[go: up one dir, main page]

RU2494470C1 - Method of treating pulmonary fibrosis - Google Patents

Method of treating pulmonary fibrosis Download PDF

Info

Publication number
RU2494470C1
RU2494470C1 RU2012113189/14A RU2012113189A RU2494470C1 RU 2494470 C1 RU2494470 C1 RU 2494470C1 RU 2012113189/14 A RU2012113189/14 A RU 2012113189/14A RU 2012113189 A RU2012113189 A RU 2012113189A RU 2494470 C1 RU2494470 C1 RU 2494470C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
hyaluronidase
bleomycin
fibrosis
pulmonary fibrosis
day
Prior art date
Application number
RU2012113189/14A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Андрей Владимирович Артамонов
Андрей Александрович Бекарев
Александр Михайлович Дыгай
Дмитрий Николаевич Киншт
Павел Геннадьевич Мадонов
Евгений Германович Скурихин
Ольга Викторовна Першина
Наталия Николаевна Ермакова
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "Саентифик Фьючер Менеджмент")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "Саентифик Фьючер Менеджмент") filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "Саентифик Фьючер Менеджмент")
Priority to RU2012113189/14A priority Critical patent/RU2494470C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2494470C1 publication Critical patent/RU2494470C1/en

Links

Landscapes

  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: hyaluronidase immobilised on polyethylene glycol is introduced into laboratory animals intranasally in a dose of 16 units. Hyaluronidase is introduced once a day on 1st, 3rd, 7th and 10th day after administering bleomycin that is a pulmonary fibrosis simulation factor.
EFFECT: higher pulmonary tissue resistance to fibrotic depositions, including prevents a reverse process of fibrosis formation ensured by the properties of pegylated hyaluronidase and developed mode of its administration that leads to a prolonged antifibrotic effect with low toxicity and immunogenicity of the effects on the body.
1 ex, 1 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности к терапии и пульмонологии, и касается лечения фиброза легких.The invention relates to medicine, in particular to therapy and pulmonology, and for the treatment of pulmonary fibrosis.

Идиопатический фиброз легких, достаточно распространенное тяжелое интерстициальное легочное заболевание, являющееся серьезной проблемой для клиницистов, так как обладает неблагоприятным прогнозом [1]. До настоящего времени не ясны механизмы возникновения заболевания, и как следствие этого нет лекарственных препаратов, препятствующих развитию фиброза легких. Терапия фиброза легких направлена главным образом на профилактику быстрого прогрессирования заболевания, а не на его предупреждение. Для этого в настоящее время используют глюкокортикостероиды, часто в комбинации с цитостатическими агентами, антиоксиданты (N-ацетилцистеин), антифиброзные средства (D-пеницилламин, колхицин) [2]. Как правило, изучение патогенеза фиброгенных изменений в легких и выявление средств, препятствующих интерстициальному отложению коллагена, проводят на блеомициновой модели пневофиброза [3, 4].Idiopathic pulmonary fibrosis, a fairly common severe interstitial pulmonary disease, which is a serious problem for clinicians, as it has an unfavorable prognosis [1]. To date, the mechanisms of the onset of the disease are not clear, and as a result there are no drugs that prevent the development of pulmonary fibrosis. Therapy for pulmonary fibrosis is mainly aimed at preventing the rapid progression of the disease, and not at preventing it. For this, glucocorticosteroids are currently used, often in combination with cytostatic agents, antioxidants (N-acetylcysteine), antifibrotic agents (D-penicillamine, colchicine) [2]. As a rule, the study of the pathogenesis of fibrogenic changes in the lungs and the identification of agents that interfere with the interstitial deposition of collagen are carried out on the bleomycin model of pneumofibrosis [3, 4].

Известен способ коррекции блеомицин-индуцированного фиброза легких под влиянием единичной интраназальной инокуляции препарата гиалуронидазы [5].A known method for the correction of bleomycin-induced pulmonary fibrosis under the influence of a single intranasal inoculation of the drug hyaluronidase [5].

Данный способ является близким к заявляемому по технической сущности и достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.This method is close to the claimed technical essence and the achieved result and is selected as a prototype.

Недостатками способа являются кратковременность действия фермента, высокая вероятность аллергических реакций, которые в сочетании с плохим периодом полувыведения препарата могут ограничивать клиническую эффективность гиалуронидазы [3, 6].The disadvantages of the method are the short duration of the enzyme, the high probability of allergic reactions, which, in combination with a poor half-life of the drug, can limit the clinical effectiveness of hyaluronidase [3, 6].

Задачей, решаемой данным изобретением, является повышение эффективности способа лечения фиброза легких и уменьшение побочного действия препарата гиалуронидазы.The problem solved by this invention is to increase the effectiveness of the method of treatment of pulmonary fibrosis and reduce the side effects of the drug hyaluronidase.

Поставленная задача достигается техническим решением, представляющим собой способ лечения фиброза легких, заключающийся в интраназальном введении лабораторным животным иммобилизированной на полиэтиленгликоле гиалуронидазы в дозе 16 ЕД 1 раз в сут на 1, 3, 7, 10-е сут после введения блеомицина.The task is achieved by a technical solution, which is a method of treating pulmonary fibrosis, which consists in intranasally administering to animals laboratory hyaluronidase immobilized on polyethylene glycol at a dose of 16 units once a day on days 1, 3, 7, 10 after administration of bleomycin.

Новым в предлагаемом изобретении является использование препарата иммобилизированной на полиэтиленгликоле гиалуронидазы 1 раз в сут на 1, 3, 7, 10-е сут после введения блеомицина.New in the present invention is the use of the drug immobilized on polyethylene glycol hyaluronidase 1 time per day on the 1st, 3rd, 7th, 10th day after administration of bleomycin.

Регулирование восстановления тканей при их повреждении - это тщательно скоординированный ответ организма, направленный на ликвидацию повреждения и восстановление целостности тканей [7]. Механизмы, которые участвуют в регуляции ответа организма на повреждение ткани, не полностью понятны. Известно, что различные легочные заболевания характеризуются избыточным отложением отдельных компонентов экстрацеллюлярного матрикса, в результате чего может развиться органный фиброз. При бронхиальной астме, эмфиземе легких, легочном фиброзе и других хронических заболеваниях легких обнаруживается дисбаланс между синтезом и деградацией гиалуроновой кислоты [7, 8].Regulation of tissue repair in case of damage is a carefully coordinated response of the body aimed at eliminating damage and restoring tissue integrity [7]. The mechanisms that are involved in regulating the body's response to tissue damage are not fully understood. It is known that various pulmonary diseases are characterized by excessive deposition of the individual components of the extracellular matrix, as a result of which organ fibrosis can develop. In bronchial asthma, emphysema, pulmonary fibrosis and other chronic lung diseases, an imbalance is found between the synthesis and degradation of hyaluronic acid [7, 8].

Гиалуроновая кислота основной компонент экстрацеллюлярного матрикса, который динамически изменяется во время повреждения тканей и воспалений. Взаимодействуя с протеогликанами (аггрекан, версикан) гиалуроновая кислота участвует в организации фибрина, фибронектина и коллагена [8]. В эксперименте показано, что продукция гиалуроновой кислоты возрастает в несколько раз после интратрахеальной инсталляции блеомицина, что связывают с повреждением паренхемы легких и воспалением [7].Hyaluronic acid is the main component of the extracellular matrix, which dynamically changes during tissue damage and inflammation. Interacting with proteoglycans (aggrecan, versican), hyaluronic acid is involved in the organization of fibrin, fibronectin and collagen [8]. The experiment showed that the production of hyaluronic acid increases several times after the intratracheal installation of bleomycin, which is associated with damage to the lung parenchyma and inflammation [7].

Основным ферментом, регулирующим метаболизм гиалуроновой кислоты, является гиалуронидаза. Расщепляя гиалуроновую кислоту на фрагменты (глюкозамины и глюкуроновая кислота), фермент тем самым ремодулирует экстрацеллюлярный матрикс [3, 7, 8, 9]. Основным показанием для применения гиалуронидазы являются контрактуры суставов, рубцы после ожогов и операций, анкилозирующий спондилоартрит, склеродермия, травматические поражения сплетений и периферических нервов (плексит, неврит), гематомы, тяжелые заболевания поясничных дисков и другие [3]. В эксперименте показано, что на фоне введения блеомицина в легких гиалуронидаза препятствует развитию фиброза. Это связывают со снижением концентрации глюкуроновой кислоты в паренхиме [5]. Однако, несмотря на выявленную эффективность действия препарата, использование нативной гиалуронидазы во многом ограничено, благодаря высокой способности фермента вызывать аллергические реакции и короткому периоду полувыведения из плазмы при системном введении [3, 6].The main enzyme that regulates the metabolism of hyaluronic acid is hyaluronidase. By splitting hyaluronic acid into fragments (glucosamines and glucuronic acid), the enzyme thereby remodulates the extracellular matrix [3, 7, 8, 9]. The main indications for the use of hyaluronidase are joint contractures, scars after burns and operations, ankylosing spondylitis, scleroderma, traumatic lesions of the plexuses and peripheral nerves (plexitis, neuritis), hematomas, severe diseases of the lumbar disc and others [3]. The experiment showed that, against the background of the introduction of bleomycin in the lungs, hyaluronidase inhibits the development of fibrosis. This is associated with a decrease in the concentration of glucuronic acid in the parenchyma [5]. However, despite the effectiveness of the drug, the use of native hyaluronidase is largely limited, due to the high ability of the enzyme to cause allergic reactions and a short half-life from plasma with systemic administration [3, 6].

На сегодняшний день модификация пептидных препаратов пегилированием активно развивающееся направление фармакологии. Пегилированные лекарственные препараты пептидной структуры имеют ряд весомых и несомненных преимуществ, которые ранее были просто невозможны при использовании нативных аналогов: усиление биологической активности, удлинение периода полураспада, замедление выведения, отсутствие пиков плазменной/тканевой концентрации, понижение токсичности и иммуногенности [10]. Результаты экспериментальных исследований последних лет дают основание говорить о перспективах лечения пегилированной гиалуронидазой миелосупрессии, вызванной цитостатиком [11].To date, the modification of peptide preparations by pegylation is an actively developing area of pharmacology. Pegylated drugs of the peptide structure have a number of significant and undeniable advantages that were previously simply impossible with the use of native analogues: increased biological activity, prolonged half-life, slowed elimination, the absence of plasma / tissue concentration peaks, and reduced toxicity and immunogenicity [10]. The results of experimental studies of recent years give reason to talk about the prospects of treatment with pegylated hyaluronidase myelosuppression caused by cytostatic [11].

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено в проанализированной патентной и научно-медицинской литературе.Distinctive features showed in the inventive combination of new properties that are not explicitly derived from the prior art in this field and are not obvious to a specialist. An identical set of features was not found in the analyzed patent and medical literature.

Изобретение может быть использовано для повышения устойчивости легочной ткани к отложению фибротических масс при фибротических заболеваниях в легких.The invention can be used to increase the resistance of lung tissue to the deposition of fibrotic masses with fibrotic diseases in the lungs.

Исходя из вышеизложенного, заявляемое изобретение соответствует критериям патентоспособности изобретения «Новизна», «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».Based on the foregoing, the claimed invention meets the criteria for patentability of the invention of "Novelty", "Inventive step" and "Industrial applicability".

Предлагаемый способ был изучен в экспериментах на 7-8 недельных мышах линии C57BL/6J в количестве 100 штук. Животные первой категории, инбредные мыши, получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН (сертификат имеется). Использование животных в экспериментах обосновано и согласовано с Комиссией по контролю за содержанием и использованием лабораторных животных ФГБУ «НИИ фармакологии» СО РАМН.The proposed method was studied in experiments on 7-8 week old mice of the C57BL / 6J line in the amount of 100 pieces. Animals of the first category, inbred mice, were obtained from the nursery of the experimental biomedical modeling department of the Research Institute of Pharmacology SB RAMS (certificate is available). The use of animals in experiments is justified and agreed with the Commission for the control of the maintenance and use of laboratory animals of the Federal State Budget Scientific Research Institute of Pharmacology SB RAMS.

Способ будет понятен из следующего описания и приложенного к нему рисунка 1.The method will be clear from the following description and the attached figure 1.

На рис.1 изображено легкое мыши, при окрашивании ткани легкого гематоксилином и эозином: а - интактной, б - получавшей блеомицин, в - получавшей нативную гиалуронидазу на фоне моделирования фиброза; г - получавшей иммобилизированную гиалуронидазу на фоне моделирования фиброза; легкое мыши, при окрашивании ткани легкого по Ван-Гизону на соединительную ткань: д - интактной; е - получавшей блеомицин; ж - получавшей нативную гиалуронидазу на фоне моделирования фиброза; з - получавшей иммобилизированную гиалуронидазу на фоне моделирования фиброза.Figure 1 shows the lung of a mouse when staining lung tissue with hematoxylin and eosin: a - intact, b - receiving bleomycin, c - receiving native hyaluronidase against the background of fibrosis modeling; g - receiving immobilized hyaluronidase against the background of modeling fibrosis; mouse lung, when staining lung tissue according to Van Gieson on connective tissue: e - intact; e - receiving bleomycin; g - receiving native hyaluronidase against the background of modeling fibrosis; h - receiving immobilized hyaluronidase against the background of modeling fibrosis.

Способ осуществляют следующим образом:The method is as follows:

Фиброз легкого моделировали однократным интратрахеальным введением 80 мкг блеомицина («Блеомицетин», ОАО «Лэнсфарм», Россия) в 30 мкл физиологического раствора. Контрольным животным в аналогичных условиях вводили эквивалентный объем физиологического раствора (контроль). Блеомицин относится к группе противоопухолевых антибиотиков. Его механизм действия до конца не выяснен, хотя известно, что он способен подавлять синтез нуклеиновых кислот (преимущественно ДНК) и белка. Препарат активен в отношении клеток, находящихся как в митотическом цикле, так и вне его, но проявляет большую активность в фазе G2. Основное токсическое действие цитостатик оказывает на легкие: вызывает пневмонию, фибротические изменения в паренхиме легких [3].Lung fibrosis was modeled by a single intratracheal administration of 80 μg of bleomycin (Bleomycetin, OJSC Lanspharm, Russia) in 30 μl of physiological saline. Control animals under similar conditions were injected with an equivalent volume of physiological saline (control). Bleomycin belongs to the group of antitumor antibiotics. Its mechanism of action is not fully understood, although it is known that it is able to inhibit the synthesis of nucleic acids (mainly DNA) and protein. The drug is active against cells located both in the mitotic cycle and outside it, but is more active in the G 2 phase. The main toxic effect of the cytostatic has on the lungs: it causes pneumonia, fibrotic changes in the lung parenchyma [3].

Иммобилизированную гиалуронидазу (ООО «Scientific Future Management», г.Новосибирск), модифицированную активированным полиэтиленоксидом молекулярной массой 1500 Да с помощью электроннолучевого синтеза вводили интраназально в дозе 16 ЕД/18 мкл/20 г на 1, 3, 7, 10-е сутки после интратрахеального введения блеомицина.Immobilized hyaluronidase (Scientific Future Management LLC, Novosibirsk), modified with activated polyethylene oxide with a molecular weight of 1500 Da by electron beam synthesis, was administered intranasally at a dose of 16 U / 18 μl / 20 g on days 1, 3, 7, 10 after intratracheal administration of bleomycin.

Нативную гиалуронидазу (ООО «Scientific Future Management», г.Новосибирск) вводили интраназально в дозе 16 ЕД/18 мкл/20 г на 1, 3, 7, 10-е сутки после интратрахеального введения блеомицина.Native hyaluronidase (Scientific Future Management LLC, Novosibirsk) was administered intranasally at a dose of 16 U / 18 μl / 20 g on days 1, 3, 7, 10 after intratracheal administration of bleomycin.

Заявляемая доза и режим введения нативной и иммобилизированной гиалуронидазы подобраны опытным путем и являются оптимальными для получения заявленного технического результата. Повышение дозы и кратности введения отменяют получение заявленного технического результата. Снижение дозы и/или однократное введение препарата значительно снижают эффективность способа.The claimed dose and regimen of administration of native and immobilized hyaluronidases are selected empirically and are optimal for obtaining the claimed technical result. Increasing the dose and frequency of administration cancel the receipt of the claimed technical result. Dose reduction and / or single administration of the drug significantly reduces the effectiveness of the method.

В качестве фона использовали интактных животных (интактный контроль).Intact animals (intact control) were used as the background.

На 3, 7, 14 и 21-е сутки после введения блеомицина проводили эвтаназию мышей передозировкой CO2 и изучали морфологическую картину легких. Для гистологического исследования из средней части правого легкого по стандартной методике готовили парафиновые блоки. С каждого блока получали срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином для изучения содержания лимфоцитов, макрофагов, нейтрофилов и плазматических клеток и по Ван-Гизону на соединительную ткань [12].On the 3rd, 7th, 14th and 21st days after administration of bleomycin, mice were euthanized with an overdose of CO 2 and the morphological picture of the lungs was studied. For histological examination, paraffin blocks were prepared from the middle part of the right lung by a standard method. Slices were obtained from each block, which were stained with hematoxylin and eosin to study the content of lymphocytes, macrophages, neutrophils and plasma cells and according to Van Gieson on connective tissue [12].

Математическую обработку результатов производили с применением стандартных методов вариационной статистики. Достоверность различий оценивали с использованием параметрического t критерия Стьюдента или непараметрического U критерия Манна-Уитни.Mathematical processing of the results was carried out using standard methods of variation statistics. Significance of differences was evaluated using parametric Student's t test or non-parametric Mann-Whitney U test.

Пример.Example.

При интратрахеальном введении блеомицина в легких мышей отмечаются изменения, характерные для токсического фиброзирующего альвеолита. В ранние сроки после инсталляции блеомицина (3 сут) наблюдается выраженная сосудистая реакция, характеризующаяся венозным полнокровием в стенках альвеол и отеком эпителия межальвеолярных перегородок (рисунок). Вокруг крупных сосудов и перибронхиально обнаруживаются воспалительные инфильтраты, содержащие лимфоциты, гистиоциты, альвеолярные макрофаги, нейтрофильные и эозинофильные лейкоциты (рис.1). На 7 сут происходит усиление гиперемии и отечных явлений, в просветах альвеол появляются спущенные альвеоциты. Одновременно увеличивается интенсивность интерстициального воспаления, отмечается утолщение стенок альвеол за счет инфильтрации их воспалительными клетками. 14 сут опыта характеризуются значительным усилением процессов воспаления и отека по сравнению с 7 сут опыта. В альвеолах появляется серозно-фибринозный экссудат, повышается количество слущенных альвеоцитов и клеток инфильтрата. При изучении лейкоцитарной формулы выявляется, что число нейтрофильных лейкоцитов превышает количество макрофагов и лимфоцитов. У корня легкого встречаются участки, где легочный рисунок отсутствует за счет массивной воспалительной инфильтрации. В этот период наблюдения в патологический процесс вовлекаются бронхиолы с образованием мелких кист и разрушением структуры альвеол, что является начальным этапом формирования так называемого «сотового легкого». На 21 сут воспалительный процесс в легких достигает максимальной выраженности. С помощью гистохимической окраски выявляется повышение интенсивности отложения коллагеновых волокон в легочной ткани фиброзных животных на протяжении всего периода наблюдения. На ранних сроках эксперимента отмечается преимущественно перибронхиальный и околососудистый фиброз (7 сут), который в дальнейшем распространяется на альвеолярные перегородки и превращается в интерстициальный (14 сут) (рис.1, табл.1). На 21-е сут опыта наблюдается картина обширного распространенного пневмофиброза.With intratracheal administration of bleomycin in the lungs of mice, changes characteristic of toxic fibrosing alveolitis are noted. In the early stages after the installation of bleomycin (3 days), a pronounced vascular reaction is observed, characterized by venous congestion in the walls of the alveoli and edema of the epithelium of the interalveolar septa (figure). Inflammatory infiltrates containing lymphocytes, histiocytes, alveolar macrophages, neutrophilic and eosinophilic leukocytes are found around large vessels and peribronchially (Fig. 1). On the 7th day, there is an increase in hyperemia and edematous phenomena, deflated alveocytes appear in the lumens of the alveoli. At the same time, the intensity of interstitial inflammation increases, there is a thickening of the walls of the alveoli due to infiltration by their inflammatory cells. 14 days of the experiment are characterized by a significant increase in the processes of inflammation and edema compared to the 7th day of the experiment. Serous fibrinous exudate appears in the alveoli, the number of desquamated alveocytes and infiltrate cells increases. When studying the leukocyte formula, it is revealed that the number of neutrophilic leukocytes exceeds the number of macrophages and lymphocytes. At the root of the lung there are areas where the pulmonary pattern is absent due to massive inflammatory infiltration. During this observation period, the bronchioles are involved in the pathological process with the formation of small cysts and the destruction of the structure of the alveoli, which is the initial stage in the formation of the so-called “cell lung”. At 21 days, the inflammatory process in the lungs reaches its maximum severity. Using histochemical staining, an increase in the intensity of deposition of collagen fibers in the lung tissue of fibrous animals is detected throughout the observation period. In the early stages of the experiment, mainly peribronchial and periovascular fibrosis (7 days) is observed, which subsequently spreads to the alveolar septum and turns into interstitial (14 days) (Fig. 1, Table 1). On the 21st day of the experiment, a picture of extensive common pneumofibrosis is observed.

Нативная гиалуронидаза и иммобилизированная гиалуронидаза замедляют прогрессирование фиброза в блеомициновых легких на протяжении всего периода наблюдения (табл.1). Пегилированная форма гиалуронидазы более эффективно замедляет отложение фиброзных масс в легких мышей, по сравнению с животными, получавшими нативную гиалуронидазу на 7, 14-е сут опыта (рис.1).Native hyaluronidase and immobilized hyaluronidase slow the progression of fibrosis in bleomycin lungs throughout the observation period (Table 1). The pegylated form of hyaluronidase more effectively slows down the deposition of fibrous masses in the lungs of mice, compared with animals that received native hyaluronidase on the 7th, 14th day of the experiment (Fig. 1).

Таблица 1Table 1 Содержание соединительной ткани (% от площади ткани) в легких мышей линии C57BL/6J в условиях интратрахеального введения блеомицина и курсового назначения препаратов гиалуронидазы на фоне моделирования фиброза легких (M±m)The content of connective tissue (% of tissue area) in the lungs of C57BL / 6J mice under the conditions of intratracheal administration of bleomycin and course prescription of hyaluronidase preparations against the background of modeling pulmonary fibrosis (M ± m) Блеомицин + иммобилизированная гиалуронидазаBleomycin + immobilized hyaluronidase Сроки исследования, суткиStudy time, days БлеомицинBleomycin Блеомицин + гиалуронидазаBleomycin + hyaluronidase Интактный контрольIntact control 1,12±0,031.12 ± 0.03 77 3,07±0,07*3.07 ± 0.07 * 3,05±0,17*3.05 ± 0.17 * 2,35±0,16*&2.35 ± 0.16 * & 14fourteen 3,91±0,07*3.91 ± 0.07 * 2,60±0,21*&2.60 ± 0.21 * & 2,33±0,15*&2.33 ± 0.15 * & 2121 4,26±0,14*4.26 ± 0.14 * 3,24±0,07*&3.24 ± 0.07 * & 2,90±0,11*&2.90 ± 0.11 * & Примечание: отмечена достоверность (P<0,05) различия показателя: * - от интактного контроля; & - от блеомицинового контроляNote: the reliability (P <0.05) of the indicator difference was noted: * - from intact control; & - from bleomycin control

У животных, леченных нативной гиалуронидазой или иммобилизированной гиалуронидазой, имеет место диффузная инфильтрация воспалительными клетками, в отличие от мышей, получавших только блеомицин, у которых инфильтрат локализуется преимущественно у корня легкого (рис.1). При изучении лейкоцитарной формулы у мышей, получавших препараты гиалуронидазы, отмечается незначительное увеличение количества альвеолярных макрофагов и снижение количества нейтрофилов в инфильтрате по сравнению с группой блеомицинового контроля.In animals treated with native hyaluronidase or immobilized hyaluronidase, diffuse infiltration by inflammatory cells occurs, in contrast to mice that received only bleomycin, in which the infiltrate is localized mainly at the root of the lung (Fig. 1). When studying the leukocyte formula in mice treated with hyaluronidase preparations, there was a slight increase in the number of alveolar macrophages and a decrease in the number of neutrophils in the infiltrate compared with the bleomycin control group.

Таким образом, интраназальное введение иммобилизированной гиалуронидазы препятствует отложению фибротических масс в паренхиме легких у мышей в условиях интратрахеального введения блеомицина, при этом антифибротический эффект пегилированного фермента более выражен, чем у нативной гиалуронидазы.Thus, intranasal administration of immobilized hyaluronidase prevents the deposition of fibrotic masses in the lung parenchyma in mice under the conditions of intratracheal administration of bleomycin, while the antifibrotic effect of the pegylated enzyme is more pronounced than that of native hyaluronidase.

Предлагаемый способ позволяет рассматривать иммобилизированную гиалуронидазу в качестве средства антифиброзной терапии легких.The proposed method allows to consider immobilized hyaluronidase as a means of antifibrotic therapy of the lungs.

ЛитератураLiterature

1. Илькович М.М., Новикова Л.Н., Сперанская А.А. Идиопатический фиброзирующий альвеолит // Участковый терапевт - 2009. - №6. - С.1-3.1. Ilkovich M.M., Novikova L.N., Speranskaya A.A. Idiopathic fibrosing alveolitis // District therapist - 2009. - No. 6. - S.1-3.

2. Андреева И.И. Фиброзирующие альвеолиты. В кн.: Саперов В.Н., Андреева И.И., Мусалимова Г.Г. (ред.) Практическая пульмонология. Чебоксары: Изд-во Чуваш, гос. ун-та; 2007. С.511-514.2. Andreeva I.I. Fibrosing alveolitis. In the book: Saperov V.N., Andreeva I.I., Musalimova G.G. (Ed.) Practical pulmonology. Cheboksary: Publishing house of Chuvash, state. un-that; 2007. S.511-514.

3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей. - 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: «Новая волна», Издатель Умеренков, 2008. - С.660-661, 1003-1004.3. Mashkovsky M.D. Medicines Manual for doctors. - 15th ed., Rev., Rev. and add. - M .: “New Wave”, Publisher Umerenkov, 2008. - S.660-661, 1003-1004.

4. Moeller A., Ask K., Warburton D. et al. The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis? // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2008. - Vol.40, №3. - P.362-382.4. Moeller A., Ask K., Warburton D. et al. The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis? // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2008. - Vol.40, No. 3. - P.362-382.

5. Bitencourt C.S., Pereira P.А.Т., Ramos S.G. et al. Hyaluronidase recruits mesenchymal-like cells to the lung and ameliorates fibrosis // Fibrogenesis & Tissue Repair. - 2011. - Vol.4, №3. - P.1-14.5. Bitencourt C.S., Pereira P.A.T., Ramos S.G. et al. Hyaluronidase recruits mesenchymal-like cells to the lung and ameliorates fibrosis // Fibrogenesis & Tissue Repair. - 2011. - Vol.4, No. 3. - P.1-14.

6. Thompson С.В., Shepard M.H., O'Connor P.M., et al. Enzymatic Depletion of Tumor Hyaluronan Induces Antitumor Responses in Preclinical Animal Models // Mol Cancer Ther. - 2010. - Vol.9. - P.3052-3064.6. Thompson, C. B., Shepard, M. H., O'Connor, P. M., et al. Enzymatic Depletion of Tumor Hyaluronan Induces Antitumor Responses in Preclinical Animal Models // Mol Cancer Ther. - 2010 .-- Vol. 9. - P.3052-3064.

7. Noble P.W., Jiang D. Matrix Regulation of Lung Injury, Inflammation, and Repair. The Role of Innate Immunity // Proc Am Thorac Soc. - 2006. - Vol.3. - P.401-404.7. Noble P.W., Jiang D. Matrix Regulation of Lung Injury, Inflammation, and Repair. The Role of Innate Immunity // Proc Am Thorac Soc. - 2006. - Vol. 3. - P.401-404.

8. Delpech В., Girard N., Bertrand P. et al. Hyaluronan: fundamental principles and applications in cancer // J. Intern. Med. - 1997. - №242. - P.41-48.8. Delpech B., Girard N., Bertrand P. et al. Hyaluronan: fundamental principles and applications in cancer // J. Intern. Med. - 1997. - No. 242. - P.41-48.

9. Kemparaju K., Girish K.S. Snake venom hyaluronidase: a therapeutic target // Cell Biochem. Funct. - 2006. - Vol.24. - P.7-12.9. Kemparaju K., Girish K.S. Snake venom hyaluronidase: a therapeutic target // Cell Biochem. Funct. - 2006 .-- Vol.24. - P.7-12.

10. Piedmonte D.M., Treuheit M.J. Formulation of Neulasta (pegfilgrastim) // Advanced Drug Delivery Reviews. - 2008. - Vol.60. - P.50-58.10. Piedmonte D.M., Treuheit M.J. Formulation of Neulasta (pegfilgrastim) // Advanced Drug Delivery Reviews. - 2008. - Vol.60. - P.50-58.

11. Дыгай A.M., Скурихин Е.Г., Першина О.В. и др. Гемопоэзстимулирующая активность препаратов иммобилизированных олигонуклеотидов и гиалуронидазы в условиях цитостатической миелосупрессии // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 2010. - Т.150, №11. - С.545-549.11. Dygay A.M., Skurikhin EG, Pershina OV et al. Hematopoiesis-stimulating activity of preparations of immobilized oligonucleotides and hyaluronidase under conditions of cytostatic myelosuppression // Bull. an experiment. biol. and medicine. - 2010. - T.150, No. 11. - S. 545-549.

12. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. - СПб: Медицина, 1969. - С.14, 36-38, 58, 98-100, 163, 170.12. Merkulov G.A. Course of histopathological technology. - St. Petersburg: Medicine, 1969. - P.14, 36-38, 58, 98-100, 163, 170.

Claims (1)

Способ лечения фиброза легких, заключающийся в интраназальном введении лабораторным животным (мыши) препарата гиалуронидазы в дозе 16 ЕД, отличающийся тем, что вводят иммобилизированную на полиэтиленгликоле гиалуронидазу 1 раз в сутки на 1, 3, 7, 10-е сутки после введения блеомицина. A method of treating pulmonary fibrosis, which consists in intranasally administering to a laboratory animal (mouse) a preparation of hyaluronidase in a dose of 16 units, characterized in that hyaluronidase immobilized on polyethylene glycol is administered once a day on days 1, 3, 7, 10 after administration of bleomycin.
RU2012113189/14A 2012-04-04 2012-04-04 Method of treating pulmonary fibrosis RU2494470C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012113189/14A RU2494470C1 (en) 2012-04-04 2012-04-04 Method of treating pulmonary fibrosis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012113189/14A RU2494470C1 (en) 2012-04-04 2012-04-04 Method of treating pulmonary fibrosis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2494470C1 true RU2494470C1 (en) 2013-09-27

Family

ID=49254167

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012113189/14A RU2494470C1 (en) 2012-04-04 2012-04-04 Method of treating pulmonary fibrosis

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2494470C1 (en)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2621163C1 (en) * 2016-02-16 2017-05-31 государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России) Antifibrolytic means
US10695340B2 (en) 2015-06-25 2020-06-30 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for fibrosis
WO2021154969A1 (en) * 2020-01-28 2021-08-05 Standard Of Care Corporation Hyaluronidase compositions and methods of using same to treat fibrosis
US12144892B2 (en) 2017-02-15 2024-11-19 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Pharmaceutical composition

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2004115390A (en) * 2001-10-24 2005-04-20 Пари Гмбх (De) KIT FOR PREPARING PHARMACEUTICAL COMPOSITION
WO2008052165A2 (en) * 2006-10-27 2008-05-02 Centocor Ortho Biotech Inc. Method for treating pathological pulmonary conditions and bleomycin associated pulmonary fibrosis

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2004115390A (en) * 2001-10-24 2005-04-20 Пари Гмбх (De) KIT FOR PREPARING PHARMACEUTICAL COMPOSITION
WO2008052165A2 (en) * 2006-10-27 2008-05-02 Centocor Ortho Biotech Inc. Method for treating pathological pulmonary conditions and bleomycin associated pulmonary fibrosis

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BITENCOURT C.S. et. al. Hyaluronidase recruits mesenchymal-like cells to the lung and ameliorates fibrosis, Bitencourt. 2011, 4:3, найдено 10.11.2012 из Интернета: http://download.springer.com/static/pdf/582/art%253A10.1186%252F1755-1536-4-3.pdf?auth66=1353334617_f2028f4508ab48fb568c3fa 50b 745295&ext=.pdf. *
ДЫГАЙ A.M. Фармакологическая стратегия клеточных технологий, 20.12.2010, найдено 10.11.2012 из Интернета: http://soramn.ru/files/prezidium_ramn/2.ppt. *
ДЫГАЙ A.M. Фармакологическая стратегия клеточных технологий, 20.12.2010, найдено 10.11.2012 из Интернета: http://soramn.ru/files/prezidium_ramn/2.ppt. ЧАЙКОВСКИЙ А.В. и др. Механизмы гемостимулирующих эффектов иммобилизированной с помощью нанотехнологий электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы, найдено 10.11.2012 из Интернета: https://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:S-mNtMO1cLQJ:oncology.tomsk.ru/nii/journal/2010/prill/files/soj_2010_prill_108-. NOBLE P.W. et al. Matrix regulation of lung injury, inflammation, and repair: the role of innate immunity, Proc Am Thorac Soc. 2006 Jul; 3(5):401-4, Abstract, найдено 10.11.2012 из Интернета: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16799081. *
ЧАЙКОВСКИЙ А.В. и др. Механизмы гемостимулирующих эффектов иммобилизированной с помощью нанотехнологий электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы, найдено 10.11.2012 из Интернет&# *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10695340B2 (en) 2015-06-25 2020-06-30 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for fibrosis
RU2729630C2 (en) * 2015-06-25 2020-08-11 Тайхо Фармасьютикал Ко., Лтд. Therapeutic agent for fibrosis
US11191759B2 (en) 2015-06-25 2021-12-07 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for fibrosis
US11690838B2 (en) 2015-06-25 2023-07-04 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for fibrosis
RU2621163C1 (en) * 2016-02-16 2017-05-31 государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России) Antifibrolytic means
US12144892B2 (en) 2017-02-15 2024-11-19 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Pharmaceutical composition
WO2021154969A1 (en) * 2020-01-28 2021-08-05 Standard Of Care Corporation Hyaluronidase compositions and methods of using same to treat fibrosis

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20080188441A1 (en) Composition for Treating Inflammatory Diseases
ES2953560T3 (en) Procedure for the treatment or reduction of edematous fibrosclerotic panniculopathy
Singh et al. Novel biotherapeutics targeting biomolecular and cellular approaches in diabetic wound healing
RU2494470C1 (en) Method of treating pulmonary fibrosis
Cowman et al. Role of hyaluronan in inflammatory effects on human articular chondrocytes
WO2020117698A1 (en) Compositions for the treatment of conditions
CN111514161B (en) Anti-oral ulcer preparation and application thereof
EP1749532A1 (en) Drug for remedy or treatment of wound
Yu et al. Molecular mechanisms of wound healing: The role of zinc as an essential microelement
Moreno-Blas et al. Autophagy in tissue repair and regeneration
US9713608B2 (en) Method for topically treating actinic keratosis on the trunk (except chest) or extremities with ingenol 3-(3,5-diethylisoxazole-4-carboxylate)
Wu et al. Bletilla striata polysaccharides alleviate ARDS by inhibiting NETs-induced pyroptosis in pulmonary alveolar macrophage through the PAD4 pathway
EP2389924A1 (en) An eyedrops of the deproteinized calf blood extract
EP3479830B1 (en) Application of small-molecule hyaluronic acid fragment
Grynchuk et al. Comparative characteristic of fibrinolytic activity in case of experimental peritonitisand underlying diabetes mellitus
RU2497523C1 (en) Method for improving therapeutic effectiveness in lung tissue disorders after action of cytostatics
Cardona-Álvarez et al. Pythiosis cutaneous in horses treated with triamcinolone acetonide. Part 2. Histological and histochemical description
Cui et al. Engineered microalgal extracellular vesicles for enhancing mitochondrial homeostasis in radiodermatitis prevention
Generalova et al. Polysaccharide from Solanum tuberosum L. as a potential antiulcer drug
Zarei et al. Synergistic effects of royal jelly and melittin on wound healing and collagen synthesis in mouse skin
Liu et al. The key role of hyaluronic acid molecular weight in HIF-1α pathway-mediated hypoxic microenvironment reprogramming
Nettelbladt et al. Accumulation of hyaluronan in bronchoalveolar lavage fluid is independent of iron-, complement-and granulocyte-depletion in bleomycin-induced alveolitis in the rat
Demircioğlu et al. The Efficacy of Low-Dose Enoxaparin in Psoriasis
Obara et al. Safety and efficacy of long-shelf-life allogeneic adipose-derived mesenchymal stem cell line-derived platelet-like cells for refractory foot ulcers: A translational preclinical and phase 1/2a study
Kośny et al. Case series of patients with atopic dermatitis treated with tralokinumab