DE60036638T2

DE60036638T2 - USE OF COLOSTRININ, THEIR PEPTIDE COMPONENTS AND THEIR ANALOGUE FOR PROMOTING NEURONAL CELL DIFFERENTIATION

Info

Publication number: DE60036638T2
Application number: DE60036638T
Authority: DE
Inventors: Istvan Galveston BOLDOGH; Thomas K. Galveston HUGHES; G. JOHN Texas City STANTON
Original assignee: University of Texas System; University of Texas at Austin
Current assignee: University of Texas System; University of Texas at Austin
Priority date: 1999-08-17
Filing date: 2000-08-17
Publication date: 2008-02-21
Anticipated expiration: 2020-08-18
Also published as: EP1238058A4; DE60036638D1; WO2001012651A9; EP1238058B1; EP1238058A2; WO2001012651A3; AU6917700A; WO2001012651A2; ATE374810T1

Abstract

The present invention discloses a use of colostrinin, a constituent peptide thereof, and/or an analog thereof as a neural cell regulator in animals including humans.

Description

Das Kolostrum ist ein Bestandteil der Milch von Säugetieren während der ersten Tage nach der Geburt. Das Kolostrum ist eine dicke, gelbliche Flüssigkeit und ist die erste Milchsekretion nach der Niederkunft und enthält eine hohe Konzentration an Immunglobulinen (IgG, IgM und IgA) sowie eine Vielzahl nicht spezifischer Proteine. Das Kolostrum enthält außerdem verschiedene Zellen, wie z. B. Granula- und Stromazellen, Neutrophile, Monozyten/Makrophagen und Lymphozyten. Das Kolostrum beinhaltet ferner Wachstumsfaktoren, Hormone und Zytokine. Anders als reife Muttermilch enthält Kolostrum geringe Konzentrationen an Zucker, geringe Konzentration an Eisen, ist jedoch reich an Lipiden, Proteinen, Mineralsalzen, Vitaminen und Immunglobulinen.The Colostrum is a component of mammalian milk during the first few days of birth. The colostrum is a thick, yellowish liquid and is the first milk secretion after childbirth and contains one high concentration of immunoglobulins (IgG, IgM and IgA) and one Variety of non-specific proteins. The colostrum also contains various Cells, such. B. granula and stromal cells, neutrophils, monocytes / macrophages and lymphocytes. The colostrum also contains growth factors, Hormones and cytokines. Unlike mature breast milk contains colostrum low concentrations of sugar, low concentration of iron, is rich in lipids, proteins, mineral salts, vitamins and immunoglobulins.

Das Kolostrum umfasst oder enthält außerdem ein(en) Prolin-reiches/n Polypeptid-Aggregat oder -Komplex, das/der als Colostrinin bezeichnet wird. Ein Peptidfragment von Colostrinin ist Val-Glu-Ser-Tyr-Val-Pro-Leu-Phe-Pro (SEQ ID NR:31), das in der internationalen Veröffentlichung Nr. WO-A-98/14473 offenbart ist. Colostrinin und dieses Fragment wurden als nützlich bei der Behandlung von Störungen des zentralen Nervensystems, neurologischen Störungen, mentalen Störungen, Demenz, neurodegenerativen Erkrankungen, Alzheimer-Krankheit, Erkrankung der Motoneurone, Psychose, Neurose, chronischen Störungen des Immunsystems, Erkrankungen mit einer bakteriellen oder viralen Ätiologie und erworbenen immunologischen Defizienzen, wie in der internationalen Veröffentlichung Nr. WO-A-98/14473 dargelegt, identifiziert.The colostrum also includes or contains a proline-rich polypeptide aggregate or complex called colostrinin. A peptide fragment of colostrinin is Val-Glu-Ser-Tyr-Val-Pro-Leu-Phe-Pro (SEQ ID NO: 31), which is described in International Publication No. WO-A-98/14473 is disclosed. Colostrinin and this fragment have been found useful in the treatment of central nervous system disorders, neurological disorders, mental disorders, dementia, neurodegenerative diseases, Alzheimer's disease, motor neurone disease, psychosis, neurosis, chronic immune system disorders, bacterial or viral diseases Etiology and acquired immunological deficiencies as described in International Publication No. WO-A-98/14473 set out, identified.

Obwohl bestimmte Verwendungsmöglichkeiten für Colostrinin ermittelt worden sind, würde es einen Fortschritt auf dem Gebiet bedeuten, weitere Verwendungsmöglichkeiten für Colostrinin oder einen Bestandteil davon zu entdecken und zu offenbaren, die nicht ohne Weiteres aus den derzeit über Colostrinin oder dessen Bestandteile bekannten Informationen ermittelbar sind.Even though certain uses for colostrinin would have been detected there is progress in the field, other uses for colostrinin or to discover and disclose a part of it that not readily available from the current about Colostrinin or its components known information can be determined.

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf die Verwendung von Colostrinin, wenigstens einem Peptidbestandteil (d. h. einer Peptidkomponente) davon, wenigstens einem aktiven Analogon davon (z. B. ein Peptid, das eine N-terminale Sequenz hat, die einer N-terminalen Sequenz von wenigstens einem der Colostrinin-Peptidbestandteile entspricht) und Kombinationen davon, als Förderer der neuronalen Zelldifferenzierung (promoters of neural cell differentiation). Diese Agenzien können in vitro oder in vivo verwendet werden, einschließlich der innerlichen Verwendung in Patienten, insbesondere Tieren (einschließlich Säugetieren, wie z. B. Menschen).The The present invention relates to the use of colostrinin, at least one peptide component (i.e., a peptide component) thereof, at least one active analog thereof (eg, a peptide, the has an N-terminal sequence corresponding to an N-terminal sequence of at least one of the colostrinin peptide components corresponds) and combinations thereof, as a promoter of neuronal cell differentiation (promoters of neural cell differentiation). These agents can used in vitro or in vivo, including internal use in patients, especially animals (including mammals, such as People).

In einem ersten Aspekt stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Fördern der In-vitro-Zelldifferenzierung zur Verfügung, wobei das Verfahren das Inkontaktbringen der Zellen mit einem Regulator neuronaler Zellen umfasst, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Colostrinin, einem Peptidbestandteil von Colostrinin, einem aktiven Analogon eines Peptidbestandteils von Colostrinin und Kombinationen davon, unter Bedingungen, die wirksam sind, die Morphologie der Zellen zu verändern, um neuronale Zellen zu bilden, worin der Peptidbestandteil von Colostrinin ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34 und worin das aktive Analogon ein Peptid umfasst, das eine Aminosäuresequenz mit wenigstens 15 % Prolin hat und das wenigstens 70 % Sequenzidentität mit einem oder mehreren Peptidbestandteil(en) von Colostrinin aufweist, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34. Die Zellen können in einer Zellkultur, einem Organ, einem Gewebe oder einem Organismus vorhanden sein. Vorzugsweise sind die Zellen Säugerzellen und bevorzugter humane Zellen. Der Regulator neuronaler Zellen ist vorzugsweise ein Peptidbestandteil von Colostrinin, wie z. B. den hierin beschriebenen (SEQ ID NRn:1-34).In In a first aspect, the present invention provides a method to promote the in vitro cell differentiation, the method being the Contacting the cells with a neuronal cell regulator includes, the selected is from the group consisting of colostrinin, a peptide constituent of Colostrinin, an active analogue of a peptide component of Colostrinin and combinations thereof, under conditions that are effective are to change the morphology of cells to neuronal cells wherein the peptide component of colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34 and wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with one or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34. The cells can in a cell culture, an organ, a tissue or an organism to be available. Preferably, the cells are mammalian cells and more preferred human cells. The neuronal cell regulator is preferred a peptide component of colostrinin, such as. As described herein (SEQ ID NOs: 1-34).

In einem zweiten Aspekt stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung eines Regulators neuronaler Zellen, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Colostrinin, einem Peptidbestandteil von Colostrinin, einem aktiven Analogon eines Peptidbestandteils von Colostrinin und Kombinationen davon, worin der Peptidbestandteil von Colostrinin ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34; und worin das aktive Analogon ein Peptid umfasst, das eine Aminosäuresequenz mit wenigstens 15 % Prolin hat und das wenigstens 70 % Sequenzidentität mit einem oder mehreren Peptidbestandteil(en) von Colostrinin aufweist, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34, bei der Herstellung eines Medikamentes zum Fördern der neuronalen Zelldifferenzierung in einem Patienten, zur Verfügung.In In a second aspect, the present invention provides the use a regulator of neuronal cells selected from the group consisting from colostrinin, a peptide component of colostrinin, one active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations of which the peptide component of colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34; and in which the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with one or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34, in the manufacture of a medicament for promoting neuronal cell differentiation in a patient, available.

In einem dritten Aspekt stellt die vorliegende Erfindung ein In-vitro-Verfahren zum Behandeln geschädigter neuronaler Zellen zur Verfügung, wobei das Verfahren das Inkontaktbringen nicht-funktioneller neuronaler Zellen mit einem Regulator neuronaler Zellen umfasst, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Colostrinin, einem Peptidbe standteil von Colostrinin, einem aktiven Analogon eines Peptidbestandteils von Colostrinin und Kombinationen davon, unter Bedingungen, die wirksam sind, um die geschädigten neuronalen Zellen in funktionelle neuronale Zellen umzuwandeln; worin der Peptidbestandteil von Colostrinin ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34; worin das aktive Analogon ein Peptid umfasst, das eine Aminosäuresequenz mit wenigstens 15 % Prolin hat und das wenigstens 70 % Sequenzidentität mit einem oder mehreren Peptidbestandteil(en) von Colostrinin aufweist, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34, und worin die Nichtfunktion das Ergebnis einer Neurodegeneration ist.In a third aspect, the present invention provides an in vitro method of treating damaged neuronal cells, the method comprising contacting non-functional neurona The invention encompasses cells having a neuronal cell regulator selected from the group consisting of colostrinin, a peptide component of colostrinin, an active analog of a peptide component of colostrinin, and combinations thereof, under conditions effective to render the damaged neuronal cells functional to transform neuronal cells; wherein the peptide component of colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34; wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence with at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with one or more peptide component (s) of colostrinin selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NR: 34, and where the non-function is the result of a neurodegeneration.

Ein In-Vitro-Verfahren zum Behandeln geschädigter (d. h. nicht-funktioneller) neuronaler Zellen in einem Patienten umfasst das Verabreichen eines Regulators neuronaler Zellen, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Colostrinin, einem Peptidbestandteil davon, einem Analog davon und Kombinationen davon, an den Patienten, unter Bedingungen, die wirksam sind, um die geschädigten neuronalen Zellen in funktionelle neuronale Zellen umzuwandeln.One In vitro method of treating damaged (i.e., non-functional) Neuronal cells in a patient include administering a Regulators of neuronal cells selected from the group consisting from colostrinin, a peptide component thereof, an analogue thereof and combinations thereof, to the patient, under conditions that are effective to the injured transform neuronal cells into functional neuronal cells.

In einem vierten Aspekt stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung eines Regulators neuronaler Zellen, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Colostrinin, einem Peptidbestandteil von Colostrinin, einem aktiven Analogon eines Peptidbestandteils von Colostrinin und Kombinationen davon; worin der Peptidbestandteil von Colostrinin ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34; worin das aktive Analogon ein Peptid umfasst, das eine Aminosäuresequenz mit wenigstens 15 % Prolin hat und das wenigstens 70 % Sequenzidentität mit einem oder mehreren Peptidbestandteil(en) von Colostrinin aufweist, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34, bei der Herstellung eines Medikamentes zum Behandeln geschädigter neuronaler Zellen in einem Patienten, zur Verfügung.In In a fourth aspect, the present invention provides the use a regulator of neuronal cells selected from the group consisting from colostrinin, a peptide component of colostrinin, one active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations from that; wherein the peptide component of colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34; wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with one or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34, in the manufacture of a medicament for treating damaged neuronal Cells in a patient, available.

In einem fünften Aspekt stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Fördern der In-Vitro-Differenzierung neuronaler Zellen zur Verfügung, wobei das Verfahren das Inkontaktbringen pluripotenter Zellen des Nervensystems mit einem Regulator neuronaler Zellen umfasst, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Colostrinin, einem Peptidbestandteil von Colostrinin, einem aktiven Analogon eines Peptidbestandteils von Colostrinin und Kombinationen davon, unter Bedingungen, die wirksam sind, um die pluripotenten Zellen des Nervensystems in ihrer Morphologie zu verändern, um neuronale Zellen zu bilden; worin der Peptidbestandteil von Colostrinin ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34; und worin das aktive Analogon ein Peptid umfasst, das eine Aminosäuresequenz mit wenigstens 15 % Prolin hat und das wenigstens 70 % Sequenzidentität mit einem oder mehreren Peptidbestandteil(en) von Colostrinin aufweist, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34.In a fifth Aspect, the present invention provides a method for promoting the In-vitro differentiation of neuronal cells is available, wherein the method involves contacting pluripotent cells of the nervous system with a neuronal cell regulator selected from the group consisting of colostrinin, a peptide component Colostrinin, an active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations thereof, under conditions that are effective to treat the pluripotent cells of the nervous system in their To change morphology, to form neuronal cells; wherein the peptide component of colostrinin selected is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34; and wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with one or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34.

In einem sechsten Aspekt stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung eines Regulators neuronaler Zellen, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehen aus Colostrinin, einem Peptidbestandteil von Colostrinin, einem aktiven Analogon eines Peptidbestandteils von Colostrinin und Kombinationen davon; worin der Peptidbestandteil von Colostrinin ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34; und worin das aktive Analogon ein Peptid umfasst, das eine Aminosäuresequenz mit wenigstens 15 % Prolin hat und das wenigstens 70 % Sequenzidentität mit einem oder mehreren Peptidbestandteil(en) von Colostrinin aufweist, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehen aus SEQ ID NR:1 bis SEQ ID NR:34, bei der Herstellung eines Medikamentes zum Fördern der Differenzierung pluripotenter Zellen des Nervensystems, um neuronale Zellen in einem Patienten zu bilden, zur Verfügung.In In a sixth aspect, the present invention provides the use a regulator of neuronal cells selected from the group from colostrinin, a peptide component of colostrinin, one active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations from that; wherein the peptide component of colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34; and in which the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with one or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34, at the preparation of a medicament for promoting the differentiation of pluripotent Cells of the nervous system to neuronal cells in a patient to form available.

Wie hierin verwendet, werden "neural/Nerven-" und "Nerven-ähnlich" hierin synonym verwendet. Derartige Zellen weisen Morphologien auf, die Nervenzellen ähneln. Zum Beispiel einen zentralen Zellkörper mit einem Neuritenfortsatz. Wie hierin verwendet, sind nicht-funktionelle neurale Zellen solche, die keine Information übertragen, z. B. durch Acetylcholin, jedoch morphologisch Nervenzellen ähneln, und funktionelle neurale Zellen sind solche, die Informationen unter Verwendung von Mediatoren, wie z. B. Acetylcholin, übertragen und morphologisch Nervenzellen ähneln.As as used herein, "neural / nerve" and "nerve-like" are used interchangeably herein. Such cells have morphologies that resemble neurons. To the Example, a central cell body with a neurite outgrowth. As used herein, non-functional neural cells those that do not transmit information, e.g. By acetylcholine, however, morphologically resemble neurons, and functional neural cells are those that provide information using mediators, such as As acetylcholine transferred and morphologically resemble nerve cells.

Wie hierin verwendet, bedeutet "ein" ein oder mehrere, so dass Kombinationen der Wirkstoffe (d. h. aktive immunologische Regulatoren oder Promotoren der Differenzierung von Blutzellen) z. B. in den Zusammensetzungen und Verfahren gemäß der Erfindung verwendet werden können. Folglich bezieht sich eine Zusammensetzung, die "ein" Polypeptid enthält, auf eine Zusammensetzung, die ein oder mehrere Polypeptide enthält.As used herein, "a" means one or more, such that combinations of the active ingredients (i.e., active immunological Regulators or promoters of differentiation of blood cells) z. In the compositions and methods of the invention can. Thus, a composition refers to the "a" polypeptide contains to a composition containing one or more polypeptides.

"Aminosäure" wird hierin verwendet, um eine chemische Verbindung mit der allgemeinen Formel: NH₂---CRH---COOH zu bezeichnen, wobei R, die Seitenkette, H oder eine organische Gruppe ist. Wenn R organisch ist, kann R variieren und ist entweder polar oder nicht polar (d. h. hydrophob). Die Aminosäuren gemäß dieser Erfindung können natürlich vorkommen oder synthetisch sein (häufig als nicht-proteinogen bezeichnet)."Amino acid" is used herein to mean a chemical compound having the general formula: NH ₂ --- CRH --- COOH where R is the side chain, H or an organic group. When R is organic, R can vary and is either polar or non-polar (ie hydrophobic). The amino acids according to this invention may be naturally occurring or synthetic (often referred to as non-proteinogenic).

Wie hierin verwendet, ist eine organische Gruppe eine Kohlenwasserstoff-Gruppe, die als aliphatische Gruppe, zyklische Gruppe oder Kombinationen aliphatischer und zyklischer Gruppen klassifiziert wird. Der Begriff "aliphatische Gruppe" bezeichnet eine gesättigte oder ungesättigte lineare oder verzweigte Kohlenwasserstoff-Gruppe. Dieser Begriff wird so verwendet, dass er z. B. Alkyl-, Alkenyl- und Alkynyl-Gruppen umfasst.As used herein, an organic group is a hydrocarbon group, as aliphatic group, cyclic group or combinations aliphatic and cyclic groups is classified. The term "aliphatic group" refers to a saturated or unsaturated linear or branched hydrocarbon group. This term is used so that it z. B. alkyl, alkenyl and alkynyl groups includes.

Der Begriff "zyklische Gruppe" bezeichnet eine Kohlenwasserstoff-Gruppe mit geschlossenem Ring, die als alizyklische Gruppe, aromatische Gruppe oder heterozyklische Gruppe klassifiziert wird. Der Begriff "alizyklische Gruppe" bezeichnet eine zyklische Kohlenwasserstoff-Gruppe, die Eigenschaften aufweist, die denen aliphatischer Gruppen ähneln. Der Begriff "aromatische Gruppe" bezieht sich auf mono- oder polyzyklische aromatische Kohlenwasserstoff-Gruppen. Wie hierin verwendet, kann eine organische Gruppe substituiert oder nicht substituiert sein.Of the Term "cyclic Group " a closed-ring hydrocarbon group that is considered alicyclic Group, aromatic group or heterocyclic group classified becomes. The term "alicyclic Group " a cyclic hydrocarbon group that has properties which are similar to those of aliphatic groups. The term "aromatic Group "refers on mono- or polycyclic aromatic hydrocarbon groups. As used herein, an organic group may be substituted or not be substituted.

Die Begriffe "Polypeptid" und "Peptid" werden hierin synonym verwendet, um ein Polymer von Aminosäuren zu bezeichnen. Diese Begriffe beinhalten keine spezifische Länge eine Polymers von Aminosäuren. Folglich sind z. B. die Begriffe Oligopeptid, Protein und Enzym von der Definition des Polypeptids oder Peptids umfasst, ob unter Verwendung rekombinanter Methoden hergestellt, der chemischen oder enzymatischen Synthese, oder natürlich vorkommend. Dieser Begriff umfasst außerdem Polypeptide, die modifiziert oder derivatisiert worden sind, wie z. B. durch Glycosylierung, Acetylierung, Phosphorylierung und dergleichen.The Terms "polypeptide" and "peptide" are synonymous herein used to designate a polymer of amino acids. These terms do not contain a specific length a polymer of amino acids. consequently are z. For example, the terms oligopeptide, protein and enzyme are defined of the polypeptide or peptide, whether using recombinant Methods, chemical or enzymatic synthesis, or of course occurring. This term also includes polypeptides that are modified or derivatized, such as. By glycosylation, Acetylation, phosphorylation and the like.

Die folgenden Abkürzungen werden in der gesamten Anmeldung verwendet: A = Ala = Alanin T = Thr = Threonin V = Val = Valin C = Cys = Cystein L = Leu = Leucin Y = Tyr = Tyrosin I = Ile = Isoleucin N = Asn = Asparagin P = Pro = Prolin Q = Gln = Glutamin F = Phe = Phenylalanin D = Asp = Asparaginsäure W = Trp = Tryptophan E = Glu = Glutaminsäure M = Met = Methionin K = Lys = Lysin G = Gly = Glycin R = Arg = Arginin S = Ser = Serin H = His = Histidin The following abbreviations are used throughout the application: A = Ala = alanine T = Thr = threonine V = Val = valine C = Cys = cysteine L = Leu = leucine Y = Tyr = tyrosine I = Ile = isoleucine N = Asn = asparagine P = Pro = proline Q = Gln = glutamine F = Phe = phenylalanine D = asp = aspartic acid W = Trp = tryptophan E = Glu = glutamic acid M = Met = methionine K = Lys = lysine G = Gly = glycine R = Arg = arginine S = Ser = serine H = His = histidine

1. Wirkung von NGF und Peptidbestandteilen von Colostrinin auf die Morphologie von PC12-Zellen. 3 × 10⁴-Zellen pro Vertiefung wurden in 24-Well-Platten ausgesät, und 24 Stunden (Std.) später wurden die Zellen mit NGF oder Kolostrum, Colostrinin oder dessen Peptidbestandteilen behandelt, wie in dem Abschnitt Beispiele beschrieben. Sechs Tage nach der Behandlung wurden die Zellen in Formaldehyd fixiert und gefärbt, um die morphologischen Veränderungen der Zellen sichtbar zu machen. Scheinbehandelte Zellen (A), mit NGF behandelte Zellen (B). Die untere Abbildung zeigt die typischen morphologischen Veränderungen von PC12-Zellen nach der Exposition gegenüber SEQ ID NR:1 (C) oder SEQ ID NR:2 (D, D1). 1 , Effect of NGF and peptide components of colostrinin on the morphology of PC12 cells. 3 × 10 ⁴ cells per well were seeded in 24-well plates, and 24 hours (hr) later cells were treated with NGF or colostrum, colostrinin or its peptide components as described in the Examples section. Six days after the treatment, the cells were fixed in formaldehyde and stained to visualize the morphological changes of the cells. Sham-treated cells (A), NGF-treated cells (B). The lower panel shows the typical morphological changes of PC12 cells after exposure to SEQ ID NO: 1 (C) or SEQ ID NO: 2 (D, D1).

Die Erfinder haben festgestellt, dass Colostrinin, wenigstens ein Peptidbestandteil davon und/oder wenigstens ein aktives Analogon davon (z. B. ein Peptid, das eine N-terminale Sequenz aufweist, die einer N-terminalen Sequenz von wenigstens einem Peptidbestandteil von Colostrinin entspricht), als Regulatoren neuronaler Zellen verwendet werden können. Derartige Regulatoren fördern die Differenzierung von Zellen (z. B. von pluripotenten Zellen), so dass es eine Veränderung in der Morphologie gibt, so dass neurale Zellen gebildet werden (die in Geweben und Organen, wie z. B. dem Gehirn oder dem Ganglion vorhanden sind). Dieses kann in vitro oder in vivo auftreten, einschließlich des innerlichen Auftretens in Tieren (einschließlich Säugetieren, wie z. B. Menschen). Diese Regulatoren können außerdem geschädigte (z. B. nicht-funktionelle) neurale Zellen in funktionelle neurale Zellen umwandeln.The Inventors have found that colostrinin, at least one peptide component thereof and / or at least one active analog thereof (eg A peptide having an N-terminal sequence that is N-terminal Corresponds to the sequence of at least one peptide component of colostrinin), can be used as regulators of neuronal cells. such Promote regulators the differentiation of cells (eg of pluripotent cells), so it's a change in the morphology, so that neural cells are formed (in tissues and organs, such as the brain or ganglion available). This may occur in vitro or in vivo, including the internal occurrence in animals (including mammals, such as humans). These regulators can Furthermore damaged (eg non-functional) neural cells in functional neural Convert cells.

Derartige Regulatoren neuraler Zellen werden hierin als "Wirkstoffe/aktive Agenzien (active agents)" bezeichnet. Bedeutsamerweise können derartige Agenzien allein oder in verschiedenen Kombinationen an einen Patienten verabreicht werden (z. B. an Tiere, einschließlich Menschen), als Medikation oder diätetisches (z. B. Nahrungs-)Ergänzungsmittel, in einer Dosis, die ausreicht, um eine Zunahme an Nervenzellen innerhalb des Körpers des Patienten zu bewirken, in einem spezifischen Gewebe oder in einer Sammlung von Geweben (Organen).Such neural cell regulators are referred to herein as "active agents". Significantly, such agents may be used alone or in various combinations of ei administered to patients (eg, to animals, including humans), as a medication, or as a dietary (eg, nutritional) supplement at a dose sufficient to cause an increase in nerve cells within the patient's body; in a specific tissue or collection of tissues (organs).

Der Vorgang der Differenzierung von Zellen im Nervensystem wird durch den Vorgang der Differenzierung und durch Wachstumsfaktoren, einschließlich NGF, reguliert. Zum Beispiel löst die Bindung von NGF an seine Rezeptor-Tyrosin-Kinase, TrkA, verschiedene molekulare Interaktionen aus, einschließlich der Tyrosin-Phosphorylierung von Proteinen sowie die Aktivität des Ras/Raf/MEK/MAPK-Stoffwechselweges (Chao et al., Cell, 68, 995-997(1992); und Marshall et al., Cell, 80, 179-185 (1995)). NGF induziert die Produktion von reaktivem Stickstoffoxid (nitric Oxid, NO), und NO wird für die NGF-induzierte Zytostase und Differenzierung benötigt (Peunova et al., Nature, 375, 68-73 (1995)), was nahe legt, dass freie Radikal-Moleküle eine regulatorische Rolle bei bestimmten Arten der Zelldifferenzierung ausüben könnten.Of the Process of differentiation of cells in the nervous system is going through the process of differentiation and growth factors, including NGF, regulated. For example, solves the binding of NGF to its receptor tyrosine kinase, TrkA, various molecular interactions, including tyrosine phosphorylation of proteins as well as the activity the Ras / Raf / MEK / MAPK pathway (Chao et al., Cell, 68, 995-997 (1992); and Marshall et al., Cell, 80, 179-185 (1995)). NGF induces production of reactive nitric oxide (nitric oxide, NO), and NO is responsible for NGF-induced cytostasis and differentiation needed (Peunova et al., Nature, 375, 68-73 (1995)), suggesting that free radical molecules a regulatory role in certain types of cell differentiation exercise could.

Es ist wichtig, die Nervenzellen-Differenzierung zu fördern (d. h. die Differenzierung von Zellen zu fördern, so dass sie neurale Zellen bilden) und/oder die Umwandlung geschädigter Nervenzellen, soweit ein signifikanter Schaden der Nervenzellen aufgetreten ist, der in einer Vielzahl von Situationen auftreten kann. Die hierin beschriebenen Wirkstoffe können einzeln, in verschiedenen Kombinationen oder kombiniert mit anderen bereits bekannten oder neu erfundenen pharmakologischen Agenzien verwendet werden. Die Förderung von Differenzierungsantworten von Nervenzellen kann man sich z. B. bei der Regeneration, der Reparatur und dem Ersetzen von Zellen, Geweben oder Organen zunutze machen.It is important to promote neuronal differentiation (i. H. to promote the differentiation of cells, making them neural Forming cells) and / or the transformation of damaged nerve cells, as far as Significant damage has occurred to the nerve cells, the can occur in a variety of situations. The ones described herein Active ingredients can individually, in different combinations or combined with others already known or newly invented pharmacological agents used become. The promotion of differentiation responses of nerve cells can be z. In regeneration, repair and replacement of cells, Make use of tissues or organs.

In bevorzugten Ausführungsformen stellt die vorliegende Erfindung Verfahren zum Fördern der Differenzierung neuraler Zellen (d. h. der Differenzierung von Zellen, so dass neurale Zellen gebildet werden) und der Umwandlung nicht-funktioneller neuraler Zellen in funktionelle neurale Zellen zur Verfügung. Ob in vivo oder in vitro, umfassen diese Verfahren die Beobachtung, des Grads der Zunahme von funktionellen Nervenzellen und/oder der Veränderungen in der Morphologie der Zellen, die gebildet werden, unter Verwendung phänotypischer Marker, wie durch Fillmore et al., J. Neurosci. Res., 31, 662-669 (1992) und Levi et al., Mol. Neurobiol., 2, 201-226 (1988) offenbart. Spezifische In-Vitro-Verfahren sind in dem Abschnitt Beispiele beschrieben.In preferred embodiments The present invention provides methods for promoting differentiation of neural Cells (i.e., the differentiation of cells, so that neural cells formed) and the conversion of non-functional neural Cells are available in functional neural cells. Whether in vivo or in vitro, These methods include the observation of the degree of increase of functional nerve cells and / or changes in morphology Cells formed using phenotypic Markers as described by Fillmore et al., J. Neurosci. Res., 31, 662-669 (1992) and Levi et al., Mol. Neurobiol., 2, 201-226 (1988). Specific in vitro methods are described in the Examples section.

Colostrinin ist aus Peptiden zusammengesetzt, wobei das Aggregat ein Molekulargewicht im Bereich von etwa 5,8 bis etwa 26 Kilodalton (kDa) hat, wie mittels Polyacrylamidgelelektrophorese bestimmt wurde. Es weist eine höhere Konzentration an Prolin auf als irgendeine andere Aminosäure. Von Colostrinin des Schafes wurde festgestellt, dass es ein Molekulargewicht von etwa 18 kDa hat und drei nicht-kovalent verbundene Untereinheiten mit einem Molekulargewicht von etwa 6 kDa umfasst und etwa 22 Gew.-% Prolin aufweist. Es wurde außerdem gezeigt, dass Schafscolostrinin die folgende Anzahl von Resten pro Untereinheit aufweist: Lysin – 2; Histidin – 1; Arginin – 0; Asparaginsäure – 2; Threonin – 4; Serin – 3; Glutaminsäure – 6; Prolin – 11; Glycin – 2; Alanin – 0; Valin – 5; Methionin – 2; Isoleucin – 2; Leucin – 6; Tyrosin – 1; Phenylalanin – 3; und Cystein – 0.colostrinin is composed of peptides, the aggregate having a molecular weight in the range of about 5.8 to about 26 kilodaltons (kDa) has, as by Polyacrylamide gel electrophoresis was determined. It has a higher concentration at proline as any other amino acid. From colostrinin of the sheep became found that it has a molecular weight of about 18 kDa and three non-covalently linked subunits of molecular weight of about 6 kDa and has about 22% by weight of proline. It was also shown that sheep colostrinin has the following number of residues per subunit comprising: lysine - 2; Histidine - 1; Arginine - 0; Aspartic acid - 2; Threonine - 4; Serine - 3; Glutamic acid - 6; Proline - 11; Glycine - 2; Alanine - 0; Valine - 5; Methionine - 2; Isoleucine - 2; Leucine - 6; Tyrosine - 1; Phenylalanine - 3; and Cysteine - 0.

Von Colostrinin wurde festgestellt, dass es etliche Peptide im Bereich von 3 Aminosäuren bis 22 Aminosäuren oder mehr umfasst. Diese können durch verschiedene bekannte Methoden erhalten werden, einschließlich der Isolation und Reinigung, welche die Elektrophorese und synthetische Methoden umfassen. Das spezifische Verfahren zum Erhalten von Colostrinin und SEQ ID NR:31 wird in der internationalen Veröffentlichung Nr. WO-A-98/14473 beschrieben. Unter Verwendung von HPLC und der Edelman-Degradation wurden über 30 Peptidbestandteile von Colostrinin identifiziert, die in verschiedene Gruppen eingeteilt werden können: (A), solche mit unbekanntem Vorläufer (precursor); (B), solche, die einen Vorläufer eines β-Casein-Homologen haben; (C), solche, die einen β-Casein-Vorläufer haben; und (D), solche, die einen Annexin-Vorläufer haben. Diese Peptide sind in der internationalen Patentanmeldung PCT/GB00/02128 , eingereicht am 2. Juni 2000, die die Priorität vom 2. Juni 1999 in Anspruch nimmt, beschrieben und können in Übereinstimmung mit dem in dem Abschnitt Beispiele beschriebenen allgemeinen Verfahren synthetisiert werden. Diese Peptide (d. h. Peptidbestandteile von Colostrinin), die aus Colostrinin stammen können oder chemisch synthetisiert werden können, schließen ein: MQPPPLP (SEQ ID NR:1), LQTPQPLLQVMMEPQGD (SEQ ID NR:2), DQPPDVEKPDLQPFQVQS (SEQ ID NR:3), LFFFLPVVNVLP (SEQ ID NR:4), DLEMPVLPVEPFPFV (SEQ ID NR:5), MPQNFYKLPQM (SEQ ID NR:6), VLEMKFPPPPQETVT (SEQ ID NR:7), LKPFPKLKVEVFPFP (SEQ ID NR:8), VVMEV (SEQ ID NR:9), SEQP (SEQ ID NR:10), DKE (SEQ ID NR:11), FPPPK (SEQ ID NR:12), DSQPPV (SEQ ID NR:13), DPPPPQS (SEQ ID NR:14), SEEMP (SEQ ID NR:15), KYKLQPE (SEQ ID NR:16), VLPPNVG (SEQ ID NR:17), VYPFTGPIPN (SEQ ID NR:18), SLPQNILPL (SEQ ID NR:19), TQTPWVPPF (SEQ ID NR:20), LQPEIMGVPKVKETMVPK (SEQ ID NR:21), HKEMPFPKYPVEPFTESQ (SEQ ID NR:22), SLTLTDVEKLHLPLPLVQ (SEQ ID NR:23), SWMHQPP (SEQ ID NR:24), QPLPPTVMFP (SEQ ID NR:25), PQSVLS (SEQ ID NR:26), LSQPKVLPVQKAVPQRDMPIQ (SEQ ID NR:27), AFLLYQE (SEQ ID NR:28), RGPFPILV (SEQ ID NR:29), ATFNRYQDDHGEEILKSL (SEQ ID NR:30), VESYVPLFP (SEQ ID NR:31), FLLYQEPVLGPVR (SEQ ID NR:32), LNF (SEQ ID NR:33) und MHQPPQPLPPTVMFP (SEQ ID NR:34). Diese können wie folgt eingeteilt werden: (A) solche mit unbekanntem Vorläufer schließen SEQ ID NRn: 2, 6, 7, 8, 10, 11, 14 und 33 ein; (B) solche, die einen Vorläufer eines Homologen von β-Casein haben, schließen SEQ ID NRn: 1, 3, 4, 5, 9, 12, 13, 15, 16, 17 und 31 ein; (C) solche, die einen β-Casein-Vorläufer haben, schließen die SEQ ID NRn: 18 (Casein Aminosäuren 74-83), 19 (Casein Aminosäuren 84-92), 20 (Casein Aminosäuren 93-102), 21 (Casein Aminosäuren 103-120), 22 (Casein Aminosäuren 121-138), 23 (Casein Aminosäuren 139-156), 24 (Casein Aminosäuren 157-163), 25 (Casein Aminosäuren 164-173), 26 (Casein Aminosäuren 174-179), 27 (Casein Aminosäuren 180-201), 28 (Casein Aminosäuren 202-208), 29 (Casein Aminosäuren 214-222), 32 (Casein Aminosäuren 203-214), und 34 (Casein Aminosäuren 159-173) ein; und (D) solche, die einen Annexin-Vorläufer haben, schließen die SEQ ID NR:30 (Annexin Aminosäuren 203-220) ein.Colostrinin has been found to encompass a number of peptides ranging from 3 amino acids to 22 amino acids or more. These can be obtained by various known methods, including isolation and purification, which include electrophoresis and synthetic methods. The specific method for obtaining colostrinin and SEQ ID NO: 31 is described in International Publication No. WO-A-98/14473 described. Using HPLC and Edelman degradation, over 30 peptide constituents of colostrinin have been identified which can be categorized into different groups: (A), those with unknown precursor; (B), those having a precursor of a β-casein homolog; (C), those having a β-casein precursor; and (D), those that have an annexin precursor. These peptides are in the international patent application PCT / GB00 / 02128 , filed June 2, 2000, claiming priority from June 2, 1999, and can be synthesized in accordance with the general procedure described in the Examples section. These peptides (ie, peptide constituents of colostrinin), which may be derived from colostrinin or may be chemically synthesized, include: MQPPPLP (SEQ ID NO: 1), LQTPQPLLQVMMEPQGD (SEQ ID NO: 2), DQPPDVEKPDLQPFQVQS (SEQ ID NO: 3), LFFFLPVVNVLP (SEQ ID NO: 4), DLEMPVLPVEPFPFV (SEQ ID NO: 5), MPQNFYKLPQM (SEQ ID NO: 6), VLEMKFPPPPQETVT (SEQ ID NO: 7), LKPFPKLKVEVFPFP (SEQ ID NO: 8), VVMEV (SEQ ID NO : 9), SEQP (SEQ ID NO: 10), DKE (SEQ ID NO: 11), FPPPK (SEQ ID NO: 12), DSQPPV (SEQ ID NO: 13), DPPPPQS (SEQ ID NO: 14), SEEMP (SEQ ID NO: 15), KYKLQPE (SEQ ID NO: 16), VLPPNVG (SEQ ID NO: 17), VYPFTGPIPN (SEQ ID NO: 18), SLPQNILPL (SEQ ID NO: 19), TQTPWVPPF (SEQ ID NO: 18). 20), LQPEIMGVPKVKETMVPK (SEQ ID NO: 21), HKEMPFPKYPVEPFTESQ (SEQ ID NO: 22), SLTLTDVEKLHLPLPLVQ (SEQ ID NO: 23), SWMHQPP (SEQ ID NO: 24), QPLPPTVMFP (SEQ ID NO: 25), PQSVLS ( SEQ ID NR: 26), LSQPKVLPVQKAVPQRDMPIQ (SEQ ID NO: 27), AFLLYQE (SEQ ID NO: 28), RGPFPILV (SEQ ID NO: 29), ATFNRYQDDHGEEILKSL (SEQ ID NO: 30), VESYVPLFP (SEQ ID NO: 31), FLLYQEPVLGPVR (SEQ ID NO: 32), LNF (SEQ ID NO: 33), and MHQPPQPLPPTVMFP (SEQ ID NO: 34). These may be classified as follows: (A) those with unknown precursors include SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 10, 11, 14 and 33; (B) those having a precursor of a β-casein homolog include SEQ ID NOs: 1, 3, 4, 5, 9, 12, 13, 15, 16, 17 and 31; (C) those having a β-casein precursor include SEQ ID NOs: 18 (casein amino acids 74-83), 19 (casein amino acids 84-92), 20 (casein amino acids 93-102), 21 (casein Amino acids 103-120), 22 (casein amino acids 121-138), 23 (casein amino acids 139-156), 24 (casein amino acids 157-163), 25 (casein amino acids 164-173), 26 (casein amino acids 174-179) , 27 (casein amino acids 180-201), 28 (casein amino acids 202-208), 29 (casein amino acids 214-222), 32 (casein amino acids 203-214), and 34 (casein amino acids 159-173); and (D) those having an annexin precursor include SEQ ID NO: 30 (annexin amino acids 203-220).

Eine bevorzugte Gruppe derartiger Peptide umfasst: MQPPPLP (SEQ ID NR:1), LQTPQPLLQVMMEPQGD (SEQ ID NR:2), DQPPDVEKPDLQPFQVQS (SEQ ID NR:3), LFFFLPVVNVLP (SEQ ID NR:4), DLEMPVLPVEPFPFV (SEQ ID NR:5), MPQNFYKLPQM (SEQ ID NR:6), VLEMKFPPPPQETVT (SEQ ID NR:7), LKPFPKLKVEVFPFP (SEQ ID NR:8), und Kombinationen davon.A preferred group of such peptides comprises: MQPPPLP (SEQ ID NO: 1), LQTPQPLLQVMMEPQGD (SEQ ID NO: 2), DQPPDVEKPDLQPFQVQS (SEQ ID NO: 3), LFFFLPVVNVLP (SEQ ID NO: 4), DLEMPVLPVEPFPFV (SEQ ID NO: 5), MPQNFYKLPQM (SEQ ID NO: 6), VLEMKFPPPPQETVT (SEQ ID NO: 7), LKPFPKLKVEVFPFP (SEQ ID NR: 8), and combinations thereof.

Die Polypeptide der SEQ ID NRn:1-34 können als freie Säure vorhanden sein oder sie können an der C-terminalen Carboxylat-Gruppe amidiert sein. Die vorliegende Erfindung umfasst ferner Analoga der Polypeptide der SEQ ID NRn:1-34, die Polypeptide umfassen, die eine strukturelle Ähnlichkeit zu den SEQ ID NRn:1-34 aufweisen. Diese Peptide können außerdem einen Teil eines größeren Peptids bilden. Ein "Analogon" eines Polypeptids umfasst wenigstens einen Teil des Polypeptids, wobei der Teil Deletionen oder Additionen einer oder mehrerer zusammenhängender oder nicht-zusammenhängender Aminosäuren enthält oder ein oder mehrere Aminosäuresubstitution(en) enthält. Ein "Analogon" kann folglich zusätzliche Aminosäuren an einem oder beiden Termini der oben angegebenen Polypeptide umfassen. Substitute für eine Aminosäure in den Polypeptiden gemäß der Erfindung sind vorzugsweise konservative Substitutionen, die ausgewählt sind aus anderen Mitgliedern der Klasse, zu der die Aminosäure gehört. Zum Beispielt ist es auf dem Gebiet der Proteinbiochemie wohlbekannt, dass eine Aminosäure, die zu einer Gruppe von Aminosäuren gehört, die eine bestimmte Größe oder bestimmte Eigenschaft aufweisen (wie z. B. Ladung, Hydrophobizität und Hydrophilizität), im Allgemeinen durch eine andere Aminosäure ersetzt werden kann, ohne die Struktur eines Polypeptids wesentlich zu ändern.The Polypeptides of SEQ ID NOs: 1-34 may be present as the free acid his or her can be be amidated at the C-terminal carboxylate group. The present Invention further encompasses analogs of the polypeptides of SEQ ID NOs: 1-34, the polypeptides have a structural similarity to SEQ ID NOS: 1-34 exhibit. These peptides can Furthermore a part of a larger peptide form. An "analogue" of a polypeptide comprises at least part of the polypeptide, the part being deletions or additions of one or more connected or non-contiguous ones amino acids contains or one or more amino acid substitution (s) contains. An "analogue" can therefore be additional Amino acids on one or both termini of the above-mentioned polypeptides. Substitutes for an amino acid in the polypeptides according to the invention are preferably conservative substitutions selected from other members of the class to which the amino acid belongs. To the For example, it is well known in the field of protein biochemistry, that an amino acid, to a group of amino acids belongs, the one particular size or have certain properties (such as charge, hydrophobicity and hydrophilicity), in general by another amino acid can be replaced without the structure of a polypeptide substantially to change.

Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung werden konservative Aminosäureaustausche als Ergebnis eines Austausches von Aminosäureresten innerhalb einer der folgenden Klassen von Resten definiert: Klasse I: Ala, Gly, Ser, Thr und Pro (die kleine aliphatische Seitenketten und Hydroxylgruppen-Seitenketten darstellen); Kasse II: Cys, Ser, Thr und Tyr (die Seitenketten darstellen, die eine -OH- oder -SH-Gruppe umfassen); Klasse III: Glu, Asp, Asn und Gln (Carboxylgruppen-enthaltende Seitenketten): Klasse IV: His, Arg und Lys (die basische Seitenketten darstellen); Klasse V: Ile, Val, Leu, Phe und Met (die hydrophobe Seitenketten darstellen); und Klasse VI: Phe, Trp, Tyr und His (die aromatische Seitenketten darstellen). Die Klassen umfassen außerdem verwandte Aminosäuren, wie z. B. 3Hyp und 4Hyp in Klasse I; Homocystein in Klasse II; 2-Aminoadipinsäure, 2-Aminopimelinsäure, γ-Carboxyglutaminsäure, β-Carboxyasparaginsäure und die entsprechenden Aminosäureamide in Klasse III; Ornithin, Homoarginin, N-Methyllysin, Dimethyllysin, Trimethyllysin, 2,3-Diaminopropionsäure, 2,4-Diaminobuttersäure, Homoarginin, Sarcosin und Hydroxylysin in Klasse IV; substituierte Phenylalanine, Norleucin, Norvalin, 2-Aminooctansäure, 2-Aminoheptansäure, Statin und β-Valin in Klasse V; und Naphthylalanine, substituierte Phenylalanine, Tetrahydroisochinolin-3-carboxylsäure und halogenierte Tyrosine in Klasse VI.For the purpose In the present invention, conservative amino acid substitutions are made as a result of an exchange of amino acid residues within one of the defines the following classes of radicals: Class I: Ala, Gly, Ser, Thr and Pro (the small aliphatic side chains and hydroxyl group side chains group); Box II: Cys, Ser, Thr and Tyr (which represent side chains, which comprise an -OH or -SH group); Class III: Glu, Asp, Asn and Gln (carboxyl group-containing side chains): Class IV: His, Arg and Lys (representing basic side chains); Class V: Ile, Val, Leu, Phe and Met (which are hydrophobic side chains); and Class VI: Phe, Trp, Tyr and His (the aromatic side chains represent). The classes also include related amino acids, such as z. 3Hyp and 4Hyp in class I; Homocysteine in class II; 2-aminoadipic acid, 2-aminopimelic acid, γ-carboxyglutamic acid, β-carboxyaspartic acid and the corresponding amino acid amides in class III; Ornithine, homoarginine, N-methyllysine, dimethyl lysine, Trimethyl lysine, 2,3-diaminopropionic acid, 2,4-diaminobutyric acid, homoarginine, Sarcosine and hydroxylysine in class IV; substituted phenylalanines, Norleucine, norvaline, 2-aminooctanoic acid, 2-aminoheptanoic acid, statin and β-valine in class V; and naphthylalanines, substituted phenylalanines, tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid and halogenated tyrosines in class VI.

Vorzugsweise umfassen die aktiven Analoga von Colostrinin und dessen Peptidbestandteilen Polypeptide, die eine relativ große Anzahl von Prolinresten aufweisen. Da Prolin keine häufige Aminosäure ist, bedeutet eine "große Anzahl" vorzugsweise, dass ein Polypeptid wenigstens etwa 15 % Prolin (nach Anzahl) und bevorzugter wenigstens etwa 20 % Prolin (nach Anzahl) umfasst. Am bevorzugtesten umfassen die aktiven Analoga mehr Prolinreste als irgendeine andere Aminosäure.Preferably include the active analogues of colostrinin and its peptide components Polypeptides containing a relatively large number of proline residues exhibit. Because proline is not common amino acid Preferably, a "large number" means that a polypeptide is at least about 15% proline by number and more preferably at least about 20% proline (by number). Most preferred For example, the active analogs include more proline residues than any other Amino acid.

Wie oben angegeben, umfassen aktive Analoga von Colostrinin und dessen Peptidbestandteilen Polypeptide, die strukturelle Ähnlichkeiten aufweisen. Die strukturelle Ähnlichkeit wird im Allgemeinen bestimmt, indem die Reste von zwei Aminosäurensequenzen alignt werden, um die Anzahl identischer Aminosäuren über die Länge ihrer Sequenzen zu optimieren; Lücken in einer oder beiden Sequenzen sind bei der Herstellung des Alignments erlaubt, um die Anzahl identischer Aminosäuren zu optimieren, obwohl die Aminosäuren in jeder Sequenz nichtsdestotrotz in ihrer richtigen Reihenfolge bleiben müssen. Vorzugsweise werden zwei Aminosäuresequenzen unter Verwendung des Baste-Programms, Version 2.0.9, des BLAST 2-Suchalgorithmus verwendet, das erhältlich ist unter http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gort/bl2.html. Vorzugsweise werden die Standardwerte für sämtliche BLAST 2-Suchparameter verwendet, einschließlich: matrix = BLOSUM62; open gap penalty = 11, extension gap penalty = 1, gap x_dropoff = 50, expect = 10, wordsize = 3 und angeschalteten Filter. Bei dem Vergleich der beiden Aminosäuresequenzen unter Verwendung des BLAST-Suchalgorithmus wird die strukturelle Ähnlichkeit als "Identität" bezeichnet. Vorzugsweise weist ein aktives Analogon von Colostrinin oder dessen Peptidbestandteilen eine strukturelle Ähnlichkeit mit Colostrinin oder einem oder mehreren seiner Peptidbestandteile (vorzugsweise einem der SEQ ID NRn:1-34) von wenigstens etwa 70 % Identität auf, bevorzugter von etwa 80 % Identität und am bevorzugtesten von etwa 90 % Identität.As noted above, active analogues of colostrinin and its peptide components include polypeptides having structural similarities. The structural similarity is generally determined by aligning the residues of two amino acid sequences to optimize the number of identical amino acids along the length of their sequences; Gaps in either or both sequences are allowed in making the alignment to optimize the number of identical amino acids, although the amino acids in each sequence must nonetheless remain in their proper order. Preferably, two Amino acid sequences using the Baste program, version 2.0.9, of the BLAST 2 search algorithm, available at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gort/bl2.html. Preferably, the default values are used for all BLAST 2 search parameters, including: matrix = BLOSUM62; open gap penalty = 11, extension gap penalty = 1, gap x_dropoff = 50, expect = 10, wordsize = 3 and turned on filter. In comparing the two amino acid sequences using the BLAST search algorithm, the structural similarity is referred to as "identity". Preferably, an active analog of colostrinin or its peptide components has a structural similarity to colostrinin or one or more of its peptide components (preferably one of SEQ ID NOs: 1-34) of at least about 70% identity, more preferably about 80% identity, and most preferably of about 90% identity.

Colostrinin oder jede Kombination seiner Peptidbestandteile oder aktiven Analoga können natürlicherweise gewonnen (vorzugsweise isoliert und gereinigt) werden, wie z. B. durch Extraktion aus Kolostrum, oder sie können unter Verwendung bekannter Peptid-Polymerisierungsmethoden synthetisch konstruiert werden. Zum Beispiel können die Peptide gemäß der Erfindung durch das Feste-Phase-Verfahren unter Verwendung von Standardverfahren auf Grundlage von t-Butyloxycarbonyl (BOC)- oder 9-Fluorenylmethoxy-carbonyl (FMOC)-Schutzgruppen synthetisiert werden. Diese Methodik wird von G. B. Fields et al. in Synthetic Peptides: A User's Guide, W. M. Freeman & Company, New York, NY, S. 77-183 (1992) beschrieben. Darüber hinaus können die Gensequenzen, die für die Colostrininpeptide oder Analoga davon kodieren, durch bekannte Methoden konstruiert werden, wie z. B. Expressionsvektoren oder Plasmide und in geeignete Mikroorganismen transfiziert werden, welche die DNA-Sequenzen exprimieren, wobei das Peptid für die spätere Extraktion aus dem Medium, in dem die Mikroorganismen wachsen, hergestellt wird. Zum Beispiel beschreibt US-Patent Nr. 5,595,887 Verfahren zur Herstellen zahlreicher relativ kleiner Peptide durch Expression eines rekombinanten Genkonstruktes, das für ein Fusionsprotein kodiert, das ein Bindungsprotein und eine oder mehrere Kopien des gewünschten Zielpeptids umfasst. Nach der Expression wird das Fusionsprotein isoliert und unter Verwendung chemischer und/oder enzymatischer Verfahren gespalten, um das gewünschte Zielpeptid herzustellen.Colostrinin or any combination of its peptide components or active analogs can be naturally recovered (preferably isolated and purified), such as e.g. By extraction from colostrum, or they can be synthetically constructed using known peptide polymerization techniques. For example, the peptides according to the invention can be synthesized by the solid-phase method using standard t-butyloxycarbonyl (BOC) or 9-fluorenylmethoxycarbonyl (FMOC) protecting group based methods. This methodology is described by GB Fields et al. in Synthetic Peptides: A User's Guide, WM Freeman & Company, New York, NY, pp. 77-183 (1992). In addition, the gene sequences coding for the colostrinin peptides or analogs thereof can be constructed by known methods, such as. B. expression vectors or plasmids and transfected into suitable microorganisms expressing the DNA sequences, wherein the peptide for later extraction from the medium in which the microorganisms grow, is produced. For example, describes U.S. Patent No. 5,595,887 A method of producing a plurality of relatively small peptides by expression of a recombinant gene construct encoding a fusion protein comprising a binding protein and one or more copies of the desired target peptide. After expression, the fusion protein is isolated and cleaved using chemical and / or enzymatic methods to produce the desired target peptide.

Die in dem Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung verwendeten Peptide können in monovalentem Zustand verwendet werden (d. h. als freies Peptid oder als einzelnes Peptid-Fragment, gekoppelt an ein Trägermolekül). Die Peptide können außerdem als Konjugate verwendet werden, die mehr als ein Peptidfragment (dasselbe oder verschiedene) an ein einziges Trägermolekül gebunden aufweisen. Der Träger kann ein biologisches Trägermolekül sein (z. B. ein Glycosaminoglycan, ein Proteoglycan, ein Albumin oder dergleichen) oder ein synthetisches Polymer (z. B. ein Polyalkylenglycol oder ein synthetischer Chromatografie-Träger). üblicherweise werden Ovalbumin, humanes Serumalbumin, andere Proteine, Polyethylenglycol oder dergleichen als Träger verwendet. Derartige Modifikationen können die scheinbare Affinität erhöhen und/oder die Stabilität des Peptids verändern. Die Anzahl der Peptidfragmente, die mit dem jeweiligen Träger assoziiert sind oder an diesen gebunden sind, kann variieren, jedoch werden unter den Standard-Kopplungsbedingungen üblicherweise zwischen etwa 4 bis 8 Peptide pro Trägermolekül erhalten.The in the method according to the present invention Peptides used in the invention can in a monovalent state (i.e., as a free peptide or as a single peptide fragment coupled to a carrier molecule). The Peptides can Furthermore used as conjugates containing more than one peptide fragment (same or different) bonded to a single carrier molecule. The carrier can be a biological carrier molecule (z. A glycosaminoglycan, a proteoglycan, an albumin or the like) or a synthetic polymer (eg, a polyalkylene glycol or a synthetic chromatography support). usually ovalbumin, human serum albumin, other proteins, polyethylene glycol or the like as a carrier used. Such modifications may increase the apparent affinity and / or the stability of the peptide. The number of peptide fragments associated with each carrier are or are bound to these can vary, however under the standard coupling conditions usually between about 4 to 8 peptides per carrier molecule obtained.

Zum Beispiel kann ein Peptid/Trägermolekül-Konjugat hergestellt werden, indem eine Mischung von Peptiden und Trägermolekülen mit einem Kopplungsagens, wie z. B. Carbodiimid, behandelt wird. Das Kopplungsagens kann eine Carboxylgruppe, entweder auf dem Peptid oder dem Trägermolekül, aktivieren, so dass die Carboxylgruppe mit einem Nukleophil (z. B. einer Amino- oder Hydroxyl-Gruppe) auf dem anderen Teil des Peptid/Trägermoleküls reagieren kann, was zu der kovalenten Bindung des Peptids und des Trägermoleküls führt. Zum Beispiel können Konjugate eines Peptids, das an Ovalbumin gekoppelt ist, hergestellt werden, indem gleiche Mengen eines lyophylisierten Peptids und Ovalbumins in einem kleinen Volumen Wasser gelöst werden. In einem zweiten Gefäß wird 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carboiimidhydrochloride (EDC; die zehnfache Menge des Peptids) in einer kleinen Menge Wasser aufgelöst. Die EDC-Lösung wurde zu der Peptid/Ovalbumin-Mischung dazugegeben und für einige Stunden reagieren gelassen. Die Mischung kann anschließend dialysiert werden (z. B. in Phosphat-gepufferter Salzlösung), um eine gereinigte Lösung des Peptid/Ovalbumin-Konjugats zu erhalten. Peptid/Trägermolekül-Konjugate, die mittels dieses Verfahrens hergestellt wurden, enthalten üblicherweise etwa 4 bis 5 Peptide pro Ovalbuminmolekül.To the Example may be a peptide / carrier molecule conjugate be prepared by mixing a mixture of peptides and carrier molecules with a coupling agent, such. As carbodiimide is treated. The Coupling agent may be a carboxyl group, either on the peptide or the carrier molecule, activate, such that the carboxyl group is reacted with a nucleophile (eg an amino or hydroxyl group) on the other part of the peptide / carrier molecule which leads to the covalent binding of the peptide and the carrier molecule. To the Example can Conjugates of a peptide coupled to ovalbumin by adding equal amounts of a lyophilized peptide and ovalbumin be dissolved in a small volume of water. In a second Vessel becomes 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carboiimide hydrochloride (EDC, ten times the amount of the peptide) in a small amount of water dissolved. The EDC solution was added to the peptide / ovalbumin mixture and for some Hours reacted. The mixture can then be dialyzed (eg in phosphate buffered saline) to give a purified solution of the To obtain peptide / ovalbumin conjugate. Peptide / carrier molecule conjugates which were produced by this method usually contain about 4 to 5 peptides per ovalbumin molecule.

Die vorliegende Erfindung stellt ferner eine Zusammensetzung zur Verfügung, die ein oder mehrere Wirkstoffe gemäß der Erfindung (d. h. Colostrinin, wenigstens ein Peptidbestandteil davon oder ein aktives Analogon davon) und ein oder mehrere Träger enthält, vorzugsweise einen pharmazeutisch annehmbaren Träger. Die Verfahren gemäß der Erfindung umfassen die Verabreichung einer Zusammensetzung gemäß der Erfindung an einen Patienten, das Applizieren auf die Haut eines Patienten, vorzugsweise eines Säugers und bevorzugter eines Menschen, in einer Menge, die wirksam ist, den gewünschten Effekt zu erzielen. Die Wirkstoffe gemäß der vorliegenden Erfindung werden für die enterale Verabreichung (oral, rektal, etc.) oder die parenterale Verabreichung (Injektion, innerliche Pumpe, etc.) formuliert. Die Verabreichung kann durch direkte Injektion in ein Gewebe, interarterielle Injektion, intervenöse Injektion oder andere innerliche Verabreichungsverfahren, wie z. B. durch die Verwendung einer implantierten Pumpe oder über das Inkontaktbringen der Zusammensetzung mit einer Schleimhaut in einem Trägerstoff, der so gestaltet ist, dass er die Transmission der Zusammensetzung durch die Schleimhaut erleichtert, wie z. B. ein Suppositorium, Augentropfen, inhalator oder weitere ähnliche Verabreichungsverfahren oder über die orale Verabreichung in Form eines Sirups, einer Flüssigkeit, einer Pille, Kapsel, mit Gel beschichteten Tablette oder über andere ähnliche orale Verabreichungsverfahren erfolgen. Die Wirkstoffe können in ein Heftpflaster, ein Pflaster, ein Kaugummi und dergleichen eingeschlossen werden oder sie können in eine Kapsel oder in eine bio-erodierbare Matrix für die kontrollierte Freisetzung eingeschlossen werden.The present invention further provides a composition comprising one or more active agents according to the invention (ie colostrinin, at least one peptide component thereof or an active analog thereof) and one or more carriers, preferably a pharmaceutically acceptable carrier. The methods according to the invention comprise administering to a patient a composition according to the invention which is applied to the skin of a patient, preferably a mammal and more preferably a human, in an amount effective to achieve the desired effect. The active ingredients according to the present invention are formulated for enteral administration (oral, rectal, etc.) or parenteral administration (injection, internal pump, etc.). Administration can be by direct Injection into a tissue, interarterial injection, intervening injection or other internal administration methods such as. By the use of an implanted pump or by contacting the composition with a mucosa in a carrier designed to facilitate the transmission of the composition through the mucosa, such as, e.g. As a suppository, eye drops, inhaler or other similar methods of administration or by oral administration in the form of a syrup, a liquid, a pill, capsule, gel-coated tablet or other similar oral administration methods. The active ingredients may be included in a sticking plaster, patch, chewing gum and the like, or may be included in a capsule or in a bioerodible controlled release matrix.

Die Träger für die innerliche Verabreichung können jegliche Träger sein, die üblicherweise verwendet werden, um die innerliche Verabreichung von Zusammensetzungen wie z. B. Plasma, sterile Salzlösung, i.v.-Lösungen oder dergleichen zu erleichtern. Träger für die Verabreichung über Schleimhäute können jegliche auf dem Gebiet wohlbekannte Träger sein. Träger für die orale Verabreichung können jegliche Träger sein, die auf dem Gebiet wohlbekannt sind.The carrier for the internal administration can any carrier be that usually used to improve the internal administration of compositions such as As plasma, sterile saline, i.v. solutions or to facilitate such. carrier for the Administration over mucous can be any carrier well known in the art. Carrier for the oral Administration can any carrier which are well known in the field.

Die Formulierungen können in geeigneter Weise in Einheitsdosierungsformen dargeboten werden und können mit Hilfe jeglicher auf dem Gebiet der Pharmazie wohlbekannten Verfahren hergestellt werden. Sämtliche Verfahren umfassen den Schritt des Zusammenbringens des Wirkstoffes mit einem Träger, der ein oder mehrere Zusatzbestandteile aufweist. Im Allgemeinen werden die Formulierungen hergestellt, indem der Wirkstoff gleichmäßig und eng mit einem flüssigen Träger, einem fein aufgeteilten festen Träger oder mit beiden zusammengebracht wird und anschließend, falls nötig, das Produkt in die gewünschten Formulierungen gebracht wird.The Formulations can suitably presented in unit dosage forms and can using any method well known in the pharmaceutical field getting produced. All Methods include the step of bringing the active ingredient together with a carrier, having one or more additional components. In general The formulations are prepared by adding the active ingredient evenly and tight with a liquid Carrier, a finely divided solid support or combined with both and then, if necessary, the product in the desired Formulations is brought.

Geeignete Formulierungen für die parenterale Verabreichung umfassen zweckmäßigerweise eine sterile wässrige Herstellung des Wirkstoffes oder Dispersionen des sterilen Pulvers des Wirkstoffes, die vorzugsweise isotonisch in Bezug zum Blut des Empfängers sind. Isotonische Mittel, die in die flüssigen Herstellungen eingeschlossen werden können, beinhalten Zucker, Puffer und Natriumchlorid. Lösungen des Wirkstoffes können in Wasser hergestellt werden, optional mit einem nicht toxischen oberflächenaktiven Stoff gemischt. Dispersionen des Wirkstoffes können in Wasser, Ethanol oder Polyol (wie z. B. Glycerin, Propylenglycol, flüssigen Polyethylenglycolen und dergleichen), pflanzlichen Ölen, Glycerolestern und Mischungen davon hergestellt werden. Die endgültige Dosierungsform ist steril, flüssig und unter den Bedingungen der Herstellung und Lagerung stabil. Die notwendige Fluidität kann z. B. erreicht werden, indem Liposomen verwendet werden, indem im Falle von Dispersionen die geeignete Partikelgröße verwendet wird oder indem oberflächenaktive Stoffe verwendet werden. Die Sterilisierung einer flüssigen Herstellung kann durch jedes geeignete Verfahren erreicht werden, das die Bioaktivität des Wirkstoffes erhält, vorzugsweise durch Filtersterilisierung. Bevorzugte Verfahren zur Herstellung von Pudern schließen die Vakuumtrocknung und die Gefriertrocknung der sterilen injizierbaren Lösungen ein. Eine spätere mikrobielle Kontamination kann verhindert werden, indem verschiedene antimikrobielle Mittel verwendet werden, z. B. antibakterielle, antivirale und antifungale Mittel, einschließlich Parabenen, Chlorbutanol, Phenol, Sorbinsäure, Thimerosal und dergleichen. Eine Absorption der Wirkstoffe über eine längere Zeit kann erreicht werden, indem Mittel zur Verzögerung eingeschlossen werden, z. B. Aluminiummonostearat und Gelatine.suitable Formulations for parenteral administration conveniently comprises a sterile aqueous preparation the active ingredient or dispersions of the sterile powder of the active substance, which are preferably isotonic with respect to the blood of the recipient. Isotonic agents included in the liquid preparations can be include sugar, buffer and sodium chloride. Solutions of the active ingredient can be found in Water, optionally with a non-toxic surface-active Mixed fabric. Dispersions of the active ingredient may be in water, ethanol or Polyol (such as glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycols and the like), vegetable oils, Glycerolestern and mixtures thereof are produced. The final dosage form is sterile, liquid and stable under the conditions of manufacture and storage. The necessary fluidity can z. B. can be achieved by using liposomes in the Case of dispersions the appropriate particle size is used or by surfactants Substances are used. Sterilization of a liquid preparation can be achieved by any suitable method that enhances the bioactivity of the drug receives preferably by filter sterilization. Preferred methods for Close production of powders the vacuum drying and the freeze-drying of the sterile injectable solutions one. A later one Microbial contamination can be prevented by different antimicrobial agents are used, e.g. B. antibacterial, antiviral and antifungal agents, including parabens, chlorobutanol, Phenol, sorbic acid, Thimerosal and the like. An absorption of the active ingredients over one longer Time can be achieved by including means for delay, z. As aluminum monostearate and gelatin.

Die Formulierungen der vorliegenden Erfindung, die für die orale Verabreichung geeignet sind, können als einzelne Einheiten dargeboten werden, wie z. B. als Tabletten, Pastillen, Kapseln, Lutschtabletten, Oblaten, Kapseln aus Stärkemasse, die jeweils eine vorbestimmte Menge des Wirkstoffes als Puder oder Granulat enthalten, als Liposomen, welche den Wirkstoff enthalten oder als Lösung oder Suspension in einem flüssigen Liquor oder als nicht-wässrige Flüssigkeit, wie z. B. ein Sirup, Elixier, Emulsion oder Trunk. Die Menge des Wirkstoffes ist so gewählt, dass die Dosierungsmenge wirksam ist, um das gewünschte Ergebnis in dem Individuum zu erreichen.The Formulations of the present invention suitable for oral administration are, can as individual units are presented, such. B. as tablets, lozenges, Capsules, lozenges, wafers, starch capsules, each a predetermined amount of the active ingredient as a powder or Contain granules as liposomes containing the active ingredient or as a solution or suspension in a liquid cerebrospinal fluid or as non-aqueous Liquid, such as As a syrup, elixir, emulsion or trunk. The amount of the active ingredient is chosen that the dosage amount is effective to achieve the desired result in the individual to reach.

Nasenspray-Formulierungen umfassen gereinigte wässrige Lösungen des Wirkstoffes mit Konservierungsmitteln und isotonischen Mitteln. Derartige Formulierungen werden vorzugsweise auf einen pH und eine isotonische Beschaffenheit eingestellt, der/die mit den Nasenschleimhäuten kompatibel ist. Formulierungen für die rektale oder vaginale Verabreichung können als Suppositorium dargeboten werden, mit einem geeigneten Träger, wie z. B. Kakaobutter oder gehärteten Fetten oder gehärteten aliphatischen Carboxylsäuren. Ophthalmische Formulierungen werden mit Hilfe eines ähnlichen Verfahrens wie für das Nasenspray hergestellt, außer dass der pH und die isotonischen Faktoren vorzugsweise so eingestellt werden, dass sie dem des Auges entsprechen. Topische Formulierungen enthalten den Wirkstoff gelöst oder suspendiert in einem oder mehreren Medien, wie z. B. Mineralöl, DMSO, Polyhydroxyalkoholen oder anderen Grundbestandteilen für topische pharmazeutische Formulierungen.Nasal spray formulations comprise purified aqueous solutions of the active ingredient with preservatives and isotonic agents. Such formulations are preferably adjusted to a pH and isotonicity compatible with the nasal mucosa. Formulations for rectal or vaginal administration may be presented as a suppository, with a suitable carrier, such as, e.g. Cocoa butter or hydrogenated fats or hydrogenated aliphatic carboxylic acids. Ophthalmic formulations are prepared by a similar method to the nasal spray, except that the pH and isotonic factors are preferably adjusted to match that of the eye. Topical formulations contain the active ingredient dissolved or suspended in one or more media, such as. As mineral oil, DMSO, polyhydroxy alcohols or other basic ingredients for topical pharmaceutical formulations.

Geeignete Dosierungen der Wirkstoffe können bestimmt werden, indem ihre In-Vitro-Aktivität und die In-Vivo-Aktivitat in Tiermodellen verglichen werden. Verfahren zur Extrapolierung wirksamer Dosierungen in Mäusen und anderen Tieren auf Menschen sind auf dem Gebiet bekannt; siehe z. B. US-Patent Nr. 4,938,949 .Appropriate dosages of the drugs can be determined by comparing their in vitro activity and in vivo activity in animal models. Methods for extrapolating effective dosages into mice and other animals to humans are known in the art; see, for. B. U.S. Patent No. 4,938,949 ,

Die Tabletten, Pastillen, Pillen, Kapseln und dergleichen können außerdem ein oder mehrere der folgenden Stoffe enthalten: ein Bindemittel, wie z. B. das Gummi Tragacanth, Akazie, Maisstärke oder Gelatine; ein Exzipient, wie z. B. Dicalciumphosphat; ein Aufschlussmittel, wie z. B. Maisstärke, Kartoffelstärke, Algininsäure und dergleichen; ein Gleitmittel, wie z. B. Magnesiumstearat; ein Süßungsmittel, wie z. B. Sucrose, Fructose, Lactose oder Aspartam; und einen natürlichen oder künstlichen Aromastoff. Wird die Einheitsdosierungsform als Kapsel verwendet, kann sie weiterhin einen flüssigen Träger enthalten, wie z. B. pflanzliches Öl oder ein Polyethylenglycol. Verschiedene andere Materialien können als Beschichtungsmittel vorhanden sein oder um die physische Form der festen Dosierungseinheitsform zu verändern. Zum Beispiel können Tabletten, Pillen oder Kapseln mit Gelatine, Wachs, Schellack oder Zucker und dergleichen beschichtet werden. Ein Sirup oder Elixier kann ein oder mehrere, ausgewählt aus einem Süßungsmittel, einem Konservierungsmittel, wie z. B. Methyl- oder Propyl-Paraben, einem Mittel, um die Kristallisierung des Zuckers zu verzögern, einem Mittel, um die Löslichkeit eines anderen Inhaltsstoffes zu erhöhen, wie z. B. Polyalkohol, z. B. Glycerin oder Sorbitol, einem Farbstoff und einem Aromastoff, enthalten. Das bei der Herstellung jeglicher Dosierungseinheitsformen verwendete Material ist in den verwendeten Mengen im Wesentlichen nicht toxisch. Der Wirkstoff kann in Herstellungen und Geräten für die anhaltende Freisetzung eingeschlossen werden.The Tablets, troches, pills, capsules and the like may also be used or more of the following: a binder, such as z. Gum tragacanth, acacia, corn starch or gelatin; an excipient, such as Dicalcium phosphate; a disintegrating agent, such as. Corn starch, potato starch, alginic acid and the like; a lubricant, such as. For example, magnesium stearate; a sweetener, such as Sucrose, fructose, lactose or aspartame; and a natural one or artificial Flavoring agent. If the unit dosage form is used as a capsule, Can she continue a liquid carrier included, such as As vegetable oil or a polyethylene glycol. Various other materials can be used as coating agents be present or around the physical form of the solid dosage unit form to change. For example, you can Tablets, pills or capsules with gelatin, wax, shellac or Sugar and the like are coated. A syrup or elixir can one or more, selected from a sweetener, a preservative, such as. Methyl or propyl paraben, a means to delay the crystallization of the sugar, a Means to solubility of another ingredient, such as For example, polyalcohol, z. As glycerol or sorbitol, a dye and a flavoring, contain. The one used in the preparation of any dosage unit forms Material is essentially non-toxic in the amounts used. The active substance can be used in preparations and devices for sustained release be included.

BeispieleExamples

Die Erfindung wird weiterhin mit Bezug auf die folgenden detaillierten Beispiele beschrieben. Die Beispiele sind als Veranschaulichung gedacht und sollten nicht als den Umfang der vorliegenden Erfindung beschränkend aufgefasst werden.The The invention will be further elucidated with reference to the following detailed Examples are described. The examples are for illustration and should not be considered the scope of the present invention restrictive be understood.

MATERIAL UND METHODENMATERIAL AND METHODS

Herstellung der Peptide:

1. Wasche ein bereits beladenes Harz mit DMF (Dimethylformamid), lasse es anschließend vollständig trocken laufen.
2. Gib 10 ml 20 % Piperidin/DMF zu dem Harz. Schüttle für 5 Minuten, lasse es anschließend trocken laufen.
3. Gib weitere 10 ml 20 % Piperidin/DMF dazu. Schüttle für 30 Minuten.
4. Entleere das Reaktionsgefäß und wasche das Harz viermal mit DMF. Wasche es anschließend einmal mit DCM (Dichlormethanol). Überprüfe die Kügelchen unter Verwendung des Ninhydrin-Tests – die Kügelchen sollten blau sein.
5. Der Kopplungsschritt wurde wie folgt durchgeführt: a. Stelle die folgende Lösung her: 1 mmol Fmoc (d. h. Fluorenylmethyloxycarbonyl)aminosäure, 2,1 ml von 0,45 M HBTU/HOBT (1 mmol) (2-(1H-Benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorphosphat(N-Hydroxybenzotriazol-₂O), 348 μl DIEA (2 mmol) (Diisopropylethanlamin); und b. gib die Lösung zu dem Harz, und schüttle es für wenigstens 30 Minuten.
6. Lasse das Reaktionsgefäß trocken laufen und wasche das Harz erneut viermal mit DMF und einmal mit DCM.
7. Führe den Ninhydrin-Test durch: falls positiv (keine Farbe) – fahre fort mit Schritt 2 und führe die Synthese fort; falls negativ (blaue Farbe) – gehe zurück zu Schritt 5 und kopple dieselbe Fmoc-Aminosäure erneut.
8. Nachdem die Synthese abgeschlossen war, wurde das Peptid mit 5 % H₂O, 5 % Phenol, 3 % Thionisol, 3 % EDT (Ethandithiol), 3 % Triisopropylsilan und 81 % TFA für 2 Stunden von dem Harz gespalten.
9. Nach 2 Stunden filtere in kalten MTBE (Methyl-t-butylether). Das präzipitierte Peptid wurde anschließend zweimal mit kaltem MTBE gewaschen und unter Stickstoff getrocknet.
10. Das Molekulargewicht der synthetisierten Peptide wurde mittels Matrix-Assisted Laser Desorption Time-of-Flight Mass Spectroscopy (LDMS) überprüft, und die Reinheit wurde mittels HPLC unter Verwendung einer C-18, 300 Ångstrom, 5 μm Säule überprüft.

Preparation of the peptides:

1. Wash an already loaded resin with DMF (dimethylformamide), then let it run completely dry.
2. Add 10 ml of 20% piperidine / DMF to the resin. Shake for 5 minutes, then let it dry.
3. Add another 10 ml of 20% piperidine / DMF. Shake for 30 minutes.
4. Empty the reaction vessel and wash the resin four times with DMF. Then wash it once with DCM (dichloromethanol). Check the beads using the ninhydrin test - the beads should be blue.
5. The coupling step was performed as follows: a. Make the following solution: 1 mmol Fmoc (ie, fluorenylmethyloxycarbonyl) amino acid, 2.1 mL of 0.45 M HBTU / HOBT (1 mmol) (2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1, 1, 3, 3, -tetramethyluronium hexafluorophosphate (N-hydroxybenzotriazole- ₂ O), 348 μl DIEA (2 mmol) (diisopropylethane-amine) and b., Add the solution to the resin and shake for at least 30 minutes.
6. Run the reaction vessel dry and wash the resin four more times with DMF and once with DCM.
7. Perform the ninhydrin test: if positive (no color) - proceed to step 2 and continue the synthesis; if negative (blue color) - go back to step 5 and pair the same Fmoc amino acid again.
8. After the synthesis was complete, the peptide was cleaved from the resin with 5% H ₂ O, 5% phenol, 3% thionisole, 3% EDT (ethanedithiol), 3% triisopropylsilane, and 81% TFA for 2 hours.
9. After 2 hours, filter in cold MTBE (methyl t-butyl ether). The precipitated peptide was then washed twice with cold MTBE and dried under nitrogen.
10. The molecular weight of the synthesized peptides was checked by matrix-assisted laser desorption time-of-flight mass spectroscopy (LDMS) and the purity was checked by HPLC using a C-18, 300 angstrom, 5 μm column.

Zellen: Die PC12-Zelllinie, die von medullären Phäochromozytom-Zellen abgeleitet ist, wurde verwendet, um die unten beschriebenen Studien durchzuführen. PC12-Zellen wurden von der American Type Culture Collection erhalten und in RPMI-1640, dem 10 % fötales bovines Serum (HYCLONE Inc), Penicillin (100 U/ml) und Streptomycin (100 μg/ml) zugesetzt wurde, gehalten.cells: The PC12 cell line derived from medullary pheochromocytoma cells was used to perform the studies described below. PC12 cells were obtained from the American Type Culture Collection and in RPMI-1640, the 10% fetal bovine serum (HYCLONE Inc), penicillin (100 U / ml) and streptomycin (100 μg / ml) was added, kept.

Verfahren: Um die Wirkung von Kolostrum, Colostrinin und dessen Peptidbestandteilen auf die Zelldifferenzierung zu bestimmen, wurden 3 × 10⁴ sich logarithmisch teilende PC12-Zellen (70 % Konfluenz) in 24-Well-Platten ausgesät, und die Zellen wurden 24 Stunden anheften und wachsen gelassen. Das Serum-enthaltende Medium wurde aspiriert und durch serumfreies RPMI, das die geeigneten Mengen an Antibiotika enthält, ersetzt. In vier parallelen, wurden zunehmende Konzentrationen (0,1, 1, 10 und 100 μg pro ml) an Kolostrum, Colostrinin und dessen Peptidbestandteilen direkt zu den Medien gegeben und bei 37°C inkubiert. Als positive Kontrolle wurde der Nervenwachstumsfaktor (nerve growth factor, NGF) 7S (Gibco-BRL) mit einer Konzentration von 100 ng pro ml verwendet (Chao et al., Cell, 68, 995-997 (1992); und Marshall et al., Cell, 80, 179-185 (1995)). Phorbol-12-myristat-13-acetat (TPA: 10 ng pro ml) wurde als negative Kontrolle verwendet. Acht Stunden später wurde das Medium ausgewechselt, und RPMI-1640 wurde dazu gegeben, das 1 % oder 10 % fötales bovines Serum enthält. Die Kulturen wurden am 2., 4. und 6. Tag nach der Behandlung mikroskopisch untersucht. Sechs Tage nach der Behandlung wurden die Zellen mit Paraformaldehyd (4 %) fixiert und mit 0,01 % Kristallviolett-Lösung gefärbt. Überschüssiger Farbstoff wurde durch Waschen mit Ethanol entfernt. Die endgültige Bewertung wurde unter Verwendung eines Mikroskops (Axiophot2 Zeiss Inc., Deutschland) durchgeführt.Method: To determine the effect of colostrum, colostrinin and its peptide components on cell differentiation, 3 × 10 ⁴ logarithmically dividing PC12 cells (70% confluency) were seeded in 24-well plates and cells were fixed for 24 hours and let grow. The serum-containing medium was aspirated and replaced with serum-free RPMI containing the appropriate amounts of antibiotics. In four parallel, increasing concentrations (0.1, 1, 10 and 100 μg per ml) of colostrum, colostrinin and its peptide components were added directly to the media and incubated at 37 ° C. As a positive control, nerve growth factor (NGF) 7S (Gibco-BRL) at a concentration of 100 ng per ml was used (Chao et al., Cell, 68, 995-997 (1992); and Marshall et al. , Cell, 80, 179-185 (1995)). Phorbol 12-myristate 13-acetate (TPA: 10 ng per ml) was used as a negative control. Eight hours later, the medium was changed and RPMI-1640 was added containing 1% or 10% fetal bovine serum. The cultures were examined microscopically on the 2nd, 4th and 6th day after the treatment. Six days after the treatment, the cells were fixed with paraformaldehyde (4%) and stained with 0.01% crystal violet solution. Excess dye was removed by washing with ethanol. The final evaluation was done using a microscope (Axiophot2 Zeiss Inc., Germany).

ERGEBNISSERESULTS

Nicht behandelte Kontrollzellen zeigten die gewöhnliche abgerundete Morphologie, replizierten weiterhin und erreichten während der 7-tägigen Versuchsdauer 70 % bis 80 % Konfluenz. Die scheinbehandelten Kontrollzellen und TPA-exponierten Zellen zeigten einen schwachen Hintergrund-Differenzierungslevel (weniger als 0,01 %). In dem hierin verwendeten Assaysystem vermittelte NGF (100 ng pro ml) wie zuvor beschrieben (Chao et al., Cell, 68, 995-997 (1992)) einen Zellzyklusarrest. In mehreren Experimenten vermittelte NGF in der Gegenwart von 10 % fötalem bovinem Serum eine Induktion der Zelldifferenzierung, die in 45 ± 11 % der Zellen beobachtet wurde. Wurden die Zellen einer NGF-vermittelten Differenzierung in Gegenwart von 1 % Serum unterzogen, zeigten 5 bis 10 % der Zellen morphologische Veränderungen. Die differenzierten Zellen zeigten eine typische Neuron-ähnliche Morphologie. In parallelen Experimenten wurden neun Peptidbestandteile, Colostrinin und Kolostrum getestet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengefasst.Not treated control cells showed the usual rounded morphology, replicated and reached during the 7-day trial period 70% to 80% confluency. The sham-treated control cells and TPA-exposed cells showed a weak background differentiation level (less than 0.01%). In the assay system used herein, mediated NGF (100 ng per ml) as previously described (Chao et al., Cell, 68, p. 995-997 (1992)) a cell cycle arrest. In several experiments NGF induced induction in the presence of 10% fetal bovine serum Cell differentiation observed in 45 ± 11% of cells has been. Were the cells undergoing NGF-mediated differentiation in the presence of 1% serum, showed 5 to 10% of the cells morphological changes. The differentiated cells showed a typical neuron-like Morphology. In parallel experiments, nine peptide components, colostrinin and colostrum tested. The results are summarized in Table 1.

In der Gegenwart von 1 % fötalem bovinem Serum wurde keine Zelldifferenzierung beobachtet. Diese Daten zeigen, dass einige der Serumfaktoren für die biologische Wirksamkeit dieser Verbindungen benötigt werden. Andererseits induzierten in der Gegenwart von 10 % Serum die Peptidbestandteile, das Colostrinin und auch das Kolostrum die Zelldifferenzierung in PC12-Zellen. Die morphologischen Veränderungen (Fibroblasten-ähnlich, epitheloid, Neuron-ähnlich) sind in 1 gezeigt. Diese Daten stimmen mit der Zytokin-induzierenden Aktivität dieser Peptide überein. Zum Beispiel wurde gezeigt, dass IFN-gamma und der Nervenwachstumsfaktor ähnliche Signal-Transduktionskaskaden induzieren (Peunova et al., Nature, 375, 68-73 (1995)). Tabelle 1. Wirkung von Kolostrum, Colostrinin und dessen Peptidbestandteilen auf die Morphologie (Differenzierung) medullärer Phäochromozytom-Zellen (PC12). Peptid Konzentration Zellenmorphologie μg/ml 1 % FBS 10 % FBS SEQ ID NR:1 100 10 1,0 0,1 – – – – +/– ++ + +/– epitheloid Neuron-ähnlich SEQ ID NR:7 100 10 1,0 0,1 – – – – +/– + + – Fibroblasten-ähnlich Neuron-ähnlich SEQ ID NR:8 100 10 1,0 0,1 – – – – – + ++ – Fibroblasten-ähnlich Neuron-ähnlich SEQ ID NR:3 100 10 1,0 0,1 – – – – + + +/– – Fibroblasten-ähnlich Neuron-ähnlich SEQ ID NR:2 100 10 1,0 0,1 – + – – + ++ ++ +/– Fibroblasten-ähnlich Neuron-ähnlich SEQ ID NR:4 100 10 1,0 0,1 – – – – ++ ++ + – Fibroblasten-ähnlich epitheloid Neuron-ähnlich SEQ ID NR:5 100 10 1,0 0,1 – – – – + +/– – – Fibroblasten-ähnlich epitheloid Neuron-ähnlich SEQ ID NR:6* 100 10 1,0 0,1 – – – – + + +/– – Fibroblasten-ähnlich epitheloid SEQ ID NR:31 100 10 1,0 0,1 NT – – NT +/– – Fibroblasten-ähnlich Neuron-ähnlich Colostrinin 100 10 1,0 0,1 NT + – NT ++ ++ – Fibroblasten-ähnlich Neuron-ähnlich Kolostrum 100 10 1,0 0,1 NT – – – NT ++ ++ +/– Fibroblasten-ähnlich Neuron-ähnlich NGF 0,1 ++++ ++++ Neuron-ähnlich TPA (negative Kontrolle) 0,1 abgerundet Kontrolle abgerundet No cell differentiation was observed in the presence of 1% fetal bovine serum. These data indicate that some of the serum factors are needed for the biological effectiveness of these compounds. On the other hand, in the presence of 10% serum, the peptide components, colostrinin and colostrum induced cell differentiation in PC12 cells. The morphological changes (fibroblast-like, epitheloid, neuron-like) are in 1 shown. These data are consistent with the cytokine-inducing activity of these peptides. For example, IFN-gamma and nerve growth factor have been shown to induce similar signal transduction cascades (Peunova et al., Nature, 375, 68-73 (1995)). Table 1. Effect of colostrum, colostrinin and its peptide components on the morphology (differentiation) of medullary pheochromocytoma cells (PC12). peptide concentration cell morphology ug / ml 1% FBS 10% FBS SEQ ID NO: 1 100 10 1.0 0.1 - - - - +/- ++ + +/- epitheloid neuron-like SEQ ID NO: 7 100 10 1.0 0.1 - - - - +/- + + - Fibroblast-like neuron-like SEQ ID NO: 8 100 10 1.0 0.1 - - - - - + ++ - Fibroblast-like neuron-like SEQ ID NO: 3 100 10 1.0 0.1 - - - - + + +/- - Fibroblast-like neuron-like SEQ ID NO: 2 100 10 1.0 0.1 - + - - + ++ ++ +/- Fibroblast-like neuron-like SEQ ID NO: 4 100 10 1.0 0.1 - - - - ++ ++ + - Fibroblast-like epitheloid neuron-like SEQ ID NO: 5 100 10 1.0 0.1 - - - - + +/- - - Fibroblast-like epitheloid neuron-like SEQ ID NO: 6 * 100 10 1.0 0.1 - - - - + + +/- - Fibroblast-like epitheloid SEQ ID NO: 31 100 10 1.0 0.1 NT - - NT +/- Fibroblast-like neuron-like colostrinin 100 10 1.0 0.1 NT + - NT ++ ++ - Fibroblast-like neuron-like colostrum 100 10 1.0 0.1 NT - - - NT ++ ++ +/- Fibroblast-like neuron-like NGF 0.1 ++++ ++++ Neuron-like TPA (negative control) 0.1 rounded control rounded

NT = Not Tested; - = ≤ 0.01% (background); + = 1 %; ++ = 1-5%; +++ = 6-15%; ++++ => 15%
* Although the cells treated with SEQ ID NO: 6 were included showed no neuron-like cell morphology in the visual examination, will be additional Tests needed to definitely prove that such morpholgic changes did not occur.

Obwohl die Erfindung unter Bezugnahme auf ihre bevorzugten Ausführungsformen offenbart wurde, können die Fachleute auf dem Gebiet beim Lesen dieser Beschreibung Änderungen und Modifikationen erkennen, die durchgeführt werden können.Although the invention has been disclosed with reference to its preferred embodiments, those skilled in the art may, upon reading this description, make changes and modifications know that can be done.

Sequenzprotokoll in freiem TextSequence listing in free text

Die folgenden Sequenzen sind allesamt synthetische Peptidsequenzen. SEQ ID NR:1 MQPPPLP SEQ ID NR:2 LQTPQPLLQVMMEPQGD SEQ ID NR:3 DQPPDVEKPDLQPFQVQS SEQ ID NR:4 LFFFLPVVNVLP SEQ ID NR:5 DLEMPVLPVEPFPFV SEQ ID NR:6 MPQNFYKLPQM SEQ ID NR:7 VLEMKFPPPPQETVT SEQ ID NR:8 LKPFPKLKVEVFPFP SEQ ID NR:9 VVMEV SEQ ID NR:10 SEQP SEQ ID NR:11 DKE SEQ ID NR:12 FPPPK SEQ ID NR:13 DSQPPV SEQ ID NR:14 DPPPPQS SEQ ID NR:15 SEEMP SEQ ID NR:16 KYKLQPE SEQ ID NR:17 VLPPNVG SEQ ID NR:18 VYPFTGPIPN SEQ ID NR:19 SLPQNILPL SEQ ID NR:20 TQTPWVPPF SEQ ID NR:21 LQPEIMGVPKVKETMVPK SEQ ID NR:22 HKEMPFPKYPVEPFTESQ SEQ ID NR:23 SLTLTDVEKLHLPLPLVQ SEQ ID NR:24 SWMHQPP SEQ ID NR:25 QPLPPTVMFP SEQ ID NR:26 PQSVLS SEQ ID NR:27 LSQPKVLPVPQKAVPQRDMPIQ SEQ ID NR:28 AFLLYQE SEQ ID NR:29 RGPFPILV SEQ ID NR:30 ATFNRYQDDHGEEILKSL SEQ ID NR:31 VESYVPLFP SEQ ID NR:32 FLLYQEPVLGPVR SEQ ID NR:33 LNF SEQ ID NR:34 MHQPPQPLPPTVMFP The following sequences are all synthetic peptide sequences. SEQ ID NO: 1 MQPPPLP SEQ ID NO: 2 LQTPQPLLQVMMEPQGD SEQ ID NO: 3 DQPPDVEKPDLQPFQVQS SEQ ID NO: 4 LFFFLPVVNVLP SEQ ID NO: 5 DLEMPVLPVEPFPFV SEQ ID NO: 6 MPQNFYKLPQM SEQ ID NO: 7 VLEMKFPPPPQETVT SEQ ID NO: 8 LKPFPKLKVEVFPFP SEQ ID NO: 9 VVMEV SEQ ID NO: 10 SEQP SEQ ID NO: 11 DKE SEQ ID NO: 12 FPPPK SEQ ID NO: 13 DSQPPV SEQ ID NO: 14 DPPPPQS SEQ ID NO: 15 SEEMP SEQ ID NO: 16 KYKLQPE SEQ ID NO: 17 VLPPNVG SEQ ID NO: 18 VYPFTGPIPN SEQ ID NO: 19 SLPQNILPL SEQ ID NO: 20 TQTPWVPPF SEQ ID NO: 21 LQPEIMGVPKVKETMVPK SEQ ID NO: 22 HKEMPFPKYPVEPFTESQ SEQ ID NO: 23 SLTLTDVEKLHLPLPLVQ SEQ ID NO: 24 SWMHQPP SEQ ID NO: 25 QPLPPTVMFP SEQ ID NO: 26 PQSVLS SEQ ID NO: 27 LSQPKVLPVPQKAVPQRDMPIQ SEQ ID NO: 28 AFLLYQE SEQ ID NO: 29 RGPFPILV SEQ ID NO: 30 ATFNRYQDDHGEEILKSL SEQ ID NO: 31 VESYVPLFP SEQ ID NO: 32 FLLYQEPVLGPVR SEQ ID NO: 33 LNF SEQ ID NO: 34 MHQPPQPLPPTVMFP

Claims

Method for promoting in vitro cell differentiation, the method comprising contacting the cells with a regulator neuronal cells selected from the group consisting from colostrinin, a peptide component of colostrinin, one active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations of which, under conditions that are effective to the morphology of To change cells to form neuronal cells, wherein the peptide component selected from colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34 and wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with a or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34.

The method according to claim 1, wherein the cells in a cell culture, an organ or a Tissues are present.

The method according to claim 1, wherein the cells are mammalian cells are.

The method according to claim 3, wherein the cells are human cells.

The method according to claim 1, wherein the cells are pluripotent cells.

The method according to claim 1, wherein the neuronal cell regulator is a peptide component of Colostrinin is.

The method according to claim 6, wherein the peptide component of colostrinin is selected from the group consisting of MQPPPLP (SEQ ID NO: 1), LQTPQPLLQVMMEPQGD (SEQ ID NO: 2), DQPPDVEKPDLQPFQVQS (SEQ ID NO: 3), LFFFLPVVNVLP (SEQ ID NR: 4), DLEMPVLPVEPFPFV (SEQ ID NO: 5), MPQNFYKLPQM (SEQ ID NO: 6), VLEMKFPPPPQETVT (SEQ ID NO: 7), LKPFPKLKVEVFPFP (SEQ ID NO: 8), VVMEV (SEQ ID NO: 9), SEQP (SEQ ID NO: 10), DKE (SEQ ID NO: 11), FPPPK (SEQ ID NR: 12), DSQPPV (SEQ ID NO: 13), DPPPPQS (SEQ ID NO: 14), SEEMP (SEQ ID NO: 15), KYKLQPE (SEQ ID NO: 16), VLPPNVG (SEQ ID NO: 17), VYPFTGPIPN (SEQ ID NO: 18), SLPQNILPL (SEQ ID NO: 19), TQTPVVVPPF (SEQ ID NO: 20), LQPEIMGVPKVKETMVPK (SEQ ID NO: 21), HKEMPFPKYPVEPFTESQ (SEQ ID NO: 22), SLTLTDVEKLHLPLPLVQ (SEQ ID NO: 23), SWMHQPP (SEQ ID NR: 24), QPLPPTVMFP (SEQ ID NO: 25), PQSVLS (SEQ ID NO: 26), LSQPKVLPVQKAVPQRDMPIQ (SEQ ID NO: 27), AFLLYQE (SEQ ID NO: 28), RGPFPILV (SEQ ID NO: 29), ATFNRYQDDHGEEILKSL (SEQ ID NO: 30), VESYVPLFP (SEQ ID NO: 31), FLLYQEPVLGPVR (SEQ ID NO: 32), LNF (SEQ ID NO: 33) and MHQPPQPLPPTVMFP (SEQ ID NO: 34), as well as combinations thereof.

The method according to claim 7, wherein the peptide component of colostrinin is selected from the group consisting of MQPPPLP (SEQ ID NO: 1), LQTPQPLLQVMMEPQGD (SEQ ID NO: 2), DQPPDVEKPDLQPFQVQS (SEQ ID NO: 3), LFFFLPVVNVLP (SEQ ID NR: 4), DLEMPVLPVEPFPFV (SEQ ID NO: 5), MPQNFYKLPQM (SEQ ID NO: 6), VLEMKFPPPPQETVT (SEQ ID NO: 7), LKPFPKLKVEVFPFP (SEQ ID NO: 8), as well as Combinations of it.

Use of a regulator of neuronal cells, the selected is from the group consisting of colostrinin, a peptide component Colostrinin, an active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations thereof, wherein the peptide component selected from colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34 and wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with one or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34, at the manufacture of a medicament for promoting neuronal cell differentiation in a patient.

The use according to claim 9, wherein the patient a human being is.

The use according to claim 9, wherein the regulator neuronal cells is a peptide component of colostrinin.

The use according to claim 11, wherein the peptide component selected from colostrinin is from the group consisting of MQPPPLP (SEQ ID NO: 1), LQTPQPLLQVMMEPQGD (SEQ ID NO: 2), DQPPDVEKPDLQPFQVQS (SEQ ID NO: 3), LFFFLPVVNVLP (SEQ ID NR: 4), DLEMPVLPVEPFPFV (SEQ ID NO: 5), MPQNFYKLPQM (SEQ ID NO: 6), VLEMKFPPPPQETVT (SEQ ID NO: 7), LKPFPKLKVEVFPFP (SEQ ID NO: 8), VVMEV (SEQ ID NO: 9), SEQP (SEQ ID NO: 10), DKE (SEQ ID NO: 11), FPPPK (SEQ ID NR: 12), DSQPPV (SEQ ID NO: 13), DPPPPQS (SEQ ID NO: 14), SEEMP (SEQ ID NO: 15), KYKLQPE (SEQ ID NO: 16), VLPPNVG (SEQ ID NO: 17), VYPFTGPIPN (SEQ ID NO: 18), SLPQNILPL (SEQ ID NO: 19), TQTPVVVPPF (SEQ ID NO: 20), LQPEIMGVPKVKETMVPK (SEQ ID NO: 21), HKEMPFPKYPVEPFTESQ (SEQ ID NO: 22), SLTLTDVEKLHLPLPLVQ (SEQ ID NO: 23), SWMHQPP (SEQ ID NR: 24), QPLPPTVMFP (SEQ ID NO: 25), PQSVLS (SEQ ID NO: 26), LSQPKVLPVQKAVPQRDMPIQ (SEQ ID NO: 27), AFLLYQE (SEQ ID NO: 28), RGPFPILV (SEQ ID NO: 29), ATFNRYQDDHGEEILKSL (SEQ ID NO: 30), VESYVPLFP (SEQ ID NO: 31), FLLYQEPVLGPVR (SEQ ID NO: 32), LNF (SEQ ID NO: 33) and MHQPPQPLPPTVMFP (SEQ ID NO: 34), as well as combinations thereof.

The use according to claim 12, wherein the peptide component selected from colostrinin is selected from the group consisting of MQPPPLP (SEQ ID NO: 1), LQTPQPLLQVMMEPQGD (SEQ ID NO: 2), DQPPDVEKPDLQPFQVQS (SEQ ID NO: 3), LFFFLPVVNVLP (SEQ ID NR: 4), DLEMPVLPVEPFPFV (SEQ ID NO: 5), MPQNFYKLPQM (SEQ ID NO: 6), VLEMKFPPPPQETVT (SEQ ID NO: 7), LKPFPKLKVEVFPFP (SEQ ID NO: 8), as well as Combinations of it.

In vitro method for treating damaged neuronal Cells, the method comprising contacting non-functional neuronal cells with a neuronal cell regulator, which is selected from the group consisting of colostrinin, a peptide component Colostrinin, an active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations thereof, under conditions that are effective to the injured transform neuronal cells into functional neuronal cells; wherein the peptide component of colostrinin is selected from the group consisting from SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34; wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence of at least 15 % Proline has at least 70% sequence identity with one or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34 and wherein Nonfunction is the result of neurodegeneration.

Use of a regulator of neuronal cells, the selected is from the group consisting of colostrinin, a peptide constituent Colostrinin, an active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations thereof; wherein the peptide component selected from colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34 and wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with a or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34, at the preparation of a medicament for treating damaged neuronal Cells in a patient.

Method of conveying the in vitro differentiation of neuronal cells, wherein the method contacting pluripotent cells of the nervous system with a neuron cell regulator selected from the group consisting of colostrinin, a peptide component Colostrinin, an active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations thereof, under conditions that are effective to treat the pluripotent cells of the nervous system in their To change morphology, to form neuronal cells; wherein the peptide component selected from colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34; and wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with one or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34.

Use of a regulator of neuronal cells, the selected is from the group consisting of colostrinin, a peptide constituent Colostrinin, an active analogue of a peptide component of colostrinin and combinations thereof; wherein the peptide component selected from colostrinin is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34; and wherein the active analog comprises a peptide having an amino acid sequence having at least 15% proline and having at least 70% sequence identity with a or more peptide component (s) of colostrinin, the selected are selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 34, at the preparation of a medicament for promoting the differentiation of pluripotent Cells of the nervous system to neuronal cells in a patient to build.