[go: up one dir, main page]

RU2486197C2 - Изобретение, относящееся к glp-1 и эксендинам - Google Patents

Изобретение, относящееся к glp-1 и эксендинам Download PDF

Info

Publication number
RU2486197C2
RU2486197C2 RU2010148446/10A RU2010148446A RU2486197C2 RU 2486197 C2 RU2486197 C2 RU 2486197C2 RU 2010148446/10 A RU2010148446/10 A RU 2010148446/10A RU 2010148446 A RU2010148446 A RU 2010148446A RU 2486197 C2 RU2486197 C2 RU 2486197C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
glp
derivative
exendin
peptide according
expression
Prior art date
Application number
RU2010148446/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2010148446A (ru
Inventor
Мартин ГОТТХАРДТ
Мартин БЭЭ
Томас Бер
Буркхард Й. ГЕКЕ
Original Assignee
Филиппс-Универзитет Марбург
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Филиппс-Универзитет Марбург filed Critical Филиппс-Универзитет Марбург
Publication of RU2010148446A publication Critical patent/RU2010148446A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2486197C2 publication Critical patent/RU2486197C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/57563—Vasoactive intestinal peptide [VIP]; Related peptides
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложены пептиды, являющиеся производными от GLP-1, которые связываются с GLP-1-рецепторами и могут быть использованы либо мечеными, либо немечеными для получения средства для диагностики и терапии доброкачественных и злокачественных заболеваний, в которых играет роль экспрессия рецепторов GLP-1. 7 н. и 16 з.п. ф-лы, 4 табл.

Description

В топической диагностике гастроэнтеропанкреатических нейроэндокринных опухолей в качестве важного диагностического метода наряду с ультразвуком используют сцинциграфию рецепторов соматостатина (SRS). Используемый принцип состоит в специфическом отображении опухолей с помощью радиоактивно меченых пептидов, которые захватываются опухолевыми клетками. Таким образом с помощью гамма-камеры можно наглядно обнаруживать повышение радиоактивности в опухолевой ткани. Если тип опухоли обладает рецепторами, требующими SRS, например аналог соматостатина октреотид®, определение указанных опухолей возможно без проблем. Однако если соответствующие рецепторы не экспрессируются, они не поддаются сцинциграфическому определению. Но наряду с топикальной диагностикой радиоактивно меченые пептиды также дают возможность подхода к лечению опухолей, при котором путем мечения аналога соматостатина, например октреотида®, подходящим радионуклидом (α- или β-лучами) можно производить специфическую направленную на рецепторы радиопептидную терапию. Так как соответствующие радионуклиды химически связаны с пептидом таким образом (например, путем комплексообразования с ранее связанным с пептидом хелатирующим агентом), что хотя опухолевые клетки их поглощают, но не могут их больше выбрасывать, происходит высокое специфическое обогащение их в опухолевой ткани.
Конечно, целый ряд нейроэндокринных опухолей (NET), в том числе инсулинома и мелкоклеточный бронхогенный рак, не экспрессируют требуемых подтипов рецепторов соматостатина, которые необходимы для SRS или радиопептидной терапии с аналогом соматостатина октреотидом®. В частности, инсулинома в значительном проценте не поддается сцинциграфической диагностике. Также при мелкоклеточном бронхогенном раке SRS не представляет собой подходящего способа, так как хотя первичные опухоли часто могут быть отображены, однако метастазы нет, поскольку утрачивается экспрессия рецепторов. Таким образом, также недоступна радиотерапия, которая представляет собой интересный дополнительный или альтернативный способ лечения. Отсюда возникает потребность в подходящем пептиде, который поглощался бы указанными опухолями.
Гормон внутренней секреции глюкагонподобный пептид-1 (GLP-1), а также его аналоги эксендин-3 и эксендин-4 (из слюны ящериц (Heloderma horridum и Heloderma suspectum)) представляют собой пептиды, для которых инсулинома и мелкоклеточный бронхогенный рак, наряду с многими другими видами опухолей, экспрессируют рецепторы. Инсулинома происходит от продуцирующих инсулин β-клеток островков Лангеранса поджелудочной железы, в котором GLP-1, а также эксендин-3 и эксендин-4 инициируют возникающую после приема пищи секрецию инсулина.
Состояние техники
Для применения глюкагонподобных пептидов (GLP-1) в сцинциграфии требуется мечение пептидов. Способы мечения белков радионуклидами известны специалисту и представлены в многочисленных патентных описаниях (например, DE 69018226 T2) и научных работах. При этом описанные пептиды для использования в диагностических изображениях и для опосредования терапевтически активных молекул в патологических тканях, как правило, содержат у N-конца введенный в пептид амин. Пептиды при этом должны быть дополнительно модифицированы в смысле стабильности.
Например, использованный в патенте US 2003/0232761 A1 GLP-1 и его производное GLP-1(7-37) модифицированы у N-конца амином. Таким образом, N-конец GLP-1 более не может быть использован в связывании с GLP-1-рецепторами, так что с указанными пептидами возможно только неудовлетворительное связывание и внутренние (взаимодействия) с рецепторами, указанные пептиды таким образом не подходят для применения в радиопептидной терапии инсулиномы и мелкоклеточного бронхогенного рака. Мутация, например замена аминокислоты внутри пептидной последовательности GLP-1 и эксендина-3 или эксендина-4 и их возможных модификаций под действием лекарственного препарата или подающей сигнал молекулы, на основе опытов приводит в основном к тому, что структура пептида разрушается таким образом, что становится невозможным связывание с рецепторами.
Дополнительный метод модифицирования GLP-1 без воздействия на N-конец до настоящего времени не известен. Сверх того не известны меченые или немеченые производные GLP-1 для использования при радиотерапии инсулиномы и мелкоклеточного бронхогенного рака.
Задача предлагаемого изобретения состоит в том, чтобы устранить недостаток современного уровня техники и получить пептиды, которые могут быть мечеными, и также с указанным мечением могут связываться с GLP-1-рецепторами и могут вводиться для получения средства для диагностики и терапии заболеваний, при которых играет роль экспрессия рецепторов GLP-1.
Указанную задачу предложено решить путем получения производных пептидов GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4, которые модифицированы амином у С-конца, а N-концом связываются с GLP-1-рецепторами, а также химерных пептидов из GLP-1 с эксендином-3 или эксендином-4. Указанные пептиды, а также химерные пептиды, меченые или немеченые, используют для получения средства для диагностики и терапии доброкачественных и злокачественных заболеваний, при которых играет роль экспрессия GLP-1-рецепторов.
С помощью указанных производных пептидов GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4, а также химерных пептидов из GLP-1, эксендина-3 или экзендина-4 осуществляют получение средства для сцинциграфического применения, которое используют для диагностики и терапии опухолей, экспрессирующих GLP-1-рецепторы, в том числе NET (в частности, инсулиномы) и мелкоклеточного бронхогенного рака. Прежде всего, это возможно, так как предложенные производные пептидов модифицированы амином у С-конца и таким образом N-конец остается в распоряжении для связывания с GLP-1-рецепторами.
Благодаря связыванию предложенных, например, радиоактивно меченых производных пептидов и химерных пептидов GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4 с GLP-1-рецепторами, возможно отображение опухолей, экспрессирующих GLP-1-рецепторы и вместе с тем значительное улучшение помощи пациенту. В первую очередь это (касается) гастроэнтеропанкреатических NET, таких как инсулинома, для которых в настоящее время не существует неинвазивных способов с достаточной чувствительностью, или мелкоклеточного бронхогенного рака, локализованного в области легких, при котором в настоящее время невозможно дифференцирование между воспалительными процессами и опухолями или метастазами, и также невозможны неинвазивные способы (лечения).
Далее посредством предложенных производных пептидов и химерных пептидов отображают плотность продуцирующих инсулин клеток в поджелудочной железе, а также экспрессию GLP-1-рецепторов in vivo и in vitro. Так, например, при отображении клеток, экспрессирующих GLP-1-рецепторы, при сахарном диабете отображение (происходит) in vivo, так как это клетки, которые также выделяют инсулин. Отображение плотности GLP-1-рецепторов в поджелудочной железе особенно важно для пациентов с сахарным диабетом во время и после терапии лекарственными препаратами. Дополнительно отображают распределение GLP-1-рецепторов в злокачественных и доброкачественных тканях. Постановки вопросов носят здесь как клинический, так и научный характер, так как еще не дают всеохватывающих данных in vivo для распределения GLP-1-рецепторов у человека.
Изобретение также имеет то преимущество, что производные пептидов GLP-1 (глюкагонподобного пептида-1), эксендина-3 и эксендина-4, а также химерных пептидов из GLP-1, эксендина-3 или эксендина-4 использовали для получения средства, в частности для направленного на рецепторы специфического отображения и терапии, в частности NET, особенно инсулиномы и мелкоклеточного бронхогенного рака.
В частности, при диагностике мелкоклеточного бронхогенного рака применима сцинциграфия GLP-1-рецепторов и, возможно в первую очередь, специфическое определение пораженных метастазами лимфатических узлов (воспалительно измененных лифатических узлов или пораженных лимфатических узлов).
Дополнительно возможно применение предложенных производных пептидов GLP-1 (глюкагонподобного пептида-1), эксендина-3 и эксендина-4, а также химерных пептидов из GLP-1, эксендина-3 или эксендина-4 в качестве средств для диагностики и терапии всех доброкачественных и злокачественных заболеваний, при которых играет роль экспрессия рецепторов GLP-1, в частности, в качестве контрастных средств для магниторезонансной томографии (MRT), в качестве радиоактивного средства для сцинциграфии (SPECT, компьютерной томографии единичных фотонов) или радиопептидотерапии, в РЕТ (позитронно-эмиссионной томографии), в опосредованной рецепторами химиотерапии и в оптической диагностике. Причем под оптической диагностикой понимают возбуждение флуоресцирующей молекулы волной определенной длины, которая вызывает последующую эмиссию света других длин волн. При этом определяют испускаемые длины волн.
Специалист легко может выбрать вид мечения у С-конца производных пептидов GLP-1 (глюкагонподобного пептида-1), эксендина-3 и эксендина-4, а также химерных пептидов из GLP-1, эксендина-3 или эксендина-4 в зависимости от желаемого применения, которое состоит, например, (в использовании) для сцинциграфии или радиотерапии по радиоактивным нуклидам, для контрастных средств в магниторезонансной томографии (MRT), например по гадолинию, для эндоскопического или научного изучения по флуоресцирующим красителям.
Под злокачественными заболеваниями предложено понимать злокачественные заболевания, при которых наблюдаются изменения соответствующих тканей, отличающие их от здоровых тканей, проявляется инвазивный рост или ткани разрываются на кровяное или лимфатическое русло. Сюда относятся все нейроэндокринные опухоли, в частности, желудочно-кишечного тракта, бронхогенный рак, рак поджелудочной железы и другие злокачественные заболевания, которые связаны со сверхэкспрессией GLP-1-рецепторов.
Под доброкачественными заболеваниями предложено понимать доброкачественные заболевания, которые отличаются тем, что соответствующие ткани не теряют своей степени дифференцировки, не проявляют инвазивного роста и не образуют метастазирования тканей в лимфатическое или кровяное русло. Сюда относятся, например, сахарный диабет, а также нарушения аппетита (Essverhaltens) или психические (расстройства).
Характеристика производных пептидов и химерных пептидов
Неожиданно было обнаружено, что производные пептидов GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4, а также химерные пептиды из GLP-1, эксендина-3 или эксендина-4, которые модифицированы амином у С-конца, связываются через N-конец с GLP-1-рецепторами. Они даже проявляют подобно природному пептиду очень высокое сродство к GLP-1-рецепторам. Эксперименты с имеющими опухоли голыми мышами показывают специфический захват опухолевой тканью, позитивной по GLP-1-рецепторам.
Предложенные производные пептидов, а также химерные пептиды, немеченые или через хелатирующий агент меченые у С-концевого амина, вводили в качестве средства для диагностики и терапии доброкачественных и злокачественных заболеваний, при которых играет роль экспрессия рецепторов GLP-1. Вид мечения заключался при этом, в частности, (во введении) радиоактивного металла, MRT-контрастного средства, флуоресцирующего хромофора или химиотерапевтического средства.
Процесс и способы мечения известны специалисту (например, патент DE 69018226 T2) и оно осуществляется, например, путем взаимодействия с радионуклидами немагнитных металлов и другими MRT-контрастными средствами или флуоресцирующими красителями таким образом, чтобы не мешать связыванию с рецепторами или интернализации предложенных производных пептидов, а также химерных пептидов и чтобы связывающие GLP-1-рецепторы N-концы оставались свободными.
Аминокислотные последовательности исходных пептидов:
GLP-1:
Figure 00000001
Эксендин-3:
Figure 00000002
Эксендин-4:
Figure 00000003
Предложены следующие полученные производные пептидов GLP-1 (1-37), эксендина-3 и эксендина-4
GLP-1(x-y)A 1-37
Эксендин-3(z-k)A 1-40
Эксендин-4(z-k)A 1-40
Причем означают:
х=аминокислоты 1-36 аминокислотной последовательности GLP-1
y=аминокислоты 2-37 аминокислотной последовательности GLP-1
z=аминокислоты 1-38 аминокислотной последовательности эксендина-3 или эксендина-4
k=аминокислоты 2-39 аминокислотной последовательности эксендина-3 или эксендина-4
А=присоединенная группа, состоящая из одной или более аминокислот или их производных в качестве сигнальной молекулы как таковой или для связывания сигнальных молекул или для стабилизации. (Группа) А предпочтительно локализована у С-конца и представляет собой, например, амин, предпочтительно лизин или в качестве альтернативы другую аминокислоту со свободной аминогруппой, такую как, например, орнитин, или органическую группу со свободной аминогруппой, с которыми может взаимодействовать хелатирующий агент для мечения радионуклидами или MRT-контрастным средством, флуоресцирующим красителем или химиотерапевтическим средством. Хелатирующие агенты представляют собой, например, DTPA (диэтилентриаминопентауксусную кислоту, применяемый в качестве альтернативы N,N-бис(2-[бис(карбоксиметил)амино]этил)глицин), в качестве альтернативы DOTA (1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусную кислоту), HYNIC (6-гидразинопиридин-3-карбоновую кислоту), MAG3 (меркаптоацетилглицилглицилглицин), N4 (1,4,8,11-тетраазаундекан) и известные производные всех названных хелатирующих агентов.
Верхний индекс указывает, в каком месте аминокислотной последовательности могут альтернативно находиться присоединенные группы.
GLP-1(x-y)A1-37
при этом охватывают производные GLP-1 различной длины, в которых x представляет собой число от 1 до 36, но меньше y, который может означать число от 2 до 37. А представляет собой присоединенную группу, которая стоит в любом месте, но предпочтительно у С-конца и у более высокого (положения), чем y. Присоединенная группа предпочтительно представляет собой амин лизин.
Эксендин-3(z-k)A1-40
при этом охватывают производные эксендина-3 различной длины, в которых z представляет собой число от 1 до 38, но меньше k, которое может означать число от 2 до 39. А представляет собой присоединенную группу, которая стоит в любом месте, но предпочтительно у С-конца и у более высокого (положения), чем y. Присоединенная группа предпочтительно представляет собой амин лизин.
Эксендин-4(z-k)A1-40
при этом охватывают производные эксендина-4 различной длины, в которых z представляет собой число от 1 до 38, но меньше k, которое может означать число от 2 до 39. А представляет собой присоединенную группу, которая стоит в любом месте, но предпочтительно у С-конца и у более высокого (положения), чем y. Присоединенная группа предпочтительно представляет собой амин лизин.
В частности, предпочтительны производные пептидов:
1. MC 10: (DTPA-Lys37)GLP-1(7-36)амид
2. MC 13: (DTPA-Lys40)эксендин-3 амид
3. MC 11: (DTPA-Lys40)эксендин-4 амид
Синтез осуществляли, например, через фирму Peptide Specialty Laboratories GnbH по способу Merrifield и очищали ВЭЖХ.
MC 10 (DTPA-Lys37)GLP1(7-36)амид состоит из аминокислот 7-36 GLP-1 и содержит у С-конца в качестве аминокислоты со свободной аминогруппой предпочтительно лизин в положении 37, а также хелатирующий агент DTPA.
МС 13 (DTPA-Lys40)эксендин-3 амид состоит из общей аминокислотной последовательности эксендина-3 и содержит у С-конца в качестве аминокислоты со свободной аминогруппой предпочтительно лизин в положении 40, а также хелатирующий агент DTPA.
МС 11 (DTPA-Lys40)эксендин-4 амид состоит из общей аминокислотной последовательности эксендина-4 и содержит у С-конца в качестве аминокислоты со свободной аминогруппой предпочтительно лизин в положении 39, а также хелатирующий агент DTPA.
Согласно изобретению были получены следующие химерные пептиды из GLP-1(1-37) и эксендина-3 или эксендина-4.
GLP-1(x-y)эксендин-3(z-k)A 1-75
GLP-1(x-y)эксендин-4(z-k)A 1-75
Эксендин-3(z-k)GLP-1(x-y)A 1-75
Эксендин-4(z-k)GLP-1(x-y)A 1-75
Причем (буквы) означают:
х=аминокислоты 1-36 аминокислотной последовательности GLP-1
y=аминокислоты 2-37 аминокислотной последовательности GLP-1
z=аминокислоты 1-38 аминокислотной последовательности эксендина-3 или эксендина-4
k=аминокислоты аминокислотной последовательности 2-39 эксендина-3 или эксендина-4
А=присоединенная группа, состоящая из одной или более аминокислот или их производных в качестве сигнальной молекулы как таковой, или для связывания или стабилизации. (Группа) А предпочтительно локализована у С-конца и предпочтительно представляет собой, например, лизин или, в качестве альтернативы, другую аминокислоту со свободной аминогруппой, такую как, например, орнитин, или органическую группу со свободной аминогруппой, к которой присоединяется хелатирующий агент для мечения радионуклидами или MRT-контрастным средством, флуоресцирующим красителем или химиотерапевтическим средством. Хелатирующий агент представляет собой, например, DTPA (диэтилентриаминопентауксусную кислоту, в качестве альтернативы N,N-бис(2-[бис(карбоксиметил)амино]этил)глицин), в качестве альтернативы DOTA (1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусную кислоту, NYNIC (6-гидразинопиридин-3-карбоновую кислоту, MAG3 (меркаптоацетилглицилглицилглицин), N4 (1,4,8,11-тетраазаундекан) и известные производные всех названных хелатирующих агентов.
Верхний индекс означает, у какого положения аминокислотной последовательности альтернативно может находиться присоединенная группа.
GLP-1(x-y)эксендин-3(z-k)A 1-75
при этом охватывает химерные пептиды из GLP-1 и эксендина-3, в которых аминокислоты с 1 по 36 происходят от GLP-1 и последующие аминокислоты с 1 по 39 от эксендина-3. (Группа) А представляет собой присоединенную группу, которая стоит в любом месте, но предпочтительно у С-конца, и в большинстве случаев является аминокислотой из GLP-1 и эксендина-3, предпочтительно амином лизином.
GLP-1(x-y)эксендин-4(z-k)A 1-75
при этом охватывает химерные пептиды из GLP-1 и эксендина-4, в которых аминокислоты с 1 по 36 происходят от GLP-1 и последующие аминокислоты с 1 по 39 от эксендина-4. (Группа) А представляет собой присоединенную группу, которая стоит в любом месте, но предпочтительно у С-конца, и в большинстве случаев является аминокислотой из GLP-1 и эксендина-4, предпочтительно амином лизином.
Эксендин-3(z-k)GLP-1(x-y)A 1-75
при этом охватывает химерные пептиды из эксендина-3 и GLP-1, причем z может означать числа от 1 до 38, но меньше k, которое может означать число от 2 до 39. (Группа) А представляет собой присоединенную группу, которая стоит в любом месте, но предпочтительно у С-конца, и в большинстве случаев выше y. Присоединенная группа предпочтительно представляет собой амин лизин.
Эксендин-4(z-k)GLP-1(x-y)A 1-75
при этом охватывает химерные пептиды из эксендина-4 и GLP-1, причем z может означать числа от 1 до 38, но меньше k, которое может означать число от 2 до 39. (Группа) А представляет собой присоединенную группу, которая стоит в любом месте, но предпочтительно у С-конца, и в большинстве случаев выше y. Присоединенная группа предпочтительно представляет собой амин лизин.
Например, химерный пептид GLP-1(x-y)эксендин-3(z-k)A1-75 или GLP-1(х-y)эксендин-4(z-k)A1-75 представляет собой пептид МС12, состоящий из GLP-1(7-36)эксендин(33-39)Lys-амида (синтез на фирме Specialty Laboratories GmbH по способу Merrifield и очистка ВЭЖХ).
МС12: (Ser37, Gly38, Ala39, Pro40, Pro41, Pro42, Ser43, DTPA-Lys44-амид) GLP1(7-36)
МС12 состоит из всей аминокислотной последовательности GLP-1(7-36) и у С-конца содержит амин, предпочтительно лизин, в положении 44, а также хелатирующий агент DTPA, а также дополнительную цепь из 7 аминокислот от эксендина(33-39)Lys- амида. Этим представлен химерный пептид GLP-1(7-36)эксендин(33-39)Lys-амид.
Специалисту очевидно, что при этом (могут быть) представлены производные пептидов из GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4, а также химерные пептиды различной длины из GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4, в основе которых лежат различные комбинации аминокислотных последовательностей из GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4.
Предложенные производные пептидов GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4, а также химерные пептиды из GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4, которые модифицированы амином у С-конца, а N-концом могут связываться с GLP-1-рецептором, включают в себя также молекулы, аминокислотные последовательности которых отличаются от описанных пептидов GLP-1, эксендина-3 и эксендина-4 по одному или нескольким положениям и имеют более высокую степень гомологии указанных последовательностей. Гомология означает при этом идентичность последовательностей по меньшей мере на 40%, в частности идентичность по меньшей мере на 60%, предпочтительно на 80% и особенно предпочтительно на 90%. Отклонения от вышеописанных аминокислотных последовательностей при этом могут возникнуть в результате удаления, замещения и/или внедрения.
Сверх того были получены предложенные химерные пептиды из GLP-1, эксендина-3 или эксендина-4 также без модифицирования С-конца и при этом найдено их применение, особенно при получении средства для терапии диабета.
GLP-1(x-y)эксендин-3(z-k)
GLP-1(x-y)эксендин-4(z-k)
Эксендин-3(z-k)GLP-1(x-y)
Эксендин-4(z-k)GLP-1(x-y)
MC20:(Ser33, Gly34, Ala35, Pro36, Pro37, Pro38, Ser39) эксендин GLP-1(7-36)
МС20 состоит из всей аминокислотной последовательности GLP-1(7-36) и содержит у С-конца цепь из 7 аминокислот эксендина (33-39). При этом представлен немодифицированный химерный пептид GLP-1(7-36)эксендин(33-39).
Мечение производных пептидов и химерных пептидов
Предложенные производные пептидов и химерные пептиды для получения средства для диагностики и терапии доброкачественных и злокачественных заболеваний, при которых играет роль экспрессия рецепторов GLP-1, растворяли в подходящем стабилизирующем буферном растворе, например, для стабилизации металла, предпочтительно в 0,5 М ацетате натрия, рН 5,4, в концентрации около 10-3 М. В качестве альтернативы для стабилизации флуоресцирующих красителей предпочтителен буферный раствор из ацетата аммония, для стабилизации химиотерапевтических средств и контрастных средств - физиологический буферный раствор.
Мечение осуществляют взаимодействием присоединенной группы А с радионуклидами, контрастными средствами MRT, флуоресцирующими красителями или химиотерапевтическими средствами. При этом для каждого вида применения in vitro или in vivo используют различные варианты.
В качестве радионуклидов для ковалентного или комплексного связывания использовали:
Нуклид Способ применения t1/2[ч] Испускаемые лучи Энергия [keV] Вид связывания
F-18 PET 1,8 β+ 634 Ковалентное
Cu-64 PET 12,7 β+ 1673 Комплексное
Cu-67 Терапия 61,8 β- 391 Комплексное
γ 184
Ga-67 SPECT 79,2 γ 93/184/300 Комплексное
Ga-68 PET 1,1 β+ 2921 Комплексное
Y-86 PET 14,8 β+ 1220 Комплексное
γ 1076/1153
Y-90 Терапия 64,1 β- 2280 Комплексное
To-99m SPECT 6 γ 140 Комплексное
In-111 SPECT 67,2 γ 171/245 Комплексное
I-123 SPECT 13,2 γ 158 Ковалентное
I-124 PET 101 β+ 2137/1534 Ковалентное
γ 602
I-131 Терапия 192 γ 364 Ковалентное
β- 606
Lu-177 Терапия 158 γ 208 Комплексное
β- 112/208
Re-186 Терапия 88,8 γ 137 Комплексное
β- 1071
Re-188 Терапия 17 γ 155/477/632 Комплексное
β- 1965/2120
Pt-193m Терапия 104 γ 135 Комплексное
оже-е-
Pt-195m Терапия 96 γ 98 Комплексное
оже-е-
Ас-225 Терапия 240 γ 99, 150 Комплексное
α
At-211 Терапия 7,2 γ 687 Комплексное
оже-е- Ковалентное
Bi-213 Терапия 0,76   440 Комплексное
α
Sm-153 Терапия 46 γ 103 Комплексное
β-
Er-169 Терапия 226 β- 100 Комплексное
РЕТ (позитронная эмиссионная томография), SPECT (компьютерная томография единичных протонов).
В качестве флуоресцирующего красителя/хромофора использовали, например флуоресцеин, родамин, кумарин, пирен (каскадный синий (cascadblau)), люцифер желтый (lucifergelb), фикобилипротеин (phycobiliprotein), цианин, алексафтор (alexafluoro), орегон зеленый (oregongruen), тексафирин красный (texasrot), кумарин и их производные.
Хелатирующими агентами являются, например, DTPA (диэтилентриаминпентауксусная кислота, N,N-бис(2-[бис(карбоксиметил)амино]этил)глицин), DOTA (1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусная кислота), HYNIC (6-гидразинопиридин-3-карбоновая кислота), MAG3 (меркаптоацетилглицилглицилглицин), N4 (1,4,8,11-тетраазаундекан) или производные всех указанных хелатирующих агентов.
Контрастными средствами MRT являются, например, гадолиний, марганец, европий, медь, никель, хром, празеодим, диспрозий или гольмий или их соединения, а также отрицательные MRT-контрастные средства, такие как, например, перфторуглероды, а также, например, изотопы для MRT-спектроскопии, такие как F-19, H-1, P-31, Na-19.
Отрицательные MRT-контрастные средства представляют собой котрастные средства, которые гасят или сильно ослабляют, но не усиливают сигналы MRT.
Химиотерапевтические средства представляют собой, в частности, аддукторы алкила (Alkylanzien), интеркаляторы, антиметаболиты, ингибиторы ферментов и митотические яды (например, алкилсульфонаты, производные этилиминонитрозомочевины, утратившие азот, аналоги фолиевой кислоты, аналоги пурина, аналоги пиримидина, аналоги подофиллина, таксаны, алкалоиды барвинка, антрациклины, прочие цитостатические антибиотики, соединения платины, производные камптотецина, различные гормоны, факторы роста, интерфероны или интерлейкины), кроме того химиотерапевтические средства, описанные в “Onkologie 2004/05” авторами Preiss, Dornhoff, Hagmann, Schmieder в Zuckschwerdtverlag на стр. 230-267, а также другие цитостатически или цитотоксично действующие вещества.
В зависимости от рода применения предложенных производных белков и химерных белков и от полученных из них средств для диагностики и терапии доброкачественных и злокачественных заболеваний, при которых играет роль экспрессия рецепторов GLP-1, реакцию мечения проводили в двух вариантах.
Мечение для применения in vitro в радиотерапии
3 мкл раствора предложенного производного пептида или химерного пептида в подходящем стабилизирующем буфере, предпочтительно 0,5 М ацетате натрия, рН 5,4, с концентрацией около 10-3 М для мечения прибавляли к 500 мкл 0,5 М ацетата натрия, рН 5,4. При этом рН находился при 3-6. Туда же прибавляли 185 MBq 111InCl3 (Tyco, Petten, Нидерланды) в 500 мл 0,1 М HCl и инкубировали в течение 30 минут при 37°С. Для насыщения всех участков связывания снова прибавляли 3 мкл раствора natInCl3 и инкубировали еще в течение 30 минут.
Контроль качества проводили ВЭЖХ на колонке.
Колонка: СС 250/4,6 Nucleosil 120-5 C18(Machery-Nagel, Oenisingen, Швейцария)
Градиент: 0→5 мин 100% 0,05М NH4OOCCH3, рН 5,4 (буферный раствор А); 5→25 мин 100% буферный раствор А→50% буферного раствора А/50% ацетонитрила.
Контроль качества для применения in vitro выполняли при выходе мечения более 98%.
Таким образом получали в распоряжение радиоактивное меченое средство для диагностики и терапии доброкачественных и злокачественных заболеваний, при которых играет роль экспрессия рецепторов GLP-1, такое как, например, вводимое в клеточные и тканевые культуры поджелудочной железы.
Мечение для применения in vivo при радиотерапии
3 мкл раствора предложенного производного пептида или химерного пептида в подходящем стабилизирующем буфере, предпочтительно 0,5 М ацетате натрия, рН 5,4, с концентрацией около 10-3 М для мечения прибавляли к 500 мкл 0,5 М ацетата натрия, рН 5,4. По окончании туда же прибавляли 185 MBq 111InCl3 (Tyco, Petten, Нидерланды) в 500 мл 0,1 М HCl и инкубировали в течение 30 минут при 37°С. Контроль качества проводили ВЭЖХ на колонке.
Колонка: СС 250/4,6 Nucleosil 120-5 C18(Machery-Nagel, Oenisingen, Швейцария)
Градиент: 0→5 мин 100% 0,05М NH4OOCCH3, рН 5,4 (буферный раствор А); 5→25 мин 100% буферный раствор А→50% буферного раствора А/50% ацетонитрила.
Контроль качества для применения in vivo выполняли при выходе мечения более 98%.
Таким образом получали радиоактивное меченое средство для диагностики и терапии доброкачественных и злокачественных заболеваний, при которых играет роль экспрессия рецепторов GLP-1, например, для определения опухолей у пациента.
Понятие пациент означает здесь равным образом человека и позвоночное животное. Таким образом, средство применимо в медицине и ветеринарии. Терапевтически и диагностически действующие средства по изобретению вводят пациенту как часть фармацевтически приемлемой композиции либо перорально, ректально, парентерально, внутривенно/внутриартериально, внутримышечно, внутрисосудисто, местно (порошок, мазь или капли), либо в виде спрея. Соответствующая дозировка в каждом случае применения для диагностики и терапии доброкачественных и злокачественных заболеваний, при которых играет роль экспрессия рецепторов GLP-1, устанавливается врачом.
Изучение интернализации
Изучение интернализации показывает, например, перенос радиоактивно меченых in vitro предложенных производных пептидов и химерных белков в клетки.
В 6-луночный планшет высевали 100000 СНО-клеток, трансфицированных GLP-1-рецепторами. Клетки выращивали до сливания. Были образованы 4 группы:
Группа 1: общее связывание, промывание PBS
К 2 мл среды прибавляли меченый 100000 cpm 111In пептид (10-15 моль) и инкубировали в течение 1 ч при 37°С. Затем трижды промывали PBS и отделяли клетки 20 мМ MOPS (3-морфолинопропансульфокислотой)+0,1% тритон-Х-100 (pH 7,4). Захват в клетки измеряли на γ-счетчике. Число клеток измеряли по содержанию белка при помощи набора для определения белка из Bio-Rad (Мюнхен, Германия) на основе способа Bradford'a. Результат выражали в cpm/мкг белка.
Группа 2: неспецифическое связывание, промывание PBS
К 2 мл среды прибавляли 20 мкл 10-3 М раствора GLP-1 и меченый 100000 cpm 111In пептид и инкубировали в течение 1 ч при 37°С. Затем трижды промывали PBS и отделяли клетки 20 мМ MOPS (3-морфолинопропансульфокислотой)+0,1% тритон-Х-100 (pH 7,4). Захват в клетки измеряли на γ-счетчике. Число клеток измеряли по содержанию белка при помощи набора для определения белка из Bio-Rad (Мюнхен, Германия) на основе способа Bradford'a. Результат выражали в cpm/мкг белка.
Группа 3: общее связывание, промывание кислотой
К 2 мл среды прибавляли 20 мкл 10-3 М раствора GLP-1 и меченый 100000 cpm 111In пептид и инкубировали в течение 1 ч при 37°С. Затем промывали 1 раз 0,1 М буферным раствором ацетата натрия, рН 4, и дважды PBS и отделяли клетки 20 мМ MOPS (3-морфолинопропансульфокислотой)+0,1% тритон-Х-100 (pH 7,4). Захват в клетки измеряли на γ-счетчике. Число клеток измеряли по содержанию белка при помощи набора для определения белка из Bio-Rad (Мюнхен, Германия) на основе способа Bradford'a. Результат выражали в cpm/мкг белка.
Группа 4: неспецифическое связывание, промывание кислотой
К 2 мл среды прибавляли 20 мкл 10-4 М раствора GLP-1 и меченый 100000 cpm 111In пептид и инкубировали в течение 1 ч при 37°С. Затем промывали 1 раз 0,1 М буферным раствором ацетата натрия, рН 4, и дважды PBS и отделяли клетки 20 мМ MOPS (3-морфолинопропансульфокислотой)+0,1% тритон-Х-100 (pH 7,4). Захват в клетки измеряли на γ-счетчике. Число клеток измеряли по содержанию белка при помощи набора для определения белка из Bio-Rad (Мюнхен, Германия) на основе способа Bradford'a. Результат выражали в cpm/мкг белка.
Figure 00000004
%IdsB=% внедрения специфического связывания
  %IdsB
MC10 75±5
MC11 70±7
MC12 73±9
Результаты показывают, что происходит хороший перенос в клетки.
Изучение связывания
Изучение связывания показывает специфическое связывание радиоактивно меченых in vivo предложенных производных пептидов и химерных белков с GLP-1-рецепторами.
В 6-луночный планшет высевали 100000 СНО-клеток, трансфицированных GLP-1-рецепторами. Клетки выращивали до сливания. Затем прибавляли в 2 мл маркированного 100000 cpm111In пептида. Для определения связывание блокировали 20 мкл 10-3 М раствора GLP-1.
  % блокирования
МС10 80±3
МС11 85±3
МС12 77±6
Биораспределение in vivo получали на грызунах, например на голых мышах. Для этого впрыскивали трансфицированные GLP-1 СНО-клетки голым мышам. Через 3-5 недель опухоли вырастали до величины около 300 мг. Мышам впрыскивали предложенный меченый 37 MBq 111In пептид через хвостовую вену и через 4 ч измеряли мышей в γ-камере.
При этом происходило быстрое очищение через почки и поглощение почками. Более высокое поглощение происходило равным образом в опухолевой ткани, позитивной по рецепторам GLP-1, в то время как опухолевые ткани, негативные по рецепторам GLP-1, едва проявляли поглощение. Легкое поглощение также наблюдали в поджелудочной железе, другие органы не проявляли видимого поглощения.
Изучение биораспределения ex vivo проводили в группах по 4 мыши, при котором впрыскивали 555 kBq In-111 в хвостовую вену. Через 1, 4 и 24 ч после впрыскивания мышей убивали и извлекали органы.
Измеряли поглощение радиоактивности и органы взвешивали. Рассчитывали % впрыснутой дозы на грамм массы органа (%i.D./g).
Результаты выглядели следующим образом.
Орган 1 ч Станд. отклонение 4 ч Станд. отклонение 24 ч Станд. отклонение
Кровь 0,01 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
Печень 0,03 0,01 0,01 0,01 0,01 0,00
Желудок 0,14 0,10 0,13 0,07 0,07 0,06
Селезенка 0,02 0,02 0,01 0,00 0,01 0,00
Поджелудочная железа 0,58 0,50 0,62 0,28 0,37 0,27
Почки 7,90 3,62 7,41 3,56 4,85 3,05
Кишечник 0,12 0,06 0,07 0,06 0,04 0,03
Легкие 0,80 0,56 0,36 0,17 0,22 0,07
Сердце 0,02 0,01 0,01 0,01 0,00 0,00
Кости 0,02 0,04 0,01 0,00 0,01 0,01
Мышцы 0,01 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
Опухоль - 0,03 0,03 0,02 0,01 0,01 0,00
Опухоль + 0,42 0,19 0,31 0,30 0,20 0,16
Средние значения биораспредения для 4 мышей в группе в %i.D./г. Станд. отклонение: стандартное отклонение.

Claims (23)

1. Производное пептида GLP-1(1-37), основанное на аминокислотной последовательности пептида
Figure 00000001

отличающееся тем, что
- y С-конца оно модифицировано амином и N-концом связывается с GLP-1-рецепторами, и
- оно построено из GLP-l(x-y)A, причем x имеет число 7, и y имеет число 36, и А представляет собой присоединенную группу, локализованную на С-конце, так, чтобы связываться с сигнальной молекулой,
- присоединенная группа А представляет собой амин, такой как лизин, или другую аминокислоту со свободной аминогруппой, такую как орнитин, или органическую группу со свободной аминогруппой, и что его используют для диагностики и терапии заболеваний, в которых играет роль экспрессия рецептора GLP-1.
2. Производное пептида GLP-1 по п.1, отличающееся тем, что к присоединенной группе А присоединен хелатирующий агент для мечения радионуклидами или MRT-контрастное средство, флуоресцирующий краситель или химиотерапевтическое средство.
3. Производное пептида GLP-1 по одному из пп.1 или 2, отличающееся тем, что хелатирующий агент представляет собой N,N-бис(2-[бис(карбоксиметил)амино)-этил)глицин), DOTA (1,4,7,10-тетраазациклододскан-1,4,7,10-тетрауксусную кислоту), HYNIC (6-гидразинопиридин-3-карбоновую кислоту), MAG3 (меркаптоацетил-глицилглицилглицин), N4 (1,4,8,11-тетраазаундекан) и их известные производные, предпочтительно DTPA (диэтилентриаминопентауксусную кислоту).
4. Производное пептида GLP-1 по одному из пп.1-3, отличающееся тем, что мечение является связыванием с радионуклидом, MRT-контрастным средством, флуоресцирующим красителем и/или химиотерапевтическим средством.
5. Производное пептида GLP-1 по одному из пп.1-4, отличающееся тем, что флуоресцирующий краситель в особенности выбран из группы, включающей флуоресцеин, родамин, кумарин, BODIPY, пирен (каскадный синий), люцифер желтый, фикобилипротеин, цианин, алексафтор, орегоновый зеленый, тексафирин красный, кумарин и их производные.
6. Производное пептида GLP-1 по одному из пп.1-5, отличающееся тем, что радионуклид в особенности выбран из группы, включающей F-18, Cu-64, Cu-67, Ga-67, Ga-68, Y-86, Y-90, Tc-99m, In-111, I-123, I-124, I-131, Lu-177, Re-186, Re-188, Pt-193m, Pt-195m, Ac-225, At-211, Bi-213, Sm-153 или Lr-169.
7. Производное пептида GLP-1 по одному из пп.1-6, отличающееся тем, что MRT-контрастное средство представляет собой гадолиний, марганец, железо, европий, медь, никель, хром, празеодим, диспрозий или гольмий или их соединения, или перфтроруглероды, или F-19, H-1, P-31, Na-19.
8. Производное пептида GLP-1 по одному из пп.1-7, отличающееся тем, что химиотерапевтическое средство в особенности выбрано из группы, включающей алкилсульфонаты, этилимины, нитрозомочевины, производные азотистого иприта, аналоги фолиевой кислоты, аналоги пурина, аналоги пиримидина, производные подофиллина, таксаны, алкалоиды барвинка, антрациклины, прочие цитостатические антибиотики, соединения платины, производные камптотецина, гормоны, факторы роста, интерфероны или интерлейкины, или цитостатически или цитотоксически действующие вещества.
9. Производное пептида GLP-1 по одному из пп.1-8, отличающееся тем, что мечение происходит путем присоединения радионуклидов для применения in vitro посредством насыщения мест связи natInCl3.
10. Применение производного пептида GLP-1 по одному из пп.1-9 для получения средства для диагностики заболеваний, при которых играет роль экспрессия GLP-1.
11. Применение производного пептида GLP-1 по одному из пп.1-9 для получения средства для терапии заболеваний, при которых играет роль экспрессия GLP-1.
12. Производное пептида GLP-1 по одному из пп.1-9 для определения плотности инсулин-продуцирующих клеток в ткани.
13. Производное пептида GLP-1 по одному из пп.1-9 для применения для определения экспрессии GLP-1-рецепторов или их плотности.
14. Средство для диагностики заболеваний, при которых играет роль экспрессия GLP-1, отличающееся тем, что оно содержит меченое производное пептида GLP-1 по п.1.
15. Средство для терапии заболеваний, при которых играет роль экспрессия GLP-1, отличающееся тем, что оно содержит меченое производное пептида GLP-1 по п.1.
16. Средство для диагностики заболеваний, при которых играет роль экспрессия GLP-1, отличающееся тем, что оно содержит немеченое производное пептида GLP-1 по п.1.
17. Средство для терапии заболеваний, при которых играет роль экспрессия GLP-1, отличающееся тем, что оно содержит немеченое производное пептида GLP-1 по п.1.
18. Средство по пп.14 и 15, отличающееся тем, что мечение представляет собой присоединение радионуклидов, MRT-контрастных средств, флуоресцирующих красителей и/или химиотерапевтических средств.
19. Средство по пп.14 и 16 для применения для диагностики и заболеваний, при которых играет роль экспрессия GLP-1.
20. Средство по пп.15 и 17 для применения для терапии заболеваний, при которых играет роль экспрессия GLP-1.
21. Средство по пп.14 и 16 для применения для диагностики и нейроэндокринных опухолей (NET), в особенности инсулиномы и мелкоклеточного бронхогенного рака.
22. Средство по пп.15 и 17 для применения для терапии нейроэндокринных опухолей (NET), в особенности инсулиномы и мелкоклеточного бронхогенного рака.
23. Средство по пп.14 и 16 для применения в сцинциграфии, PET, SPECT, MRT, оптической диагностике, опосредованной рецепторами химиотерапии, опосредованной рецепторами цитостатической или цитотоксической терапии и радиопептидной терапии.
RU2010148446/10A 2004-09-03 2010-11-26 Изобретение, относящееся к glp-1 и эксендинам RU2486197C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102004043153A DE102004043153B4 (de) 2004-09-03 2004-09-03 Erfindung betreffend GLP-1 und Exendin
DE102004043153.1 2004-09-03

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007112115/10A Division RU2420536C2 (ru) 2004-09-03 2005-08-26 Пептидные производные эксендина-4

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2010148446A RU2010148446A (ru) 2012-06-10
RU2486197C2 true RU2486197C2 (ru) 2013-06-27

Family

ID=35970651

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007112115/10A RU2420536C2 (ru) 2004-09-03 2005-08-26 Пептидные производные эксендина-4
RU2010148447/10A RU2489443C2 (ru) 2004-09-03 2005-08-26 Изобретение, относящееся к glp-1 и эксендинам
RU2010148446/10A RU2486197C2 (ru) 2004-09-03 2010-11-26 Изобретение, относящееся к glp-1 и эксендинам

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007112115/10A RU2420536C2 (ru) 2004-09-03 2005-08-26 Пептидные производные эксендина-4
RU2010148447/10A RU2489443C2 (ru) 2004-09-03 2005-08-26 Изобретение, относящееся к glp-1 и эксендинам

Country Status (16)

Country Link
US (2) US8268781B2 (ru)
EP (3) EP1784422B1 (ru)
JP (1) JP5047795B2 (ru)
KR (1) KR101237152B1 (ru)
CN (3) CN102358752B (ru)
AT (1) ATE486090T1 (ru)
AU (1) AU2005279537C1 (ru)
BR (1) BRPI0515624A (ru)
CA (2) CA2578252A1 (ru)
DE (2) DE102004043153B4 (ru)
HR (1) HRP20110061T1 (ru)
MX (1) MX2007002455A (ru)
NO (1) NO20071592L (ru)
PL (2) PL2070946T3 (ru)
RU (3) RU2420536C2 (ru)
WO (1) WO2006024275A2 (ru)

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080021636A (ko) * 2005-05-05 2008-03-07 카딜라 핼쓰캐어 리미티드 Ｇｌｐ-1 아고니스트인 신규 화합물
DK3456340T3 (da) 2007-01-08 2022-03-21 Univ Pennsylvania Glp-1-receptorantagonist til brug ved behandling af medfødt hyperinsulisme
KR20110043766A (ko) * 2008-09-20 2011-04-27 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 췌도 이미징용 분자 프로브 전구체 및 그의 사용
HUE068164T2 (hu) 2008-10-17 2024-12-28 Sanofi Aventis Deutschland Egy inzulin és egy GLP-1 agonista kombinációja
WO2010118034A2 (en) * 2009-04-06 2010-10-14 Board Of Regents, The University Of Texas System Cyclic peptide analogues for non-invasive imaging of pancreatic beta-cells
WO2011019020A1 (ja) * 2009-08-10 2011-02-17 国立大学法人京都大学 膵島イメージング用分子プローブ及びその前駆体、並びに、それらの使用
WO2011027584A1 (ja) * 2009-09-04 2011-03-10 国立大学法人京都大学 膵島イメージング用分子プローブ及びその使用
JP5608867B2 (ja) * 2009-09-30 2014-10-15 国立大学法人京都大学 膵島イメージング用分子プローブ及びその使用
SG10201500871TA (en) 2009-11-13 2015-04-29 Sanofi Aventis Deutschland Pharmaceutical composition comprising a glp-1 agonist and methionine
CA2780460C (en) 2009-11-13 2018-09-04 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Pharmaceutical composition comprising a glp-1 agonist, an insulin and methionine
EP2510951B1 (en) 2009-12-10 2016-07-13 Kyoto University Molecular probe for imaging of pancreatic islet, and use thereof
CN101875700B (zh) * 2010-04-09 2012-09-26 无锡和邦生物科技有限公司 一种增加促胰岛素分泌肽融合蛋白生物活性的方法
RS55378B1 (sr) 2010-08-30 2017-03-31 Sanofi Aventis Deutschland Upotreba ave0010 za proizvodnju leka za tretman diabetes mellitus tipa 2
US9278146B2 (en) 2010-10-08 2016-03-08 Kyoto University Peptide derivative and use of the same
US9289516B2 (en) 2011-03-09 2016-03-22 The General Hospital Corporation Imaging beta cell mass
US9821032B2 (en) 2011-05-13 2017-11-21 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin
EP2729493B1 (en) 2011-07-04 2020-06-10 IP2IPO Innovations Limited Novel compounds and their effects on feeding behaviour
BR112014004726A2 (pt) 2011-08-29 2017-04-04 Sanofi Aventis Deutschland combinação farmacêutica para uso no controle glicêmico em pacientes de diabetes tipo 2
TWI559929B (en) 2011-09-01 2016-12-01 Sanofi Aventis Deutschland Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease
WO2013182217A1 (en) * 2012-04-27 2013-12-12 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Quantification of impurities for release testing of peptide products
US8901484B2 (en) * 2012-04-27 2014-12-02 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Quantification of impurities for release testing of peptide products
UA116217C2 (uk) * 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
TWI674270B (zh) * 2012-12-11 2019-10-11 英商梅迪繆思有限公司 用於治療肥胖之升糖素與glp-1共促效劑
PT2934568T (pt) 2012-12-21 2018-01-04 Sanofi Sa Agonistas duplos de glp1/gip ou trigonais de glp1/gip/glucagina
CN103344764B (zh) * 2013-06-19 2014-11-26 天津美德太平洋科技有限公司 胰高血糖素样肽-1生物学活性检测试剂及检测方法和试剂盒
TW201609796A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 非醯化之艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
TW201609795A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 作為雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑的艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
TW201609799A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑
TW201609797A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
US11311519B2 (en) 2014-05-01 2022-04-26 Eiger Biopharmaceuticals, Inc. Treatment of hepatitis delta virus infection
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
DE102014112747A1 (de) * 2014-09-04 2016-03-10 Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät Verwendung eines Quinoxalinderivats in einem bildgebenden Verfahren
TWI758239B (zh) 2014-12-12 2022-03-21 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 甘精胰島素/利司那肽固定比率配製劑
TWI748945B (zh) 2015-03-13 2021-12-11 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 第２型糖尿病病患治療
TW201705975A (zh) 2015-03-18 2017-02-16 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 第２型糖尿病病患之治療
LT3297653T (lt) 2015-05-22 2022-01-10 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Postbariatrinės hipoglikemijos gydymas glp-1 antagonistais
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
TW201706291A (zh) 2015-07-10 2017-02-16 賽諾菲公司 作為選擇性肽雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之新毒蜥外泌肽（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）衍生物
PT3389697T (pt) 2015-12-14 2021-01-22 Antaros Medical Ab Agonistas seletivos do recetor de glucagão compreendendo uma fração quelante para propósitos de imagiologia
WO2017152014A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 Eiger Biopharmaceuticals, Inc. Treatment of hyperinsulinemic hypoglycemia with exendin-4 derivatives
DK3541366T3 (da) 2016-11-21 2025-03-03 Amylyx Pharmaceuticals Inc Bufferformuleringer af exendin (9-39)
CN115348876A (zh) 2020-03-31 2022-11-15 安塔罗斯医疗公司 用于成像和治疗目的的包含螯合部分的选择性gip受体激动剂

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU95108231A (ru) * 1995-03-21 1997-03-20 Эли Лилли энд Компани (US) Glp-1-молекулярный комплекс, фармацевтическая композиция и способ получения комплекса
EP0699686B1 (en) * 1994-08-30 2003-10-08 Eli Lilly And Company Biologically active fragments of glucagon-like insulinotropic peptide

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU638043B2 (en) * 1989-07-20 1993-06-17 Novartis Ag Labeled polypeptide derivatives
US5424286A (en) * 1993-05-24 1995-06-13 Eng; John Exendin-3 and exendin-4 polypeptides, and pharmaceutical compositions comprising same
DK0915910T3 (da) * 1996-06-05 2006-05-22 Roche Diagnostics Gmbh Exendin-analoger, fremgangsmåder til fremstilling deraf samt lægemidlter der indeholder disse
WO1999043705A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 Novo Nordisk A/S N-terminally truncated glp-1 derivatives
WO1999043708A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives of glp-1 and exendin with protracted profile of action
US7259136B2 (en) * 1999-04-30 2007-08-21 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating peripheral vascular disease
SG125915A1 (en) * 1998-12-07 2006-10-30 Sod Conseils Rech Applic Analogues of glp-1
WO2000066629A1 (en) * 1999-04-30 2000-11-09 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
EP2100901A1 (en) * 1999-05-17 2009-09-16 ConjuChem Biotechnologies Inc. Modified Insulin and conjugates thereof
US6329336B1 (en) * 1999-05-17 2001-12-11 Conjuchem, Inc. Long lasting insulinotropic peptides
EP1076066A1 (en) * 1999-07-12 2001-02-14 Zealand Pharmaceuticals A/S Peptides for lowering blood glucose levels
US6528486B1 (en) * 1999-07-12 2003-03-04 Zealand Pharma A/S Peptide agonists of GLP-1 activity
DK1246638T4 (da) * 2000-01-10 2014-09-22 Amylin Pharmaceuticals Llc Anvendelse af extendiner og agonister deraf til behandlingen af hypertriglyceridæmi
US7514078B2 (en) * 2001-06-01 2009-04-07 Cornell Research Foundation, Inc. Methods of treating prostate cancer with anti-prostate specific membrane antigen antibodies
US20030232761A1 (en) * 2002-03-28 2003-12-18 Hinke Simon A. Novel analogues of glucose-dependent insulinotropic polypeptide
RU2376314C2 (ru) * 2002-10-02 2009-12-20 Зилэнд Фарма А/С Стабилизированные соединения эксендина-4
EP1559724A4 (en) * 2002-10-11 2006-02-08 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co GLP-1 DERIVATIVES AND TRANSMUCOSAL ABSORPTION PREPARATIONS THEREOF

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0699686B1 (en) * 1994-08-30 2003-10-08 Eli Lilly And Company Biologically active fragments of glucagon-like insulinotropic peptide
RU95108231A (ru) * 1995-03-21 1997-03-20 Эли Лилли энд Компани (US) Glp-1-молекулярный комплекс, фармацевтическая композиция и способ получения комплекса

Also Published As

Publication number Publication date
ATE486090T1 (de) 2010-11-15
RU2420536C2 (ru) 2011-06-10
EP2301962A3 (de) 2011-11-02
US8268781B2 (en) 2012-09-18
DE102004043153A1 (de) 2006-03-23
PL2301962T3 (pl) 2014-05-30
EP2301962B1 (de) 2013-10-30
JP5047795B2 (ja) 2012-10-10
CN101010340B (zh) 2012-11-28
EP2070946A3 (de) 2009-09-09
RU2489443C2 (ru) 2013-08-10
BRPI0515624A (pt) 2008-07-29
NO20071592L (no) 2007-05-29
DE102004043153B4 (de) 2013-11-21
CN101010340A (zh) 2007-08-01
PL2070946T3 (pl) 2013-09-30
US20130095037A1 (en) 2013-04-18
MX2007002455A (es) 2007-10-10
EP2301962A2 (de) 2011-03-30
HRP20110061T1 (hr) 2011-02-28
DE502005010449D1 (de) 2010-12-09
CA2578252A1 (en) 2006-03-09
CN102358752A (zh) 2012-02-22
AU2005279537B2 (en) 2012-02-16
AU2005279537C1 (en) 2012-07-05
CN102358752B (zh) 2014-07-30
EP1784422B1 (de) 2010-10-27
JP2008511557A (ja) 2008-04-17
RU2010148447A (ru) 2012-06-10
CN102304179A (zh) 2012-01-04
WO2006024275A2 (de) 2006-03-09
US20090180953A1 (en) 2009-07-16
EP2070946A2 (de) 2009-06-17
RU2007112115A (ru) 2008-10-10
EP2070946B1 (de) 2013-05-29
KR20070093960A (ko) 2007-09-19
KR101237152B1 (ko) 2013-03-04
WO2006024275A3 (de) 2006-11-30
CA2797666A1 (en) 2006-03-09
RU2010148446A (ru) 2012-06-10
EP1784422A2 (de) 2007-05-16
AU2005279537A1 (en) 2006-03-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2486197C2 (ru) Изобретение, относящееся к glp-1 и эксендинам
KR100385340B1 (ko) 금속킬레이트형성펩티드및그의용도
Kimura et al. Synthesis and biological evaluation of an 111In-labeled exendin-4 derivative as a single-photon emission computed tomography probe for imaging pancreatic β-cells
US7122622B2 (en) Peptide compounds having improved binding affinity to somatostatin receptors
JP2023520769A (ja) イメージング及び治療目的のキレート部分を含む選択的ｇｉｐ受容体アゴニスト
Azad et al. Design, synthesis and in vitro characterization of Glucagon-Like Peptide-1 derivatives for pancreatic beta cell imaging by SPECT
US6855308B2 (en) PACAP compositions and methods for tumor imaging and therapy
US6395255B1 (en) Radiolabeled vasoactive intestinal peptide analogs for imaging and therapy
JP4318985B2 (ja) ソマトスタチンアナログ誘導体およびその利用
AU2012202855B2 (en) GLP-1 and exendin related invention
Vallabhajosula Theranostics in Neuroendocrine Tumors
JP2019508480A (ja) イメージング目的のためのキレート部分を含む選択的グルカゴン受容体アゴニスト
JP2005538966A (ja) 金属錯体形成により環化した標識ソマトスタチン同族体骨格
JP3866317B2 (ja) 金属キレート形成性ペプチド、その用途及びその製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20150827