RU2444519C2

RU2444519C2 - Противоопухолевые соединения дигидропиран-2-она

Info

Publication number: RU2444519C2
Application number: RU2009101150/04A
Authority: RU
Inventors: ЛОПЕС Ма Хесус МАРТИН (ES); Лопес Ма Хесус Мартин; МОЛИНЕРО Лаура КОЭЛЬО (ES); МОЛИНЕРО Лаура КОЭЛЬО; БЕНИТЕС Хосе Фернандо РЕЙЕС (ES); БЕНИТЕС Хосе Фернандо РЕЙЕС; ВИСЕНТЕ Альберто РОДРИГЕС (ES); ВИСЕНТЕ Альберто РОДРИГЕС; ГАРСИА-ИБАРРОЛА Мария ГАРРАНСО (ES); ГАРСИА-ИБАРРОЛА Мария ГАРРАНСО; ПЕРЕС Кармен МУРСИЯ (ES); ПЕРЕС Кармен МУРСИЯ; СОЛЬОСО Андрес ФРАНСЕСЧ (ES); Сольосо Андрес Франсесч; САНЧО Франсиско САНЧЕС (ES); САНЧО Франсиско САНЧЕС; МАРЧАНТЕ Мария дель Кармен КУЭВАС (ES); Марчанте Мария дель Кармен Куэвас; РОДРИГЕС Рохелио ФЕРНАНДЕС (ES); РОДРИГЕС Рохелио ФЕРНАНДЕС
Original assignee: Фарма Мар, С.А.
Priority date: 2006-06-16
Filing date: 2007-06-15
Publication date: 2012-03-10
Also published as: TWI373469B; BRPI0713031A2; CY1112103T1; CN101679340A; CA2654334A1; BRPI0713031B1; AU2007259257A1; EP2032551B1; US8501968B2; SG174830A1; AU2007259257B2; ZA200810315B; ES2371942T3; HK1130052A1; EP2404912A3; EP2404913A3; US20090186938A1; EP2032551A1; PT2032551E; BRPI0722429A2

Abstract

Изобретение относится к новым соединениям дигидропиран-2-она формулы (I),

где R₁ выбирают из водорода, OR_a, OCOR_a, OCOOR_a, NR_aR_b, NR_aCOR_b и NR_aC(NR_a)NR_aR_b; каждый R₂ и R₃ независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила; каждый R₄₁, R₄₂, R₄₃, R₄₄, R₄₅, R₄₆, R₄₇ и R₄₈ независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила; каждый R₅, R₆ и R₇ независимо выбирают из водорода, COR_a, COOR_a, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила, или R₅ и R₄₈ вместе с соответствующими атомом N и атомом С, к которым они присоединены, могут образовывать замещенную или незамещенную гетероциклическую группу; каждый R_a и R_b независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила, замещенного или незамещенного арила и замещенной или незамещенной гетероциклической группы; и каждая пунктирная линия обозначает необязательную дополнительную связь; или его фармацевтически приемлемым солям, таутомерам или стереоизомерам. Изобретение также относится к способу получения противоопухолевой композиции, применению и способу лечения рака. 6 н. и 40 з.п. ф-лы, 10 табл., 12 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к новым противоопухолевым соединениям, содержащим их фармацевтическим композициям, их применению в качестве противоопухолевых агентов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

В 1990, Gunasekera SP et al. описали выделение нового полигидроксилированного лактона, (+)-дискодермолид, из глубоководной карибской губки Discodermia dissoluta (Gunasekera SP et al. J. Org. Chem. 1990, 55, 4912-4915, and J. Org. Chem. 1991, 56, 1346).

(+)-Дискодермолид

Это соединение относится к мощным противоопухолевым агентам (Hung DT et al. Chem. Biol. 1996, 3, 287-293 and ter Haar E et al. Biochemistry 1996, 35, 243-250), обладающим действием, подобным действию клинически проверенного противоракового агента паклитаксел (Schiff PB et al. Nature 1979, 277, 665-667). Оба натуральных продукта подавляют клеточный цикл в M фазе, способствуют образованию микротрубочек и оказывают одинаковое ингибирующее действие на рак молочной железы (IC₅₀ 2,4 нМ и 2,1 нМ, соответственно).

С другой стороны, некоторые необычные линейные дипептиды, содержащие функциональную группу N-ациленамид, были выделены из миксобактерий, принадлежащих к роду Chondromyces (Kunze B et al. J. Antibiot. 1994, 47, 881-886, and Jansen R et al. J. Org. Chem. 1999, 1085-1089). Более конкретно, эти соединения являются крокацинами A, B, C и D и являются группой ингибиторов транспорта электронов.

Крокацины A-D умеренно ингибируют рост некоторых грамположительных бактерий и являются мощными ингибиторами животных клеточных культур и некоторых дрожжей и грибов. Наиболее активным является крокацин D, который демонстрирует MIC 1,4 нг/мл против грибов Saccharomyces cereυisiae и сильную токсичность (IC₅₀ 0,06 мг/л) к клеточной культуре фибробластов мышей L929.

Рак является основной причиной гибели животных и человека. Колоссальные попытки делались и делаются для получения противоопухолевого агента, активного и безопасного для введения пациентам, страдающим раком. Проблема, решаемая данным изобретением, состоит в получении соединений, которые полезны для лечения рака.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В одном аспекте, данное изобретение связано с соединениями общей формулы I или их фармацевтически приемлемыми солями, производными, таутомерами, пролекарствами или стереоизомерами.

где R₁ выбирают из водорода, OR_a, OCOR_a, OCOOR_a, NR_aR_b, NR_aCOR_b и NR_aC(NR_a)NR_aR_b;

каждый R₂ и R₃ независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила;

каждый R₄₁, R₄₂, R₄₃, R₄₄, R₄₅, R₄₆, R₄₇ и R₄₈ независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂- C₁₂ алкинила;

каждый R₅, R₆ и R₇ независимо выбирают из водорода, COR_a, COOR_a, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила, или R₅ и R₄₈ вместе с соответствующим атомом N и атомом C, к которым они присоединены, могут образовывать замещенную или незамещенную гетероциклическую группу;

каждый R_a и R_b независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила, замещенного или незамещенного арила и замещенной или незамещенной гетероциклической группы; и

каждая пунктирная линия обозначает необязательную дополнительную связь.

В другом аспекте, данное изобретение относится к соединениям формулы I или их фармацевтически приемлемым солям, производным, таутомерам, пролекарствам или стереоизомерам для применения в качестве лекарственного средства, в частности в качестве лекарственного средства для лечения рака.

В другом аспекте, данное изобретение также относится к применению соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, производных, таутомеров, пролекарств или стереоизомеров для лечения рака или для получения лекарственного средства, предпочтительно, для лечения рака. Другими аспектами данного изобретения являются способы лечения и соединения для применения в этих способах. Поэтому данное изобретение также относится к способу лечения любого млекопитающего, в частности человека, пораженного раком, который включает введение пораженному раком пациенту терапевтически эффективного количества соединения, определенного выше.

В другом аспекте, данное изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы I или их фармацевтически приемлемые соли, производные, таутомеры, пролекарства или стереоизомеры, вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Данное изобретение также относится к выделению соединений формулы I из губки семейства Raspailiidae, род Lithoplocamia, вид lithistoides, способу их получения и образованию производных этих соединений.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ

Данное изобретение относится к соединениям общей формулы I, как описано выше.

В этих соединениях заместители могут быть выбраны согласно следующим принципам.

Алкильные группы могут быть разветвленные или неразветвленные и, предпочтительно, имеют от 1 до около 12 атомов углерода. Один более предпочтительный класс алкильных групп содержит от 1 до около 6 атомов углерода. Даже более предпочтительные алкильные группы содержат 1, 2, 3 или 4 атома углерода. Метил, этил, пропил, изопропил и бутил, включая трет-бутил, втор-бутил, изобутил, являются особенно предпочтительными алкильными группами в соединениях в соответствии с данным изобретением. Другой предпочтительный класс алкильных групп содержит от 6 до около 10 атомов углерода; и даже более предпочтительно, 7, 8 или 9 атомов углерода. Гептил, октил и нонил являются наиболее предпочтительными алкильными группами в этом классе.

Предпочтительные алкенильные и алкинильные группы в соединениях в соответствии с данным изобретением могут быть разветвленными или неразветвленными, содержать одну или более ненасыщенных связей и от 2 до около 12 атомов углерода. Один более предпочтительный класс алкенильных и алкинильных групп содержит от 2 до около 6 атомов углерода. Даже более предпочтительными являются алкенильные и алкинильные группы, содержащие 2, 3 или 4 атома углерода. Другой предпочтительный класс алкенильных и алкинильных групп содержит от 4 до около 10 атомов углерода, еще более предпочтительно, от 6 до около 10 атомов углерода; и даже более предпочтительно, 7, 8 или 9 атомов углерода.

Подходящие арильные группы в соединениях в соответствии с данным изобретением включают соединения с одним или несколькими кольцами, включая соединения с несколькими кольцами, которые содержат отдельные и/или конденсированные арильные группы. Типовые арильные группы содержат от 1 до 3 раздельных или конденсированных колец и от 6 до около 18 атомов углерода в кольце. Предпочтительно, арильные группы содержат от 6 до около 10 атомов углерода в кольце. Особенно предпочтительные арильные группы включают замещенный или незамещенный фенил, замещенный или незамещенный нафтил, замещенный или незамещенный бифенил, замещенный или незамещенный фенантрил и замещенный или незамещенный антрил.

Подходящие гетероциклические группы включают гетероароматические и гетероалициклические группы, содержащие от 1 до 3 отдельных или конденсированных колец и от 5 до около 18 атомов в кольце. Предпочтительно, гетероароматические и гетероалициклические группы содержат от 5 до около 10 атомов в кольце. Подходящие гетероароматические группы в соединениях в соответствии с данным изобретением содержат один, два или три гетероатома, выбранные из N, O или S атомов, и включают, например, кумарил, включая 8-кумарил, хинолил, включая 8-хинолил, пиридил, пиразинил, пиразолил, пиримидинил, фурил, пирролил, тиенил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, тетразолил, изоксазолил, оксазолил, имидазолил, индолил, изоиндолил, индазолил, индолизинил, фталазинил, птеридинил, пуринил, оксадиазолил, тиадиазолил, фуразанил, пиридазинил, триазинил, циннолинил, бензимидазолил, бензофуранил, бензотиофенил, бензотиазолил, бензоксазолил, хиназолинил, хиноксалинил, нафтиридинил и фуропиридил. Подходящие гетероалициклические группы в соединениях в соответствии с данным изобретением содержит один, два или три гетероатома, выбранные из атомов N, O или S, и включают, например, пирролидинил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, тетрагидротиенил, тетрагидротиопиранил, пиперидил, морфолинил, тиоморфолинил, тиоксанил, пиперазинил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, гомопиперидил, оксепанил, тиепанил, оксазепинил, диазепинил, тиазепинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, индолинил, 2H-пиранил, 4H-пиранил, диоксанил, 1,3-диоксоланил, пиразолинил, дитианил, дитиоланил, дигидропиранил, дигидротиенил, дигидрофуранил, пиразолидинил, имидазолинил, имидазолидинил, 3-азабицикло[3.1.0]гексил, 3-азабицикло[4.1.0]гептил, 3H-индолил и хинолизинил.

Указанные выше группы могут быть замещены в одном или более доступных положениях подходящими группами, такими как OR', =O, SR', SOR', SO₂R', NO₂, NHR', N(R')₂, =N-R', NHCOR', N(COR')₂, NHSO₂R', NR'C(=NR')NR'R', CN, галоген, COR', COOR', OCOR', OCONHR', OCON(R')₂, защищенная OH, замещенный или незамещенный арил и замещенная или незамещенная гетероциклическая группа, где каждую из R' групп независимо выбирают из группы, включающей водород, OH, NO₂, NH₂, SH, CN, галоген, COH, COалкил, CO₂H, замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкенил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкинил, замещенный или незамещенный арил и замещенную или незамещенную гетероциклическую группу. Если такие группы замещены сами, заместители могут быть выбраны из представленного выше списка.

Подходящие галогеновые заместители в соединениях в соответствии с данным изобретением включают F, Cl, Br и I.

Подходящие защитные группы для OH хорошо известны специалисту в данной области техники. Общий обзор защитных групп в органической химии представлен в Wuts, PGM and Greene TW Protecting Groups in Organic Synthesis, 4^th Ed. Wiley-Interscience, и в Kocienski PJ Protecting Groups, 3^rd Ed. Georg Thieme Verlag. В этих ссылках представлены разделы, описывающие защитные группы для OH. Все эти источники включены посредством ссылок полностью. Примеры таких защищенных OH включают простые эфиры, силилэфиры, сложные эфиры, сульфонаты, сульфенаты и сульфинаты, карбонаты и карбаматы. При применении простых эфиров защитные группы для OH могут быть выбраны из группы, включающей метил, метоксиметил, метилтиометил, (фенилдиметилсилил)метоксиметил, бензилоксиметил, п-метоксибензилоксиметил, [(3,4-диметоксибензил)окси]метил, п-нитробензилоксиметил, o-нитробензилоксиметил, [(R)-1-(2-нитрофенил)этокси]метил, (4-метоксифенокси)метил, гваяколметил, [(п-фенилфенил)окси]метил, трет-бутоксиметил, 4-пентенилоксиметил, силоксиметил, 2-метоксиэтоксиметил, 2-цианоэтоксиметил, бис(2-хлорэтокси)метил, 2,2,2-трихлорэтоксиметил, 2-(триметилсилил)этоксиметил, метоксиметил, o-бис(2-ацетоксиэтокси)метил, тетрагидропиранил, фтористый тетрагидропиранил, 3-бромтетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, 1-метоксициклогексил, 4-метокситетрагидропиранил, 4-метокситетрагидротиопиранил, 4-метокситетрагидротиопиранил S,S-диоксид, 1-[(2-хлор-4-метил)фенил]-4-метоксипиперидин-4-ил, 1-(2-фторфенил)-4-метоксипиперидин-4-ил, 1-(4-хлорфенил)-4-метоксипиперидин-4-ил, 1,4-диоксан-2-ил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофуранил, 2,3,3α,4,5,6,7,7α-октагидро-7,8,8-триметил-4,7-метанобензофуран-2-ил, 1-этоксиэтил, 1-(2-хлорэтокси)этил, 2-гидроксиэтил, 2-бромэтил, 1-[2-(триметилсилил)этокси]этил, 1-метил-1-метоксиэтил, 1-метил-1-бензилоксиэтил, 1-метил-1-бензилокси-2-фторэтил, 1-метил-1-феноксиэтил, 2,2,2-трихлорэтил, 1,1-дианизил-2,2,2-трихлорэтил, 1,1,1,3,3,3-гексафтор-2-фенилизопропил, 1-(2-цианоэтокси)этил, 2-триметилсилилэтил, 2-(бензилтио)этил, 2-(фенилселенил)этил, трет-бутил, циклогексил, 1-метил-1'-циклопропилметил, аллил, пренил, циннамил, 2-феналлил, пропаргил, п-хлорфенил, п-метоксифенил, п-нитрофенил, 2,4-динитрофенил, 2,3,5,6-тетрафтор-4-(трифторметил)фенил, бензил, п-метоксибензил, 3,4-диметоксибензил, 2,6-диметоксибензил, o-нитробензил, п-нитробензил, пентадиенилнитробензил, пентадиенилнитропиперонил, галобензил, 2,6-дихлорбензил, 2,4-дихлорбензил, 2,6-дифторбензил, п-цианобензил, фтористый бензил, 4-фтористый алкоксибензил, триметилсилилксилил, п-фенилбензил, 2-фенил-2-пропил, п-ациламинобензил, п-азидобензил, 4-азидо-3-хлорбензил, 2-трифторметилбензил, 4-трифторметилбензил, п-(метилульфинил)бензил, п-силетанилбензил, 4-ацетоксибензил, 4-(2-триметилсилил)этоксиметоксибензил, 2-нафтилметил, 2-пиколил, 4-пиколил, 3-метил-2-пиколил N-оксидо, 2-хинолинилметил, 6-метокси-2-(4-метилфенил-4-хинолинметил, 1-пиренилметил, дифенилметил, 4-метоксидифенилметил, 4-фенилдифенилметил, п,п'-динитробензгидрил, 5-дибензосуберил, тирфенилметил, трис(4-трет-бутилфенил)метил, α-нафтилдифенилметил, п-метоксифенилдифенилметил, ди(п-метоксифенил)фенилметил, три(п-метоксифенил)метил, 4-(4'-бромфенацилокси)фенилдифенилметил, 4,4',4"-трис(4,5-дихлорфталимидофенил)метил, 4,4',4"-трис(левулиноилоксифенил)метил, 4,4',4"-трис(бензоилоксифенил)метил, 4,4'-диметокси-3"-[N-(имидазолилметил)]тритил, 4,4'-диметокси-3"-[N-(имидазолилэтил)карбамоил]тритил, бис(4-метоксифенил)-1'-пиренилметил, 4-(17-тетрабензо[a,c,g,i]фторенилметил)-4,4''-диметокситритил, 9-антрил, 9-(9-фенил)ксантенил, 9-фенилтиоксантил, 9-(9-фенил-10-оксо)антрил, 1,3-бензодитиолан-2-ил и 4,5-бис(этоксикарбонил)-[1,3]-диоксолан-2-ил, бензизотиазолил S,S-диоксид. В случае силилэфиров, защитная группа для OH может быть выбрана из группы, включающей триметилсилил, триэтилсилил, триизопропилсилил, диметилизопропилсилил, диэтилизопропилсилил, диметилгексилсилил, 2-норборнилдиметилсилил, трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил, трибензилсилил, три-п-ксилилсилил, трифенилсилил, дифенилметилсилил, ди-трет-бутилметилсилил, бис(трет-бутил)-1-пиренилметоксисилил, трис(триметилсилил)силил, (2-гидроксистирил)диметилсилил, (2-гидроксистирил)диизопропилсилил, трет-бутилметоксифенилсилил, трет-бутоксидифенилсилил, 1,1,3,3-тетраизопропил-3-[2-(трифенилметокси)этокси]дисилоксан-1-ил и фтористый силил. В случае применения сложных эфиров в качестве защитных групп для OH, они могут быть выбраны из группы, включающей формиат, бензоилформиат, ацетат, хлорацетат, дихлорацетат, трихлорацетат, трихлорацетамид, трифторацетат, метоксиацетат, трифенилметоксиацетат, феноксиацетат, п-хлорфеноксиацетат, фенилацетат, дифенилацетат, 3-фенилпропионат, бисфтористый цепной пропаноил, 4-пентеноат, 4-оксопентаноат, 4,4-(этилендитио)пентаноат, 5[3-бис(4-метоксифенил)гидроксиметилфенокси]левулинат, пивалоат, 1-адамантоат, кротонат, 4-метоксикторонат, бензоат, п-фенилбензоат, 2,4,6-триметилбензоат, 4-бромбензоат, 2,5-дифторбензоат, п-нитробензоат, пиколинат, никотинат, 2-(азидометил)бензоат, 4-азидобутират, (2-азидометил)фенилацетат, 2-{[(тритилтио)окси]метил}бензоат, 2-{[(4-метокситритилтио)окси]метил}бензоат, 2-{[метил(тритилтио)амино]метил}бензоат, 2-{{[(4-метокситритил)тио]метиламино}метил}бензоат, 2-(аллилокси)фенилацетат, 2-(пренилоксиметил)бензоат, 6-(левулинилоксиметил)-3-метокси-2-нитробензоат, 6-(левулинилоксиметил)-3-метокси-4-нитробензоат, 4-бензилоксибутират, 4-триалкилсилилоксибутират, 4-ацетокси-2,2-диметилбутират, 2,2-диметил-4-пентеноат, 2-йодбензоат, 4-нитро-4-метилпентаноат, o-(дибромметил)бензоат, 2-формилбензолсульфонат, 4-(метилтиометокси)бутират, 2-(метилтиометоксиметил)бензоат, 2-(хлорацетоксиметил)бензоат, 2-[(2-хлорацетокси)этил]бензоат, 2-[2-(бензилокси)этил]бензоат, 2-[2-(4-метоксибензилокси)этил]бензоат, 2,6-дихлор-4-метилфеноксиацетат, 2,6-дихлор-4-(1,1,3,3-тетраметилбутил)феноксиацетат, 2,4-бис(1,1-диметилпропил)феноксиацетат, хлордифенилацетат, изобутират, моносукциноат, (Е)-2-метил-2-бутеноат, o-(метоксикарбонил)бензоат, α-нафтоат, нитрат, алкил N,N,N',N'-тетраметилфосфордиамидат и 2-хлорбензоат. В случае сульфонатов, сульфенатов и сульфинатов, защитная группа для OH может быть выбрана из группы, включающей сульфат, аллилсульфонат, метансульфонат, бензилсульфонат, тозилат, 2-[(4-нитрофенил)этил]сульфонат, 2-трифторметилбензолсульфонат, 4-монометокситритилсульфенат, алкил 2,4-динитрофенилсульфенат, 2,2,5,5-тетраметилпирролидин-3-он-1-сульфинат, борат и диметилфосфинотиолил. В случае карбонатов, защитная группа для OH может быть выбрана из группы, включающей метилкарбонат, метоксиметилкарбонат, 9-фторенилметилкарбонат, этилкарбонат, бромэтилкарбонат, 2-(метилтиометокси)этилкарбонат, 2,2,2-трихлорэтилкарбонат, 1,1-диметил-2,2,2-трихлорэтилкарбонат, 2-(триметилсилил)этилкарбонат, 2-[диметил(2-нафтилметил)силил]этилкарбонат, 2-(фенилсульфонил)этилкарбонат, 2-(трифенилфосфонил)этилкарбонат, цис-[4-[[(метокситритил)сульфенил]окси]тетрагидрофуран-3-ил]оксикарбонат, изобутилкарбонат, трет-бутилкарбонат, винилкарбонат, аллилкарбонат, циннамилкарбонат, пропаргилкарбонат, п-хлорфенилкарбонат, п-нитрофенилкарбонат, 4-этокси-1-нафтилкарбонат, 6-бром-7-гидроксикумарин-4-илметилкарбонат, бензилкарбонат, o-нитробензилкарбонат, п-нитробензилкарбонат, п-метоксибензилкарбонат, 3,4-диметоксибензилкарбонат, антрахинон-2-илметилкарбонат, 2-данзилэтилкарбонат, 2-(4-нитрофенил)этилкарбонат, 2-(2,4-динитрофенил)этилкарбонат, 2-(2-нитрофенил)пропилкарбонат, алкил 2-(3,4-метилендиокси-6-нитрофенил)пропилкарбонат, 2-циано-1-фенилэтилкарбонат, 2-(2-пиридил)амино-1-фенилэтилкарбонат, 2-[N-метил-N-(2-пиридил)]амино-1-фенилэтилкарбонат, фенацилкарбонат, 3',5'-диметоксибензоинкарбонат, метил дитиокарбонат и S-бензилтиокарбонат. И в случае карбаматов, защитная группа для OH может быть выбрана из группы, включающей диметилтиокарбамат, N-фенилкарбамат, N-метил-N-(o-нитрофенил)карбамат. Упоминание этих групп не должно рассматриваться как ограничение объема данного изобретения, так как они указаны только как иллюстрация защитных групп для OH, но другие группы, имеющие указанную функцию, могут быть известны специалисту в данной области техники, и они также рассматриваются как входящие в объем данного изобретения.

Термин "фармацевтически приемлемые соли, производные, пролекарства" относится к любой фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру, сольвату, гидрату или любому другому соединению, которое, при введении пациенту, способно давать (прямо или косвенно) описанное здесь соединение. Однако должно быть понятно, что нефармацевтически приемлемые соли также попадают в объем данного изобретения, так как они могут применяться для получения фармацевтически приемлемых солей. Получение солей, пролекарств и производных может проводиться способами, известными в данной области техники.

Например, фармацевтически приемлемые соли представленных здесь соединений синтезируют из исходного соединения, которое содержит основную или кислотную группу, обычными химическими методами. Обычно такие соли, например, получают взаимодействием свободной кислоты или основания этих соединений со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде, или в органическом растворителе, или в их смеси. Обычно предпочтительна водная среда, такая как простой эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Примеры кислотно-аддитивных солей включают минеральные кислотно-аддитивные соли, такие как, например, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, сульфат, нитрат, фосфат, и органические кислотно-аддитивные соли, такие как, например, ацетат, трифторацетат, малеат, фумарат, цитрат, оксалат, сукцинат, тартрат, малат, манделат, метансульфонат и п-толуолсульфонат. Примеры основно-аддитивных солей включают неорганические соли, такие как, например, соли натрия, калия, кальция и аммония, и органические основно-аддитивные соли, такие как, например, соли этилендиамина, этаноламина, N,N-диалкиленэтаноламина, триэтаноламина и соли основных аминокислот.

Соединения в соответствии с данным изобретением могут быть в кристаллической форме, либо в виде свободных соединений, либо в виде сольватов (например, гидратов), и подразумевается, что обе формы включены в объем данного изобретения. Способы сольватации широко известны в данной области техники.

Любое соединение, которое является пролекарством соединения формулы I, попадает в объем и сущность данного изобретения. Термин «пролекарство» применяют в его широчайшем смысле, и он охватывает такие производные, которые превращаются in vivo в соединения в соответствии с данным изобретением. Такие производные легко распознаются специалистами в данной области техники и включают, например, соединения, в которых свободная гидроксигруппа превращается в производное сложного эфира.

Любое соединение, указанное здесь, представляет конкретное соединение, а также определенные варианты или формы. В частности, указанные здесь соединения могут иметь асимметричные центры и поэтому существуют в различных энантиомерных формах. Все оптические изомеры и стереоизомеры указанных здесь соединений и их смеси включены в объем данного изобретения. Таким образом, любое данное соединение, указанное здесь, представляет любой рацемат, одну или более энантиомерных форм, одну или более диастереомерных форм, одну или более атропизомерных форм и их смеси. В частности, соединения в соответствии с данным изобретением, представленные указанной выше формулой I, могут включать энантиомеры в зависимости от их асимметрии или диастереоизомеры. Стереоизомерия около двойной связи также возможна, поэтому в некоторых случаях молекула может существовать как (E)-изомер или (Z)-изомер. Если молекула содержит несколько двойных связей, каждая двойная связь будет иметь собственную изомерию, которая может быть одинаковой или отличной от стереоизомерии других двойных связей в молекуле. Отдельные изомеры и смеси изомеров попадают в объем данного изобретения.

Далее, указанные здесь соединения могут существовать в виде геометрических изомеров (т.е. цис и транс изомеров), в виде таутомеров или атропизомеров. Более конкретно, термин «таутомер» относится к одному из двух или более структурных изомеров соединения, которые существуют в равновесии и легко превращаются из одной изомерной формы в другую. Обычные таутомерные формы включают амин-имин, амид-имид, кето-енол, лактам-лактим и т.д. Дополнительно, любое указанное здесь соединение представляет гидраты, сольваты и полиморфы, их смеси, когда такие формы существуют в среде. Кроме того, указанные здесь соединения могут существовать в меченных изотопами формах. Все геометрические изомеры, таутомеры, атропизомеры, гидраты, сольваты, полиморфы и меченные изотопами формы указанных здесь соединений попадают в объем данного изобретения.

Для более конкретного описания, некоторые количественные выражения, данные здесь, не обозначены термином «около». Понятно, что независимо от того, применяется термин «около» недвусмысленно или нет, каждое указанное здесь количество относится к фактическому данному значению, а также относится к приблизительным значениям такого данного значения, которые обоснованно предполагаются специалистом в данной области техники, включая эквиваленты и приближенные значения, возникающие из-за экспериментальных и/или условий измерения для такого данного значения.

В соединениях общей формулы I, особенно предпочтительным R₁ является водород, OR_a и OCOR_a, где R_a выбирают из водорода и замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила. Особенное предпочтительным R_a является водород и замещенный или незамещенный C₁-C₆ алкил; и даже более предпочтительным является водород, метил, этил, пропил, изопропил и бутил, включая трет-бутил. Водород, OH и метокси являются наиболее предпочтительными R₁ группами.

Особенно предпочтительными R₂ и R₃ являются водород и замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил. Более предпочтительными R₂ и R₃ являются водород и замещенный или незамещенный C₁-C₆ алкил, и даже более предпочтительно, водород.

Особенно предпочтительными R₄₁, R₄₂, R₄₃, R₄₄, R₄₅, R₄₆, R₄₇ и R₄₈ являются водород и замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил. Более предпочтительными R₄₁, R₄₂, R₄₃, R₄₄, R₄₅, R_46, R₄₇ и R₄₈ являются водород и замещенный или незамещенный C₁-C₆ алкил, и даже более предпочтительным является водород, замещенный или незамещенный метил, замещенный или незамещенный этил, замещенный или незамещенный пропил, замещенный или незамещенный изопропил и замещенный или незамещенный бутил, включая замещенный или незамещенный трет-бутил, замещенный или незамещенный изобутил и замещенный или незамещенный втор-бутил. Предпочтительными заместителями указанных групп являются OR', =O, SR', SOR', SO₂R', NO₂, NHR', N(R')₂, =N-R', NHCOR', N(COR')₂, NHSO₂R', NR'C(=NR')NR'R', CN, галоген, COR', COOR', OCOR', OCONHR', OCON(R')₂, защищенный OH, замещенный или незамещенный арил и замещенная или незамещенная гетероциклическая группа, где каждую из R' независимо выбирают из группы, включающей водород, OH, NO₂, NH₂, SH, CN, галоген, COH, COалкил, COOH, замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкенил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкинил, замещенный или незамещенный арил и замещенную или незамещенную гетероциклическую группу. Если такие группы сами замещены, заместители могут быть выбраны из представленного выше списка. Даже более предпочтительными заместителями указанных выше групп являются OH, SCH₃, SH, NH₂, NHC(=NH)NH₂, CONH₂, COOH, фенил, п-, м- или o-гидроксифенил, индолил, включая 1-, 2- и 3-индолил, и имидазолил, включая 4- и 5-имидазолил. Водород, метил, изопропил, трет-бутил и бензил являются наиболее предпочтительными R₄₁, R₄₂, R₄₃, R₄₄, R₄₅, R₄₆, R₄₇ и R₄₈ группами. Более конкретно, особенно предпочтительно R₄₂, R₄₄, R₄₅, R₄₆ и R₄₇ являются водородом. Особенно предпочтительно R₄₁ и R₄₃ являются метилом. И особенно предпочтительно R₄₈ является изопропилом, трет-бутилом или бензилом.

Особенно предпочтительными R₅ и R₆ являются водород и замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил. Более предпочтительными R₅ и R₆ являются водород и замещенный или незамещенный C₁-C₆ алкил; и даже более предпочтительными являются водород, метил, этил, пропил, изопропил и бутил, включая трет-бутил. Водород является наиболее предпочтительным.

В другом варианте изобретения, также предпочтительно, чтобы R₅ и R₄₈ вместе с соответствующими N атомом и C атомом, к которым они присоединены, образовывали замещенную или незамещенную гетероциклическую группу. Предпочтительной гетероциклической группой является пирролидинил, включая 1-, 2- и 3-пирролидинил.

Особенно предпочтительным R₇ является водород, замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил и замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкенил, и более предпочтительным, является водород, замещенный C₁-C₁₂ алкил и замещенный C₂-C₁₂ алкенил. Предпочтительный замещенный алкил и замещенный алкенил может присутствовать не только в одном, но и в двух или более заместителях. Более предпочтительными алкильными группами являются такие, которые содержат от 6 до около 10 атомов углерода; и даже более предпочтительно, 7, 8 или 9 атомов углерода. Гептил, октил и нонил являются наиболее предпочтительными алкильными группами. С другой стороны, более предпочтительными алкенильными группами являются такие, которые содержат от 6 до около 10 атомов углерода; и даже более предпочтительно, 7, 8 или 9 атомов углерода. Окта-1,6-диентил, окта-1,5-диенил, окта-1,4-диенил, окта-1,3-диенил, нона-1,7-диенил, нона-1,6-диенил, нона-1,5-диенил, нона-1,4-диенил, нона-1,3-диенил, гепта-1,5-диенил, гепта-1,4-диенил, гепта-1,3-диенил являются наиболее предпочтительными алкенильными группами. Предпочтительными заместителями для указанных алкильных и алкенильных групп являются OR', =O, SR', SOR', SO₂R', NO₂, NHR', N(R')₂, =N-R', NHCOR', N(COR')₂, NHSO₂R', NR'C(=NR')NR'R', CN, галоген, COR', COOR', OCOR', OCONHR', OCON(R')₂, защищенный OH, замещенный или незамещенный арил и замещенная или незамещенная гетероциклическая группа, где каждую из R' групп независимо выбирают из группы, включающей водород, OH, NO₂, NH₂, SH, CN, галоген, COH, COалкил, COOH, замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкенил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкинил, замещенный или незамещенный арил, и замещенная или незамещенная гетероциклическая группа. Если такие группы сами являются замещенными, заместители могут быть выбраны из представленного выше списка. Более предпочтительными заместителями для указанных выше алкильных и алкенильных групп являются галоген, OR', =O, OCOR^', OCONHR', OCON(R')₂ и защищенный OH, где каждую из R' групп предпочтительно выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила и замещенного или незамещенного арила. Даже более предпочтительными заместителями для указанных алкильных и алкенильных групп являются галоген, OR', =O, OCONHR', OCON(R')₂ и защищенный OH, где защитную группу для OH предпочтительно выбирают из триметилсилила, триэтилсилила, триизопропилсилила, диметилизопропилсилила, диэтилизопропилсилила, диметилгексилсилила, 2-норборнилдиметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, трет-бутилдифенилсилила, трибензилсилила, три-п-ксилилсилила, трифенилсилила, дифенилметилсилила, ди-трет-бутилметилсилила, бис(трет-бутил)-1-пиренилметоксисилила, трис(триметилсилил)силила, (2-гидроксистирил)диметилсилила, (2-гидроксистирил)диизопропилсилила, трет-бутилметоксифенилсилила, трет-бутоксидифенилсилила, 1,1,3,3-тетраизопропил-3-[2-(трифенилметокси)этокси]дисилоксан-1-ила и фтористого силила и где каждую из R' групп более предпочтительно выбирают из водорода, незамещенного C₁-C₆ алкила и замещенного или незамещенного арила. Cl, OH, =O, OCONH₂, OCONHфенил и защищенный OH, где защитную группу для OH предпочтительно выбирают из триметилсилила, триэтилсилила, триизопропилсилила, диметилизопропилсилила, диэтилизопропилсилила, диметилгексилсилила, 2-норборнилдиметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, трет-бутилдифенилсилила, трибензилсилила, три-п-ксилилсилила, трифенилсилила, дифенилметилсилила, ди-трет-бутилметилсилила, бис(трет-бутил)-1-пиренилметоксисилила, трис(триметилсилил)силила, (2-гидроксистирил)диметилсилила, (2-гидроксистирил)диизопропилсилила, трет-бутилметоксифенилсилила, трет-бутоксидифенилсилила, 1,1,3,3-тетраизопропил-3-[2-(трифенилметокси)этокси]дисилоксан-1-ила и фтористого силила, являются наиболее предпочтительными заместителями для таких алкильных и алкенильных групп.

Особенно предпочтительным является присутствие одной или более дополнительных связей в местах, обозначенных пунктирной линией. Более предпочтительным является присутствие дополнительной связи во всех местах, обозначенных пунктирной линией. Кроме того, стереохимия каждой двойной связи может существовать как (E) или (Z). Отдельные изомеры и смеси изомеров попадают в объем данного изобретения.

Более конкретно, в данном изобретении представлены соединения общей формулы II или их фармацевтически приемлемые соли, производные, таутомеры, пролекарства или стереоизомеры

каждый R₄₁, R₄₃ и R₄₈ независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила;

каждый R₅, R₆ и R₇ независимо выбирают из водорода, COR_a, COOR_a, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила, или R₅ и R₄₈ вместе с соответствующими атомом N и атомом C, к которым они присоединены, могут образовывать замещенную или незамещенную гетероциклическую группу;

каждая пунктирная линия представляет необязательную дополнительную связь.

В соединениях общей формулы II, особенно предпочтительным R₁ является водород, OR_a и OCOR_a, где R_a выбирают из водорода и замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила. Особенно предпочтительным R_a является водород и замещенный или незамещенный С₁-С₆ алкил; и даже более предпочтительным является водород, метил, этил, пропил, изопропил и бутил, включая трет-бутил. Водород, OH и метокси являются наиболее предпочтительными R₁.

Особенно предпочтительными R₄₁, R₄₃ и R₄₈ являются водород и замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил. Более предпочтительными R₄₁, R₄₃ и R₄₈ являются водород и замещенный или незамещенный С₁-С₆ алкил, и даже более предпочтительным является водород, замещенный или незамещенный метил, замещенный или незамещенный этил, замещенный или незамещенный пропил, замещенный или незамещенный изопропил и замещенный или незамещенный бутил, включая замещенный или незамещенный трет-бутил, замещенный или незамещенный изобутил и замещенный или незамещенный втор-бутил. Предпочтительными заместителями указанных групп являются OR', =O, SR', SOR', SO₂R', NO₂, NHR', N(R')₂, =N-R', NHCOR', N(COR')₂, NHSO₂R', NR'C(=NR')NR'R', CN, галоген, COR', COOR', OCOR', OCONHR', OCON(R')₂, защищенный OH, замещенный или незамещенный арил и замещенная или незамещенная гетероциклическая группа, где каждую из групп R' независимо выбирают из группы, включающей водород, OH, NO₂, NH₂, SH, CN, галоген, COH, COалкил, COOH, замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкенил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкинил, замещенный или незамещенный арил и замещенную или незамещенную гетероциклическую группу. Если такие группы замещены сами, заместители могут быть выбраны из представленного выше списка. Даже более предпочтительными заместителями указанных выше групп являются OH, SCH₃, SH, NH₂, NHC(=NH)NH₂, CONH₂, COOH, фенил, п-, м- или o-гидроксифенил, индолил, включая 1-, 2- и 3-индолил, имидазолил, включая 4- и 5-имидазолил. Водород, метил, изопропил, трет-бутил и бензил являются наиболее предпочтительными R₄₁, R₄₃ и R₄₈ группами. Более конкретно, особенно предпочтительными R₄₁ и R₄₃ являются метил, и особенно предпочтительным R₄₈ является изопропил, трет-бутил или бензил.

Особенно предпочтительными R₅ и R₆ являются водород и замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил. Более предпочтительными R₅ и R₆ являются водород и замещенный или незамещенный С₁-С₆ алкил; и даже более предпочтительными являются водород, метил, этил, пропил, изопропил и бутил, включая трет-бутил. Водород является наиболее предпочтительным.

В другом варианте данного изобретения также предпочтительно, чтобы R₅ и R₄₈ вместе с соответствующими атомом N и атомом C, к которым они присоединены, образовывали замещенную или незамещенную гетероциклическую группу. Предпочтительной гетероциклической группой является пирролидинил, включая 1-, 2- и 3-пирролидинил.

Особенно предпочтительным R₇ является водород, замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил и замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкенил и, более предпочтительно, является водород, замещенный C₁-C₁₂ алкил и замещенный C₂-C₁₂ алкенил. Более предпочтительными алкильными группами являются такие, которые содержат от 6 до около 10 атомов углерода; и даже более предпочтительно, 7, 8 или 9 атомов углерода. Гептил, октил и нонил являются наиболее предпочтительными алкильными группами. С другой стороны, более предпочтительными алкенильными группами являются такие, которые содержат от 6 до около 10 атомов углерода; и даже более предпочтительно, 7, 8 или 9 атомов углерода. Окта-1,6-диенил, окта-1,5-диенил, окта-1,4-диенил, окта-1,3-диенил, нона-1,7-диенил, нона-1,6-диенил, нона-1,5-диенил, нона-1,4-диенил, нона-1,3-диенил, гепта-1,5-диенил, гепта-1,4-диенил, гепта-1,3-диенил являются наиболее предпочтительными алкенильными группами. Предпочтительными заместителями для указанных алкильных и алкенильных групп являются OR', =O, SR', SOR', SO₂R', NO₂, NHR', N(R')₂, =N-R', NHCOR', N(COR')₂, NHSO₂R', NR'C(=NR')NR'R', CN, галоген, COR', COOR', OCOR', OCONHR', OCON(R')₂, замещенный OH, замещенный или незамещенный арил и замещенная или незамещенная гетероциклическая группа, где каждую из групп R' независимо выбирают из группы, включающей водород, OH, NO₂, NH₂, SH, CN, галоген, COH, COалкил, COOH, замещенный или незамещенный C₁-C₁₂ алкил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкенил, замещенный или незамещенный C₂-C₁₂ алкинил, замещенный или незамещенный арил и замещенную или незамещенную гетероциклическую группу. Если такие группы сами замещены, заместители могут быть выбраны из представленного выше списка. Более предпочтительными заместителями для указанных выше алкильных и алкенильных групп являются галоген, OR', =O, OCOR^', OCONHR', OCON(R')₂ и защищенный OH, где каждую из групп R' предпочтительно выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила и замещенного или незамещенного арила. Даже более предпочтительными заместителями для таких алкильных и алкенильных групп являются галоген, OR', =O, OCONHR', OCON(R')₂ и защищенный OH, где защитную группу для OH предпочтительно выбирают из триметилсилила, триэтилсилила, триизопропилсилила, диметилизопропилсилила, диэтилизопропилсилила, диметилгексилсилила, 2-норборнилдиметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, трет-бутилдифенилсилила, трибензилсилила, три-п-ксилилсилила, трифенилсилила, дифенилметилсилила, ди-трет-бутилметилсилила, бис(трет-бутил)-1-пиренилметоксисилила, трис(триметилсилил)силила, (2-гидроксистирил)диметилсилила, (2-гидроксистирил)диизопропилсилила, трет-бутилметоксифенилсилила, трет-бутоксидифенилсилила, 1,1,3,3-тетраизопропил-3-[2-(трифенилметокси)этокси]дисилоксан-1-ила и фтористого силила и где каждую группу R' более предпочтительно выбирают из водорода, незамещенного С₁-С₆ алкила и замещенного или незамещенного арила. Cl, OH, =O, OCONH₂, OCONHфенил и защищенный OH, где защитную группу для OH предпочтительно выбирают из триметилсилила, триэтилсилила, триизопропилсилила, диметилизопропилсилила, диэтилизопропилсилила, диметилгексилсилила, 2-норборнилдиметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, трет-бутилдифенилсилила, трибензилсилила, три-п-ксилилсилила, трифенилсилил, дифенилметилсилил, ди-трет-бутилметилсилил, бис(трет-бутил)-1-пиренилметоксисилил, трис(триметилсилил)силила, (2-гидроксистирил)диметилсилила, (2-гидроксистирил)диизопропилсилила, трет-бутилметоксифенилсилила, трет-бутоксидифенилсилила, 1,1,3,3-тетраизопропил-3-[2-(трифенилметокси)этокси]дисилоксан-1-ила и фтористого силила, являются наиболее предпочтительными заместителями для таких алкильных и алкенильных групп.

Особенно предпочтительными соединениями в соответствии с данным изобретением являются следующие:

	Соединение 1
	Соединение 2
	Соединение 3

	Соединение 4
	Соединение 5
	Соединение 6
	Соединение 7
	Соединение 8

Соединения 1-8 выделяют из губки семейства Raspailiidae, род Lithoplocamia, вид lithistoides.

Образец Lithoplocamia lithistoides хранится в "Instituto de Ciencias del Mar y Limnologia" в Universidad Nacional Autόnoma de Mexico в Мазальтан в Мексике, с порядковым номером LEB-ICML-UNAM-11-2004. Эту губку собирают вручную пловцы с аквалангом на Мадагаскаре (S 17° 06,071'/E 49° 51,385') на глубине от 6 до 20 м, и она имеет следующее описание.

Семейство Raspailiidae: Raspailiidae Hentschel, 1923 представляют собой губки, имеющие покрытые коркой, массивные, дольчатые, веерообразные или разветвленные формы роста, обычно с очень щетинистой поверхностью. Обычно присутствует адаптированный эктосомальный скелет, состоящий из кистей или небольших тонких игл (Hooper & Wiedenmayer 1994: фиг. 17) или оксеан (Hooper & Wiedenmayer 1994: фиг. 5), окруженный отдельными длинными толстыми иглами или оксеанами. Хоаносомальный скелет варьируется от сжатого осевого скелета до перисто-сетчатых или исключительно сетчатых структур. Волокна спонгина обычно полностью окружены полыми шипами (хоаносомальные иглы, оксеаны или оба вида). Особая категория шиповидных игл (Hooper & Wiedenmayer 1994: фиг. 22) или модификации игл (например, фиг. 22-25, 28), покрытых шипами волокон, торчат под прямым углом к волокнам. Микросклеры обычно отсутствуют, хотя в некоторых родах могут иметься отдельные рафиды (Hooper & Wiedenmayer 1994: фиг. 109) или пучки (trichodragmata; Hooper & Wiedenmayer 1994: фиг. 110). Распаилиды широко распространены на глубине от мелководья до, по крайней мере, 2460 м (Hartman 1982).

Род Lithoplocamia, вид lithistoides представляет собой покрытые коркой массивные формы роста, хоаносомальный скелет представляет собой плотную изодиктиальную или неравномерно субизодиктиальную сетчатую структуру акантостронгилид, в 1 или 2 размерных категориях, без осевого сжатия, без шиповатых акантоигл, с экстраосевыми радиальными участками гладких игл и обычно без специализированного эктосомального скелета распаилид (хотя, если они присутствуют, эктосомальные шипы представляют собой длинные тонкие оксеаны); микросклеры отсутствуют.

Образцы Lithoplocamia lithistoides также собирают в Кении (S 04°40'5,5"/E 39°26'4,3" и S 03°38'36,5"/E 39°53'53,8") и Танзании (S 08°55'31,7"/E 39°34'53,5" и S 05°24,200'/E 39°47,730') на глубине от 30 до 40 м.

Кроме того, соединения в соответствии с данным изобретением могут быть получены синтезом. Например, соединение 1 может быть получено объединением различных фрагментов, как показано на схеме 1.

Схема 1

где R, R^I, R^II, R^III, R^IV, R^V, R^VI, R^VII и R^VIII являются желаемой группой или подходящей защитной группой, при необходимости.

Этот способ может включать следующие ключевые стадии:

a) амидирование йодалкенил производного (фрагмент D) фрагментом C с последующим применением стандартных методик (Kozawa Y et al. Tetrahedron Lett. 2002, 43, 111) для получения соответствующего енамида (фрагмент CD);

b) реакция сочетания Стилла между фрагментом A и фрагментом B с последующим применением известных методик органического синтеза (Scott WJ et al. J. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 4630; Labadie J W et al. J. Org. Chem. 1983, 48, 4634-4642; Farina V et al. Organic Reactions 1998, Wiley) для получения линейного полиена (фрагмент AB);

c) фрагменты AB и CD могут быть соединены с применением стандартных методик (Bodanszky M and Bodanszky A, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 1993) с получением углеродного скелета соединения 1;

d) снятие защиты со спирта OR^II с последующей лактонизацией может быть проведено известными методами органического синтеза (Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd ed., Wiley-Interscience; Burke and Danheiser, Handbook of Reagents for Organic Synthesis: Oxidizing and Reducing Agents, Wiley; Pla D et al. J. Org. Chem. 2005, 70, 8231);

e) наконец, снятие защиты со спирта OR^III с последующим образованием карбамата может быть проведено стандартными методами (Love B et al. Organic Syntheses, Coll. Vol. 5, p. 162; Vol. 48, p. 32; Muller E et al. Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), 4^th ed., Vol. 8, G. Thieme, Stuttgart, 1952, p. 137) с получением соединения 1.

Последовательность стадий может быть изменена для получения конечного соединения. Например, фрагмент BC может быть получен на первой стадии затем присоединен к фрагментам A и D с получением углеродного скелета соединения 1. Также соединение 1 может быть получено последовательным сочетанием фрагментов A, B, C и D в любом порядке. Другой вариант действий включает получение лактоновой группы фрагмента А до его сочетания с любым другим фрагментом.

Аналоги соединения 1 могут быть синтезированы способом, эквивалентным тому, который описан для соединения 1, путем выбора подходящих заместителей в промежуточных соединениях в каждом случае.

При необходимости на заместителях могут применяться подходящие защитные группы для того, чтобы не были затронуты реакционно-способные группы. Синтез может проводиться с применением предшественников заместителей, которые могут быть превращены на подходящей стадии в желаемый заместитель. Насыщенность или ненасыщенность кольцевой структуры может быть введена или удалена как часть синтеза. Исходные материалы и реагенты могут быть модифицированы при желании для того, чтобы обеспечить синтез необходимого соединения. Кроме того, из соединения 1 также могут быть синтезированы аналоги с применением обычных методов синтеза в органической химии, которые известны специалистам в данной области техники.

Указанный выше путь синтеза может быть модифицирован по желанию для получения стереоспецифических соединений, а также смесей стереоизомеров. Возможно синтезировать определенные стереоизомеры или определенные смеси различными методами, включая применение стереоспецифических реагентов или введение хиральных центров в соединения во время синтеза. Возможно введение одного или более стереоцентров во время синтеза, а также инвертировать существующие стереоцентры. Кроме того, возможно разделять стереоизомеры сразу же после синтеза соединения с применением стандартных методик разделения, известных специалисту в данной области техники.

Важной характеристикой описанных выше соединений формул I и II является их биоактивность и, в частности, их цитотоксическое и антимитотическое действие.

В данном изобретении представлены новые фармацевтические композиции соединений общей формулы I и II, которые обладают цитотоксическим и антимитотическим действием, их применение в качестве противоопухолевых агентов. Таким образом, в данном изобретении также представлены фармацевтические композиции, содержащие соединение в соответствии с данным изобретением, его фармацевтически приемлемую соль, производное, таутомер, пролекарство или стереоизомер, и фармацевтически приемлемый носитель.

Примеры фармацевтических композиций включают любые твердые (таблетки, пилюли, капсулы, гранулы и т.д.) или жидкие (растворы, суспензии или эмульсии) композиции для перорального, местного или парентерального введения.

Введение соединений или композиций в соответствии с данным изобретением может проводиться любым подходящим способом, таким как внутривенное вливание, пероральные препараты и внутрибрюшинное и внутривенное введение. Предпочтительно, чтобы время вливания составляло вплоть до 24 часов, более предпочтительно, 1-12 часов, наиболее предпочтительно, 1-6 часов. Особенно желательно более короткое время вливания, которое позволяет проводить лечение без необходимости оставаться в больнице на ночь. Однако при необходимости вливание может проводиться в течение от 12 до 24 часов или даже дольше. Вливание может проводиться с подходящими интервалами, например от 1 до 4 недель. Фармацевтические композиции, содержащие соединения в соответствии с данным изобретением, могут доставляться с применением липосомного или наносферического инкапсулирования, в композициях с замедленным выделением или другими стандартными средствами доставки.

Точная доза соединений варьируется в соответствии с конкретной композицией, способом введения и конкретным местом воздействия, пациентом и лечимой опухолью. Также должны приниматься во внимание другие факторы, такие как возраст, масса тела, пол, режим питания, время введения, скорость выведения, состояние пациента, комбинация лекарственных средств, реакции чувствительности и тяжесть заболевания. Введение может проводиться непрерывно или периодически с применением максимальной переносимой дозы.

Соединения и композиции в соответствии с данным изобретением могут применяться с другими лекарственными средствами для проведения комбинированной терапии. Другие лекарственные средства могут являться частью одной композиции или представлять собой отдельную композицию для введения одновременно или в другое время.

Противоопухолевое действие этих соединений включает, но не ограничено ими, воздействие на рак легких, рак толстой кишки, рак молочной железы и рак шейки матки.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1: ОПИСАНИЕ МОРСКОГО ОРГАНИЗМА И МЕСТО СБОРА

Lithoplocamia lithistoides собирают вручную пловцы с аквалангом на Мадагаскаре (S 17°06,071'/E 49°51,385') на глубине от 6 до 20 м. Животный материал идентифицирован Jose Luis Carballo (Universidad Autόnoma de Mejico). Образец помещен на хранение в "Instituto de Ciencias del Mar y Limnologia" в Universidad Nacional Autόnoma de Mexico в Мазальтан в Мексике, с порядковым номером LEB-ICML-UNAM-11-2004.

ПРИМЕР 2: ВЫДЕЛЕНИЕ СОЕДИНЕНИЯ 1

Замороженный образец примера 1 (61 г) нарезают и экстрагируют H₂O (3×200 мл) и затем смесью MeOH:дихлорметан (1:1, 3×200 мл) при комнатной температуре. Объединенные органические экстракты концентрируют с получением 1,11 г неочищенного продукта. Этот материал подвергают VLC на Lichroprep RP-18 со ступенчатым градиентом от H₂O до MeOH.

Соединение 1 (1,6 мг) выделяют из фракций, элюированных MeOH с применением полупрепаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (SymmetryPrep C18 7 мкм, 7,8×150 мм, градиент H₂O:MeCN от 35 до 100% MeCN за 30 мин, УФ определение, поток 2,5 мл/мин, кт 14,4 мин).

Соединение 1: аморфное белое вещество. (+)HRESIMS m/z 606,2940 [M+H]⁺ (рассч. для C₃₁H₄₅ ³⁵ClN₃O₇ 606,2946); ¹H (500 МГц) и ¹³C ЯМР (125 МГц), см. таблицу 1.

Таблица 1 Данные ¹H и ¹³C ЯМР для соединения 1 (CDCl₃)
№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C	№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C
1	-	161,6	18	6,84 (ушир.дд, 10,8, 9,7)	124,5
2	-	145,2	19	4,80 (м)	105,0
3	5,63 (дд, 6,5, 2,6)	108,2	20	2,46 (м) 2,09 (ддд, 14,1, 8,4, 8,1)	30,7
4	2,45 (ддд, 17,3, 11,5, 2,6) 2,37 (ддд, 17,3, 6,5, 4,1)	26,1	21	4,41 (м)	74,9
5	4,24 (ддд, 11,5, 7,1, 4,1)	81,9	22	2,33 (м), 2H	33,0
6	2,85 (ддкв., 9,8, 7,1, 6,7)	37,1	23	5,61 (ушир.т, 6,8)	122,4
7	5,29 (д, 9,8)	134,1	24	-	132,0
8	-	133,7	25	2,06 (с), 3H	21,0
9	6,17 (д, 11,6)	140,2	26	3,66 (с), 3H	55,4
10	7,30 (дд, 11,6, 11,6)	124,6	27	1,15 (д, 6,7), 3H	16,3
11	6,91 (дд, 11,6, 11,6)	137,6	28	1,82 (с), 3H	17,1
12	5,70 (д, 11,6)	120,7	29	-	34,7
13	-	166,3	30	1,04 (с), 3H	26,7
14	6,51 (д, 9,5)	-	31	1,04 (с), 3H	26,7
15	4,41 (д, 9,5)	60,8	32	1,04 (с), 3H	26,7
16	-	168,2	33	-	157,2
17	8,78 (д, 10,8)	-

Соединение 1

ПРИМЕР 3: ВЫДЕЛЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ 2, 3, 4, 5, 6 И 7

Вторую группу образцов Lithoplocamia lithistoides (7,66 кг) растирают и тщательно экстрагируют смесью MeOH:дихлорметан (1:1, 14 л, 2×5 л, 4 л). Растворитель удаляют в вакууме и оставшийся водный раствор экстрагируют EtOAc (12 л, 3×8 л). Органический слой выпаривают с получением неочищенного остатка 21,71 г.

Этот материал подвергают хроматографии на колонке RP-18 со ступенчатым градиентом от H₂O:MeOH (4:6) до MeOH. Фракции, элюированные H₂O:MeOH (2:8, 430 мг), объединяют и подвергают препаративной ВЭЖХ (Atlantis dC₁₈, OBD, 5 мкм, 19×150 мм, изократическое H₂O:MeOH (39:61), поток: 20 мл/мин, УФ определение) с получением чистых соединений 1 (160,8 мг), 2 (13,2 мг) и 7 (1,8 мг) и смесей 3 и 4 (11,4 мг) и 5 и 6 (10,0 мг). Чистые соединения 3 (5,1 мг) и 4 (2,6 мг) получают после конечной очистки смеси полупрепаративной ВЭЖХ (X-Terra Prep RP-18, 10 мкм, 10×150 мм, градиент H₂O:MeOH для от 50 до 70% MeOH за 70 мин, поток: 2,5 мл/мин, УФ определение). Соединения 5 (3,6 мг) и 6 (1,0 мг) разделяют с применением того же метода полупрепаративной ВЭЖХ (X-Terra Prep RP-18, 10 мкм, 10×150 мм, изократическое H₂O:MeOH (45:55), поток: 2,5 мл/мин, УФ определение).

Соединение 2: аморфное белое твердое вещество. МС (ЭР) m/z 606,3 [M+H]⁺, 628,3 [M+Na]⁺; ¹H (500 МГц) и ¹³C ЯМР (125 МГц), см. таблицу 2.

Соединение 3: аморфное белое твердое вещество. (+)HRESIMS m/z 628,2774 [M+Na]⁺ (рассч. для C₃₁H₄₄ ³⁵ClN₃O₇Na 628,2760); ¹H (500 МГц) и ¹³C ЯМР (125 МГц), см. таблицу 3.

Соединение 4: аморфное белое твердое вещество. (+)HRESIMS m/z 594,3152 [M+Na]⁺ (рассч. для C₃₁H₄₅N₃O₇Na 594,3150); ¹H (500 МГц) и ¹³C ЯМР (125 МГц), см. таблицу 4.

Соединение 5: аморфное белое твердое вещество. МС (ЭР) m/z 592,3 [M+H]⁺, 614,3 [M+Na]⁺; ¹H (500 МГц) и ¹³C ЯМР (125 МГц), см. таблицу 5.

Соединение 6: аморфное белое твердое вещество. МС (ЭР) m/z 592,3 [M+H]⁺, 614,3 [M+Na]⁺; ¹H (500 МГц) и ¹³C ЯМР (125 МГц), см. таблицу 6.

Соединение 7: аморфное белое твердое вещество. (+)HRESIMS m/z 427,2207 [M+Na]⁺ (рассч. для C₂₂H₃₂N₂O₅Na 427,2203); ¹H (500 МГц) и ¹³C ЯМР (125 МГц), см. таблицу 7.

Таблица 2 Данные ¹H и ¹³C ЯМР для соединения 2 (CDCl₃)
№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C	№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C
1	-	161,5	18	6,83 (ддд, 10,8, 8,9, 1,2)	124,4
2	-	145,2	19	4,80 (м)	105,5
3	5,61 (дд, 6,4, 3,1)	108,1	20	2,43 (м) 2,12 (м)	30,6
4	2,41 (ддд, 17,1, 11,3, 3,0) 2,34 м	26,6	21	4,50 (м)	74,9
5	4,18 (ддд, 11,3, 7,8, 4,3)	81,6	22	2,36 (м), 2H	33,2
6	2,88 (ддкв., 10,0, 7,8, 6,7)	37,4	23	5,61 (ушир.т, 6,5)	122,2
7	5,46 (ушир.д, 10,0)	136,5	24	-	132,1
8	-	135,6	25	2,07 (д, 1,0), 3H	21,0
9	6,41 (д, 15,5)	145,0	26	3,65 (с), 3H	55,4
10	7,60 (дд, 15,5, 11,4)	124,2	27	1,16 (д, 6,7), 3H	16,5
11	6,49 (дд, 11,4, 11,3)	142,5	28	1,86 (д, 1,0), 3H	13,1
12	5,63 (д, 11,3)	119,0	29	-	34,6
13	-	166,5	30	1,05 (с), 3H	26,6
14	6,39 (д, 9,4)	-	31	1,05 (с), 3H	26,6
15	4,44 (д, 9,4)	60,7	32	1,05 (с), 3H	26,6
16	-	168,3	33	-	157,0
17	8,50 (ушир.д, 10,8)	-

	Соединение 2

Таблица 3 Данные ¹H и ¹³C ЯМР для соединения 3 (CDCl₃)
№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C	№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C
1	-	161,5	18	6,83 (ушир.дд, 10,7, 9,6)	124,4
2	-	145,3	19	4,81 (м)	105,4
3	5,61 (дд, 6,3, 3,0)	108,1	20	2,47 (м) 2,10 (м)	30,8
4	2,39 (м) 2,37 (м)	26,3	21	4,43 (м)	75,0
5	4,21 (ддд, 10,9, 7,6, 4,7)	81,7	22	2,34 (м), 2H	33,0
6	2,90 (ддкв., 10,0, 7,6, 6,6)	37,4	23	5,62 (ушир.т, 6,5)	122,4
7	5,46 (ушир.д, 10,0)	136,4	24	-	132,0
8	-	135,1	25	2,07 (с), 3H	21,0
9	6,51 (д, 15,3)	144,1	26	3,65 (с), 3H	55,4
10	6,27 (дд, 15,3, 11,1)	125,2	27	1,15 (д, 6,6), 3H	16,6
11	7,25 (дд, 14,8, 11,1)	141,9	28	1,83 (д, 1,0), 3H	12,9
12	5,96 (д, 14,8)	122,9	29	-	35,1
13	-	166,0	30	1,03 (с), 3H	26,6
14	6,39 (д, 9,3)	-	31	1,03 (с), 3H	26,6
15	4,43 (д, 9,3)	60,8	32	1,03 (с), 3H	26,6
16	-	168,3	33	-	157,9
17	8,82 (д, 10,7)	-

Соединение 3

Таблица 4 Данные ¹H и ¹³C ЯМР для соединения 4 (CDCl₃)
№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C	№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C
1	-	161,6	18	6,82 (ддд, 10,4, 9,1, 0,9)	124,2
2	-	145,2	19	4,82 (м)	105,8
3	5,63 (дд, 6,6, 2,7)	108,2	20	2,46 (м) 2,12 (ддд, 14,1, 8,0, 8,0)	30,9
4	2,44 (м) 2,39 (м)	26,1	21	4,45 (м)	75,6
5	4,25 (ддд, 11,3, 7,0, 4,0)	81,9	22	2,35 (м), 2H	31,4
6	2,85 (ддкв., 9,9, 7,0, 6,7)	37,1	23	5,40 (м)	124,9
7	5,29 (д, 9,9)	134,1	24	5,60 (м)	127,1
8	-	133,8	25	1,63 (дд, 6,8, 1,0), 3H	13,0
9	6,15 (д, 11,6)	140,2	26	3,66 (с), 3H	55,4
10	7,31 (дд, 11,6, 11,6)	124,4	27	1,15 (д, 6,7), 3H	16,4
11	6,90 (дд, 11,6, 11,6)	137,5	28	1,82 (с), 3H	17,1
12	5,72 (ушир.д, 11,6)	120,8	29	-	34,8
13	-	166,3	30	1,04 (с), 3H	26,7
14	6,53 (д, 9,6)	-	31	1,04 (с), 3H	26,7
15	4,44 (д, 9,6)	60,7	32	1,04 (с), 3H	26,7
16	-	168,2	33	-	157,6
17	8,69 (д, 10,4)	-

Соединение 4

Таблица 5 Данные ¹H и ¹³C ЯМР для соединения 5 (CDCl₃)
№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C	№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C
1	-	161,7	17	8,69 (д, 10,7)	-
2	-	145,1	18	6,84 (ддд, 10,7, 9,8, 0,9)	124,5
3	5,64 (дд, 6,6, 2,6)	108,3	19	4,80 (м)	105,2
4	2,48 (ддд, 17,4, 12,0, 2,6) 2,37 (ддд, 17,4, 6,6, 3,9)	26,0	20	2,45 (м) 2,10 (ддд, 15,0, 7,1, 6,2)	30,7
5	4,28 (ддд, 12,0, 6,6, 3,9)	81,9	21	4,44 (м)	74,8
6	2,85 (ддкв., 9,7, 6,6, 6,7)	37,0	22	2,33 (м), 2H	33,0
7	5,31 (д, 9,7)	134,1	23	5,60 (ушир.т, 7,1)	122,4
8	-	133,6	24	-	132,0
9	6,17 (д, 11,5)	140,3	25	2,06 (с), 3H	21,0
10	7,31 (дд, 11,5, 11,5)	124,5	26	3,66 (с), 3H	55,4
11	6,93 (дд, 11,5, 11,5)	137,6	27	1,15 (д, 6,7), 3H	16,2
12	5,73 (д, 11,5)	120,5	28	1,82 (ушир.с), 3H	17,1
13	-	166,5	29	2,22 (м)	31,1
14	6,54 (д, 9,2)	-	30	1,00 (д, 6,8), 3H	19,3
15	4,46 (дд, 9,2, 6,4)	58,5	31	0,96 (д, 6,8), 3H	18,0
16	-	169,1	32	-	157,4

Соединение 5

Таблица 6 Данные ¹H и ¹³C ЯМР для соединения 6 (CDCl₃)
№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C	№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C
1	-	161,5	17	8,59 (д, 10,8)	-
2	-	145,2	18	6,84 (ушир.дд, 10,8, 8,7)	124,5
3	5,61 (дд, 6,8, 2,8)	108,2	19	4,81 (м)	105,5
4	2,41 (м), 2H	26,6	20	2,42 (м) 2,13 (ддд, 14,1, 7,5, 7,2)	30,6
5	4,18 (ддд, 11,6, 7,7,4,2)	81,6	21	4,49 (м)	74,7
6	2,88 (ддкв., 10,0, 7,7, 6,6)	37,4	22	2,35 (м), 2H	33,1
7	5,47 (ушир.д, 10,0)	136,5	23	5,61 (м)	122,3
8	-	135,5	24	-	132,1
9	6,41 (д, 15,4)	145,0	25	2,07 (с), 3H	21,0
10	7,61 (дд, 15,4, 11,3)	124,2	26	3,65 (с), 3H	55,4
11	6,49 (дд, 11,3, 11,3)	142,5	27	1,15 (д, 6,6), 3H	16,5
12	5,63 (д, 11,3)	118,9	28	1,86 (с), 3H	13,1
13	-	166,6	29	2,20 (м)	30,9
14	6,34 (д, 8,9)	-	30	1,01 (д, 6,7), 3H	19,3
15	4,42 (дд, 8,9, 7,1)	58,6	31	0,98 (д, 6,8), 3H	18,2
16	-	169,0	32	-	157,0

Соединение 6

Таблица 7 Данные ¹H и ¹³C ЯМР для соединения 7 (CDCl₃)
№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C
1	-	161,5
2	-	145,3
3	5,62 (дд, 6,1, 3,2)	108,1
4	2,43 (м) 2,38 (м)	26,3
5	4,21 (ддд, 12,0, 7,0, 4,8)	81,8
6	2,86 (ддкв., 9,9, 7,0, 6,6)	37,4
7	5,29 (д, 9,9)	134,2
8	-	134,1
9	6,17 (д, 11,6)	140,2
10	7,26 (дд, 11,6, 11,5)	124,1
11	6,90 (дд, 11,5, 11,5)	137,4
12	5,67 (д, 11,5)	120,8
13	-	166,2
14	6,22 (д, 9,2)	-
15	4,34 (д, 9,2)	59,8
16	-	172,5
17	3,66 (с), 3H	55,4
18	1,17 (д, 6,6), 3H	16,7
19	1,85 (с), 3H	17,2
20	-	34,5
21	1,05 (с), 3H	26,6
22	1,05 (с), 3H	26,6
23	1,05 (с), 3H	26,6

Соединение 7

ПРИМЕР 4: ВЫДЕЛЕНИЕ СОЕДИНЕНИЯ 8

Фракцию, содержащую соединение 1 (61,6 мг), полученную методом экстрагирования, описанным в примере 3, далее очищают полупрепаративной ВЭЖХ (Symmetryprep C-18, 7 мкм, 7,8×150 мм, изократическое H₂O:CH₃CN (55:45), поток: 2,3 мл/мин, УФ определение) и 0,9 мг соединения 8 получают в очищенной форме.

Соединение 8: аморфное белое твердое вещество. МС (ЭР) m/z 606,2 [M+H]⁺, 628,3 [M+Na]⁺; ¹H (500 МГц) и ¹³C ЯМР (125 МГц), см. таблицу 8.

Таблица 8 Данные ¹H и ¹³C ЯМР для соединения 8 (CDCl₃)
№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C	№	¹Н (Мультиплетность, J)	¹³C
1	-	161,6	18	6,83 (ддд, 10,8, 8,7, 1,0)	124,4
2	-	145,2	19	4,80 (м)	105,2
3	5,66 (ушир.т, 4,6)	108,4	20	2,11 (ддд, 14,2, 8,1, 7,8) 2,45 (м)	30,7
4	2,45 (м), 2H	26,6	21	4,46 (м)	75,0
5	4,21 (ддд, 7,7, 7,7, 7,7)	81,7	22	2,34 (т, 6,7), 2H	33,0
6	2,85 (ддкв., 10,0, 7,7, 6,7)	37,4	23	5,60 (тд, 7,8, 1,2)	122,3
7	5,35 (д, 10,0)	135,1	24	-	132,0
8	-	134,6	25	2,06 (с), 3H	21,0
9	6,16 (д, 11,7)	140,6	26	3,66 (с), 3H	55,4
10	6,06 (дд, 11,7, 11,7)	125,6	27	1,17(д, 6,7), 3H	16,6
11	7,71 (дд, 14,7, 11,7)	137,9	28	1,91 (д, 0,7), 3H	17,0
12	5,95 (д, 14,7)	124,5	29	-	34,8
13	-	166,0	30	1,04 (с), 3H	26,6
14	6,35 (д, 9,5)	-	31	1,04 (с), 3H	26,6
15	4,47 (д, 9,5)	61,0	32	1,04 (с), 3H	26,6
16	-	168,3	33	-	157,1
17	8,65 (д, 10,8)	-

Соединение 8

ПРИМЕР 5: СИНТЕЗ ФРАГМЕНТА A

На схеме 2 представлено несколько примеров синтеза фрагмента A в соответствии с номенклатурой, представленной на схеме 1.

Схема 2

Синтез промежуточного соединения 9

К имеющему температуру 0°С раствору (2S,3S)-3,5-бис{[(трет-бутил)диметилсилил]окси}-4-метилпентан-1-ола (P. Phukan, S. Sasmal and M. E. Maier Eur. J. Org. Chem. 2003, 1733-1740) (50 г, 0,14 моль) в смеси дихлорметан/ДМСО (331 мл/149 мл) Et₃N (96,1 мл, 0,69 моль) добавляют через добавляющую воронку. Через 10 мин SO₃·Pyr (54,8 г, 0,34 моль) добавляют порциями и раствор перемешивают в течение еще 2 ч при температуре 0°С. Затем его разбавляют дихлорметаном (800 мл) и гасят HCl (0,5N, 800 мл). Органический слой декантируют, сушат над MgSO₄ и концентрируют в вакууме. Очистка хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 100:0 до 10:1) дает 45 г (выход: 90%) альдегида 9.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,79 (с, 1H), 4,30 (м, 1H), 3,65 (м, 2H), 2,51 (м, 1H), 1,69 (м, 2H), 1,04 (д, 3H, J=6,9Гц), 0,85-0,88 (м, 18H), 0,03-0,07 (м, 12H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 205,4, 69,4, 59,6, 51,7, 37,5, 26,1, 26,0, 18,4, 18,2, 8,0, -4,3, -4,5, -5,2.

Синтез промежуточного соединения 10

В раствор альдегида 9 (45 г, 0,12 моль) в толуоле (625 мл) добавляют карбоэтоксиэтилиден-трифенилфосфоран (113 г, 0,31 моль) и смесь нагревают при температуре 60°С в течение более 17 ч. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении, оставшееся масло очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 100:0 до 10:1) с получением 53,3 г (выход: 96%) сложного эфирного соединения 10.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 6,71 (дд, 1H, J=1,5, 10,2 Гц), 4,19 (м, 2H), 3,77 (м, 1H), 3,66 (м, 2H), 2,61 (м, 1H), 1,85 (д, 3H, J=1,5 Гц), 1,68 (м, 2H), 1,30 (т, 3H, J=7,2 Гц), 0,98 (д, 3H, 6,9 Гц), 0,90 (м, 18H), 0,05 (м, 12H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,3, 145,4, 126,7, 72,2, 60,4, 59,7, 38,4, 38,0, 25,9, 18,2, 18,1, 14,3, 14,3, 12,6, -4,4, -4,6, -5,4.

Синтез промежуточного соединения 11

К охлажденному до температуры -78°C раствору сложного эфира 10 (46,7 г, 0,105 моль) в безводном ТГФ (525 мл) в атмосфере аргона добавляют гидрид диизобутилалюминия (DIBAL) 1 М в толуоле (231 мл, 0,231 моль) в течение 10 минут и смесь перемешивают при температуре -78°С. Через 4 часа реакцию гасят MeOH (10 мл), добавляют насыщенный раствор виннокислого калия-натрия (800 мл) и разбавляют EtOAc (1000 мл). Эту смесь перемешивают в течение 2 ч и затем органический слой декантируют. Водный остаток экстрагируют дополнительным EtOAc (2×400 мл), объединенные органические слои сушат (Na₂SO₄) и растворитель выпаривают. Полученное масло очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 20:1 до 10:1) с получением 32,5 г (выход: 77%) спирта 11.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 5,31 (д, 1H, J=9,6 Гц), 3,98 (м, 2H), 3,66 (м, 3H), 2,49 (м, 1H), 1,67 (с, 3H), 1,70-1,62 (м, 2H), 0,91 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,88 (м, 18H), 0,03 (м, 12H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 133,9, 129,8, 73,1, 69,1, 59,9, 37,8, 37,5, 25,9, 18,3, 18,1, 15,9, 13,9, -4,4, -4,4, -5,3.

Синтез промежуточного соединения 12

К раствору спирта 11 (31,2 г, 77,5 ммоль) в этиловом эфире (387 мл) в атмосфере аргона добавляют MnO₂ (101 г, 1,16 моль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Эту смесь фильтруют через колонку с силикагелем, элюируя EtOAc (3 л), и полученный раствор сушат при пониженном давлении с получением 29,1 г (выход: 94%) альдегида 12.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,37 (с, 1H), 6,44 (д, 1H, J=9,6 Гц), 3,82 (дд, 1H, J=6,3, 10,8 Гц), 3,65 (м, 2H), 2,82 (м, 1H), 1,74 (с, 3H), 1,67 (м, 2H), 1,02 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,86 (с, 18H), 0,04-0,01 (м, 12H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 195,4, 157,8, 138,3, 134,5, 72,0, 59,5, 36,7, 37,5, 25,8, 18,2, 18,1, 14,3, 9,4, -4,4, -4,5, -5,4.

Синтез промежуточного соединения 13

К суспензии йодида йодметилтрифенилфосфония (Gilbert Stork, KZ. Tetrahedron letters 1989, 30(17), 2173) (96,3 г, 181,7 ммоль) в ТГФ (727 мл) при температуре 0°С медленно добавляют 1 М раствор гексаметилдисилазана натрия (NaHMDS) (181,7 мл, 181,7 ммоль) через добавляющую воронку в течение 10 минут. После перемешивания в течение еще 5 мин раствор охлаждают до температуры -78°C и затем добавляют 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1H)-пиримидинон (DMPU) (43,9 мл, 363,4 ммоль) через канюлю, с последующим добавлением альдегида 12 (29,1 г, 72,7 ммоль), растворенного в ТГФ (727 мл). Температуру поддерживают на уровне -78°C при одновременном перемешивании реакционной смеси в течение 2 часов. Добавляют гексан (1 л) и полученную суспензию фильтруют через целит и промывают дополнительным гексаном (3 л). Фильтрат выпаривают при пониженном давлении и полученное масло очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 100:0 до 20:1) с получением 32 г (выход: 84%) йодида 13.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 6,73 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,09 (дд, 1H, J=8,4, 1,2 Гц), 5,57 (дд, 1H, J=9,6, 1,2 Гц), 3,63-3,71 (м, 3H), 2,58 (м, 1H), 1,90 (с, 3H), 1,70 (м, 2H), 0,96 (дд, 3H, J=6,6, 1,2 Гц), 0,88 (с, 18H), 0,04 (м, 12H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 142,3, 138,1, 131,8, 74,6, 72,9, 59,8, 38,1, 37,9, 26,0, 18,3, 18,2, 15,7, 15,7, -4,4, -5,2, -5,2.

Синтез промежуточного соединения 14

К раствору йодида 13 (12 г, 22,9 ммоль) в EtOH (114 мл) добавляют п-толуолсульфонат пиридиния (PPTS) (2,01 г, 8,0 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 25 часов. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении и полученное масло очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 10:1) с получением 8,7 г (выход: 93%) спирта 14.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 6,69 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,12 (д, 1H, J=8,4 Гц), 5,47 (д, 1H, J=9,9 Гц), 3,67-3,87 (м, 4H), 2,71 (м, 1H), 1,89 (с, 3H), 1,73-1,86 (м, 2H), 1,01 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,91 (с, 9H), 0,087-0,115 (м, 6H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 142,4, 136,4, 132,6, 75,8, 75,2, 60,0, 38,1, 36,4, 26,1, 18,2, 17,1, 16,0, -4,1, -4,2.

Синтез промежуточного соединения 15

К имеющему температуру 0°С раствору спирта 14 (8,7 г, 21,2 ммоль) в смеси дихлорметан/ДМСО (50,9 мл/22,9 мл) добавляют Et₃N (14,8 мл, 106 ммоль) через воронку. Через 10 минут SO₃·Pyr (8,43 г, 53,0 моль) добавляют порциями и раствор перемешивают в течение еще 2 ч при 0°С. Затем его разбавляют дихлорметаном (800 мл) и гасят HCl (0,5N, 50 мл). Органический слой декантируют, сушат над MgSO₄ и концентрируют в вакууме. Очистка хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 10:1) дает 6,9 г (выход: 80%) альдегида 15.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,89 (т, 1H, J=1,5 Гц), 6,67 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,13 (д, 1H, J=8,4 Гц), 5,43 (д, 1H, J=10,2 Гц), 3,98 (м, 1H), 2,59-2,69 (м, 3H), 1,85 (с, 3H), 1,01 (д, 3H, J=6,6 Гц), 0,86 (с, 9H), 0,06 (с, 3H), 0,03 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 201,8, 141,9, 135,2, 133,3, 76,3, 71,9, 49,3, 39,3, 25,8, 18,0, 16,7, 15,9, -4,4, -4,5.

Синтез промежуточного соединения 16a

К раствору диэтил(метокси[метоксикарбонил]метил)фосфоната (5,51 г, 14,45 ммоль) и 18-краун-6 (11,5 г, 43,34 ммоль) в сухом ТГФ (390 мл), перемешиваемому в атмосфере аргона при температуре -78°C, по каплям добавляют 0,5 M раствор бис(триметилсилил)амида калия (KHMDS) (43,34 мл, 21,67 ммоль). Через 15 мин по каплям добавляют альдегид 15 (5,9 г, 14,45 ммоль) в сухом ТГФ в течение 30 мин и перемешивают при -78°C в течение 90 мин. Затем реакцию гасят насыщенным раствором NH₄Cl (200 мл), нагревают до комнатной температуры и разбавляют дихлорметаном (1000 мл). Органическую фазу сушат (Na₂SO₄) и выпаривают при пониженном давлении. Очистка хроматографией на колонке (гексан/Et₂O 20:1) дает чистые 4,2 г (59%) (E)-16a.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 6,70 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,08 (д, 1H, J=8,4 Гц), 5,47 (д, 1H, J=9,9 Гц), 5,37 (т, 1H, J=7,2 Гц), 3,78 (с, 3H), 3,60 (с, 3H), 3,60 (м, 1H), 2,79 (м, 1H), 2,52-2,67 (м, 2H), 1,83 (с, 3H), 0,99 (д, 3H, J=6,6 Гц), 0,89 (с, 9H), 0,05 (с, 3H), 0,04 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 163,7, 145,9, 142,1, 137,3, 132,1, 110,4, 75,4, 74,8, 55,4, 51,9, 38,1, 32,3, 25,9, 18,1, 16,5, 15,7, -4,3, -4,5.

Синтез промежуточного соединения 16b

К раствору этил[бис(2,2,2-трифторэтокси)фосфинил]ацетата (0,16 мл, 0,66 ммоль) и 18-краун-6 (350 мг, 1,32 ммоль) в сухом ТГФ (2,4 мл), перемешиваемому в атмосфере аргона при 0°С, по каплям добавляют KHMDS (1,23 мл, 0,62 ммоль). Через 30 мин по каплям добавляют альдегид 15 (180 мг, 0,44 ммоль) в сухом ТГФ и перемешивают при -78°C в течение 60 мин.

Затем реакцию гасят насыщенным раствором NH₄Cl, нагревают до комнатной температуры и разбавляют EtOAc. Органическую фазу сушат (Na₂SO₄) и выпаривают при пониженном давлении. Очистка хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 100:1 до 15:1) дает 172 мг (выход: 82%) (Z)-16b.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 6,70 (д, 1H, J=8,7 Гц), 6,44-6,36 (м, 1H), 6,09 (д, 1H, J=8,7 Гц), 5,86-5,81 (м, 1H), 5,47 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,14 (кв, 2H, J=7,2 Гц), 3,69-3,64 (м, 1H), 3,06-3,00 (м, 1H), 2,85-2,75 (м, 1H), 2,59-2,51 (м, 1H), 1,84 (с, 3H), 1,28 (т, 3H, J=7,2 Гц), 1,00 (д, 3H, J=6,6 Гц), 0,89 (с, 9H), 0,06 (с, 3H), 0,05 (с, 3H).

МС (ЭР) m/z 501,0 [M+Na]⁺.

Синтез промежуточного соединения 17a

К раствору сложного эфира 16a (4,15 г, 8,39 ммоль) в MeOH (125 мл) при комнатной температуре добавляют HCl 37% (1,04 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 6 часов. Затем смесь нейтрализуют насыщенным раствором NaHCO₃ (pH 7-8) и органический растворитель выпаривают при пониженном давлении. Полученную суспензию экстрагируют дихлорметаном (3×200 мл), сушат и выпаривают. Фильтрация хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 10:1 до 2:1) дает 2,76 г (выход: 94%) лактона 17a.

¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ: 6,68 (д, 1H, J=9,0 Гц), 6,20 (д, 1H, J=8,5 Гц), 5,63 (дд, 1H, J=2,5, 6,5 Гц), 5,43 (д, 1H, J=10,0 Гц), 4,19 (м, 1H), 3,65 (с, 3H), 2,84 (м, 1H), 2,55 (м, 1H), 2,43 (дк, J=1H, 3,0, 12,0, 15,0, 18,0 Гц), 1,87 (с, 3H), 1,16 (д, 3H, J=6,5 Гц).

¹³C ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ: 161,6, 145,2, 141,8, 134,4, 132,7, 108,3, 81,7, 77,4, 55,4, 37,1, 26,6, 16,5, 16,1.

Синтез промежуточного соединения 17b

К раствору сложного эфира 16b (172 мг, 0,36 ммоль) в MeOH (4,5 мл) при комнатной температуре добавляют HCl 37% (0,03 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 3 часов. Затем смесь нейтрализуют насыщенным раствором NaHCO₃ (pH 7-8) и органический растворитель выпаривают при пониженном давлении. Полученную суспензию экстрагируют дихлорметаном, сушат и выпаривают. Очистка хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 10:1 до 5:1) дает 70 мг (выход: 61%) лактона 17b.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 6,91-6,85 (м, 1H), 6,68 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,62 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,02 (дд, 1H, J=2,7, 9,6 Гц), 5,45 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,19 (м, 1H), 3,65 (с, 3H), 4,26-4,18 (м, 1H), 2,92-2,79 (м, 1H), 2,57-2,48 (м, 1H), 2,39-2,28 (м, 1H), 1,88 (с, 3H), 1,17 (д, 3H, J=6,6 Гц).

ПРИМЕР 6: СИНТЕЗ ФРАГМЕНТА D

На схеме 3 представлено несколько примеров синтеза фрагмента D в соответствии с номенклатурой, представленной на схеме 1.

Схема 3

Синтез промежуточного соединения 19

К раствору промежуточного соединения 18 (72,3 г) в дихлорметане (ДХМ) (918 мл) при комнатной температуре порциями добавляют 3-хлорпербензойную кислоту (m-CPBA) (100 г, 0,58 моль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Белый осадок гасят насыщенным раствором NaHCO₃, экстрагируют ДХМ (3×250 мл) и снова промывают насыщенным водным раствором NaHCO₃ (3×250 мл). Органические слои объединяют, сушат над Na₂SO₄ и концентрируют в вакууме. Полученное масло очищают на силикагеле (гексан-AcOEt; 15:1) с получением эпоксида в виде бесцветного масла (64,5 г, 82%). К раствору рацемического эпоксида (30 г) в безводном ТГФ (7,5 мл) добавляют комплекс (R,R)Co(II) (448 мг, 0,74 ммоль), затем AcOH (0,14 мл). Раствор охлаждают до 0°С и по каплям добавляют воду (1,2 мл). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 18 ч. После этого летучие вещества концентрируют в вакууме и неочищенный остаток загружают непосредственно в колонку с силикагелем. Флэш-хроматография с применением гексана/EtOAc (15:1 до 12:1) в качестве элюента дает хиральный эпоксид (+)-19 (13,6 г, выход: 46%) в виде бесцветного масла.

[α]_D=+14,1 (c=1, CHCl₃).

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 3,74 (т, 2H, J=6,3 Гц), 3,01 (м, 1H), 2,74 (т, 1H, J=4,6 Гц), 2,48 (дд, 1H, J=5,1, 3,1 Гц), 1,70 (м, 2H), 0,87 (с, 9H), 0,04 (с, 6H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 60,2, 50,2, 47,3, 36,1, 26,1, 18,4, -5,2.

Синтез промежуточного соединения 20

Пропин конденсируют при температуре -78°C и растворяют в безводном ТГФ (165 мл). По каплям добавляют н-бутиллитий в атмосфере Ar в течение более 30 мин и полученную белую суспензию перемешивают в течение дополнительных 30 мин при температуре -78°C. Затем по каплям добавляют раствор (+) (R)-2-[2-(трет-бутилдиметилсилилокси)этил]оксирана 19 (23,7 г) в безводном ТГФ (125 мл) с последующим добавлением BF₃OEt₂. Смесь перемешивают в течение 1 ч при -78°C и в течение еще одного часа при 0°С. Реакцию гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl (150 мл) и экстрагируют Et₂O (3×150 мл). Объединенные органические слои сушат над NaSO₄, фильтруют и концентрируют. Флэш-хроматография (гексан/EtOAc 10:1 до 1:1) дает 22,7 г, (выход: 80%) спирта 20 в виде бесцветного масла.

[α]_D=+5,6 (c=0,1, CHCl₃).

¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ: 3,75-3,90 (м, 3H), 3,47 (д, 1H, J=2,7 Гц, OH), 2,34 (м, 2H), 1,79 (т, 3H, J=2,4 Гц), 1,75 (м, 2H), 0,89 (с, 9H), 0,07 (с, 6H).

¹³C ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ: 77,8, 75,8, 70,7, 62,4, 37,6, 27,6, 26,1, 18,3, 3,7, -5,3, -5,4.

МС (ЭР) m/z 243,2 [M+H]⁺, 265,2 [M+Na]⁺.

Синтез промежуточного соединения 21a

Раствор промежуточного соединения 20 (22,7 г) и п-метоксибензилтрихлорацетимидата (PMBTCA) в ДХМ обрабатывают Sc(OTf)₃. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч (проверка ТСХ) и реакцию концентрируют в вакууме и очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 50:1 до 15:1) с получением соединения 21a в виде желтого масла (18,3 г; выход: 55%).

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,25 (д, 2H, J=8,7 Гц), 6,90 (д, 2H, J=8,7 Гц), 4,45 (м, 2H), 3,80 (с, 3H), 3,65 (м, 3H), 2,40 (м, 2H), 1,82 (м, 2H), 1,79 (т, 3H, J=2,4 Гц), 0,92 (с, 9H), 0,05 (с, 6H).

Синтез промежуточного соединения 21b

Раствор спирта 20 (2,88 г, 11,9 ммоль), трет-бутилдифенилсилилхлорида (4,39 мл, 16,89 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридина (43,6 мг) в N,N-диметилформамиде (ДМФ) (14 мл) перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Смесь разбавляют водой и экстрагируют Et₂O и органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Флэш-хроматография (гексан/EtOAc, 95:1) дает силиловый эфир 21b (5,3 г, выход: 93%) в виде бесцветной жидкости.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,70-7,66 (м, 4H), 7,40-7,34 (м, 6H), 3,99-3,95 (м, 1H), 3,70-3,62 (м, 2H), 2,23-2,22 (м, 2H), 1,84-1,81 (м, 2H), 1,69 (т, 3H, J=2,7 Гц), 1,05 (с, 9H), 0,84 (с, 9H), 0,01 (с, 6H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 136,1; 134,6; 129,7; 127,8; 77,8; 76,2; 69,9; 60,1; 39,6; 27,5; 27,2; 26,2; 19,6; 18,5; 3,7; -5,1.

Синтез промежуточного соединения 22a

К раствору соединения 21a в безводном толуоле в атмосфере Ar и при температуре 0°С добавляют реагент Шварца гидрид хлорида (бис(циклопентадиенил)циркония(IV), Cp₂ZrHCl) и реакционную смесь перемешивают в течение 5 мин при комнатной температуре. Температуру реакции повышают до 50°С в течение 20 мин и перемешивают при 50°С в течение 2,30 ч. В течение этого времени реакционный раствор становится оранжевым. Реакцию охлаждают до 0°С и добавляют N-хлорсукцинимид одной порцией. Перемешивание продолжают в течение 30 мин при комнатной температуре и реакционную смесь разбавляют гексаном/EtOAc (95:5; 500 мл). Удаление твердого вещества фильтрацией и выпаривание летучих веществ дает соединение 22a в виде желтого масла, которое применяют без дальнейшей очистки (15,1 г; выход: 86%).

[α]_D=+20,5 (c=1, CHCl₃).

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,25 (д, 2H, J=8,7 Гц), 6,87 (д, 2H, J=8,7 Гц), 5,64 (тд, 1H, J=7,8, 0,9 Гц), 4,45 (кв, 2H, J=11,1 Гц), 3,80 (с, 3H), 3,70 (м, 2H), 3,62 (м, 1H), 2,27 (т, 2H, J=6,9 Гц), 2,03 (с, 3H), 1,70 (м, 2H), 0,89 (с, 9H), 0,05 (с, 6H).

¹³C ЯМР (75 МГц, CDCl₃) δ: 159,4, 130,9, 130,7, 129,6, 124,2, 114,0, 75,2, 71,4, 59,8, 55,5, 37,7, 33,8, 26,1, 21,2, 18,5, -5,1.

Синтез промежуточного соединения 22b

Колбу, содержащую смесь соединения 21b (4,73 г, 9,85 ммоль), хинолин (0,582 мл, 4,92 ммоль) и катализатор Линдлара (2,18 г) в этилацетате, вакуумируют и промывают H₂. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере H₂ (1 атм) в течение 2 ч и затем фильтруют через слой целита. Слой промывают этилацетатом и объединенные фильтраты промывают 0,1% HCl. Органический слой сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют с получением промежуточного соединения 22b (4,27 г, выход: 90%) в виде бесцветного масла, которое применяют без дальнейшей очистки.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,70-7,67 (м, 4H), 7,44-7,36 (м, 6H), 5,48 (м, 1H), 5,36-5,27 (м, 1H), 3,95-3,87 (м, 1H), 3,71-3,55 (м, 2H), 2,16 (дд, 2H, J=6,9, 6,3 Гц), 1,73-1,66 (м, 2H), 1,41 (дд, 3H, J=6,6, 1,2 Гц), 1,05 (с, 9H), 0,84 (с, 9H), -0,02 (с, 6H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 136,2; 134,8; 129,8; 127,8; 126,4; 125,8; 70,9; 60,4; 39,6; 34,8; 27,3; 26,2; 19,7; 18,5; 13,1; -5,1.

Синтез промежуточного соединения 23a

К раствору соединения 22a (23 г) в безводном ТГФ в атмосфере Ar и при температуре 0°С по каплям добавляют фторид трибутиламмония (TBAF) в течение 20 мин (раствор становится красным). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl (200 мл). Объединенные слои разделяют и водную фазу тщательно экстрагируют EtOAc (3×150 мл). Объединенные органические слои сушат над NaSO₄, фильтруют и концентрируют. Флэш-хроматография (гексан/EtOAc 4:1 до 1:1) дает 23a в виде бесцветного масла (11,9 г; выход: 73%).

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,25 (д, 2H, J=8,7 Гц), 6,86 (д, 2H, J=8,7 Гц), 5,62 (т, 1H, J=7,8 Гц), 4,45 (м, 2H), 3,80 (с, 3H), 3,70 (м, 3H), 2,35 (м, 2H), 2,03 (с, 3H), 1,75 (м, 2H).

Синтез промежуточного соединения 23b

PPTS (837,7 мг, 3,33 ммоль) добавляют одной порцией к раствору 22b (4 г, 8,33 ммоль) в этаноле (80 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 7 ч и затем концентрируют. Остаток разбавляют в ДХМ и промывают насыщенным раствором NaHCO₃. Органический слой экстрагируют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Флэш-хроматография (Гексан/EtOAc, 95:1) дает силиловый эфир 23b (2,12 г, выход: 69%) в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,73-7,69 (м, 4H), 7,44-7,36 (м, 6H), 5,44-5,38 (м, 1H), 5,21-5,17 (м, 1H), 4,01-3,94 (м, 1H), 3,84-3,76 (м, 1H), 3,69-3,64 (м, 1H), 2,32-2,14 (м, 2H), 1,89- 1,78 (м, 1H), 1,70-1,60 (м, 1H), 1,37 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,07 (с, 9H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 136,2; 134,1; 130,0; 127,8; 126,3; 125,9; 72,3; 60,1; 37,7; 34,3; 27,2; 19,5; 13,0.

Синтез промежуточного соединения 24a

(Диацетоксийод)бензол (BAIB) (11,5 г, 35,7 ммоль) добавляют к раствору спирта 23a (9,2 г, 32,4 ммоль) и 1-оксила 2,2,6,6-тетраметилпиперидина (TEMPO) (515 мг, 3,3 ммоль) в безводном дихлорметане (92 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч до тех пор, пока не перестанет определяться спирт (ТСХ), и затем смесь гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют ДХМ (3×100 мл). Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 4:1 до 1:1) с получением соединения 24a в виде бесцветного масла (6,3 г; выход: 70%).

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,78 (с, 1H), 7,25 (д, 2H, J=8,7 Гц), 6,85 (д, 2H, J=8,7 Гц), 5,64 (т, 1H, J=7,8 Гц), 4,45 (кв, 2H, J=11,1 Гц), 4,02 (м, 1H), 3,80 (с, 3H), 2,60 (м, 2H), 2,35 (м, 2H), 2,03 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 201, 159,6, 132,1, 130,1, 129,7, 122,8, 114,1, 73,3, 71,5, 55,5, 48,3, 33,5, 21,3.

Синтез промежуточного соединения 24b

BAIB (1,97 г, 6,11 ммоль) добавляют к раствору спирта 23b (2,05 г, 5,56 ммоль) и TEMPO (86,87 мг, 0,56 ммоль) в 25 мл ДХМ. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16-18 ч до тех пор, пока спирт не перестанет определяться (ТСХ), и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/ДХМ 5:1 до 1:2) с получением соединения 24b (1,733 мг, выход: 79%) в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,72 (т, 1H, J=2,7 Гц), 7,74-7,67 (м, 4H), 7,48-7,37 (м, 6H), 5,56-5,45 (м, 1H), 5,32-5,23 (м, 1H), 4,29-4,20 (м, 1H), 2,51-2,48 (м, 2H), 2,31-2,27 (м, 2H), 1,43 (дд, 3H, J=6,9, 1,5 Гц), 1,06 (с, 9H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 202,3; 136,1; 134,0; 130,1; 127,9; 127,4; 125,1; 69,4; 50,1; 35,1; 27,2; 19,5; 13,1.

Синтез промежуточного соединения 25a

К суспензии йодида йодметилтрифенилфосфония (16,6 г; 31 ммоль) в безводном ТГФ (126 мл) при комнатной температуре медленно добавляют 1 М раствор NaHMDS в ТГФ (31,27 мл). После перемешивания в течение 2 мин желтую смесь охлаждают до -78°С и затем добавляют раствор 24a (6,3 г, 22 ммоль) в ТГФ (82 мл). Реакционную смесь перемешивают при температуре -78°С в течение 2 ч и при комнатной температуре в течение 5 мин, разбавляют гексаном и фильтруют через слой целита. Слой промывают гексаном, объединенные фильтраты выпаривают при пониженном давлении и полученное масло очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 12:1 до 8:1) с получением 25a в виде желтого масла (5,6 г; выход: 62%)

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,25 (д, 2H, J=8,7 Гц), 6,85 (д, 2H, J=8,7 Гц), 6,25 (м, 2H) 5,64 (т, 1H, J=7,8 Гц), 4,42 (м, 2H), 3,80 (с, 3H), 3,55 (м, 1H), 2,40 (м, 2H), 2,25 (м, 2H), 2,03 (с, 3H).

Синтез промежуточного соединения 25b

К суспензии йодметилтрифенилфосфорана (3,32 г, 6,38 ммоль) в ТГФ (60 мл) при комнатной температуре медленно добавляют 6,83 мл 1 М раствора NaHMDS (6,38 ммоль) в ТГФ. После перемешивания в течение 2 мин желтую смесь охлаждают до температуры -78°С и затем добавляют 24b (1,67 г, 4,56 ммоль) в ТГФ (40 мл). Реакционную смесь перемешивают при температуре -78°С в течение 90 мин, затем при комнатной температуре в течение 5 мин, разбавляют гексаном и фильтруют через слой целита/SiO₂. Слой промывают гексаном/EtOAc (10:1 до 5:1) с получением соединения 25b (2 г, выход: 89%) в виде бесцветного масла, которое применяют без дальнейшей очистки.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,70-7,66 (м, 4H), 7,45-7,34 (м, 6H), 6,21-6,31 (м, 2H), 5,49-5,43 (м, 1H), 5,35-5,27 (м, 1H), 3,94-3,75 (м, 1H), 2,30-2,27 (м, 2H), 2,24-2,04 (м, 2H), 1,43 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,06 (с, 9H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 138,2; 136,2; 134,3; 129,9; 127,8; 126,4; 126,0; 84,1; 71,9; 41,6; 34,5; 27,2; 19,6; 13,2.

Синтез промежуточного соединения 25c

2,3-Дихлор-5,6-дициано-п-бензохинон (DDQ) (3,6 г, 16 ммоль) добавляют к раствору соединения 25a (5 г; 12 ммоль) в ДХМ-H₂O (20:1) в атмосфере Ar при комнатной температуре. Через 1:30 ч (ТСХ гексан/EtOAc 4:1 показывает отсутствие исходного материала) реакционную смесь гасят выливанием в Et₂O (200 мл) и промыванием 1 М NaOH (3×50 мл) и насыщенным раствором соли (50 мл). Органическую фазу сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Хроматографическое разделение п-метоксибензальдегида проводят через восстановление до п-метоксибензилового спирта. В конце раствор остатка, полученный в MeOH с NaBH₄ в атмосфере Ar, сохраняют при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем реакционную смесь гасят выливанием в Et₂O (100 мл) и промыванием 1 M HCl (40 мл) и насыщенным раствором соли (40 мл). Органическую фазу сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Полученное масло очищают на силикагеле (гексан/EtOAc 10:1 до 4:1) с получением вторичного спирта в виде бесцветного масла (2,8 г; выход: 80%).

К раствору вторичного спирта (2,8 г; 10 ммоль) в безводном ДХМ, в атмосфере Ar и при температуре 0°С по каплям добавляют 2,6-лутидина с последующим добавлением трет-бутилдиметилсилилтрифторметансульфоната (TBSOTf) (ТСХ гексан/ДХМ 4:1 показывает отсутствие исходного материала). В этот момент неочищенную смесь гасят 0,5 M HCl (25 мл) и экстрагируют ДХМ (2×25 мл). Объединенные органические слои промывают насыщенным водным раствором NaHCO₃ и насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат над NaSO₄, фильтруют и концентрируют. Флэш-хроматография (гексан/EtOAc 100:1 до 20:1) дает соединение 25c в виде бесцветного масла (3,14 г; выход: 80%).

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 6,25 (м, 2H) 5,64 (т, 1H, J=7,8 Гц), 3,82 (м, 1H), 2,38 (т, 2H, J=6,0 Гц), 2,20 (т, 2H, J=6,3 Гц), 2,03 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,05 (с, 6H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 137,7, 130,9, 124,3, 84,6, 70,6, 42,5, 36,6, 25,9, 21,3, 18,2, -4,4.

ПРИМЕР 7: СИНТЕЗ ФРАГМЕНТА BCD

На схеме 4 представлено несколько примеров синтеза фрагмента BCD в соответствии с номенклатурой, представленной на схеме 1.

Схема 4

Синтез промежуточного соединения 26a

Повторно герметизируемую пробирку Шленка загружают йодидом меди (I) (148 мг, 0,78 ммоль), карбонатом калия (1,076 г, 7,78 ммоль) и Boc-трет-LeuCONH₂ (полученный по методике, описанной у Pozdnev, V. F., Tetrahedron Letters 1995, 36, 7115-7118) (0,96 г, 4,15 ммоль), вакуумируют и заполняют аргоном. N,N'-диметилэтилендиамин (DMEDA) (0,166 мл, 1,55 ммоль), винилйодид 25c (1,04 г, 2,59 ммоль) и сухой ДМФ (15 мл) добавляют в атмосфере аргона. Пробирку Шленка герметично закрывают, нагревают до температуры 90°С в течение 16-18 ч и охлаждают до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляют EtOAc и гасят водой. Органический слой промывают водой и сушат над Na₂SO₄. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан/EtOAc, 20:1 до 15:1). Промежуточное соединение 26a (670 мг, выход, 53%) получают в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,72 (д, 1H, J=9,9 Гц), 6,70 (т, 1H, J=9,6 Гц), 5,54 (т, 1H, J=7,8 Гц), 5,35 (д, 1H, J=9,0 Гц), 4,76 (кв, 1H, J=7,8 Гц), 3,89 (д, 1H, J=9,0 Гц), 3,73-3,68 (м, 1H), 2,12 (м, 4H), 1,98 (с, 3H), 0,971 (с, 9H), 0,84 (с, 9H), 0,02 (с, 3H), 0,01 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,9, 156,0, 131,1, 123,9, 122,6, 108,2, 79,9, 71,6, 62,5, 36,5, 34,8, 33,8, 28,1, 26,7, 25,9, 21,2, 18,3, -4,3, -4,4.

Синтез промежуточного соединения 26b

Повторно герметизируемую пробирку Шленка загружают йодидом меди (I) (232,4 мг, 1,22 ммоль), карбонатом калия (1,688 г, 12,23 ммоль) и Boc-трет-LeuCONH₂ (2,474 г, 6,12 ммоль), вакуумируют и заполняют аргоном. N,N'-диметилэтилендиамин (DMEDA) (0,26 мл, 2,45 ммоль), винилйодид 25b (2 г, 4,08 ммоль) и сухой ДМФ (35 мл) добавляют в атмосфере аргона. Пробирку Шленка герметично закрывают, нагревают до температуры 90°С в течение 16-18 ч и охлаждают до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляют EtOAc и гасят водой. Органический слой промывают водой и сушат над Na₂SO₄. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан/EtOAc, 20:1 до 15:1). Промежуточное соединение 26b (1,06 г, выход, 44%) получают в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,70-7,67 (м, 4H), 7,43-7,35 (м, 6H), 7,13 (д, 1H, J=10,5 Гц), 6,67 (дд, 1H, J=10,2, 9,6 Гц), 5,56-5,45 (м, 1H), 5,36-5,28 (м, 2H), 4,86-4,78 (м, 2H), 3,88-3,77 (м, 1H), 2,26-2,04 (м, 4H), 1,44 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,43 (с, 9H), 1,06 (с, 9H), 0,96 (с, 9H).

Синтез промежуточного соединения 26c

Повторно герметизируемую пробирку Шленка загружают йодидом меди (I) (40,4 г, 0,213 ммоль), карбонатом калия (294 г, 2,13 ммоль) и Boc-Val-CONH₂ (полученный по методике, описанной у Pozdnev, V. F., Tetrahedron Letters 1995, 36, 7115-7118) (230 мг, 1,06 ммоль), вакуумируют и заполняют аргоном. N,N'-диметилэтилендиамин (DMEDA) (45 мкл, 0,426 ммоль), винилйодид 25c (283 мг, 0,71 ммоль) и сухой ДМФ (35 мл) добавляют в атмосфере аргона. Пробирку Шленка герметично закрывают, нагревают до температуры 90°С в течение 16-18 ч и охлаждают до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляют EtOAc и гасят водой. Органический слой промывают водой и сушат над Na₂SO₄. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан/EtOAc, 7:1 до 3:1). Промежуточное соединение 26с (270 г, выход, 77%) получают в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,80 (д, 1H, J=9,3), 6,79-6,73 (м, 1H), 5,58 (т, 1H, J=7,5 Гц), 5,02 (ушир.с, 1H), 4,85-4,76 (м, 1H), 3,93 (дд, 1H, J=8,4, 6,0 Гц), 3,80-3,73 (м, 1H), 2,12-2,22 (м, 5H), 2,02 (с, 3H), 1,45 (с, 9H), 0,98 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,93 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,89 (с, 9H), 0,07 (с, 3H), 0,06 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 169,3, 131,1, 124,0, 122,7, 108,9, 71,6, 36,5, 33,8, 30,6, 28,5, 26,1, 21,3, 19,6, 18,3, 17,9, -4,3, -4,4.

Синтез промежуточного соединения 26d

Повторно герметизируемую пробирку Шленка загружают йодидом меди (I) (14,2 мг, 0,075 ммоль), карбонатом калия (104 мг, 0,75 ммоль) и Fmoc-Phe-CONH₂ (полученный по методике, описанной у Pozdnev, V. F., Tetrahedron Letters 1995, 36, 7115-7118) (145 мг, 0,375 ммоль), вакуумируют и заполняют аргоном. N,N'-диметилэтилендиамин (16 мкл, 0,15 ммоль), винилйодид 25c (100 мг, 0,25 ммоль) и сухой ДМФ (2,5 мл) добавляют в атмосфере аргона. Пробирку Шленка герметично закрывают, нагревают до температуры 90°С в течение 16-18 ч и охлаждают до комнатной температуры. Полученную смесь разбавляют EtOAc и гасят водой. Органический слой промывают водой и сушат над Na₂SO₄. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан/EtOAc, 4:1 до 1:1). Промежуточное соединение 26d (46 мг, выход, 42%) получают в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,19 (д, 1H, J=11,1 Гц), 7,36-7,21 (м, 5H), 6,77 (ддд, 1H, J=10,2, 9,3, 0,9), 5,60 (ушир.т, 1H, J=7,8 Гц), 4,82-4,78 (м, 1H), 3,79-3,71 (м, 1H), 3,67 (дд, 1H, J=9,6, 3,9 Гц), 3,32 (дд, 1H, J=13,8, 3,9 Гц), 2,69 (дд, 1H, J=13,8, 9,6 Гц), 2,20-2,11 (м, 4H), 1,99 (с, 3H), 0,89 (с, 9H), 0,05 (с, 3H), 0,04 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 171,9, 137,9, 130,9, 129,5, 129,1, 127,2, 124,1, 122,5, 107,9, 71,4, 56,6, 40,9, 36,3, 33,6, 26,1, 21,3, 18,3, -4,4, -4,5.

МС (ЭР) m/z 437,1 [M+H]⁺, 459,0 [M+Na]⁺.

Синтез промежуточного соединения 27a

Раствор амино-защищенного производного 26a (670 мг, 1,33 ммоль) в этиленгликоле (30 мл) нагревают при температуре 200°С в течение 10-20 мин. Затем реакционную смесь охлаждают при комнатной температуре, разбавляют ДХМ, гасят насыщенным раствором соли и выливают в воду. Несколько капель 3 M NaOH добавляют до тех пор, пока рН раствора не станет равна 14, и затем тщательно экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением первичного амина 27a (510 мг, выход: 95%) в виде желтого масла, которое применяют без дальнейшей очистки.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 8,77 (д, 1H, J=9,9 Гц), 6,71 (т, 1H, J=9,6 Гц), 5,56 (т, 1H, J=7,8 Гц), 4,71 (м, 1H), 3,72 (м, 1H), 3,14 (с, 1H), 2,14 (м, 4H), 1,97 (с, 3H), 0,97 (с, 9H), 0,84 (с, 9H), 0,02 (с, 6H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 171,2, 131,0, 124,1, 122,5, 107,1, 71,5, 64,3, 36,2, 34,5, 33,8, 26,5, 26,0, 21,2, 18,2, -4,4, -4,5.

Синтез промежуточного соединения 27b

Раствор амино-защищенного производного 26b (847 мг, 1,43 ммоль) в этиленгликоле (50 мл) нагревают при температуре 200°С в течение 10-20 мин. Затем реакционную смесь охлаждают при комнатной температуре, разбавляют ДХМ, гасят насыщенным раствором соли выливают в воду. Несколько капель 3 M NaOH добавляют до тех пор, пока рН раствора не станет равна 14, и затем тщательно экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением первичного амина 27b (435 мг, выход: 62%) в виде белой пены после очистки флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 10:1 до 1:2).

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 8,50 (д, 1H, J=10,8 Гц), 7,70-7,66 (м, 4H), 7,45-7,33 (м, 6H), 6,67 (дд, 1H, J=11,1, 9,3 Гц), 5,48-5,40 (м, 1H), 5,36-5,28 (м, 1H), 4,79 (дд, 1H, J=16,2, 7,5 Гц), 3,87-3,79 (м, 1H), 3,08 (с, 1H), 2,22-2,14 (м, 4H), 1,43 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,05 (с, 9H), 0,97 (с, 9H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 171,0; 136,1; 134,5; 129,8; 127,8; 126,3; 126,2; 122,1; 107,6; 72,6; 64,4; 34,0; 34,4; 32,8; 27,2; 26,9; 19,6; 13,2.

Синтез промежуточного соединения 27c

Раствор амино-защищенного производного 26с (255 мг, 0,52 ммоль) в этиленгликоле (15 мл) нагревают при температуре 200°С в течение 10-20 мин. Затем реакционную смесь охлаждают при комнатной температуре, разбавляют ДХМ, гасят насыщенным раствором соли и выливают в воду. Несколько капель 3 M NaOH добавляют до тех пор, пока рН раствора не станет равна 14, и затем тщательно экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением первичного амина 27с (170 мг, выход: 85%) в виде желтого масла, которое применяют без дальнейшей очистки.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,27 (д, 1H, J=10,2), 6,76 (дд, 1H, J=11,1, 9,6 Гц), 5,61 (т, 1H, J=7,8 Гц), 4,80-4,72 (м, 1H), 3,81-3,73 (м, 1H), 3,31 (д, 1H, J=3,6 Гц) 2,44-2,33 (м, 1H), 2,20-2,16 (м, 4H), 2,03 (с, 3H), 1,59 (ушир.с, 2H), 1,00 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,89 (с, 9H), 0,82 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,05 (с, 6H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 172,1, 131,1, 124,1, 122,5, 107,4, 71,5, 36,5, 33,7, 30,8, 26,0, 21,3, 20,0, 16,1, -4,3, -4,4.

Синтез промежуточного соединения 28a

К раствору амина 27a (918 мг, 2,27 ммоль) в ДХМ/ДМФ (10:1, 39,6 мл) добавляют раствор (Z)-3-трибутилстаннилакриловой кислоты (1028 мг, 2,84 ммоль) в сухом ДХМ в атмосфере аргона и затем охлаждают при температуре 0°С. Диизопропилэтиламин (DIPEA) (0,6 мл, 3,4 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (HOAt) (310 мг, 2,27 ммоль) и гексафторфосфат N,N,N',N'-тетраметил-O-(7-азабензотриазол-1-ил)урония (HATU) (860 мг, 2,27 ммоль) добавляют к раствору и через 30 мин холодную баню удаляют. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl, выливают в воду и экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 20:1 до 15:1) с получением амида 28a (1110 мг; выход: 66%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,63 (д, 1H, J=10,5 Гц), 6,97 (д, 1H, J=12,3 Гц), 6,75 (д, 1H, J=12,3 Гц), 6,72 (т, 1H, J=9,5 Гц), 6,50 (д, 1H, J=9,0 Гц), 5,56 (т, 1H, J=6,6 Гц), 4,83 (кв, 1H, J=9,0 Гц), 4,41 (д, 1H, J=9,6 Гц) 3,76 (м, 1H), 2,17 (м, 4H), 2,01 (с, 3H), 1,45 (м, 6H), 1,25 (м, 8H), 1,0 (с, 9H), 0,88 (с, 9H), 0,84 (м, 13H), 0,06 (с, 6H).

Синтез промежуточного соединения 28b

К раствору амина 27b (575 мг, 1,17 ммоль) в ДХМ/ДМФ (4:1, 12,5 мл) добавляют раствор (Z)-3-трибутилстаннилакриловой кислоты (505,6 мг, 1,4 ммоль) в сухом ДХМ в атмосфере аргона и затем охлаждают до 0°С. DIPEA (0,243 мл, 1,76 моль), 7-гидроксибензотриазола (HOBt) (189,2 мг, 1,4 ммоль) и HATU (532,28 мг, 1,4 ммоль) добавляют к раствору и через 30 мин холодную баню удаляют. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl, выливают в воду и экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 20:1 до 15:1) с получением амида 28b (780,4 мг; выход: 77%) в виде белой пены.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,70-7,68 (м, 4H), 7,43-7,36 (м, 6H), 7,02 (д, 1H, J=12,3 Гц), 7,00 (д, 1H, J=10,8 Гц), 6,75 (д, 1H, J=12,3 Гц), 6,66 (т, 1H, J=9,3 Гц), 6,26 (д, 1H, J=9,6 Гц), 5,57-5,34 (м, 1H), 5,38-5,28 (м, 1H), 4,83 (дд, 1H, J=16,5, 7,8 Гц), 4,31 (д, 1H, J=9,6 Гц), 3,89-3,82 (м, 1H), 2,26-2,02 (м, 4H), 1,50-1,42 (м, 6H), 1,43 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,33-1,20 (м, 6H), 1,06 (с, 9H), 0,96 (с, 9H), 0,95-0,83 (м, 15H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,0; 166,2; 153,8; 136,3; 136,1; 134,3; 130,0; 127,8; 126,7; 126,0; 121,6; 109,0; 72,6; 60,7; 35,7; 34,0; 32,7; 29,5; 27,7; 27,2; 26,7; 19,5; 14,0; 13,2; 11,8.

Синтез промежуточного соединения 28c

К раствору амина 27c (170 мг, 0,437 ммоль) в ДХМ/ДМФ (10:1, 7,7 мл) добавляют раствор (Z)-3-трибутилстаннилакриловой кислоты (197,2 мг, 0,546 ммоль) в сухом ДХМ в атмосфере аргона и затем охлаждают при температуре 0°С. К раствору добавляют DIPEA (0,11 мл, 0,655 ммоль), HOAt (59,4 мг, 0,437 ммоль) и HATU (166 мг, 0,437 ммоль) и через 30 мин холодную баню удаляют. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl, выливают в воду и экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 20:1 до 15:1) с получением амида 28c (250 мг, выход: 78%) в виде белой пены.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,94 (д, 1H, J=10,8 Гц), 7,00 (д, 1H, J=12,3 Гц), 6,75 (д, 1H, J=12,3 Гц), 6,72 (т, 1H, J=9,5 Гц), 6,50 (д, 1H, J=9,0 Гц), 5,56 (т, J=6,6 Гц, 1H), 4,83 (кв, 1H, J=9,0 Гц), 4,41 (т, 1H, J=9,0 Гц), 3,76 (м, 1H), 2,17 (м, 4H), 2,01 (с, 3H), 1,45 (м, 7H), 1,25 (м, 8H), 0,88 (с, 9H), 0,84 (м, 19H), 0,06 (с, 6H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 169,2, 166,8, 153,8, 136,2, 131,1, 123,9, 122,6, 108,7, 71,6, 59,2, 36,5, 33,7, 31,4, 29,5, 29,4, 27,6, 26,1, 21,3, 19,5, 18,5, 18,3, 14,0, 11,8, -4,3, -4,4.

Синтез промежуточного соединения 28d

К раствору амина 26d (44 мг, 0,1 ммоль) в ДХМ/ДМФ (10:1, 1,3 мл) добавляют раствор (Z)-3-трибутилстаннилакриловой кислоты (45 мг, 0,125 ммоль) в сухом ДХМ в атмосфере аргона и затем охлаждают при температуре 0°С. К раствору добавляют DIPEA (26 мкл, 0,15 ммоль), HOAt (13,6 мг, 0,1 ммоль) и HATU (38 мг, 0,1 ммоль) и через 30 мин холодную баню удаляют. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl, выливают в воду и экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 20:1 до 15:1) с получением амида 28d (60 мг, выход: 80%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,43 (д, 1H, J=10,8 Гц), 7,34-7,22 (м, 5H), 7,02 (д, 1H, J=12,3 Гц), 6,70 (д, 1H, J=12,3 Гц), 6,66 (дд, 1H, J=9,9, 9,3 Гц), 6,34 (д, 1H, J=7,8 Гц), 5,51 (дд, 1H, J=8,1, 7,5 Гц), 4,81-4,71 (м, 2H), 3,68-3,59 (м, 1H), 3,18 (дд, 1H, J=13,5, 6 Гц), 2,69 (дд, 1H, J=13,5, 8,4 Гц), 2,11-2,04 (м, 2H), 2,01 (с, 3H), 1,96-1,87 (м, 1H), 1,80-1,70 (м, 1H), 1,53-1,43 (м, 8H), 1,31-1,24 (м, 10H), 0,89-0,85 (м, 9H), 0,88 (с, 9H), 0,04 (с, 3H), 0,01 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,5, 166,5, 154,4, 136,7, 135,9, 131,0, 129,5, 129,1, 127,4, 124,0, 122,3, 108,8, 71,5, 55,1, 38,8, 36,6, 33,3, 29,5, 29,4, 27,6, 26,0, 21,3, 18,2, 14,0, 11,8, -4,3, -4,5.

МС (ЭР) m/z 781,2 [M+H]⁺, 803,2 [M+Na]⁺.

Синтез промежуточного соединения 28e

К раствору амина 27а (30 мг, 0,075 ммоль) в ДХМ/ДМФ (10:1, 1 мл) добавляют раствор (Е)-3-трибутилстаннилакриловой кислоты (33,5 мг, 0,095 ммоль) в сухом ДХМ в атмосфере аргона и затем охлаждают при температуре 0°С. К раствору добавляют DIPEA (19 мкл, 0,11 ммоль), HOAt (10 мг, 0,075 ммоль) и HATU (27,5 мг, 0,075 ммоль) и через 30 мин холодную баню удаляют. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl, выливают в воду и экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 6:1) с получением амида 28е (25 мг, выход: 45%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,68 (д, 1H, J=9,2 Гц), 7,52 (д, 1H, J=18,9 Гц), 6,73 (т, 1H, J=9,2 Гц), 6,28 (д, 1H, J=10,8 Гц), 6,25 (д, 1H, J=18,9 Гц), 5,60 (т, 1H, J=7,2 Гц), 4,83 (кв, 1H, J=9,2 Гц), 4,40 (д, 1H, J=9,6 Гц), 3,77 (м, 1H), 2,17 (м, 4H), 2,01 (с, 3H), 1,45 (м, 6H), 1,25 (м, 8H), 1,0 (с, 9H), 0,88 (с, 9H), 0,84 (м, 13H), 0,06 (с, 6H).

ПРИМЕР 8

На схеме 5 представлен синтез нескольких соединений в соответствии с данным изобретением.

Схема 5

Синтез соединения 29a

К раствору алкенилстаннана 28a (1,1 г, 1,47 ммоль) и соединения 17a (0,62 г, 1,77 ммоль) в 1-метил-2-пирролидиноне (NMP) (14,7 мл) при температуре 0°C добавляют тиофенкарбоксилат меди (CuTC) (422 мг, 2,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 45 мин и 20 мин при комнатной температуре. Затем неочищенную смесь фильтруют через слой нейтральной окиси алюминия, промывают EtOAc/простым эфиром 50:50 и объединенные фильтраты промывают HCl 0,5N (3×15 мл). Органический раствор сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 5:1 до 1:1) с получением триена 29a (0,66 г, выход: 66%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,89 (д, 1H, J=10,8 Гц), 7,22 (дд, 1H, J=12,3, 11,4 Гц), 6,86 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,70 (дд, 1H, J=9,9, 9,3 Гц), 6,35 (д, 1H, J=9,3 Гц), 6,13 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,66 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,60 (дд, 1H, J=5,4, 3,9 Гц), 5,55 (ушир. т, 1H, J=7,8 Гц), 5,26 (д, 1H, J=10,2 Гц), 4,84-4,76 (м, 1H), 4,3 (д, 1H, J=9,3 Гц), 4,20-4,16 (м, 1H), 3,77-3,69 (м, 1H), 3,63 (с, 3H), 2,89-2,77 (м, 1H), 2,41-2,33 (м, 2H), 2,19-2,13 (м, 4H), 2,00 (с, 3H), 1,82 (с, 3H), 1,13 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,02 (с, 9H), 0,86 (с, 9H), 0,4 (с, 3H), 0,03 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,5; 166,4; 161,8; 145,4; 140,3, 137,3; 134,4; 134,3; 131,0, 124,3; 124,1, 122,4; 121,2; 108,7; 108,4; 82,0; 71,6; 60,6; 55,6; 37,5; 36,5, 35,1; 33,8; 26,5; 26,0; 21,3, 18,3, 17,4, 16,9, -4,3, -4,4.

Синтез соединения 29b

К раствору алкенилстаннана 28b (780,4 мг, 0,904 ммоль) и соединения 17a (377,4 мг, 1,085 ммоль) в NMP (9 мл) при температуре 0°C добавляют тиофенкарбоксилат меди (258,5 мг, 1,36 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 45 мин и 20 мин при комнатной температуре. Затем неочищенную смесь фильтруют через слой нейтральной окиси алюминия, промывают EtOAc/простым эфиром 50:50 и объединенные фильтраты промывают HCl 0,5N (3×10 мл). Органический раствор сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 5:1 до 1:1) с получением триена 29b (459,7 мг, выход: 66%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,66-7,64 (м, 4H), 7,43-7,32 (м, 7H), 7,23 (т, 1H, J=11,7 Гц), 6,85 (т, 1H, J=11,7 Гц), 6,62 (дд, 1H, J=10,5, 9,3 Гц), 6,41 (д, 1H, J=9,3 Гц), 6,11 (д, 1H, J=11,7 Гц), 5,66 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,60 (дд, 1H, J=5,7, 5,1 Гц), 5,49-5,41 (м, 1H), 5,32-5,27 (м, 1H), 5,25 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,83-4,75 (м, 1H), 4,32 (д, 1H, J=9,3 Гц), 4,22-4,15 (м, 1H), 3,83-3,78 (м, 1H), 3,62 (с, 3H), 2,86-2,78 (м, 1H), 2,40-2,35 (м, 2H), 2,20-2,04 (м, 4H), 1,81 (с, 3H), 1,40 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,13 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,03 (с, 9H), 0,97 (с, 9H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,3; 166,3; 161,8; 145,4; 140,2, 137,3; 136,1; 134,8; 134,4; 134,3; 129,9; 127,8; 126,4; 126,1; 124,4; 121,7; 121,2; 108,4; 109,1; 82,0; 72,6; 60,6; 55,6; 37,5; 35,2; 32,7; 31,1; 27,2; 26,8, 26,5; 19,5; 17,4; 16,9; 13,1.

Синтез соединения 29c

К раствору алкенилстаннана 28с (250 мг, 0,34 ммоль) и соединения 17a (142 мг, 0,409 ммоль) в NMP (2,5 мл) при температуре 0°C добавляют тиофенкарбоксилат меди (97 мг, 0,51 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 45 мин и 20 мин при комнатной температуре. Затем неочищенную смесь фильтруют через слой нейтральной окиси алюминия, промывают EtOAc/простым эфиром 50:50 и объединенные фильтраты промывают HCl 0,5N (3×10 мл). Органический раствор сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 10:1 до 6:1) с получением триена 29с (150 мг, выход: 67%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 8,21 (д, 1H, J=10,8 Гц), 7,28 (т, 1H, J=11,7 Гц), 6,88 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,72 (дд, 1H, J=10,2, 9,3 Гц), 6,42 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,15 (д, 1H, J=11,7 Гц), 5,66 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,61 (дд, 1H, J=5,7, 3,6 Гц), 5,56 (ушир.т, 1H, J=8,1 Гц), 5,27 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,85-4,77 (м, 1H), 4,30 (дд, 1H, J=8,1, 7,5 Гц), 4,24-4,16 (м, 1H), 3,79-3,72 (м, 1H), 3,66 (с, 3H), 2,88-2,80 (м, 1H), 2,42-2,37 (м, 2H), 2,18-2,14 (м, 5H), 2,00 (с, 3H), 1,83 (с, 3H), 1,14 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,97 (д, 3H, J=6,6 Гц), 0,96 (д, 3H, J=6,6 Гц), 0,86 (с, 9H), 0,4 (с, 6H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 169,2, 166,8; 161,8; 145,4; 140,5, 137,7; 134,6; 134,3; 131,0, 124,3; 124,2, 122,6; 121,2; 108,6; 108,4; 82,0; 71,5; 58,9; 55,6; 37,5; 36,4; 33,8; 30,8, 26,5; 26,1; 21,3, 19,6, 18,5, 18,3, 17,4, 16,9, -4,3, -4,4.

Синтез соединения 29d

К раствору алкенилстаннана 28d (60 мг, 0,08 ммоль) и соединения 17a (32,4 мг, 0,09 ммоль) в NMP (1 мл) при температуре 0°C добавляют тиофенкарбоксилат меди (22 мг, 0,12 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 45 мин и 20 мин при комнатной температуре. Затем неочищенную смесь фильтруют через слой нейтральной окиси алюминия, промывают EtOAc/простым эфиром 50:50 и объединенные фильтраты промывают HCl 0,5N (3×10 мл). Органический раствор сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 4:1 до 1:1) с получением триена 29d (13 мг, выход: 25%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,59 (д, 1H, J=11,1 Гц), 7,33-7,24 (м, 5Н), 7,23 (т, 1H, J=11,7 Гц), 6,90 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,66 (дд, 1H, J=10,5, 9 Гц), 6,24 (д, 1H, J=7,2 Гц), 6,17 (д, 1H, J=12,0 Гц), 5,63-5,58 (м, 2Н), 5,51 (тд, 1H, J=7,8, 1,2 Гц), 5,28 (д, 1H, J=10,8 Гц), 4,79-4,67 (м, 2H), 4,24-4,17 (м, 1H), 3,66 (с, 3H), 3,65-3,62 (м, 1Н), 3,22 (дд, 1Н J=13,5, 6,3 Гц), 3,04 (дд, 1Н, J=13,8, 8,4 Гц), 2,89-2,81 (м, 1H), 2,43-2,37 (м, 2H), 2,11-2,04 (м, 2H), 2,00 (с, 3H), 1,84 (с, 3H), 1,93-1,72 (м, 2Н), 1,16 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,86 (с, 9H), 0,03 (с, 3Н), 0,01 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,4, 166,5, 161,7, 145,5, 140,8, 138,1, 136,8, 134,5, 134,3, 131,0, 129,5, 129,1, 127,4, 124,2, 124,1, 122,3, 120,4, 108,7, 108,3, 82,0, 71,4, 55,7, 54,9, 38,3, 37,5, 36,6, 33,4, 26,5, 26,0, 21,3, 18,2, 17,4, 16,9, -4,3, -4,4.

МС (ЭР) m/z 711,2 [M+H]⁺.

Синтез соединения 29e

К раствору алкенилстаннана 28е (50 мг, 0,067 ммоль) и соединения 17a (28 мг, 0,08 ммоль) в NMP (1 мл) при температуре 0°C добавляют тиофенкарбоксилат меди (19,1 мг, 0,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 45 мин и 20 мин при комнатной температуре. Затем неочищенную смесь фильтруют через слой нейтральной окиси алюминия, промывают EtOAc/простым эфиром 50:50 и объединенные фильтраты промывают HCl 0,5N (3×10 мл). Органический раствор сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 5:1 до 1:1) с получением триена 29е (33 мг, выход: 50%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,73 (д, 1H, J=11,4 Гц), 7,70 (дд, 1H, J=14,1, 11,7 Гц), 6,71 (дд, 1H J=9,9, 9,7 Гц), 6,30 (д, 1H, J=9,3 Гц), 6,13 (д, 1H, J=12,9 Гц), 6,04 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 5,93 (д, 1H, J=15,0 Гц), 5,63 (ушир.т, 1H, J=4,5 Гц), 5,58-5,53 (м, 1H), 5,34 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,85-4,78 (м, 1H), 4,41 (д, 1H, J=9,3), 4,24-4,16 (м, 1H), 3,77-3,72 (м, 1H), 3,64 (с, 3H), 2,90-2,78 (м, 1H), 2,45-2,41 (м, 2H), 2,19-2,12 (м, 4H), 2,01 (с, 3H), 1,91 (с, 3H), 1,16 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,02 (с, 9H), 0,87 (с, 9H), 0,06 (с, 3H), 0,04 (с, 3H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,5, 166,1, 161,8, 145,4, 140,7, 138,0, 135,3, 134,9, 131,1, 125,8, 124,9, 124,0, 122,4, 108,7, 108,5, 81,9, 71,6, 60,9, 55,6, 37,6, 36,5, 35,2, 33,8, 29,9, 26,8, 26,1, 21,3, 18,3, 17,3, 16,9, -4,3, -4,4.

Синтез соединения 29f

К раствору алкенилстаннана 28а (60 мг, 0,083 ммоль) и соединения 17b (29 мг, 0,09 ммоль) в NMP (0,9 мл) при температуре 0°C добавляют тиофенкарбоксилат меди (24 мг, 0,12 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 45 мин и 20 мин при комнатной температуре. Затем неочищенную смесь фильтруют через слой нейтральной окиси алюминия, промывают EtOAc/простым эфиром 50:50 и объединенные фильтраты промывают HCl 0,5N (3×10 мл). Органический раствор сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 5:1 до 1:1) с получением амида 29f (27 мг, выход: 50%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,62 (д, 1H, J=10,5 Гц), 7,25 (дд, 1H, J=12,6, 11,4 Гц), 6,94-6,84 (м, 2H), 6,73 (дд, 1H, J=10,5, 9,0 Гц), 6,23 (д, 1H, J=9,3 Гц), 6,17 (д, 1H, J=11,4 Гц), 6,06-6,01 (м, 1H), 5,66 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,60-5,55 (м, 1H), 5,29 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,88-4,80 (м, 1H), 4,34 (д, 1H, J=9,3 Гц), 4,27-4,19 (м, 1H), 3,79-3,72 (м, 1H), 2,90-2,81 (м, 1H), 2,36-2,30 (м, 2H), 2,21-2,13 (м, 4H), 2,03 (с, 3H), 1,85 (с, 3H), 1,17 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,03 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 0,08 (с, 3H), 0,06 (с, 3H).

Синтез соединения 30a

К раствору 29a (275 мг, 0,41 ммоль) в ТГФ (6 мл) в атмосфере N₂ и при комнатной температуре добавляют TBAF 1 M в ТГФ (0,82 мл, 0,82 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2) с получением спирта 30a (175 мг; выход: 76%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,00 (д, 1H, J=10,2 Гц), 7,25 (дд, 1H, J=12,0, 11,4 Гц), 6,86 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,72 (дд, 1H, J=9,6, 8,7 Гц), 6,68 (д, 1H, J=8,7 Гц), 6,13 (д, 1H, J=11,7 Гц), 5,68 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,63-5,58 (м, 2H), 5,27 (д, 1H, J=10,2 Гц), 4,85-4,76 (м, 1H), 4,42 (д, 1H, J=9,3 Гц), 4,25-4,17 (м, 1H), 3,70-3,69 (м, 1H), 3,63 (с, 3H), 3,48 (ушир.с, 1H), 2,89-2,75 (м, 1H), 2,42-2,36 (м, 2H), 2,22-2,11 (м, 4H), 2,04 (с, 3H), 1,82 (с, 3H), 1,14 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,03 (с, 9H).

Изомер (21S)-соединения 30a получают при проведении синтеза начиная с рацемического фрагмента D. Конечную смесь изомеров [(21S)-соединение 30a и (21R)-соединение 30a] разделяют полупрепаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (SymmetryPrep C18 7 мкм, 7,8×150 мм, градиент H₂O:MeCN от 50 до 60% MeCN за 30 мин, УФ определение, поток 2,5 мл/мин, [кт ((21S)-30a): 15,4 мин, кт ((21R)-30a): 14,7 мин]) и (21S)-соединение 30a получают в чистой форме:

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 8,62 (д, 1H, J=10,2 Гц), 7,28-22 (м, 1H), 6,93-6,86 (м, 1H), 6,81-6,75 (м, 1H), 6,32 (д, 1H, J=9,0 Гц), 6,17 (д, 1H, J=11,7 Гц), 5,68-5,58 (м, 3H), 5,28 (д, 1H, J=10,2 Гц), 4,93-4,84 (м, 1H), 4,32 (д, 1H, J=9,3 Гц), 4,25-4,17 (м, 1H), 3,78-3,67 (м, 1H), 3,66 (с, 3H), 2,89-2,81 (м, 1H), 2,43-2,38 (м, 2H), 2,28-2,20 (м, 4H), 2,08 (с, 3H), 1,84 (с, 3H), 1,16 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,02 (с, 9H).

Синтез соединения 30b

К раствору соединения 29b (586 мг, 0,76 ммоль) в ТГФ (7,5 мл) в атмосфере N₂ и при комнатной температуре добавляют TBAF 1 M в ТГФ (1,53 мл, 2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2) с получением спирта 30b (320 мг, выход: 80%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 8,95 (д, 1H, J=10,2 Гц), 7,25 (т, 1H, J=12,0 Гц), 6,85 (т, 1H, J=11,7 Гц), 6,73 (т, 1H, J=9,6 Гц), 6,57 (д, 1H, J=8,7 Гц), 6,12 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,67 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,61 (дд, 1H, J=5,4, 3,9 Гц), 5,63-5,58 (м, 1H), 5,44-5,35 (м, 1H), 5,26 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,86 (кв, 1H, J=8,1 Гц), 4,38 (д, 1H, J=9,3 Гц), 4,24-4,16 (м, 1H), 3,81-3,71 (м, 1H), 3,64 (с, 3H), 2,96-2,92 (м, 1H), 2,86-2,79 (м, 1H), 2,41-2,37 (м, 2H), 2,28-2,14 (м, 4H), 1,82 (с, 3H), 1,61 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,14 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,02 (с, 9H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,7; 166,6; 161,8; 145,4; 140,3; 137,5; 134,4; 134,3; 127,7; 126,0; 124,4; 123,7; 121,1; 108,9; 108,4; 82,0; 72,1; 60,9; 55,7; 37,6; 35,0; 34,8; 33,2; 26,9; 26,5; 17,4; 16,9; 13,3.

Синтез соединения 30c

К раствору соединения 29c (150 мг, 0,23 ммоль) в ТГФ (4,8 мл) в атмосфере N₂ и при комнатной температуре добавляют TBAF 1M в ТГФ (0,45 мл, 0,45 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2) с получением спирта 30c (90 мг, выход: 73%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,16 (д, 1H, J=10,2 Гц), 7,26 (дд, 1H, J=12,0, 11,1 Гц), 6,87 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,79-6,70 (м, 2H), 6,14 (д, 1H, J=11,7 Гц), 5,68 (д, 1H, J=11,7 Гц), 5,63-5,58 (м, 2H), 5,27 (д, 1H, J=9,6 Гц), 4,85-4,76 (м, 1H), 4,35 (дд, 1H, J=8,4, 7,5 Гц), 4,24-4,17 (м, 1H), 3,70-3,69 (м, 1H), 3,63 (с, 3H), 3,43 (ушир.с, 1H), 2,89-2,76 (м, 1H), 2,42-2,36 (м, 2H), 2,21-2,14 (м, 4H), 2,03 (с, 3H), 1,82 (с, 3H), 1,13 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,96 (д, 6H, J=6,6 Гц).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 169,7, 167,1, 161,8, 145,4, 140,5, 137,8, 134,6, 134,2, 131,6, 124,4, 123,9, 123,8, 120,7, 108,5, 108,4, 82,0, 59,1, 55,7, 37,5, 36,4, 33,5, 31,0, 26,5, 21,3, 19,5, 18,7, 17,4, 16,8.

МС (ЭР) m/z 549,0 [M+H]⁺, 571,1 [M+Na]⁺.

Синтез соединения 30d

К раствору соединения 29d (11 мг, 0,02 ммоль) в ТГФ (0,32 мл) в атмосфере N₂ и при комнатной температуре добавляют TBAF 1 M в ТГФ (0,03 мл, 0,03 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2) с получением спирта 30d (6 мг, выход: 65%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 8,54 (д, 1H, J=9,9 Гц), 7,34-7,23 (м, 5H), 7,20 (т, 1H, J=11,7 Гц), 6,89 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,72 (дд, 1H, J=9,9, 9,3 Гц), 6,27 (д, 1H, J=8,1 Гц), 6,17 (д, 1H, J=11,7 Гц), 5,63-5,53 (м, 3H), 5,28 (д, 1H, J=10,2 Гц), 4,84-4,76 (м, 1H), 4,75-4,68(м, 1H), 4,25-4,17 (м, 1H), 3,66 (с, 3H), 3,67-3,65 (м, 1H), 3,18 (дд, 1H, J=13,8, 6,3 Гц), 3,06 (дд, 1H, J=13,8, 8,1 Гц), 2,89-2,81 (м, 1H), 2,43-2,38 (м, 2H), 2,15-2,10 (м, 3H), 2,06 (с, 3H), 1,92-1,87 (м, 1H), 1,84 (с, 3H), 1,16 (д, 3H, J=6,6 Гц).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,6, 166,6, 160,8, 145,8, 140,8, 138,1, 136,8, 134,6, 134,2, 129,6, 129,0, 127,2, 124,1, 124,0, 123,4, 120,4, 108,3, 108,2, 82,0, 71,6, 55,7, 55,0, 38,4, 37,5, 36,4, 33,0, 26,5, 21,3, 17,4, 16,9.

МС (ЭР) m/z 597,2 [M+H]⁺.

Синтез соединения 30e

К раствору соединения 29е (32 мг, 0,047 ммоль) в ТГФ (1 мл) в атмосфере N₂ и при комнатной температуре добавляют TBAF 1 M в ТГФ (0,094 мл, 0,094 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2) с получением спирта 30е (14 мг, выход: 55%) в виде белой пены.

¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ: 8,97 (д, 1H, J=10,2 Гц), 7,71 (дд, 1H, J=14,7, 11,7 Гц), 6,74 (дд, 1H, J=9,3, 9,9 Гц), 6,57 (д, 1H, J=9,0 Гц), 6,15 (д, 1H, J=11,7 Гц), 6,03 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 5,95 (д, 1H, J=14,7 Гц), 5,65-5,58 (м, 2H), 5,35 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,87-4,78 (м, 1H), 4,42 (д, 1H, J=9,3), 4,25-4,18 (м, 1H), 3,72-3,68 (м, 1H), 3,65 (с, 3H), 3,25 (ушир.с, 1H), 2,87-2,79 (м, 1H), 2,45-2,40 (м, 2H), 2,23-2,12 (м, 4H), 2,04 (с, 3H), 1,89 (с, 3H), 1,15 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,03 (с, 9H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,8, 166,5, 161,68, 145,3, 140,9, 138,2, 135,4, 134,7, 132,0, 125,68, 124,6, 123,9, 123,6, 108,6, 108,4, 81,9, 71,7, 61,3, 55,7, 37,5, 36,5, 36,3, 34,9, 33,3, 26,9, 26,7, 21,3, 17,0, 16,7.

МС (ЭР) m/z 563,3 [M+H]⁺, 585,2 [M+Na]⁺.

Синтез соединения 30f

К раствору соединения 29f (28 мг, 0,04 ммоль) в ТГФ (1 мл) в атмосфере N₂ и при комнатной температуре добавляют TBAF 1 M в ТГФ (0,09 мл, 0,09 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2) с получением спирта 30f (17 мг, выход: 75%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 9,05 (д, 1H, J=10,2 Гц), 7,35 (м, 2H), 7,0 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,73 (дд, 1H, J=9,6, 8,7 Гц), 6,56 (д, 1H, J=8,7 Гц), 6,05 (м, 3H), 5,63-5,58 (м, 2H), 5,30 (д, 1H, J=10,2 Гц), 4,78 (м, 1H), 4,50 (д, 1H, J=9,3 Гц), 3,68 (м, 1H), 3,48 (ушир.с, 1H), 2,45 (м, 1H), 2,42-2,36 (м, 2H), 2,22-2,11 (м, 4H), 2,04 (с, 3H), 1,82 (с, 3H), 1,14 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,03 (с, 9H).

Синтез соединения 1

К раствору соединения 30a (300 мг, 0,53 ммоль) в дихлорметане (7,5 мл) при температуре 0°C добавляют трихлорацетилизоцианат (TCAI) (76 мкл, 0,64 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 30 мин и затем добавляют нейтральный оксид алюминия. Смесь перемешивают в течение 5-30 мин и затем пропитывают в слое оксида алюминия. Продукт промывают с применением смеси ДХМ/MeOH 50:1. Фильтрат выпаривают в вакууме с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 2:1 до 1:2). Соединение 1 (0,26 г, выход: 81%) получают в виде белого твердого вещества и получают физические и спектроскопические характеристики (¹H, ¹³C ЯМР и МС), эквивалентные тем, которые описаны в примере 2.

Изомер (21S)-соединения 1 получают одним из двух способов:

A) с применением той же методики начиная со смеси изомеров (21R)- и (21S)-соединения 30a и заканчивая отделением (21S)-соединения 1 полупрепаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (Symmetry Prep C18 7 мкм, 7,8×150 мм, градиент H₂O:MeOH от 50 до 100% MeOH за 30 мин, УФ определение, поток 2,5 мл/мин, [кт ((21S)-1): 19,2 мин, кт ((21R)-1): 19,8 мин]).

B) по методике, описанной для соединения 1, но начиная с чистого (21S)-соединения 30a.

(21S)-соединение 1

¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ: 8,69 (д, 1H, J=10,5 Гц), 7,30 (т, 1H, J=11,5 Гц), 6,90 (т, 1H, J=11,5 Гц), 6,86-6,82 (м, 1H), 6,34 (д, 1H, J=9,0 Гц), 6,17 (д, 1H, J=11,5 Гц), 5,66 (д, 1H, J=11,5 Гц), 5,64-5,62 (м, 1H), 5,59-5,56 (м, 1H), 5,29 (д, 1H, J=9,5 Гц), 4,81-4,77 (м, 1H), 4,50-4,45 (м, 1H), 4,42 (д, 1H, J=9,5 Гц), 4,25-4,20 (м, 1H), 3,66 (с, 3H), 2,89-2,81 (м, 1H), 2,44-2,31 (м, 5H), 2,24-2,17 (м, 1H), 2,06 (с, 3H), 1,84 (с, 3H), 1,16 (д, 3H, J=6,5 Гц), 1,04 (с, 9H).

¹³C ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ: 168,4, 166,1, 157,2, 148,3, 145,2, 140,2, 137,4, 134,1, 134,0, 132,0, 124,7, 124,2, 122,4, 120,7, 108,1, 104,7, 81,8, 75,0, 60,8, 55,4, 37,2, 34,8, 32,5, 30,3, 26,7, 26,2, 21,0, 17,1, 16,6.

Синтез соединения 4

К раствору соединения 30b (56 мг, 0,105 ммоль) в дихлорметане (1 мл) при температуре 0°C добавляют трихлорацетилизоцианат (15 мкл, 0,126 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 30 мин и затем добавляют нейтральный оксид алюминия. Смесь перемешивают в течение 5-30 мин и затем пропитывают в слое оксида алюминия. Продукт промывают с применением смеси ДХМ/MeOH 50:1. Фильтрат выпаривают в вакууме с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2). Соединение 4 (57,6 мг, выход: 96%) получают в виде белой пены и получают физические и спектроскопические характеристики (¹H, ¹³C ЯМР и МС), эквивалентные тем, которые представлены в примере 3.

Синтез соединения 5

К раствору соединения 30с (115 мг, 0,21 ммоль) в дихлорметане (2 мл) при температуре 0°C добавляют трихлорацетилизоцианат (27 мкл, 0,23 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 30 мин и затем добавляют нейтральный оксид алюминия. Смесь перемешивают в течение 5-30 мин и затем пропитывают в слое оксида алюминия. Продукт промывают с применением смеси ДХМ/MeOH 50:1. Фильтрат выпаривают в вакууме с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2). Соединение 5 (71 мг, выход: 57%) получают в виде белой пены и получают физические и спектроскопические характеристики (¹H, ¹³C ЯМР и МС), эквивалентные тем, которые представлены в примере 3.

Конечную смесь изомеров (15 мг) разделяют полупрепаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (SymmetryPrep C18 7 мкм, 7,8×150 мм, градиент H₂O:MeOH от 50 до 70% MeOH за 75 мин, УФ определение, поток 2,5 мл/мин, [кт ((15R)-7): 18,15 мин, кт ((15S)-7)]: 19,62 мин) и получают 3,1 мг чистого (15-R)-соединения 7 и 2,9 мг чистого (15S)-соединения 7.

Изомер (21S)-соединения 5 выделяют при очищении соединения 5 полупрепаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (Symmetry Prep C8, градиент H₂O:MeCN от 45 до 50% MeCN за 30 мин, УФ определение, поток 4,7 мл/мин, [кт ((21S)-5): 21,6 мин, кт ((21R)-5)]: 23,6 мин). Начиная с образца (50 мг), который содержит оба изомера, после указанного выше разделения получают 39 мг чистого (21R)-соединения 5 и 6,1 мг чистого (21S)-соединения 5.

(21S)-соединение 5

¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ: 8,74 (д, 1H, J=10,5 Гц), 7,29 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,94 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,84 (дд, 1H, J=10,5, 9,3 Гц), 6,22 (м, 2H), 5,68 (д, 1H, J=11,5 Гц), 5,63 (м, 2H), 5,42 (д, 1H, J=9,3 Гц), 4,81 (м, 1H), 4,52 (м, 1H), 4,41 (м, 1H), 4,23 (м, 1H), 3,66 (с, 3H), 2,91 (м, 1H), 2,49-2,38 (м, 3H), 2,35-2,31 (м, 2H), 2,24-2,17 (м, 2H), 2,05 (с, 3H), 1,82 (с, 3H), 1,15 (д, 3H, J=6,6 Гц), 0,99 (д, 3H, J=6,9 Гц) 0,96 (д, 3H, J=6,9 Гц).

МС (ЭР) m/z 592,3 [M+H]⁺.

Синтез соединения 31

К раствору соединения 30d (5 мг, 0,008 ммоль) в дихлорметане (0,7 мл) при температуре 0°C добавляют трихлорацетилизоцианат (1,1 мкл, 0,009 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 30 мин и затем добавляют нейтральный оксид алюминия. Смесь перемешивают в течение 5-30 мин и затем пропитывают в слое оксида алюминия. Продукт промывают с применением смеси ДХМ/MeOH 50:1. Фильтрат выпаривают в вакууме с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2). Соединение 31 (3,5 мг, выход: 66%) получают в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 8,43 (д, 1H, J=10,5 Гц), 7,29-7,19 (м, 6H), 6,91 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,77 (ушир. дд, 1H, J=10,2, 9,6 Гц), 6,51 (д, 1H, J=8,1 Гц), 6,16 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,69-5,63 (м, 2H), 5,59-5,54 (м, 1H), 5,31 (д, 1H, J=9,3 Гц), 5,12 (ушир.с, 1H), 4,91-4,84 (м, 1H), 4,76-4,70 (м, 1H), 4,31-4,13 (м, 2H, CH-5), 3,66 (с, 3H), 3,20 (дд, 1H, J=13,5, 6,9 Гц), 3,09 (дд, 1H, J=13,5, 6,6 Гц), 2,89-2,81 (м, 1H), 2,48-2,35 (м, 2H), 2,28-2,23 (м, 3H), 2,05 (с, 3H), 2,01-1,90 (м, 1H), 1,81 (с, 3H), 1,15 (д, 3H, J=6,6 Гц).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 168,9, 166,5, 161,9, 157,1, 145,4, 140,6, 137,9, 136,4, 134,4, 133,9, 132,1, 129,7, 128,8, 127,2, 124,6, 124,6, 122,7, 120,7, 108,5, 105,6, 82,1, 74,8, 55,7, 54,6, 38,7, 37,2, 33,1, 30,5, 26,2, 21,2, 17,3, 16,4.

Синтез соединения 8

К раствору соединения 30е (13 мг, 0,023 ммоль) в дихлорметане (1,7 мл) при температуре 0°C добавляют трихлорацетилизоцианат (3 мкл, 0,025 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 30 мин и затем добавляют нейтральный оксид алюминия. Смесь перемешивают в течение 5-30 мин и затем пропитывают в слое оксида алюминия. Продукт промывают с применением смеси ДХМ/MeOH 50:1. Фильтрат выпаривают в вакууме с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2). Соединение 8 (14,3 мг, выход: 100%) получают в виде белого твердого вещества и получают физические и спектроскопические характеристики (¹H, ¹³C ЯМР и МС), эквивалентные тем, которые представлены в примере 4.

ПРИМЕР 9

На схеме 6 изображен способ синтеза нескольких соединений в соответствии с данным изобретением.

Схема 6

Синтез промежуточного соединения 32

К раствору триэтил 4-фосфонокротоната (3,7 г, 14,66 ммоль) и 18-краун-6 (6,2 г, 23,46 ммоль) в сухом ТГФ (59 мл), перемешиваемому в атмосфере аргона при температуре -78°C, по каплям добавляют KHMDS (28,1 мл, 14,07 ммоль). Через 15 мин по каплям добавляют альдегид 12 (2,35 г, 5,86 ммоль) и перемешивают в течение 20 часов при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасят насыщенным раствором NH₄Cl (200 мл) и разбавляют EtOAc. Органическую фазу сушат (Na₂SO₄) и выпаривают при пониженном давлении. Очистка хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 20:1 до 10:1) дает 2,7 г (выход: 93%) триена 32.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,31 (дд, 1H, J=11,2, 15,3 Гц), 6,53 (д, 1H, J=15,0 Гц), 6,21 (дд, 1H, J=11,7, 13,8 Гц), 5,84 (д, 1H, J=15,1 Гц), 5,61 (д, 1H, J=9,6 Гц), 4,17 (м, 2H), 3,72 (м, 1H), 3,63 (м, 2H), 2,61 (м, 1H), 1,78 (с, 3H), 1,67 (м, 2H), 1,26 (м, 3H), 0,94 (д, 3H, J=6,7 Гц), 0,87 (с, 18H), 0,01 (м, 12H).

Синтез промежуточного соединения 33

К раствору соединения 32 (3,75 г, 7,54 ммоль) в EtOH (38 мл) добавляют п-толуолсульфонат пиридиния (663 мг, 2,64 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 17 часов. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении, полученное масло очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 4:1 до 1:1) с получением 2,11 г (выход: 73%) спирта 33.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,31 (дд, 1H, J=10,8, 15,0 Гц), 6,52 (д, 1H, J=15,3 Гц), 6,23 (дд, 1H, J=11,1, 15,0 Гц), 5,86 (д, 1H, J=15,3 Гц), 5,52 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,18 (кв, 2H, J=7,5 Гц), 3,72 (м, 3H), 2,73 (м, 1H), 1,82 (с, 3H), 1,68 (м, 2H), 1,28 (т, 3H, J=7,2 Гц), 0,98 (д, 3H, J=6,6 Гц), 0,88 (с, 9H), 0,08 (м, 6H).

Синтез промежуточного соединения 34

Спирт 33 (130 мг, 0,34 ммоль) перемешивают при комнатной температуре в ДХМ (3,4 мл) в инертной атмосфере и одной порцией добавляют периодинан (DMP) (288,5 мг, 0,68 ммоль). Реакционную смесь перемешивают до завершения реакции (ТСХ, около 1 часа) и затем гасят NaHCO₃ (насыщенный раствор), экстрагируют ДХМ, промывают насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Продукт очищают хроматографией на колонке, элюируя EtOAc/гексаном 1:4 с получением около 125 мг (выход: 96%) альдегида 34 в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 9,79 (с, 1H), 7,31 (дд, 1H, J=11,1, 15,3 Гц), 6,52 (д, 1H, J=15,3 Гц), 6,25 (дд, 1H, J=11,1, 15,3 Гц), 5,87 (д, 1H, J=15,3 Гц), 5,48 (д, 1H, J=10,5 Гц), 4,19 (кв, 2H, J=7,2 Гц), 4,03 (м, 1H), 2,69 (м, 1H), 2,54 (м, 2H), 1,80 (с, 3H), 1,29 (т, 3H, J=6,9 Гц), 1,01 (д, 3H, J=6,9 Гц), 0,88 (с, 9H), 0,06 (м, 6H).

Синтез промежуточного соединения 35

К раствору фосфоната (170 мг, 0,67 ммоль) и 18-краун-6 (357 мг, 1,35 ммоль) в сухом ТГФ (10 мл), перемешиваемому в атмосфере аргона при температуре -78°C, по каплям добавляют KHMDS (1,34 мл, 0,67 ммоль). Через 15 мин по каплям добавляют раствор альдегида 34 (170 мг, 0,45 ммоль) в сухом ТГФ (8,5 мл) в течение 30 мин и перемешивают при температуре -78°C в течение 90 мин. Затем реакционную смесь гасят насыщенным раствором NH₄Cl, нагревают до комнатной температуры и разбавляют дихлорметаном. Органическую фазу сушат (Na₂SO₄) и выпаривают при пониженном давлении. Очистка хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 20:1 до 10:2) дает 170 мг (выход: 82%) (E)-35.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,29 (дд, 1H, J=10,8, 15,3 Гц), 6,50 (д, 1H, J=15,3 Гц), 6,19 (дд, 1H, J=10,8, 15,0 Гц), 5,83 (д, 1H, J=15,3 Гц), 5,48 (д, 1H, J=10,2 Гц), 5,33 (т, 1H, J=7,2 Гц), 4,17 (м, 2H), 3,71 (с, 3H), 3,61 (м, 1H), 3,58 (с, 3H), 2,73 (м, 1H), 2,57 (м, 2H), 1,71 (с, 3H), 1,25 (м, 3H), 0,97 (д, 3H, J=6,7 Гц), 0,88 (с, 9H), 0,03 (м, 6H).

Синтез промежуточного соединения 36

LiOH (15,8 мг, 0,66 ммоль) добавляют к раствору сложного эфира 35 (140 мг, 0,30 ммоль) в 20% воде/диоксане (7 мл) и смесь перемешивают в течение 4 часов при температуре 60°С. Смесь охлаждают, разбавляют ДХМ и промывают HCl (0,5N, 10 мл). Водную фазу повторно экстрагируют ДХМ и объединенные органические слои сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением неочищенной ди-кислоты, которую применяют на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Концентрированную HCl (43 мкл) добавляют к раствору неочищенного продукта в MeOH (5,2 мл) и полученную смесь перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении, полученное масло очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 1:4 до EtOAc/MeOH 5:1) с получением 72 мг (выход: 70%) кислоты 36 в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,40 (дд, 1H, J=10,8, 15,0 Гц), 6,57 (д, 1H, J=15,0 Гц), 6,31 (дд, 1H, J=11,4, 15,3 Гц), 5,89 (д, 1H, J=15,0 Гц), 5,60 (м, 1H), 5,52 (д, 1H, J=10,2 Гц), 4,22 (м, 1H), 3,64 (с, 3H), 2,90 (м, 1H), 2,38 (м, 2H), 1,84 (с, 3H), 1,15 (д, 3H, J=6,9 Гц).

Синтез соединения 37

К раствору амина 27е (37,6 мг, 0,093 ммоль) в ДХМ/ДМФ (10:1, 1,3 мл) добавляют раствор кислоты 36 (30 мг, 0,103 ммоль) в сухом ДХМ в атмосфере аргона и затем охлаждают при температуре 0°С. К раствору добавляют DIPEA (26 мкл, 0,14 ммоль), HOAt (12,7 мг, 0,093 ммоль) и HATU (35,4 мг, 0,093 ммоль) и через 30 мин холодную баню удаляют. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl, выливают в воду и экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 2:1 до 1:4) с получением амида 37 (34,7 мг, выход: 55%) в виде масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ: 7,88 (д, 1H, J=10,5 Гц), 7,26 (дд, 1H, J=14,4, 11,4 Гц), 6,72 (дд, 1H, J=9,9, 9,6 Гц), 6,50 (д, 1H, J=15,3 Гц), 6,31-6,22 (м, 2H), 5,94 (д, 1H, J=14,7 Гц), 5,61-5,54 (м, 2H), 5,44 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,87-4,79 (м, 1H), 4,45 (д, 1H, J=9,3), 4,24-4,16 (м, 1H), 3,77-3,44 (м, 1H), 3,64 (с, 3H), 2,96-2,2,81 (м, 1H), 2,39-2,35 (м, 2H), 2,16-2,15 (м, 4H), 2,01 (с, 3H), 1,82 (с, 3H), 1,14 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,02 (с, 9H), 0,87 (с, 9H), 0,06 (с, 3H), 0,05 (с, 3H).

Синтез соединения 38

К раствору соединения 37 (28 мг, 0,04 ммоль) в ТГФ (0,6 мл) в атмосфере N₂ и при комнатной температуре добавляют TBAF 1 M в ТГФ (83 мкл, 0,08 ммоль). Реакцию перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 3:1 до 1:2) с получением спирта 38 (22 мг, выход: 96%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ: 9,06 (д, 1H, J=9,9 Гц), 7,24 (дд, 1H, J=14,7, 10,5 Гц), 6,76 (д, 1H, J=9,6 Гц), 6,74 (дд, 1H, J=9,6, 9,6 Гц), 6,50 (д, 1H, J=15,3 Гц), 6,25 (дд, 1H, J=15,3, 11,1 Гц), 5,99 (д, 1H, J=14,7 Гц), 5,65-5,60 (м, 2H), 5,45 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,87-4,81 (м, 1H), 4,45 (д, 1H, J=9,3), 4,24-4,16 (м, 1H), 3,74-3,64 (м, 1H), 3,64 (с, 3H), 3,22-3,17 (м, 1H), 2,95-2,2,82 (м, 1H), 2,40-2,35 (м, 2H), 2,23-2,16 (м, 4H), 2,05 (с, 3H), 1,81 (с, 3H), 1,13 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,03 (с, 9H).

Синтез соединения 3

К раствору соединения 38 (20 мг, 0,04 ммоль) в дихлорметане (0,35 мл) при температуре 0°C добавляют трихлорацетилизоцианат (5,1 мкл, 0,04 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 30 мин и затем добавляют нейтральный оксид алюминия. Смесь перемешивают в течение 5-30 мин и затем пропитывают в слое оксида алюминия. Продукт промывают с применением смеси ДХМ/MeOH 50:1. Фильтрат выпаривают в вакууме с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (гексан/EtOAc 1:1 до 1:3). Соединение 3 (13,6 мг, выход: 63%) получают в виде белой пены и получают физические и спектроскопические характеристики (¹H, ¹³C ЯМР и МС), эквивалентные тем, которые представлены в примере 3.

ПРИМЕР 10

На схеме 7 изображен способ синтеза соединения 7.

Схема 7

Синтез промежуточного соединения 40

К раствору Boc-трет-LeuCONH₂ 39 (полученного по методике, описанной у Pozdnev, V. F., Tetrahedron Letters 1995, 36, 7115-7118) (1,9 г, 8,26 ммоль) в MeOH добавляют 66 мл раствора 1,25 M HCl в MeOH. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре и затем концентрируют при пониженном давлении. Твердое вещество затем суспендируют в MeOH и нейтрализуют концентрированным гидроксидом аммония. Растворитель удаляют на роторном испарителе и неочищенный остаток растворяют в дихлорметане. Раствор сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют с получением 730 мг (выход: 68%) промежуточного соединения 40 в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 6,65-6,55 (ушир.с, 1H), 5,65-5,55 (ушир.с, 1H), 3,18 (с, 1H), 1,65-1,55 (ушир.с, 2H), 1,05 (с, 9H).

Синтез промежуточного соединения 41

К раствору амина 40 (100 мг, 0,77 ммоль) в ДХМ/ДМФ (10:1, 7,7 мл) добавляют раствор (Z)-3-трибутилстаннилакриловой кислоты (306 мг, 0,85 ммоль) в сухом ДХМ в атмосфере аргона и затем охлаждают при температуре 0°С. К раствору добавляют DIPEA (0,27 мл, 1,54 ммоль), HOAt (115,6 мг, 0,85 ммоль) и HATU (323 мг, 0,85 ммоль) и через 30 мин холодную баню удаляют. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl, выливают в воду и экстрагируют ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 10:1 до 1:1) с получением амида 41 (228 мг, выход: 63%) в виде белой пены.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 6,99 (д, 1H, J=12,3 Гц), 6,77 (д, 1H, J=12,3 Гц), 6,47 (д, 1H, J=9,6 Гц), 6,38 (ушир.с, 1H), 6,12 (ушир.с, 1H), 4,46 (д, 1H, J=9,9 Гц), 1,48-1,40 (м, 6H), 1,31-1,19 (м, 12H), 1,00 (с, 9H), 0,89-0,83 (м, 9H).

¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц) δ: 173,4, 166,6, 153,4, 136,6, 60,0, 35,0, 29,6, 27,6, 26,8, 14,0, 11,7.

Синтез соединения 7

К раствору алкенилстаннана 41 (227,6 мг, 0,48 ммоль) и соединения 17a (200,9 мг, 0,58 ммоль) в NMP (5 мл) при температуре 0°C добавляют тиофенкарбоксилат меди (19,1 мг, 0,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°C в течение 45 минут и 20 мин при комнатной температуре. Затем неочищенную смесь фильтруют через слой нейтральной окиси алюминия, промывают EtOAc/простым эфиром 50:50 и объединенные фильтраты промывают HCl 0,1%. Органический раствор сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией на колонке (дихлорметан/MeOH 100:1 до 10:1) с получением соединения 7 (65,7 мг, выход: 34%) в виде белой пены. Этот продукт синтеза демонстрирует физические и спектроскопические характеристики (¹H, ¹³C ЯМР и МС), эквивалентные тем, которые представлены в примере 3.

Изомер (15R)-соединения 7 получают, если рацемическую смесь аминокислоты (Boc-трет-LeuCONH₂) применяют для проведения этих реакций. Конечную смесь изомеров (15 мг) разделяют полупрепаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (SymmetryPrep C18 7 мкм, 7,8×150 мм, градиент H₂O:MeOH от 50 до 70% MeOH в 75 мин, УФ определение, поток 2,5 мл/мин, [кт ((15R)-7): 18,15 мин, кт ((15S)-7)]: 19,62 мин) и получают 3,1 мг чистого (15-R)-Соединения 7 и 2,9 мг чистого (15S)-Соединения 7:

(15R)-соединение 7

¹H ЯМР (MeOD, 500 МГц) δ: 7,23 (дд, 1H, J=12,5, 11,5 Гц), 6,94 (дд, 1H, J=12,5, 11,5 Гц), 6,18 (д, 1H, J=12,0 Гц), 5,91-5,88 (м, 1H), 5,86 (т, 1H, J=4,5 Гц), 5,34 (д, 1H, J=10,0 Гц), 4,33-4,28 (м, 1H), 3,64 (с, 3H), 2,92-2,88 (м, 1H),2,47-2,44 (м, 2H), 1,85 (с, 3H), 1,17 (д, 3H, J=6,6 Гц), 1,02 (с, 9H).

¹³C ЯМР (MeOD, 125 МГц) δ: 175,3, 168,6, 164,0, 146,0, 140,8, 138,2, 135,4, 135,4, 125,5, 121,9, 111,1, 83,5, 61,8, 55,9, 38,4, 35,0, 27,2, 27,1, 17,3, 16,8.

ПРИМЕР 11

На схеме 8 показаны способы получения соединений 42 и 43.

Схема 8

Синтез соединения 42

К раствору спирта 30a (5 мг, 8,8 мкмоль) в пиридине (0,45 мл) добавляют фенилизоцианат (29 мл, 0,27 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 часов и затем гасят насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фазы сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией (гексан/EtOAc 20:1 до 1:1) с получением соединения 42 (2,7 мг, выход: 44%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 8,81-8,77 (м, 1H), 7,46-7,43 (м, 2H), 7,34-7,23 (м,3H), 7,11-7,06 (м, 2H), 6,88-6,77 (м, 2H), 6,39 (д, 1H, J=9,9 Гц), 6,10 (д, 1H, J=11,7 Гц), 5,67-5,57 (м, 3H), 5,27 (д, 1H, J=9,9 Гц), 4,85-4,78 (м, 1H), 4,62-4,56 (м, 1H), 4,54 (д, 1H, J=9,3 Гц), 4,25-4,17 (м, 1H), 3,66 (с, 3H), 2,87-2,80 (м, 1H), 2,41-2,38 (м, 5H), 2,21-2,13 (м, 1H), 2,08 (с, 3H), 1,82 (с, 3H), 1,16 (д, 3H J=6,6 Гц), 1,07 (с, 9H).

Синтез соединения 43

Спирт 30a (5 мг, 8,88 мкмоль) перемешивают при комнатной температуре в ДХМ (0,1 мл) в инертной атмосфере и добавляют периодинан (7,5 мг, 0,018 ммоль) одной порцией. Реакционную смесь перемешивают до завершения реакции (ТСХ, около 1 часа) и затем гасят NaHCO₃ (насыщенный раствор), экстрагируют ДХМ, промывают насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Продукт очищают хроматографией на колонке, элюируя EtOAc/гексаном 1:1 с получением около 4,5 мг (выход: 90%) кетона 43 в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 8,32 (д, 1H, J=9,9 Гц), 7,31-7,23 (м, 1H), 6,91 (дд, 1H, J=11,7, 11,4 Гц), 6,84 (дд, 1H, J=9,9, 8,7 Гц), 6,26 (д, 1H, J=8,7 Гц), 6,18 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,78-5,73 (м, 1H), 5,68 (д, 1H, J=11,4 Гц), 5,64-5,61 (м, 1H), 5-30-5,27 (м, 1H), 4,94-4,86 (м, 1H), 4,41 (д, 1H, J=9,0 Гц), 4,25-4,17 (м, 1H), 3,66 (с, 3H), 3,18 (дд, 4H, J=18,3, 7,2 Гц), 2,89-2,75 (м, 1H), 2,44-2,38 (м, 2H), 2,04 (с, 3H), 1,84 (с, 3H), 1,16 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,05 (с, 9H).

ПРИМЕР 12: БИОАНАЛИЗЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ

Целью этого анализа является оценка in vitro цитостатической (способности задерживать или останавливать рост опухолевых клеток) или цитотоксической (способности убивать опухолевые клетки) активности тестируемых образцов.

ЛИНИИ КЛЕТОК

Наименование	№ ATCC	Виды	Ткань	Характеристики
A549	CCL-185	человеческие	легкое	карцинома легкого (NSCLC)
HT29	HTB-38	человеческие	толстая кишка	колоректальная аденокарцинома
MDA-MB-231	HTB-26	человеческие	молочная железа	аденокарцинома молочной железы

ОЦЕНКА ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ С ПРИМЕНЕНИЕМ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОГО АНАЛИЗА SBR

Колориметрический тип анализа с применением реакции сульфородамина B (SRB) адаптируют для количественного измерения роста и жизнеспособности клеток (с применением методики, описанной у Skehan P et al. J. Natl. Cancer Inst. 1990, 82, 1107-1112).

В этом виде анализа применяются SBS-стандартизированные 96-луночные микропланшеты для культивирования клеток (Faircloth et al. Methods in cell science, 1988, 11 (4), 201-205; Mosmann et al. Journal of. Immunological. Methods, 1983, 65(1-2), 55-63). Все линии клеток, применяемые в данном исследовании, полученные из различных типов человеческого рака, берут из American Type Culture Collection (ATCC).

Клетки выдерживают в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (ФТС), 2 мМ L-глутамина, 100 Ед./мл пенициллина и 100 Ед./мл стрептомицина при температуре 37°C, 5% CO₂ и 98% влажности. Для экспериментов клетки собирают из субконфлюэнтных культур с применением трипсинизации и повторно суспендируют в свежей среде перед подсчетом и помещением в планшеты.

Клетки засевают в 96-луночные титровальные микропланшеты в количестве 5×10³ клеток на лунку в аликвотах 150 мкл и дают прикрепиться к поверхности планшета в течение 18 часов в не содержащей лекарственного средства среде. Один контрольный (необработанный) планшет для каждого вида клеток фиксируют (как описано ниже) и применяют в качестве ссылочного значения для нулевого значения времени. Затем тестируемые образцы добавляют в культуры десятью серийными разведениями, в аликвотах 50 мкл, от 10 до 0,00262 мкг/мл. Через 48 часов обработки противоопухолевое действие оценивают методом SRB: кратко, клетки дважды промывают ФРФБ, фиксируют в течение 15 мин в 1% растворе глутаральдегида, дважды промывают в ФРФБ и окрашивают в 0,4% растворе SRB в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем клетки промывают несколько раз 1% раствором уксусной кислоты и сушат на воздухе. Затем SRB экстрагируют в 10 мМ основном растворе trizma и абсорбцию измеряют в автоматизированном спектрофотометрическом планшет-ридере при 490 нм. Выживание клеток выражают как процент от роста контрольных клеток. Конечное действие тестируемого образца оценивают с применением алгоритма NCI (Boyd MR and Paull KD. Drug Dev. Res. 1995, 34, 91-104).

Применяя среднее ± СО из трех культурных проб автоматически строят кривую доза-эффект с применением анализа нелинейной регрессии. Рассчитывают три ссылочных параметра (алгоритм NCI) с применением математической интерполяции: GI₅₀ = концентрации, которая дает 50% ингибирование роста; TGI = полное ингибирование роста (цитостатическое действие) и LC₅₀ = концентрация, которая дает 50% полное уничтожение клеток (цитотоксическое действие).

ПРОТОКОЛ АНТИМИТОТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

Митотическое соотношение клеточных культур (процент клеток, задержанных в митозе) оценивают с применением специфического иммуноанализа с применением 96-луночного микропланшета, который количественно определяет специфический митотический маркер. Клетки HeLa (h-карцинома шейки матки, ATCC# CCL-2) инкубируют в течение 18 часов в присутствии или в отсутствие тестируемого образца. Затем клетки промывают ФРФБ и лизируют на льду в 75 мкл свежеприготовленного лизисного буфера (1 мМ ЭГТК (pH 7,5), 0,5 мМ ПМСФ и 1 мМ NaVO₃) в течение 30 мин. Аликвоту клеточного экстракта (60 мкл) переносят в планшет ELISA с высокосвязывающей поверхностью и сушат в скоростном вакууме в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшеты блокируют в 100 мкл ФРФБ - 1% АБС в течение 30 мин при температуре 30°С и затем инкубируют с анти-MPM2 первичным мышиным моноклональным антителом (Upstate Biotechnology, cat # 05-368) в течение 18 ч при температуре 4°С и подходящим пероксидаза-конъюгированным вторичным антителом в течение 1 ч при температуре 30°С. После интенсивного промывания в 0,02% Tween-20 проводят пероксидазную реакцию с применением 30 мкл TMB (3,3',5,5'-тетраметилбензидина) в течение 30 мин при температуре 30°С. Реакцию останавливают добавлением 30 мкл 4% раствора H₂SO₄. Проводят количественный анализ измерением O.D. при 450 нм в микропланшетном спектрофотометре. Результаты выражают как IC₅₀, концентрация образца, которая дает 50% остановку митоза в обработанных культурах клеток, по сравнению с контролем, необработанным культурами.

В таблицах 9 и 10 показаны данные биологической активности соединений в соответствии с данным изобретением.

Таблица 9 Анализ цитотоксичности - данные активности (молярные)
		Соединение 1	Соединение 2	Соединение 3	Соединение 4
MDA-MB-231	GI₅₀	4,45E-10	9,85E-09	9,24E-10	6,13E-10
	TGI	9,90E-10	2,15E-08	2,47E-09	1,49E-09
	LC₅₀	2,80E-09	7,20E-08	9,57E-09	8,23E-09
HT29	GI₅₀	4,62E-10	8,31E-09	4,45E-10	<4,31E-10
	TGI	6,10E-10	1,09E-08	7,59E-10	9,28E-10
	LC₅₀	9,90E-10	1,72E-08	>1,65E-07	1,12E-09
A549	GI₅₀	3,79E-10	8,63E-09	1,02E-09	5,95E-10
	TGI	1,09E-09	2,37E-08	4,29E-09	2,45E-09
	LC₅₀	>1,65E-07	1,65E-05	>1,65E-07	>1,64E-06

Таблица 9 (продолжение)
		Соединение 5	Соединение 6	Соединение 7	Соединение 8
MDA-MB-231	GI₅₀	1,03E-10	4,90E-10	4,20E-07	3,46E-09
	TGI	4,56E-10	3,21E-09	8,41E-07	1,01E-08
	LC₅₀	4,90E-09	1,55E-08	2,45E-06	4,12E-08
HT29	GI₅₀	4,39E-11	5,91E-10	4,20E-07	2,14E-09
	TGI	1,28E-10	1,01E-09	5,44E-07	3,13E-09
	LC₅₀	>1,69E-07	4,90E-09	8,16E-07	6,27E-09
A549	GI₅₀	6,08E-11	7,60E-10	6,18E-07	3,63E-09
	TGI	3,21E-10	>1,64E-06	1,19E-06	1,30E-08
	LC₅₀	>1,69E-07	>1,64E-06	>2,47E-06	>1,65E-06

Таблица 9 (продолжение)
		Соединение 29а	Соединение 29d	Соединение 29e	Соединение 30a
MDA-MB-231	GI₅₀	1,18E-06	1,10E-06	1,14E-06	1,95E-09
	TGI	2,80E-06	1,39E-06	1,48E-06	9,41E-09
	LC₅₀	6,20E-06	1,83E-06	2,07E-06	8,52E-08
HT29	GI₅₀	6,05E-07	8,29E-07	2,07E-06	1,35E-09
	TGI	1,42E-06	8,72E-07	2,21E-06	2,13E-09
	LC₅₀	4,43E-06	9,28E-07	2,36E-06	1,01E-08
A549	GI₅₀	8,86E-07	4,64E-07	1,15E-06	2,31E-09
	TGI	3,40E-06	8,01E-07	1,77E-06	1,37E-07
	LC₅₀	8,56E-06	1,38E-06	2,66E-06	>1,78E-06

Таблица 9 (продолжение)
		Соединение 30b	Соединение 30c	Соединение 30d	Соединение 30f
MDA-MB-231	GI₅₀	2,08E-08	9,83E-10	3,10E-10	6,94E-07
	TGI	5,11E-07	5,83E-09	7,03E-10	1,07E-06
	LC₅₀	5,11E-06	5,28E-08	>1,67E-08	1,61E-06
HT29	GI₅₀	9,84E-09	4,74E-10	1,32E-10	4,88E-07
	TGI	9,27E-08	8,38E-10	2,51E-10	7,13E-07
	LC₅₀	4,73E-06	>1,82E-07	>1,67E-08	1,05E-06
A549	GI₅₀	2,27E-08	7,10E-10	3,18E-10	4,88E-07
	TGI	3,22E-07	3,10E-09	1,06E-09	6,57E-07
	LC₅₀	>1,89E-05	>1,82E-07	>1,67E-08	9,19E-07


Таблица 9 (продолжение)
		Соединение 30e	Соединение 31	Соединение 37	Соединение 38
MDA-MB-231	GI₅₀	2,31E-08	7,50E-11	3,10E-06	6,04E-08
	TGI	6,57E-08	1,50E-10	5,61E-06	>1,78E-07
	LC₅₀	2,66E-07	3,59E-10	>1,48E-05	>1,78E-07
HT29	GI₅₀	1,35E-08	4,06E-11	1,92E-06	3,91E-08
	TGI	2,13E-08	1,02E-10	2,95E-06	6,39E-08
	LC₅₀	4,44E-08	>1,56E-08	1,00E-05	>1,78E-07
A549	GI₅₀	3,55E-08	9,22E-11	3,54E-06	4,62E-08
	TGI	3,02E-07	2,19E-10	6,64E-06	6,75E-08
	LC₅₀	3,55E-06	>1,56E-08	1,39E-05	>1,78E-07


Таблица 9 (продолжение)
		Соединение (21S)-1	Соединение (21S)-5	Соединение (15R)-7	Соединение (21S)-30a
MDA-MB-231	GI₅₀	1,65E-09	4,56E-09	7,66E-07	2,49E-09
	TGI	5,77E-09	1,86E-08	2,47E-06	2,13E-08
	LC₅₀	3,46E-08	1,03E-07	>2,47E-05	2,84E-07
HT29	GI₅₀	8,91E-10	2,53E-09	3,46E-07	2,66E-09
	TGI	1,63E-09	2,87E-09	5,93E-07	3,02E-09
	LC₅₀	2,31E-08	3,88E-09	1,31E-06	>1,63E-06
A549	GI₅₀	2,14E-09	6,92E-09	1,04E-06	3,73E-09
	TGI	4,29E-08	2,87E-08	3,46E-06	1,95E-07
	LC₅₀	>1,65E-06	>1,69E-06	>2,47E-05	>1,63E-06

Таблица 10 Антимитотический анализ - данные активности (молярные) соединений 1 и 2
	IC₅₀
Соединение 1	2,64E-8
Соединение 2	2,64E-8

Claims

1. Соединение общей формулы I

где R₁ выбирают из водорода, OR_a, OCOR_a, OCOOR_a, NR_aR_b, NR_aCOR_b и NR_aC(NR_a)NR_aR_b;
каждый R₂ и R₃ независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила;
каждый R₄₁, R₄₂, R₄₃, R₄₄, R₄₅, R₄₆, R₄₇ и R₄₈ независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила;
каждый R₅, R₆ и R₇ независимо выбирают из водорода, COR_a, COOR_a, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила, или R₅ и R₄₈ вместе с соответствующими атомом N и атомом С, к которым они присоединены, могут образовывать замещенную или незамещенную гетероциклическую группу;
каждый R_a и R_b независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-С₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂алкенила, замещенного или незамещенного С₂-С₁₂ алкинила, замещенного или незамещенного арила и замещенной или незамещенной гетероциклической группы; и
каждая пунктирная линия обозначает необязательную дополнительную связь;
или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

2. Соединение по п.1, имеющее формулу II

где R₁, R₄₁, R₄₃ и R₄₈, R₅, R₆ и R₇ такие, как определены в п.1, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

3. Соединение по п.1, где R₂ и R₃ каждый независимо выбирают из водорода и замещенного или незамещенного C₁-С₆ алкила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

4. Соединение по п.3, где R₂ и R₃ являются водородом, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

5. Соединение по любому из предшествующих пунктов, где R₁ выбирают из водорода, OR_a и OCOR_a, где R_a выбирают из водорода и замещенного или незамещенного С₁-С₆ алкила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

6. Соединение по п.5, где R₁ является водородом или метокси, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

7. Соединение по любому из пп.1 и 3-4, где R₄₂, R₄₄, R₄₅, R₄₆ и R₄₇ группы независимо выбирают из водорода и замещенного или незамещенного С₁-С₆ алкила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

8. Соединение по п.7, где R₄₂, R₄₄, R₄₅, R₄₆, R₄₇ группы независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного метила, замещенного или незамещенного изопропила и замещенного или незамещенного трет-бутила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

9. Соединение по п.8, где R₄₂, R₄₄, R₄₅, R₄₆ и R₄₇ являются водородом, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

10. Соединение по любому из пп.1-4, где R₄₁, R₄₃ и R₄₈ группы независимо выбирают из водорода и замещенного или незамещенного C₁-С₆ алкила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

11. Соединение по п.10, где группы R₄₁, R₄₃ и R₄₈ независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного метила, замещенного или незамещенного изопропила и замещенного или незамещенного трет-бутила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

12. Соединение по п.11, где R₄₁ и R₄₃ являются метилом, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

13. Соединение по п.12, где R₄₈ выбирают из изопропила, трет-бутила и бензила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

14. Соединение по любому из пп.1-4, где R₅ и R₆ каждый независимо выбирают из группы, включающей водород и замещенный или незамещенный C₁-С₆ алкил, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

15. Соединение по п.14, где R₅ и R₆ являются водородом, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

16. Соединение по любому из пп.1-4, где R₇ выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила и замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

17. Соединение по п.16, где R₇ выбирают из водорода и замещенного C₂-C₁₂ алкенила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

18. Соединение по п.17, где R₇ является алкенильной группой, которая замещена в одном или более положениях галогеном, OR', =O, OCOR', OCONHR', OCON(R')₂ и замещенным ОН, где каждую из групп R' независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного C₁-C₁₂ алкила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкенила, замещенного или незамещенного C₂-C₁₂ алкинила и замещенного или незамещенного арила, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

19. Соединение по любому из пп.1-4, где дополнительная связь присутствует во всех местах, обозначенных пунктирной линией, или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

20. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер.

21. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

22. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

23. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

24. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

25. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

26. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

27. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

28. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

29. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

30. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

31. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

32. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

33. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

34. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

35. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

36. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

37. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу:

38. Соединение по п.1 или 2, имеющее следующую формулу

39. Способ получения соединения, определенного в п.20, или его фармацевтически приемлемой соли, таутомера или стереоизомера, который включает проведение стадий экстрагирования и выделения из Lithoplocamia lithistoides.

40. Противоопухолевая фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-38, или его фармацевтически приемлемую соль, таутомер или стереоизомер, и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.

41. Соединение по любому из пп.1-38 или его фармацевтически приемлемая соль, таутомер или стереоизомер для применения при лечении рака.

42. Композиция по п.40, применяемая при лечении рака.

43. Применение соединения, определенного в любом из пп.1-38, или его фармацевтически приемлемой соли, таутомера или стереоизомера для изготовления лекарственного средства для лечения рака.

44. Применение композиции по п.40 для изготовления лекарственного средства для лечения рака.

45. Способ лечения млекопитающего, пораженного раком, который включает введение пораженному раком пациенту терапевтически эффективного количества соединения, определенного в любом из пп.1-38, или его фармацевтически приемлемой соли, таутомера или стереоизомера.

46. Способ по п.45, где млекопитающим является человек.