RU2493168C2 - Пептидное производное - миметик эритропоэтина и его фармацевтические соли, их получение и применение - Google Patents
Пептидное производное - миметик эритропоэтина и его фармацевтические соли, их получение и применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2493168C2 RU2493168C2 RU2010123466/10A RU2010123466A RU2493168C2 RU 2493168 C2 RU2493168 C2 RU 2493168C2 RU 2010123466/10 A RU2010123466/10 A RU 2010123466/10A RU 2010123466 A RU2010123466 A RU 2010123466A RU 2493168 C2 RU2493168 C2 RU 2493168C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- epo
- nhr
- peptide
- pharmaceutically acceptable
- seq
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 94
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 claims abstract description 25
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims abstract description 8
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 30
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 claims description 23
- 102100031939 Erythropoietin Human genes 0.000 claims description 20
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims description 12
- -1 (1) obtaining R 1 H Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims description 3
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 claims description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 2
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000623 carbamazepine Drugs 0.000 claims description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 claims description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 claims 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 claims 1
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 7
- 108010092408 Eosinophil Peroxidase Proteins 0.000 abstract description 6
- 239000000556 agonist Substances 0.000 abstract description 2
- 230000006735 deficit Effects 0.000 abstract 1
- 108010074604 Epoetin Alfa Proteins 0.000 description 103
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 96
- 229940089118 epogen Drugs 0.000 description 96
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 45
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 33
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 30
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 19
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 18
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 18
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 16
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 16
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 15
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 15
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 15
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 15
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 15
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 15
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 15
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 14
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 14
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 11
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 11
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 10
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 10
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 9
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 6
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 6
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 6
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 6
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 6
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 description 5
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 5
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 5
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 description 5
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 0 C*NC(CCCCNCCCC(CCNCCCCC(C(N)=O)N)OC(NCCNC(C(CCCCNC(OCCOCCOC)=O)NC(OCCOCCCOC)=O)=O)=O)C(N)=O Chemical compound C*NC(CCCCNCCCC(CCNCCCCC(C(N)=O)N)OC(NCCNC(C(CCCCNC(OCCOCCOC)=O)NC(OCCOCCCOC)=O)=O)=O)C(N)=O 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 206010058116 Nephrogenic anaemia Diseases 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- DIZZIOFQEYSTPV-UHFFFAOYSA-N [I].CO Chemical compound [I].CO DIZZIOFQEYSTPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 3
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 3
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 3
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-Trimethylpyridine Chemical compound CC1=CC(C)=NC(C)=C1 BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FZTIWOBQQYPTCJ-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(4-carboxyphenyl)phenyl]benzoic acid Chemical compound C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C1=CC=C(C=2C=CC(=CC=2)C(O)=O)C=C1 FZTIWOBQQYPTCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100333654 Homo sapiens EPO gene Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFFHZYDWPBMWHY-UHFFFAOYSA-N L-Homocysteine Natural products OC(=O)C(N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910010082 LiAlH Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 2
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USZLCYNVCCDPLQ-UHFFFAOYSA-N hydron;n-methoxymethanamine;chloride Chemical compound Cl.CNOC USZLCYNVCCDPLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N methyl benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1 QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 2
- 238000007745 plasma electrolytic oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950000477 triflutate Drugs 0.000 description 2
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 2
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- AUYBSFAHQLKXSW-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloroethane;3-(ethyliminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine;hydrochloride Chemical compound Cl.ClCCCl.CCN=C=NCCCN(C)C AUYBSFAHQLKXSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004066 1-hydroxyethyl group Chemical group [H]OC([H])([*])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003287 1H-imidazol-4-ylmethyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[*])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000980 1H-indol-3-ylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- HCSBTDBGTNZOAB-UHFFFAOYSA-N 2,3-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1[N+]([O-])=O HCSBTDBGTNZOAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCFJUSRQHZPVKY-UHFFFAOYSA-N 3-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCC(O)=O WCFJUSRQHZPVKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000981 3-amino-3-oxopropyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003974 3-carbamimidamidopropyl group Chemical group C(N)(=N)NCCC* 0.000 description 1
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- PXACTUVBBMDKRW-UHFFFAOYSA-N 4-bromobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)C=C1 PXACTUVBBMDKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- 125000003143 4-hydroxybenzyl group Chemical group [H]C([*])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBKXEAXTFZPCHS-UHFFFAOYSA-N 4-phenylbutyric acid Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=CC=C1 OBKXEAXTFZPCHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000029483 Acquired immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YUOXDZJUBPTCLH-UHFFFAOYSA-N C(C(=O)O)(=O)O.C(CCCCCC)(=O)O Chemical compound C(C(=O)O)(=O)O.C(CCCCCC)(=O)O YUOXDZJUBPTCLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 101150002621 EPO gene Proteins 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 206010018367 Glomerulonephritis chronic Diseases 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M Glycolate Chemical compound OCC([O-])=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 101000987583 Mus musculus Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium on carbon Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- WXIONIWNXBAHRU-UHFFFAOYSA-N [dimethylamino(triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CN=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 WXIONIWNXBAHRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000272 alkali metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910001860 alkaline earth metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 125000005340 bisphosphate group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- KVSASDOGYIBWTA-UHFFFAOYSA-N chloro benzoate Chemical compound ClOC(=O)C1=CC=CC=C1 KVSASDOGYIBWTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000032798 delamination Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M dihydrogenphosphate Chemical compound OP(O)([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013846 hematide Proteins 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000006750 hematuria Diseases 0.000 description 1
- RAWBHTTZVBOMFT-UHFFFAOYSA-N heptanedioic acid pentan-2-one Chemical compound CCCC(C)=O.OC(=O)CCCCCC(O)=O RAWBHTTZVBOMFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M hexanoate Chemical compound CCCCCC([O-])=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940071870 hydroiodic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N iminodiacetic acid Chemical compound OC(=O)CNCC(O)=O NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002570 interstitial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-M mandelate Chemical compound [O-]C(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 125000005341 metaphosphate group Chemical group 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- IZYBEMGNIUSSAX-UHFFFAOYSA-N methyl benzenecarboperoxoate Chemical compound COOC(=O)C1=CC=CC=C1 IZYBEMGNIUSSAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940095102 methyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CN(C)C1=CC=NC=C1 PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N naphthalene-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C21 KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001314 paroxysmal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950009215 phenylbutanoic acid Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UORVCLMRJXCDCP-UHFFFAOYSA-M propynoate Chemical compound [O-]C(=O)C#C UORVCLMRJXCDCP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C([O-])=O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000002653 sulfanylmethyl group Chemical group [H]SC([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- DHHKPEUQJIEKOA-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-[6-(nitromethyl)-6-bicyclo[3.2.0]hept-3-enyl]acetate Chemical compound C1C=CC2C(CC(=O)OC(C)(C)C)(C[N+]([O-])=O)CC21 DHHKPEUQJIEKOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- AOCSUUGBCMTKJH-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-(2-aminoethyl)carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCN AOCSUUGBCMTKJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N triphosgene Chemical compound ClC(Cl)(Cl)OC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению пептидного производного - миметика ЭПО, имеющего формулу (I):
и его фармацевтических солей, где R1, R5 выбраны из циклических пептидов, имеющих последовательности SEQ ID NO:5, 6, 7 и 8; n1, n2 представляют собой целые числа, независимо выбранные из 0-10; R2, R4 выбраны из -СО или -CH2; R3 выбран из О, S, CH2, N(CH2)n3NHR6, NCO(CH2)n4NHR6, CHOCONH(CH2)n5NHR6, CHSCON(CH2)n5NHR6 или CHNHCON(CH2)n5NHR6; где n3 представляет собой целое число, выбранное из 1-10, n4 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n5 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R6 выбран из Н или производных метоксиполиэтиленгликоля. Полученный пептид или его фармацевтически приемлемую соль используют в составе фармацевтической композиции для лечения расстройств, характеризующихся недостаточностью ЭПО, низкой или дефектной популяцией эритроцитов. Изобретение позволяет получить агонист рецептора ЭПО, обладающий повышенной биологической активностью по сравнению с уже существующими миметиками ЭПО. 5 н. и 10 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 19 пр.
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к пептидному производному - миметику эритропоэтина (ЭПО) и его фармацевтическим солям, которые связываются с рецептором ЭПО и активируют рецептор ЭПО или обладают агонистическим действием в отношении ЭПО. Конкретно, настоящее изобретение относится к пептидному производному - миметику ЭПО, модифицированному активным метоксиполиэтиленгликолем, и способам его получения; также оно относится к лечению расстройств, характеризующихся низким уровнем ЭПО или недостаточной или дефектной популяцией эритроцитов с использованием указанного пептидного производного - миметика и его фармацевтических солей.
Предшествующий уровень техники
ЭПО представляет собой гликопротеиновый гормон, имеющий молекулярную массу приблизительно 34 кДа. ЭПО в плазме крови состоит из 165 аминокислот с высокой степенью гликозилирования, где основной компонент гликозила представляет собой сиаловую кислоту. На основе углеводородного содержания встречающиеся в природе ЭПО делятся на два типа, а именно α и β-тип, где α-тип содержит 34% углеводородов и β-тип содержит 26% углеводородов. Эти два типа обладают одними и теми же биологическими характеристиками, антигенностью и клиническим действием. Человеческий ген ЭПО располагается в хромосоме 7 long-Area 22. Его кДНК успешно клонирована в 1985 году, и рекомбинантный человеческий ЭПО (rНиЭПО) в основном продуцируют с использованием генетической рекомбинантной технологии и широко используют в клинической практике. ЭПО биосинтезировали с использованием технологии рекомбинантной ДНК (Egrie, JC, Strickland, TW, Lane, J etc. (986) Immunobiology (Immunobiol)72: 213-224), которая представляет собой продукт клонированного человеческого гена ЭПО, встроенного в клетки яичника китайского хомячка (клетки СНО) и экспрессирующегося в них. Природный человеческий ЭПО сначала транслируется в полипептидные цепи, содержащие 166 аминокислот, где позиция 166 представляет собой аргинин. При посттрансляционной модификации аргинин в позиции 166 деградируют с использованием гидроксилпептидазы. Молекулярная масса человеческого ЭПО без гликозила составляет 18236 Да. В интактной молекуле ЭПО гликозил составляет приблизительно 40% от общей молекулярной массы (J. Biol. Chem. 262: 12059).
ЭПО представляет собой первый цитокин, примененный в клинической практике, и до настоящего времени представляет собой наилучший увеличивающий уровень гемоглобина препарат, обладающий единичным и безопасным действием. Он обладает некоторым действием при почечной анемии, апластической анемии, множественной миеломе и пароксизмальной ночной гематурии; дополнительно, применение ЭПО может уменьшить степень переливания крови при хирургическом вмешательстве и до некоторой степени лечить анемию, вызванную злокачественной опухолью, химиотерапией и ревматоидным артритом. Поскольку ЭПО прежде всего производится эндотелиальными клетками почечных канальцев, то анемия, вызванная почечными заболеваниями, представляет собой первое показание для применения ЭПО; эффективность ЭПО при лечении почечной анемии составляет почти 100%, но ЭПО не улучшает функцию почек. Лечение ЭПО безопасно, эффективно и подходит для длительного лечения; дополнительно, оно решает проблему ускорения доставки крови. На глобальном рынке биотехнологических лекарств в 2006 году рекомбинантные лекарства ЭПО составляли 11,9 миллиардов долларов США. Имеется огромная емкость рынка.
В 1989 году рекомбинантный человеческий ЭПО (ЭПОGЕN) был одобрен U.S. FDA (Комиссия по контролю за лекарствами и питательными веществами) для лечения почечной анемии, но только с 1992 г. ЭПОGЕN поступил на китайский рынок. Ежегодная смертность от хронического нефрита составляет приблизительно 0,25% в Китае, из которой у значительной доли пациентов по существу развивается почечная недостаточность. Количество пациентов, страдающих от почечной анемии, составляет 500-600 тысяч ежегодно. В соответствии с консервативными оценками потребления вместе с потреблением при других вызванных раком анемиях емкость домашнего рынка составляет приблизительно 1,2-1,6 миллиардов или даже больше (рассчитанная при текущей цене, составляющей 30-40 CNY/дозу, средней массе пациентов 50 кг). С конца 1990-х ЭПО признали как наиболее хорошо продающиеся лекарства в основных областях Китая. Величина потребления составляет 62,13 миллионов юаней в рассмотренных госпиталях основных районов по всему Китаю в 2003 году, по занимаемому месту 56. Расходы на ЭПО в рассмотренных госпиталях основных районах по всему Китаю увеличилась до 80,49 миллионов CNY в 2004, с ежегодным ростом 30%.
В качестве эндогенного гормона, действующего на гематопоэтические клетки костного мозга, способствуя пролиферации, дифференцировке и созреванию эритроидных клеток-предшественников, ЭПО играет важную роль в регуляции кислородного статуса в организме. На ранней эмбриональной стадии ЭПО образуется в печени и затем постепенно перемещается в почки. ЭПО в основном секретируется интерстициальными клетками почечных канальцев после рождения.
Во время индукции дифференцировки клеток-предшественников эритроцитов под действием ЭПО индуцируется глобулин, который дает клеткам возможность рекрутировать больше гемоглобина с железосодержащей функциональной группой, которая может связываться с кислородом в зрелых эритроцитах; таким образом, эритроциты и гемопоэтин играют важную роль в снабжении кислородом организма. Последнее вызвано путем взаимодействия между ЭПО и поверхностным рецептором эритроцитов.
Когда организм здоров, тогда ткань может получать достаточно кислорода из уже существующих эритроцитов. В этот момент концентрация ЭПО в организме очень низка. Эта низкая, но нормальная концентрация ЭПО достаточна для того, чтобы способствовать генерации эритроцитов, что обычно утрачивается при старении.
Когда уровень кислородного транспорта эритроцитами в системе кровообращения уменьшается и возникает гипоксия, тогда количество ЭПО в организме увеличивается. Состояние гипоксии в организме может быть вызвано следующими причинами: избыточная радиация, уменьшенное поступление кислорода вследствие высоты или длительной комы, различные типы анемии и т.п. Как реакция на гипоксический стресс в организме, более высокий уровень ЭПО может стимулировать дифференцировку клеток-предшественников эритроцитов, увеличивая их способность продуцировать эритроциты. Когда количество эритроцитов в организме превышает потребность нормальной ткани, тогда уровень ЭПО в системе кровообращения уменьшается. Последнее точно возникает потому, что ЭПО играет критическую роль для формирования эритроцитов, поэтому эти гормоны обладают очень широкой перспективой для лечения и диагностики заболеваний крови, характеризующихся низким формированием и дефектом эритроцитов. Недавние исследования подвели основание для предсказания эффекта терапии ЭПО при множестве заболеваний, расстройств и гематологических аномалий, эти заболевания включают: применение ЭПО в лечении анемии у пациентов, страдающих от хронической почечной недостаточности (CRF), и введение ЭПО пациентам, страдающим от AIDS (синдром приобретенного иммунодефицита) и получающим химиотерапию (Danna, RP, Rudnick, SA, Abels, RI: edited by MB, Garnick, ЭПО in Clinical Applications-An International Perspective. Marcel Dekker; 1990, p.301-324).
Часть биологических действий ЭПО могут регулироваться внутренней ролью поверхностных рецепторов на клеточной мембране. Ранее, при исследовании связывания белка ЭПО с клеточной поверхностью с использованием незрелых эритроцитов, выделенных из селезенки мышей, обнаружили, что этот белок состоит из двух полипептидов и его молекулярная масса составляет приблизительно 85000-100000 кДа (более подробное описание смотри в Sawyer, et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3690-3694). Количество сайтов связывания ЭПО также подсчитано. Каждая клеточная мембрана содержит приблизительно 800-1000 сайтов. Среди этих сайтов связывания приблизительно 300 сайтов связывания имеют уровень Kd 90 пМ. Связывание оставшихся сайтов связывания является низким, составляя приблизительно 570 пМ. В некоторых исследованиях продемонстрировано, что по ответу на ЭПО эритроцитов из селезенки мышей, инфицированных дружественным штаммом вируса анемии, идентифицировано приблизительно 400 сайтов связывания, где некоторые имеют уровень Kd 100 пМ, а некоторые имеют низкий уровень Kd 800 пМ.
Последующая работа заключалась в том, что два типа рецептора ЭПО транскрибировались на одном гене. В настоящее время указанный ген клонирован. Например, последовательности ДНК и последовательности, кодирующие пептид, мышиного и человеческого рецептора ЭПО описаны в WO90/08822. В данной модели показано, что связывание ЭПО с рецептором ЭПО приводит к активации и димеризации двух рецепторов ЭПО. Эта димеризация дополнительно ведет к инициации проведения сигнала.
Применение клонированного гена ЭПО полезно при нахождении агонистов и антагонистов этих важных рецепторов. Пептид, который в некоторой степени может действовать на рецептор ЭПО, идентифицирован и описан. Конкретно, идентифицирована группа пептидов, содержащих основной пептидный фрагмент, который связывается с рецептором ЭПО и стимулирует дифференцировку и пролиферацию клеток ЭПО. Тем не менее ЕС50 пептида, который может стимулировать дифференцировку и пролиферацию клеток ЭПО очень низка, находясь в пределах от 20 нМ до 250 нМ. Таким образом, клинические применения этих пептидов весьма ограничены. Для преодоления сложностей существующих технологий в настоящем изобретении предложено пептидное производное - миметик ЭПО, обладающее более хорошей биологической активностью и более высокой биодоступностью, а также его фармацевтические соли и способ его получения.
Описание изобретения
Задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить пептидное производное - миметик ЭПО, обладающий лучшей биологической активностью и более высокой биодоступностью, а также его фармацевтические соли и способ его получения.
Изобретение также нацелено на то, чтобы предложить фармацевтическую композицию, содержащую вышеупомянутое пептидное производное - миметик ЭПО и его фармацевтические соли для лечения расстройств, характеризующихся низким уровнем ЭПО или недостаточной или дефектной популяцией эритроцитов.
В изобретении раскрыто пептидное производное - миметик ЭПО общей формулы (I) и его фармацевтические соли, обладающие биологической активностью in vivo,
где R1, R5 выбраны из мономерного пептида-миметика ЭПО и его аналогов, обладающих биологической активностью in vivo; n1, n2 представляют собой целые числа, независимо выбранные из 0-10; R2, R4 выбраны из -СО или -СН2; R3 выбран из О, S, CH2, N(CH2)n3NHR6, NCO(СН2)n4NHR6, CHOCONH(CH2)n5NHR6, CHSCON(CH2)n5NHR6 или CHNHCON(CH2)n5NHR6; где n3 представляет собой целое число, выбранное из 1-10, n4 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n5 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R6 выбран из Н или производных метоксиполиэтиленгликоля.
В этом аспекте предпочтительное воплощение представляет собой: R1, R5 независимо выбраны из мономерного пептида-миметика ЭПО и его аналогов общей формулы Y1X1X2X3GX4X5TWX6X7Y2Y3, которые обладают биологической активностью in vivo, где каждая аминокислота обозначена стандартно одной буквой, аминокислотные последовательности R1, R5 могут быть похожи или не похожи, и дополнительные предпочтительные аминокислотные последовательности R1, R5 могут быть постоянными или непостоянными, и N-концы R1, R5 ацетилизированы; Х2, Х3, Х4, X5, Х6, Y3 независимо выбраны из любой из 20 генетически кодируемых L-аминокислот или неприродных аминокислот;
Y1, Y2 независимо выбраны из любой из 20 генетически кодируемых L-аминокислот или неприродных аминокислот или пептидов, образованных этими аминокислотами; X1, Х7 выбраны из С, K, D, Е, Orn (L-орнитина) или Hoc (L-гомоцистеина).
В дополнительной оптимизации вышеупомянутого предпочтительного воплощения R1, R5 представляют собой циклический пептид, циклизованный дисульфидными связями или амидными связями; где если R1, R5 представляют собой циклический пептид, циклизованный дисульфидными связями, то X1, X7 независимо выбраны из С или Нос; аналогично, если R1, R5 представляют собой циклический пептид, циклизованный амидными связями, то X1, X7 независимо выбраны из K, D, Е или Orn.
В аспекте, охватывающем вышеупомянутое предпочтительное воплощение, Y3 предпочтительно выбран из K, Н или R, более предпочтительно Y3 представляет собой K.
В аспекте, охватывающем вышеупомянутое предпочтительное воплощение, длина аминокислотных последовательностей R1, R5 дополнительно оптимизирована, а именно предпочтительно выбрана из 13~40 аминокислот, более предпочтительно составляет 22 аминокислоты, еще более предпочтительно, но не ограничена следующей структурой с циклическим пептидом, наиболее предпочтительно, но без ограничения, циклическими пептидами NO:1-NO:8, а именно
В этом аспекте существуют четыре предпочтительных воплощения:
[1] n1, n2 равны 2, R2, R4 представляют собой -СО, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, n5 равно 2, R6 представляет собой Н или производные метоксиполиэтиленгликоля.
[2] n1, n2 равны 1, R2, R4 представляют собой -СО, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, n4 равно 2, R6 представляет собой Н или метоксиполиэтиленгликолевые производные.
[3] n1, n2 равны 2, R2, R4 представляют собой -СН2, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, n5 равно 2, R6 представляет собой Н или метоксиполиэтиленгликолевые производные.
[4] n1, n2 равны 1, R2, R4 представляют собой -CH2, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, n4 равно 2, R6 представляет собой Н или метоксиполиэтиленгликолевые производные.
Вышеупомянутые четыре предпочтительных воплощения приведены параллельно, не включая друг друга или не находясь в прогрессивной взаимосвязи.
Вышеупомянутые четыре предпочтительных воплощения могут быть дополнительно оптимизированы, R6 представляет собой метоксиполиэтиленгликолевые производные, наиболее предпочтительно R6 представляет собой метоксиполиэтиленгликолевые производные, где молекулярная масса метоксиполиэтиленгликолевых производных составляет от 5000 до 100000 дальтон, структура метоксиполиэтиленгликолевых производных выбрана из разветвленных или имеющих линейный тип производных.
В этом аспекте для дополнительной исчерпывающей оптимизации авторы изобретения смогли получить следующие четыре предпочтительных воплощения:
[1] n1, n2 представляют собой 2, R1, R5 выбраны из SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, где n5 выбран из 2-10, предпочтительно равен 2; R6 представляет собой метоксиполиэтиленгликолевое производное, имеющее линейную структуру и молекулярную массу 20000 дальтон.
[2] n1, n2 равны 1, R1, R5 выбраны из SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:8, R2, R4 выбраны из -CO, -CH2, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, где n4 выбран из 2-10 и предпочтительно равен 2; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее линейную структуру и молекулярную массу 20000 дальтон.
[3] n1, n2 равны 2, R1, R5 выбраны из SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:8, R2, R4 выбраны из -СО, -CH2, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, где n5 выбран из 2-10 и предпочтительно равен 2; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее разветвленную структуру и молекулярную массу 40000 дальтон.
[4] n1, n2 равны 1, R1, R5 выбраны из SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, где n4 выбран из 2-10 и предпочтительно равен 2; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее разветвленную структуру и молекулярную массу 40000 дальтон.
Структура наиболее предпочтительных пептидных производных - миметиков ЭПО и их фармацевтической соли выбрана из:
Приведенные пептидные производные - миметики ЭПО представляют собой амфифильные соединения, которые могут образовывать соли, путем взаимодействия с кислотными или щелочными соединениями при помощи общеизвестного специалистам в данной области техники способа. Обычно используемые кислоты выбраны из соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, йодистоводородной кислоты, серной кислоты, ортофосфорной кислоты, пара-толуолсульфоновой кислоты, метансульфоновой кислоты, щавелевой кислоты, пара-бромфенилсульфоновой кислоты, карбоновой кислоты, янтарной кислоты, лимонной кислоты, бензойной кислоты, уксусной кислоты; образующиеся соли включают сульфат, пирофосфат, трифлютат, сульфит, бисульфит, фосфат, бифосфат, дигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, хлорид, бромид, йодид, ацетат, пропионат, каприлат, акрилат, формиат, изобутират, капроат, энантат, пропиолат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диолат, гексин-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фенилацетат, фенпропионат, фенилбутират, цитрат, лактат, γ-гидроксибутират, гликолят, тартрат, метансульфонат, пропилсульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, манделат и подобные, предпочтительно трифлютат.
Щелочные вещества также могут взаимодействовать с пептидными производными - миметиками ЭПО с образованием солей. Эти щелочные вещества выбраны из аммония, гидроксидов щелочных металлов или щелочноземельных металлов, а также карбоната, бикарбоната, типично выбраны из гидроксида натрия, гидроксида калия, гидроксида аммония, карбоната натрия, карбоната калия и тому подобных.
В изобретении также раскрыты программы получения вышеупомянутых пептидных производных - миметиков ЭПО и их фармацевтических солей, включающие следующие стадии:
(1) получение R1, R5 путем генетической инженерии или способа химического синтеза. R1, R5 представляют собой мономерный пептид пептидного миметика и его аналоги, обладающие биологической функцией ЭПО;
(2) получение функциональной небольшой молекулы общей формулы (II)
где n1, n2 представляют собой целые числа, независимо выбранные из 0-10;
R7, R8 выбраны из ОН или Н;
Z2 выбран из О, S, CH2, N(СН2)n6NHR9, NCO(CH2)n7NHR9, CHOCONH(CH2)n8NHR9, CHSCON(CH2)n8NHR9 или CHNHCON(CH2)n8NHR9, где n6 представляет собой целое число, выбранное из 1-10, n7 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n8 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R9 выбран из Boc (трет-бутоксикарбонил) или Cbz (карбамазепин),
(3) получение производного R1, R5 с функциональной небольшой молекулой формулы (II) с получением соединения формулы (III);
где R2, R4 независимо выбраны из -СО или -CH2,
(4) связывание с активным метоксиполиэтиленгликолем при помощи ковалентных связей после удаления Boc или Cbz.
Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей:
(1) терапевтические количества вышеупомянутых пептидных производных - миметиков ЭПО и их фармацевтических солей общей формулы (I);
(2) фармацевтически приемлемый лекарственный носитель.
В изобретении также раскрыто применение лекарств, а именно применение любого из указанных пептидных производных - миметиков и его фармацевтических солей в терапевтически эффективном количестве для лечения расстройств, характеризующихся низким уровнем ЭПО или недостаточной или дефектной группой эритроцитов, в особенности для лечения следующих заболеваний: прогрессирующей почечной недостаточности или диализа; анемии, связанной со СПИДом (синдромом приобретенного иммунодефицита), аутоиммунных заболеваний или злокачественной опухоли; кистозного фиброза; анемии при недоношенности; анемии, связанной с хроническим воспалительным заболеванием; повреждения спинного мозга; острой потери крови; старения и рака, сопровождающегося аномальной продукцией эритроцитов.
Пептидные производные - миметики ЭПО и их фармацевтические соли, полученные в настоящем изобретении, способны значительно способствовать увеличению количества ретикулоцитов периферической крови мышей, свидетельствуя о том, что они стимулируют эритропоэз; одновременно они также способны значительно удлинять период полувыведения конъюгатов из организма. Пептидные производные - миметики ЭПО и белок ЭПО - не оказывают существенного влияния на зрелые эритроциты, гематокрит клеток крови, содержание гемоглобина и также не оказывают существенного влияния на количество лейкоцитов периферической крови.
Для синтеза пептидных мономеров-миметиков ЭПО используется твердофазный синтез, основной принцип которого заключается в следующем: сначала связывают гидроксил C-концевой аминокислоты синтезируемой пептидной цепи с нерастворимой полимерной смолой путем ковалентной связи. Затем аминокислоты, присоединенные к твердофазному носителю, используют в качестве аминокомпонента для удлинения полипептидной цепи путем удаления защитной группы для аминогруппы и взаимодействия с чрезвычайно активным карбоксильным компонентом. Операцию (конденсация → отмывка → снятие защиты → отмывка → следующий раунд конденсации) повторяют для достижения желаемой длины цепи синтетического пептида. Наконец пептидную цепь отделяют от смолы. После очистки получают желаемый пептид. В промежуточном контроле реакционных стадий конденсации и удаления защиты используют способ нингидринового обнаружения, а именно когда пептидная цепь на смоле имеет свободную аминогруппу, тогда появляется голубая окраска после окрашивания нингидриновым реагентом. При отсутствии свободной аминогруппы цветная реакция не развивается (сам нингидриновый реагент имеет желтый цвет). Таким образом, после проведения реакции конденсации и обнаружения при помощи нингидрина, в том случае если присутствует желтое окрашивание (цвет самого нингидринового реагента), то это означает, что данная стадия связывания завершена и может быть осуществлена операция снятия защиты перед связыванием следующей аминокислоты. Если присутствует голубое окрашивание, тогда это означает, что все еще присутствует некоторое количество свободных аминогрупп на пептидной цепи. Необходимо дополнительно повторить связывание или заменить текущий конденсирующий реагент до тех пор, пока смола-пептид не продемонстрирует желтое окрашивание после обнаружения нингидрином.
Способ циклизования мономерного пептида хорошо известен специалистам в данной области техники. Циклизование дисульфидных связей в основном осуществляют путем окисления сульфгидрила в боковой цепи аминокислоты мономерного пептида до дисульфидных связей при помощи окислителя. Конкретно, мономерные пептиды помещают в раствор ДМСО (диметилсульфоксида) или 5% раствор бикарбоната амина для самоокисления, или добавляют к раствору уксусной кислоты, содержащему окисляемый I2, предпочтительно добавляют к раствору уксусной кислоты, содержащему окисляемый I2. Циклизование амидной связи в основном осуществляют путем образования амидной связи между карбоксильной группой и аминогруппой боковой цепи мономерного пептида в присутствии конденсирующего агента. Добавляемый конденсирующий агент хорошо известен специалисту в данной области техники, обычно включая DIC (N,N'-диизопропилкарбодиимид), EDC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид), HATU (2-(1Н-7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний гексафторфосфат), Pybop (бензотриазол-1-ил-окси-трис-пирролидино-фосфоний гексафторфосфат) и тому подобные.
Синтез димерного пептида в основном осуществляют путем образования -NH-СН2-связи или -NH-CO-связи между аминогруппой боковой цепи аминокислотного остатка пептидного мономера-миметика ЭПО и функциональной небольшой молекулой. Специалист в данной области техники легко может синтезировать функциональную небольшую молекулу и связать ее с мономерным циклическим пептидом при помощи известного способа.
Получают димерный пептид и активное производное метоксиполиэтиленгликоля. Реакционная система может быть выбрана из органического растворителя или имеющейся буферной системы. Когда осуществляют реакцию PEG(полиэтиленгликоль)-илирования димерного пептида в органическом растворителе, тогда следующие щелочи могут быть добавлены в подходящем количестве, включая, но не ограничиваясь ими, триэтиламин, диизопропилэтиламин, пиридин, 2,4,6-триметилпиридин, но не ограничивающиеся ими. Когда осуществляют реакцию полиэтиленгликолевой дериватизации в буферной системе, тогда буферная система может быть выбрана из различных доступных буферов, предпочтительно фосфатного буфера с рН 7,7.
Биологическая активность ЭПО или пептидных производных - миметиков ЭПО и их фармацевтических солей, предложенных в данном изобретении, может быть определена при помощи различных анализов, известных в данной области. Тест активности in vivo осуществляют следующим образом: мышам подкожно инъецируют ЭПО и пептидные производные - миметики ЭПО, а также их фармацевтические соли, предложенные в данном изобретении, в течение трех последующих суток. Затем мышей умерщвляют. Цельную кровь отбирают для осуществления подсчета клеток периферической крови и ретикулоцитов. Подсчет клеток крови осуществляют при помощи автоматического счетчика клеток крови. Фармакодинамическое исследование осуществляют путем внутривенного введения макакам дозы 1,35 мг/кг. Доза белка ЭПО в качестве контрольного лекарства составляет 240 мкг/кг. Лекарства вводят три раза в неделю, и введение продолжают в течение шести недель. Образцы крови отбирают для осуществления связанного анализа гематологического индекса.
Обзор сокращений, используемых в изобретении:
| Сокращения | Название | Структура |
| Orn | L-орнитин |
|
| Нос | L-гомоцистеин |
|
| DIC | N,N'-диизопропилкарбодиимид |
|
| EDC | 1-Этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимид гидрохлорид |
|
| РуВОР | Бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфоний гексафторфосфат |
|
| HATU | 2-(1Н-7-Азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний гексафторфосфат метанаммоний |
|
| DMAP | 4-Диметиламинопиридин |
|
| Nle | Норлейцин |
|
| mPEG2-OSU(40k) | Разветвленный метоксиполиэтиленгликолевый N-гидроксисукцинимид (40к) |
|
Описание графических материалов
Фиг.1 демонстрирует влияние пептидных производных - миметиков ЭПО (НН-ЭПО-018) на гематокрит макаки.
Фиг.2 демонстрирует влияние пептидных производных - миметиков ЭПО (НН-ЭПО-018) на гемоглобин макаки.
Предпочтительные воплощения
Для более подробного описания настоящего изобретения приведены следующие примеры, не ограничивающие объем настоящего изобретения.
Пример 1: синтез мономерного пептида - миметика ЭПО
Синтез мономерного пептида - миметика ЭПО осуществляют при помощи способа твердофазного пептидного синтеза. Этот способ пептидного синтеза приведен во множестве литературных источников, смотри Stewart, J.M., and Young, J.D., solid phase peptide synthesis 2d edition, novabiochem peptide synthesis notes. Синтез мономерного пептидного производного - миметика ЭПО осуществляют при помощи способов ручного синтеза. Смола представляет собой амидную смолу Ринка. α-Аминогруппу аминокислотных производных защищают при помощи Fmoc (флуорен-формил-карбонил). Тиоловую группу цистеиновой боковой цепи, аминогруппу глутаминовой боковой цепи и имидазольную группу гистидиновой боковой цепи защищают при помощи Trt (тритила). Гуанидиновую группу аргининовой боковой цепи защищают при помощи Pbf (2,2,4,6,7- пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонила). Индольную группу триптофановой боковой цепи, аминогруппу лизиновой боковой цепи защищают при помощи Boc (трет-бутокискарбонила). Гидроксильную группу треониновой боковой цепи, фенольную группу тирозиновой боковой цепи, гидроксильную группу сериновой боковой цепи защищают при помощи tBu (трет-бутил). Карбоксил С-конца пептидной цепи мономерного синтезируемого пептидного производного - миметика ЭПО присоединяют к нерастворимой смоле (амидной смоле Ринка) при помощи ковалентной связи. Затем аминокислоты, присоединенные к твердофазному носителю, используют в качестве аминокомпонента для удлинения полипептидной цепи путем удаления защитных групп амино при помощи раствора 20% пиперидин/DMF и взаимодействия с чрезвычайно активным карбоксильным компонентом. Операцию (конденсация → отмывка → удаление защиты → отмывка → следующий раунд конденсации) повторяют для достижения желаемой длины цепи синтетического пептида. Наконец пептидную цепь удаляют со смолы с использованием смешанного раствора трифторуксусной кислоты, воды, этиленмеркаптана, 3-изопропилсилана (92.5: 2.5: 2.5: 2.5). После осаждения в простом эфире получают неочищенное мономерное пептидное производное - миметик ЭПО. Неочищенный мономерный пептид выделяют и очищают при помощи С18 обращенно-фазовой препаративной колонки. Затем получают мономерное пептидное производное - миметик ЭПО. В промежуточном контроле реакционных стадий конденсации и удаления защиты используют способ нингидринового обнаружения, а именно когда пептидная цепь на смоле имеет свободную группу амино, тогда появляется голубая окраска после окрашивания нингидриновым реагентом. При отсутствии свободной аминогруппы цветная реакция не развивается (сам нингидриновый реагент имеет желтый цвет). Таким образом, после проведения реакции конденсации и обнаружения при помощи нингидрина, в том случае если присутствует желтое окрашивание (цвет самого нингидринового реагента), то это означает, что данная стадия связывания завершена и может быть осуществлена операция удаления защиты перед связыванием следующей аминокислоты. Если присутствует голубое окрашивание, тогда это означает, что все еще присутствует некоторое количество свободных аминогрупп на пептидной цепи. Необходимо дополнительно повторить связывание или заменить текущий конденсирующий реагент до тех пор, пока смола-пептид не продемонстрирует желтое окрашивание после обнаружения нингидрином.
Пример 2: Получение функциональных небольших молекул (LG-1)
Стадия 1: получение LG-1-A
Растворяют диэтиловый эфир иминодиуксусной кислоты (10,0 г, 52,8 ммоль), Вос-β-аланин (10,0 г, 52,8 ммоль) в 100 мл дихлорметана, добавляют DIC (8,0 мл, 52,8 ммоль), смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, реакционный раствор фильтруют, фильтрат промывают 100 мл насыщенного NaHCO3, 50 мл 0,5 Н раствора HCl, 100 мл насыщенного физиологического раствора, органический слой отделяют, органический слой сушат над безводным MgSO4. Органический слой фильтруют, его концентрируют и получают бесцветное маслянистое жидкое вещество LG-1-A: 17 г.
Стадия 2: получение LG-1-B
Растворяют 17 г LG-1-A в 100 мл МеОН: ТГФ = смесь 1:1, и затем добавляют 25 мл воды, 5 г NaOH (125 ммоль). Величину рН доводят до 1 с использованием 6 Н раствора HCl после перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционный раствор экстрагируют четыре раза этилацетатом. Органический слой промывают физиологическим раствором, сушат над безводным сульфатом магния, концентрируют при пониженном давлении с получением белого полутвердого вещества. Растворяют продукты в 50 мл дихлорметана и добавляют 300 мл н-гексана. Раствор представляет собой белую пасту. После концентрирования при пониженном давлении получают белое твердое вещество LG-1-B: 14 г (Выход составляет приблизительно 90%).
Стадия 3: Получение LG-1-C
Растворяют 7 г LG-1-B (23 ммоль) в 80 мл тетрагидрофурана, и при перемешивании добавляют 4,6 г N,N-метокси-метиламин гидрохлорида (46 ммоль) и 5,1 г триэтиламина (51 ммоль), и затем добавляют 4,4 г DIC (32 ммоль), 4,7 г НОВТ (32 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. На следующие сутки реакционную жидкость добавляют в воду и экстрагируют 350 мл этилацетата. Органический слой промывают 200 мл 2 н. водного раствора HCl, 200 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, 100 мл насыщенного физиологического раствора. Органический слой отделяют и сушат над безводным сульфатом магния в течение 2 часов и затем фильтруют. Фильтрат превращается в маслянистое вещество после концентрирования при пониженном давлении. После колоночной хроматографии получают желаемый продукт LG-1-C: 4,2 г, выход: 70%.
Стадия 4: Получение LG-1
Растворяют 4,0 г LG-1-C (10,2 ммоль) в 60 мл тетрагидрофурана, охлаждают до 0°С при помощи бани лед-соль. Добавляют LiAlH4 (340 мг, 8,9 ммоль). После взаимодействия при 0°С в течение 30 минут добавляют 4 мл воды, 4 мл 15% раствора NaOH. Реакционный раствор фильтруют. Фильтрат промывают тетрагидрофураном. После концентрирования досуха и колоночной хроматографии на силикагеле получают LG-1: 1,63 г (6 ммоль, Выход: 58,8%)
Пример 3: Получение функциональных небольших молекул (LG-2)
Растворяют 4 г LG-1-B (13 ммоль) в 100 мл N,N-диметилформамида и добавляют гидроксисукцинимид (3,1 г, 21 ммоль), DIC (4 мл, 26 ммоль) и DMAP (4-диметиламинопиридин) (12 мг, 0,08 ммоль). После перемешивания в течение ночи реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении. Растворяют остаток в 80 мл этилацетата. Нерастворимые вещества отфильтровывают. Органическую фазу промывают 40 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, 40 мл насыщенного физиологического раствора, 40 мл 0,5 н. раствора HCl, 40 мл насыщенного физиологического раствора однократно. Органический слой отделяют и сушат над безводным сульфатом магния. Органический слой фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Получают белое твердое вещество LG-2: 4,4 г (Выход составляет приблизительно 68%).
Пример 4: Получение функциональных небольших молекул (LG-3)
Стадия 1: Получение LG-3-A
Растворяют 7,0 г пентанона пимелиновой кислоты (0,04 моль) в 100 мл метанола. Добавляют 5% CsCO3 в метанольном растворе при перемешивании и контролируют добавляемое количество для получения рН реакционного раствора приблизительно 8,5 (определяемого при помощи бумаги для точного определения рН). Его перемешивают в течение 30 минут после полного добавления. Затем реакционный раствор фильтруют. Фильтрат превращается в маслянистое вещество после концентрирования в вакууме. Маслянистое вещество растворяют в приблизительно 100 мл ДМСО и нагревают до 60°С. Добавляют 14 г (0,08 моль) бензилбромида. После взаимодействия в течение 8 часов реакционный раствор фильтруют, твердое вещество промывают небольшим количеством простого эфира. Добавляют 400 мл эфира в маточный раствор, его промывают 200 мл насыщенного физиологического раствора. Отделяют органический слой и его сушат над безводным сульфатом магния в течение 2 часов. Затем его фильтруют. Когда фильтрат концентрируют при пониженном давлении до 1/5 от исходного объема, его помещают в морозильник на -20°С на ночь для кристаллизации. На следующие сутки отфильтровывают твердые вещества, сушат и получают белое твердое вещество LG-3-A: 10,5 г (Выход 74%).
Стадия 2: Получение LG-3-B
Растворяют 2 г LG-3-A (0,0056 моль) в 20 мл тетрагидрофурана. Внутреннюю температуру раствора поддерживают ниже -10°С, его перемешивают и добавляют 626 мг NaBH4 (0,0168 моль). После взаимодействия в течение 1 ч добавляют 200 мл охлажденного простого эфира, а затем добавляют 150 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия для прекращения взаимодействия. Оставляют для расслаивания. Органический слой промывают однократно насыщенным физиологическим раствором и затем сушат над безводным Na2SO4 в течение 2 часов и фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением LG-3-B: 1,9 г (Выход: 94,6%).
Стадия 3: Получение LG-3-C
Растворяют 3,2 г LG-3-B (0,009 моль) в 50 мл дихлорметана. Добавляют 4,34 г триэтиламина (0,043 моль) при температуре ниже 0°С при перемешивании. Растворяют 1,33 г (0,0045 моль) трифосгена в 25 мл дихлорметана. Затем его добавляют в вышеприведенный раствор по каплям. Через 1 час добавляют 2,8 г трет-бутоксикарбонил-этилендиамина через 1 час. После взаимодействия в течение 3 ч реакционную смесь затем доводят до нейтрального значения с использованием ледяной уксусной кислоты, и в этот момент образуется осадок. Осадок отфильтровывают. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении и затем растворяют в простом эфире. Затем промывают водой трижды, насыщенным физиологическим раствором однократно. Органический слой отделяют и сушат над безводным сульфатом магния в течение 2 часов и затем фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении до маслянистого вещества. Маслянистые вещества очищают путем колоночной хроматографии на силикагеле (подвижная фаза: петролейный эфир:этилацетат = 10:1). Желаемый продукт комбинируют и собирают, и концентрируют с получением белого твердого вещества LG-3-C: 1,5 г (выход 38,8%).
Стадия 4: Получение LG-3-D
Растворяют 13 г LG-3-C (0,031 моль) в 8 мл метанола и добавляют приблизительно 200 мг 10% Pd-C при перемешивании. После взаимодействия в Н2 при атмосферном давлении в течение 4 ч активированный углерод отфильтровывают, и фильтрат концентрируют с получением маслянистого вещества LG-3-D: 8,28 г (выход: 96,7%).
Стадия 5: Получение LG-3
Растворяют 5 г LG-3-D (0,018 моль) в 10 мл тетрагидрофурана. Добавляют 4,7 г пара-нитрофенола (0,043 моль) и добавляют раствор DIC 4,2 г (0,043) при перемешивании. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи. На следующие сутки отфильтровывают получающийся в результате осадок, осадок на фильтре промывают небольшим количеством этилацетата, фильтрат сушат путем концентрирования при пониженном давлении. К остатку добавляют 100 мл этилацетата и растворяют его. Однократно промывают 50 мл насыщенного физиологического раствора. Органический слой отделяют и его сушат над безводным сульфатом магния в течение 2 часов. Затем его фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением маслянистого вещества. Маслянистое вещество очищают путем колоночной хроматографии на силикагеле (элюэнт: гексан/этилацетат 20:1 = 10:1). Желаемый продукт комбинируют и собирают, и концентрируют при пониженном давлении с получением белого твердого вещества LG-3: 3,5 г (выход: 32%).
Пример 5: Получение функциональной небольшой молекулы (LG-4)
Стадия 1: Получение LG-4-A
Растворяют 5 г LG-3-D (0,018 моль) в 60 мл тетрагидрофурана. Добавляют 3,51 г N,N-метокси-метиламин гидрохлорида (0,036 моль) и 4,0 г триэтиламина (0,04 моль) при перемешивании. Затем добавляют 3,4 г DIC (0,027 моль) и 3,65 г НОВТ (0,027 моль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. На следующие сутки добавляют реакционный раствор в 200 мл воды, и его дважды экстрагируют этилацетатом, каждый раз 200 мл. Органический слой комбинируют. Его промывают 50 мл 2 н. раствора HCl, 100 мл насыщенного раствора NaHCO3, 100 мл насыщенного физиологического раствора однократно. Органический слой отделяют, его сушат в течение 2 часов над безводным сульфатом магния. Затем его фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением маслянистого вещества. Маслянистое вещество очищают путем колоночной хроматографии (элюэнт: гексан/этилацетат 10:1). Желаемый компонент комбинируют с получением белого твердого вещества LG-4-A: 6,24 г (выход: 80%).
Стадия 2: Получение LG-4
Растворяют 4,0 г LG-4-A (9 ммоль) в 50 мл тетрагидрофурана. Добавляют 300 мг LiAlH4 (7,9 ммоль) при температуре ниже нуля градусов с помощью бани лед-соль. Реакционную смесь поддерживают при 0°С в течение 30 минут. Затем добавляют 0,3 мл воды, 0,9 мл 15% раствора NaOH, 0,3 мл воды, и в этот момент образуется осадок. Осадок отфильтровывают. Осадок на фильтре однократно промывают тетрагидрофураном. Фильтрат комбинируют и концентрируют при пониженном давлении для сушки. Остаток очищают путем колоночной хроматографии с получением 1,65 г LG-4 (Выход: 55,5%).
Пример 6: Получение НН-ЭПО-005
Стадия 1: Получение циклического пептида SEQ ID NO:5
Растворяют 9 г пептидного мономерного производного - миметика ЭПО SEQ ID NO:5 (синтез в соответствии со способом, приведенным в Примерах) в 3000 мл 20% ледяной уксусной кислоты, и затем медленно по каплям добавляют 5% раствор йодного метанола до исчезновения желтого окрашивания. Реакционный раствор непосредственно подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°C и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении путем лиофилизации получают 3,0 г циклического пептида SEQ ID NO:5 (Выход: 15,6%).
Стадия 2: Получение НН-ЭПО-005
Растворяют циклический пептид SEQ ID NO:5 3,0 г (1,22 ммоль) в 150 мл N,N-диметилформамида. Добавляют триэтиламин 147 мг (1,46 ммоль), 368 мг функциональных небольших молекул (LG-3) (0,61 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 6 часов концентрируют часть N,N-диметилформамида. К остатку добавляют 200 мл простого эфира, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Затем это белое твердое вещество растворяют в 50 мл 20% раствора трифторуксусная кислота/дихлорметан. После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут часть растворителя концентрируют при пониженном давлении. Добавляют 200 мл простого эфира к остатку, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Белое твердое вещество подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии, с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-005: 1,0 г получают путем лиофилизации (Выход составляет приблизительно 33%).
Пример 7: Получение НН-ЭПО-006
Стадия 1: Получение циклического пептида SEQ ID NO:6
Растворяют 9 г пептидного мономерного производного - миметика ЭПО SEQ ID NO:6 (синтез в соответствии со способом, приведенным в Примерах) в 3000 мл 20% ледяной уксусной кислоты, и затем медленно добавляют 5% раствор йодного метанола по каплям до исчезновения желтого окрашивания. Реакционный раствор непосредственно подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении 3,0 г циклического пептида SEQ ID NO:6 получают путем лиофилизации (Выход: 15,3%).
Стадия 2: Получение НН-ЭПО-006
Растворяют циклический пептид SEQ ID NO:6 3,0 г (1,22 ммоль) в 150 мл N,N-диметилформамида. Добавляют триэтиламин 147 мг (1,46 ммоль), 368 мг функциональных небольших молекул (LG-3) (0,61 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 6 часов концентрируют часть DMF. К остатку добавляют 200 мл простого эфира, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Затем это белое твердое вещество растворяют в 50 мл 20% раствора трифторуксусная кислота/дихлорметан. После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут часть растворителя концентрируют при пониженном давлении. Добавляют 200 мл простого эфира к остатку, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Белое твердое вещество подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии, с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-006: 3,98 г получают путем лиофилизации (Выход составляет приблизительно 32,7%).
Пример 8: Получение НН-ЭПО-007
Стадия 1: Получение циклического пептида SEQ ID NO:7
Растворяют 9 г пептидного мономерного производного - миметика ЭПО SEQ ID NO:7 (синтез в соответствии со способом, приведенным в Примерах) в 3000 мл 20% ледяной уксусной кислоты, и затем медленно добавляют 5% раствор йодного метанола по каплям до исчезновения желтого окрашивания. Реакционный раствор непосредственно подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении 3,15 г циклического пептида SEQ ID NO: 7 получают путем лиофилизации (Выход: 16,4%).
Стадия 2: Получение НН-ЭПО-007
Растворяют циклический пептид SEQ ID NO:7 3,0 г (1,22 ммоль) в 150 мл N,N-диметилформамида. Добавляют триэтиламин 147 мг (1,46 ммоль), 368 мг функциональных небольших молекул (LG-3) (0,61 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 6 часов концентрируют часть N,N-диметилформамида. К остатку добавляют 200 мл простого эфира, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Затем это белое твердое вещество растворяют в 50 мл 20% раствора трифторуксусная кислота/дихлорметан. После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут часть растворителя концентрируют при пониженном давлении. Добавляют 200 мл простого эфира к остатку, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Белое твердое вещество подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии, с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-007: 1,0 г получают путем лиофилизации (Выход составляет приблизительно 33%).
Пример 9: Получение НН-ЭПО-008
Стадия 1: Получение циклического пептида SEQ ID NO:8
Растворяют 27 г пептидного мономерного производного - миметика ЭПО SEQ ID NO:8 (синтез в соответствии со способом, приведенным в Примерах) в 3000 мл 20% ледяной уксусной кислоты, и затем медленно добавляют 5% раствор йодного метанола по каплям до исчезновения желтого окрашивания. Реакционный раствор непосредственно подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении 9,3 г циклического пептида SEQ ID NO:8 получают путем лиофилизации (Выход: 15,7%).
Стадия 2: Получение НН-ЭПО-008
Растворяют циклический пептид SEQ ID NO:8 3,0 г (1,22 ммоль) в 150 мл N,N-диметилформамида. Добавляют триэтиламин 147 мг (1,46 ммоль), 368 мг функциональных небольших молекул (LG-3) (0,61 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 6 часов концентрируют часть N,N-диметилформамида. К остатку добавляют 200 мл простого эфира, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Затем это белое твердое вещество растворяют в 50 мл 20% раствора трифторуксусная кислота/дихлорметан. После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут часть растворителя концентрируют при пониженном давлении. Добавляют 200 мл простого эфира к остатку, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Белое твердое вещество подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии, с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-008: 1,12 г получают путем лиофилизации (Выход составляет приблизительно 33%).
Пример 10: Получение НН-ЭПО-008А
Растворяют циклический пептид SEQ ID NO:8 3,0 г (1,22 ммоль) в 150 мл 20 ммоль буфера уксусной кислоты (рН 5,0), и затем добавляют 201 мг функциональных небольших молекул (LG-4) (0,61 ммоль) и 10 мл ацетонитрила. После перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 30 минут реакционный раствор подвергают препаративной путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-008А: 0,75 г получают путем лиофилизации (Выход: 25%).
Пример 11: Получение НН-ЭПО-008В
Растворяют циклический пептид SEQ ID NO:8 3,0 г (1,22 ммоль) в 150 мл N,N-диметилформамида. Добавляют триэтиламин 147 мг (1,46 ммоль), 322 мг функциональных небольших молекул (LG-2) (0,61 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 6 часов, концентрируют часть N,N-диметилформамида. Добавляют 200 мл простого эфира к остатку, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Затем это белое твердое вещество растворяют в 50 мл 20% раствора трифторуксусная кислота/дихлорметан. После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут часть растворителя концентрируют при пониженном давлении. Добавляют 200 мл простого эфира к остатку, его помещают в морозильник на 2 часа и затем центрифугируют. Белое твердое вещество получают путем вакуумной сушки. Белое твердое вещество подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии, с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-008: 1,3 г получают путем лиофилизации (Выход составляет приблизительно 43%).
Пример 12: Получение НН-ЭПО-008С
Растворяют циклический пептид SEQ ID NO:8 3,0 г (1,22 ммоль) в 150 мл 20 ммоль буфера уксусной кислоты (рН 5,0), и затем добавляют 165 мг функциональных небольших молекул (LG-1) (0,61 ммоль) и 10 мл ацетонитрила. После перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 30 минут реакционный раствор подвергают препаративной очистке путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-008А:
0,8 г получают путем лиофилизации (Выход: 27%).
Пример 13: Получение НН-ЭПО-018
Растворяют 0,5 г НН-ЭПО-008 (0,98 ммоль) в 100 мл N,N-диметилформамида, добавляют триэтиламин 39,6 мг (0,196 ммоль), 3,8 г mPEG2-OSU(40K) (0,96 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. Реакционный раствор помещают непосредственно в 600 мл охлажденного простого эфира. Твердое вещество осаждается. После помещения в морозильник на 2 часа его центрифугируют и неочищенное НН-ЭПО-018 получают путем вакуумной сушки. Неочищенный НН-ЭПО-018 очищают путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-0018; 1,8 г получают путем лиофилизации (Выход составляет приблизительно 47%).
Пример 14: Получение НН-ЭПО-018А
Растворяют 0,5 г НН-ЭПО-008 (0,98 ммоль) в 100 мл N,N-диметилформамида, добавляют триэтиламин 39,6 мг (0,196 ммоль), 3,8 г mPEG2-OSU(40K) (0,96 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. Реакционный раствор помещают непосредственно в 600 мл охлажденного простого эфира. Твердое вещество осаждается. После помещения в морозильник на 2 часа его центрифугируют и неочищенное НН-ЭПО-018 получают путем вакуумной сушки. Неочищенный НН-ЭПО-018 очищают путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-0018А: 1,5 г получают путем лиофилизации (Выход составляет приблизительно 39%).
Пример 15: Получение НН-ЭПО-018В
Растворяют 0,5 г НН-ЭПО-008 (0,98 ммоль) в 100 мл N,N-диметилформамида, добавляют триэтиламин 39,6 мг (0,196 ммоль), 3,8 г mPEG2-OSU(40K) (0,96 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. Реакционный раствор помещают непосредственно в 600 мл охлажденного простого эфира. Твердое вещество осаждается. После помещения в морозильник на 2 часа его центрифугируют и неочищенное НН-ЭПО-018 получают путем вакуумной сушки. Неочищенный НН-ЭПО-018 очищают путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-0018: 1,7 г получают путем лиофилизации (Выход составляет приблизительно 45%).
Пример 16: Получение НН-ЭПО-018С
Растворяют 0,5 г НН-ЭПО-008 (0,98 ммоль) в 100 мл N,N-диметилформамида, добавляют триэтиламин 39,6 мг (0,196 ммоль), 3,8 г mPEG2-OSU(40K) (0,96 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. Реакционный раствор помещают непосредственно в 600 мл охлажденного простого эфира. Твердое вещество осаждается. После помещения в морозильник на 2 часа его центрифугируют и неочищенное НН-ЭПО-018 получают путем вакуумной сушки. Неочищенный НН-ЭПО-018 очищают путем обращенно-фазовой хроматографии с использованием связанного с октадецилсиланом силикагеля в качестве наполнителя колонки (Waters SymmetryShield™ RP18 3,5µm, 4,6*100 мм), где температура колонки составляет 60°С и длина волны для детекции составляет 214 нм; воду (содержащую 0,05% трифторуксусную кислоту) и ацетонитрил (содержащий 0,05% трифторуксусную кислоту) в различных пропорциях используют в качестве подвижной фазы. Желаемые фракции комбинируют и собирают. После отгонки большей части ацетонитрила при пониженном давлении НН-ЭПО-0018: 1,4 г получают путем лиофилизации (Выход составляет приблизительно 37%).
Пример 17: Действия пептидных производных - миметиков ЭПО на мышей
Задача этого эксперимента
Оценить и сравнить действия пептидных производных - миметиков ЭПО и белка ЭПО на эритропоэз у мышей.
Материалы и способы
Пептидные производные - миметики ЭПО, включающие НН-ЭПО-001, НН-ЭПО-002, НН-ЭПО-003, НН-ЭПО-004, НН-ЭПО-005, НН-ЭПО-006, НН-ЭПО-007, НН-ЭПО-008, НН-ЭПО-015, НН-ЭПО-016, НН-ЭПО-017 и НН-ЭПО-018 предоставлены Jiangsu Hansoh Pharmaceutical со.,LTD. ЭПО приобретали в Shenyang Sansheng Pharmaceutical Co., Ltd. Мыши Kunming, приобретенные в Chinese Academy of Sciences Shanghai Experimental Animal Center, имели массу 25-30 г, ♀. Количество животных в каждой группе составляло 10.
Мышам подкожно инъецировали пептидные производные - миметики ЭПО и белок ЭПО в течение трех последующих суток. Затем мышей умерщвляли, цельную кровь отбирали для подсчета периферических клеток крови и ретикулоцитов. Подсчет клеток крови осуществляли с использованием автоматических счетчиков клеток крови.
Результаты и обсуждение
В соответствии с данной схемой введения доз, как пептидные производные - миметики ЭПО, так и белок ЭПО могут значительно способствовать увеличению количества ретикулоцитов в периферической крови мышей, что свидетельствует о том, что они стимулируют эритропоэз (Смотри Таблицу 1). В качестве сравнения в Таблице 1 также приведены данные об активности соединения последовательности SEQ ID NO:599, известного из WO 2006/062685. Пептидные производные - миметики ЭПО и белок ЭПО не оказывают существенного влияния на количество зрелых эритроцитов, гематокрит клеток крови, содержание гемоглобина (Смотри Таблицу 2) и также не оказывают существенного влияния на количество лейкоцитов периферической крови (Смотри Таблицу 3).
Пример 18: Действия пептидных производных - миметиков ЭПО на макак
Задача данного эксперимента
Оценить действия пептидных производных - миметиков ЭПО на эритропоэз у макак.
Материалы и способы
Пептидные производные - миметики ЭПО НН-ЭПО-018 предоставлены Jiangsu Hansoh Pharmaceutical со.,LTD. ЭПО приобретенными в Shenyang Sansheng Pharmaceutical Co., Ltd. Их разбавляли в физиологическом растворе, содержащем 0,1% BSA (БСА - бычий сывороточный альбумин) перед применением.
Макак, имеющих массу 5,5-8,5 кг, самцов или самок, приобретали в Suzhou Xishan Zhongke Laboratory Animal Center. Макак группировали на основе содержания гемоглобина в каждой из групп по три макаки. НН-ЭПО-018 1,35 мг/кг однократно инъецировали внутривенно; ЭПО 240 мкг/кг, трижды/неделю, непрерывное введение на протяжении пяти недель. Измеряли гематологические индексы 1-2 раза в неделю.
Результаты и обсуждение
Разовая внутривенная инъекция НН-ЭПО-018 макакам приводит к увеличению содержания гемоглобина в периферической крови, увеличению гематокрита клеток крови, свидетельствуя о том, что НН-ЭПО-018 стимулирует эритропоэз. Стимуляция максимальна через 35 суток после введения и затем медленно уменьшается. Стимулирующее действие на гемоглобин составляет 33%. В качестве положительного контроля ЭПО также обеспечивал то же самое увеличение содержания гемоглобина в периферической крови макак и гематокрит клеток крови, и его действия уменьшались после прекращения введения лекарственного средства. В соответствии с настоящей схемой введения доз стимуляция НН-ЭПО-018 и ЭПО на продукцию гемоглобина у макак является значительной (смотри Фиг.1, 2).
Пример 19: Оценка и сравнение действий пептидных производных - миметиков ЭПО НН-ЭПО-015, НН-ЭПО-018, НН-ЭПО-018 В и положительного контроля AF37702 на мышей.
Материалы и способы
НН-ЭПО-015, НН-ЭПО-018, НН-ЭПО-018 В и AF37702 предоставлены Jiangsu Hansoh Pharmaceutical со., LTD, где AF37702 также представляет собой пептидное производное - миметик ЭПО, производимый Affymax (торговое название: Hematide). Образец готовили в физиологическом растворе, содержащем 0,1% BSA перед применением. Kunming, приобретенные в Chinese Academy of Sciences Shanghai Experimental Animal Center, имели массу 25-30 г, ♀. Количество животных в каждой группе составляло 10. После адаптации животным подкожно инъецировали НН-ЭПО-015, НН-ЭПО-018, НН-ЭПО-018 В, AF37702. Мышей умерщвляли на шестые сутки после первой дозы, цельную кровь отбирали для подсчета периферических клеток крови и ретикулоцитов. Подсчет клеток крови осуществляли с использованием автоматических счетчиков клеток крови ADVIA.
Результаты и обсуждение
Разовая подкожная инъекция каждого из НН-ЭПО-015, НН-ЭПО-018, НН-ЭПО-018В, AF37702 значительно увеличивала процентную долю и количество ретикулоцитов в периферической крови мышей; где действия НН-ЭПО-018В были относительно сильными; действия НН-ЭПО-018, AF37702 следовали далее; действия НН-ЭПО-015 самыми слабыми; действия НН-ЭПО-018 и AF37702 почти равными (смотри Таблицу 4). НН-ЭПО-015, НН-ЭПО-018, НН-ЭПО-018В и AF37702 увеличивали гематокрит периферической крови мышей, содержание гемоглобина. Их действия были почти равными, но они не оказывали значительного действия на количество эритроцитов в периферической крови (Смотри Таблицу 5).
Claims (15)
1. Пептидное производное - миметик эритропоэтина (ЭПО) общей формулы (I) и его фармацевтически приемлемые соли,
где R1, R5 выбраны из циклических пептидов, имеющих последовательности SEQ ID No:5, 6, 7 и 8:
n1, n2 представляют собой целые числа, независимо выбранные из 0-10; R2, R4 выбраны из -СО или -СН2; R3 выбран из О, S, CH2, N(CH2)n3NHR6, NCO(CH2)n4NHR6, CHOCONH(CH2)n5NHR6, CHSCON(CH2)n5NHR6 или CHNHCON(CH2)n5NHR6; где n3 представляет собой целое число, выбранное из 1-10, n4 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n5 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R6 выбран из Н или производных метоксиполиэтиленгликоля.
где R1, R5 выбраны из циклических пептидов, имеющих последовательности SEQ ID No:5, 6, 7 и 8:
n1, n2 представляют собой целые числа, независимо выбранные из 0-10; R2, R4 выбраны из -СО или -СН2; R3 выбран из О, S, CH2, N(CH2)n3NHR6, NCO(CH2)n4NHR6, CHOCONH(CH2)n5NHR6, CHSCON(CH2)n5NHR6 или CHNHCON(CH2)n5NHR6; где n3 представляет собой целое число, выбранное из 1-10, n4 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n5 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R6 выбран из Н или производных метоксиполиэтиленгликоля.
2. Пептидное производное - миметик ЭПО по п.1 и его фармацевтически приемлемые соли, где N-концы R1, R5 ацетилированы.
3. Пептидное производное - миметик ЭПО по п.1 или 2 и его фармацевтически приемлемые соли, где R1, R5 представляют собой циклический пептид, циклизованный с помощью дисульфидных связей.
4. Пептидное производное - миметик ЭПО по п.1 или 2 и его фармацевтически приемлемые соли, где указанный пептид-миметик ЭПО выбран из следующего пептида, где
n1, n2 равны 2, R2, R4 представляют собой -СО, R3 представляет собой СНОСОNН(СН2)n5NНR6, n5 равно 2;
n1, n2 равны 1, R2, R4 представляют собой -СО, R3 представляет собой NСО(СН2)n4NНR6, n4 равно 2;
n1, n2 равны 2, R2, R4 представляют собой -СН2, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, n5 равно 2; или
n1, n2 равны 1, R2, R4 представляют собой -СН2, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, n4 равно 2.
n1, n2 равны 2, R2, R4 представляют собой -СО, R3 представляет собой СНОСОNН(СН2)n5NНR6, n5 равно 2;
n1, n2 равны 1, R2, R4 представляют собой -СО, R3 представляет собой NСО(СН2)n4NНR6, n4 равно 2;
n1, n2 равны 2, R2, R4 представляют собой -СН2, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, n5 равно 2; или
n1, n2 равны 1, R2, R4 представляют собой -СН2, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, n4 равно 2.
5. Пептидное производное - миметик ЭПО по п.1 или 2 и его фармацевтически приемлемые соли, отличающиеся тем, что R6 представляет собой Н.
6. Пептидное производное - миметик ЭПО по п.1 или 2 и его фармацевтически приемлемые соли, где R6 представляет собой производные метоксиполиэтиленгликоля и где молекулярная масса производных метоксиполиэтиленгликоля предпочтительно выбрана из диапазона 5000-100000 Да (дальтон).
7. Пептидное производное - миметик ЭПО по п.6 и его фармацевтически приемлемые соли, где структура производных метоксиполиэтиленгликоля выбрана из разветвленных или линейных производных, предпочтительно из производных метоксиполиэтиленгликоля линейной структуры и имеющих молекулярную массу 20000 Да, или производных метоксиполиэтиленгликоля с разветвленной структурой и молекулярной массой 40000 Да.
8. Пептидное производное - миметик ЭПО по любому из пп.1, 2 или 7 и его фармацевтически приемлемые соли, где:
n1, n2 равны 2, R1, R5 выбраны из SEQ ID No:5 - SEQ ID No:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, где n5 представляет собой целое число, выбранное из 2-10; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее линейную структуру и молекулярную массу 20000 Да;
n1, n2 равны 1, R1, R5 выбраны из SEQ ID No:5 - SEQ ID No:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, где n4 представляет собой целое число, выбранное из 2-10; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее линейную структуру и молекулярную массу 20000 Да;
n1, n2 равны 2, R1, R5 выбраны из SEQ ID No:5 - SEQ ID No:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, где n5 представляет собой целое число, выбранное из 2-10; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее разветвленную структуру и молекулярную массу 40000 Да; или
n1, n2 равны 1, R1, R5 выбраны из SEQ ID No:5 - SEQ ID No:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, где n4 представляет собой целое число, выбранное из 2-10; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее разветвленную структуру и молекулярную массу 40000 Да.
n1, n2 равны 2, R1, R5 выбраны из SEQ ID No:5 - SEQ ID No:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, где n5 представляет собой целое число, выбранное из 2-10; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее линейную структуру и молекулярную массу 20000 Да;
n1, n2 равны 1, R1, R5 выбраны из SEQ ID No:5 - SEQ ID No:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, где n4 представляет собой целое число, выбранное из 2-10; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее линейную структуру и молекулярную массу 20000 Да;
n1, n2 равны 2, R1, R5 выбраны из SEQ ID No:5 - SEQ ID No:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой CHOCONH(CH2)n5NHR6, где n5 представляет собой целое число, выбранное из 2-10; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее разветвленную структуру и молекулярную массу 40000 Да; или
n1, n2 равны 1, R1, R5 выбраны из SEQ ID No:5 - SEQ ID No:8, R2, R4 выбраны из -СО, -СН2, R3 представляет собой NCO(CH2)n4NHR6, где n4 представляет собой целое число, выбранное из 2-10; R6 представляет собой производное метоксиполиэтиленгликоля, имеющее разветвленную структуру и молекулярную массу 40000 Да.
9. Пептидное производное - миметик ЭПО по любому из пп.1, 2 или 7 и его фармацевтически приемлемые соли, где указанное пептидное производное - миметик ЭПО и его фармацевтически приемлемые соли представляют собой:
.
10. Способ получения пептидного производного - миметика ЭПО по любому из пп.1-9 и его фармацевтически приемлемых солей, включающий:
(1) получение R1H, R5H, где R1, R5 выбраны из циклических пептидов, имеющих последовательности SEQ ID No:5, 6, 7 и 8,
(2) получение функциональной небольшой молекулы общей формулы (II)
где n1, n2 представляют собой целые числа, независимо выбранные из 0-10;
R7, R8 выбраны из ОН или Н;
Z2 выбран из О, S, CH2, N(CH2)n6NHR9, NCO(CH2)n7NHR9, CHOCONH(CH2)n8NHR9, CHSCON(CH2)n8NHR9 или CHNHCON(CH2)n8NHR9, где n6 представляет собой целое число, выбранное из 1-10, n7 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n8 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R9 выбран из Воc (трет-бутоксикарбонила) или Cbz (карбамазепина),
(3) взаимодействие R1, R5 с функциональной небольшой молекулой формулы (II) путем амидирования или восстановительного аминирования с получением соединения формулы (III):
где R2, R4 независимо выбраны из -СО или -CH2,
(4) проведение реакции амидирования с активным метоксиполиэтиленгликолем после удаления Воc или Cbz.
(1) получение R1H, R5H, где R1, R5 выбраны из циклических пептидов, имеющих последовательности SEQ ID No:5, 6, 7 и 8,
(2) получение функциональной небольшой молекулы общей формулы (II)
где n1, n2 представляют собой целые числа, независимо выбранные из 0-10;
R7, R8 выбраны из ОН или Н;
Z2 выбран из О, S, CH2, N(CH2)n6NHR9, NCO(CH2)n7NHR9, CHOCONH(CH2)n8NHR9, CHSCON(CH2)n8NHR9 или CHNHCON(CH2)n8NHR9, где n6 представляет собой целое число, выбранное из 1-10, n7 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n8 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R9 выбран из Воc (трет-бутоксикарбонила) или Cbz (карбамазепина),
(3) взаимодействие R1, R5 с функциональной небольшой молекулой формулы (II) путем амидирования или восстановительного аминирования с получением соединения формулы (III):
где R2, R4 независимо выбраны из -СО или -CH2,
(4) проведение реакции амидирования с активным метоксиполиэтиленгликолем после удаления Воc или Cbz.
11. Способ получения по п.10, отличающийся тем, что в указанной общей формуле (II)
n1, n2 равны 1 или 2, R7, R8 представляют собой ОН, Z2 выбран из NCO(CH2)n7NHR9 или CHOCONH(CH2)n8NHR9, n7 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n8 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R9 представляет собой Воc; или
n1, n2 равны 1 или 2, R7, R8 представляют собой Н, Z2 выбран из NCO(CH2)n7NHR9 или CHOCONH(CH2)n8NHR9, n7 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n8 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R9 представляет собой Воc.
n1, n2 равны 1 или 2, R7, R8 представляют собой ОН, Z2 выбран из NCO(CH2)n7NHR9 или CHOCONH(CH2)n8NHR9, n7 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n8 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R9 представляет собой Воc; или
n1, n2 равны 1 или 2, R7, R8 представляют собой Н, Z2 выбран из NCO(CH2)n7NHR9 или CHOCONH(CH2)n8NHR9, n7 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n8 представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R9 представляет собой Воc.
12. Фармацевтическая композиция для лечения расстройств, характеризующихся низким уровнем ЭПО или недостаточной или дефектной популяцией эритроцитов, содержащая:
(1) терапевтически эффективное количество пептидного производного - миметика ЭПО по любому из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемых солей, и
(2) фармацевтически приемлемые носители.
(1) терапевтически эффективное количество пептидного производного - миметика ЭПО по любому из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемых солей, и
(2) фармацевтически приемлемые носители.
13. Применение пептидного производного - миметика ЭПО по любому из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемых солей в изготовлении лекарственного средства для лечения расстройств, характеризующихся низким уровнем ЭПО или недостаточной, или дефектной группой эритроцитов.
14. Применение фармацевтической композиции по п.12 для изготовления лекарственного средства для лечения расстройств, характеризующихся низким уровнем ЭПО или недостаточной, или дефектной группой эритроцитов.
15. Применение по п.13 или 14, где указанные расстройства, характеризующиеся низким уровнем ЭПО или недостаточной, или дефектной группой эритроцитов, представляют собой прогрессирующую почечную недостаточность или диализ; анемию, связанную со СПИДом (синдромом приобретенного иммунодефицита), аутоиммунные заболевания или злокачественную опухоль; кистозный фиброз; анемию при недоношенности; анемию, связанную с хроническим воспалительным заболеванием; повреждение спинного мозга; острую потерю крови; старение и рак, сопровождающийся аномальной продукцией эритроцитов.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2007101987519A CN101456911A (zh) | 2007-12-12 | 2007-12-12 | 促红细胞生成素模拟肽衍生物及其可药用盐和其制备方法与用途 |
| CN200710198751.9 | 2007-12-12 | ||
| PCT/CN2008/001909 WO2009079910A1 (fr) | 2007-12-12 | 2008-11-24 | Dérivé de peptide mimétique d'érythropoïétine et son sel pharmaceutique, préparation et utilisations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010123466A RU2010123466A (ru) | 2012-01-20 |
| RU2493168C2 true RU2493168C2 (ru) | 2013-09-20 |
Family
ID=40768057
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010123466/10A RU2493168C2 (ru) | 2007-12-12 | 2008-11-24 | Пептидное производное - миметик эритропоэтина и его фармацевтические соли, их получение и применение |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8642545B2 (ru) |
| EP (1) | EP2233504B1 (ru) |
| JP (1) | JP5448099B2 (ru) |
| KR (1) | KR101646929B1 (ru) |
| CN (2) | CN101456911A (ru) |
| AU (1) | AU2008341661B9 (ru) |
| BR (1) | BRPI0820749B8 (ru) |
| CA (1) | CA2708819C (ru) |
| ES (1) | ES2541139T3 (ru) |
| MX (1) | MX2010006436A (ru) |
| RU (1) | RU2493168C2 (ru) |
| TW (1) | TWI419706B (ru) |
| UA (1) | UA102236C2 (ru) |
| WO (1) | WO2009079910A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201003998B (ru) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2709648A4 (en) * | 2011-05-19 | 2015-04-08 | Geysen Hendrik M | COMPOUNDS FOR BINDING TO THE ERYTHROPOIETIN RECEPTOR |
| WO2013158871A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Use of erythropoietin and derivatives for treating hypertension |
| CN103450348B (zh) * | 2012-05-29 | 2016-03-30 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 一种促红细胞生成素模拟肽、其制备方法和用途 |
| CN103536900B (zh) * | 2012-07-16 | 2017-06-16 | 江苏豪森药业集团有限公司 | 含有促红细胞生成素模拟肽的药物组合物 |
| CN103570834A (zh) * | 2012-07-19 | 2014-02-12 | 江苏豪森药业股份有限公司 | 甲氧基聚乙二醇修饰的促红细胞生成素模拟肽衍生物 |
| JP6426693B2 (ja) | 2013-03-15 | 2018-11-21 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | 抗ｃｄ４７薬の処理上有効量を達成するための方法 |
| CN104231039A (zh) * | 2013-06-08 | 2014-12-24 | 江苏豪森药业股份有限公司 | 用于合成促红细胞生成素模拟肽衍生物的功能小分子及其制备方法 |
| CN105085653B (zh) * | 2015-08-26 | 2019-01-08 | 天津药物研究院有限公司 | 一种促红细胞生成素模拟肽及其制备方法和应用 |
| CN106608913B (zh) * | 2015-10-22 | 2020-05-05 | 天津药物研究院有限公司 | 一种1，2，3-丙三酸偶联的epo拟肽衍生物及其制备方法和应用 |
| CN106608912B (zh) * | 2015-10-22 | 2019-09-20 | 天津药物研究院有限公司 | 一种脂肪二羧酸偶联的epo模拟肽衍生物及其制备方法和应用 |
| CN105367629B (zh) * | 2015-11-09 | 2019-01-08 | 天津药物研究院有限公司 | 一种促红细胞生成素模拟肽以及其制备方法和用途 |
| CN106928338A (zh) * | 2015-12-31 | 2017-07-07 | 杭州阿德莱诺泰制药技术有限公司 | 促红细胞生成素肽及衍生物和聚合物、制备方法和应用 |
| CA3026863A1 (en) | 2016-07-12 | 2018-01-18 | Hexal Ag | Glycoprotein with reduced acetylation rate of sialic acid residues |
| CN108236717A (zh) * | 2016-12-27 | 2018-07-03 | 江苏豪森药业集团有限公司 | 聚乙二醇连接臂与所修饰多肽药物的偶合物 |
| TW202024117A (zh) * | 2018-09-14 | 2020-07-01 | 日商Ｅｐｏ醫藥股份有限公司 | 抗紅血球生成素受體胜肽 |
| KR102073886B1 (ko) | 2019-05-02 | 2020-02-05 | 주식회사 미래와바다 | 잘피이식용 다공질 패널 |
| CN114601916B (zh) * | 2022-04-12 | 2024-04-16 | 江苏豪森药业集团有限公司 | 一种培化西海马肽注射制剂及其制备方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996040749A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Johnson & Johnson Corporation | Compounds and peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| WO2004101606A2 (en) * | 2003-05-12 | 2004-11-25 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| WO2006060148A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-08 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| WO2006062685A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-15 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| RU2281116C2 (ru) * | 2000-05-15 | 2006-08-10 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Новая фармацевтическая композиция |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990008822A1 (en) | 1989-02-03 | 1990-08-09 | Genetics Institute, Inc. | Erythropoietin receptor |
| DE69736780T2 (de) * | 1996-08-02 | 2007-09-06 | Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. | Polypeptide mit einzelnem kovalent gebundenen n-terminalen wasserlöslichen polymer |
| CN1169827C (zh) * | 2001-08-07 | 2004-10-06 | 沈阳三生制药股份有限公司 | 一种增强多肽在体内稳定性药物的生产方法及其应用 |
| EP1626983B8 (en) * | 2003-05-12 | 2010-12-22 | Affymax, Inc. | Novel poly (ethylene glycol) modified erythropoietin agonists and uses thereof |
| EP1625156B1 (en) * | 2003-05-12 | 2012-09-19 | Affymax, Inc. | Peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| CN100362019C (zh) * | 2004-03-02 | 2008-01-16 | 成都生物制品研究所 | 聚乙二醇修饰后具有体内生理活性的重组促红细胞生成素 |
-
2007
- 2007-12-12 CN CNA2007101987519A patent/CN101456911A/zh active Pending
-
2008
- 2008-07-08 TW TW097125651A patent/TWI419706B/zh active
- 2008-11-24 MX MX2010006436A patent/MX2010006436A/es active IP Right Grant
- 2008-11-24 CA CA2708819A patent/CA2708819C/en active Active
- 2008-11-24 JP JP2010537234A patent/JP5448099B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-24 RU RU2010123466/10A patent/RU2493168C2/ru active
- 2008-11-24 AU AU2008341661A patent/AU2008341661B9/en active Active
- 2008-11-24 ES ES08865748.1T patent/ES2541139T3/es active Active
- 2008-11-24 UA UAA201007321A patent/UA102236C2/ru unknown
- 2008-11-24 US US12/747,818 patent/US8642545B2/en active Active
- 2008-11-24 CN CN2008800142471A patent/CN101675080B/zh active Active
- 2008-11-24 EP EP08865748.1A patent/EP2233504B1/en active Active
- 2008-11-24 KR KR1020107014960A patent/KR101646929B1/ko active Active
- 2008-11-24 BR BRPI0820749A patent/BRPI0820749B8/pt active IP Right Grant
- 2008-11-24 WO PCT/CN2008/001909 patent/WO2009079910A1/zh not_active Ceased
-
2010
- 2010-06-04 ZA ZA2010/03998A patent/ZA201003998B/en unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996040749A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Johnson & Johnson Corporation | Compounds and peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| RU2281116C2 (ru) * | 2000-05-15 | 2006-08-10 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Новая фармацевтическая композиция |
| WO2004101606A2 (en) * | 2003-05-12 | 2004-11-25 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| WO2006060148A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-08 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| WO2006062685A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-15 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BRPI0820749B8 (pt) | 2021-05-25 |
| CN101456911A (zh) | 2009-06-17 |
| BRPI0820749A2 (pt) | 2015-06-16 |
| CA2708819C (en) | 2018-05-15 |
| AU2008341661A1 (en) | 2009-07-02 |
| WO2009079910A8 (zh) | 2009-11-19 |
| AU2008341661B2 (en) | 2013-08-08 |
| CN101675080B (zh) | 2012-07-11 |
| BRPI0820749B1 (pt) | 2020-11-24 |
| US20100323949A1 (en) | 2010-12-23 |
| ES2541139T3 (es) | 2015-07-16 |
| KR101646929B1 (ko) | 2016-08-09 |
| EP2233504A4 (en) | 2011-03-09 |
| US8642545B2 (en) | 2014-02-04 |
| KR20110025731A (ko) | 2011-03-11 |
| RU2010123466A (ru) | 2012-01-20 |
| HK1136837A1 (en) | 2010-07-09 |
| UA102236C2 (ru) | 2013-06-25 |
| EP2233504A1 (en) | 2010-09-29 |
| JP5448099B2 (ja) | 2014-03-19 |
| MX2010006436A (es) | 2010-10-06 |
| TW201002352A (en) | 2010-01-16 |
| JP2011506350A (ja) | 2011-03-03 |
| EP2233504B1 (en) | 2015-04-01 |
| WO2009079910A1 (fr) | 2009-07-02 |
| CA2708819A1 (en) | 2009-07-02 |
| TWI419706B (zh) | 2013-12-21 |
| AU2008341661B9 (en) | 2013-08-15 |
| ZA201003998B (en) | 2011-10-26 |
| CN101675080A (zh) | 2010-03-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2493168C2 (ru) | Пептидное производное - миметик эритропоэтина и его фармацевтические соли, их получение и применение | |
| KR101163683B1 (ko) | 에리스로포이에틴 수용체에 결합하는 신규의 펩티드 | |
| KR101227666B1 (ko) | 에리스로포이에틴 수용체에 결합하는 펩티드 | |
| KR101262312B1 (ko) | 에리스로포이에틴 수용체 펩티드 포뮬레이션 및 용도 | |
| US7459522B2 (en) | Peptide dimers as agonists of the erythropoietin (EPO) receptor, and associated methods of synthesis and use | |
| WO2007010552B1 (en) | N- terminal peg conjugate of erythropoietin | |
| TWI430811B (zh) | 聚乙二醇化促紅血球生成素偶聯物和其製備方法與用途 | |
| CN105085653B (zh) | 一种促红细胞生成素模拟肽及其制备方法和应用 | |
| CN105085654B (zh) | 一种促红细胞生成素模拟肽及其制备方法和应用 | |
| CN105367629B (zh) | 一种促红细胞生成素模拟肽以及其制备方法和用途 | |
| CN106554395B (zh) | 一种长效促红细胞生成素模拟肽及其制备方法和应用 | |
| CN105837681B (zh) | 一种促红细胞生成素模拟肽衍生物、其制备方法和用途 | |
| HK1136837B (en) | An erythropoietin mimetic peptide derivatives and its pharmaceutical salt, the preparation and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |