RU2492173C2 - Новые соединения со спирохиральной углеродной основой, способы их получения и фармацевтические композиции, содержащие такие соединения - Google Patents
Новые соединения со спирохиральной углеродной основой, способы их получения и фармацевтические композиции, содержащие такие соединения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2492173C2 RU2492173C2 RU2011121877/04A RU2011121877A RU2492173C2 RU 2492173 C2 RU2492173 C2 RU 2492173C2 RU 2011121877/04 A RU2011121877/04 A RU 2011121877/04A RU 2011121877 A RU2011121877 A RU 2011121877A RU 2492173 C2 RU2492173 C2 RU 2492173C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compound
- pharmaceutically acceptable
- methanol
- formula
- eluent
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 100
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 31
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 31
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 16
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 15
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 105
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 20
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 18
- 102000004311 liver X receptors Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000865 liver X receptors Proteins 0.000 claims description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 16
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 10
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 10
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 claims description 9
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000010410 layer Substances 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 8
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 241001346917 Phorbas Species 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 5
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 4
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 claims description 4
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 abstract description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 10
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 abstract description 9
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 abstract description 8
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 abstract description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 8
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 abstract description 3
- 230000004072 osteoblast differentiation Effects 0.000 abstract description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 abstract description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 abstract description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 abstract description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 abstract 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 49
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 23
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 20
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 10
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 10
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 9
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 9
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 9
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 8
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 102000015775 Core Binding Factor Alpha 1 Subunit Human genes 0.000 description 7
- 108010024682 Core Binding Factor Alpha 1 Subunit Proteins 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 102000007399 Nuclear hormone receptor Human genes 0.000 description 7
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 7
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 6
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 6
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 6
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 6
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 4
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 108020004017 nuclear receptors Proteins 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 229910052714 tellurium Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 235000019502 Orange oil Nutrition 0.000 description 3
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 3
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 239000010502 orange oil Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UNOBADFVAVKXOA-UHFFFAOYSA-N 3,4-ditert-butyl-2-methylpyridine Chemical compound CC1=NC=CC(C(C)(C)C)=C1C(C)(C)C UNOBADFVAVKXOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940122430 Liver X receptor antagonist Drugs 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 101150118570 Msx2 gene Proteins 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 2
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000243142 Porifera Species 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical group 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- WJKHJLXJJJATHN-UHFFFAOYSA-N triflic anhydride Chemical compound FC(F)(F)S(=O)(=O)OS(=O)(=O)C(F)(F)F WJKHJLXJJJATHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KUWPCJHYPSUOFW-YBXAARCKSA-N 2-nitrophenyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O KUWPCJHYPSUOFW-YBXAARCKSA-N 0.000 description 1
- 101710190443 Acetyl-CoA carboxylase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102100021334 Bcl-2-related protein A1 Human genes 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000003706 Complement factor D Human genes 0.000 description 1
- 108090000059 Complement factor D Proteins 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000804917 Homo sapiens Xenotropic and polytropic retrovirus receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 201000002451 Overnutrition Diseases 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 102100036974 Xenotropic and polytropic retrovirus receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026594 alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- HFVAFDPGUJEFBQ-UHFFFAOYSA-M alizarin red S Chemical compound [Na+].O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=C(S([O-])(=O)=O)C(O)=C2O HFVAFDPGUJEFBQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N butyryl chloride Chemical compound CCCC(Cl)=O DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- PQLFROTZSIMBKR-UHFFFAOYSA-N ethenyl carbonochloridate Chemical compound ClC(=O)OC=C PQLFROTZSIMBKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000004136 fatty acid synthesis Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020823 overnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000018406 regulation of metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000001896 rotating frame Overhauser effect spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- GXPHKUHSUJUWKP-UHFFFAOYSA-N troglitazone Chemical compound C1CC=2C(C)=C(O)C(C)=C(C)C=2OC1(C)COC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O GXPHKUHSUJUWKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001641 troglitazone Drugs 0.000 description 1
- GXPHKUHSUJUWKP-NTKDMRAZSA-N troglitazone Natural products C([C@@]1(OC=2C(C)=C(C(=C(C)C=2CC1)O)C)C)OC(C=C1)=CC=C1C[C@H]1SC(=O)NC1=O GXPHKUHSUJUWKP-NTKDMRAZSA-N 0.000 description 1
- 238000007738 vacuum evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/10—Spiro-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
Изобретение относится к новому соединению со спирохиральной углеродной основой, или его фармацевтически приемлемой соли общей формулы 1
где W представляет собой СО или СНО(С=O)СН3; Х представляет собой N3 или OR2; R2 представляет собой водород, линейный или разветвленный алкил С1~С8 или 
; Y представляет собой О; Z представляет собой простую связь или O; R3 представляет собой линейный или разветвленный алкил С1~С8 или алкенил С2~С8, и М и N представляют собой, каждый независимо, водород, ОН или отсутствуют; при этом атом углерода, связанный с М или N, образует простую связь или двойную связь с другими атомами углерода, и число двойных связей составляет одну или менее для каждого из атомов углерода. Изобретение относится к способу получения и фармацевтическим композициям. Соединение со спирохиральной углеродной основой обладает превосходной активностью дифференцировки остеобластов, активностью ингибирования тучных клеток и активностью ингибирования синтеза жирных кислот в печени. Поэтому соединение будет играть передовую роль при лечении остеопороза, жировой дистрофии печени и ожирения. 6 н. и 7 з.п. ф-лы, 6 пр., 5 табл., 17 ил.
Description
Область техники
Изобретение относится к новым соединениям со спирохиральной углеродной основой, способам их получения и фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения.
Уровень техники
Быстрый экономический рост и разработка лекарственных средств в последнее время привели к избыточному питанию и к увеличению количества населения преклонного возраста, результатом чего является ожирение и резкое увеличение числа пациентов с жировой дистрофией печени из-за ожирения и увеличение числа страдающих от остеопороза из-за старения.
В течение длительного времени полагали, что жировая ткань защищает ткани организма и сохраняет тепло тела и является хранилищем энергии для физической активности. Однако результаты многих последних исследований показывают, что жировая ткань играет важную роль в физиологии и генезисе человеческого организма. В частности, обнаружены факты, что материалы, способные регулировать различные виды физиологической активности, такие как энергетический баланс, регулирование сахара в крови, регуляция чувствительности к инсулину, генерация кровеносных сосудов и т.п., например адипсин, TNFa, лептин и т.д., секретируются в адипоцитах один за другим, и, таким образом, адипоциты стали центром внимания в отношении регуляции метаболизма в человеческом организме.
С другой стороны, так как ожирение вызывает тяжелые социальные болезни, активно осуществляется разработка лекарственных средств для ингибирования образования адипоцитов. Однако даже хотя быстрое возрастание числа пациентов с неалкогольной жировой дистрофией печени из-за ожирения отражает серьезную угрозу здоровью современного населения, лекарственное средство для эффективного лечения в таком случае до сих пор не разработано.
Остеопороз является результатом нарушения остеогенного баланса между способностью остеобластов к костеобразованию и костеабсорбирующей способностью остеокластов. Известно, что генерация остеобластов и остеокластов регулируется с учетом гормонов, поступающих извне питательных веществ и генов, но многие гены, которые являются непосредственно причинами костных болезней, пока не обнаружены.
Большинство лекарственных средств, используемых в настоящее время в способах лечения, ингибируют костеабсорбирующую способность костных клеток для уравновешивания с образованием костных клеток. Однако такие лекарственные средства имеют серьезное побочное действие и недостаточный клинический эффект, и поэтому необходима разработка новой концепции лекарственных средств. Хотя многие исследователи пытаются разрабатывать лекарственные средства, способные промотировать образование костных клеток, иными словами, активацию остеобластов, новые лекарственные средства с благоприятным действием пока еще не разработаны.
Описание
Техническая задача
Целью настоящего изобретения является новое соединение с в высшей степени превосходной способностью дифференцировки остеобластов.
Другой целью настоящего изобретения является новое соединение с превосходной способностью ингибировать дифференцировку адипоцитов.
Еще одной целью настоящего изобретения является новое соединение с селективной и превосходной антагонистической активностью против Х-рецептора печени (LXR).
Еще одной целью настоящего изобретения является новое соединение, ингибирующее биосинтез и абсорбцию жира в печени.
Еще одной целью настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для лечения остеопороза, жировой дистрофии печени или ожирения, содержащая такое новое соединение в качестве активного компонента.
Техническое решение
В одном общем аспекте изобретение относится к соединению формулы 1, приведенной ниже, его стереоизомеру, его энантиомеру, его предшественнику, способному к гидролизу in vivo, или его фармацевтически приемлемой соли.
В формуле 1
W представляет собой СО или CHOR1;
Х представляет собой N3, NHR2, OR2, SR2, SeR2 или TeR2;
R1 и R2 выбирают, независимо, из водорода, линейного или разветвленного алкила С1~C8, алкенила С2~C8, алкинила С2~C8, циклоалкила С3~C8, арила С6~С20, гетероарила С4~С20 или 
Y представляет собой О, S или NR4;
Z представляет собой простую связь, NH, O, S, Se или Те;
R3 и R4 выбирают, каждый независимо, из водорода, линейного или разветвленного алкила С1~C8, алкенила С2~C8, алкинила С2~C8, циклоалкила С3~C8, арила С6~С20, гетероарила С4~С20; и
М и N представляют собой, каждый независимо, водород, ОН или отсутствуют; при этом атом углерода, связанный с М или N, образует простую связь или двойную связь с другими атомами углерода, и число двойных связей составляет одну или менее для каждого из атомов углерода.
В другом общем аспекте изобретение относится к способу получения соединения формулы 1, включающему
(а) нарезание и сушку губки Phorbas sp. с последующей экстракцией с использованием спирта С1~C4;
(b) обработку экстракта, полученного на стадии (а), с использованием воды и метиленхлорида и затем удаление растворителя из органического слоя с последующей обработкой с использованием н-гексана и смешанного растворителя из метанола и воды; и
(с) удаление растворителя из слоя метанольной аликвоты, полученной на стадии (b), и последующее получение аликвоты хроматографией с использованием диоксида кремния в качестве неподвижной фазы и с использованием метанольного раствора в качестве элюента, причем метанольный раствор содержит или не содержит 20 мас.% или менее воды относительно его общей массы.
В еще одном общем аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения остеопороза, включающей соединение формулы 1, его стереоизомер, его энантиомер, его предшественник, способный к гидролизу in vivo, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
В еще одном общем аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения жировой дистрофии печени, включающей соединение формулы 1, его стереоизомер, его энантиомер, его предшественник, способный к гидролизу in vivo, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
В еще одном общем аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения ожирения, включающей соединение формулы 1, его стереоизомер, его энантиомер, его предшественник, способный к гидролизу in vivo, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
В еще одном общем аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции для антагонизации (как антагонисту) Х-рецептора печени (LXR), включающей соединение формулы 1, его стереоизомер, его энантиомер, его предшественник, способный к гидролизу in vivo, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
Благоприятные действия
Соединение формулы 1 по настоящему изобретению имеет в высшей степени превосходную способность дифференцировки остеобластов, и поэтому ожидается, что соединение по настоящему изобретению может играть весьма передовую роль в лечении остеопороза. Кроме того, соединение формулы 1 по настоящему изобретению обладает сильной антагонистической эффективностью против Х-рецепторов печени для ингибирования синтеза жира и абсорбции жира в печени, и поэтому ожидается, что соединение по настоящему изобретению может являться весьма эффективным при лечении жировой дистрофии печени.
Более того, соединение формулы 1 по настоящему изобретению обладает превосходной способностью ингибировать дифференцировку адипоцитов, и поэтому ожидается, что соединение по настоящему изобретению можно использовать при лечении ожирения.
Описание чертежей
Указанные выше и другие цели, особенности и преимущества настоящего изобретения станут очевидны из последующего описания предпочтительных воплощений изобретения, приведенных в сочетании с прилагаемыми чертежами, в которых
фиг.1 показывает корреляцию водорода (сплошные линии) и корреляцию НМВС (стрелки, показывающие корреляцию связывания от ядра водорода к ядру углерода), полученные экспериментом COSY (а), и показывает структуры соединений 1-4 по настоящему изобретению (b);
фиг.2 показывает спектры кругового дихроизма, которые дают соединения 1 и 2 по настоящему изобретению;
фиг.3 показывает картину, представляющую результаты измерения способности дифференцировки остеобластов аликвоты экстракта 116V и соединений 1-4 по настоящему изобретению (экспериментальный пример 1);
фиг.4 показывает данные ОТ-ПЦР (RTPCR), которые подтверждают степени транскрипции факторов признаков дифференцировки остеобластов (Runx2, остеокальцина, Msx2 и т.д.) в реальном времени ПЦР (ОТ-ПЦР) после обработки клеточных линий С3Н/10Т1/2 соединениями 1-4 по настоящему изобретению в течение 6 суток (экспериментальный пример 1);
фиг.5 показывает данные вестерн-блоттинга, которые подтверждают экспрессию белка фактора признаков дифференцировки остеобластов TAZ, с использованием вестерн-блоттинга после обработки клеточных линий С3Н/10Т1/2 соединениями 1-4 по настоящему изобретению в течение 6 суток (экспериментальный пример 1);
фиг.6 показывает данные вестерн-блоттинга, которые подтверждают экспрессию белков факторов признаков дифференцировки остеобластов TAZ и Runx2, с использованием вестерн-блоттинга после обработки клеточных линий С3Н/10Т1/2 соединениями 1-4 по настоящему изобретению в течение 6 суток (экспериментальный пример 1);
фиг.7 показывает картину, представляющую результат измерения способности дифференцировки остеобластов по соединению 5 по настоящему изобретению в экспериментальном примере 1;
фиг.8 показывает картину, представляющую результаты измерения способности дифференцировки адипоцитов (С3Н/10Т1/2) аликвоты экстракта 116V и соединений 1-4 по настоящему изобретению в экспериментальном примере 2;
фиг.9 показывает картину, представляющую результаты измерения способности ингибировать дифференцировку адипоцитов (3Т3-L1) соединения 1 по настоящему изобретению в экспериментальном примере 2;
фиг.10 показывает график, представляющий результат измерения антагонистической активности соединения 1 по настоящему изобретению против ядерного рецептора LXR в экспериментальном примере 3;
фиг.11 показывает график, представляющий результаты измерения селективной активности соединения 1 по настоящему изобретению в отношении различных ядерных рецепторов в экспериментальном примере 3;
фиг.12 показывает график, представляющий результаты измерения непосредственного связывания соединения 1 по настоящему изобретению на белке ядерного рецептора LXR в экспериментальном примере 3;
фиг.13 показывает график, представляющий результат измерения цитотоксичности соединения 1 по настоящему изобретению на клетках селезенки мыши в экспериментальном примере 4;
фиг.14 показывает диаграммы, представляющие результаты измерения регуляции экспрессии генов соединением 1 по настоящему изобретению в клетках печени (клетки AML12 и HepG2) в экспериментальном примере 5;
фиг.15 показывает график, представляющий изменения массы тела в периоды введения для групп обработки и контроля, когда мышам в экспериментальном примере 6 вводят соединение 1 по настоящему изобретению;
фиг.16 показывает диаграмму и картины, представляющие эффективность ингибирования жировой дистрофии печени соединением 1 по настоящему изобретению на животной модели заболевания в экспериментальном примере 6; и
фиг.17 показывает диаграммы, представляющие результаты измерения эффективности регуляции экспрессии генов, проявляемой соединением 1 по настоящему изобретению, на животной модели заболевания после того, как указанная эффективность на таких животных подтверждена в ходе экспериментального примера 6.
Наилучший способ осуществления изобретения
Настоящее изобретение относится к соединению приведенной ниже формулы 1, его стереоизомеру, его энантиомеру, его предшественнику, способному к гидролизу in vivo, или его фармацевтически приемлемой соли.
В формуле 1
W представляет собой СО или CHOR1;
Х представляет собой N3, NHR2, OR2, SR2, SeR2 или TeR2;
R1 и R2 выбирают, независимо, из водорода, линейного или разветвленного алкила С1~C8, алкенила С2~C8, алкинила С2~C8, циклоалкила С3~C8, арила С6~С20, гетероарила С4~С20 или 
Y представляет собой О, S или NR4;
Z представляет собой простую связь, NH, O, S, Se или Те;
R3 и R4 выбирают, каждый независимо, из водорода, линейного или разветвленного алкила С1~C8, алкенила С2~C8, алкинила С2~C8, циклоалкила С3~C8, арила С6~С20 или гетероарила С4~С20; и
М и N представляют собой, каждый независимо, водород, ОН или отсутствуют; при этом атом углерода, связанный с М или N, образует простую связь или двойную связь с другими атомами углерода, и число двойных связей составляет одну или менее для каждого из атомов углерода.
Соединение формулы 1 выделяют из материала (KNUE116), экстрагированного из Phorbas sp., обитающей в стране, или синтезируют с использованием выделенного соединения в качестве исходного материала, и нового соединения со спирохиральной углеродной основой. Соединение формулы 1 по новому промотирует дифференцировку остеобластов, прекрасно ингибирует способность адипоцитов к дифференцировке и подавляет синтез жира и абсорбцию жира в печени. Поэтому ожидается, что соединение формулы 1 может играть передовую роль при лечении остеопороза, лечении жировой дистрофии печени и лечении ожирения.
Конкретные примеры соединений формулы 1 приводятся далее.
В указанных выше формулах
Х1 представляет собой N3, NH2, OH, SH, SeH или TeH;
Х2 представляет собой NH, O, S, Se или Te;
Z представляет собой простую связь, NH, O, S, Se или Те;
R1 представляет собой водород, линейный или разветвленный алкил С1~C8, алкенил С2~C8, алкинил С2~C8, циклоалкил С3~C8, арил С6~С20, гетероарил С4~С20 или 
и
каждый из R2, R3 и R4 представляет собой водород, линейный или разветвленный алкил С1~C8, алкенил С2~C8, алкинил С2~C8, циклоалкил С3~C8, арил С6~С20 или гетероарил С4~С20.
В другом предпочтительном соединении из числа соединений указанной выше формулы 1 W представляет собой СО или CHOR1; Х представляет собой N3, NHR2, OR2, SR2, SeR2 или TeR2; R1 и R2 выбирают, независимо, из водорода, линейного или разветвленного алкила С1~C8, алкенила С2~C8, алкинила С2~C8 или Y представляет собой О, S или NR4; Z представляет собой простую связь, NH, O или S; R3 и R4 выбирают, каждый независимо, из водорода, линейного или разветвленного алкила С1~C8, алкенила С2~C8 или алкинила С2~C8; и М и N представляют собой, каждый независимо, водород, ОН или отсутствуют, при этом атом углерода, связанный с М или N, образует простую связь или двойную связь с другими атомами углерода, и число двойных связей составляет одну или менее для каждого из атомов углерода.
В другом предпочтительном соединении из числа соединений указанной выше формулы 1, где W представляет собой СО или CHOR1, Х представляет собой N3, OR2 или SR2; R1 и R2 выбирают, каждый независимо, из водорода, линейного или разветвленного алкила С1~C8, алкенила С2~C8, алкинила С2~C8 или Y представляет собой О или S; Z представляет собой простую связь; R3 выбирают из водорода, линейного или разветвленного алкила С1~C8, алкенила С2~C8 или алкинила С2~C8; и М и N представляют собой, каждый независимо, водород, ОН или отсутствуют; при этом атом углерода, связанный с М или N, образует простую связь или двойную связь с другими атомами углерода, и число двойных связей составляет одну или менее для каждого из атомов углерода.
Конкретные примеры соединений формулы 1 приводятся далее.
Далее настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы 1.
Способ получения по настоящему изобретению включает:
(а) нарезание и сушку губки Phorbas sp. с последующей экстракцией с использованием спирта С1~C4;
(b) обработку экстракта, полученного на стадии (а), с использованием воды и метиленхлорида и затем удаление растворителя из органического слоя снова с последующей обработкой с использованием н-гексана и смешанного растворителя из метанола и воды; и
(с) удаление растворителя из слоя метанольной аликвоты, полученной на стадии (b), и последующее получение аликвоты хроматографией с использованием диоксида кремния в качестве неподвижной фазы и с использованием метанольного раствора в качестве элюента, причем метанольный раствор содержит или не содержит 20 мас.% или менее воды относительно его общей массы.
Также способ получения может дополнительно включать после стадии (с) стадию (d) очистку аликвоты, полученной на стадии (с).
На стадии (а) для сушки можно использовать сушку вымораживанием, и в качестве спирта С1~С4 можно использовать метанол. Экстракцию можно выполнять при комнатной температуре, и предпочтительно, в течение 2 часов или более.
На стадии (b) смешанный растворитель из метанола и воды может содержать 60~90 мас.% метанола и 10~40 мас.% воды относительно общей массы растворителя.
На стадии (с) можно выполнять флэш-хроматографию с обращенной фазой. Хроматографию можно выполнять один раз или более в порядке от элюента, имеющего наивысшую полярность, до элюента, имеющего наименьшую полярность, путем использования в качестве элюента смешанного растворителя из воды и метанола с наивысшей полярностью перед использованием в качестве элюента метанольного раствора, содержащего или не содержащего 20 мас.% или менее воды от общей массы элюента. В частности, в качестве элюента можно использовать смесь воды и метанола.
На стадии (d) очистку можно выполнять высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), и в качестве элюента можно использовать смесь 50~80 мас.% ацетонитрила (ACN) и 20~50 мас.% воды относительно общей массы элюента.
Между тем, соединения формулы 1 по настоящему изобретению можно синтезировать с использованием в качестве исходного материала соединений, выделенных вышеуказанными способами, и такого способа как реакция этерификации (получения сложного эфира), реакция азидного замещения, реакция этерификации (получения простого эфира) или подобная реакция.
Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения остеопороза, жировой дистрофии печени и ожирения, включающей соединение формулы 1, его стереоизомер, его энантиомер, его предшественник, способный к гидролизу in vivo, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для антагонизации Х-рецептора печени (LXR), включающей соединение формулы 1, его стереоизомер, его энантиомер, его предшественник, способный к гидролизу in vivo, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
В фармацевтической композиции фармацевтически приемлемая соль может представлять собой носитель или среду, применимые при введении лекарственных средств, и можно использовать без ограничения любой материал, обычно используемый в технике. Например, можно использовать растворитель, диспергатор, наполнители, сухие разбавители, связующие, смачивающие вещества, вещества, способствующие рассыпанию, поверхностно-активные вещества или подобное.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получить в формате перорального препарата, такого как порошок, гранула, таблетка, капсула, суспензия, эмульсия, сироп, аэрозоль, или подобного, препарата для наружного применения, суппозитория, стерильного раствора для инъекций или подобном формате.
Дозировка соединения формулы 1, его стереоизомера, его энантиомера, его предшественника, способного к гидролизу in vivo, или его фармацевтически приемлемой соли по настоящему изобретению может изменяться в зависимости от состояния, массы тела и степени заболевания пациентов, типов препаратов лекарственных средств, способов введения и периодов введения, но может быть правильно установлена специалистами в данной области техники. Например, может назначаться дозировка от 0,01 мг/кг до 200 мг/кг в сутки. Введение может осуществляться один раз в сутки или несколько раз в сутки. Соответственно, дозировка не ограничивает объем настоящего изобретения в каком-либо аспекте.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить млекопитающим, таким как крысы, мыши, домашний скот, люди и т.п., различными способами. Все типы введения, известные ранее, могут быть использованы, например, для введения можно использовать ректальный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, интраутериндуральный путь или интрацеребровентрикулярную инъекцию.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения
Далее в данном описании будут подробно описываться воплощения настоящего изобретения с обращением к прилагаемым чертежам. Однако воплощения используются для пояснения настоящего изобретения на примерах, и настоящее изобретение может различным образом модифицироваться и изменяться, не будучи ограничено указанными воплощениями.
Пример 1. Выделение и очистка новых соединений
Губку Phorbas sp., обитающую в стране, собирают с использованием кожаных скуб, режут на куски размером примерно 10 см или меньше и сушат вымораживанием в течение 3 суток, и получают сухие материалы с массой сухого вещества примерно 1 кг. К высушенным материалам добавляют 3,0 л метанола и затем выполняют экстракцию при комнатной температуре в целом дважды в течение 2 суток. Экстракт обрабатывают с использованием воды и метиленхлорида и затем из органического слоя удаляют растворитель вакуумным испарением с последующей обработкой с использованием н-гексана и смешанного растворителя с 85 мас.% метанола и 15 мас.% воды. Из слоя аликвоты с 85 мас.% метанола удаляют растворитель и получают аликвоту примерно в 5 г. С полученной аликвотой выполняют флэш-хроматографию с обращенной фазой на диоксиде кремния. В данном случае для обращенной фазы в качестве неподвижной фазы используют диоксид кремния С18 и используют элюент в порядке от высокой полярности до низкой полярности, иными словами, в порядке 50% воды/50% метанола, 40% воды/60% метанола, 30% воды/70% метанола, 20% воды/80% метанола, 10% воды/90% метанола, 100% метанола и 100% ацетона. Измеряют способность дифференцировки остеобластов материала, соответствующего каждому слою. Результаты показывают, что способность дифференцировки остеобластов обнаруживается в аликвоте 10% воды/90% метанола (116V) и аликвоте 100% метанола (116VI), каждую из двух аликвот получают в количестве примерно 1 г.
Для того чтобы очистить соединения из двух аликвот с активностью, выполняют полупрепаративную ВЭЖХ с обращенной фазой. Сначала выполняют хроматографию аликвоты 116V в условиях, указанных далее, и получают соединения 1, 9 и 10.
[Колонка YMC ODSC18, диаметр частиц 5 мкм, размер колонки 250×10 мм (длина × диаметр), скорость элюции 2,0 мл/мин, детектор с измерением показателя преломления, элюент - смесь 65 мас.% ацетонитрила (ACN) и 35 мас.% воды.]
Когда впрыскивают 50 мг такой аликвоты, выделяют компоненты в форме масла оранжевого цвета при времени удерживания примерно 33 минуты (соединение 1), 15 минут (соединение 9) и 40 минут (соединение 10) в количествах 25 мг, 1,5 мг и 1,0 мг, соответственно. Такую же ВЭЖХ также используют для аликвоты 116VI, но для разделения аддитивных компонентов используют другие условия в отношении проявляющего растворителя. В данном случае используют смесь 70 мас.% ацетонитрила и 30 мас.% воды. Общее время проявления при каждой обработке составляет примерно полтора часа. Когда за один раз впрыскивают 5 мг аликвоты жидкости 116VI, соединение 2 в форме масла оранжевого цвета, соединение 3 и, в заключение, соединение 4 выделяют, очищают и получают при времени удержания примерно 1 час 10 минут, 1 час 40 минут и, в заключение, 1 час 57 минут в количествах 0,5 мг, 0,08 мг и, в заключение, 0,004 мг.
Пример 2. Анализ химических структур новых соединений
Сначала измеряют спектры водородного ядерного магнитного резонанса полученных из аликвот 116V и 116VI соединений 1-4, 9 и 10 для проверки их чистоты, и затем получают спектроскопические данные с использованием приборов, указанных далее. Масс-спектрометр (спектрометр JMS700 от Jeol Inc.) используют для измерения молекулярной массы соответствующих соединений, и затем используют спектрометр ядерного магнитного резонанса (спектрометр VNMRS 500 от Varian Inc.) для анализа их точных химических структур. Кроме того, используют спектрометр Cary50 (от Varian Inc.) и спектрометр FT_IR 4100 (от JACSO Inc.) для измерения ультрафиолетовых полос поглощения и инфракрасных полос поглощения молекул соединений, соответственно, и используют поляризатор Р1010 (JACSO Inc.) для измерения их углов поляризации.
Соединение 1 выделяют в форме масла бледно-оранжевого цвета, и данные высокоэффективной FAB-масс-спектроскопии ([M+H]+ m/z 399,2533) показывают, что соединение 1 имеет молекулярную формулу С25Н34О4. Из характеристических полос поглощения анализом инфракрасного спектра при 3433 см-1 и 1680 см-1 полагают, что соединение 1 содержит гидроксильную группу и карбонильную функциональную группу. Для определения структуры соединения используют С13 ЯМР и Н ЯМР.
Величины химических сдвигов для соединения 1 суммированы ниже в таблице 1.
Выполняют эксперимент ROESY для определения относительной стереоструктуры данного соединения. Из NOE между водородом (4,49 ч/млн) и водородом (2,59 ч/млн) определяют, что циклы А и В связаны в цис-конфигурации. Стереоконфигурацию цикла С можно определить согласно информации NOE между водородом (5,28 ч/млн) и водородом (5,54 ч/млн) и между водородом (5,28 м.д.) и водородом (2,43 ч/млн). Наконец, пространственную конфигурацию водорода у С-16 можно оценить из констант взаимодействия (11,3, 7,8, 3,4 Гц) между близкими атомами водорода, которая косвенно доказывается фактом, что водород Н-19 метила имеет соотношения NOE с Н-5 и Н-6.
Абсолютную стереохимическую структуру соединения 1 определяют анализом спектра кругового дихроизма (CD). Абсолютную стереоконфигурацию хиральных центров в циклогексиноне определяют согласно правилу секторов Snatzke. Когда хиральный центр С-7 в циклогексиноне цикла А имеет абсолютную (S) стереоконфигурацию, соединение 1 обнаруживает в спектре кругового дихроизма положительное поглощение в переходной области nπ* (330 нм-1~350 нм-1). Так как соединение 1 обнаруживает положительное поглощение при 330 нм-1~350 нм-1, абсолютную конфигурацию С-7 в соединении 1 определяют как (S)-стереоконфигурацию (фиг.2).
Химические структуры других пяти соединений определяют с использованием вышеуказанного способа. Данные углеродного ЯМР и данные водородного ЯМР соответствующих трех соединений приводятся ниже в таблицах 2-4, и физические и спектроскопические данные сведены в таблице 5.
| Таблица 5 | ||||||
| Соединение 1 | Соединение 2 | Соединение 3 | Соединение 4 | Соединение 9 | Соединение 10 | |
| Молекулярная формула | С25Н34О4 | С27Н36О5 | С27Н38О5 | С27Н38О5 | С25Н34О5 | С27Н34О5 |
| Молекулярная масса | 398 | 440 | 442 | 442 | 414 | 414 |
| Цвет | Бледно-оранжевый | Бледно-оранжевый | Бледно-желтый | Бледно-желтый | Бледно-желтый | Бледно- желтый |
| Инфракрасная полоса поглощения (см-1) |
3433, 2913, 1680, 1000 | 2920, 1743, 1681, 1225 | 3430, 2918, 1735, 1238 | 3387, 2914, 1673, 1000 | 3414, 2917, 1678 | 3413, 2925, 1678 |
| Ультрафиоле-товая полоса поглощения (нм) |
203, 230 | 203, 229 | 203 | 203 | 203, 227 | 204, 225 |
| Угол поляриза-ции[α]D 25° в МеОН |
-118, 1 (с 0,15) |
-63,9 (с 0,15) |
-102,3 (с 0,10) |
-148,7 (с 0,10) |
-78,7 (с 0,15) |
-57 (с 0,15) |
| Растворимость | Легко растворимы в органическом растворителе ацетоне, метаноле, ДМФА и т.д. | |||||
Пример 3. Синтез производного соединения 1 реакцией этерификации (получения сложного эфира)
Соединение 1 по настоящему изобретению растворяют в тетрагидрофуране, и затем температуру понижают до 0~5°С. К раствору последовательно добавляют диизопропилэтиламин и бутирилхлорид. Полученный материал перемешивают при 0~5°С в течение 1 часа и экстрагируют, добавляя этилацетат и воду, и затем слой органического растворителя отделяют и перегоняют. Оставшийся материал очищают колоночной флэш-хроматографией, и получают соединение 5.
Соединение 5 (С29Н41О5): [M+H]+ = 469,29.
Пример 4. Синтез производного соединения 1 реакцией азидного замещения
Соединение 1 по настоящему изобретению растворяют в метиленхлориде, и затем температуру понижают до 0~5°С. К раствору последовательно добавляют ди-трет-бутилметилпиридин и трифторметансульфоновый ангидрид. Полученный материал перемешивают в течение 30 минут и экстрагируют, добавляя метиленхлорид и воду. Слой органического растворителя отделяют и перегоняют, и весь растворитель выпаривают. Оставшийся материал снова растворяют в диметилформамиде, и к раствору добавляют азид натрия. Полученный материал перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов, разбавляют, добавляя метиленхлорид, и затем несколько раз промывают водой. Слой органического растворителя отделяют и перегоняют, и затем оставшийся материал очищают колоночной флэш-хроматографией, и получают соединение 6.
Соединение 6 (C25H34N3O3): [M+H]+ = 424,26.
Пример 5. Синтез простого эфирного производного соединения 1
Соединение 1 по настоящему изобретению и ди-трет-бутилметилпиридин растворяют в метиленхлориде, и затем к раствору добавляют метантрифторсульфонат. Полученный материал перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов, и затем растворитель выпаривают. Оставшийся материал очищают колоночной флэш-хроматографией и получают соединение 7.
Соединение 7 (С26Н37О4): [M+H]+ = 413,27.
Пример 6. Синтез карбонатного производного соединения 1
Соединение 1 по настоящему изобретению растворяют в метиленхлориде и затем температуру понижают до 0~5°С. К раствору последовательно добавляют пиридин и винилхлорформиат. Полученный материал перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, разбавляют метиленхлоридом и затем промывают водой. Слой органического растворителя отделяют и перегоняют, и затем оставшийся материал очищают колоночной флэш-хроматографией, и получают соединение 8.
Соединение 8 (С28Н37О6): [M+H]+ = 469,26.
Экспериментальный пример 1. Измерение активности новых соединений в отношении образования остеобластов (анализ с осаждением кальция)
Клетки C3H/10Т1/2, которые представляют собой мышиные мезенхимные клетки-предшественники, закупленные у АТСС, разводят в среде DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла), содержащей 5,958 г/л HEPES, 3,7 г/л бикарбоната натрия и 10% FBS (сыворотка плода коровы), и культивируют в 24-луночных культуральных планшетах при плотности 4×104 клеток/лунку в присутствии 5% СО2 при 37°С в течение 2 суток. Культивируемые клетки выращивают в культуральных планшетах до 90~100% слияния, клетки культивируют в среде DMEM, содержащей 10% FBS, к которой добавлены 10 мМ β-глицерофосфата и 50 мкг/мл аскорбиновой кислоты, в присутствии 5% СО2 при 37°С в течение 6 суток, для того чтобы вызывать дифференцировку в остеобласт. Во время дифференцировки среду заменяют через день. Клеточную линию C3H/10Т1/2, в которой индуцируют дифференцировку в остеобласт, промывают один раз PBS (забуференный фосфатом физиологический раствор) и фиксируют 70% этанолом при 20°С в течение 1 часа. После фиксации клетки промывают холодным PBS три раза и окрашивают 40 мМ раствором красителя ализаринового красного S при комнатной температуре в течение 20 минут. Раствор красителя удаляют, и клетки три раза промывают дистиллированной водой для того, чтобы селективно наблюдать только клетки, дифференцированные в остеобласт.
Аликвоту 116V и аликвоту 116VI, экстрагированные из губок и обработанные, растворяют в растворителе ДМСО и используют для обработки клеточной линии C3H/10Т1/2 мезенхимных клеток-предшественников в концентрациях 1, 2,5, 5, 10 и 20 мкг/мл. В результате показывают, что способность дифференцировки остеобластов заметно повышается в зависимости от концентрации, и отмечают слабую цитотоксичность при концентрации 20 мкг/мл. После этого такой же эксперимент выполняют с соединением 1 (1163), соединением 2 (1162), соединением 3 (1161) и соединением 4 (1164), которые выделяют в чистом виде из аликвот 116V и 116VI, и в результате можно утверждать, что способность дифференцировки остеобластов в соединениях 1, 3 и 4 возрастает. Концентрации, при которых проявляется максимальная активность, несколько различаются. Соединение 3 (116-1) показывает максимальную активность при 2,5 мкг/мл, и его цитотоксичность можно наблюдать при последующих концентрациях. Соединение 1 (116-3) показывает активность, значительно возрастающую при концентрациях до 10 мкг/мл в зависимости от концентрации, и цитотоксичность при концентрации 20 мкг/мл, подобно активности выделенной аликвоты 116V без очистки. Соединение 4 показывает максимальную активность при концентрации 5 мкг/мл, и его цитотоксичность наблюдают при последующих концентрациях (фиг.3). Для того чтобы исследовать механизм, касающийся способности дифференцировки остеобластов, клеточные линии C3H/10Т1/2 обрабатывают соединением 1 и соединением 4, соответственно, в течение 6 суток. Обнаружено, с использованием ПЦР (ОТ-ПЦР) в реальном времени, что степень транскрипции факторов признаков дифференцировки (Runx2, остеокальцина, Msx2 и т.д.) остеобласта заметно возрастает (фиг.4). Также клеточные линии C3H/10Т1/2 обрабатывают соединением 1 и соединением 4, соответственно, в течение 6 суток. Обнаружено, с использованием вестерн-блоттинга, что экспрессия белков Runx2 и TAZ возрастает (фиг. 5 и 6). Следовательно, можно принять за основу, что соединения по настоящему изобретению приводят к возрастанию количеств белков Runx2 и TAZ через регуляцию после транскрипции, и, таким образом, можно промотировать дифференцировку остеобласта. Более того, можно убедиться, что сумма белков Runx2 и TAZ возрастает за счет обработки соединениями, и, таким образом, активность Runx2-опосредуемой транскрипции возрастает. Соединение 5, которое представляет собой сложноэфирное производное соединения 1 (1163), синтезируют для того, чтобы получить материал с еще более превосходной биоактивностью, и определяют структуру соединения 5, полученного таким образом. Кроме того, в анализе с осаждением кальция на физиологическую активность (способность дифференцировки остеобластов) полученного соединения найдено, что соединение 5, которое является производным соединения 1, также промотирует дифференцировку остеобласта на уровне, схожем с уровнем соединения 1 (фиг.7). Поэтому ожидается, что соединения по настоящему изобретению и их производные промотируют дифференцировку остеобласта и, таким образом, играют передовую роль в лечении остеопороза.
Экспериментальный пример 2. Определение способности новых соединений ингибировать дифференцировку адипоцитов
Клетки C3H/10Т1/2, которые представляют собой мышиные мезенхимные клетки-предшественники, закупленные у АТСС, разводят в среде DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла), содержащей 5,958 г/л HEPES, 3,7 г/л бикарбоната натрия и 10% FBS (сыворотка плода коровы), и культивируют в 24-луночных культуральных планшетах при плотности 4×104 клеток/лунку в присутствии 5% СО2 при 37°С в течение 2 суток. Когда культивируемые клетки в культуральных планшетах вырастают до 90~100% слияния, клетки культивируют в среде DMEM, содержащей 10% FBS, к которой добавлены 5 мкг/мл инсулина, 1 мкМ дексаметазона и 5 мкМ троглитазона, в присутствии 5% СО2 при 37°С в течение 6 суток, для того, чтобы вызывать дифференцировку в адипоцит. Во время дифференцировки среду заменяют через день. Клеточную линию C3H/10Т1/2, в которой индуцируют дифференцировку в адипоцит, фиксируют 3,7% формальдегидом при комнатной температуре в течение 30 минут. Масляный раствор красного О, растворенного в изопропаноле в концентрации 0,5%, разбавляют в дистиллированной воде в соотношении 6:4, фильтруют через фильтр 0,2 мкм и добавляют к фиксированной клеточной линии, которую окрашивают в течение 1 часа. Для того чтобы наблюдать только клетки, дифференцированные в адипоцит, раствор красителя удаляют, и клетки два раза промывают дистиллированной водой.
Образец 116V, экстрагированный из губки, растворяют в растворителе ДМСО, и обрабатывают клеточные линии C3H/10Т1/2, которые представляют собой мышиные мезенхимные клетки-предшественники, в концентрациях 1, 2,5, 5, 10 и 20 мкг/мл. Результаты показывают, что способность дифференцировки адипоцитов заметно снижается в зависимости от концентрации. Затем получают образцы соединения 1 (1163), соединения 2 (1162), соединения 3 (1161) и соединения 4 (1164), которые выделяют в чистом виде из аликвот 116V и 116VI, и выполняют такой же эксперимент. Экспериментальные результаты показывают, что способность дифференцировки адипоцитов в значительной степени снижается при концентрации 10 мкг/мл. В частности, образец соединения 3 (116-1) показывает способность ингибировать дифференцировку адипоцитов даже при низкой концентрации (1 мкг/мл) при сравнении с другими видами. Заметной цитотоксичности во время дифференцировки адипоцитов не наблюдают ни в одном из образцов (фиг.8). В результате проверки эффективности соединения 1 на клетках 3Т3-L1 оказывается, что соединение 1 показывает великолепную ингибирующую способность в отношении дифференцировки адипоцитов даже на таких клетках (фиг.9).
Экспериментальный пример 3. Измерение антагонистической эффективности и селективности новых соединений в отношении Х-рецептора печени (LXR)
В исследовании трансфекции используют линию животных клеток CV-1. Клетки культивируют в среде DMEM в устройстве для культивирования клеток, содержащем 5% диоксида углерода, при 37°С. Среда содержит 10% FBS (сыворотка плода коровы), 100 Е/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. В день 1 эксперимента клетки CV-1 высевают в 96-луночные планшеты при плотности 5000 клеток/лунку. В день 2 высеянные клетки трансфицируют плазмидой, экспрессирующей GAL-hLXR, плазмидой, экспрессирующей ген люциферазы, и плазмидой, экспрессирующей β-галактозидазу, с использованием трансфицирующего реагента Superfect (QIAGEN). Через 16 часов трансфицированные клетки обрабатывают соединением 1, растворенным в диметилсульфоксиде (ДМСО), в различных концентрациях, вместе с агонистом ТО901317 (2,5 мкМ). Клетки, обработанные диметилсульфоксидом в конечной концентрации 1%, используют в качестве группы отрицательного контроля, и клетки, обработанные ТО901317 в конечной концентрации 500 нМ, используют в качестве группы положительного контроля. Клетки культивируют в течение 24 часов и лизируют с использованием буфера для лизиса. К клеткам добавляют люциферин для измерения люциферазной активности с использованием люминометра. После добавления реагента ONPG измеряют β-галактозидазную активность с использованием аппарата для прочтения планшетов ELISA. Измеренную величину люциферазной активности исправляют на величину активности β-галактозидазы. Результаты показывают, что соединение 1 имеет величины IC50 18,7 и 2,4 нМ в отношении LXRα и LXRβ, соответственно (фиг.10). Кроме того, с использованием такого же метода измеряют активности на различных ядерных рецепторах для того, чтобы измерить селективность в отношении различных ядерных рецепторов. Однако соединение 1 никогда не показывает активности в отношении других ядерных рецепторов (фиг.11). Также эксперимент Biacore доказывает, что соединение 1 непосредственно связывается с белком LXR (фиг.12).
Экспериментальный пример 4. Измерение цитотоксичности новых соединений
Используют клетки селезенки мыши в измерении цитотоксичности в анормальных клетках. Клетки селезенки мыши получают следующим образом. Селезенку 5~6-недельной мыши тонко крошат, и только флотирующие клетки селезенки фильтруют через ячеистый материал с порами размером 100 мкм. Эритроциты, смешанные с клетками селезенки, лизируют с использованием буфера для лизиса эритроцитов, и затем удаляют центрифугированием, осаждением и промывкой клеток. Полученные клетки селезенки высевают в 96-луночные планшеты в концентрации 5×105 клеток/лунку. В планшетах клетки селезенки обрабатывают соединением формулы 1 для измерения токсичности в соответствии с концентрациями. На следующий день клетки, культивированные в течение 16~18 часов, обрабатывают в анализе Titer-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega), и через 10 минут жизнеспособность клеток измеряют с использованием люминометра. Путем определения на клетках селезенки мыши величины IC50 63 мкМ показано, что соединение 1 имеет небольшую цитотоксичность в отношении здоровых клеток, которая больше в 1000 раз или более в сравнении с антагонистической концентрацией против LXR (фиг.13).
Экспериментальный пример 5. Проверка функции экспрессии генов новыми соединениями в клетках печени
Для того чтобы проверить эффективность разработанного антагониста Х-рецептора печени, идентифицируют функцию регуляции экспрессии генов в клетках печени мыши и клетках печени человека. В данном эксперименте используют клетки печени мыши AML 12 и клетки печени человека HepG2. Клетки AML12 культивируют в среде DMEM в инкубаторе для клеток с 5% диоксида углерода при 37°С. Среда содержит 10% сыворотки плода коровы (FBS), 100 Е/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. В день 1 эксперимента клетки AML12 высевают в 6-луночные планшеты. В день 2, когда клетки вырастают до 80% слияния, среду заменяют на среду DMEM, не содержащую сыворотку, и затем три лунки на группу обработки обрабатывают ТО901317 и разработанным антагонистом Х-рецептора печени. Клетки, обработанные диметилсульфоксидом в конечной концентрации 0,2%, используют в качестве группы отрицательного контроля, и клетки, обработанные ТО901317 в конечной концентрации 500 нМ, используют в качестве группы положительного контроля. Соединение 1, разработанное для раскрытия эффективности антагониста, используют одно в концентрации 1 мкМ или используют вместе с 500 нМ ТО901317. После инкубации в течение 18 часов все РНК клеток печени экстрагируют с использованием набора для экстракции РНК RNeasy (QIAGEN). Экстрагированные РНК определяют количественно, и 1 мкг экстрагированных РНК на каждый образец используют в синтезе кДНК. В синтезе кДНК используют набор для синтеза кДНК Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche). Осуществляют генетический анализ на синтезированных кДНК клеток печени с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени. Синтезированные для полимеразной цепной реакции в реальном времени кДНК смешивают с праймером, селективным для АСС1 или гена актина, и QuantiTech Master Mix (QIAGEN). Полимеразную цепную реакцию выполняют в 45 циклах 90°С в течение 10 секунд, 60°С в течение 15 секунд и 72°С в течение 20 секунд. Полимеразную цепную реакцию выполняют трижды для каждого образца кДНК. Для того чтобы сравнить экспрессированное количество каждого гена на группу обработки друг с другом, для каждого образца получают величины Ct с использованием программы анализа полимеразной цепной реакции в реальном времени. Величины Ct каждой группы обработки сравнивают с величинами Ct группы отрицательного контроля, и вычисляют различия в экспрессированном количестве генов. Различие в экспрессированном количестве гена, представляющего интерес, на каждую группу обработки корректируют различием в экспрессированном количестве гена GADPH. Экспериментальные результаты показывают, что соединение 1 весьма эффективно ингибирует экспрессию вызывающих жировую дистрофию печени генов биосинтеза жирных кислот SREBP1c, ACC и FAS (фиг.14).
Экспериментальный пример 6. Измерение эффективности ингибирования жировой дистрофии печени новых соединений на экспериментальных животных моделях
Для того чтобы проверить эффективность ингибирования жировой дистрофии печени соединения 1, разработанного в настоящем изобретении, в данном эксперименте используют мышей C57BL/6. Модель жировой дистрофии печени создают введением ТО901317, который вызывает жировую дистрофию печени, мышам C57BL/6 в возрасте 10 недель, причем в это время мышей кормят общей пищевой добавкой. Эффективность ингибирования жировой дистрофии печени соединения 1 наблюдают при пероральном введении указанного соединения. Мышиный корм с 0,75% только карбоксиметилцеллюлозы как средства для доставки лекарственного средства используют для группы отрицательного контроля, и мышиный корм только с ТО901317 используют для группы положительного контроля. Кроме того, для того чтобы проанализировать экспрессию генов печени мыши C57BL/6, печени мышей группы отрицательного контроля, группы положительного контроля и группы обработки экстрагируют и обрабатывают тризолом для получения РНК. Полученные РНК определяют количественно с использованием абсорбционного спектрометра (Nanodrop), и из РНК методом ОТ-ПЦР с использованием олиго-dT и обратной транскриптазы получают кДНК с тем же количеством соответствующих групп. Полимеразную цепную реакцию в реальном времени выполняют с использованием в качестве матриц кДНК, которые получают для анализа изменения мРНК в группах, и использованием праймеров генов-транспортеров, связанных с синтезом жира и поступлением жира в печень. Экспериментальные результаты показывают, что не имеется различий в массе тела в группе обработки и контрольных группах, когда соединение 1 вводят мышам с вызванной жировой дистрофией печени, и соединение 1 также проявляет превосходную эффективность ингибирования жировой дистрофии печени на экспериментальной животной модели (фиг. 15 и 16). Кроме того, результаты анализа экспрессии генов показывают, что соединение 1 весьма эффективно ингибирует экспрессию генов синтеза жирных кислот, которые вызывают жировую дистрофию печени, и генов-транспортеров, переносящих жиры в печень (фиг.17). Соответственно, ожидается, что соединения по настоящему изобретению и их производные играют весьма передовую роль при лечении алкогольной жировой дистрофии печени, неалкогольной жировой дистрофии печени и дистрофии печени вследствие вирусной инфекции.
Claims (13)
1. Соединение приведенной ниже формулы 1, или его фармацевтически приемлемая соль,
где W представляет собой СО или СНО(С=O)СН3;
Х представляет собой N3 или OR2;
R2 представляет собой водород, линейный или разветвленный алкил С1~С8 или
;
Y представляет собой О;
Z представляет собой простую связь или О;
R3 представляет собой линейный или разветвленный алкил С1~С8 или алкенил С2~С8; и
М и N представляют собой, каждый независимо, водород, ОН или отсутствуют; при этом атом углерода, связанный с М или N, образует простую связь или двойную связь с другими атомами углерода, и число двойных связей составляет одну или менее для каждого из атомов углерода.
где W представляет собой СО или СНО(С=O)СН3;
Х представляет собой N3 или OR2;
R2 представляет собой водород, линейный или разветвленный алкил С1~С8 или
Y представляет собой О;
Z представляет собой простую связь или О;
R3 представляет собой линейный или разветвленный алкил С1~С8 или алкенил С2~С8; и
М и N представляют собой, каждый независимо, водород, ОН или отсутствуют; при этом атом углерода, связанный с М или N, образует простую связь или двойную связь с другими атомами углерода, и число двойных связей составляет одну или менее для каждого из атомов углерода.
2. Соединение формулы 1 или его фармацевтически приемлемая соль по п.1,
при этом W представляет собой СО или СНО(С=O)СН3;
Х представляет собой OR2;
R2 представляет собой водород.
при этом W представляет собой СО или СНО(С=O)СН3;
Х представляет собой OR2;
R2 представляет собой водород.
3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1,
при этом W представляет собой СО;
Х представляет собой N3 или OR2;
R2 выбирают из линейного или разветвленного алкила С1~С8 или
;
Y представляет собой О;
Z представляет собой О или простую связь;
R3 представляет собой линейный или разветвленный алкил С1~С8 или алкенил С2~С8; и
М и N представляют собой, каждый независимо, водород, ОН или отсутствуют; при этом атом углерода, связанный с М или N, образует простую связь или двойную связь с другими атомами углерода, и число двойных связей составляет одну или менее для каждого из атомов углерода.
при этом W представляет собой СО;
Х представляет собой N3 или OR2;
R2 выбирают из линейного или разветвленного алкила С1~С8 или
Y представляет собой О;
Z представляет собой О или простую связь;
R3 представляет собой линейный или разветвленный алкил С1~С8 или алкенил С2~С8; и
М и N представляют собой, каждый независимо, водород, ОН или отсутствуют; при этом атом углерода, связанный с М или N, образует простую связь или двойную связь с другими атомами углерода, и число двойных связей составляет одну или менее для каждого из атомов углерода.
4. Соединение, его стереоизомер, или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, при этом соединение формулы 1 выбирают из группы, состоящей из
5. Способ получения соединения формулы 1, включающий
(a) нарезание и сушку губки Phorbas sp. с последующей экстракцией с использованием спирта С1~С4;
(b) обработку экстракта, полученного на стадии (а), с использованием воды и метиленхлорида и затем удаление растворителя из органического слоя с последующей обработкой с использованием н-гексана и смешанного растворителя из метанола и воды; и
(c) удаление растворителя из слоя метанольной аликвоты, полученной на стадии (b), и последующее получение аликвоты хроматографией с использованием диоксида кремния в качестве неподвижной фазы и с использованием метанольного раствора в качестве элюента, причем метанольный раствор содержит или не содержит 20 мас.% или менее воды относительно его общей массы, где соединения представляют собой
(a) нарезание и сушку губки Phorbas sp. с последующей экстракцией с использованием спирта С1~С4;
(b) обработку экстракта, полученного на стадии (а), с использованием воды и метиленхлорида и затем удаление растворителя из органического слоя с последующей обработкой с использованием н-гексана и смешанного растворителя из метанола и воды; и
(c) удаление растворителя из слоя метанольной аликвоты, полученной на стадии (b), и последующее получение аликвоты хроматографией с использованием диоксида кремния в качестве неподвижной фазы и с использованием метанольного раствора в качестве элюента, причем метанольный раствор содержит или не содержит 20 мас.% или менее воды относительно его общей массы, где соединения представляют собой
6. Способ по п.5, при этом на стадии (а) для сушки используют сушку вымораживанием и в качестве спирта С1~С4 используют метанол.
7. Способ по п.5, при этом на стадии (b) смешанный растворитель из метанола и воды содержит 60~90 мас.% метанола и 10~40 мас.% воды относительно общей массы растворителя.
8. Способ по п.5, при этом на стадии (с) выполняют хроматографию один раз или более в порядке от элюента, имеющего наивысшую полярность, до элюента, имеющего наименьшую полярность, путем использования в качестве элюента смешанного растворителя из воды и метанола с наивысшей полярностью перед использованием в качестве элюента метанольного раствора, содержащего или не содержащего 20 мас.% или менее воды от общей массы элюента.
9. Способ по п.5, также включающий (d) очистку аликвоты, полученной на стадии (с), при этом очистку выполняют высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), и в качестве элюента используют смесь 50~80 мас.% ацетонитрила (ACN) и 20~50 мас.% воды относительно общей массы элюента.
10. Фармацевтическая композиция для лечения остеопороза, включающая соединение формулы 1, или его фармацевтически приемлемую соль по п.1 в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
11. Фармацевтическая композиция для лечения жировой дистрофии печени, включающая соединение формулы 1, или его фармацевтически приемлемую соль по п.1 в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
12. Фармацевтическая композиция для лечения ожирения, включающая соединение формулы 1, или его фармацевтически приемлемую соль по п.1 в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
13. Фармацевтическая композиция для антагонизации Х-рецептора печени (LXR), включающая соединение формулы 1, или его фармацевтически приемлемую соль по п.1 в качестве фармацевтически приемлемого носителя и активного агента.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20080107821 | 2008-10-31 | ||
| KR10-2008-0107821 | 2008-10-31 | ||
| KR1020090104124A KR101149878B1 (ko) | 2008-10-31 | 2009-10-30 | 스파이로키랄 탄소 골격을 갖는 신규한 화합물, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 약제학적 조성물 |
| PCT/KR2009/006357 WO2010050783A2 (ko) | 2008-10-31 | 2009-10-30 | 스파이로키랄 탄소 골격을 갖는 신규한 화합물, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 약제학적 조성물 |
| KR10-2009-0104124 | 2009-10-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011121877A RU2011121877A (ru) | 2012-12-10 |
| RU2492173C2 true RU2492173C2 (ru) | 2013-09-10 |
Family
ID=42275585
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011121877/04A RU2492173C2 (ru) | 2008-10-31 | 2009-10-30 | Новые соединения со спирохиральной углеродной основой, способы их получения и фармацевтические композиции, содержащие такие соединения |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8703813B2 (ru) |
| EP (1) | EP2363400B1 (ru) |
| JP (1) | JP2012507509A (ru) |
| KR (1) | KR101149878B1 (ru) |
| CN (1) | CN102203099B (ru) |
| AU (1) | AU2009310544A1 (ru) |
| BR (1) | BRPI0920764A2 (ru) |
| CA (1) | CA2742364A1 (ru) |
| ES (1) | ES2423196T3 (ru) |
| RU (1) | RU2492173C2 (ru) |
| WO (1) | WO2010050783A2 (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130274212A1 (en) * | 2010-09-07 | 2013-10-17 | Snu R&Db Foundation | Sesterterpene Compounds and Use Thereof |
| KR101647507B1 (ko) | 2014-10-20 | 2016-08-10 | 건국대학교 글로컬산학협력단 | 정전용량 기반의 혈관삽입형 바이오센서를 이용한 심혈관 질환 진단 데이터 획득 시스템 및 방법 |
| CN104873499B (zh) * | 2015-06-11 | 2017-10-17 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 一种上调Runx2 转录活性的化合物在防治骨质疏松中的应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5328929A (en) * | 1993-07-02 | 1994-07-12 | Arizona Board Of Regents | Isolation and structure of spongistatin 2, spongistatin 3, spongistatin 4 and spongistatin 6 |
| JP3331028B2 (ja) * | 1993-11-16 | 2002-10-07 | 第一製薬株式会社 | スピロ化合物及びその製法 |
| WO2001036048A1 (en) * | 1999-11-15 | 2001-05-25 | Parker Hughes Institute | Phorboxazole derivatives for treating cancer |
| JP2005035895A (ja) * | 2003-07-15 | 2005-02-10 | Institute Of Physical & Chemical Research | 高カルシウム血症および骨疾患治療剤 |
| US7485631B2 (en) * | 2005-04-21 | 2009-02-03 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Phorboxazole compounds and methods of their preparation |
| JP3988833B2 (ja) * | 2006-12-01 | 2007-10-10 | 日東電工株式会社 | 新規セスキテルペン系化合物、その製造方法及び組成物 |
-
2009
- 2009-10-30 ES ES09823863T patent/ES2423196T3/es active Active
- 2009-10-30 CA CA2742364A patent/CA2742364A1/en not_active Abandoned
- 2009-10-30 EP EP09823863.7A patent/EP2363400B1/en not_active Not-in-force
- 2009-10-30 AU AU2009310544A patent/AU2009310544A1/en not_active Abandoned
- 2009-10-30 BR BRPI0920764A patent/BRPI0920764A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-10-30 WO PCT/KR2009/006357 patent/WO2010050783A2/ko not_active Ceased
- 2009-10-30 CN CN200980143890.9A patent/CN102203099B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-10-30 KR KR1020090104124A patent/KR101149878B1/ko active Active
- 2009-10-30 JP JP2011534397A patent/JP2012507509A/ja not_active Ceased
- 2009-10-30 US US13/126,979 patent/US8703813B2/en active Active
- 2009-10-30 RU RU2011121877/04A patent/RU2492173C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Алдошин С.М. // Успехи химии, т.59, №7, (1990), с.1144-1178. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2010050783A2 (ko) | 2010-05-06 |
| CA2742364A1 (en) | 2010-05-06 |
| AU2009310544A1 (en) | 2010-05-06 |
| RU2011121877A (ru) | 2012-12-10 |
| EP2363400A4 (en) | 2012-04-18 |
| BRPI0920764A2 (pt) | 2015-12-22 |
| KR20100048934A (ko) | 2010-05-11 |
| JP2012507509A (ja) | 2012-03-29 |
| EP2363400A2 (en) | 2011-09-07 |
| CN102203099B (zh) | 2014-03-12 |
| KR101149878B1 (ko) | 2012-05-24 |
| US20110218240A1 (en) | 2011-09-08 |
| WO2010050783A3 (ko) | 2010-09-10 |
| EP2363400B1 (en) | 2013-06-12 |
| CN102203099A (zh) | 2011-09-28 |
| ES2423196T3 (es) | 2013-09-18 |
| US8703813B2 (en) | 2014-04-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2019293163B2 (en) | Natural killer cells | |
| CN111484504B (zh) | Acc抑制剂的光学异构体及其应用 | |
| US20100267983A1 (en) | Water-soluble triterpenephenol compounds having antitumor activity and the preparation thereof | |
| RU2492173C2 (ru) | Новые соединения со спирохиральной углеродной основой, способы их получения и фармацевтические композиции, содержащие такие соединения | |
| CN111630047B (zh) | 含有羧酸基团的苯并氮杂环类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN109809971B (zh) | 多聚苄衍生物及其药物组合物与其制备方法和其应用 | |
| CN107056790B (zh) | (±)UncarilinsA和B及其药物组合物和应用 | |
| CN115475253B (zh) | 拉帕替尼-癌细胞干性抑制剂偶联物、制法、药物组合物和应用 | |
| CN108727403B (zh) | Nodosin衍生物及其制备方法和应用 | |
| JP2009051793A (ja) | 骨疾患治療剤 | |
| JP3740284B2 (ja) | 抗マラリア活性を有する新規化合物又はその塩 | |
| JP2017193528A (ja) | 脳卒中治療用のイリドイド配糖体類化合物、その医薬組成物及びその使用方法 | |
| US20250195542A1 (en) | Metabolic disease therapeutic agent or preventive agent | |
| TW201018462A (en) | Novel mixture and compounds from mycelia of antrodia camphorata having hepatoprotection, anti-inflammatory and anti-tumor activities | |
| JP5513754B2 (ja) | 新規化合物及び当該化合物を有効成分とする骨疾患の予防又は治療剤 | |
| CN110152009A (zh) | 一种多取代白藜芦醇自旋标记衍生物及其制备方法和应用 | |
| KR100569086B1 (ko) | 간세포 보호활성을 갖는 고로쇠 잎 추출물 및 이로부터분리된 페놀성 화합물 | |
| CN112047887B (zh) | 一种宽筋藤酰胺及其制备方法与应用 | |
| CN111943914B (zh) | 一种具有抗炎活性的化合物及其应用 | |
| CN100582110C (zh) | 环己酮类饱和三环（桥环）化合物及其制备方法与用途 | |
| JP4003369B2 (ja) | 抗癌剤 | |
| TWI326284B (en) | Derivatives of tiacumicin b as anti-cancer agents | |
| CN120842066A (zh) | 迁移型松香烷型二萜化合物及其制备方法和应用 | |
| KR101213657B1 (ko) | 할리콘드리아로부터 추출된 할리실린드라마이드 및 이를유효성분으로 함유하는 고지혈증 치료제 | |
| CN120329294A (zh) | 育亨宾类生物碱及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20141031 |