RU2444567C1 - NUTRITIVE MEDIUM FOR DETERMINATION OF Listeria GENUS BACTERIA LECITHINASE ACTIVITY - Google Patents
NUTRITIVE MEDIUM FOR DETERMINATION OF Listeria GENUS BACTERIA LECITHINASE ACTIVITY Download PDFInfo
- Publication number
- RU2444567C1 RU2444567C1 RU2011103816/10A RU2011103816A RU2444567C1 RU 2444567 C1 RU2444567 C1 RU 2444567C1 RU 2011103816/10 A RU2011103816/10 A RU 2011103816/10A RU 2011103816 A RU2011103816 A RU 2011103816A RU 2444567 C1 RU2444567 C1 RU 2444567C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- nutrient medium
- listeria
- nutritive medium
- activated carbon
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 title claims abstract description 10
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 title claims abstract description 10
- 241000186781 Listeria Species 0.000 title claims abstract description 9
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 title abstract 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 19
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims abstract description 14
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 claims abstract description 12
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 21
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 11
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 claims description 8
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 3
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 37
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 12
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 6
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 6
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 241000186780 Listeria ivanovii Species 0.000 description 4
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 241000442132 Lactarius lactarius Species 0.000 description 1
- 241000186806 Listeria grayi Species 0.000 description 1
- 241000186805 Listeria innocua Species 0.000 description 1
- 241000186807 Listeria seeligeri Species 0.000 description 1
- 206010024641 Listeriosis Diseases 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 235000013332 fish product Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940070353 protamines Drugs 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к общей и медицинской микробиологии и может быть использовано как в научно-исследовательской, так и в практической работе для санитарно-эпидемиологического и ветеринарного контроля зараженности продуктов питания, объектов окружающей среды в центрах Госсанэпиднадзора, пищевой промышленности.The invention relates to general and medical microbiology and can be used both in research and in practical work for sanitary-epidemiological and veterinary control of contamination of food products, environmental objects in the centers of Sanitary-Epidemiological Surveillance, food industry.
Многочисленные вспышки заболевания листериозом в ряде стран мира, связанные с употреблением в пищу инфицированных листериями продуктов питания, а также частота носительства возбудителя у людей и его широкое распространение в окружающей среде требуют на современном этапе разработки новых подходов к их типированию с целью быстрого выявления наиболее значимых, вирулентных штаммов листерий в инфекционной патологии. В настоящее время для дифференциации патогенного вида L.monocytogenes (согласно ГОСТ Р 51921-2002) используют питательную среду ГРМ №1 (г.Оболенск), содержащей 10% эмульсии желтка куриного яйца с (или без) добавлением 0,5% активированного угля, на которой определяют гидролиз лецитина. L.monocytogenes показывает гидролитическую активность в отношении лецитина только в присутствии активированного угля в течение 48 ч при инкубировании культур при 37°С. Эта питательная среда состоит из белковой основы, где используют панкреатический гидролизат рыбной муки, панкреатический гидролизат казеина, а также дрожжей и глюкозы.The numerous outbreaks of listeriosis in a number of countries around the world associated with the consumption of food products infected with listeria, as well as the frequency of carriage of the pathogen in humans and its wide distribution in the environment, require at the present stage of development of new approaches to their typing in order to quickly identify the most significant, virulent strains of listeria in infectious diseases. Currently, for the differentiation of the pathogenic species L.monocytogenes (according to GOST R 51921-2002), a timing medium No. 1 (Obolensk) is used, containing 10% emulsion of chicken yolk with or without the addition of 0.5% activated carbon, on which hydrolysis of lecithin is determined. L.monocytogenes shows hydrolytic activity against lecithin only in the presence of activated carbon for 48 hours when the cultures are incubated at 37 ° C. This culture medium consists of a protein base, which uses pancreatic hydrolyzate of fish meal, pancreatic hydrolyzate of casein, as well as yeast and glucose.
Среда ГРМ №1 (г.Оболенск) (г/л):Timing medium No. 1 (Obolensk) (g / l):
рН 7,4±0,2pH 7.4 ± 0.2
Дополнительно вносят (г/л):Additionally contribute (g / l):
50 мл 10% эмульсию яичного желтка50 ml 10% egg yolk emulsion
0,5% активированного угля.0.5% activated carbon.
Основным недостатком данной среды является ее низкая чувствительность и длительность процедуры - лецитиназную активность L.monocytogenes проявляет лишь через 24-48 часов. Как показали наши исследования, не всегда L.monocytogenes проявляет лецитиназную активность на данной среде (Зайцева Е.А. «Система анализа микробиологических и молекулярно-генетических маркеров для выявления высоковирулентных штаммов Listeria monocytogenes»: дис. докт. мед. наук. - М., 2010. 299 с.). Другим недостатком этой питательной среды является трудоемкость приготовления белковой основы, в качестве которой используют белковые гидролизаты.The main disadvantage of this medium is its low sensitivity and duration of the procedure - the lecithinase activity of L. monocytogenes is only after 24-48 hours. As our studies have shown, L.monocytogenes does not always exhibit lecithinase activity in this medium (Zaitseva E.A. “System of analysis of microbiological and molecular genetic markers for the detection of highly virulent strains of Listeria monocytogenes”: Ph.D. in medical sciences. - M. , 2010.299 s.). Another disadvantage of this nutrient medium is the complexity of preparing a protein base, which is used protein hydrolysates.
Задача, решаемая данным изобретением, - сокращение сроков выявления лицитиазной активности листерий.The problem solved by this invention is the reduction of the time for detection of lytic activity of Listeria.
Поставленная задача решается путем приготовления питательной среды для определения лецитиназной активности у листерий, содержащей белковую основу, микробиологический агар, хлорид натрия, дрожжевой экстракт, глюкозу, активированный уголь, эмульсию яичного желтка, дистиллированную воду, согласно изобретению питательная среда в качестве белковой основы содержит сухой концентрат отвара молок лососевых рыб при следующем соотношении компонентов, г /л:The problem is solved by preparing a nutrient medium for determining lecithinase activity in listeria containing a protein base, microbiological agar, sodium chloride, yeast extract, glucose, activated carbon, egg yolk emulsion, distilled water. According to the invention, the nutrient medium as a protein base contains dry concentrate decoction of milk of salmon fish in the following ratio of components, g / l:
рН среды 7,2-7,4,pH 7.2-7.4,
в которую, после стерилизации, добавлена 30% эмульсия яичного желтка из расчета 50 мл/л стерильной среды.into which, after sterilization, a 30% egg yolk emulsion was added at the rate of 50 ml / l of sterile medium.
Эту среду можно приготовить самостоятельно как в условиях лаборатории, так и в промышленном масштабе. Способ ее приготовления простой, дешевый и быстрый. В качестве сырья для приготовления белковой основы используют молоки лососевых рыб VI стадии зрелости, которые являются отходами рыбного производства. Данное сырье доступное и недорогое.This medium can be prepared independently both in the laboratory and on an industrial scale. The method of its preparation is simple, cheap and fast. As a raw material for the preparation of the protein base, salmon fish milk of the VI stage of maturity, which is a waste of fish production, is used. These raw materials are affordable and inexpensive.
Известно, что в молоках лососевых рыб обнаружены белки специфического состава - протамины (сальмины), которые обладают высокой биологической активностью (В.П.Зайцев, И.В.Кизеветтер и др. «Технология рыбных продуктов». //Изд-во «Пищевая промышленность». - М. 1965. с.72-74; Ю.И.Касьяненко, Т.Н. Пивненко. «Сравнительные физико-химические характеристики низкомолекулярной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) из морских гидробионтов». //Известия ТИНРО. 1999. т.125. с.152-158; Н.Б.Серебряная, А.А.Новик. «ДНК как иммуностимулятор». //Медицинская иммунология. 2001. т.3, №1. с.27-34).It is known that proteins of a specific composition - protamines (salmins), which have high biological activity (V.P. Zaitsev, I.V. Kizevetter and others. "Technology of fish products". // Publishing house "Food industry. "- M. 1965. pp. 72-74; Yu.I. Kasyanenko, TN Pivnenko." Comparative physicochemical characteristics of low molecular weight deoxyribonucleic acid (DNA) from marine hydrobionts. "// Izvestiya TINRO. 1999. t.125. p.152-158; N.B.Serebryanaya, A.A. Novik. “DNA as an immunostimulant.” // Medical Immunology. 2001. t.3, No. 1 p. 27-34).
При этом существенными признаками предложения следует считать качественный и количественный состав питательной среды, т.к. величины содержания компонентов в заявляемой питательной среде являются оптимальными и обусловливают относительную сбалансированность стоимости среды с ее ростовыми характеристиками при выявлении лецитиназной активности листерий. Лецитиназная активность L.monocytogenes и L.ivanovii проявляется уже через 16-18; 24 часа инкубации исследуемых культур при 37°С.At the same time, the qualitative and quantitative composition of the nutrient medium should be considered essential features of the proposal, the values of the content of components in the claimed nutrient medium are optimal and determine the relative balance of the cost of the medium with its growth characteristics when detecting the lecithinase activity of listeria. The lecithinase activity of L.monocytogenes and L.ivanovii is already apparent after 16-18; 24 hours incubation of the studied cultures at 37 ° C.
Питательную среду готовят следующим образом.The nutrient medium is prepared as follows.
Сначала готовят белковую основу из молок лососевых рыб. Для этого берут 500 г измельченных молок лососевых рыб, добавляют водопроводную воду в соотношении 1:2. Кипятят 1 ч на медленном огне. Получают отвар, который сушат вакуумной сушкой. Сухой отвар из молок рыб хранят в бытовом холодильнике (4-8°С) или при комнатной температуре, герметично упакованным, от 6 мес до 1 года.First, a protein base is prepared from salmon milk. To do this, take 500 g of crushed milk of salmon fish, add tap water in a ratio of 1: 2. Boil for 1 h over low heat. Get a decoction, which is dried by vacuum drying. Dry broth from fish milk is stored in a household refrigerator (4-8 ° C) or at room temperature, sealed, from 6 months to 1 year.
Полученный сухой концентрат отвара молок используется в качестве белковой основы для приготовления питательной среды следующего состава, г/л:The obtained dry concentrate of broth of milk is used as a protein base for the preparation of a nutrient medium of the following composition, g / l:
рН среды 7,2-7,4pH 7.2-7.4
Дополнительно в питательную среду добавлена 30% эмульсия яичного желтка из расчета 50 мл/л стерильной среды.Additionally, a 30% egg yolk emulsion was added to the culture medium at the rate of 50 ml / l of sterile medium.
Заявляемая питательная среда соответствует критериям изобретения: «новизна» (в качестве белковой основы в питательной среде для определения лецитиназной активности бактерий рода Listeria используют сухой концентрат отвара молок лососевых рыб); «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».The claimed nutrient medium meets the criteria of the invention: "novelty" (as a protein base in the nutrient medium for the determination of the lecithinase activity of bacteria of the genus Listeria use a dry concentrate of decoction of salmon milk fish); "Inventive step" and "industrial applicability".
Для сравнения свойств заявляемой среды со средой-прототипом (ГРМ №1 производство г.Оболенск) исследовали лецитиназную активность следующих микроорганизмов: Listeria monocytogenes NCTC 10527 (4b серовариант); L.monocytogenes CLIP 75936 (1/2a серовариант); L.ivanovii NCTC 11846; L.innocua SLCC 3379; L.seeligeri SLCC 5921; L.grayi 17; L.welchimeri SLCC 5334, Staphylococcus aureus 192 и Escherichia coli 284.To compare the properties of the claimed medium with the prototype medium (timing No. 1, production of Obolensk), the lecithinase activity of the following microorganisms was studied: Listeria monocytogenes NCTC 10527 (4b serovariant); L.monocytogenes CLIP 75936 (1 / 2a serovariant); L. ivanovii NCTC 11846; L.innocua SLCC 3379; L.seeligeri SLCC 5921; L.grayi 17; L.welchimeri SLCC 5334, Staphylococcus aureus 192 and Escherichia coli 284.
На чашки Петри с заявляемой средой и средой прототипом штрихом засевали исследуемые культуры и культивировали при температуре 37°С. Учет результатов проводили путем визуального осмотра чашек через 16-18, 24 и 48 ч культивирования. На заявляемой среде через 16-18, 24 ч вокруг культур L.monocytogenes NCTC 10527 (4b серовариант); L.monocytogenes CLIP 75936 (1/2a серовариант); L.ivanovii NCTC 11846 наблюдался гидролиз лецитина, проявляющийся в виде появления плотного ореола шириной 0,2-1,5 мм. На среде прототипе через 24 ч ореола вокруг культур L.monocytogenes NCTC 10527 (4b серовариант); L.monocytogenes CLIP 75936 (1/2a серовариант); L.ivanovii NCTC 11846, не отмечалось. Здесь гидролиз лецитина наблюдался только к 48 часам культивирования. Это подтверждает более высокую разрешающую способность заявляемой среды.The studied cultures were seeded on Petri dishes with the claimed medium and the medium as a prototype, and cultured at a temperature of 37 ° C. The results were taken into account by visual inspection of the plates after 16-18, 24 and 48 hours of cultivation. On the claimed medium after 16-18, 24 hours around cultures of L.monocytogenes NCTC 10527 (4b serovariant); L.monocytogenes CLIP 75936 (1 / 2a serovariant); L. ivanovii NCTC 11846 observed the hydrolysis of lecithin, which manifests itself in the form of the appearance of a dense halo 0.2-1.5 mm wide. On a prototype medium, after 24 hours of halo around L.monocytogenes cultures NCTC 10527 (4b serovariant); L.monocytogenes CLIP 75936 (1 / 2a serovariant); L.ivanovii NCTC 11846, not noted. Here, lecithin hydrolysis was observed only at 48 hours of cultivation. This confirms the higher resolution of the claimed environment.
Примеры конкретного выполнения.Examples of specific performance.
Пример 1Example 1
К 3,0 г сухого концентрата отвара молок лососевых рыб добавляют 7,0 г дрожжевого экстракта, 1,0 г глюкозы, 5,0 г хлорида натрия, 2,5 г активированного угля и разводят питательную среду до 1 л дистиллированной водой. Смесь перемешивают, 20% NaOH доводят рН среды до 7,2-7,4. Полученную питательную среду разливают по емкостям и стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 минут. Полученную среду охлаждают до 45-55°С. Далее в емкость с питательной средой дополнительно добавляют стерильную 30% эмульсию яичного желтка из расчета 5 мл эмульсии на 100 мл питательной среды.To 3.0 g of dry salmon broth decoction concentrate, 7.0 g of yeast extract, 1.0 g of glucose, 5.0 g of sodium chloride, 2.5 g of activated carbon are added and the nutrient medium is diluted to 1 liter with distilled water. The mixture is stirred, 20% NaOH is adjusted to pH 7.2-7.4. The resulting nutrient medium is poured into containers and sterilized at 0.5 atm for 20 minutes. The resulting medium is cooled to 45-55 ° C. Next, a sterile 30% egg yolk emulsion is added to the container with the nutrient medium at the rate of 5 ml of the emulsion per 100 ml of the nutrient medium.
Для приготовления эмульсии яичного желтка желток одного яйца соединяют с 50,0 мл стерильного физраствора и эмульгируют. Для длительного хранения добавляют в эмульсию 1-2 капли хлороформа. Хранят при температуре 4-8°С в течение 30 дней.To prepare an emulsion of egg yolk, the yolk of one egg is combined with 50.0 ml of sterile saline and emulsified. For long-term storage, 1-2 drops of chloroform are added to the emulsion. Store at 4-8 ° C for 30 days.
Готовую питательную среду разливают в чашки Петри.Ready medium is poured into Petri dishes.
Питательная среда представляет собой гель черного цвета, без запаха.The nutrient medium is a black gel, odorless.
На чашки штрихом засевали исследуемые культуры и культивировали их при температуре 37°С. Учет результатов проводили путем визуального осмотра через 16-24 часа. Гидролиз лецитина проявляется в виде плотного мутного ореола вокруг штрихового посева шириной 0,2-1,5 см.The cultures under study were streaked onto the plates and cultured at 37 ° C. Analysis was carried out by visual inspection after 16-24 hours. The hydrolysis of lecithin manifests itself in the form of a dense muddy halo around a bar seeding 0.2-1.5 cm wide.
Пример 2Example 2
К 2,7 г сухого концентрата отвара молок лососевых рыб добавляют 10,0 г дрожжевого экстракта, 1,0 г глюкозы, 5,0 г хлорида натрия, 5,0 г активированного угля и разводят питательную среду до 1 л дистиллированной водой. Смесь перемешивают, 20% NaOH доводят рН среды до 7,2-7,4. Полученную питательную среду разливают по емкостям и стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 мин. Полученную среду охлаждают до 45-55°С. Далее в емкость с питательной средой дополнительно добавляют стерильную 30% эмульсию яичного желтка из расчета 5 мл эмульсии на 100 мл питательной среды.To 2.7 g of dry concentrate of salmon milk broth, 10.0 g of yeast extract, 1.0 g of glucose, 5.0 g of sodium chloride, 5.0 g of activated carbon are added and the nutrient medium is diluted to 1 liter with distilled water. The mixture is stirred, 20% NaOH is adjusted to pH 7.2-7.4. The resulting nutrient medium is poured into containers and sterilized at 0.5 atm for 20 minutes. The resulting medium is cooled to 45-55 ° C. Next, a sterile 30% egg yolk emulsion is added to the container with the nutrient medium at the rate of 5 ml of the emulsion per 100 ml of the nutrient medium.
Готовую питательную среду разливают в чашки Петри.Ready medium is poured into Petri dishes.
Питательная среда представляет собой гель черного цвета, без запаха.The nutrient medium is a black gel, odorless.
На чашки штрихом засевали исследуемые культуры и культивировали их при температуре 37°С. Учет результатов проводили путем визуального осмотра через 16-24 часа. Гидролиз лецитина проявляется в виде плотного мутного ореола вокруг штрихового посева шириной 0,2-1,5 см.The cultures under study were streaked onto the plates and cultured at 37 ° C. Analysis was carried out by visual inspection after 16-24 hours. The hydrolysis of lecithin manifests itself in the form of a dense muddy halo around a bar seeding 0.2-1.5 cm wide.
Claims (1)
в которую после стерилизации добавлена 30%-я эмульсия яичного желтка из расчета 50 мл/л стерильной среды. Nutrient medium for determining lecithinase activity in listeria, containing a protein base, microbiological agar, sodium chloride, yeast extract, glucose, activated carbon, egg yolk emulsion, distilled water, characterized in that the nutrient medium as a protein base contains a dry concentrate of salmon milk broth fish in the following ratio of components, g / l:
into which, after sterilization, a 30% emulsion of egg yolk was added at the rate of 50 ml / l of sterile medium.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011103816/10A RU2444567C1 (en) | 2011-02-02 | 2011-02-02 | NUTRITIVE MEDIUM FOR DETERMINATION OF Listeria GENUS BACTERIA LECITHINASE ACTIVITY |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011103816/10A RU2444567C1 (en) | 2011-02-02 | 2011-02-02 | NUTRITIVE MEDIUM FOR DETERMINATION OF Listeria GENUS BACTERIA LECITHINASE ACTIVITY |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2444567C1 true RU2444567C1 (en) | 2012-03-10 |
Family
ID=46029072
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011103816/10A RU2444567C1 (en) | 2011-02-02 | 2011-02-02 | NUTRITIVE MEDIUM FOR DETERMINATION OF Listeria GENUS BACTERIA LECITHINASE ACTIVITY |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2444567C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2525637C2 (en) * | 2012-11-12 | 2014-08-20 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient medium for cultivation of listeriosis causative agent |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU374373A1 (en) * | 1971-06-08 | 1973-03-20 | METHOD OF CULTIVATION OF HYSTERIES | |
| RU2184782C2 (en) * | 1999-11-02 | 2002-07-10 | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН | Differential-diagnostic medium for listeria isolation |
| RU2196827C1 (en) * | 2001-05-03 | 2003-01-20 | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи РАМН | Method of differentiation of listeria monocytogenes culture |
| RU2268307C1 (en) * | 2004-04-07 | 2006-01-20 | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения Российской Академии Медицинских наук | Method for accumulation of listeriosis microorganism (listeria monocytogenes) |
| RU2384613C2 (en) * | 2008-03-26 | 2010-03-20 | ГУ Сибирского отделения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт Эпидемиологии и микробиологии (НИИ ЭМ СО РАМН) | Nutritional medium for cultivating bacteria |
-
2011
- 2011-02-02 RU RU2011103816/10A patent/RU2444567C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU374373A1 (en) * | 1971-06-08 | 1973-03-20 | METHOD OF CULTIVATION OF HYSTERIES | |
| RU2184782C2 (en) * | 1999-11-02 | 2002-07-10 | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН | Differential-diagnostic medium for listeria isolation |
| RU2196827C1 (en) * | 2001-05-03 | 2003-01-20 | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи РАМН | Method of differentiation of listeria monocytogenes culture |
| RU2268307C1 (en) * | 2004-04-07 | 2006-01-20 | Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения Российской Академии Медицинских наук | Method for accumulation of listeriosis microorganism (listeria monocytogenes) |
| RU2384613C2 (en) * | 2008-03-26 | 2010-03-20 | ГУ Сибирского отделения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт Эпидемиологии и микробиологии (НИИ ЭМ СО РАМН) | Nutritional medium for cultivating bacteria |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ГОСТ Р 51921-2002, Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes, 2002 год. Общая медицинская микробиология. /Под ред. ЛАБИНСКОЙ А.С. 2005, с.568-571. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2525637C2 (en) * | 2012-11-12 | 2014-08-20 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient medium for cultivation of listeriosis causative agent |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105176874B (en) | Bacillus coagulans FM603 and its application | |
| CN105175518B (en) | The bacteriocin and preparation method thereof that bacillus coagulans FM603 is generated | |
| Petrova et al. | Utilization of fish protein hydrolysates as peptones for microbiological culture medias | |
| CN102524518B (en) | Method for producing antibacterial peptide by using brevibacillus laterosporu | |
| CN105104712B (en) | A kind of additive for microbe feedstuff and preparation method thereof | |
| RU2444567C1 (en) | NUTRITIVE MEDIUM FOR DETERMINATION OF Listeria GENUS BACTERIA LECITHINASE ACTIVITY | |
| RU2580028C1 (en) | Heavy nutrient medium for the cultivation of brucella | |
| RU2626568C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of plague microbe of ypestis ev vaccine strain | |
| CN110484467A (en) | Antibacterial peptide and the application of one plant of bacillus polymyxa and its generation | |
| CN101642567A (en) | Aeromonas hydrophila inactivated vaccine and preparation thereof | |
| KR100942389B1 (en) | Medium for culturing or transporting Campylobacter bacteria | |
| RU2455351C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria | |
| RU2399660C2 (en) | Nutrient medium for bacteria cultivation | |
| RU2518282C1 (en) | Nutrient medium for submerged cultivation of tularemia microbe | |
| RU2541454C1 (en) | Nutrient culture medium for swine erysipelas strain erysipelothrix rhuisipathie | |
| RU2196827C1 (en) | Method of differentiation of listeria monocytogenes culture | |
| RU2684721C1 (en) | Nutrient environment for determination of different activity in pathogenic gram positive bacteria | |
| RU2841541C1 (en) | Universal culture medium for culturing bacteria based on hydrolyzate of mink carcasses | |
| RU2767782C1 (en) | Nutrient medium for obtaining listeria biomass | |
| RU2100029C1 (en) | Medium for culturing bacterium-symbiont bacillus pulvifaciens or bacillus subtilis - a producer of probiotic | |
| RU2571852C2 (en) | BACTERIA Enterococcus faecium STRAIN HAVING ANTAGONIST ACTIVITY IN RELATION TO BACTERIA OF Listeria GENUS AND Enterococcus faecalis SPECIES | |
| RU2410424C1 (en) | Culture medium for growing microorganism | |
| Okiev | The Importance of Lyophilization of Microorganisms and Biologicals | |
| RU2525637C2 (en) | Nutrient medium for cultivation of listeriosis causative agent | |
| Raju | Alternative culture media for cultivation of bacteria |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160203 |