RU2302871C1 - Brain functions normalizing agent and a method for preparation thereof - Google Patents
Brain functions normalizing agent and a method for preparation thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2302871C1 RU2302871C1 RU2006122057/15A RU2006122057A RU2302871C1 RU 2302871 C1 RU2302871 C1 RU 2302871C1 RU 2006122057/15 A RU2006122057/15 A RU 2006122057/15A RU 2006122057 A RU2006122057 A RU 2006122057A RU 2302871 C1 RU2302871 C1 RU 2302871C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- temperature
- solution
- drug
- brain
- concentration
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 230000003925 brain function Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 20
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 60
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 46
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims abstract description 36
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 24
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 19
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 18
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 11
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims abstract description 9
- 244000309466 calf Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 claims description 7
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 6
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 3
- 238000009434 installation Methods 0.000 claims description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 77
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 29
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 28
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 7
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 6
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 abstract description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 230000003072 anti-pyrogenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 abstract 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 abstract 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 abstract 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 74
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N haloperidol Chemical compound C1CC(O)(C=2C=CC(Cl)=CC=2)CCN1CCCC(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 5
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 5
- VMWNQDUVQKEIOC-CYBMUJFWSA-N apomorphine Chemical compound C([C@H]1N(C)CC2)C3=CC=C(O)C(O)=C3C3=C1C2=CC=C3 VMWNQDUVQKEIOC-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 5
- 229960004046 apomorphine Drugs 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 5
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010063661 Vascular encephalopathy Diseases 0.000 description 4
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 4
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 4
- 229960003878 haloperidol Drugs 0.000 description 4
- 230000003137 locomotive effect Effects 0.000 description 4
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 3
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 230000002276 neurotropic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 description 3
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 231100000456 subacute toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 2
- 206010021113 Hypothermia Diseases 0.000 description 2
- 206010061533 Myotonia Diseases 0.000 description 2
- 239000000164 antipsychotic agent Substances 0.000 description 2
- 229940005529 antipsychotics Drugs 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000000537 electroencephalography Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 2
- 230000002631 hypothermal effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 239000003368 psychostimulant agent Substances 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000009132 Catalepsy Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 102000015554 Dopamine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050004812 Dopamine receptor Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 206010047853 Waxy flexibility Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002908 adrenolytic effect Effects 0.000 description 1
- -1 adrenostimulants Substances 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004720 cerebrum Anatomy 0.000 description 1
- 108091008690 chemoreceptors Proteins 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000000718 cholinopositive effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000000095 emetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002296 hyperlocomotor Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 210000001767 medulla oblongata Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001962 neuropharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 210000002990 parathyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001915 proofreading effect Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 229940126672 traditional medicines Drugs 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Группа изобретений относится к лекарственному средству и способу его получения из органов животных, в частности к выделению биологически активного вещества из головного мозга и получению лекарственной формы для парентерального введения, которая может использоваться в медицине как средство, нормализующее функции головного мозга.The group of inventions relates to a medicinal product and a method for its preparation from animal organs, in particular to the isolation of a biologically active substance from the brain and the preparation of a parenteral dosage form that can be used in medicine as a means of normalizing brain function.
Известны способы получения биологически активных веществ и лекарственных средств из животного сырья (патент РФ №944191, 1994; а.с. SU №1112606, 1996; а.с. SU №1218521, 1994; а.с. SU №1227198, 1986; патент РФ №1448443, 1994; патент РФ №1522486, 1993; патент РФ №2075944, 1997; патент РФ №2161501, 2001; патент US 4341765, патент GB 1161896, 1969; патент FR 2583982, 1987).Known methods for producing biologically active substances and medicines from animal raw materials (RF patent No. 944191, 1994; A.S. SU No. 1112606, 1996; A.S. SU No. 1218521, 1994; A.S. SU No. 1227198, 1986; RF patent No. 1448443, 1994; RF patent No. 1522486, 1993; RF patent No. 2075944, 1997; RF patent No. 2161501, 2001; US patent 4341765, GB patent 1161896, 1969; FR patent 2583982, 1987).
Известен способ получения препарата, обладающего восстанавливающей активностью при нарушении функции головного мозга (патент РФ №1298979, 1993), который позволяет выделить из коры головного мозга убойных животных биологически активные полипептиды щелочной природы. Этот препарат получают путем обработки исходного сырья (ткань, содержащая серое вещество полушарий головного мозга) ацетоном при t=-10÷-4°C и соотношении ткани мозга и ацетона 1:5 в течение 18÷30 часов, гомогенизации, экстрагирования гомогената 2÷4% раствором уксусной кислоты в течение 48÷72 часов при рН=3,5÷4,5 в присутствии хлористого цинка в концентрации 0,6÷2 г/л и при соотношении гомогената и раствора уксусной кислоты 1:(8÷4), центрифугирования, осаждения биологически активных веществ ацетоном при температуре минус 3-5°С и соотношении супернатанта и ацетона 1:(7÷5), и ионообменной хроматографии полученного осадка на катионите "Биокарб". В результате ионообменной хроматографии получают фракцию, содержащую преимущественно щелочные полипептиды с молекулярной массой от 2000 до 6000 Да.A known method of producing a drug having restoring activity in case of impaired brain function (RF patent No. 1298979, 1993), which allows you to select biologically active alkaline polypeptides from the cerebral cortex of slaughtered animals. This preparation is obtained by processing the feedstock (tissue containing the gray matter of the cerebral hemispheres) with acetone at t = -10 ÷ -4 ° C and a ratio of brain tissue and acetone of 1: 5 for 18 ÷ 30 hours, homogenization, extraction of homogenate 2 ÷ 4% acetic acid solution for 48 ÷ 72 hours at pH = 3.5 ÷ 4.5 in the presence of zinc chloride at a concentration of 0.6 ÷ 2 g / l and with a ratio of homogenate and acetic acid solution 1: (8 ÷ 4) , centrifugation, deposition of biologically active substances with acetone at a temperature of minus 3-5 ° C and the ratio of supernatant and acetone 1: (7 ÷ 5), and ion-exchange chromatography of the obtained precipitate on Biocarb cation exchange resin. As a result of ion exchange chromatography, a fraction is obtained that contains predominantly alkaline polypeptides with a molecular weight of from 2000 to 6000 Da.
Необходимо отметить, что способ, описанный в патенте РФ №1298979, не позволяет извлечь из коры головного мозга кислые и нейтральные полипептиды, а также очистить получаемый продукт от примесей.It should be noted that the method described in the patent of the Russian Federation No. 1298979, does not allow to extract acidic and neutral polypeptides from the cerebral cortex, as well as to clear the resulting product from impurities.
Известен способ получения из животного сырья комплекса биологически активных полипептидов, нормализующих функции головного мозга, фармакологическая композиция на его основе (патент РФ №2104702, 1998), принятый в качестве прототипа предлагаемого средства и способа его получения. Известный способ состоит в том, что кору больших полушарий головного мозга убойных животных замораживают при t=-40°С с последующим хранением при температуре минус 20-22°C. Сырье подвергают гомогенизации, экстракции гомогената раствором уксусной кислоты при t=10°C, 15°C в течение 30-48 часов 2-4% раствором уксусной кислоты при рН=3.2-3.8 в присутствии хлористого цинка в концентрации 0,6-1,2 г/л при соотношении гомогената и раствора уксусной кислоты 1:(8÷4). Для отделения нерастворимых компонентов проводят фильтрацию.A known method of obtaining from animal raw materials a complex of biologically active polypeptides that normalize brain functions, a pharmacological composition based on it (RF patent No. 2104702, 1998), adopted as a prototype of the proposed means and method for its preparation. The known method consists in the fact that the cerebral cortex of the brain of slaughtered animals is frozen at t = -40 ° C, followed by storage at a temperature of minus 20-22 ° C. The raw materials are subjected to homogenization, extraction of the homogenate with a solution of acetic acid at t = 10 ° C, 15 ° C for 30-48 hours with a 2-4% solution of acetic acid at pH = 3.2-3.8 in the presence of zinc chloride at a concentration of 0.6-1, 2 g / l with a ratio of homogenate and acetic acid solution 1: (8 ÷ 4). Filtration is carried out to separate insoluble components.
После фильтрации собирают жидкую фазу и обрабатывают ацетоном при температуре минус 3-5°С и при соотношении экстракта и ацетона 1:(7÷5). При этом образуется осадок в виде белых хлопьев. Полученный осадок промывают ацетоном и высушивают под воздушной тягой. Полученный после осаждения и высушивания порошок дополнительно экстрагируют водой при рН=5.5÷6.5 в течение часа при t=18÷22°C. Нерастворимые компоненты удаляют из экстракта путем центрифугирования. Полученный раствор препарата подвергают мембранной ультрафильтрации и лиофилизируют фильтрат. Целевой продукт представляет собой лиофилизированный порошок белого или белого с желтоватым оттенком цвета и содержит комплекс биологически активных кислых и нейтральных полипептиды с молекулярной массой от 500 до 15000 Да.After filtration, the liquid phase is collected and treated with acetone at a temperature of minus 3-5 ° C and with an extract / acetone ratio of 1: (7 ÷ 5). This forms a precipitate in the form of white flakes. The resulting precipitate is washed with acetone and dried under air draft. The powder obtained after precipitation and drying is additionally extracted with water at pH = 5.5–6.5 for an hour at t = 18–22 ° C. Insoluble components are removed from the extract by centrifugation. The resulting solution of the drug is subjected to membrane ultrafiltration and the filtrate is lyophilized. The target product is a lyophilized powder of white or white with a yellowish tint and contains a complex of biologically active acidic and neutral polypeptides with a molecular weight of from 500 to 15,000 Da.
К недостаткам известного способа следует отнести извлечение в процессе экстракции из ткани коры больших полушарий головного мозга значительного количества (более 70%) веществ не пептидной природы, которые, являясь примесями, не определяют биологическую активность выделенного активного вещества, а также низкий выход активного вещества.The disadvantages of this method include the extraction during the extraction process from the cerebral cortex tissue of a significant amount (more than 70%) of substances of a non-peptide nature, which, being impurities, do not determine the biological activity of the isolated active substance, as well as a low yield of active substance.
Настоящим изобретением поставлена и решена задача разработки способа получения средства, нормализующего функции головного мозга, в виде лекарственной формы для парентерального введения, выделенного из головного мозга телят не старше 12-месячного возраста или свиней, техническим результатом которого является оптимальная технология выделения пептидного комплекса с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 72 до 250 Да и получение водного раствора экстракта с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, позволяющая не только очистить получаемый продукт от примесей, но и увеличить его выход.The present invention has posed and solved the problem of developing a method for producing a drug that normalizes brain function in the form of a parenteral dosage form isolated from the brain of calves no older than 12 months of age or pigs, the technical result of which is an optimal technology for isolating a peptide complex with a low molecular weight content fractions from 70 to 90% with a molecular weight of its peptide components ranging from 72 to 250 Da and obtaining an aqueous solution of the extract with the concentration of polypeptides 2.5 ÷ 2.9 mg / ml, which allows not only to clean the resulting product from impurities, but also to increase its yield.
Экспериментальная проверка показала, что предлагаемый способ обеспечивает фармацевтическую стабильность, максимальную биологическую ценность и терапевтическую эффективность средства, нормализующего функции головного мозга, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения, что подтверждено результатами экспериментов, приводимыми в примерах, иллюстрирующих изобретение.Experimental verification showed that the proposed method provides pharmaceutical stability, maximum biological value and therapeutic effectiveness of the drug, which normalizes brain function, made in the form of a parenteral dosage form, which is confirmed by the experimental results given in the examples illustrating the invention.
Другим аспектом изобретения является средство, нормализующее функции головного мозга, в виде лекарственной формы для парентерального введения, представляющее собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекуляиной в пределах от 72 до 250 Да, с концентрацией полипептидов 2,5-2,9 мг/мл, технический результат которого заключается в том, что выделенное вещество отличается от известных веществ, полученных ранее из головного мозга животных по молекулярной массе входящих в него пептидных компонентов, а также по его не токсичности и апирогенности за счет полной очистки от примесей.Another aspect of the invention is an agent that normalizes brain function in the form of a parenteral dosage form, which is a peptide complex with a low molecular weight content of 72 to 250 Da, with a concentration of polypeptides of 2.5-2.9 mg / ml, technical result which consists in the fact that the isolated substance differs from known substances obtained previously from the brain of animals in molecular weight of the peptide components included in it, as well as in its non-toxicity and pyrogen-free due to complete purification from impurities.
В ходе исследований в экспериментах на животных выявлено, что полученный водный раствор средства с концентрацией полипептидов 2,5-2,9 мг/мл является терапевтически эффективной дозой, что позволяет считать показанным использование средства при различных видах патологии головного мозга. Это подтверждается приводимыми ниже примерами.In the course of studies in animal experiments, it was found that the obtained aqueous solution of the drug with a concentration of polypeptides of 2.5-2.9 mg / ml is a therapeutically effective dose, which allows us to consider the use of the drug for various types of brain pathology. This is confirmed by the following examples.
В процессе проведения исследований была установлена важность следующих стадий способа получения средства, нормализующего функции головного мозга, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения (далее - препарат):In the process of conducting research, the importance of the following stages of the method of obtaining funds that normalize brain function, made in the form of a dosage form for parenteral administration (hereinafter referred to as the drug), was established:
- повторное осаждение образовавшегося гомогенизированного осадка двукратными объемами ацетона не менее двух раз и последующее промывание на нутч-фильтре двукратными объемами ацетона до получения осадка светло-серого цвета, что свидетельствует о полной очистке осадка от примесей, таких как липидные, белковые, фосфолипидные и другие;- repeated precipitation of the resulting homogenized precipitate with double volumes of acetone at least two times and subsequent washing on the suction filter with double volumes of acetone until a light gray precipitate is obtained, which indicates complete purification of the precipitate from impurities such as lipid, protein, phospholipid and others;
- получение водного раствора экстракта в концентрации полипептидов 2,5-2,9 мг/мл; его центрифугирование, фильтрование, с последующей ультрафильтрационной очисткой на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, и добавлении в ультрафильтрат гликокола до конечной концентрации 10-20 мг/мл при рН=5,6-6,6;- obtaining an aqueous solution of the extract in a concentration of polypeptides of 2.5-2.9 mg / ml; centrifuging, filtering, followed by ultrafiltration cleaning at the installation with a backpressure of not more than 1.0 kgf / cm 2 through materials with a retention capacity of 15,000 Da, and adding glycocol to the ultrafiltrate to a final concentration of 10-20 mg / ml at pH = 5.6 -6.6;
- стерилизующая фильтрация, ампулирование и автоклавирование в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2, что обеспечивает стабильность препарата при сохранении терапевтической эффективности.- sterilizing filtration, ampouling and autoclaving for 8 minutes at a temperature of 120 ° C and atmospheric pressure of 1.1 kgf / cm 2 , which ensures the stability of the drug while maintaining therapeutic efficacy.
Режим и время автоклавирования были установлены экспериментально.The mode and time of autoclaving were established experimentally.
Необходимо отметить, что предлагаемое средство, нормализующее функции головного мозга, отличается от известных биологически активных веществ, выделенных ранее из головного мозга животных, поскольку представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 72 до 250 Да, выделенных из массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 72 до 250 Да, выделенных из серого и белого вещества головного мозга, в то время как препарат, полученный способом, описанным в патенте РФ №2104702, содержит в своем составе преимущественно кислые и нейтральные полипептиды с молекулярной массой от 500 до 15000 Да, выделенные из серого вещества головного мозга, а препарат, полученный способом, описанным в патенте РФ №1298979, содержит в своем составе преимущественно щелочные полипептиды с молекулярной массой от 2000 до 6000 Да, выделенные из коры головного мозга.It should be noted that the proposed tool that normalizes the function of the brain differs from the known biologically active substances isolated previously from the brain of animals, since it is a peptide complex with a low molecular weight fraction of 70 to 90% with a molecular weight of its constituent peptide components within from 72 to 250 Da isolated from the mass of its peptide components ranging from 72 to 250 Da isolated from the gray and white matter of the brain, while the drug received The method described in the patent of the Russian Federation No. 2104702 contains mainly acidic and neutral polypeptides with a molecular weight of 500 to 15,000 Da isolated from the gray matter of the brain, and the preparation obtained by the method described in the patent of the Russian Federation No. 1298979 contains its composition is predominantly alkaline polypeptides with a molecular weight of from 2000 to 6000 Da, isolated from the cerebral cortex.
Указанный технический результат достигается тем, что средство, нормализующее функции головного мозга, выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 72 до 250 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из головного мозга телят не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка.The specified technical result is achieved by the fact that the agent normalizing brain functions is made in the form of a parenteral dosage form and is a peptide complex with a low molecular weight fraction from 70 to 90% with a molecular weight of its peptide components ranging from 72 to 250 Yes, with a concentration of polypeptides of 2.5 ÷ 2.9 mg / ml and obtained from the brain of calves no older than 12 months of age or pigs by extraction with acetic acid in the presence of zinc chloride.
Указанный технический результат достигается также тем, что предлагаемый способ получения средства, нормализующего функции головного мозга, характеризуется тем, что головной мозг телят не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее минус 40°С, выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3% раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20±5°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7÷16°С, затем перемешивают по 1 часу через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 часов, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2-х раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН=5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см2, разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2.The specified technical result is also achieved by the fact that the proposed method of obtaining a means of normalizing brain function is characterized in that the brain of calves no older than 12 months of age or pigs is frozen at a temperature of at least minus 40 ° C, kept at a temperature of minus 20 ÷ 22 ° C for at least two months, then crushed, add a 3% solution of acetic acid in a volume ratio of 1: 5 at a temperature of 20 ± 5 ° C, extraction is carried out with constant stirring, after obtaining a homogeneous suspension in add 1% solution of zinc chloride in a volume ratio of 50: 1, cool with constant stirring to a temperature of 7 ÷ 16 ° C, then mix for 1 hour after every 4 hours of settling for 48 hours, the extract is separated from the ballast substances by separation, add to the extract acetone in a volume ratio of 1: 5, kept at a temperature of 3 ÷ 5 ° C for 4 h, the resulting homogenized precipitate is re-precipitated with acetone at least 2 times, then the precipitate containing the active substance is washed on a suction filter with two cooling volumes of acetone to a temperature of 7-16 ° С until a light gray precipitate is obtained, wiped through a metal sieve, dried, dissolved in distilled water at room temperature and with constant stirring to a concentration of polypeptides of 2.5 ÷ 2.9 mg / ml, the solution is centrifuged , filtered, subjected to ultrafiltration cleaning at the installation with a backpressure of not more than 1.0 kgf / cm 2 through materials with a retention capacity of 15,000 Yes, glycol is added to the ultrafiltrate to a final concentration of 10 ÷ 20 mg / ml at pH = 5.6 ÷ 6, 6, the solution subjected sterilizing by filtration under pressure of not more than 2.0 kgf / cm 2, filled into vials of 2 ml and autoclaved for 8 minutes at 120 ° C and atmospheric pressure of 1.1 kgf / cm 2.
Сущность изобретения поясняется таблицами и чертежом.The invention is illustrated by tables and drawing.
На чертеже изображено влияние препарата на развитие эксплантатов головного мозга.The drawing shows the effect of the drug on the development of brain explants.
В Таблице 1 показано влияние препарата на морфологические и биохимические показатели периферической крови морских свинок при изучении токсичности.Table 1 shows the effect of the drug on the morphological and biochemical parameters of the peripheral blood of guinea pigs in the study of toxicity.
В Таблице 2 показано влияние препарата на показатели выполнения больными корректурной пробы.Table 2 shows the effect of the drug on the performance of patients with a corrective test.
В Таблице 3 показано влияние препарата на изменение альфа-индекса ЭЭГ у больных сосудистой энцефалопатией.Table 3 shows the effect of the drug on the change in the alpha EEG index in patients with vascular encephalopathy.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами: пример 1 - способ получения препарата; примеры 2 и 3, подтверждающие активность препарата; пример 4 - изучение токсичности препарата; пример 5, подтверждающий терапевтическую эффективность препарата, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения, содержащей терапевтически эффективную дозу пептидного комплекса.The invention is illustrated by the following examples: example 1 - a method of obtaining a preparation; examples 2 and 3, confirming the activity of the drug; example 4 - the study of the toxicity of the drug; example 5, confirming the therapeutic effectiveness of the drug, made in the form of a dosage form for parenteral administration containing a therapeutically effective dose of the peptide complex.
Пример 1. Способ получения препаратаExample 1. The method of obtaining the drug
В качестве сырья используется головной мозг телят (не старше 12-месячного возраста) или свиней, который замораживают при температуре не менее минус 40°С и выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев.The raw materials used are the brains of calves (no older than 12 months of age) or pigs, which are frozen at a temperature of at least minus 40 ° C and kept at a temperature of minus 20 ÷ 22 ° C for at least two months.
В реактор для экстракции перекачивают 350 л 3% раствора уксусной кислоты и охлаждают до температуры (20±5)°С, затем в реактор при постоянном перемешивании загружают 70 кг измельченного до получения гомогенной массы сырья. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси добавляют в нее 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры плюс 7÷16°С, затем перемешивают по 1 часу через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч.350 l of a 3% solution of acetic acid are pumped into the extraction reactor and cooled to a temperature of (20 ± 5) ° С, then 70 kg of crushed material is loaded into the reactor with constant stirring until a homogeneous mass of raw material is obtained. The extraction is carried out with constant stirring, after obtaining a homogeneous suspension, a 1% solution of zinc chloride in a volume ratio of 50: 1 is added to it, cooled with constant stirring to a temperature of plus 7 ÷ 16 ° C, then it is stirred for 1 hour after every 4 hours of settling for 48 h
Экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием при (5000±500) об/мин в течение 1 ч. К экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5. Выдерживают при температуре плюс 3-5°С в течение 4 ч. Образовавшийся осадок гомогенизируют и повторно осаждают ацетоном не менее двух раз. Затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета. Промытый осадок протирают через металлическое сито, выкладывают тонким слоем в эмалированные кюветы, закрывают двойным слоем ткани хлопчато-бумажной и высушивают при периодическом помешивании в вытяжном шкафу до полного удаления запаха ацетона.The extract is separated from the ballast substances by separation at (5000 ± 500) rpm for 1 hour. Acetone in a volume ratio of 1: 5 is added to the extract. It is kept at a temperature of plus 3-5 ° C for 4 hours. The precipitate formed is homogenized and re-precipitated with acetone at least two times. Then the precipitate containing the active substance is washed on a suction filter with twice volumes of acetone cooled to a temperature of 7-16 ° C until a light gray precipitate is obtained. The washed precipitate is wiped through a metal sieve, spread in a thin layer into enameled cuvettes, covered with a double layer of cotton cloth and dried with periodic stirring in a fume hood until the odor of acetone is completely removed.
Выход активного вещества (порошка биологически активного пептидного комплекса, выделенного из головного, мозга) составляет 50 г на 1 кг исходного сырья.The yield of active substance (powder of a biologically active peptide complex isolated from the brain, brain) is 50 g per 1 kg of feedstock.
Полученный порошок растворяют в дистиллированной воде при постоянном перемешивании при комнатной температуре в течение 40 мин до концентрации пептидов 2,5÷2,9 мг/мл. Полученный раствор центрифугируют при (3000±200) об/мин в течение 20±5 мин. Центрифугат фильтруют через фильтр типа АР-15 или аналогичный.The resulting powder is dissolved in distilled water with constant stirring at room temperature for 40 min to a concentration of peptides 2.5 ÷ 2.9 mg / ml The resulting solution was centrifuged at (3000 ± 200) rpm for 20 ± 5 minutes. The centrifuge is filtered through an AP-15 filter or similar.
Фильтрат подвергают ультрафильтрационной очистке на установке для ультрафильтрации при противодавлении не более 1,0 кгс/см2, через материалы с задерживающей способностью 15000 Да.The filtrate is subjected to ultrafiltration purification in an ultrafiltration unit with a backpressure of not more than 1.0 kgf / cm 2 , through materials with a retention capacity of 15,000 Da.
В ультрафильтрат добавляют расчетную навеску гликокола до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл, перемешивают до полного растворения гликокола при сохранении рН=5,6÷6,6.In the ultrafiltrate add the calculated sample of glycol to its final concentration of 10 ÷ 20 mg / ml, mix until the glycol is completely dissolved while maintaining the pH = 5.6 ÷ 6.6.
Раствор подвергают стерилизующей фильтрации, которую проводят под давлением, не превышающим 2,0, кгс/см2.The solution is subjected to sterilizing filtration, which is carried out under pressure not exceeding 2.0 kgf / cm 2 .
Полученный раствор разливают в ампулы по 2,0 мл и автоклавируют, причем ампулы с препаратом подвергают стерилизации в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении не более 1,1 кгс/см2.The resulting solution is poured into 2.0 ml ampoules and autoclaved, and the ampoules with the preparation are sterilized for 8 min at a temperature of 120 ° C and atmospheric pressure of not more than 1.1 kgf / cm 2 .
Препарат представляет собой бесцветный, прозрачный раствор и содержит пептидный комплекс с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл.The preparation is a colorless, transparent solution and contains a peptide complex with a concentration of polypeptides of 2.5 ÷ 2.9 mg / ml.
Тестирование на отсутствие высокомолекулярных белковых компонентов осуществляют путем добавления к содержимому 1 ампулы препарата 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Прозрачность раствора свидетельствует об отсутствии высокомолекулярных белковых компонентов.Testing for the absence of high molecular weight protein components is carried out by adding to the contents of 1 ampoule of the drug 1 ml of a 10% solution of trichloroacetic acid. The transparency of the solution indicates the absence of high molecular weight protein components.
Для определения в препарате пептидных связей к его раствору добавляют биуретовый реактив. Окрашивание раствора в фиолетовый цвет свидетельствует об имеющихся в препарате пептидных связях.To determine peptide bonds in a preparation, a biuret reagent is added to its solution. Staining the solution with violet color indicates the peptide bonds present in the preparation.
С целью определения в препарате полипептидов и их фракций используют методы ультрафиолетовой спектрофотометрии, гель-хроматографии, масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии и электрофореза в полиакриламидном геле.In order to determine the polypeptides and their fractions in the preparation, the methods of ultraviolet spectrophotometry, gel chromatography, mass spectrometry, high performance liquid chromatography and polyacrylamide gel electrophoresis are used.
Ультрафиолетовый спектр раствора препарата снимают в области длин волн от 250 до 350 нм: максимум поглощения отмечается при длине волны 270±5 нм.The ultraviolet spectrum of the drug solution is recorded in the region of wavelengths from 250 to 350 nm: the absorption maximum is observed at a wavelength of 270 ± 5 nm.
Молекулярную массу полипептидов, входящих в препарат, определяют следующими методами:The molecular weight of the polypeptides that make up the drug is determined by the following methods:
методом гель-хроматографии на сефадексах G-25 и G-50 («Pharmacia», Швеция). Для калибровки колонки 1,6×60 см используют Peptide Molecuar Weight Kit MS III («Serva», Германия);by gel chromatography on Sephadex G-25 and G-50 (Pharmacia, Sweden). Peptide Molecuar Weight Kit MS III (Serva, Germany) was used to calibrate a 1.6 x 60 cm column;
методом масс-спектрометрии. Спектры получают на времяпролетном масс-спектрометре Voyager DE Biospectrometry с лазерной десорбцией и ионизацией с помощью матрицы (MALDI-TOF) при относительной интенсивности азотного лазера 2300-2400, ускоряющем напряжении 25000 В, времени задержки 90 не и давлении в вакуумной камере 2,6×106 тор;mass spectrometry method. Spectra are obtained on a Voyager DE Biospectrometry time-of-flight mass spectrometer with laser desorption and matrix ionization (MALDI-TOF) at a relative intensity of a nitrogen laser of 2300-2400, an accelerating voltage of 25000 V, a delay time of 90 nsec, and a pressure in the vacuum chamber of 2.6 × 10 6 torr;
методом электрофореза в 15%-ном полиакриламидном геле в сравнении со стандартным набором маркерных белков.by electrophoresis in a 15% polyacrylamide gel in comparison with a standard set of marker proteins.
Перечисленными выше методами установлено, что в состав препарата входят полипептиды с молекулярной массой от 72 до 250 Да.Using the methods listed above, it was found that the composition of the drug includes polypeptides with a molecular weight of 72 to 250 Da.
С помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии в градиенте ацетонитрила (сорбент «Lichrosorb C18», колонка 2х×62 мм), установлено, что в состав препарата входят преимущественно низкомолекулярные фракции - от 70 до 90%, а высокомолекулярные компоненты в препарате отсутствуют.Using reverse-phase high-performance liquid chromatography in an acetonitrile gradient (Lichrosorb C18 sorbent, 2x × 62 mm column), it was found that the preparation contains mainly low molecular weight fractions from 70 to 90%, and there are no high molecular weight components in the preparation.
Пирогенность препарата определяют на кроликах общепринятым методом (ГФ XI, вып.2, с.183) при тест-дозе препарата 0,25 мг на 1 кг массы животного в 1,0 мл изотонического 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций. Показано, что препарат является апирогенным.Pyrogenicity of the drug is determined in rabbits by the generally accepted method (GF XI, issue 2, p. 183) with a test dose of 0.25 mg per 1 kg of animal weight in 1.0 ml of isotonic 0.9% sodium chloride solution for injection. It is shown that the drug is pyrogen-free.
Таким образом, вышеизложенным способом получен препарат - лекарственная форма для парентерального введения, представляющая собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 72 до 250 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл.Thus, in the above method, a preparation is obtained - a parenteral dosage form, which is a peptide complex with a low molecular weight fraction from 70 to 90%, with a molecular weight of its constituent peptide components ranging from 72 to 250 Da, with a concentration of 2.5 polypeptides ÷ 2.9 mg / ml.
Пример 2. Влияние препарата на развитие эксплантатов головного мозгаExample 2. The effect of the drug on the development of brain explants
Эксперименты проведены на 65 фрагментах коры головного мозга и 48 фрагментах спинно-мозговых ганглиев 10-11-суточных эмбрионов цыпленка. Питательная среда для культивирования эксплантатов состояла из 35% раствора Игла, 25% фетальной сыворотки теленка, 35% раствора Хенкса, 5% куриного эмбрионального экстракта, в среду добавляли глюкозу (0,6%), инсулин (0,5 ед./мл), пенициллин (100 ед./мл), глютамин (2 мМ). Фрагменты коры головного мозга или спинно-мозговых ганглиев помещали в эту среду и культивировали на коллагеновой подложке в чашках Петри, в термостате при температуре 36,7°С в течение 2 суток. В экспериментальную среду добавляли исследуемый препарат и церебролизин (положительный контроль) в концентрациях 0,5, 1, 2, 20, 50, 100, 200, 400, 800, 1000 нг/мл. Критерием биологической активности служил индекс площади (ИП) - соотношение площади всего эксплантата вместе с зоной роста к исходящей площади фрагмента головного мозга. Достоверность различия сравниваемых средних значений ИП оценивали с помощью t-критерия Стъюдента. Значения ИП выражали в процентах, контрольное значение ИП принималось за 100%.The experiments were conducted on 65 fragments of the cerebral cortex and 48 fragments of the spinal cord ganglia of 10-11-day-old chicken embryos. The culture medium for explant cultivation consisted of 35% Eagle's solution, 25% fetal calf serum, 35% Hanks solution, 5% chicken embryonic extract, glucose (0.6%), insulin (0.5 units / ml) were added to the medium penicillin (100 units / ml), glutamine (2 mm). Fragments of the cerebral cortex or spinal cord ganglia were placed in this medium and cultured on a collagen substrate in Petri dishes, in an incubator at a temperature of 36.7 ° C for 2 days. The test drug and cerebrolysin (positive control) were added to the experimental medium at concentrations of 0.5, 1, 2, 20, 50, 100, 200, 400, 800, 1000 ng / ml. The criterion of biological activity was the area index (PI) - the ratio of the area of the entire explant along with the growth zone to the outgoing area of the brain fragment. The significance of differences in the compared mean IP values was evaluated using Student's t-test. The IP values were expressed as a percentage, the control IP value was taken as 100%.
Зону роста контрольных эксплантатов головного мозга составляли короткие нейриты, а также выселяющиеся клетки глии и фибробластоподобные клетки.The growth area of the control brain explants was composed of short neurites, as well as evicted glia cells and fibroblast-like cells.
При исследовании непосредственного влияния препаратов на фрагменты головного мозга были поставлены следующие серии опытов.In studying the direct effect of drugs on brain fragments, the following series of experiments were performed.
В питательную среду эксплантатов коры головного мозга и спинно-мозговых ганглиев эмбрионов цыплят добавляли церебролизин в различных концентрациях. На 3-и сутки культивирования при концентрации 100 нг/мл наблюдалось достоверное повышение ИП эксплантатов коры головного мозга на 28±2%, по сравнению с контрольными значениями ИП. Достоверных значений ИП эксплантатов коры при действии других концентраций церебролизина не наблюдалось. Отчетливая стимуляция развития эксплантатов коры головного мозга выявилась при действии исследуемого препарата в концентрации 20 нг/мл, когда ИП экспериментальных эксплантатов на 37±3% был выше, чем ИП контрольных эксплантатов, и достоверно выше, чем ИП эксплантатов сравнения при действии церебролизина. При добавлении церебролизина в среду для культивирования эксплантатов спинно-мозговых ганглиев достоверного увеличения ИП эксплантатов не отмечалось, в то время как при добавлении в среду исследуемого препарата наблюдалось увеличение ИП эксплантата на 31±2%.Cerebrolysin in various concentrations was added to the nutrient medium of explants of the cerebral cortex and spinal ganglia of chick embryos. On the 3rd day of cultivation at a concentration of 100 ng / ml, a significant increase in the PI of explants of the cerebral cortex was observed by 28 ± 2%, compared with the control values of PI. Reliable IP values of cortical explants under the action of other concentrations of cerebrolysin were not observed. A distinct stimulation of the development of cerebral cortex explants was revealed under the action of the studied drug at a concentration of 20 ng / ml, when the PI of the experimental explants was 37 ± 3% higher than the PI of the control explants and significantly higher than the PI of the comparison explants under the action of cerebrolysin. When cerebrolysin was added to the medium for culturing the spinal ganglion explants, there was no significant increase in explant IP, while when the studied drug was added to the medium, an explant IP increased by 31 ± 2%.
При исследовании эксплантатов коры головного мозга и спинно-мозговых ганглиев на более длительных сроках культивирования - 7 дней - выявились те же эффекты нейрит-стимулирующего действия, в тех же концентрациях исследуемого препарата.In the study of explants of the cerebral cortex and spinal cord ganglia for longer periods of cultivation - 7 days - the same effects of a neurite-stimulating effect were revealed in the same concentrations of the studied drug.
На чертеже представлено влияние препарата на развитие эксплантатов коры головного мозга.The drawing shows the effect of the drug on the development of explants of the cerebral cortex.
Таким образом, в отношении тканей головного мозга наблюдалось уменьшение порога эффективных концентраций для исследуемого препарата по сравнению с церебролизином. Так увеличение зоны роста эксплантатов фрагментов коры головного мозга выявлялось при действии церебролизина только в концентрации 100 нг/мл, а при действии исследуемого препарата - в концентрации 20 нг/мл. При этом интенсивность стимулирующего действия препарата была достоверно выше, чем церебролизина. На увеличение зоны роста эксплантатов спинно-мозговых ганглиев церебролизин достоверного действия не оказывал, в то время как исследуемый препарат способствовал увеличению ИП на. 31%. Это свидетельствует о выраженном и направленном стимулирующем действии препарата на нейроны различных отделов головного мозга.Thus, in relation to brain tissue, a decrease in the threshold of effective concentrations for the studied drug was observed compared with cerebrolysin. So, an increase in the growth zone of the explants of fragments of the cerebral cortex was detected under the action of cerebrolysin only at a concentration of 100 ng / ml, and under the action of the studied drug at a concentration of 20 ng / ml. Moreover, the intensity of the stimulating effect of the drug was significantly higher than cerebrolysin. Cerebrolysin did not have a significant effect on the increase in the growth zone of the explants of the spinal cord ganglia, while the studied drug contributed to an increase in PI by. 31% This indicates a pronounced and directed stimulating effect of the drug on neurons of various parts of the brain.
Пример 3. Влияние препарата на токсические эффекты нейротропных веществExample 3. The effect of the drug on the toxic effects of neurotropic substances
На 38 крысах линии «Wistar» проведено исследование влияния препарата на токсические эффекты нейротропных веществ различных фармакологических групп.A study of the effect of the drug on the toxic effects of neurotropic substances of various pharmacological groups was conducted on 38 Wistar rats.
Через 1 ч после внутримышечной инъекции физиологического раствора (контроль) или исследуемого препарата (в двух дозах - 70 мкг/кг и 350 мкг/кг в 0,5 мл стерильного физиологического раствора) крысам внутрибрюшинно вводили токсические дозы различных нейрофармакологических препаратов (апоморфин, галоперидол, никотин, кофеин) и регистрировали показатели вертикальной (тревожность) и горизонтальной (локомоторика) спонтанной двигательной активности.One hour after an intramuscular injection of physiological saline (control) or the test drug (in two doses - 70 μg / kg and 350 μg / kg in 0.5 ml of sterile saline), toxic doses of various neuropharmacological drugs (apomorphine, haloperidol, nicotine, caffeine) and recorded indicators of vertical (anxiety) and horizontal (locomotor) spontaneous motor activity.
Апоморфин оказывает рвотное действие за счет стимуляции хеморецепторной пусковой зоны продолговатого мозга. Кроме того, апоморфин способен взаимодействовать с дофаминовыми рецепторами и возбуждать дофаминергические структуры мозга. В экспериментах при введении апоморфина у животных наблюдались гиперлокомоторика, гипертермия, "психоз", миотония. Исследуемый препарат в обеих концентрациях противодействовал влиянию апоморфина, снижая уровень тревожности и выраженность локомоторных реакций, препятствуя развитию гипертермии и миотонии.Apomorphine has an emetic effect due to the stimulation of the chemoreceptor trigger zone of the medulla oblongata. In addition, apomorphine is able to interact with dopamine receptors and excite dopaminergic brain structures. In experiments with the introduction of apomorphine in animals, hyperlocomotoria, hyperthermia, "psychosis", and myotonia were observed. The studied drug in both concentrations counteracted the effect of apomorphine, reducing the level of anxiety and the severity of locomotor reactions, preventing the development of hyperthermia and myotonia.
Галоперидол относится к группе нейролептиков, обладает слабой адренолитической активностью. В экспериментах при ведении животным галоперидол вызывал у них снижение локомоторики, гипотермию, каталепсию, "депрессию" и миоплегию. Исследуемый препарат действовал как фармакологический антагонист галоперидола, усиливая тревожность и локомоторные реакции, препятствуя развитию гипотермии и миоплегии как в дозе 70 мкг/кг, так и в дозе 350 мкг/кг.Haloperidol belongs to the group of antipsychotics, has weak adrenolytic activity. In experiments with animals, haloperidol caused a decrease in locomotority, hypothermia, catalepsy, depression and myoplegia. The studied drug acted as a pharmacological antagonist of haloperidol, increasing anxiety and locomotor reactions, preventing the development of hypothermia and myoplegia both at a dose of 70 μg / kg and at a dose of 350 μg / kg.
Никотин обладает н-холиномиметическим действием. В экспериментах при введении животным вызывал у них повышение вертикальной и горизонтальной двигательной активности, а также мышечного тонуса. Под действием исследуемого препарата наблюдалось снижение влияния никотина на тревожность животных, что выражалось в уменьшении вертикальной и горизонтальной двигательной активности и мышечного тонуса. Достоверной разницы в эффективности применения препарата в разных дозах не выявлено.Nicotine has an n-cholinomimetic effect. In experiments with the introduction of animals caused them to increase vertical and horizontal motor activity, as well as muscle tone. Under the influence of the studied drug, a decrease in the effect of nicotine on the anxiety of animals was observed, which was expressed in a decrease in vertical and horizontal motor activity and muscle tone. No significant difference in the effectiveness of the drug in different doses was found.
Кофеин является психостимулятором, механизм его действия основан на подавлении активности фосфодиэстеразы и ассоциированным с ним повышении уровня сАМР. В экспериментах при введении животным кофеин вызывал у них гиперлокомоторную реакцию и повышение зоосоциального контакта животных. Исследуемый препарат оказывал выраженное антитоксическое действие в обеих дозах, снижая тревожность, вызываемую кофеином, но не влиял при этом на локомоторику.Caffeine is a psychostimulant; its mechanism of action is based on the suppression of phosphodiesterase activity and the associated increase in cAMP levels. In experiments with the introduction of animals, caffeine caused a hyperlocomotor reaction in them and an increase in zoosocial contact of animals. The studied drug had a pronounced antitoxic effect in both doses, reducing the anxiety caused by caffeine, but did not affect the locomotor.
Способность препарата подавлять токсические эффекты таких препаратов, как адреностимуляторы, нейролептики, холиномиметики и психостимуляторы, свидетельствует о его нормализующем действии на функциональную активность нейронов и может быть использована как в лечении отравлений нейротропными веществами, так и для восстановления функции нейронов при действии других повреждающих факторов. Эффект препарата проявлялся в одинаковой степени как в дозе 70 мкг/кг, так и в дозе 350 мкг/кг, что свидетельствует о возможности считать дозировку 70 мкг/кг (или 5 мг на человека) терапевтически эффективной.The ability of the drug to suppress the toxic effects of drugs such as adrenostimulants, antipsychotics, cholinomimetics and psychostimulants, indicates its normalizing effect on the functional activity of neurons and can be used both in the treatment of poisoning with neurotropic substances, and to restore the function of neurons under the action of other damaging factors. The effect of the drug was manifested to the same extent both at a dose of 70 μg / kg, and at a dose of 350 μg / kg, which indicates the possibility of considering the dosage of 70 μg / kg (or 5 mg per person) as therapeutically effective.
Пример 4. Изучение токсичности препаратаExample 4. The study of the toxicity of the drug
Общетоксическое действие препарата исследовали в соответствии с требованиями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000): острой токсичности при однократном введении препарата, а также подострой и хронической токсичности при длительном введении препарата.The general toxic effect of the drug was investigated in accordance with the requirements of the Guidelines for the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances (2000): acute toxicity with a single administration of the drug, as well as subacute and chronic toxicity with prolonged administration of the drug.
Исследование по изучению острой токсичности проведено на 72 белых беспородных мышах-самцах с массой тела 20-22 г. Животные были рандомизированно разделены на 6 равных групп. Препарат вводили животным однократно внутримышечно в дозах 35 мг/кг, 50 мг/кг, 100 мг/кг, 150 мг/кг, 200 мг/кг в 0,25 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы в том же объеме вводили 0,9% раствор NaCl.A study of acute toxicity was conducted on 72 white outbred male mice weighing 20-22 g. Animals were randomly divided into 6 equal groups. The drug was administered to animals once intramuscularly at doses of 35 mg / kg, 50 mg / kg, 100 mg / kg, 150 mg / kg, 200 mg / kg in 0.25 ml of sterile 0.9% NaCl solution. Animals of the control group were injected with the same volume of 0.9% NaCl solution.
Исследования по изучению подострой токсичности проведено на 65 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 150-180 г. Ежедневно однократно животным подопытных групп вводили препарат внутримышечно в течение 90 дней в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы вводили в том же объеме стерильный 0,9% раствор NaCl. До введения препарата на 30, 60 и 90 сутки после начала введения препарата у животных исследовали морфологический состав и свойства периферической крови. При завершении эксперимента исследовали биохимические и коагулологические показатели крови.Studies on the study of subacute toxicity were performed on 65 white outbred male rats weighing 150-180 g. Daily, once a day, animals of the experimental groups were injected intramuscularly with doses of 1 mg / kg, 10 mg / kg, 100 mg / kg 0.5 ml of a sterile 0.9% NaCl solution. The animals of the control group were injected in the same volume with a sterile 0.9% NaCl solution. Before administration of the drug on the 30, 60 and 90 days after the start of drug administration, the morphological composition and properties of peripheral blood were studied in animals. At the end of the experiment, biochemical and coagulological blood parameters were examined.
Исследования по изучению хронической токсичности проводили в течение 6 месяцев исходя из длительности рекомендуемого клинического назначения препарата на 84 морских свинках-самцах с массой тела 250-280 г. Животные подопытных групп получали ежедневно однократно внутримышечно препарат в течение 6 мес. в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. В контрольной группе животным вводили по аналогичной схеме стерильный 0,9% раствор NaCl в том же объеме. У животных в периферической крови общепринятыми методами определяли: количество эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), резистентность эритроцитов. Наряду с этим определяли содержание в сыворотке крови общего белка по методу Лоури, калия и натрия методом плазменной спектрофотометрии. После завершения эксперимента проводили патоморфологическое исследование головного и спинного мозга, спинно-мозговых ганглиев, щитовидной железы, паращитовидных желез, надпочечников, семенников, гипофиза, сердца, легких, аорты, печени, почки, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга.Studies on the study of chronic toxicity were carried out for 6 months based on the duration of the recommended clinical prescription of the drug in 84 male guinea pigs with a body weight of 250-280 g. Animals of the experimental groups received once daily intramuscular preparation for 6 months. in doses of 1 mg / kg, 10 mg / kg, 100 mg / kg in 0.5 ml of a sterile 0.9% NaCl solution. In the control group, animals were injected in a similar fashion with a sterile 0.9% NaCl solution in the same volume. In animals, peripheral blood was determined by conventional methods: the number of red blood cells, hemoglobin, reticulocytes, platelets, white blood cells, white blood cell count, erythrocyte sedimentation rate (ESR), and erythrocyte resistance. Along with this, the content of total protein in blood serum was determined by the method of Lowry, potassium and sodium by plasma spectrophotometry. After the experiment was completed, a pathomorphological study of the brain and spinal cord, spinal ganglia, thyroid gland, parathyroid glands, adrenal glands, testes, pituitary gland, heart, lungs, aorta, liver, kidney, bladder, pancreas, stomach, small intestine, colon intestines, thymus, spleen, lymph nodes, bone marrow.
При изучении острой токсичности установлено, что однократное введение исследуемого препарата животным в дозе, превышающей терапевтическую, рекомендованную для клинического применения, более чем в 5000 раз, не вызывает токсических реакций, что свидетельствует о большой терапевтической широте препарата.When studying acute toxicity, it was found that a single administration of the studied drug to animals in a dose exceeding the therapeutic recommended for clinical use by more than 5000 times does not cause toxic reactions, which indicates a large therapeutic breadth of the drug.
Изучение подострой и хронической токсичности препарата свидетельствует об отсутствии побочных эффектов при длительном применении препарата в дозах, превышающих терапевтическую в 300÷3000 раз. При исследовании влияния препарата на морфологический состав и биохимические показатели периферической крови морских свинок через 3 и 6 месяцев после начала его введения достоверного изменения показателей не выявлено (Таблица 1).The study of subacute and chronic toxicity of the drug indicates the absence of side effects with prolonged use of the drug in doses exceeding the therapeutic 300-3000 times. When studying the effect of the drug on the morphological composition and biochemical parameters of the peripheral blood of guinea pigs after 3 and 6 months after the start of its administration, no significant change in the indicators was revealed (Table 1).
При оценке общего состояния животных, морфологических и биохимических показателей периферической крови, морфологического состояния внутренних органов, состояния сердечно-сосудистой и дыхательной систем, функции печени и почек патологические изменения в организме не обнаружены.When assessing the general condition of animals, morphological and biochemical parameters of peripheral blood, the morphological state of internal organs, the state of the cardiovascular and respiratory systems, and liver and kidney function, pathological changes in the body were not detected.
Следовательно, препарат, полученный предлагаемым способом, при длительном введении животным не обладает токсическими свойствами, препятствующими дальнейшему его применению в качестве лекарственного средства, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения.Therefore, the drug obtained by the proposed method, with long-term administration to animals does not have toxic properties that prevent its further use as a medicine, made in the form of a dosage form for parenteral administration.
Пример 5. Эффективность применения препарата у больных сосудистыми энцефалопатиямиExample 5. The effectiveness of the drug in patients with vascular encephalopathy
Исследование проведено с участием 30 больных сосудистыми энцефалопатиями в возрасте 61÷80 лет. Все больные ранее получали традиционные лекарственные средства симптоматического и патогенетического действия, при применении которых отмечался кратковременный терапевтический эффект, требующий увеличения дозы препаратов на курс лечения и продолжительного их приема.The study was conducted with the participation of 30 patients with vascular encephalopathies aged 61 ÷ 80 years. All patients previously received traditional medicines of symptomatic and pathogenetic action, the use of which showed a short-term therapeutic effect, requiring an increase in the dose of drugs per treatment course and their long-term use.
Все пациенты, принимавшие участие в исследовании, методом рандомизации были разделены на 2 группы. 19 пациентам, составившим основную группу, вводили препарат в дозе 5 мг в 2,0 мл физиологического раствора внутримышечно ежедневно однократно течение 10 дней.All patients participating in the study were divided into 2 groups by randomization. The 19 patients who made up the main group were injected with a dose of 5 mg in 2.0 ml of saline intramuscularly once daily for 10 days.
11 пациентам контрольной группы назначали общепринятое лечение.11 patients in the control group were prescribed conventional treatment.
При сопоставлении субъективных показателей состояния больных до и после применения препарата установлено, что количество жалоб на здоровье уменьшилось в 3,5 раза. Больные отмечали улучшение памяти, сообразительности, уменьшение интенсивности и длительности головных болей, появление эмоциональной уравновешенности, волевых качеств, чувства отдыха после ночного сна.When comparing subjective indicators of the state of patients before and after using the drug, it was found that the number of health complaints decreased by 3.5 times. Patients noted an improvement in memory, quick wisdom, a decrease in the intensity and duration of headaches, the appearance of emotional poise, strong-willed qualities, and a sense of relaxation after a night's sleep.
Оценка влияния препарата на интегральную функцию головного мозга - внимание и на биоэлектрическую активность исследовали с помощью корректурной пробы и электроэнцефалографии соответственно.Evaluation of the effect of the drug on the integral function of the brain - attention and bioelectric activity was studied using a proof-reading and electroencephalography, respectively.
У больных после лечения с применением препарата значительно возросло количество просмотренных знаков и уменьшилось количество ошибок (Таблица 2). В группах больных, получавших лечение с применением препарата, получены лучшие результаты при анализе динамики выполнения корректурной пробы до и после лечения. Это выражалось в отсутствии резких колебаний в количестве просмотренных знаков за равные отрезки времени, наличии периода "врабатываемости" к середине выполнения задания и постепенном снижении кривой к концу задания, что свидетельствует о большей устойчивости внимания после применения препарата.In patients after treatment with the use of the drug, the number of scanned characters significantly increased and the number of errors decreased (Table 2). In the groups of patients who received treatment with the drug, the best results were obtained when analyzing the dynamics of performing the corrective test before and after treatment. This was expressed in the absence of sharp fluctuations in the number of characters viewed over equal periods of time, the presence of a “work-in” period towards the middle of the task and a gradual decrease in the curve at the end of the task, which indicates greater stability of attention after using the drug.
Для оценки влияния препарата на биоэлектрическую активность головного мозга проводился расчет альфа-индекса до и после лечения. Наиболее выраженные изменения биоэлектрической активности головного мозга наблюдались у больных после лечения с применением препарата по сравнению с пациентами контрольной группы. Установлено, что под влиянием лечения с применением препарата произошло достоверное увеличение альфа-индекса у больных исследуемой группы (Таблица 3).To assess the effect of the drug on the bioelectric activity of the brain, an alpha index was calculated before and after treatment. The most pronounced changes in the bioelectric activity of the brain were observed in patients after treatment with the drug compared with patients in the control group. It was found that under the influence of treatment with the use of the drug there was a significant increase in the alpha index in patients of the study group (Table 3).
Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о нормализующем действии препарата в терапевтически эффективной дозе 5 мг (2,5 мг/мл) на интегративную функцию головного мозга у больных сосудистыми энцефалопатиями и целесообразности его применения для лечения больных с патологией головного мозга в дозе 5 мг внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней.Thus, the results of the study indicate the normalizing effect of the drug in a therapeutically effective dose of 5 mg (2.5 mg / ml) on the integrative function of the brain in patients with vascular encephalopathy and the feasibility of its use for the treatment of patients with brain pathology at a dose of 5 mg intramuscularly once daily for 10 days.
# - Р<0,05 по сравнению с показателем у больных после лечения с применением общепринятых средств.* - P <0.05 compared with the indicator in patients before treatment;
# - P <0.05 compared with the indicator in patients after treatment using conventional means.
Claims (2)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006122057/15A RU2302871C1 (en) | 2006-06-22 | 2006-06-22 | Brain functions normalizing agent and a method for preparation thereof |
| EA200700620A EA010739B1 (en) | 2006-06-22 | 2007-04-11 | Medicament normalizing drain functions and method for preparing thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006122057/15A RU2302871C1 (en) | 2006-06-22 | 2006-06-22 | Brain functions normalizing agent and a method for preparation thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2302871C1 true RU2302871C1 (en) | 2007-07-20 |
Family
ID=38431015
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006122057/15A RU2302871C1 (en) | 2006-06-22 | 2006-06-22 | Brain functions normalizing agent and a method for preparation thereof |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA010739B1 (en) |
| RU (1) | RU2302871C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105709204A (en) * | 2016-04-15 | 2016-06-29 | 上海首领生物科技有限公司 | Oral solution for improving brain functions and preparation method thereof |
| RU2822603C1 (en) * | 2023-03-03 | 2024-07-09 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Haee synthetic tetrapeptide and derivatives thereof intended for human neuron function recovery |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2090194C1 (en) * | 1994-09-30 | 1997-09-20 | Игорь Арнольдович Скворцов | Method for producing preparation for treating coordination disturbances in cerebellum and brain stem region |
| RU2104702C1 (en) * | 1996-10-16 | 1998-02-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Клиника Института биорегуляции и геронтологии" | Method of preparing the biologically active polypeptide complex normalizing brain functions from animal raw, pharmacological composition and its using |
| WO2002094305A1 (en) * | 2001-05-24 | 2002-11-28 | Neuronz Limited | Use of tripeptide gpe for treating or preventing symptoms of parkinson's disease |
-
2006
- 2006-06-22 RU RU2006122057/15A patent/RU2302871C1/en active
-
2007
- 2007-04-11 EA EA200700620A patent/EA010739B1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2090194C1 (en) * | 1994-09-30 | 1997-09-20 | Игорь Арнольдович Скворцов | Method for producing preparation for treating coordination disturbances in cerebellum and brain stem region |
| RU2104702C1 (en) * | 1996-10-16 | 1998-02-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Клиника Института биорегуляции и геронтологии" | Method of preparing the biologically active polypeptide complex normalizing brain functions from animal raw, pharmacological composition and its using |
| WO2002094305A1 (en) * | 2001-05-24 | 2002-11-28 | Neuronz Limited | Use of tripeptide gpe for treating or preventing symptoms of parkinson's disease |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Морозов В.Г. и др. Цитамины, биорегуляторы клеточного метаболизма.// Под ред. проф. В.Х Хавинсона. СПб., 1999, с.9-10. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105709204A (en) * | 2016-04-15 | 2016-06-29 | 上海首领生物科技有限公司 | Oral solution for improving brain functions and preparation method thereof |
| RU2822603C1 (en) * | 2023-03-03 | 2024-07-09 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Haee synthetic tetrapeptide and derivatives thereof intended for human neuron function recovery |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA200700620A1 (en) | 2007-12-28 |
| EA010739B1 (en) | 2008-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2104702C1 (en) | Method of preparing the biologically active polypeptide complex normalizing brain functions from animal raw, pharmacological composition and its using | |
| JP2018529626A (en) | Scorpion poison heat-resistant synthetic peptide | |
| EP2589389B1 (en) | Method for producing a biologically active complex. biologically active protein/polypeptide complex | |
| CN112639076A (en) | Methods and compositions for promoting cell growth and tissue repair | |
| RU2302871C1 (en) | Brain functions normalizing agent and a method for preparation thereof | |
| US8524674B2 (en) | Method of improving the conditioned reflex habit, the muscle tonus, or the motion coordination of a patient after suffering trauma to the brain cortex | |
| RU2302874C1 (en) | Agent normalizing reproductive function in men and method for its preparing | |
| EP2656853A1 (en) | Method for treating acute cerebral and spinal blood flow disorders of an ischaemic or haemorrhagic nature | |
| DE60036638T2 (en) | USE OF COLOSTRININ, THEIR PEPTIDE COMPONENTS AND THEIR ANALOGUE FOR PROMOTING NEURONAL CELL DIFFERENTIATION | |
| RU2301071C1 (en) | Hepatoprotective agent and method for production thereof | |
| RU2302868C1 (en) | Agent normalizing kidney function and method for its preparing | |
| RU2302875C1 (en) | Agent normalizing pancreas function and method for its preparing | |
| RU2301072C1 (en) | Agent for normalizing of blood-vessel function and method for production thereof | |
| RU2302867C1 (en) | Agent normalizing bladder tonus and method for its preparing | |
| RU2405560C1 (en) | Medication for brain cell protection | |
| RU2302872C9 (en) | Agent normalizing cartilage tissue function and method for its preparing | |
| RU2302870C1 (en) | Geroprotector activity exhibiting agent and a method for preparation thereof | |
| WO2012166004A1 (en) | Protein-polypeptide complex with a specific activity on the nervous system, process for preparing same and pharmaceutical composition on the basis thereof | |
| Khosropanah et al. | Evaluation and comparison of the effects of mature silkworm (Bombyx mori) and silkworm pupae extracts on Schwann cell proliferation and axon growth: an in vitro study | |
| RU2801151C1 (en) | Method of obtaining biologically active protein-polypeptide hydrolyzate from brain tissues | |
| EA010736B1 (en) | Medicament normalizing female reproductive function, and method for preparing thereof | |
| RU2771678C1 (en) | Biologically active substance and pharmaceutical composition in the form of sterile aqueous dispersion for conjunctival in the form of drops and subjunctival, para -, retrobulbar injection administration in the conducted therapies of vascular and dysmetabolic ophthalmological diseases | |
| RU2768475C1 (en) | Peptide with neurostimulation activity and restore learning and memory formation, pharmaceutical composition on its basis and method for its application | |
| RU2134581C1 (en) | Means for treating irradiated mammalians | |
| RU2118533C1 (en) | Agent for treatment of irradiated mammals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20140403 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20210715 |