RU2483108C2 - Способы обнаружения болезни альцгеймера - Google Patents
Способы обнаружения болезни альцгеймера Download PDFInfo
- Publication number
- RU2483108C2 RU2483108C2 RU2009104533/10A RU2009104533A RU2483108C2 RU 2483108 C2 RU2483108 C2 RU 2483108C2 RU 2009104533/10 A RU2009104533/10 A RU 2009104533/10A RU 2009104533 A RU2009104533 A RU 2009104533A RU 2483108 C2 RU2483108 C2 RU 2483108C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- disease
- polymorphism
- alzheimer
- gene
- dna
- Prior art date
Links
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims abstract description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 47
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 48
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 9
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 2
- 101000801645 Homo sapiens ATP-binding cassette sub-family A member 2 Proteins 0.000 abstract description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 37
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 28
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 26
- 101150033922 ABCA2 gene Proteins 0.000 description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 13
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 102100033618 ATP-binding cassette sub-family A member 2 Human genes 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 10
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 8
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 8
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 8
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 6
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 5
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 101150071577 chi2 gene Proteins 0.000 description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 4
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- ASUTZQLVASHGKV-JDFRZJQESA-N galanthamine Chemical compound O1C(=C23)C(OC)=CC=C2CN(C)CC[C@]23[C@@H]1C[C@@H](O)C=C2 ASUTZQLVASHGKV-JDFRZJQESA-N 0.000 description 3
- 102000056779 human ABCA2 Human genes 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011253 protective coating Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 2
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100161485 Homo sapiens ABCA2 gene Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100022033 Presenilin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010036933 Presenilin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100022036 Presenilin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010036908 Presenilin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 2
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 101150031224 app gene Proteins 0.000 description 2
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- -1 for example Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 2
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000003234 polygenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- IZAOBRWCUGOKNH-OAHLLOKOSA-N 4-[2-[(1R)-1-(N-(4-chlorophenyl)sulfonyl-2,5-difluoroanilino)ethyl]-5-fluorophenyl]butanoic acid Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1S(=O)(=O)N([C@H](C)C=1C(=CC(F)=CC=1)CCCC(O)=O)C1=CC(F)=CC=C1F IZAOBRWCUGOKNH-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 108091007403 Cholesterol transporters Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 230000009946 DNA mutation Effects 0.000 description 1
- 101100256850 Drosophila melanogaster EndoA gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101100268553 Homo sapiens APP gene Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100161486 Mus musculus Abca2 gene Proteins 0.000 description 1
- HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N N-Methyl-D-aspartic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- XSVMFMHYUFZWBK-NSHDSACASA-N Rivastigmine Chemical compound CCN(C)C(=O)OC1=CC=CC([C@H](C)N(C)C)=C1 XSVMFMHYUFZWBK-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003529 anticholesteremic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003140 astrocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007321 biological mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000012850 discrimination method Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 230000001819 effect on gene Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 210000005153 frontal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229960003980 galantamine Drugs 0.000 description 1
- ASUTZQLVASHGKV-UHFFFAOYSA-N galanthamine hydrochloride Natural products O1C(=C23)C(OC)=CC=C2CN(C)CCC23C1CC(O)C=C2 ASUTZQLVASHGKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 229960004136 rivastigmine Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000001768 subcellular fraction Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000012250 transgenic expression Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002966 varnish Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано для диагностики болезни Альцгеймера. Используют пару праймеров, где первый праймер содержит 15-30 смежных нуклеотидов последовательности SEQ ID №3, а второй праймер содержит 15-30 смежных нуклеотидов последовательности, комплементарной SEQ ID №3. Изобретение позволяет детектировать содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832 гена АВСА2, что указывает на наличие или повышенный риск развития болезни Альцгеймера у пациента. 2 з.п. ф-лы, 2 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к способам диагностики или прогноза болезни Альцгеймера. Оно относится также к наборам для диагностики или прогноза болезни Альцгеймера.
Болезнь Альцгеймера представляет собой нейродегенеративное заболевание, которое поражает значительную часть населения пожилого возраста. Эта болезнь характеризуется, в клиническом плане, потерей познавательных функций и, в невропатологическом плане, наличием в головном мозге внутриклеточных нейрофибриллярных отложений и внеклеточных отложений β-амилоидного пептида (Аβ), образующего амилоидные бляшки. Амилоидные бляшки в большинстве своем образованы пептидами Аβ из 40 или 42 аминокислот, которые генерируются в результате протеолитического процесса из белка-предшественника β-амилоидного пептида (АРР). Внеклеточные отложения Аβ являются специфическими для болезни Альцгеймера. Они представляют собой раннюю и неизменную характеристику всех форм болезни Альцгеймера, включая семейные формы.
Семейные формы болезни проявляются относительно рано (в возрасте от 40 до 60 лет). Они, по-видимому, возникают, по меньшей мере частично, вследствие мутаций в гене АРР и в генах презенилина-1 (PS1) и презенилина-2 (PS2). Мутации в этих трех генах индуцируют изменения в протеолизе АРР, приводящие к сверхпродуцированию Аβ и к раннему появлению патологии и симптомов, которые подобны таковым спорадических форм болезни Альцгеймера.
Связь между холестерином и болезнью Альцгеймера также была установлена в ходе недавних эпидемиологических исследований, на основании результатов биохимических исследований и клеточной биологии (см. обзор Hartmann T., TINS, 24, 45-48 (2001)). Повышенное содержание холестерина у взрослого, а также повышенное артериальное кровяное давление значительно повышают риск болезни Альцгеймера (Kivipelto и др., Br. Med. J., 322, 1447 (2001)).
Напротив, очень уменьшенный риск отмечается у людей, подвергаемых лечению с помощью гипохолестеринемических агентов типа статинов (Wolozin и др., Arch. Neurol., 57, 1439 (2000); Jick и др., Lancet, 356, 1627 (2000)).
Недавно была установлена имеющаяся, по-видимому, молекулярная связь. In vitro и in vivo, повышенное содержание холестерина увеличивает продуцирование пептида А-β и ускоряет появление амилоидных бляшек (Sparks и др., Exp. Neurol., 126, 88-94 (1994); Refolo и др., Neurobiol. Dis., 7, 321-331 (2000); Puglielli и др., Nat. Cell Biol., 3, 905 (2001); Shie и др., Neuroreport, 13, 455 (2002)), тогда как ингибиторы пути синтеза холестерина их уменьшают (Simons и др., PNAS USA, 95, 6460-6464 (1998); Fassbender и др., PNAS USA, 98, 5856 (2001); Refolo и др., Neurobiol. Dis., 8, 890-899 (2001)).
Несмотря на значительные подвижки в этой области, медицинский персонал все еще сталкивается с отсутствием молекул, действительно эффективных против болезни Альцгеймера. Одна из причин этого отсутствия заключается в трудности нахождения мишеней, позволяющих осуществлять эффективный скрининг молекул, способных оказывать терапевтическое действие против этой болезни.
С другой стороны, раннее обнаружение этой болезни является определяющим, чтобы проводить лечение до того, как появляются первые симптомы, в высокой степени вызывающие потерю трудоспособности у больных.
Кроме того, вследствие разнообразных форм этой болезни необходимо целенаправленно проводить лечение в зависимости, с одной стороны, от особенностей пациента и, с другой стороны, от молекулы, которая может быть использована для лечения. Этот фармакогеномный или фармакогенетический подход приобретает все более и более важное значение.
Белок АВСА2 представляет собой белок, относящийся к многочисленному семейству переносчиков холестерина типа АВС (АТФ-связывающий кластер). Этот переносчик специфически экспрессируется в головном мозге.
Клонирование гена АВСА2 описано в 2000 г. Zhao и др. (Biochem. J., 350, 865-872). Последовательность, кроме того, составила объект заявки РСТ WO-01/14414, поданной фирмой ACTIVEPASS PHARMACEUTICALS. В этой заявке сформулированы различные гипотезы в отношении роли АВСА2, но ни один результат не получен в пользу их поддержания.
Уже идентифицированы различные полиморфизмы гена АВСА2. Их последовательности, в частности, доступны из базы данных dbSNP NCBI. Среди различных полиморфизмов, перечисленных в этой базе данных, описан полиморфизм rs908832.
Этот полиморфизм характеризуется содержащимся в значительном количестве у людей индоевропейской расы аллелем, который представляет собой гуанин, локализованный в положении 348 последовательности SEQ ID № 2, и содержащимся в незначительном количестве у людей индоевропейской расы аллелем, который представляет собой аденин, локализованный в положении 348 последовательности SEQ ID № 1.
Альтернативно, этот мононуклеотидный полиморфизм представлен последовательностями SEQ ID № 3 и SEQ ID № 4, частично комплементарными, соответственно, последовательностям SEQ ID № 1 и SEQ ID № 2. Этот полиморфизм в таком случае характеризуется содержащимся в значительном количестве у людей индоевропейской расы аллелем, который представляет собой цитозин, локализованный в положении 201 последовательности SEQ ID № 4, и содержащимся в незначительном количестве у людей индоевропейской расы аллелем, который представляет собой тимидин, локализованный в положении 201 последовательности SEQ ID № 3.
Этот полиморфизм является несмысловым, то есть он не изменяет выраженной последовательности белка. Два аллеля полиморфизма составляют часть кодонов, которые кодируют аспарагиновую кислоту. Этот кодирующий полиморфизм локализован на экзоне 14 транскрипта, имеющего последовательность SEQ ID № 5, в положении 2185.
Заявитель неожиданно обнаружил, что лица, обладающие содержащимся в незначительном количестве аллелем полиморфизма rs908832 гена АВСА2, имеют повышенный риск преждевременного развития болезни Альцгеймера.
Это открытие особенно важно, так как оно впервые дает, по данным заявителя, доказательство связи между белком АВСА2, и, в частности, полиморфизмом гена, кодирующим этот белок, и патологическим состоянием, таким, как болезнь Альцгеймера.
Оно позволяет подтверждать и/или прогнозировать тяжесть поражения у пациентов, в случае которых болезнь Альцгеймера уже была диагностирована, а также вероятную эффективность предусматриваемых лечений, или еще прогнозировать риск появления болезни у субъектов, не обладающих симптомами болезни Альцгеймера, включая индивиды, относящиеся к пациентам, диагностика которых была подтверждена.
Оно позволяет, кроме того, подтверждать преобладающую функциональную роль АВСА2 в физиопатологии болезни Альцгеймера, оправдывающую осуществление тестов скрининга молекул, способных оказывать стимулирующее или ингибирующее воздействие на активность АВСА2, с целью терапевтического применения против болезни Альцгеймера.
Первым объектом настоящего изобретения, таким образом, является способ диагностики или прогноза болезни Альцгеймера у пациента. Вышеуказанный способ включает по меньшей мере одну стадию обнаружения аллелей полиморфизма гена АВСА2. Преимущественно, таким полиморфизмом является полиморфизм, принимающий активное участие в болезни Альцгеймера. Он предпочтительно представляет собой полиморфизм rs908832, но он может быть любым другим полиморфизмом без генетической связи с полиморфизмом rs908832.
Соответствующими лицами, например, могут быть:
- люди, которые не имеют симптомов болезни Альцгеймера;
- люди, у которых уже обнаружен риск развития болезни Альцгеймера, но которые еще не имеют симптомов болезни;
- люди, которые предварительно диагностированы как пораженные болезнью Альцгеймера и для которых желательно подтверждение диагностики.
Стадию или стадии обнаружения, одновременные или нет, наличия или отсутствия содержащегося в незначительном количестве аллеля полиморфизма rs908832 осуществляют прямо или непрямо с помощью любого соответствующего способа, исходя из биологических образцов.
Настоящее изобретение, следовательно, также относится к способу скрининга биологических образцов, взятых на анализ у лиц, в частности, лиц, не имеющих симптомов болезни Альцгеймера, для выявления лиц, которые в высокой степени способны подвергаться развитию болезни Альцгеймера. Такой скрининг включает поиск, проводимый одновременно или нет, в вышеуказанных биологических образцах наличия содержащегося в незначительном количестве аллеля полиморфизма rs908832.
Вышеуказанные образцы, содержащие идентифицируемые ДНК или белки, могут быть различных происхождений. Речь может идти, например, об образцах крови, спермы, волос (с их корнями) или о любом другом образце, включающем ядросодержащие клетки. Предпочтительно, анализируемые биологические образцы представляют собой образцы крови. В этом случае идентифицируемую ДНК выделяют из лейкоцитов.
В смысле настоящего изобретения, под термином “биологический образец” понимают образцы, прямо происходящие от лица, для которого желательна диагностика или прогноз без другого превращения, или образцы, подвергаемые одной или нескольким стадиям получения, чтобы сохранить из них только одну фракцию, пригодную для стадий обнаружения, как, например, сырой клеточный экстракт.
Способы, позволяющие обнаруживать или идентифицировать наличие или отсутствие ДНК, несущей содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832, могут быть комбинациями способов полимеразной цепной реакции (“PCR”), гибридизации, саузерн-блоттинга, рестрикции нуклеазами, анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (“RFLP”) и/или прямого секвенирования продуктов PCR. Все эти способы известны специалисту в данной области.
Как правило, все способы идентификации ДНК, несущей содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832, которые могут быть использованы в рамках настоящего изобретения, включают предварительную стадию сбора биологического образца или биологических образцов, содержащих идентифицируемую ДНК, и стадию экстракции геномной ДНК стандартными способами, хорошо известными специалисту в данной области, например, согласно способу Smith и др. (The Lancet, 339, 1375-1377 (1992)).
Такой способ индентификации может включать:
а) экстракцию ДНК вышеуказанного лица;
b) амплификацию вышеуказанной выделенной ДНК с помощью праймеров, способных амплифицировать последовательности, соответствующие каждому из аллелей полиморфизма rs908832 гена АВСА2;
с) обнаружение по меньшей мере одного из аллелей полиморфизма rs908832 гена АВСА2 в амплифицированной ДНК.
Согласно одному предпочтительному способу осуществления, используют способ PCR. Таким образом, стадия b) преимущественно включает стадию полимеразной цепной реакции. Этот способ состоит с самого начала в синтезе олигонуклеотидов, комплементарных последовательности областей, которые ограничивают амплифицируемый сегмент ДНК (праймеры). Эти олигонуклетиды служат праймерами ДНК-полимеразы. Затем осуществляют стадии тепловой денатурации (92-95°С) для разделения двух нитей ДНК, гибридизации с двумя специфическими праймерами за счет снижения температуры (50-55°С) и удлинения праймеров с помощью ДНК-полимеразы при температуре 70-72°.
Такие праймеры, позволяющие осуществлять амплификацию каждого из аллелей полиморфизма rs908832 гена АВСА2, и, в частности, содержащегося в незначительном количестве аллеля, а также их комплементарные последовательности составляют другие объекты настоящей заявки. Преимущественно, они имеют соответствующие последовательности, такие, что число оснований между их соответствующими сайтами гибридизации в молекуле ДНК составляет от 25 пар оснований до 2500 пар оснований и, предпочтительно, от 100 пар оснований до 500 пар оснований.
Преимущественно, такие праймеры находятся между примерно 15-30 смежными нуклеотидами последовательности SEQ ID № 3 или SEQ ID № 4. Предпочтительно речь идет о паре праймеров, имеющих последовательности SEQ ID № 6 и SEQ ID № 7.
Согласно предпочтительному варианту осуществления, объектом настоящей заявки является способ, отличающийся тем, что амплифицированную ДНК, несущую содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832, отличают от амплифицированной ДНК, не несущей этого аллеля, путем специфической гибридизации двух зондов, каждый из которых является специфическим для одной из двух форм полиморфизма. Эти зонды, также как их комплементарные последовательности, составляют другие объекты настоящей заявки.
Эти зонды преимущественно состоят из, соответственно, примерно 12-17 смежных нуклеотидов последовательности SEQ ID № 3 или SEQ ID № 4. Предпочтительно, они имеют, соответственно, последовательности SEQ ID № 8 и SEQ ID № 9.
Амплифицированную ДНК, несущую содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832, также можно отличать от амплифицированной ДНК, не несущей этого аллеля, с помощью способа, в случае которого используют активность 5'-нуклеазы ДНК-полимеразы I (TaqMan).
Согласно предпочтительному способу осуществления, объектом настоящей заявки является способ, отличающийся тем, что амплифицированную ДНК, несущую полиморфизм rs908832, отличают от амплифицированной ДНК, не несущей этого полиморфизма, путем анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (RFLP). Предпочтительно, рестрикционные фрагменты получают путем расщепления амплифицированной ДНК с помощью фермента рестрикции до миграции в геле агарозы, переноса на мембрану методом саузерн-блоттинга и гибридизации.
Для достижения сразу гораздо большей чувствительности и наилучшей специфичности, также можно осуществлять две последовательные PCR, используя две разные пары праймеров (“внутригенная PCR”): первую пару внешних праймеров, которая позволяет получать фрагмент амплифицированной ДНК, как в классической PCR, и вторую пару внутренних праймеров для амплификации фрагмента ДНК, полученного путем первой PCR.
Для обнаружения генетического отпечатка желательной области, фрагменты ДНК, полученные путем PCR, также могут быть разделены путем электрофореза по их размеру и визуализированы благодаря ВЕТ (этидиумбромид) и ультрафиолетовым лучам.
Особенно представляющая интерес возможность в настоящем случае заключается в осуществлении PCR при использовании первого праймера, имеющего на своем 3'-конце мутированную нуклеотидную последовательность, и второго праймера, имеющего на своем 3'-конце исходную нуклеотидную последовательность. Различие температуры денатурации в этих двух случаях и, следовательно, эффективности амплификации, позволяет отличать мутантную ДНК от исходной ДНК.
Согласно другой альтернативе, амплифицированные фрагменты ДНК прямо идентифицируют путем переноса через точечные отверстия в матрице (метод дот-блоттинга), который состоит в помещении образца фрагментов ДНК, полученных путем PCR, на найлоновый фильтр, в осуществлении денатурации фрагментов ДНК, их гибридизации со специфическим радиоактивным зондом и промывке для удаления избытка незафиксированного радиоактивного продукта с последующим снятием авторадиограммы. Обнаружение также может быть осуществлено другими способами благодаря использованию специфических зондов, включающих маркер, другой, чем радиоактивный, например, краситель или еще флуоресцентный маркер.
Согласно другой альтернативе, также можно обнаруживать наличие или отсутствие мутаций ДНК, включающих полиморфизм rs908832, путем прямого секвенирования всей или части амплифицированных фрагментов ДНК. Такой способ состоит в обнаружении нуклеотидной последовательности на уровне полиморфизма rs908832. Секвенирование может быть осуществлено любым способом, известным специалисту в данной области, например, методом Sanger или еще методом Maxam и Gilbert.
Согласно следующей альтернативе, обнаружение наличия или отсутствия ДНК, несущей полиморфизм rs908832, может быть осуществлено, используя метод переноса по Саузерну (саузерн-блоттинг), который состоит в осуществлении электрофореза фрагментов ДНК, полученных после воздействия одного или нескольких ферментов рестрикции. Гель затем денатурируют и осуществляют перенос на найлоновую мембрану. Эта мембрана предназначена для осуществления гибридизации со специфическим зондом. После промывки для удаления избытка незафиксированного радиоактивного продукта на мембрану наносят пленку. Таким образом могут быть выявлены одна или несколько полос, соответствующих фрагментам ДНК, распознаваемым зондом.
Также можно использовать способ RFLP, ассоциированный с методом саузерн-блоттинга и/или PCR, для обнаружения наличия или отсутствия полиморфизма rs908832. RFLP позволяет сравнивать ДНК различных индивидов и исследовать, проявились ли точечные мутации, указывая на наличие или отсутствие сайтов рестрикции. Две ДНК с идентичной последовательностью, обработанные ферментами рестрикции, дают идентичные фрагменты и получаемые с этими фрагментами саузерн-блоты, следовательно, будут идентичными. Напротив, если сайт рестрикции исчез или же появился вследствие мутации, фрагменты не будут иметь идентичные размеры, что будет видимым на авторадиограммах. И это точно также, если новый сайт рестрикции появился вследствие мутации.
Еще можно обнаруживать полиморфизм rs908832 гена АВСА2 путем определения нуклеотида в положении 2185 транскрипта, кодирующего белок АВСА2.
Все способы, описанные выше, хорошо известны специалисту в данной области. Может быть использован любой другой известный способ, также приспособленный для обнаружения наличия или отсутствия полиморфизма rs908832. На этом основании можно назвать, например, методы “лигазной цепной реакции”, “амплификации с замещением цепи”, “базирующейся на транскрипции амплификации” и т.д. Предпочтительно, вышеуказанные стадии обнаружения осуществляют путем PCR, RFLP, саузерн-блоттинга и/или путем комбинации этих способов согласно методам, описанным в литературе (см., например: Gough и др., Nature, 347, 773 (1990); Kagimoto и др., J. Biol. Chem., 265, 17209 (1990); Wolf и др., The Lancet, 336, 1452 (1990); Hayashi и др., Nucleic Acids Res., 19, 4797 (1991); Daly и др., Pharmacogenetics, 1, 33 (1991); Spurr и др., Methods Enzymol., 206, 149 (1991); Armstrong и др., The Lancet, 339, 1017 (1992); Kurth и др., Am. J. of Med. Genet., 48, 166 (1993); McCann и др., J. Neurol. Sci., 153, 50 (1997); Stroombergen и др., Hum and Exper. Toxicol., 18, 141 (1999)).
Все эти способы обнаружения особенно пригодны, так как они представляют собой основу, позволяющую обнаруживать, может ли быть то или иное лицо поражено болезнью Альцгеймера или же оно обладает повышенным риском развития болезни Альцгеймера.
Таким образом, другой объект настоящего изобретения относится к способу анализа биологических образцов, взятых у лица, который состоит в:
а) определении генотипа гена АВСА2 вышеуказанного субъекта;
b) конвертировании полученных в п. а) данных для прогнозирования риска развития болезни Альцгеймера у вышеуказанного субъекта и эффективности терапевтических обработок, предусматриваемых для этого заболевания.
Согласно другому аспекту, настоящее изобретение относится также к наборам или комплектам для диагностики или прогноза болезни Альцгеймера у лица.
Такие наборы могут находиться в форме упаковки с отделениями для помещения различных емкостей, таких, как, например, ампулы или пробирки. Каждая из этих емкостей включает различные компоненты, необходимые для осуществления обнаружения наличия или отсутствия ДНК, несущей полиморфизм rs908832.
Вышеуказанные компоненты, позволяющие осуществлять реакцию или реакции обнаружения, выбирают среди вышеуказанных. Речь может идти, например, о:
- паре праймеров, гибридизирующихся с определенной областью гена АВСА2, и, в случае необходимости, средствах, необходимых для осуществления реакции амплификации, или
- олигонуклеотидных зондах, в случае необходимости, иммобилизированных на носителе и включающих обнаруживаемый маркер, и, в случае необходимости, реагентах, необходимых для осуществления реакции гибридизации.
Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения болезни Альцгеймера, отличающийся тем, что он включает:
- по меньшей мере одну стадию обнаружения наличия содержащегося в незначительном количестве аллеля полиморфизма rs908832 у лица;
- введение соединения или смеси соединений, известных своей активностью против болезни Альцгеймера, лицу, имеющему содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832.
Предпочтительно, болезнью является болезнь Альцгеймера раннего типа.
Следующим объектом настоящего изобретения является способ селекции соединения, предназначенного для введения индивиду с заболеванием, ассоциированным с содержащимся в незначительном количестве аллелем полиморфизма rs908832 гена АВСА2, отличающийся тем, что он включает:
а. по меньшей мере одну стадию обнаружения наличия содержащегося в незначительном количестве аллеля полиморфизма rs908832 гена АВСА2 в биологическом образце вышеуказанного индивида,
b. селекцию соответствующего соединения, если имеется вышеуказанный аллель.
Другим объектом настоящего изобретения является способ селекции соединения, предназначенного для введения индивиду с болезнью Альцгеймера, отличающийся тем, что он включает:
а. по меньшей мере одну стадию обнаружения наличия содержащегося в незначительном количестве аллеля полиморфизма rs908832 гена АВСА2 в биологическом образце вышеуказанного индивида,
b. селекцию соответствующего соединения, если имеется вышеуказанный аллель.
Настоящая заявка, кроме того, относится к применению соединения или смеси соединений, известных своей активностью против болезни Альцгеймера, для получения лекарственного средства в целях лечения пациента, пораженного болезнью Альцгеймера, у которого до лечения обнаружено наличие содержащегося в незначительном количестве аллеля полиморфизма rs908832.
Вышеуказанными соединениями, известными своей активностью против болезни Альцгеймера, могут быть, например, ингибиторы ацетилхолинэстеразы (AchEIs, такие, как донепецил (арисепт), галантамин (реминил) или экселон (ривастигмин)), антагонисты рецептора канала NMDA (такие, как мемантин (эбикса)), ингибиторы продуцирования амилоидного пептида, такие, как BMS 299897, или будущие агенты-модуляторы активности АВСА2.
Соединения ассоциации могут быть введены перорально, парентерально, трансдермально или ректально, либо одновременно, либо раздельно, либо распределенно во времени.
Соединения используют для приготовления лекарственных средств в виде фармацевтических композиций, содержащих ассоциацию одного или нескольких соединений, таких, как указанные выше, с фармацевтически приемлемым наполнителем.
В качестве твердых композиций для перорального введения могут быть использованы таблетки, пилюли, порошки (желатиновые капсулы, крахмальные облатки) или гранулы. В этих композициях действующие начала смешаны, в токе аргона, с одним или несколькими инертными разбавителями, такими, как крахмал, целлюлоза, сахароза, лактоза или диоксид кремния. Эти композиции также могут включать вещества, другие, чем разбавители, например, одну или несколько смазок, таких, как стеарат магния или тальк, краситель, защитное покрытие (драже) или лак.
В качестве жидких композиций для перорального введения можно использовать фармацевтически приемлемые растворы, суспензии, эмульсии, сиропы и эликсиры, содержащие инертные разбавители, такие, как вода, этанол, глицерин, растительные масла или парафиновое масло. Эти композиции могут включать вещества, другие, чем разбавители, например, смачиватели, подсластители, загустители, ароматизаторы или стабилизаторы.
Стерильными композициями для парентерального введения могут быть, предпочтительно, водные или неводные растворы, суспензии или эмульсии. В качестве растворителя или наполнителя можно использовать воду, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, в частности, оливковое масло, сложные органические эфиры для инъекций, например, этилолеат, или другие подходящие органические растворители. Эти композиции также могут содержать добавки, в частности, смачиватели, изотонизирующие средства, эмульгаторы, диспергаторы и стабилизаторы. Стерилизацию можно осуществлять несколькими способами, например, путем асептизирующей фильтрации, за счет включения в композицию стерилизующих агентов путем облучения или путем нагревания. Они также могут быть получены в виде твердых стерильных композиций, которые могут быть растворены в момент употребления в стерильной воде или любой другой стерильной инъецируемой среде.
Композициями для ректального введения являются суппозитории или ректальные капсулы, которые содержат, кроме активного продукта, эксципиенты, такие как масло какао, полусинтетические глицериды или полиэтиленгликоли.
Фармацевтические композиции, включающие ассоциацию, такую как указанная выше, обычно содержат 0,1-500 мг соединения.
Дозы зависят от искомого эффекта, продолжительности лечения и используемого пути введения; они обычно составляют 0,1-500 мг соединения в сутки перорально для взрослого.
Как правило, врач определяет соответствующую дозировку в зависимости от возраста, массы и всех других факторов, присущих подвергаемому лечению пациенту.
Настоящее изобретение относится, кроме того, к трансгенному животному, в геном которого встроена по меньшей мере одна последовательность экзогенной ДНК, несущая содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832, так, что функция гена АВСА2 является модифицированной.
Под трансгенным животным понимают любое животное, исключая человека, имеющее искусственно модифицированный геном. Модификация генома может происходить в результате альтерации или изменения одного или нескольких генов путем инсерции (“knock-in”) или делеции (“knock-out”) (инактивация/модификация генов путем гомологичной рекомбинации) или за счет сверхпродуцирования человеческого гена под контролем специфических промоторов нейронных (таких как ThyI, PDGF или прион) или глиальных (как GFAP) клеточных типов в случае мыши. Эта модификация может быть вызвана воздействием классических модифицирующих или мутагенных факторов или по меньшей мере может быть осуществлена путем стабильной инсерции полигенного экспрессирующего кластера, позволяющего осуществлять экспрессию гибридного гена. В частности, можно, например, поступать согласно способам, идентичным или аналогичным таковым, описанным в Международных заявках WO 01/02552 или еще WO 01/13176.
Модификация генома может также происходить в результате инсерции гена (генов) или замены гена (генов) в его (их) исходной или мутированной форме.
Модификации преимущественно осуществляют в репродуктивных исходных клетках.
В настоящее время, модификация генома при использовании технологии инсерции (“knock-in”) и делеции (“knock-out”) в случае мыши в качестве модели ограничена тем, что доступны единственные исходные клетки (так называемые клетки “ES”), обладающие способностью колонизировать зародышевую линию, происходящую из эмбриона мыши. Когда клеточные линии ES будут установлены для других видов, эти технологии могут быть легко применены специалистом к этим другим видам для генерирования моделей КО и/или KI. Кроме того, подходы, основанные на использовании олигонуклеотидов (ДНК, РНК или гибридов), индивидуальных или связанных с ферментами, модифицирующими ДНК/РНК, могут быть использованы для введения определенной модификации/мутации в предопределенный локус в геноме. Точно также облучения или химические мутагены, которые индуцируют алеаторные модификации в геноме, могут быть использованы, если они комбинированы с эффективным набором биологических маркеров (фенотип) и с процессом позиционного клонирования в большом объеме.
Наиболее прямым подходом к модификации генома лабораторных животных (мыши, крысы, коровы, свиньи, овцы...), однако, является алеаторная интеграция трансгенов путем микроинъекции линеаризированной ДНК в один или два пронуклеуса оплодотворенных ооцитов на стадии одной клетки (предпочтительно, для избежания генерации химерных животных, хотя инъекция на стадии двух или более клеток также может быть осуществлена). Как правило, трансген состоит из двух частей: элементы регуляции, которые осуществляют пространственно-временной контроль в отношении экспрессии РНК, кодируемой ДНК, и расположенная рядом ДНК (кДНК или геномный фрагмент). Эти два элемента (элемент регуляции и ДНК, кодирующая желательный белок) могут быть гомологичны или же гетерологичны геному-мишени. Представляющих интерес трансгенных животных, как правило, выбирают среди млекопитающих, исключая человека. Речь может идти, например, о мышиных, а именно о мышах, крысах и морских свинках, кроликах, кошках, собаках, овцах или еще быках. Предпочтительно речь идет о мышах, крысах или кроликах, получаемых классическими способами трансгенеза. Другими объектами настоящего изобретения являются исходные клеточные линии и клеточные линии, образующиеся путем дифференцировки из этих исходных клеточных линий, в геном которых встроена по меньшей мере одна последовательность геномной экзогенной ДНК, которая несет содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832.
Вкратце, получение трансгенных животных, исходных клеточных линий и клеточных линий, образующихся путем дифференцировки, согласно изобретению, заключается в способе осуществления генерации трансгенных животных за счет инсерции путем гомологичной рекомбинации геномной экзогенной ДНК, кодирующей белок АВСА2, в соответствующий ген животного (инсерцию трансгена целенаправленно осуществляют непосредственно после промотора гена животного так, чтобы обеспечить функциональный профиль экспрессии трансгена и предотвратить экспрессию эндогенного гена животного: “элиминируют”) или же за счет инсерции специфической мутации согласно настоящему изобретению, соответствующей изоформе человеческого гена АВСА2, в эндогенный ген животного (модификацию осуществляют путем гомологичной рекомбинации в исходных клетках: “встраивают”) или же путем сверхпродуцирования гена АВСА2, несущего содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832.
В случае мышей, эти животные могут быть преимущественно скрещены с трансгенными мышами, несущими человеческий ген АРР с мутациями типа Альцгеймера и которые обеспечивают амилоидные бляшки. Таким образом полученные “двойные” трансгенные животные репродуцируют генотип, наблюдаемый у пациентов, пораженных болезнью Альцгеймера или обладающих риском этой болезни. Контроль генотипа полиморфизма rs908832 таким образом полученного новорожденного животного может быть осуществлен при использовании уже описанных выше способов, в частности, при использовании реакции амплификации (PCR) и/или саузерн-блоттинга.
Такие трансгенные животные особенно интересны, так как они представляют собой предпочтительную модель для понимания болезни Альцгеймера, которая очень точно воспроизводит характеристики болезни Альцгеймера. По сравнению с известными моделями, эта модель позволяет, в частности, выявить соединения, особенно применимые для лечения болезни Альцгеймера, особенно такой, как описанная у человека. Этими соединениями могут быть химические молекулы, пептидные или белковые молекулы, антитела, химерные молекулы, а также антисмысловые ДНК или рибозимы.
Таким образом выявленные соединения могут быть использованы в качестве лекарственного средства, индивидуально или в сочетании с фармацевтически приемлемым наполнителем, чтобы получить фармацевтическую композицию. Речь может идти, в частности, о стерильных изотонических солевых растворах (как растворы мононатрийфосфата, динатрийфосфата, хлорида натрия, хлорида калия, хлорида кальция или хлорида магния, и т.д., или растворы смесей таких солей) или о сухих композициях, особенно лиофилизированных, которые путем добавления, в зависимости от случая, стерильной воды или физиологической сыворотки позволяют получать инъецируемые растворы. Введения могут быть осуществлены стереотаксическим, локальным, оральным, парентеральным, внутриносовым, внутривенным, внутримышечным, подкожным, внутриглазным, трансдермальным и т.д. путем.
Выявление вышеописанных соединений базируется на введении в контакт, в частности, путем введения, такого, как, например, инъекция, животной модели согласно изобретению с соединением или смесью соединений, предположительно обладающим (обладающих) активностью, и определении затем эффекта или эффектов соединений, особенно на церебральном уровне модели, в отношении различных биохимических и/или гистологических изменений.
Кроме факта возможности тестирования in vivo терапевтических соединений, позволяющих предупреждать, уменьшать интенсивность или излечивать болезнь Альцгеймера, эти трансгенные животные также позволяют располагать животной моделью болезни Альцгеймера, пригодной для скрининга относящихся к окружающей среде факторов, которые индуцируют или ускоряют патогенез, или еще для исследования состояния во время развития болезни и изучения различных биологических механизмов, которые принимают активное участие, например, с целью изучения новых лекарственных средств или определения эффективных количеств лекарственных средств и токсичности. Таким образом, другой объект настоящего изобретения относится к применению трансгенного животного, исходных клеточных линий или образующихся путем дифференцировки клеточных линий, таких как указанные выше, для тестирования активности соединений или способов, предназначенных для предупреждения и/или лечения болезни Альцгеймера. Следующий объект изобретения относится к клетке, извлеченной из трансгенных животных, таких как указанные выше, а также к ее применению для выявления соединений, предназначенных для лечения болезни Альцгеймера.
Выявление вышеуказанных соединений базируется на введении в контакт клеточных экстрактов из животной модели, согласно изобретению, с соединением или смесью соединений, предположительно обладающим (обладающих) активностью, и определении затем эффекта или эффектов соединений на уровне целых клеток, в гомогенатах клеток или в субклеточной фракции по различным параметрам, таким как, например, гибель клетки.
Кроме вышеуказанных положений, настоящее изобретение включает также другие характеристики и преимущества, относящиеся к примерам и фигурам, которые следуют и которые должны рассматриваться как поясняющие изобретение, без ограничения ими его объема охраны.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Исследование генотипа полиморфизма rs908832 гена АВСА2 в образце, взятом на анализ у пациентов
Была использована коллекция ДНК, происходящих от пациентов индоевропейской расы, пораженных болезнью Альцгеймера, и контрольных индивидов, после их согласия.
Частоту встречаемости полиморфизмов определяли по генотипажу образца 47 индивидов из набора, выпускаемого институтом Coriell (США).
Десять полиморфизмов (в том числе полиморфизм rs908832) были отобраны на основании их локализации в гене и их частоты встречаемости для генотипирования в случае пациентов, пораженных болезнью Альцгеймера, и контрольных индивидов.
Генотипы были получены методом анализа 5'-нуклеазы (способ различения аллелей; фирма Applied Biosystems, Foster City, США), затем осуществляли статистический анализ типа Chi2, тестируя ассоциацию каждого из этих маркеров с болезнью Альцгеймера (тест на гетерогенность). Для анализа группы различали в зависимости от возраста, в котором происходит появление болезни ((ранний (до или в 65 лет) или поздний (после 65 лет)), и ее происхождения (спорадическое (первый известный случай) или семейное (другие, уже известные в том же самом семействе случаи)).
Результаты, полученные для полиморфизма rs908832, являются следующими:
- частота встречаемости содержащегося в незначительном количестве аллеля (Т) у пациентов (440 генотипов): 7,4
- частота встречаемости содержащегося в незначительном количестве аллеля (Т) у контрольных индивидов (519 генотипов): 3,4.
Пропорции Hardy Weinberg были подтверждены у пациентов и контрольных индивидов: не наблюдают значительного отклонения, что подтверждает, что нет ошибки генотипирования.
Результаты тестов, осуществленных в случае пациентов, которые обладают ранней формой заболевания (до или в 65 лет):
- 136 спорадических случаев в противоположность 272 контрольным;
- тест на гетерогенность: chi2 (1dd1) = 22,69 р = 2.10-6;
- аллельный тест (частота встречаемости (Т) в противоположность частоте встречаемости (С)): chi2 (1dd1)=21,27 р=4.10-6;
- 104 семейных случая в противоположность 272 контрольным;
- тест на гетерогенность: chi2 (2dd1)=7,80 р=0,02;
- аллельный тест (частота встречаемости (Т) в противоположность частоте встречаемости (С)): chi2 (1dd1)=7,27 р=7.10-3.
Нечетное отношение оценивали путем логической регрессии у 240 пациентов с ранней формой заболевания (выравнивание в отношении пола и состояния АРОЕ-ε4). Результат также является показательным: OR=3,97; IC=[2,23-7,09].
Полученные значения остаются значительными (порог фиксирован при 0,05) даже после корректировки для множественных тестов по методу Bonferroni.
Эти результаты указывают, что ген АВСА2 представляет собой важный ген в этиологии болезни Альцгеймера.
В отношении риска этот результат величины того же порядка, как и риск, придаваемый аполипротеином Е4, который представляет собой наиболее сильный, известный на сегодняшний день фактор риска для болезни Альцгеймера.
Пример 2
Получение трансгенных мышей
1. Генерация трансгенной мыши, экспрессирующей человеческий белок АВСА2
Мутагенез человеческого АВСА2 осуществляли за счет использования системы мутагенеза in vitro, как SculptorTM (Amersham, Франция). Кодирующую область АВСА2 субклонировали в векторе клонирования типа Bluescriprt (Stratagene) и мутации вводили согласно протоколу, выпускаемому изготовителем, путем использования олигонуклеотидов, содержащих желательную мутацию. Мутированные последовательности подтверждали путем анализа последовательности.
2. Генерация и идентификация трансгенных мышей АВСА2
Для конструкции трансгена, геномную ДНК, кодирующую АВСА2 и имеющую содержащийся в незнечительном количестве аллель полиморфизма rs908832 человека, субклонировали в полилинкере специфического трансгенного экспрессирующего вектора некоторых тканей/типов клеток, как THYI (Luthi и др., J. Neuroscience, 17, 4688-99), PDGF или прион для нейронных типов или GFAP для астроцитарных типов. Набор для получения плазмиды (Quiagen) использовали для получения суперспирализованной ДНК. Для микроинъекции, последовательности вектора удаляли путем рестрикции с помощью определенного фермента рестрикции, оставляющего интактной всю совокупность трансгена и отделяющего его от непригодных последовательностей вектора клонирования. Затем фрагмент, содержащий полигенный экспрессирующий кластер, очищали путем электрофореза на геле агарозы.
Аликвоты, предназначенные для микроинъекции, подвергали диализу против буфера ТЕ (10 мМ Трис, рН 7,4; 0,1 мМ ЭДТУ) на плавающем фильтре (Millipore; тип мембраны: VS; 0,025 мкм), затем отфильтровывали (Spin-X; Costar; полиацетатная мембрана; 0,22 мкм). ДНК для микроинъекции разводили до конечной концентрации 1-2 нг/мкл. Очищенный фрагмент инъецировали в один из двух пронуклеусов оплодотворенных ооцитов мыши. Выжившие эмбрионы немедленно трансплантировали в яйцевод приемных матерей (“несущие в себе псевдозародыш”). Наличие трансгена у новорожденных определяли либо путем PCR, либо путем саузерн-блоттинга, используя специфические зонды/последовательности. За счет совокупности этих анализов могут быть исключены все основные реаранжировки или делеции трансгена у исходных мышей и их потомства.
3. Генерация трансгенных животных, включающих человеческий белок АВСА2 в их геноме
Используют технологию гомологичной рекомбинации в исходных клетках для введения гена АВСА2, имеющего содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832 человека, в желательное предопределенное положение в гене мыши. Праймеры и образцы, описанные в настоящем изобретении, могут быть легко использованы для скрининга изогенных геномных библиотек мыши (библиотеки лямбда, ВАС, YAC...), чтобы выделить и клонировать соответствующий ген мыши. Вышеуказанный ген мыши охарактеризовывали по его геномной организации и его последовательности, используя стандартные способы, известные специалисту в данной области (картография сайтов рестрикции, секвенирования, биоаналитические инструменты), чтобы определить точное место, куда человеческая ДНК должна быть встроена для получения желательного профиля экспрессии человеческой ДНК, полностью прерывая экспрессию мышиного гена. Как только идентифицировано точное положение, конструируют стандартный вектор для скрининга для исходных клеток (то есть вектор, имеющий маркеры для селекции желательных “явлений”, причем все вышеуказанные маркеры хорошо известны специалисту в данной области). Кластер для селекции (ген устойчивости к антибиотику) быстро фланкируют 3'- и 5'-концами фрагментов геномной ДНК мыши (2-6 т.н.), идентичными 3'- и 5'-удлиняющим сегментам последовательности мышиного гена АВСА2, расположенного непосредственно после селекционированного сайта инсерции.
На основе знания мышиного гена, генерировали вектор положительного контроля для скрининга рекомбинантных исходных клеток (вектор репродуцирует локус мышиного гена, благоприятствуя интеграции) с целью оптимизации и осуществления процесса скрининга в большом объеме.
Согласно стандартным методикам, ДНК очищали для опытов по скринингу. Вектор для скрининга вводили в исходные клетки, используя стандартизированные способы электропорации, после чего исходные клеточные клоны подвергали процессу последовательного скрининга (антибиотики) для благоприятствования исходным клеточным клонам, несущим желательную рекомбинацию. Вообще, скрининг занимает около двух недель. Резистентные исходные клеточные клоны подвергали скринингу путем PCR и/или саузерн-блоттинга.
Исходные клеточные клоны, обладающие желательной рекомбинацией без другой модификации, обнаруживаемой в их геноме, продуцировали для получения достаточного количества клеток. Затем вышеуказанные клетки инъецировали в эмбрионы в возрасте трех с половиной суток, полученные от самки, оплодотворенной естественным путем. Выжившие бластоциты (включающие исходные клетки) имплантировали в самку-реципиента, в которой происходит развитие бластоцитов до их предела и которая производит на свет новорожденных мышат, состоящих из клеток, происходящих от бластоцитов-хозяев и исходных клеточных клонов. Этот тип животного называют “химерным животным”.
Этих химер (предпочтительно самцов, так как большинство исходных клеточных линий получено самцами) спаривали с мышами дикого типа, чтобы получить гетерозиготных животных для модификации. Отбор путем спаривания гетерозиготных животных между собой позволяет генерировать гомозиготных животных.
4. Генерация трансгенных животных, включающих содержащийся в незначительном количестве аллель полиморфизма rs908832 человеческого гена АВСА2 в их соответствующем гене
Таким же образом, как описано выше, мышиный ген выделяли и охарактеризовывали. Для этого типа модификации существенным является сравнение человеческого гена и мышиного гена для идентификации точного положения, где находящийся у человека сайт мутации должен быть введен в мышиный ген. На этой стадии существенным является биоанализ. С этой целью получали вектор для скрининга и связывали таким же образом, как описано выше. После успешной гомологичной рекомбинации ничего другого, чем желательный сайт мутации, не заменяли в кодирующей последовательности мышиного гена. Некоторые маркеры селекции могут оставаться в интроне, но они обычно не оказывают никакого влияния на экспрессию гена. Если необходимо, они могут быть удалены путем использования второй генерации векторов для скрининга, включающих элементы распознавания рекомбиназы. При сборе конструкции стадии идентичны таковым процесса, описанного выше.
Как правило, эти трансгенные мыши АВСА2 благоприятно скрещивают с трансгенными мышами, экспрессирующими ген АРР, несущий мутации семейных форм болезни Альцгеймера, чтобы способствовать отложению амилоидных бляшек.
5. Нейрогистопатология
Получение церебральной ткани
Мыши должны быть подвергнуты глубокой анестезии (пентобарбитал: 60 мг/мл/кг, интраперитонеально; кетамин: 40 мг/мл/кг интраперитонеально), затем перфузии транскардиально с помощью физиологической сыворотки, затем параформальдегида (4% в забуференном фосфатом физиологическом растворе). Головной мозг мышей затем извлекали, потом постфиксировали в том же самом растворе для фиксации в течение 24 часов при температуре 4°С. После фиксации головной мозг мышей разделяли на левую и правую половины, после чего, согласно классическому протоколу, наносили защитное покрытие при использовании парафина.
Левые половины головного мозга с нанесенным защитным покрытием из парафина трансгенных и нетрансгенных мышей, а также блоки ткани посмертного человеческого головного мозга (фронтальная кора головного мозга) субъектов, пораженных болезнью Альцгеймера, и контрольного субъекта разрезали до толщины 6 мкм (серийные срезы) путем использования микротома (LEICA RM 2155, Франция). Соответствующие блоки ткани правых половин головного мозга трансгенных и нетрансгенных мышей разрезали до толщины 25 мкм.
Иммунореактивность против амилоидного пептида Аβ обнаруживается, как обычно описывается, специалистом.
Claims (3)
1. Пара праймеров, позволяющая осуществлять амплификацию содержащегося в незначительном количестве аллеля полиморфизма rs908832 для детекции болезни Альцгеймера, отличающаяся тем, что он состоит из:
первого праймера, содержащего 15-30 смежных нуклеотидов последовательности SEQ ID №3; и
второго праймера, содержащего 15-30 смежных нуклеотидов последовательности, комплементарной SEQ ID №3.
первого праймера, содержащего 15-30 смежных нуклеотидов последовательности SEQ ID №3; и
второго праймера, содержащего 15-30 смежных нуклеотидов последовательности, комплементарной SEQ ID №3.
2. Пара праймеров по п.1, отличающаяся тем, что соответствующие последовательности праймеров являются такими, что число оснований между их соответствующими сайтами гибридизации в молекуле ДНК составляет от 100 до 500 пар оснований.
3. Пара праймеров по п.1 или 2, отличающаяся тем, что:
указанный первый праймер имеет последовательность SEQ ID №6, и
указанный второй праймер имеет последовательность SEQ ID №7.
указанный первый праймер имеет последовательность SEQ ID №6, и
указанный второй праймер имеет последовательность SEQ ID №7.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0307501A FR2856409B1 (fr) | 2003-06-20 | 2003-06-20 | Methodes de detection de la maladie d'alzheimer |
| FR0307501 | 2003-06-20 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006101561/13A Division RU2380423C2 (ru) | 2003-06-20 | 2004-06-17 | Способ обнаружения болезни альцгеймера |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009104533A RU2009104533A (ru) | 2010-08-20 |
| RU2483108C2 true RU2483108C2 (ru) | 2013-05-27 |
Family
ID=33484616
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009104533/10A RU2483108C2 (ru) | 2003-06-20 | 2004-06-17 | Способы обнаружения болезни альцгеймера |
| RU2006101561/13A RU2380423C2 (ru) | 2003-06-20 | 2004-06-17 | Способ обнаружения болезни альцгеймера |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006101561/13A RU2380423C2 (ru) | 2003-06-20 | 2004-06-17 | Способ обнаружения болезни альцгеймера |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1639139B1 (ru) |
| JP (1) | JP4691491B2 (ru) |
| KR (1) | KR101170651B1 (ru) |
| CN (1) | CN1809645B (ru) |
| AR (1) | AR044492A1 (ru) |
| AT (1) | ATE518005T1 (ru) |
| AU (1) | AU2004249919B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0411658A (ru) |
| CA (1) | CA2529633C (ru) |
| CY (1) | CY1111970T1 (ru) |
| DK (1) | DK1639139T3 (ru) |
| ES (1) | ES2370491T3 (ru) |
| FR (1) | FR2856409B1 (ru) |
| HR (1) | HRP20110778T1 (ru) |
| IL (1) | IL172690A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA05012800A (ru) |
| NO (1) | NO20060257L (ru) |
| PL (1) | PL1639139T3 (ru) |
| PT (1) | PT1639139E (ru) |
| RU (2) | RU2483108C2 (ru) |
| SI (1) | SI1639139T1 (ru) |
| TW (1) | TWI352738B (ru) |
| WO (1) | WO2004113568A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA200509945B (ru) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2315559C1 (ru) * | 2006-10-13 | 2008-01-27 | Иван Васильевич Максимович | Способ комплексной лучевой диагностики доклинических и клинических стадий болезни альцгеймера |
| CN103013989A (zh) * | 2011-09-23 | 2013-04-03 | 深圳北京大学香港科技大学医学中心 | 与老年痴呆症发病相关的细胞周期依赖性激酶5的单核苷酸多态性位点 |
| GB201212084D0 (en) * | 2012-07-06 | 2012-08-22 | Randox Lab Ltd | Tropomyosin isoforms related to alzheimers disease and mild cognitive impairment |
| CN102768189B (zh) * | 2012-07-30 | 2014-11-19 | 黄石 | 一种药物筛选方法 |
| CN104313144B (zh) * | 2014-10-16 | 2017-02-01 | 卫生部北京医院 | 一种检测阿尔茨海默病易感性的试剂 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001014414A2 (en) * | 1999-08-20 | 2001-03-01 | Activepass Pharmaceuticals, Inc. | Human abc2 transporter and uses thereof |
| WO2002064781A2 (en) * | 2001-02-09 | 2002-08-22 | Active Pass Pharmaceuticals, Inc. | Regulation of amyloid precursor protein expression by modification of abc transporter expression or activity |
| RU2195497C2 (ru) * | 1997-01-07 | 2002-12-27 | Рисерч Дивелопмент Фаундейшн | Масштабное генотипирование заболеваний и диагностический тест на мозжечковую атаксию тип 6 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5046413B2 (ja) * | 2000-07-20 | 2012-10-10 | セフアロン・インコーポレーテツド | ヒトｆａｄプレセニリン突然変異をもつ標的遺伝子組換え非ヒト哺乳動物および生殖による子孫 |
| JP2004147502A (ja) * | 2000-07-26 | 2004-05-27 | Banyu Pharmaceut Co Ltd | ヒト及びラットａｂｃａ２遺伝子 |
| EP1397385A2 (en) * | 2001-06-08 | 2004-03-17 | Xenon Genetics, Inc. | Methods for treating disorders of the nervous and reproductive systems |
-
2003
- 2003-06-20 FR FR0307501A patent/FR2856409B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-06-09 AR ARP040101994A patent/AR044492A1/es active IP Right Grant
- 2004-06-17 PL PL04767370T patent/PL1639139T3/pl unknown
- 2004-06-17 RU RU2009104533/10A patent/RU2483108C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-06-17 JP JP2006516300A patent/JP4691491B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-06-17 CA CA2529633A patent/CA2529633C/fr not_active Expired - Fee Related
- 2004-06-17 KR KR1020057024490A patent/KR101170651B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2004-06-17 MX MXPA05012800A patent/MXPA05012800A/es active IP Right Grant
- 2004-06-17 DK DK04767370.2T patent/DK1639139T3/da active
- 2004-06-17 ES ES04767370T patent/ES2370491T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-17 RU RU2006101561/13A patent/RU2380423C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-06-17 PT PT04767370T patent/PT1639139E/pt unknown
- 2004-06-17 HR HR20110778T patent/HRP20110778T1/hr unknown
- 2004-06-17 SI SI200431759T patent/SI1639139T1/sl unknown
- 2004-06-17 WO PCT/FR2004/001509 patent/WO2004113568A2/fr not_active Ceased
- 2004-06-17 BR BRPI0411658-5A patent/BRPI0411658A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-06-17 AT AT04767370T patent/ATE518005T1/de active
- 2004-06-17 CN CN2004800172750A patent/CN1809645B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-06-17 EP EP04767370A patent/EP1639139B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-17 AU AU2004249919A patent/AU2004249919B2/en not_active Ceased
- 2004-06-18 TW TW093117572A patent/TWI352738B/zh not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-12-07 ZA ZA200509945A patent/ZA200509945B/en unknown
- 2005-12-19 IL IL172690A patent/IL172690A0/en not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-01-18 NO NO20060257A patent/NO20060257L/no not_active Application Discontinuation
-
2011
- 2011-10-27 CY CY20111101024T patent/CY1111970T1/el unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2195497C2 (ru) * | 1997-01-07 | 2002-12-27 | Рисерч Дивелопмент Фаундейшн | Масштабное генотипирование заболеваний и диагностический тест на мозжечковую атаксию тип 6 |
| WO2001014414A2 (en) * | 1999-08-20 | 2001-03-01 | Activepass Pharmaceuticals, Inc. | Human abc2 transporter and uses thereof |
| WO2002064781A2 (en) * | 2001-02-09 | 2002-08-22 | Active Pass Pharmaceuticals, Inc. | Regulation of amyloid precursor protein expression by modification of abc transporter expression or activity |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gijselinck et al. | Granulin mutations associated with frontotemporal lobar degeneration and related disorders: an update | |
| JP5123936B2 (ja) | 認知症の検出および治療 | |
| Krüger et al. | Increased susceptibility to sporadic Parkinson's disease by a certain combined α‐synuclein/apolipoprotein E genotype | |
| JP6078211B2 (ja) | 自閉症および自閉症の表現型に関連する遺伝子変化ならびに自閉症の診断および治療に対するその使用方法 | |
| JP4430815B2 (ja) | パーキンソン病に関与するｄｎａまたは遺伝子 | |
| JP5686335B2 (ja) | 筋萎縮性側索硬化症の診断マーカー、及び、方法、並びに、筋萎縮性側索硬化症を発症するモデル動物、及び、モデル細胞 | |
| WO2019078684A2 (ko) | 감각신경성 난청 진단을 위한 마커 tmem43 및 그의 용도 | |
| RU2483108C2 (ru) | Способы обнаружения болезни альцгеймера | |
| US7803538B2 (en) | Method for detecting Alzheimer's disease | |
| KR102168332B1 (ko) | 망막색소변성증의 진단에 이용 가능한 15개의 ush2a 유전자 돌연변이체 및 이외 용도 | |
| FR2828212A1 (fr) | Methodes de diagnostic et de pronostic de la maladie de parkinson | |
| US6869768B2 (en) | Association between the acid phosphatase (ACP1) gene and Alzheimer's disease | |
| JP7391349B2 (ja) | 正常圧水頭症の発症リスクを試験する方法、及び該方法に用いるキット | |
| HK1090392B (en) | Methods for the diagnosis and prognosis of alzheimer's disease | |
| CN119120683A (zh) | Elavl1作为注意缺陷与多动障碍药物靶点或制备注意缺陷与多动障碍动物模型的应用 | |
| 水野裕理 | MUTYH Actively Contributes to Microglial Activation and Impaired Neurogenesis in the Pathogenesis of Alzheimer's Disease | |
| US20040058334A1 (en) | Novel method for genetic linkage analysis by mitotic recombination | |
| Mizuno et al. | Research Article MUTYH Actively Contributes to Microglial Activation and Impaired Neurogenesis in the Pathogenesis of Alzheimer’s Disease | |
| WO2024129986A1 (en) | Gene editing systems for treating and preventing fgf14 gaa cerebellar ataxias | |
| Pau et al. | Molecular genetics of Alzheimer’s disease | |
| PAGANONI et al. | 32| UPPER MOTOR NEURON DISORDERS HEREDITARY SPASTIC PARAPLEGIA AND PRIMARY LATERAL SCLEROSIS: CLINICAL TRIALS, PATHOLOGY, INSIGHTS FROM GENETICS AND PATHOGENESIS, IN VITRO AND IN VIVO DISEASE MODELS | |
| HUP0100409A2 (hu) | A kedélybetegség génje |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150618 |