[go: up one dir, main page]

RU2361612C1 - Immunoglobulin marker base for immunobiological preparations and way of its reception, suppositories and ointment for prevention and therapy of bacteriemic and virus diseases - Google Patents

Immunoglobulin marker base for immunobiological preparations and way of its reception, suppositories and ointment for prevention and therapy of bacteriemic and virus diseases Download PDF

Info

Publication number
RU2361612C1
RU2361612C1 RU2007147321/15A RU2007147321A RU2361612C1 RU 2361612 C1 RU2361612 C1 RU 2361612C1 RU 2007147321/15 A RU2007147321/15 A RU 2007147321/15A RU 2007147321 A RU2007147321 A RU 2007147321A RU 2361612 C1 RU2361612 C1 RU 2361612C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
immunoglobulin
igg
base
precipitate
igm
Prior art date
Application number
RU2007147321/15A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Владимир Андрианович Алешкин (RU)
Владимир Андрианович Алешкин
Станислав Степанович Афанасьев (RU)
Станислав Степанович Афанасьев
Лидия Ивановна Новикова (RU)
Лидия Ивановна Новикова
Ирина Валериановна Борисова (RU)
Ирина Валериановна Борисова
Александр Валерьянович Волков (RU)
Александр Валерьянович Волков
Марина Михайловна Зуева (RU)
Марина Михайловна Зуева
Ольга Михайловна Кострова (RU)
Ольга Михайловна Кострова
Original Assignee
Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека filed Critical Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority to RU2007147321/15A priority Critical patent/RU2361612C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2361612C1 publication Critical patent/RU2361612C1/en

Links

Images

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: group of inventions concerns medicine, in particular, to immunology, and can be used for immunotherapy and immunologic prophylaxis of bacteriemic and virus diseases. The base for immunobiological preparations is offered; it contains IgG, IgM and IgA, and also subclasses IgG, IgG1, IgG2, TgG3 and IgG4, thus the content of immunoglobulins makes: IgG 70-80%, IgM 10-15% and IgA 10-15%. The way of reception of immunoglobulin marker base for immunobiological preparations is offered. Suppositories and ointment for prevention and therapy of bacteriemic and virus diseases are offered.
EFFECT: development of an economic and effective way of processing of a deposit A (II+III according Cohn), allowing to receive highly effective paste for immunoglobulin marker preparations.
4 cl, 5 ex, 2 tbl, 2 dwg

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики бактериальных и вирусных заболеваний.The invention relates to medicine, in particular to immunology, and can be used for immunotherapy and immunoprophylaxis of bacterial and viral diseases.

Иммуноглобулиновые препараты (в жидком виде в ампулах для инъекций, в лиофилизированном виде для инъекций и для введения per os) более 60 лет применяются в медицине как в качестве самостоятельных средств профилактики и лечения ряда заболеваний инфекционной и неинфекционной этиологии, так и в комплексной терапии.Immunoglobulin preparations (in liquid form in ampoules for injection, in lyophilized form for injection and for per os administration) have been used in medicine for more than 60 years both as independent means of prevention and treatment of a number of diseases of infectious and non-infectious etiology, and in complex therapy.

Эти препараты содержат в основном IgG-иммуноглобулин, а иммуноглобулины классов М и А в процессе производства препарата переходят в балластные осадки, в частности в осадок Б (III фракция Кона при спиртовом фракционировании сыворотки донорской крови), и удаляются.These preparations contain mainly IgG immunoglobulin, and class M and A immunoglobulins during the production of the drug go into ballast sediments, in particular sediment B (Cohn III fraction with alcohol fractionation of donor blood serum), and are removed.

Препараты, содержащие несколько классов иммуноглобулинов, а именно IgA, IgM и IgG, представляют собой концентраты антител, опсонизирующая, нейтрализующая и комплементсвязывающая активность которых является основным фактором их клинической эффективности.Preparations containing several classes of immunoglobulins, namely IgA, IgM and IgG, are antibody concentrates whose opsonizing, neutralizing and complementing activity is the main factor in their clinical effectiveness.

В настоящее время в мире выпускаются и применяются в клинике иммуноглобулиновые препараты, обогащенные IgM и IgA, для профилактики и лечения тяжелых бактериальных инфекций, сепсиса, иммунодефицитных заболеваний. Такие препараты могут вводиться как внутривенно, так и энтерально (per os и ректально).Currently, immunoglobulin preparations enriched with IgM and IgA are produced and used in the clinic in the world for the prevention and treatment of severe bacterial infections, sepsis, and immunodeficiency diseases. Such drugs can be administered both intravenously and enterally (per os and rectally).

В России таким препаратом является комплексный иммуноглобулиновый препарат, КИП, который содержит иммуноглобулины трех основных классов - IgA (15-25%), IgM (15-25%), IgG (50-75%) (RU 2084229). Препарат обладает повышенными титрами антител против ряда энтеробактерий и вирусов. КИП получают из осадка Б (III фракция Кона).In Russia, such a drug is a complex immunoglobulin preparation, CIP, which contains immunoglobulins of the three main classes - IgA (15-25%), IgM (15-25%), IgG (50-75%) (RU 2084229). The drug has elevated titers of antibodies against a number of enterobacteria and viruses. Instrumentation is obtained from sediment B (Cohn III fraction).

Данное техническое решение является наиболее близким техническим решением в отношении иммуноглобулиновой основы для иммунобиологических препаратов.This technical solution is the closest technical solution in relation to the immunoglobulin base for immunobiological preparations.

Однако в настоящее время возникло много объективных причин, не позволяющих производителям КИП получать вовремя и в необходимых количествах основное сырье - осадок Б. Основная причина - резкое сокращение производства иммуноглобулина человека нормального вообще и, в том числе, по традиционной схеме Кона с использованием фракционирования этанолом при минусовых температурах и, как следствие, сокращение объема осадка Б, в который переходят IgM- и IgA-иммуноглобулины.However, at present, many objective reasons have arisen that do not allow instrumentation manufacturers to receive on time and in the required quantities the main raw material - sediment B. The main reason is a sharp decrease in the production of normal human immunoglobulin in general and, in particular, according to the traditional Kohn scheme using ethanol fractionation subzero temperatures and, as a result, a decrease in the volume of sediment B into which IgM and IgA immunoglobulins pass.

С другой стороны, многие предприятия и СПК по собственным регламентам производства обрабатывают плазму и сыворотку крови доноров нестандартными и оригинальными способами без выделения осадка Б. Остро встает проблема использования для выделения IgM- и IgA-иммуноглобулинов других осадков, в частности осадка А (II+III фракции по Кону). Эта фракция остается в виде пасты после отделения центрифугата при получении альбумина.On the other hand, many enterprises and SECs, according to their own production procedures, process donor plasma and blood serum using non-standard and original methods without precipitating B. There is an acute problem of using other precipitates for the isolation of IgM and IgA immunoglobulins, in particular precipitate A (II + III fractions according to Cohn). This fraction remains in the form of a paste after separation of the centrifugate upon receipt of albumin.

Кроме того, недостатком КИП является наличие в его составе всего двух подклассов IgG - иммуноглобулинов IgG1 и IgG3, что существенно уменьшает биологическую активность препарата. Данный препарат недостаточно эффективен в отношении ряда заболеваний, особенно вирусной этиологии.In addition, the lack of instrumentation is the presence in its composition of only two subclasses of IgG - immunoglobulins IgG1 and IgG3, which significantly reduces the biological activity of the drug. This drug is not effective against a number of diseases, especially viral etiology.

Наиболее близким техническим решением в отношении способа получения иммуноглобулиновой основы является способ получения иммуноглобулинового препарата (патент RU 2084229 С1 20.07.1997). В прототипе иммуноглобулиновый препарат получают из осадка Б (III фракция по Кону) путем экстракции в десятикратном объеме дистиллированной воды, добавления хлороформа и хлорида натрия в конечной концентрации 0,9% по объему и осаждения иммуноглобулиновой фракции в присутствии 12% полиэтиленгликоля.The closest technical solution in relation to a method for producing an immunoglobulin base is a method for producing an immunoglobulin preparation (patent RU 2084229 C1 07.20.1997). In the prototype, an immunoglobulin preparation is obtained from sediment B (Cohn III fraction) by extraction in a ten-fold volume of distilled water, adding chloroform and sodium chloride in a final concentration of 0.9% by volume, and precipitating the immunoglobulin fraction in the presence of 12% polyethylene glycol.

Недостатком способа является то обстоятельство, что он пригоден для получения иммуноглобулинов только из осадка Б (III фракция по Кону) и не годится без введения дополнительных приемов при использовании в качестве источника сырья осадка А (II+III фракция по Кону), отличающегося по содержанию примесных белков, в частности фибриногена.The disadvantage of this method is the fact that it is suitable for the production of immunoglobulins only from sediment B (III Cohn fraction) and is not suitable without the introduction of additional methods when using sediment A (II + III Cohn fraction) as a source of raw material, which differs in the content of impurities proteins, in particular fibrinogen.

Известен также способ обработки осадка А (II+III фракции Кона) (Н.А.Пономарева, С.А.Нечаева. Гаммаглобулин. Изд-во «Медицина», М. 1965 г., с.82).There is also a method of treating sediment A (II + III Kohn fraction) (N. A. Ponomareva, S. A. Nechaev. Gammaglobulin. Publishing House "Medicine", M. 1965, p. 82).

Экстракцию осадка А, полученного после обработки сыворотки крови этанолом в концентрации 8% при pH 7,0 и t° (-3°C) (см. фиг.1), осуществляют следующим образом: на 10 л чистого 50%-ного этанола добавляют 90 л H2O и 850 г NaCl. Таким образом, растворение осадка A проводят с помощью 5% этанола и 0,9% хлорида натрия. Далее, увеличивая концентрацию спирта с 17 до 25%, измеряя pH и ионную силу, получают целевой продукт - пасту B. Паста B подвергается растворению, стерилизующей фильтрации и розливу в ампулы в виде коммерческого препарата иммуноглобулина нормального человека.The extraction of precipitate A obtained after treatment of blood serum with ethanol at a concentration of 8% at pH 7.0 and t ° (-3 ° C) (see figure 1) is carried out as follows: add 10 ml of pure 50% ethanol 90 L of H 2 O and 850 g of NaCl. Thus, the dissolution of precipitate A is carried out using 5% ethanol and 0.9% sodium chloride. Further, increasing the alcohol concentration from 17 to 25%, measuring pH and ionic strength, we obtain the target product - paste B. Paste B is subjected to dissolution, sterilizing filtration and filling into ampoules in the form of a commercial immunoglobulin preparation of a normal person.

Недостатком способа является обработка этанолом белковых фракций, ведущая к денатурации белка. Спиртовое фракционирование на холоду утяжеляет условия труда персонала.The disadvantage of this method is the processing of protein fractions with ethanol, leading to protein denaturation. Alcohol fractionation in the cold aggravates the working conditions of personnel.

Целевой продукт содержит один класс иммуноглобулинов - IgG - и обладает ограниченной клинической эффективностью.The target product contains one class of immunoglobulins - IgG - and has limited clinical efficacy.

Наиболее близким техническим решением в отношении суппозитория будет суппозиторий на основе иммуноглобулинового препарата, содержащий сырой осадок полуфабриката иммуноглобулинового препарата с повышенным содержанием IgA и IgM в эффективном количестве (5-25 мас.%), эмульгатор (1-10 мас.%), кондитерский жир (50-55 мас.%), парафин (10-15 мас.%) (Патент РФ №2136314, 16.09.98).The closest technical solution for a suppository will be an immunoglobulin-based suppository containing a crude precipitate of a semi-finished immunoglobulin preparation with an increased content of IgA and IgM in an effective amount (5-25 wt.%), Emulsifier (1-10 wt.%), Confectionery fat (50-55 wt.%), Paraffin (10-15 wt.%) (RF Patent No. 2136314, 09.16.98).

Недостатком этого суппозитория является то, что в своей основе он содержит иммуноглобулиновый препарат, как это следует из описания, полученный из осадка Б, и не содержит полного набора подклассов IgG.The disadvantage of this suppository is that it basically contains an immunoglobulin preparation, as follows from the description obtained from precipitate B, and does not contain a complete set of IgG subclasses.

Наиболее близким техническим решением в отношении мази будет мазь на основе иммуноглобулинового препарата, содержащая сырой осадок полуфабриката иммуноглобулинового препарата с повышенным содержанием IgA и IgM в эффективном количестве (5-25 мас.%), кондитерский жир (50-55 мас.%), ланолин (10-15 мас.%), вазелин (10-15 мас.%) (RU 2116083).The closest technical solution for ointment will be an ointment based on an immunoglobulin preparation containing a crude precipitate of a semi-finished product of an immunoglobulin preparation with an increased content of IgA and IgM in an effective amount (5-25 wt.%), Confectionery fat (50-55 wt.%), Lanolin (10-15 wt.%), Petroleum jelly (10-15 wt.%) (RU 2116083).

Недостатком этой мази является то, что в своей основе она содержит иммуноглобулиновый препарат, как это следует из описания, полученный из осадка Б, и не содержит полного набора подклассов IgG.The disadvantage of this ointment is that it basically contains an immunoglobulin preparation, as follows from the description obtained from precipitate B, and does not contain a complete set of IgG subclasses.

Задачей изобретения является повышение биологической активности целевого продукта, повышение клинической эффективности и расширение ассортимента как готовой продукции, так и сырья.The objective of the invention is to increase the biological activity of the target product, increasing clinical efficiency and expanding the range of both finished products and raw materials.

Это достигается путем получения иммуноглобулиновой основы для иммунобиологических препаратов, которая содержит подклассы IgG (IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4) при содержании иммуноглобулинов IgG (70-80%), IgM (10-15%) и IgA (10-15%), и способа ее получения путем экстракции осадка A в дистиллированной воде, центрифугирования и дальнейшей последовательной обработки суспензии осадка A хлороформом, а также CaCl2 и NaCl в молярном соотношении 1:20-1:40, для удаления липидов и фибрина, центрифугирования, обработки центрифугата полиэтиленгликолем (ПЭГ) с м.м. 6000 для образования осадка иммуноглобулинов и центрифугирования для отделения целевого продукта - пасты A, которая содержит иммуноглобулины G, M и A в соотношении 70-80%, 10-15% и 10-15%, при этом содержит следующие подклассы IgG: IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 (см. фиг.2).This is achieved by obtaining an immunoglobulin base for immunobiological preparations, which contains subclasses of IgG (IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4) with the content of immunoglobulins IgG (70-80%), IgM (10-15%) and IgA (10-15%), and a method for its preparation by extraction of precipitate A in distilled water, centrifugation and subsequent sequential treatment of the suspension of precipitate A with chloroform, as well as CaCl 2 and NaCl in a molar ratio of 1: 20-1: 40, to remove lipids and fibrin, centrifugation, and processing the centrifugate with polyethylene glycol (PEG) with m.m. 6000 for the formation of a precipitate of immunoglobulins and centrifugation to separate the target product - paste A, which contains immunoglobulins G, M and A in the ratio of 70-80%, 10-15% and 10-15%, while it contains the following IgG subclasses: IgG1, IgG2 , IgG3 and IgG4 (see figure 2).

Паста А содержит следующие подклассы IgG-иммуноглобулина: IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 (паста Б - IgG1 и IgG3). Соотношение иммуноглобулинов составляет: IgG 70-80%, IgM 10-15%, IgA 10-15%. Титр антител к сальмонеллам (в РПГА) в 5%-ном белковом растворе, приготовленном из пасты A, - 1:320-1:640. Титр антител к ротавирусу (в РТНГА) - 1:320-1:640.Paste A contains the following subclasses of IgG immunoglobulin: IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 (paste B - IgG1 and IgG3). The ratio of immunoglobulins is: IgG 70-80%, IgM 10-15%, IgA 10-15%. The titer of antibodies to salmonella (in RPGA) in a 5% protein solution prepared from paste A is 1: 320-1: 640. The titer of antibodies to rotavirus (in RTNGA) - 1: 320-1: 640.

Анализ полученного целевого продукта (паста A) позволяет выявить преимущества заявленного способа перед аналогичным продуктом, получаемым из осадка Б, который и является сырьем для препарата КИП.Analysis of the obtained target product (paste A) allows you to identify the advantages of the claimed method over a similar product obtained from sediment B, which is the raw material for the drug KIP.

Также заявляются суппозитории, которые получают путем добавления к иммуноглобулиновой основе, содержащей стерилизованные иммуноглобулины IgG, IgM и IgA в эффективном количестве, эмульгатора, кондитерского жира, парафина.Suppositories are also claimed which are prepared by adding to an immunoglobulin base containing sterilized immunoglobulins IgG, IgM and IgA in an effective amount of an emulsifier, confectionery fat, paraffin.

Заявляется мазь, которую получают путем добавления к иммуноглобулиновой основе, содержащей стерилизованные иммуноглобулины в эффективном количестве, кондитерского жира, эмульгатора, вазелина и ланолина.The ointment, which is obtained by adding to the immunoglobulin base containing sterilized immunoglobulins in an effective amount of confectionery fat, emulsifier, vaseline and lanolin, is claimed.

Таким образом, заявляется несколько объектов изобретения, которые объединены единым изобретательским замыслом и направлены для достижения одного технического результата.Thus, several objects of the invention are claimed, which are united by a single inventive concept and aimed to achieve one technical result.

Известно, что основной первичной функцией антитела является связывание с антигеном, однако чаще взаимодействие антитела с антигеном остается безрезультатным пока антитела не осуществят свои вторичные эффекторные функции.It is known that the main primary function of an antibody is binding to an antigen, however, more often the interaction of an antibody with an antigen remains inconclusive until the antibodies fulfill their secondary effector functions.

IgG состоит из четырех подклассов, различающихся аффинностью к антигенам, способностью активировать комплемент, длительностью полувыведения из организма и концентрацией в крови (см. таблицу 1).IgG consists of four subclasses that differ in affinity for antigens, ability to activate complement, half-life from the body and concentration in the blood (see table 1).

Таблица 1.Table 1. Свойства подклассов IgG человека.Properties of subclasses of human IgG. Подклассы IgGIgG subclasses IgG1IgG1 IgG2IgG2 IgG3IgG3 IgG4IgG4 Длительность полувыведенияElimination half-life 25 суток25 days 25 суток25 days 7,5 суток7.5 days 25 суток25 days Аффинность к белковым антигенамProtein Antigen Affinity ++++++ ++ ++++++ ++++ Аффинность к полисахаридамPolysaccharide Affinity ++ ++++++ ++ ++ Активация комплементаComplement activation ++++++ ++ ++++ -- Антителозависимая клеточная цитотоксичностьAntibody-dependent cell cytotoxicity ++++++ -- ++++++ -- Распределение в плазме у взрослыхDistribution in plasma in adults 65%65% 25%25% 4%four% 6%6%

Один из наиболее важных эффекторных механизмов действия подклассов IgG1 и IgG3 состоит в активации системы комплемента по классическому пути. Связываясь с C1q, субкомпонентом первого компонента системы комплемента, IgG1 и IgG3 способны активировать каскад протеолитических реакций, осуществляемых системой комплемента. Менее эффективен в этом отношении IgG2, a IgG4 не активирует комплемент. К эффекторным функциям иммуноглобулинов относится также их избирательное взаимодействие с различными типами клеток при участии специфических рецепторов клеточной поверхности (см. таблицу 2).One of the most important effector mechanisms of action of the IgG1 and IgG3 subclasses is the activation of the complement system along the classical pathway. By binding to C1q, a subcomponent of the first component of the complement system, IgG1 and IgG3 are able to activate a cascade of proteolytic reactions carried out by the complement system. IgG2 is less effective in this regard, and IgG4 does not activate complement. The effector functions of immunoglobulins also include their selective interaction with various types of cells with the participation of specific cell surface receptors (see table 2).

Таблица 2.Table 2. Отдельные примеры связывания иммуноглобулина G человека с клеточными рецепторами.Specific examples of the binding of human immunoglobulin G to cell receptors. РецепторReceptor Подкласс иммуноглобулина GImmunoglobulin G subclass IgG1IgG1 IgG2IgG2 IgG3IgG3 IgG4IgG4 Мононуклеарные клеткиMononuclear cells ++++ ±± ++++++ ++++ НейтрофилыNeutrophils ++ -- ++ --

Из таблицы 2 видно, что наиболее активно связываются с мононуклеарными клетками подклассы IgG1, IgG3 и IgG4, а с нейтрофилами - IgG1 и IgG3.Table 2 shows that subclasses IgG1, IgG3 and IgG4 are most actively associated with mononuclear cells, and IgG1 and IgG3 with neutrophils.

Подклассы IgG1 и IgG3 обладают антительной активностью в отношении белковых антигенов, в том числе фрагментов вирусов и эндотоксинов грамположительных микроорганизмов, а подкласс IgG2 более специфичен в отношении полисахаридных антигенов.The IgG1 and IgG3 subclasses have antibody activity against protein antigens, including fragments of viruses and endotoxins of gram-positive microorganisms, and the IgG2 subclass is more specific for polysaccharide antigens.

Наличие подклассов IgG - IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 - в одном биологическом продукте (осадке А) благодаря синергизму их действия обеспечивает повышенную эффективность биологического действия IgG-содержащих иммуноглобулиновых препаратов.The presence of IgG subclasses - IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 - in one biological product (sediment A) due to the synergy of their action provides increased efficiency of the biological action of IgG-containing immunoglobulin preparations.

Техническим результатом заявляемого изобретения являются разработанные более экономичные и эффективные способы обработки осадка A (II+III по Кону), позволяющие получить высокоэффективную иммуноглобулиновую основу для иммунобиологических препаратов.The technical result of the claimed invention are developed more economical and effective methods for processing sediment A (II + III according to Cohn), allowing to obtain a highly effective immunoglobulin base for immunobiological preparations.

Целевой продукт обладает повышенной антивирусной активностью в отношении ротавирусов по сравнению с КИП.The target product has increased antiviral activity against rotaviruses in comparison with instrumentation.

Пример 1.Example 1

1 кг осадка А экстрагируют в десятикратном объеме охлажденной дистиллированной воды (10 л) при постоянном перемешивании, выдерживают в течение ночи (18 ч) при температуре 4-6°С и рН 5,5±0,3, а затем центрифугируют в течение 1 ч при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок удаляют, в полученном экстракте определяют содержание белка, которое равно 2%. Объем полученного экстракта составляет 10600 мл. К экстракту осадка А добавляют 530 мл охлажденного до 4-6°С хлороформа (5% по объему) и смесь энергично встряхивают в течение 2 ч при температуре 4-6°С. К смеси экстракта с хлороформом добавляют CaCl2 (6,2 г) и NaCl (94,6 г) в молярном соотношении 1:30, встряхивают в течение 10 мин и центрифугируют при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением до получения прозрачного центрифугата. Осадок удаляют. Объем центрифугата составляет 8000 мл, содержание белка - 0,4%. К 8000 мл центрифугата для концентрирования иммуноглобулинов добавляют 50%-ный раствор полиэтиленгликоля м.м. 6000 (около 2500 мл) до конечной концентрации 12% при постоянном перемешивании. Осадок иммуноглобулинов отделяют путем декантации и центрифугирования в течение 15-30 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением.1 kg of precipitate A is extracted in a tenfold volume of chilled distilled water (10 L) with constant stirring, kept overnight (18 h) at a temperature of 4-6 ° C and a pH of 5.5 ± 0.3, and then centrifuged for 1 h at 3000 rpm in a centrifuge with cooling. The precipitate is removed, in the obtained extract, the protein content is determined, which is 2%. The volume of extract obtained is 10,600 ml. To the extract of precipitate A, 530 ml of chloroform cooled to 4-6 ° C (5% by volume) was added and the mixture was vigorously shaken for 2 hours at a temperature of 4-6 ° C. CaCl 2 (6.2 g) and NaCl (94.6 g) were added to the mixture of the extract with chloroform in a molar ratio of 1:30, shaken for 10 minutes and centrifuged at 3000 rpm in a centrifuge with cooling until a clear centrifuge was obtained. The precipitate is removed. The volume of the centrifugate is 8000 ml, the protein content is 0.4%. To 8000 ml of a centrifugate for the concentration of immunoglobulins add a 50% solution of polyethylene glycol m.m. 6000 (about 2500 ml) to a final concentration of 12% with constant stirring. The precipitate of immunoglobulins is separated by decantation and centrifugation for 15-30 minutes at 3000 rpm in a centrifuge with cooling.

Вес осадка (паста А) 500 г.Sediment weight (paste A) 500 g.

Соотношение иммуноглобулинов составляет - IgG: 72%, IgM: 14% и IgA: 14%.The ratio of immunoglobulins is - IgG: 72%, IgM: 14% and IgA: 14%.

Титр антител к сальмонеллам (в РПГА) в 5%-ном белковом растворе, полученном из пасты А, - 1:640.The titer of antibodies to salmonella (in RPGA) in a 5% protein solution obtained from paste A is 1: 640.

Титр антител к ротавирусу (в РТНГА) - 1:320.The titer of antibodies to rotavirus (in RTNGA) - 1: 320.

Пример 2.Example 2

Иммуноглобулиновую основу, полученную по примеру, в полиэтиленовых пакетах помещают в пластмассовые банки и подвергают гамма-стерилизации на гамма-установке РЦ-1000М при мощности поглощенной дозы 5 кГр/ч в течение 4 ч (суммарная доза 20 кГр) (RU 2255766).The immunoglobulin base obtained according to the example in plastic bags is placed in plastic jars and subjected to gamma sterilization on an RC-1000M gamma unit at an absorbed dose rate of 5 kGy / h for 4 hours (total dose of 20 kGy) (RU 2255766).

Контроль стерильности: после облучения Иммуноглобулиновую основу высевают на среды Эндо, Сабуро, среду с мочевиной, кровяной агар, а также смотрят количество колониеобразующих микробов-сапрофитов на мясопептонном агаре (МПА). На всех использованных средах рост микроорганизмов и грибов отсутствует.Sterility control: after irradiation, the Immunoglobulin base is plated on Endo, Saburo, urea, blood agar, and the number of colony forming microbial saprophytes on meat peptone agar (MPA) is also monitored. On all used media, the growth of microorganisms and fungi is absent.

Контроль сохранения биологической активности: до облучения титр антител в РПГА в 5%-ном белковом растворе, полученном из пасты, в отношении сальмонелл составлял 1:640, после облучения титр не изменился. Титр антител к ротавирусу также не изменился после облучения (1:320) в РТНГА.Control of preservation of biological activity: before irradiation, the titer of antibodies in RPHA in a 5% protein solution obtained from paste in relation to salmonella was 1: 640; after irradiation, the titer did not change. The titer of antibodies to rotavirus also did not change after irradiation (1: 320) in RTNGA.

Пример 3.Example 3

К стерильной иммуноглобулиновой основе, полученной, как описано в примере 1, добавляют эмульгатор, кондитерский жир, парафин для получения суппозиториев. Примерный состав суппозитория: иммуноглобулиновая основа в виде влажной пасты - 25 мас.%, эмульгатор - 10 мас.%, кондитерский жир - 55 мас.%, парафин - 10 мас.%.To a sterile immunoglobulin base prepared as described in Example 1, an emulsifier, confectionery fat, and paraffin are added to form suppositories. The approximate composition of the suppository: immunoglobulin base in the form of a wet paste - 25 wt.%, Emulsifier - 10 wt.%, Confectionery fat - 55 wt.%, Paraffin - 10 wt.%.

Пример 4.Example 4

К стерильной иммуноглобулиновой основе, полученной, как описано в примере 1, добавляют кондитерский жир, эмульгатор, ланолин, вазелин для получения мази. Примерный состав: иммуноглобулиновая основа в виде влажной пасты - 15 мас.%, кондитерский жир - 55 мас.%, ланолин - 10 мас.%, вазелин - 10 мас.%, эмульгатор - 10 мас.%.To a sterile immunoglobulin base prepared as described in Example 1, confectionery fat, emulsifier, lanolin, petrolatum are added to form an ointment. Approximate composition: immunoglobulin base in the form of a wet paste - 15 wt.%, Confectionery fat - 55 wt.%, Lanolin - 10 wt.%, Petrolatum - 10 wt.%, Emulsifier - 10 wt.%.

Пример 5.Example 5

Ротавирусные антигены были обнаружены у 13 из 19 детей раннего возраста в детском стационаре. При лечении с целью достижения санирующего эффекта дети получали КИП и бифидумбактерин (в возрастных дозировках). Повторное обследование свидетельствовало об упорных выделениях ротавируса у 10 детей. Длительное и упорное выделение ротавируса послужило основанием для проведения лечения с использованием суппозиториев с КИПфероном 1 (КИП получен из осадка Б) и КИПфероном 2 (КИП получен из осадка А). Были взяты 2 группы по 5 детей. Свечи назначались ректально по 1 свече 1 раз в день в течение 10 дней. Контрольное вирусологическое обследование, проведенное после окончания курса, выявило полную элиминацию вируса у 5 детей, получавших КИП из осадка А, и лишь у 3-х детей, получавших КИП из осадка Б.Rotavirus antigens were found in 13 out of 19 young children in a children's hospital. During treatment, in order to achieve a sanitizing effect, children received instrumentation and bifidumbacterin (in age dosages). Repeated examination showed persistent secretions of rotavirus in 10 children. Prolonged and persistent isolation of rotavirus served as the basis for treatment using suppositories with KIPferon 1 (KIP was obtained from sediment B) and KIPferon 2 (KIP was obtained from sediment A). 2 groups of 5 children were taken. Suppositories were administered rectally, 1 suppository 1 time per day for 10 days. A control virological examination conducted after the end of the course revealed complete elimination of the virus in 5 children receiving CIP from sediment A, and only 3 children receiving CIP from sediment B.

Препараты хорошо переносились больными. Токсических побочных эффектов при клиническом наблюдении не зарегистрировано. Обследование в динамике состава периферической крови и мочи не выявило каких-либо отрицательных влияний ректального введения препарата. Прибавка массы тела за период наблюдения соответствовала средним возрастным показателям.The drugs were well tolerated by patients. Toxic side effects during clinical observation have not been reported. Examination of the dynamics of the composition of peripheral blood and urine did not reveal any negative effects of rectal administration of the drug. The weight gain during the observation period corresponded to the average age indices.

Источники информацииInformation sources

1. RU (11) 2051054 (13) C1.1. RU (11) 2051054 (13) C1.

2. RU (11) 2110279 (13) С1.2. RU (11) 2110279 (13) C1.

3. RU (11) 2060034 (13) C1.3. RU (11) 2060034 (13) C1.

4. RU (11) 93032577 (13) A.4. RU (11) 93032577 (13) A.

5. RU (11) 2073525 (13) C1.5. RU (11) 2073525 (13) C1.

6. RU (11) 2084229 (13) C1.6. RU (11) 2084229 (13) C1.

7. RU (11) 94025645 (11) A1.7. RU (11) 94025645 (11) A1.

8. RU (11) 95119174 (13) A.8. RU (11) 95119174 (13) A.

9. RU (11) 2255766 (13) C2.9. RU (11) 2255766 (13) C2.

10. H.A.Пономарева, С.А.Нечаева. Гаммаглобулин. Изд-во «Медицина», М., 1965, с.82.10. H.A. Ponomareva, S. A. Nechaev. Gammaglobulin. Publishing House "Medicine", M., 1965, p. 82.

11. А.Ройт, Дж.Бростофф, Д.Мейл. Иммунология. Изд-во «Мир», М., 2000, с.99-107.11. A.Royt, J. Brostoff, D. Mail. Immunology. Publishing house "Mir", M., 2000, pp. 99-107.

Claims (4)

1. Иммуноглобулиновая основа для иммунобиологических препаратов, содержащая IgG, IgM и IgA, отличающаяся тем, что содержит подклассы IgG: IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, при этом содержание иммуноглобулинов составляет: IgG 70-80%, IgM 10-15% и IgA 10-15%.1. The immunoglobulin base for immunobiological preparations containing IgG, IgM and IgA, characterized in that it contains subclasses of IgG: IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4, while the content of immunoglobulins is: IgG 70-80%, IgM 10-15% and IgA 10-15%. 2. Способ получения иммуноглобулиновой основы для иммунобиологических препаратов, предусматривающий экстракцию осадка, полученного после обработки сыворотки крови этанолом, десятикратным объемом дистиллированной воды, хлороформом и раствором хлорида натрия, встряхивания, центрифугирования, обработку центрифугата 12% полиэтиленгликолем м.м. 6000, с последующим отделением осадка, содержащего целевой продукт, и его стерилизацией, отличающийся тем, что экстрагируют дистиллированной водой спиртовой осадок А (фракции II+III по Кону), затем выдерживают 18 ч при температуре 4-6°С и рН 5,5±0,3, с дальнейшим центрифугированием 1 ч при 3000 об/мин, сначала обрабатывают центрифугат хлороформом 5% по объему с встряхиванием 2 ч при температуре 4-6°С, затем CaCl2 и NaCl в молярном соотношении 1:20-1:40 с встряхиванием 5-15 мин, после чего центрифугируют, обрабатывают центрифугат полиэтиленгликолем и полученный после осаждения полиэтиленгликолем осадок подвергают гамма стерилизации.2. A method of obtaining an immunoglobulin base for immunobiological preparations, involving the extraction of a precipitate obtained after treatment of blood serum with ethanol, ten times the volume of distilled water, chloroform and a solution of sodium chloride, shaking, centrifugation, centrifugation treatment with 12% polyethylene glycol m.m. 6000, followed by separation of the precipitate containing the target product and its sterilization, characterized in that the alcohol precipitate A is extracted with distilled water (Cohn fractions II + III), then it is left to stand for 4 hours at a temperature of 4-6 ° C and pH 5.5 ± 0.3, with further centrifugation for 1 h at 3000 rpm, first the centrifugate is treated with chloroform 5% by volume with shaking for 2 hours at a temperature of 4-6 ° C, then CaCl 2 and NaCl in a molar ratio of 1: 20-1: 40 with shaking for 5-15 minutes, after which it is centrifuged, the centrifugate is treated with polyethylene glycol and the resulting polyethylene glycol precipitation the precipitate is subjected to gamma sterilization. 3. Суппозитории для профилактики и терапии бактериальных и вирусных заболеваний, содержащие стерилизованную иммуноглобулиновую основу в эффективном количестве, эмульгатор, кондитерский жир, парафин, отличающиеся тем, что основа получена способом по п.2.3. Suppositories for the prevention and treatment of bacterial and viral diseases, containing a sterilized immunoglobulin base in an effective amount, an emulsifier, confectionery fat, paraffin, characterized in that the base is obtained by the method according to claim 2. 4. Мазь для профилактики и терапии бактериальных и вирусных заболеваний, содержащая иммуноглобулиновую основу в эффективном количестве, эмульгатор, кондитерский жир, вазелин и ланолин, отличающаяся тем, что основа получена способом по п.2. 4. An ointment for the prevention and treatment of bacterial and viral diseases, containing an immunoglobulin base in an effective amount, an emulsifier, confectionery fat, petroleum jelly and lanolin, characterized in that the base is obtained by the method according to claim 2.
RU2007147321/15A 2007-12-21 2007-12-21 Immunoglobulin marker base for immunobiological preparations and way of its reception, suppositories and ointment for prevention and therapy of bacteriemic and virus diseases RU2361612C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007147321/15A RU2361612C1 (en) 2007-12-21 2007-12-21 Immunoglobulin marker base for immunobiological preparations and way of its reception, suppositories and ointment for prevention and therapy of bacteriemic and virus diseases

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007147321/15A RU2361612C1 (en) 2007-12-21 2007-12-21 Immunoglobulin marker base for immunobiological preparations and way of its reception, suppositories and ointment for prevention and therapy of bacteriemic and virus diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2361612C1 true RU2361612C1 (en) 2009-07-20

Family

ID=41047008

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007147321/15A RU2361612C1 (en) 2007-12-21 2007-12-21 Immunoglobulin marker base for immunobiological preparations and way of its reception, suppositories and ointment for prevention and therapy of bacteriemic and virus diseases

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2361612C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2504401C2 (en) * 2012-04-10 2014-01-20 Константин Владимирович Былов Drug preparation possessing immunoregulatory property for treating immune diseases
RU2614119C2 (en) * 2012-02-22 2017-03-22 Чэнду Жуншэн Фармасьютикалс Ко., Лтд Method of producing human immunoglobulin

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1499078A (en) * 1975-05-29 1978-01-25 Green Cross Corp Medicinal preparations containing ypsilon-globulin
RU2084229C1 (en) * 1994-07-08 1997-07-20 Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского Method of preparing immunoglobulin preparation for prophylaxis and therapy of bacterial and viral diseases
RU2116083C1 (en) * 1997-04-11 1998-07-27 Владимир Андрианович Алешкин Method of preparing immunoglobulin preparation containing recombinant alpha-2-interferon
RU2136314C1 (en) * 1998-09-16 1999-09-10 Алешкин Владимир Андрианович Suppositorium based on immunoglobulin preparation
RU2003137064A (en) * 2003-12-24 2005-06-10 Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранени Российской Федерации" (RU) Vaccines for immunoprophylaxis and immunotherapy of human and animal diseases caused by pathogenic and opportunistic gram-negative microorganisms coliform AND exotoxin AND PROCESS FOR ITS PREPARATION, immunoglobulin preparations and process for its preparation, immuno-biological preparations, multicomponent vaccine,
RU2255766C2 (en) * 2003-03-05 2005-07-10 Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габрического Министерства здравоохранения Российской Федерации" Method for preparing immunoglobulin preparation for prophylaxis and therapy of bacterial and viral infection, immunoglobulin preparation for prophylaxis and therapy of bacterial and viral infection (variants) and suppository based on immunoglobulin preparation
RU2261112C1 (en) * 2004-07-06 2005-09-27 Ромео Антонян Method for preparing immunoglobulin preparation

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1499078A (en) * 1975-05-29 1978-01-25 Green Cross Corp Medicinal preparations containing ypsilon-globulin
RU2084229C1 (en) * 1994-07-08 1997-07-20 Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского Method of preparing immunoglobulin preparation for prophylaxis and therapy of bacterial and viral diseases
RU2116083C1 (en) * 1997-04-11 1998-07-27 Владимир Андрианович Алешкин Method of preparing immunoglobulin preparation containing recombinant alpha-2-interferon
RU2136314C1 (en) * 1998-09-16 1999-09-10 Алешкин Владимир Андрианович Suppositorium based on immunoglobulin preparation
RU2255766C2 (en) * 2003-03-05 2005-07-10 Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габрического Министерства здравоохранения Российской Федерации" Method for preparing immunoglobulin preparation for prophylaxis and therapy of bacterial and viral infection, immunoglobulin preparation for prophylaxis and therapy of bacterial and viral infection (variants) and suppository based on immunoglobulin preparation
RU2003137064A (en) * 2003-12-24 2005-06-10 Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранени Российской Федерации" (RU) Vaccines for immunoprophylaxis and immunotherapy of human and animal diseases caused by pathogenic and opportunistic gram-negative microorganisms coliform AND exotoxin AND PROCESS FOR ITS PREPARATION, immunoglobulin preparations and process for its preparation, immuno-biological preparations, multicomponent vaccine,
RU2261112C1 (en) * 2004-07-06 2005-09-27 Ромео Антонян Method for preparing immunoglobulin preparation

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2614119C2 (en) * 2012-02-22 2017-03-22 Чэнду Жуншэн Фармасьютикалс Ко., Лтд Method of producing human immunoglobulin
RU2614119C9 (en) * 2012-02-22 2017-08-15 Чэнду Жуншэн Фармасьютикалс Ко., Лтд Method of producing human immunoglobulin
RU2504401C2 (en) * 2012-04-10 2014-01-20 Константин Владимирович Былов Drug preparation possessing immunoregulatory property for treating immune diseases

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2340492T3 (en) IMMUNE MODULATION METHODS IN ANIMALS.
US20080213263A1 (en) Methods and compositions for treatment of immune dysfunction disorders
WO1995022350A1 (en) Composition and method for preventing and treating inflammation with immunoglobulin a
US20020044942A1 (en) Transfer factor composition and process for producing same
Dwyer Thirty years of supplying the missing link: History of gamma globulin therapy for immunodeficient states
US20220267419A1 (en) Human Immunoglobulin Against Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus, Preparation Method Therefor, And Use Thereof
US9724422B2 (en) Human lactoferrin derived peptide for use as an antigen masking agent
RU2361612C1 (en) Immunoglobulin marker base for immunobiological preparations and way of its reception, suppositories and ointment for prevention and therapy of bacteriemic and virus diseases
WO1999036077A1 (en) Composition and method for treatment and prevention of arthritis and/or autoimmune diseases
WO1999002188A1 (en) Hen egg yolk antibodies to clostridium difficile antigens and use in therapy for pseudomembranous colitis
JPH0570370A (en) Medicinal preparation based on plasma protein
WO2016114677A1 (en) Manufacture and use of hyperimmune egg pc2
JPH0669962B2 (en) Oral immunoglobulin
KR20060038387A (en) How to Treat Cancer Patients on Chemotherapy
RU2470664C2 (en) Method for producing immunoglobulin for intravenous introduction of immunoglobulin m enriched preparation, and preparation prepared by such method
CN101314032B (en) Preparation technique for specified transfer factor oral preparation for typhoid fever, paratyphoid fever
RU2262350C2 (en) Vaccine for prophylaxis and immunotherapy of human and animal diseases caused by pathogenic and opportunistic gram-negative microorganisms of intestine group and their exotoxins and method for its preparing (variants), immunoglobulin preparation (variant) and method for its preparing, immunobiological preparation polycomponent vaccine
RU2255766C2 (en) Method for preparing immunoglobulin preparation for prophylaxis and therapy of bacterial and viral infection, immunoglobulin preparation for prophylaxis and therapy of bacterial and viral infection (variants) and suppository based on immunoglobulin preparation
CN114073766A (en) Helicobacter pylori epitope peptide and application thereof
RU2129017C1 (en) Method of an antirotaviral immunoglobulin preparing
WO2002007760A2 (en) Therapeutic agent against aids comprising anti hiv goat antibody
RU2661028C2 (en) Pharmaceutical composition for passive rabies immunization, pharmaceutical kit, pharmaceutical kit application method
RU2141341C1 (en) Method of preparing human antistaphylococcus immunoglobulin for intravenous administration
EP1044690B1 (en) Applications of gamma globulin-rich plasma protein mixtures of animal origin and process for the preparation thereof
RU2150960C1 (en) Method of human antidiphtheritic immunoglobulin preparing

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20180605

QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20190403

Effective date: 20190403