RU2300384C2 - Вещество, обладающее противовоспалительной, иммуномодулирующей и ранозаживляющей активностью - Google Patents
Вещество, обладающее противовоспалительной, иммуномодулирующей и ранозаживляющей активностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2300384C2 RU2300384C2 RU2005102259/15A RU2005102259A RU2300384C2 RU 2300384 C2 RU2300384 C2 RU 2300384C2 RU 2005102259/15 A RU2005102259/15 A RU 2005102259/15A RU 2005102259 A RU2005102259 A RU 2005102259A RU 2300384 C2 RU2300384 C2 RU 2300384C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- substance
- adp
- inflammatory
- wound
- supernatants
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 21
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 3
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 abstract 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 17
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 12
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 11
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 11
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 9
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 9
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 8
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 7
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 2
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 2
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000001804 debridement Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000000707 layer-by-layer assembly Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N nitrofural Chemical compound NC(=O)N\N=C\C1=CC=C([N+]([O-])=O)O1 IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к фармации и биотехнологии, и может быть использовано для получения лекарственных средств с противовоспалительным, иммуномодулирующим и ранозаживляющим свойствами и касается нового биологически активного вещества, содержащего комплекс гуморальных факторов аллогенных диплоидных фибробластов (АДФ), и полученное механической дезагрегацией донорской ткани, добавлением питательной среды, культивированием во влажной атмосфере с 5% CO2 и отделением супернатанта. Изобретение обеспечивает уменьшение ограничения в применении и удешевление в получении. 2 табл., 10 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к фармации и биотехнологии, и может быть использовано для получения лекарственных средств с противовоспалительным, иммуномодулирующим и ранозаживляющим свойствами на основе культур клеток.
Известен способ получения аллотрансплантата для восстановления кожных покровов путем выращивания и последующего использования культуры аллогенных диплоидных эмбриональных фибробластов (RU 2023424). В данном методе используется культура аллогенных диплоидных фибробластов, получаемая из дермы в постнатальном периоде или из эмбрионов и плодов человека. Доказана высокая эффективность клинического применения указанного способа для лечения ожоговых ран в качестве самостоятельной терапии и для подготовки ран к аутодермопластике (А.А.Алексеев, А.Ю.Яшин. Комбинированная аутодермопластика с трансплантацией культивированных фибробластов при обширных глубоких ожогах: клинические результаты и перспективы // Междунар. симп. «Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи» (30-31 мая 1996 г., г.Тула). - Тула, 1996. - С.1-3; Алексеев, А.А. Современные методы лечения ожогов и ожоговой болезни / А.А.Алексеев // Комбустиология (электронный журнал). - 2000. - №1; 60. Туманов В.П. Морфологический анализ клеточного состава ожоговой раны при трансплантации культивированных аллофибробластов // II Междунар. симп. «Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи» (май 1998 г., г.Саратов). Саратов: Сарат. ун-т, 1998. - С.40-42).
Наиболее близким является решение по использованию в качестве действующего вещества лекарственного средства «Культура клеток диплоидных человека для заместительной терапии» (ФСП 42-0393252302, Регистрационное удостоверение Р №001402/01-2002 от 23.05.2002 г.), которое получают путем механической и ферментативной дезагрегации фрагментов эмбриона человека.
Однако использование трансплантации АДФ в целом и вышеуказанного лекарственного средства, в частности, требует для своего применения определенных условий со стороны участка повреждения, а именно санации раны от бактериальной флоры, купирования активного воспалительного процесса (Теоретические и практические аспекты использования культивированных фибробластов при восстановлении кожных покровов / Д.С.Саркисов, В.Д.Федоров, Е.В.Глущенко и др. // Вести. Рос. АН. - 1994. - №6. - С.6-11). Кроме того, получение достаточного для закрытия обширного участка повреждения количества фибробластов связано со значительными финансовыми затратами, требует дополнительного использования подложек для выращивания клеток, соответствующих определенным требованиям, предъявляемым к биологическим покрытиям, и при этом нетоксичных для клеток и выдерживающих ферментативное воздействие среды в процессе культивирования. Еще одним фактором, ограничивающим возможность использования АДФ и «Культуры клеток диплоидных человека для заместительной терапии», является невозможность их длительного хранения и жесткие ограничения по условиям транспортировки.
В связи с этим задачей изобретения является получение нового биологически активного вещества, содержащего комплекс гуморальных факторов АДФ, для создания на его основе лекарственных средств, а также разработка способа его получения. Вещество должно обладать противовоспалительными, иммуномодулирующими и ранозаживляющими свойствами, иметь меньше ограничений в применении, в условиях хранения и транспортировки и быть дешевле в получении по сравнению с клеточной культурой.
Поставленная задача достигается использованием в качестве указанного вещества супернатанта культуры АДФ, представляющего собой кондиционированную ими среду культивирования. Для получения культуры АДФ используется способ бесферментативной дезагрегации фрагментов донорских тканей.
Изобретение поясняется следующими таблицами и фигурами:
- на табл.1 - показатели функциональной активности нейтрофилов in vitro;
- на табл.2 - показатели продукции цитокинов мононуклеарами периферической крови здоровых доноров медиана, 1-й и 3-й квартили;
- на фиг.1 - влияние супернатантов АДФ на адгезию нейтрофилов к пластику;
- на фиг.2 - влияние супернатантов АДФ на активность миелопероксидазы нейтрофилов in vitro;
- на фиг.3 - влияние супернатантов АДФ на активность кислой фосфатазы нейтрофилов in vitro;
- на фиг.4 - влияние супернатантов АДФ на показатели НСТ-теста нейтрофилов in vitro;
- на фиг.5 - влияние супернатантов АДФ на спонтанную продукцию ФНО-α мононуклеарами периферической крови здоровых доноров;
- на фиг.6 - влияние супернатантов АДФ на ЛПС-стимулированную продукцию ФНО-α мононуклеарами периферической крови здоровых доноров;
- на фиг.7 - влияние супернатантов АДФ на спонтанную продукцию ИЛ-1β мононуклеарами периферической крови здоровых доноров;
- на фиг.8 - влияние супернатантов АДФ на ЛПС-стимулированную продукцию ИЛ-1β мононуклеарами периферической крови здоровых доноров;
- на фиг.9 - влияние супернатантов АДФ на спонтанную продукцию раИЛ-1 мононуклеарами периферической крови здоровых доноров;
- на фиг.10 - влияние супернатантов АДФ на ЛПС-стимулированную продукцию раИЛ-1 мононуклеарами периферической крови здоровых доноров.
На всех фигурах и во всех таблицах: *1 - р<0,05 по сравнению с контролем. Для статобработки использовали дисперсионный анализ и критерий Ньюмена-Кейлса.
Способ осуществляется следующим образом.
Перевиваемые линии АДФ получали оригинальным бесферментативным методом, отличающимся от общепринятого отказом от использования протеолитических ферментов (трипсин, коллагеназа, террилитин и др.). Кусочки тканей (абортный материал, кусочки дермы, костный мозг, легких) подвергали механической дезагрегации до фрагментов размером 0,1-0,2 мм3, добавляли питательную среду 199, дополненную 10% сыворотки крови крупного рогатого скота, - для эмбриональных и фетальных тканей, или питательную среду RPMI 1640, дополненную 20% сыворотки эмбрионов коров, - для постнатального материала. Фрагменты тканей ресуспендировали в указанной среде, вносили в культуральные пластиковые флаконы и культивировали во влажной атмосфере с 5% СО2. В течение 1-3 суток происходила миграция фибробластов из тканевых фрагментов и прикрепление к дну культуральных флаконов. После этого фрагменты тканей со средой из флаконов удаляли, а к прикрепленным клетками добавляли свежую среду, соответствующую степени зрелости их источника. После формирования на дне культуральных флаконов монослоя АДФ отработанную питательную среду удаляли, к клеткам добавляли бессывороточную среду 199 и вновь культивировали в течение 24 ч в стандартных условиях. Через сутки кондиционированную АДФ среду сливали и проверяли в последующих экспериментах на биологическую активность, а клеточный монослой пересевали на новые флаконы со сменой среды и контролем бактериологической чистоты и кариотипа клеток.
Предлагаемый способ бесферментативного получения культур клеток позволяет обеспечить минимальное повреждение клеток и снизить экономические затраты на начальном этапе.
Биологическая активность вещества иллюстрирована в нижеприведенных экспериментах.
Пример 1. Влияние супернатантов АДФ на функциональную активность Нф периферической крови здоровых доноров in vitro.
В качестве супернатантов использовали кондиционированную в течение 24 ч эмбриональными (СЭФ) или зрелыми легочными (СЗФЛ) фибробластами среду 199. МНК и нейтрофилы (Нф) получали из венозной крови здоровых добровольцев общепринятым методом выделения на двойном градиенте плотности фиколл-гипак 1,077 и 1,114. После отмывки Нф ресуспендировали в бессывороточной среде 199 и вносили в лунки 96-луночного планшета в конечной концентрации 2×105/лунку. К МНК добавляли суточный СЭФ и СЗФЛ в конечной концентрации 25%, в контрольные лунки добавляли аналогичный объем бессывороточной среды 199. Клетки инкубировали в течение 2 ч в термостате при +37°С, по окончании инкубации трижды отмывали от неприкрепившихся клеток подогретым до +37°С фосфатно-солевым буфером. Дальнейшие эксперименты проводили по методикам, описанным Р.М.Хаитовым и соавт. (Экологическая иммунология / Р.М.Хаитов, Б.В.Пинегин, Х.И.Истамов. - М.: ВНИРО, 1995. - 219 с.).
Показатели активности нейтрофилов представлены в табл. 1 и на фиг.1-4.
Пример 2. Влияние супернатантов АДФ на продукцию ФНО-α и ИЛ-1β мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови здоровых доноров in vitro.
После отмывки МНК ресуспендировали в полной питательной среде RPMI-1640 с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки и вносили в лунки 24-луночного планшета в конечной концентрации 1×106/лунку. К МНК добавляли суточный СЭФ и СЗФЛ в конечной концентрации 25%, в контрольные лунки добавляли аналогичный объем бессывороточной среды 199. В часть лунок вносили ЛПС в концентрации 10 мкг/лунку. Клетки инкубировали в течение суток в СО2-инкубаторе и по окончании инкубации оценивали концентрацию ФНОα и ИЛ-1β в твердофазном ИФА с использованием тест-систем фирмы «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург, Россия). Полученные результаты представлены в табл.1 и на фиг.1-4. Как видно из фиг.5 и 6 и табл.2, СЭФ и СЗФЛ статистически значимо стимулируют спонтанную продукцию ФНО-α, однако данный эффект не имеет клинического значения, поскольку концентрации ФНО-α сопоставимы с нормальным содержанием данного цитокина в сыворотке крови здорового человека. Аналогичный, статистически значимый эффект СЭФ и СЗФЛ оказывают и на спонтанную продукцию ИЛ-1β (табл.2 и фиг.7 и 8). При стимуляции МНК с помощью ЛПС отмечено значительное статистически значимое ингибирующее влияние обоих супернатантов на продукции провоспалительных цитокинов ФНО-α и ИЛ-1β.
Пример 3. Влияние супернатантов АДФ на продукцию рецепторного антагониста ИЛ-1 (раИЛ-1) МНК периферической крови здоровых доноров in vitro.
Общая схема опытов идентична описанной для исследования продукции ФНО-α и ИЛ-1β, за исключением тест-систем для определения концентрации раИЛ-1 («Цитокин», Санкт-Петербург, Россия). Полученные результаты представлены в табл. 2 и на фиг.9 и 10. Видно, что супернатанты АДФ статистически значимо усиливали как спонтанную, так и ЛПС-стимулированную продукцию МНК доноров этого важного противовоспалительного цитокина.
Таким образом, супернатанты АДФ in vitro оказывали противовоспалительное влияние, выражавшееся в подавлении продукции провоспалительных цитокинов аллогенными мононуклеарными клетками в условиях стимуляции липополисахаридом, подавление адгезионной способности аллогенных нейтрофилов. При этом отмечается стимуляция продукции раИЛ-1 мононуклеарами, особенно в условиях индукции липополисахаридом, и повышение активности факторов бактерицидности нейтрофилов.
Пример 4. Влияние супернатантов АДФ на сроки эпителизации экспериментальной ожоговой раны (ЭОР) у крыс.
Под эфирным наркозом 10 крысам линии Вистар раскаленным до 200°С электродом площадью 1 см2 путем контактного воздействия в течение 2 с наносили 3 экспериментальных ожоговых раны (ЭОР) на область спины. На каждую из ран накладывали стерильную салфетку, пропитанную раствором 0,05% фурацилина (контроль), СЭФ или СЗФЛ, которые фиксировали лейкопластырем. На шею крысы фиксировали пластиковый воротник и каждую крысу помещали в отдельную клетку для исключения самостоятельного и взаимного повреждения наклеек. Под эфирным наркозом ежедневно в течение 21 дня производили перевязку со сменой салфеток с супернатантами АДФ и раствором антисептика. При формировании струпа на ране во время перевязки его тангенциально иссекали. За указанный период отмечена полная эпителизация ЭОР, леченных СЭФ, - у 8 крыс, леченных СЗФЛ - у 7 крыс, леченных раствором фурацилина - у 2 крыс.
| Таб.1. | ||||||||||||
| Показатели (пкг/мл) | Адгезия (n=32) | Миелопероксидаза (n=26) | НСТ-тест (n=26) | Кислая фосфатаза (n=26) | ||||||||
| спонтанная | зимозан-стим. | спонтанная | зимозан-стим. | спонтанная | зимозанстим. | |||||||
| Контроль | 93,8±1,1 | 95,5±1,1 | 93,0±1,8 | 91,9±1,8 | 95,1±1,3 | 96,6±0,9 | 95,7±1,3 | |||||
| СЭФ | 66,6±4,7*1 | 111,6±9,2 | 86,9±9,0 | 190,1±20,7*1 | 101,7±5,6 | 119,0±9,6 | 109,4±6,2 | |||||
| СЗФЛ | 73,8±5,4*1 | 114,7±10,7 | 82,1±5,6 | 178,6±19,9*1 | 102,6±5,1 | 100,0±6,9 | 104,6±6,3 | |||||
| Таб. 2. | ||||||||||||
| Показатели (пкг/мл) | ФНО-α (n=32) | ИЛ-1β (n=32) | раИЛ-1 (n=32) | |||||||||
| спонтанная | ЛПС-стим. | спонтанная | ЛПС-стим. | спонтанная | ЛПС-стим. | |||||||
| Контроль | 19,3±12,8 | 1051,9±175,8 | 9,5±9,2 | 2614,6±551,1 | 102,5±68,2 | 1225,9±358,9 | ||||||
| СЭФ | 29,9±8,8 | 523,8±113,9*1 | 49,9±30,0*1 | 1567,9±321,7*1 | 322,7±106,4*1 | 2174,0±319,4*1 | ||||||
| СЗФЛ | 23,1±8,1 | 548,6±92,9*1 | 50,8±24,2*1 | 1729,7±391,6*1 | 284,6±127,4*1 | 1970,9±404,5*1 | ||||||
Claims (1)
- Вещество, обладающее противовоспалительной, иммуномодулирующей и ранозаживляющей активностью, характеризующееся тем, что содержит супернатант культуры аллогенных диплоидных фибробластов (АДФ), включающий комплекс гуморальных факторов, продуцируемых АДФ, и полученное механической дезагрегацией донорской ткани, добавлением питательной среды, культивированием во влажной атмосфере с 5% CO2 и отделением супернатанта.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005102259/15A RU2300384C2 (ru) | 2005-01-31 | 2005-01-31 | Вещество, обладающее противовоспалительной, иммуномодулирующей и ранозаживляющей активностью |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005102259/15A RU2300384C2 (ru) | 2005-01-31 | 2005-01-31 | Вещество, обладающее противовоспалительной, иммуномодулирующей и ранозаживляющей активностью |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005102259A RU2005102259A (ru) | 2006-07-10 |
| RU2300384C2 true RU2300384C2 (ru) | 2007-06-10 |
Family
ID=36830393
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005102259/15A RU2300384C2 (ru) | 2005-01-31 | 2005-01-31 | Вещество, обладающее противовоспалительной, иммуномодулирующей и ранозаживляющей активностью |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2300384C2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2369398C2 (ru) * | 2007-09-10 | 2009-10-10 | Юрий Евгеньевич Бурда | Средство с ранозаживляющей активностью на основе супернатанта человеческих фибробластов |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2023424C1 (ru) * | 1993-01-13 | 1994-11-30 | Научно-производственный центр трансплантации и культивирования тканей | Способ лечения раны |
| RU2160112C1 (ru) * | 2000-04-10 | 2000-12-10 | Сухих Геннадий Тихонович | Способ приготовления клеточного трансплантата из фетальных тканей |
| RU2205010C2 (ru) * | 1997-06-03 | 2003-05-27 | Матаеси Девелопмент Ко., Лтд. | Природные противоопухолевые или противовирусные вещества и их применение |
| RU2231986C1 (ru) * | 2002-12-15 | 2004-07-10 | Вольхина Валентина Николаевна | Способ хирургического лечения воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта |
| JP2004339107A (ja) * | 2003-05-14 | 2004-12-02 | Applied Cell Biotechnologies Inc | 細胞外マトリックス濃縮液を利用した皮膚疾患治療剤及び皮膚疾患治療用被覆材。 |
-
2005
- 2005-01-31 RU RU2005102259/15A patent/RU2300384C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2023424C1 (ru) * | 1993-01-13 | 1994-11-30 | Научно-производственный центр трансплантации и культивирования тканей | Способ лечения раны |
| RU2205010C2 (ru) * | 1997-06-03 | 2003-05-27 | Матаеси Девелопмент Ко., Лтд. | Природные противоопухолевые или противовирусные вещества и их применение |
| RU2160112C1 (ru) * | 2000-04-10 | 2000-12-10 | Сухих Геннадий Тихонович | Способ приготовления клеточного трансплантата из фетальных тканей |
| RU2231986C1 (ru) * | 2002-12-15 | 2004-07-10 | Вольхина Валентина Николаевна | Способ хирургического лечения воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта |
| JP2004339107A (ja) * | 2003-05-14 | 2004-12-02 | Applied Cell Biotechnologies Inc | 細胞外マトリックス濃縮液を利用した皮膚疾患治療剤及び皮膚疾患治療用被覆材。 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2369398C2 (ru) * | 2007-09-10 | 2009-10-10 | Юрий Евгеньевич Бурда | Средство с ранозаживляющей активностью на основе супернатанта человеческих фибробластов |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2005102259A (ru) | 2006-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9078903B2 (en) | Compositions for the treatment of skin conditions, disorders or diseases and methods of making and using the same | |
| KR101495281B1 (ko) | 피부 재생 또는 상처 치유를 위한 중간엽 줄기세포-하이드로겔-생분해성 또는 중간엽 줄기세포-하이드로겔-비분해성 지지체 조성물 | |
| JPH07501214A (ja) | 新規なケラチノサイト培養物，その調製方法及び創傷治療物質としてのその用途 | |
| CN116555175A (zh) | 一种细胞修复蛋白提取物及其制备方法和其应用 | |
| Abdel-Sayed et al. | Cell therapies for skin regeneration: An overview of 40 years of experience in burn units | |
| KR101293762B1 (ko) | 창상치유능력이 향상된 줄기세포 배양액 및 그의 제조방법 | |
| US20220218868A1 (en) | Novel polysaccharide-based hydrogel scaffolds for wound care | |
| CN113876611A (zh) | 唾液酸在制备促进胶原蛋白生成的制剂中的应用 | |
| US20200078492A1 (en) | Process for obtaining a functional dermal substitute of decellurized amniotic membrane from the placenta combination with keratinocytes and its use as an agent for tissue regeneration of the skin | |
| WO1999001034A1 (en) | Method for producing new hair growth | |
| US20010006813A1 (en) | Methods and compositions for the preparation of cell transplants | |
| KR20170089924A (ko) | 줄기세포 재료 및 그 제조방법 | |
| NZ336619A (en) | A method of biological control with a spirulina compound useful for treating skin defects | |
| KR20150142287A (ko) | 식물추출물을 포함하는 줄기세포 증식 촉진용 배지 조성물 | |
| CN104971382A (zh) | 一种用无血清和牛垂体提取物培养液构建的创口贴式人工活性组织及其构建方法 | |
| CN107349220A (zh) | 一种包含成纤维细胞外泌体的制剂及其用途 | |
| RU2300384C2 (ru) | Вещество, обладающее противовоспалительной, иммуномодулирующей и ранозаживляющей активностью | |
| RU2372922C1 (ru) | Способ лечения глубокого ожога кожи | |
| Liu et al. | Bioreactor microcarrier cell culture system (Bio-MCCS) for large-scale production of autologous melanocytes | |
| US20210220518A1 (en) | Producing method of the collagen-laminin matrix for healing ulcers, burns and wounds of a human skin | |
| Villeneuve et al. | A novel culturing and grafting system for the treatment of leg ulcers | |
| DE102006038252A1 (de) | Zubereitung mit marinem Kollagen zur Proteinasehemmung | |
| RU2646793C1 (ru) | Средство для собак, обладающее регенеративной активностью | |
| Pramono et al. | Immense addition of royal jelly apis mellifera (ceiba pentandra) insufficient to increase fibroblast preputium proliferation | |
| RU2250108C2 (ru) | Способ местного лечения эрозивно-язвенных поражений кожи и слизистых |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070201 |