carrier, since it is a substance accessible to microorganisms and will be consumed by them in the first place, which will increase the time for cleaning oil in general. In addition, peat can become a source of eutrophication in areas where biologics are used.
Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения биопрепарата «Авалон» (патент РФ №2181701, кл. C02F 3/34, С12Р 39/00, В09С 1/20, C12N 1/20, 2002), который содержит пористый носитель в виде вспененных стеклообразных метафосфатов переменного состава и штаммы микроорганизмов-деструкторов нефти (Serratia marcescens PL-1, Pseudomonas fluorescens biovar II 10-1, Acidovorax delafieldii 3-1), взятый нами за прототип.Closest to the proposed method is a method of obtaining a biological product "Avalon" (RF patent No. 2181701, class C02F 3/34, C12P 39/00, B09C 1/20, C12N 1/20, 2002), which contains a porous carrier in the form of foamed glassy metaphosphates of variable composition and strains of oil-degrading microorganisms (Serratia marcescens PL-1, Pseudomonas fluorescens biovar II 10-1, Acidovorax delafieldii 3-1), which we took as a prototype.
Его недостатком является то, что предлагаемые микроорганизмы могут представлять опасность в медицинском и санитарно-гигиеническом отношении. Кроме того, прототип предлагает к использованию коллекционные штаммы, а с точки зрения экологической безопасности и эффективности в состав биопрепаратов должны входить аборигенные микроорганизмы, свойственные конкретному очищаемому от нефти объекту.Its disadvantage is that the proposed microorganisms can be dangerous in medical and sanitary terms. In addition, the prototype offers collection strains for use, and from the point of view of environmental safety and effectiveness, the composition of biological products should include indigenous microorganisms characteristic of a particular object being cleaned from oil.
Задачей изобретения является создание такого способа получения биопрепарата для очистки морской воды от нефти, который позволил бы обеспечить экологическую, медицинскую и санитарно-гигиеническую безопасность его применения.The objective of the invention is the creation of such a method of obtaining a biological product for the purification of sea water from oil, which would ensure environmental, medical and sanitary safety of its use.
Это достигается за счет того, что в качестве биодеструктора используют углеводородокисляющий бактериальный штамм Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1, выделенный из вод Северного Каспия, отобранных в районе разведочного бурения нефтяных скважин. Филогенетическое положение штамма проведено на основании секвенирования гена 16S рРНК в Центре "Биоинженерия" РАН и ИНМИ РАН.This is achieved due to the fact that the hydrocarbon-oxidizing bacterial strain Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1, isolated from the waters of the North Caspian taken in the area of exploratory drilling of oil wells, is used as a biodestructor. The phylogenetic position of the strain was carried out on the basis of sequencing of the 16S rRNA gene at the Center for Bioengineering RAS and INMI RAS.
Данный штамм защищен патентом (2268934) и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (коллекционный номер ВКПМ В-9079).This strain is protected by patent (2268934) and deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms (collection number VKPM B-9079).
Штамм не токсичен, не обладает вирулентными и токсигенными свойствами, не диссеминирует во внутренних органах лабораторных животных.The strain is not toxic, does not have virulent and toxigenic properties, does not disseminate in the internal organs of laboratory animals.
Анализ литературных данных и известных технических решений показывает, что не имеется сведений о способах получения биопрепаратов для очистки объектов окружающей среды от нефтяного загрязнения с использованием бактерий рода Phyllobacterium. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условиям патентоспособности "новизна", "изобретательский уровень".An analysis of literature data and known technical solutions shows that there is no information on methods for producing biological products for cleaning environmental objects from oil pollution using bacteria of the genus Phyllobacterium. Therefore, the claimed invention meets the conditions of patentability "novelty", "inventive step".
Для промышленной реализации предлагаемого изобретения используются типовое биотехнологическое оборудование и материалы.For the industrial implementation of the invention, typical biotechnological equipment and materials are used.
Пример 1. Получение жидкой формы биопрепарата.Example 1. Obtaining a liquid form of a biological product.
В качестве деструктора нефти используют бактериальный штамм Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1. Хранение штамма осуществляют на агаризованной питательной среде (МПА) с периодическими пересевами (3-4 раза в год). Инкубирование после пересева ведут при температуре 28°С в течение 3-4 дней, затем культуру хранят в холодильнике при температуре 4°С, а также в лиофилизированном состоянии в ампулах.The bacterial strain Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1 is used as an oil destructor. The strain is stored on an agarized nutrient medium (MPA) with periodic reseeding (3-4 times a year). Incubation after reseeding is carried out at a temperature of 28 ° C for 3-4 days, then the culture is stored in a refrigerator at a temperature of 4 ° C, as well as in a lyophilized state in ampoules.
Штамм Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками: Грамвариабельные прямые подвижные палочки, спор не образуют. Образуют на МПА круглые, выпуклые, блестящие, слизистые, 1-2 мм в диаметре колонии с ровными краями от светло-розового до красного цвета. Оксидазоположительный, каталазоположительный, галотолерантный (рост в интервале солености 0,05-20% NaCl), не гидролизует крахмал, казеин, пектин и целлюлозу, не разжижает желатин, не образует сероводород и индол, восстанавливает нитраты в нитриты, образует кислоту из глюкозы, не окисляет лактозу. Не имеет аргининдегидролазы, лизин - и орнитиндекарбоксилаз, уреазы, фенилаланиндезаминазы, β-галактозидазы, не утилизирует цитрат и малонат натрия, цитрат натрия с глюкозой. Способен к росту на средах Чапека, Миллса, Кинга, магниево-калиево-дрожжевой (МКД), Маккланга, на средах, приготовленных на основе отрубей, мелассы, кукурузного, мясного или дрожжевого экстрактов, картофельного или горохового отваров как с добавлением дизельного топлива и нефти, так и без добавления.The strain Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1 is characterized by the following cultural-morphological and physiological-biochemical characteristics: Gramvariant direct motile rods, do not form a spore. Form on the MPA round, convex, shiny, mucous, 1-2 mm in diameter of the colony with smooth edges from light pink to red. Oxide-positive, catalase-positive, halotolerant (growth in the salinity range of 0.05-20% NaCl), does not hydrolyze starch, casein, pectin and cellulose, does not dilute gelatin, does not form hydrogen sulfide and indole, restores nitrates to nitrites, forms acid from glucose, does not oxidizes lactose. It does not have arginine dehydrolase, lysine - and ornithine decarboxylases, urease, phenylalanine deaminase, β-galactosidase, does not utilize sodium citrate and malonate, sodium citrate with glucose. It is capable of growth on Chapek, Mills, King, magnesium-potassium-yeast (MKD), Macklang, on media prepared on the basis of bran, molasses, corn, meat or yeast extracts, potato or pea decoctions as with the addition of diesel fuel and oil without adding.
Бактериальный штамм Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1, выращиваемый на стандартных средах и средах с добавлением морской соли, способен размножаться и деградировать до 96% углеводородов за 30 суток в диапазоне солености 0,05-20,0%.The bacterial strain Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1, grown on standard media and with the addition of sea salt, is able to multiply and degrade up to 96% of hydrocarbons in 30 days in the salinity range of 0.05-20.0%.
Получение жидкой формы биопрепарата включает получение концентрата суспензии штамма с последующим его разведением. Для получения посевного материала указанного штамма используют жидкую питательную среду следующего состава, г/л воды: пептон - 10,0; сахароза - 10,0; KH2PO4 - 0,5; K2HPO4 - 0,5; MgSO4×7H2O - 0,3; рН до стерилизации доводят до 7,4, стерилизуют при 1 атм. (121°С) 30 минут. Приготовленную жидкую среду разливают в качалочные колбы по 100 мл, при этом объем качалочной колбы - 750 мл. Среду засевают смывом с одного косяка и колбу помещают на качалку при 220 об/мин с температурой 28-30°С на 72 часа. Получают титр 0,5-1,0 млрд/мл. Для достижения титра около 1-2×10 КОЕ/мл время культивирования - 96 часов.Obtaining a liquid form of a biological product includes obtaining a suspension concentrate of a strain with its subsequent dilution. To obtain the seed of the specified strain using a liquid nutrient medium of the following composition, g / l of water: peptone - 10.0; sucrose - 10.0; KH 2 PO 4 - 0.5; K 2 HPO 4 - 0.5; MgSO 4 × 7H 2 O - 0.3; The pH before sterilization is adjusted to 7.4, sterilized at 1 atm. (121 ° C) 30 minutes. The prepared liquid medium is poured into 100 ml rocking flasks, while the volume of the rocking flask is 750 ml. The medium is seeded by flushing from one jamb and the flask is placed on a rocking chair at 220 rpm with a temperature of 28-30 ° C for 72 hours. A titer of 0.5-1.0 billion / ml is obtained. To achieve a titer of about 1-2 × 10 CFU / ml, the cultivation time is 96 hours.
Посевной материал можно хранить в холодильнике до 1 месяца при температуре плюс 4-6°С. Посевной материал вносят в ферментер и проводят глубинное культивирование в аэробных условиях при температуре 28-30°С с постоянно работающей мешалкой при коэффициенте заполнения 0,8 на среде следующего состава (г/л воды): кукурузный экстракт - 10,0; сахароза - 10,0; KH2PO4 - 0,5; K2HPO4 - 0,5; MgSO4×7H2O - 0,3; рН=7,5Seeds can be stored in the refrigerator for up to 1 month at a temperature of plus 4-6 ° C. The seed is introduced into the fermenter and deep cultivation is carried out under aerobic conditions at a temperature of 28-30 ° C with a constantly working mixer with a fill factor of 0.8 on a medium of the following composition (g / l of water): corn extract - 10.0; sucrose - 10.0; KH 2 PO 4 - 0.5; K 2 HPO 4 - 0.5; MgSO 4 × 7H 2 O - 0.3; pH = 7.5
Для успешного культивирования бактерий в промышленных условиях важное значение имеет количество вносимого посевного материала. Так, в опытных условиях было показано, что через 96 часов культивирования при 28 С штамма Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1 титр при внесении 1, 5 или 10% посевного материала достигал максимума 1,38-1,45×109 КОЕ/мл.For the successful cultivation of bacteria under industrial conditions, the amount of seed applied is important. Thus, under experimental conditions, it was shown that after 96 hours of cultivation at 28 ° C of the Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1 strain, the titer reached 1.38-1.45 × 10 9 CFU / ml when 1, 5 or 10% of inoculum was added.
Если же вносили 20 или 30% посевного материала, то максимальный титр 0,8-0,9×109 КОЕ/мл достигался через 24 часа культивирования при 28°С (табл.1). Таким образом, при необходимости ускоренного получения биопрепарата можно увеличить количество посевного материала до 20% от объема питательной среды и получить биопрепарат уже через 24 часа, хотя при этом титр бактерий будет несколько ниже, чем при внесении 1-10% посевного материала и культивировании 96 часов.If 20 or 30% of inoculum was introduced, then the maximum titer of 0.8-0.9 × 10 9 CFU / ml was achieved after 24 hours of cultivation at 28 ° C (Table 1). Thus, if you need accelerated production of a biological product, you can increase the amount of inoculum up to 20% of the volume of the nutrient medium and get the biological product in 24 hours, although the bacterium titer will be slightly lower than when 1-10% of the inoculum is added and cultured for 96 hours .
Полученный в ферментерах концентрат суспензии штамма разводят стерильной дистиллированной водой, в которую добавляют (г/л): концентрат бактериальной суспензии - 100,0; меласса - 20,0; K2HPO4 - 1,5; KH2PO4 - 1,5; MgSO4 - 1,5; pH 7,5.The strain suspension concentrate obtained in fermenters is diluted with sterile distilled water, to which (g / l) is added: bacterial suspension concentrate - 100.0; molasses - 20.0; K 2 HPO 4 - 1.5; KH 2 PO 4 - 1.5; MgSO 4 - 1.5; pH 7.5.
Жидкую форму биопрепарата разливают в стерильные пластиковые бутыли или канистры емкостью от 1 до 10 литров.The liquid form of the biological product is poured into sterile plastic bottles or canisters with a capacity of 1 to 10 liters.
Полученную жидкую форму биопрепарата выдерживают в течение 3-5 дней при 20-25°С, после чего ее можно применять для очистки водной поверхности, загрязненной нефтью или нефтепродуктами.The resulting liquid form of the biological product is incubated for 3-5 days at 20-25 ° C, after which it can be used to clean the water surface contaminated with oil or oil products.
Готовый препарат хранят в сухом темном помещении при температуре +5+20°С. Гарантийный срок годности жидкой формы биопрепарата - 6 месяцев со дня его изготовления.The finished product is stored in a dry, dark room at a temperature of + 5 + 20 ° C. The warranty shelf life of a liquid form of a biological product is 6 months from the date of its manufacture.
Пример 2. Получение сухой формы биопрепарата на субстрате-носителе.Example 2. Obtaining a dry form of a biological product on a substrate carrier.
В качестве субстрата-носителя используют стерильный адсорбент вермикулитовый вспученный.As a carrier substrate, a sterile expanded vermiculite adsorbent is used.
Вермикулит вспученный представляет собой сыпучий, пористый, зернистый материал чешуйчатого строения, получаемый в результате обжига природных гидратированных слюд. Обладает высокой огнестойкостью, малой плотностью, низкой теплопроводностью, химико-биологической инертностью при контакте с агрессивными средами, не смачивается расплавленным металлом, имеет высокие сорбционные свойства, экологически чистый, не токсичный, не подвержен гниению, препятствует распространению плесени, без запаха.Expanded vermiculite is a loose, porous, granular material of a scaly structure, obtained by burning natural hydrated mica. It has high fire resistance, low density, low heat conductivity, chemical and biological inertness when in contact with aggressive media, is not wetted by molten metal, has high sorption properties, environmentally friendly, non-toxic, not subject to decay, prevents the spread of mold, odorless.
Химический состав адсорбента вермикулитового (%): SiO2 - 34-36; AL2O3 - 6-18; MgO - 14-25; CaO - 1,2-2; K2O - 3-5; Fe2O3 - 5,6-17; другие - 0,2-1,2; рН(H2O)-6,8-8.The chemical composition of the vermiculite adsorbent (%): SiO 2 - 34-36; AL 2 O 3 - 6-18; MgO - 14-25; CaO - 1.2-2; K 2 O - 3-5; Fe 2 O 3 - 5.6-17; others 0.2-1.2; pH (H 2 O) -6.8-8.
Структура вермикулита как носителя обеспечивает оптимальные условия для иммобилизации и жизнедеятельности штамма на пористой структуре. При этом значительно улучшаются условия аэрации, увеличивается площадь питания клеток, а также вермикулит одновременно обеспечивает их минеральное питание. Кроме того, иммобилизация штамма на твердой поверхности предотвращает взаимное ингибирование клеток продуктами их метаболизма.The structure of vermiculite as a carrier provides optimal conditions for the immobilization and vital activity of the strain on the porous structure. At the same time, the aeration conditions are significantly improved, the cell nutrition area is increased, and vermiculite at the same time provides their mineral nutrition. In addition, the immobilization of the strain on a solid surface prevents mutual inhibition of cells by their metabolic products.
Субстрат высушивают при температуре 80-100°С, размалывают на молотковой мельнице до тонины 0,1-0,25 мм. Влажность субстрата носителя не должны превышать 15%, а рН должен составлять 7,2-7,4. Субстрат-носитель расфасовывают с наполнением 0,8 от объема в полиэтиленовые пакеты толщиной от 40 до 100 микрон размером 20-30 см по 150 и 400 г, пакеты запаивают и упаковывают в соответствующую тару для отправки на гамма-стерилизацию, где субстрат-носитель подвергают облучению гамма-лучами при дозе 1,0-2,0 Мрад (10-20 кГр). Субстрат-носитель можно стерилизовать и термическим способом - 2 часа при 121°С. В этом случае в качестве упаковки используются мешки из крафт-бумаги размером 20-30 см.The substrate is dried at a temperature of 80-100 ° C, milled in a hammer mill to a fineness of 0.1-0.25 mm. The moisture content of the substrate should not exceed 15%, and the pH should be 7.2-7.4. The carrier substrate is packaged with a filling of 0.8 by volume in plastic bags with a thickness of 40 to 100 microns, size 20-30 cm, 150 and 400 g each, the packages are sealed and packaged in an appropriate container for shipment to gamma sterilization, where the carrier substrate is subjected irradiation with gamma rays at a dose of 1.0-2.0 Mrad (10-20 kGy). The substrate carrier can be sterilized and thermally - 2 hours at 121 ° C. In this case, kraft paper bags of 20-30 cm are used as packaging.
Получают концентрат бактериальной суспензии глубинным культивированием на жидкой среде в ферментере (как в первом примере).A bacterial suspension concentrate is obtained by deep cultivation in a liquid medium in a fermenter (as in the first example).
Стерильный субстрат-носитель в пакетах инокулируют инъекцией смесью концентрата суспензии штамма, 15% стерильного раствора мелассы и воды, взятых в соотношении 1:1:1. На каждые 150 г стерильного субстрата-носителя с влажностью 15% используют 50 мл жидкой смеси. Воду и раствор мелассы и других ингредиентов предварительно стерилизуют. Конечная влажность биопрепарата не должна превышать 25%. Инъекция производится стерильной иглой диаметром 0,5-0,7 см. Инокулированные пакеты перемешиваются вручную или во вращающемся барабане - 30 об/мин в течение 3-5 минут. Исходный титр инокулированного субстрата-носителя составляет 20×106 КОЕ/г. Осуществляют дополнительное поверхностное культивирование штамма на субстрате-носителе в течение 3-5 дней при 18-20°С. Благодаря тому, что пакеты герметично закрыты, в них поддерживается практически постоянная влажность.The sterile carrier substrate in bags is inoculated with an injection of a mixture of a concentrate of a suspension of the strain, a 15% sterile solution of molasses and water taken in a 1: 1: 1 ratio. For every 150 g of a sterile carrier substrate with a moisture content of 15%, 50 ml of a liquid mixture is used. Water and a solution of molasses and other ingredients are pre-sterilized. The final moisture of the biological product should not exceed 25%. Injection is performed with a sterile needle with a diameter of 0.5-0.7 cm. Inoculated packets are mixed manually or in a rotating drum - 30 rpm for 3-5 minutes. The initial titer of the inoculated carrier substrate is 20 × 10 6 CFU / g. Perform additional surface cultivation of the strain on a substrate carrier for 3-5 days at 18-20 ° C. Due to the fact that the bags are hermetically sealed, they maintain almost constant humidity.
Готовый препарат хранят в сухом темном помещении при температуре +5+20°С. Гарантийный срок годности этой формы биопрепарата - 1 год со дня его изготовления.The finished product is stored in a dry, dark room at a temperature of + 5 + 20 ° C. The warranty shelf life of this form of biological product is 1 year from the date of its manufacture.
В случае замораживания препарата при транспортировании или хранении препарат перед применением должен быть разморожен и выдержан в течение 5-7 суток при температуре +15+20°С для реактивации - восстановления количества бактерий Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1. Неоднократное замораживание и размораживание препарата не допускается.In case of freezing of the preparation during transportation or storage, the preparation must be thawed before use and kept for 5-7 days at a temperature of + 15 + 20 ° С for reactivation - restoration of the number of bacteria Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1. Repeated freezing and thawing of the drug is not allowed.
Свойства и характеристики жидкой и сухой форм биопрепарата представлены в таблице 2.The properties and characteristics of the liquid and dry forms of the biological product are presented in table 2.
Таким образом, предлагаемый способ благодаря дополнительному поверхностному культивированию штамма на стерильном субстрате-носителе в герметично закрытых пакетах позволяет не только повысить титр и биологическую активность препарата, но и исключает необходимость дополнительной расфасовки готового препарата, что удешевляет технологию получения препарата в целом.Thus, the proposed method due to the additional surface cultivation of the strain on a sterile carrier substrate in hermetically sealed bags allows not only to increase the titer and biological activity of the drug, but also eliminates the need for additional packaging of the finished product, which reduces the cost of the technology for obtaining the drug as a whole.
Кроме того, предложенный способ благодаря соблюдению всех требований асептики на каждом этапе производства, исключает возможность заражения биопрепарата посторонней нежелательной микрофлорой.In addition, the proposed method due to compliance with all requirements of aseptic at each stage of production, eliminates the possibility of infection of the biological product with extraneous unwanted microflora.
Преимуществом заявленных форм препарата в сравнении с известным штаммом Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1 (RU 2268934 C2, 27.01.2006) является получение более высокого титра клеток, более длительный срок хранения, а также исключение заражения биопрепарата посторонней нежелательной микрофлорой. Кроме того, при иммобилизации штамма на пористой структуре вермикулита (сухая форма биопрепарата) улучшаются условия аэрации, увеличивается площадь питания клеток и дополнительно обеспечивается их минеральное питание, исключается взаимное ингибирование клеток продуктами их метаболизма.An advantage of the claimed forms of the preparation in comparison with the well-known Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1 strain (RU 2268934 C2, January 27, 2006) is to obtain a higher titer of cells, a longer shelf life, and also to prevent infection of the biological product with extraneous undesirable microflora. In addition, when the strain is immobilized on the porous structure of vermiculite (dry form of a biological product), the aeration conditions improve, the cell nutrition area increases and their mineral nutrition is additionally provided, and mutual inhibition of cells by their metabolic products is excluded.
Изобретение обеспечивает достижение технического результата, может быть использовано на практике, обеспечивает возможность воспроизводимости, что удовлетворяет условию патентоспособности "промышленная применимость".The invention ensures the achievement of a technical result, can be used in practice, provides the possibility of reproducibility, which satisfies the condition of patentability "industrial applicability".
Источники информацииInformation sources
1. Авторское свидетельство СССР №1076446, кл. C02F 3/34, 1982.1. USSR copyright certificate No. 1076446, cl. C02F 3/34, 1982.
2. Патент РФ №2053205, кл. В09С 1/10, 1996.2. RF patent No. 2053205, cl. B09C 1/10, 1996.
3. Патент РФ №2116145, кл. В09С 1/10, C02F 3/34, 1998.3. RF patent №2116145, cl. B09C 1/10, C02F 3/34, 1998.
4. Патент РФ №2181701, кл. C02F 3/34, С12Р 39/00, В09С 1/20, C12N 1/20, 2002.4. RF patent No. 2181701, cl. C02F 3/34, C12P 39/00, B09C 1/20, C12N 1/20, 2002.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008131657/13A RU2404138C2 (en) | 2008-07-30 | 2008-07-30 | Method of obtaining biopreparation for sea water purification from oil (versions) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008131657/13A RU2404138C2 (en) | 2008-07-30 | 2008-07-30 | Method of obtaining biopreparation for sea water purification from oil (versions) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008131657A RU2008131657A (en) | 2010-02-10 |
| RU2404138C2 true RU2404138C2 (en) | 2010-11-20 |
Family
ID=42123411
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008131657/13A RU2404138C2 (en) | 2008-07-30 | 2008-07-30 | Method of obtaining biopreparation for sea water purification from oil (versions) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2404138C2 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2600872C2 (en) * | 2014-11-19 | 2016-10-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | Preparation for cleaning soil and water from oil contaminants |
| RU2615464C1 (en) * | 2015-12-31 | 2017-04-04 | Общество с ограниченной ответственностью Малое инновационное предприятие "СахаНефтеБиоСорб" | Preparation for soils and water bodies purification from oil products |
| RU2624065C1 (en) * | 2016-03-23 | 2017-06-30 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Strain psychrobacter cibarius arc 13 vkpm b-12351 is destructor of oil and oil products |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2181701C2 (en) * | 2000-06-20 | 2002-04-27 | Лимбах Иван Юрьевич | Biological preparation "avalon" for cleaning environmental objects to remove petroleum and petroleum derivatives, and method of preparation thereof |
| RU2268934C2 (en) * | 2003-10-28 | 2006-01-27 | ООО "ЛУКОЙЛ-Нижневолжскнефть" | STRAIN Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1 FOR DESTRUCTION OF PETROLEUM HYDROCARBON IN SUBSALINE-AQUEOUS ECOSYSTEM |
-
2008
- 2008-07-30 RU RU2008131657/13A patent/RU2404138C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2181701C2 (en) * | 2000-06-20 | 2002-04-27 | Лимбах Иван Юрьевич | Biological preparation "avalon" for cleaning environmental objects to remove petroleum and petroleum derivatives, and method of preparation thereof |
| RU2268934C2 (en) * | 2003-10-28 | 2006-01-27 | ООО "ЛУКОЙЛ-Нижневолжскнефть" | STRAIN Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1 FOR DESTRUCTION OF PETROLEUM HYDROCARBON IN SUBSALINE-AQUEOUS ECOSYSTEM |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| СЕМЕНОВ С.М. Лабораторные среды для актиномицетов и грибов. Справочник. - М.: Агропромиздат, 1990, с.3. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2600872C2 (en) * | 2014-11-19 | 2016-10-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | Preparation for cleaning soil and water from oil contaminants |
| RU2615464C1 (en) * | 2015-12-31 | 2017-04-04 | Общество с ограниченной ответственностью Малое инновационное предприятие "СахаНефтеБиоСорб" | Preparation for soils and water bodies purification from oil products |
| RU2624065C1 (en) * | 2016-03-23 | 2017-06-30 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Strain psychrobacter cibarius arc 13 vkpm b-12351 is destructor of oil and oil products |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2008131657A (en) | 2010-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Feasibility of sewage sludge and food waste aerobic co-composting: Physicochemical properties, microbial community structures, and contradiction between microbial metabolic activity and safety risks | |
| CN104232501B (en) | Enterobacter cancerogenus for degrading polyethylene and application of enterobacter cancerogenus | |
| CN100588624C (en) | Water environment microbial remediation agent and preparation method thereof | |
| CN101407774B (en) | Preparation technique of photosynthetic bacteria preparation | |
| RU2565549C2 (en) | Biopreparation for bioremediation of oil-contaminated soils for climatic conditions of far north | |
| CN111793575A (en) | A compound bacterial agent and its application in aquaculture | |
| CN103484396B (en) | New strain of streptomyces thermocarboxydus and application thereof | |
| CN104787899B (en) | A kind of antibacterial water quality purifier for marine aquaculture and preparation method thereof | |
| KR101920557B1 (en) | Mixed Strain for Decomposing Food Waste and Method for Treating Food Waste Using the Same | |
| KR20140074451A (en) | Microbial agent for improving water quality of aquarium | |
| CN106754571B (en) | A kind of composite microbial deodorant and preparation method thereof | |
| RU2482179C1 (en) | Bacillus atropheus BACTERIA STRAIN - OIL AND OIL PRODUCT DECOMPOSER | |
| RU2404138C2 (en) | Method of obtaining biopreparation for sea water purification from oil (versions) | |
| CN106754572A (en) | One bacillus amyloliquefaciens and application thereof | |
| CN109679871A (en) | A kind of method of PAM-SA immobilized microorganism degradation oily waste water | |
| CN118126869A (en) | Bacillus subtilis BS-22 strain and its application | |
| RU2404139C2 (en) | Biopreparation for removing oil from sea water | |
| CN102382784B (en) | Salt-resistant Serratiasp. strain and application thereof in restoration of salinized petroleum-contaminated soil | |
| CN107217017A (en) | One plant of acinetobacter calcoaceticus and its application in oil degradation | |
| RU2142996C1 (en) | Strain arthrobacter sp for degradation of crude oil and petroleum products | |
| JP2013132248A (en) | Method for culturing photosynthetic bacterium and photosynthetic bacterium | |
| CN117645957B (en) | Pseudomonas stutzeri strain for degrading sulfonamide antibiotics and application thereof | |
| CN118755645A (en) | A composting bacillus strain DFH-1 and its application | |
| CN100349808C (en) | Method of removing microcystin using microbial degradation | |
| CN101050433A (en) | Microbe for degrading nitrite, separating and bring up method, and application |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110731 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20130227 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150731 |