RU2361606C2 - Composition for treatment of damages of gi tract mucosa - Google Patents
Composition for treatment of damages of gi tract mucosa Download PDFInfo
- Publication number
- RU2361606C2 RU2361606C2 RU2007125265/15A RU2007125265A RU2361606C2 RU 2361606 C2 RU2361606 C2 RU 2361606C2 RU 2007125265/15 A RU2007125265/15 A RU 2007125265/15A RU 2007125265 A RU2007125265 A RU 2007125265A RU 2361606 C2 RU2361606 C2 RU 2361606C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- interleukin
- area
- treatment
- ulcers
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 title abstract description 6
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 13
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 13
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 13
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 10
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 8
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 claims 1
- 102000004125 Interleukin-1alpha Human genes 0.000 claims 1
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 claims 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 abstract 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 25
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 14
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 14
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 13
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 239000002826 coolant Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 3
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 241001116389 Aloe Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001002634 Homo sapiens Interleukin-1 alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100020881 Interleukin-1 alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N methyluracil Natural products CN1C=CC(=O)NC1=O XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к созданию композиции для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), а именно композиции, содержащей препараты интерлейкина-1 (ИЛ-1) для лечения повреждений слизистой оболочки (СО) ЖКТ.The invention relates to medicine, namely to create a composition for the treatment of diseases of the gastrointestinal tract (GIT), namely a composition containing preparations of interleukin-1 (IL-1) for the treatment of injuries of the mucous membrane (CO) of the gastrointestinal tract.
Лечение поражений слизистой оболочки (СО) пищеварительного тракта, как правило, осуществляют путем комплексного воздействия, включающего в себя препараты и приемы, направленные на устранение повреждающего влияния кислотно-пептического фактора, нормализацию моторно-эвакуаторной функций желудка и двенадцатиперстной кишки, стимуляцию регенерации эпителиальных клеток слизистой оболочки и образование слизи, улучшение кровоснабжения слизистой оболочки и другое. Для стимуляции процессов регенерации СО в комплекс лечебных мероприятий включают солкосерил, метилурацил, алоэ, витамины, аутогемотерапию и гипербарическую оксигенацию (Краткая медицинская энциклопедия, под ред. акад. Б.В.Петровского - М., Советская энциклопедия, 1990, стр.437-439).Treatment of lesions of the mucous membrane (CO) of the digestive tract, as a rule, is carried out by a complex effect, which includes drugs and techniques aimed at eliminating the damaging effect of the acid-peptic factor, normalizing the motor-evacuation functions of the stomach and duodenum, stimulating the regeneration of epithelial cells of the mucosa shells and the formation of mucus, improved blood supply to the mucous membrane and more. To stimulate CO regeneration processes, the complex of therapeutic measures includes solcoseryl, methyluracil, aloe, vitamins, autohemotherapy and hyperbaric oxygenation (Brief Medical Encyclopedia, edited by Acad. B.V. Petrovsky - M., Soviet Encyclopedia, 1990, p. 437- 439).
Известно профилактическое применение интерлейкинов при интерперитонеальном или внутривенном введении при воспалительных процессах ЖКТ в эксперименте (Wallace J.L. et al., Gastroenterology, 1992, V.102, р.1176; Wallace J.L., Eur. J. Pharmacol, 1990, V.186, p.279).The prophylactic use of interleukins for interperitoneal or intravenous administration in inflammatory processes of the gastrointestinal tract in the experiment is known (Wallace JL et al., Gastroenterology, 1992, V.102, p. 1176; Wallace JL, Eur. J. Pharmacol, 1990, V.186, p .279).
Недостатком указанных методов является относительно невысокая эффективность, наличие значительного числа противопоказаний и осложнений.The disadvantage of these methods is the relatively low efficiency, the presence of a significant number of contraindications and complications.
Наиболее близким к заявляемому изобретению является разработанный авторами препарат ИЛ-1β «Беталейкин» (RU 2128706; Р №000222/01-2001, 25.01.2001), содержащий в своем составе ИЛ-1β, человеческий альбумин и поливинилпирролидон. Курс лечения с помощью «Беталейкина» состоит из 3-х ежедневных внутривенных капельных инфузий в дозе 5 нг/кг массы тела (Долгушина А.И., Автореферат канд. дисс., Челябинск, 2003). После применения ИЛ-1 было показано ускорение заживления язвенных дефектов слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки. Однако данная композиция ИЛ-1 имеет ряд недостатков, в частности недостаточная эффективность и появление нежелательных побочные эффектов, таких как лихорадочная реакция после инфузий и реакция со стороны системного иммунитета.Closest to the claimed invention is the preparation developed by the authors of IL-1β "Betaleikin" (RU 2128706; P No. 000222 / 01-2001, 01/25/2001), containing IL-1β, human albumin and polyvinylpyrrolidone. The course of treatment using Betaleikin consists of 3 daily intravenous drip infusions at a dose of 5 ng / kg body weight (Dolgushina A.I., Abstract of Cand. Diss., Chelyabinsk, 2003). After the use of IL-1, acceleration of the healing of ulcerative defects of the gastric and duodenal mucosa was shown. However, this composition of IL-1 has several disadvantages, in particular lack of effectiveness and the appearance of undesirable side effects, such as a febrile reaction after infusion and a reaction from the systemic immunity.
Технической задачей, стоявшей перед авторами, являлось разработка более эффективной и безопасной лечебной композиции для лечения повреждений СО ЖКТ на основе «Беталейкина».The technical challenge faced by the authors was the development of a more effective and safe therapeutic composition for the treatment of gastrointestinal tract injuries based on Betaleikin.
Технический результат достигался созданием композиции в виде водного раствора, содержащего 5×10-7-5×10-5 мас.% ИЛ-1, 1-10 мас.% бикарбоната натрия (БКН) и 1×10-4-1×10-2 мас.% поливинилпирролидона (ПВП).The technical result was achieved by creating a composition in the form of an aqueous solution containing 5 × 10 -7 -5 × 10 -5 wt.% IL-1, 1-10 wt.% Sodium bicarbonate (BKN) and 1 × 10 -4 -1 × 10 -2 wt.% Polyvinylpyrrolidone (PVP).
Препарат вводят ежедневно в дозе 25-2500 нг на 1 кг массы. Курс лечения в зависимости от особенностей заболевания составляет от 1 до 10 дней.The drug is administered daily at a dose of 25-2500 ng per 1 kg of body weight. The course of treatment, depending on the characteristics of the disease, is from 1 to 10 days.
Основой использования заявляемого способа являлось предположение, что заряженные молекулы поливинилпирролидона и бикарбоната натрия способны с одной стороны защитить наиболее уязвимые фрагменты молекулы ИЛ-1 от ферментативной и кислотной биодеградации, увеличивая эффективность действия препарата, а с другой стороны способны ослабить взаимодействие ИЛ-1 с иммуноглобулинами и устранить негативную иммунную реакцию на введение чужеродного белка.The basis of the use of the proposed method was the assumption that charged molecules of polyvinylpyrrolidone and sodium bicarbonate are able, on the one hand, to protect the most vulnerable fragments of the IL-1 molecule from enzymatic and acid biodegradation, increasing the effectiveness of the drug, and on the other hand, can weaken the interaction of IL-1 with immunoglobulins and eliminate the negative immune response to the introduction of a foreign protein.
Как показали исследования, использование данной композиции ИЛ-1 как значительно усиливает заживление язвенных поражений слизистой оболочки желудка (СОЖ) в различных моделях, так и минимизирует негативное воздействие введения ИЛ-1 на иммунную систему, что ранее в литературе не отмечалось.As studies have shown, the use of this composition of IL-1 both significantly enhances the healing of ulcerative lesions of the gastric mucosa (coolant) in various models, and minimizes the negative effect of the introduction of IL-1 on the immune system, which was not previously noted in the literature.
Использование ИЛ-1 в дозе менее 5×10-7 малоэффективно, применение его в дозе более 5×10-5 мас.% возможно при использовании в отдельных осложненных патологиях, но, как правило, экономически нецелесообразно. Использование раствора с концентрацией бикарбоната натрия менее 1% и поливинилпирролидона в дозе менее 1×10-4 не обеспечивает надежную защиту белка от деградации при попадании в желудок, либо не устраняет негативные побочные эффекты. Использование растворов, содержащих большие количества защитных добавок, не повышает эффективности метода.The use of IL-1 in a dose of less than 5 × 10 -7 is ineffective, its use in a dose of more than 5 × 10 -5 wt.% Is possible when used in certain complicated pathologies, but, as a rule, it is not economically feasible. The use of a solution with a sodium bicarbonate concentration of less than 1% and polyvinylpyrrolidone in a dose of less than 1 × 10 -4 does not provide reliable protection of the protein from degradation when it enters the stomach, or does not eliminate negative side effects. The use of solutions containing large amounts of protective additives does not increase the effectiveness of the method.
В качестве препарата ИЛ-1 могут использоваться природный ИЛ-1, а также рекомбинантные ИЛ-1ά или ИЛ-1β. Выбор конкретного интерлейкина-1 и длительность применения определяется, в основном, особенностями заболевания пациента.As the drug IL-1 can be used natural IL-1, as well as recombinant IL-1ά or IL-1β. The choice of a specific interleukin-1 and the duration of use is determined mainly by the characteristics of the patient's disease.
Промышленная применимость способа и его эффективность иллюстрируются следующими примерами.The industrial applicability of the method and its effectiveness are illustrated by the following examples.
Пример 1. 10 мкл раствора субстанции ИЛ-1, содержавшего 20 мкг ИЛ-1β, разводили в 980 мкл стерильного 4%-ного раствора натрия двууглекислого и получали, таким образом, раствор с концентрацией ИЛ-1 20 мкг/мл. Затем 50 мкл полученного раствора вносили в 9950 мкл стерильного 4%-ного раствора пищевой соды, перемешивали пипетированием и получали раствор с концентрацией ИЛ-1β 100 нг/мл. Поливинилпирролидон (ПБП) добавляли в дозе на 1 мл раствора 0,1 мг ПБП. После этого пробы лиофилизировали.Example 1. 10 μl of a solution of the substance IL-1, containing 20 μg of IL-1β, was diluted in 980 μl of a sterile 4% solution of sodium bicarbonate and, thus, a solution with a concentration of IL-1 of 20 μg / ml was obtained. Then 50 μl of the resulting solution was added to 9950 μl of a sterile 4% baking soda solution, mixed by pipetting and a solution with a concentration of IL-1β of 100 ng / ml was obtained. Polyvinylpyrrolidone (PBP) was added at a dose of 1 ml of a 0.1 mg PBP solution. After this, the samples were lyophilized.
Для испытания биологической активности композиции при пероральном введении использовали самки крыс Wistar весом около 150 г. За 24 часа до проведения опыт крыс не кормили, оставляя свободный доступ к воде. Повреждения слизистой вызывали внутрижелудочным введением 1 мл 96°-ного этанола (Wallace J.L., Eur. J. Pharmacol., 1990, V.186, p.279). Через 1 час после поражения внутрижелудочно через зонд вводили 1 мл субстанции, содержащей ИЛ-1β в дозах 0,005-0,5 мкг/мл и поливинилпирролидон в 4%-ного раствора пищевой соды или плацебо в том же объеме. На каждую точку были исследованы по пять животных. Животные были забиты через 3 часа, сутки и трое суток после введения ИЛ-1. Желудки были вынуты, зафиксированы 10%-ным формалином, разрезаны по большой кривизне, приколоты к восковой платформе и сфотографированы цифровой камерой, после чего площадь поражений измеряли с использованием программы Scion Image. Проводилось планиметрическое измерение площадей поражений СОЖ и высчитывали их процент по отношению к общей площади секреторной части желудка, что является широко используемым методом. В нашем исследовании мы учитывали наиболее выраженные повреждения СОЖ, имевшие четкие контуры, процент их площади составлял заявленные значения относительно площадей секреторной части желудка. Процент поражения высчитывали как отношение пораженных участков к общей площади слизистой желудка. Статистическую обработку проводили по критерию Стьюдента. Результаты представлены в таблице 1.To test the biological activity of the composition when administered orally, female Wistar rats weighing about 150 g were used. 24 hours before the experiment, the rats were not fed, leaving free access to water. Mucosal damage was caused by intragastric administration of 1 ml of 96 ° ethanol (Wallace J.L., Eur. J. Pharmacol., 1990, V.186, p.279). 1 hour after the lesion, 1 ml of a substance containing IL-1β in doses of 0.005-0.5 μg / ml and polyvinylpyrrolidone in 4% baking soda or placebo in the same volume was administered intragastrically through a probe. Five animals were examined at each point. Animals were slaughtered 3 hours, one day, and three days after the administration of IL-1. The stomachs were removed, fixed with 10% formalin, cut along a large curvature, pinned to a wax platform and photographed with a digital camera, after which the lesion area was measured using the Scion Image program. A planimetric measurement of the areas of coolant lesions was carried out and their percentage was calculated relative to the total area of the secretory part of the stomach, which is a widely used method. In our study, we took into account the most pronounced lesions of the coolant, which had clear contours, the percentage of their area was the declared values relative to the areas of the secretory part of the stomach. The percentage of lesions was calculated as the ratio of the affected areas to the total area of the gastric mucosa. Statistical processing was performed according to student criterion. The results are presented in table 1.
Влияние заявляемого препарата и рекомбинантного ИЛ-1 бета и «Бета-лейкин» на площадь поражения СОЖ (% площади поражения от общей площади секреторной части желудка)Table 1
The effect of the claimed drug and recombinant IL-1 beta and Beta-leukin on the area of the lesion of the coolant (% of the lesion area of the total area of the secretory part of the stomach)
Результаты показали, что применение рек ИЛ-1β в составе композиции в диапазоне доз в два-три раза статистически достоверно снижало площадь поражения в использованных дозах на сроках исследования 24 и 72 часа по сравнению с контрольной группой. Использование препарата «Беталейкин» также приводило к положительным эффектам, так, начиная со срока 24 часа, применение ИЛ-1 в 1,5-3 раза снижало площадь поражения по сравнению с контрольной группой. Однако действие рек ИЛ-1β в составе композиции было более выраженным, что проявлялось в достоверных различиях с плацебо на сроках 24 и 72 часа практически во всем диапазоне доз, а препарат «Беталейкин» достоверно снижал площадь поражений на 24 часа в дозе 50 нг/мл.The results showed that the use of the IL-1β rivers in the composition in a dose range of two to three times statistically significantly reduced the lesion area in the doses used at the study time of 24 and 72 hours compared with the control group. The use of the Betaleikin preparation also led to positive effects, so, starting from the period of 24 hours, the use of IL-1 1.5-3 times reduced the lesion area compared with the control group. However, the effect of the IL-1β rivers in the composition was more pronounced, which was manifested in significant differences with placebo at 24 and 72 hours in almost the entire dose range, and Betaleikin significantly reduced the area of lesions by 24 hours at a dose of 50 ng / ml .
Пример 2. В условиях примера 1 было проведено исследование по действию заявленной композиции, включавшей природный ИЛ-1 бета, или препарата «Беталейкин» на заживление кислотных язв желудка.Example 2. In the conditions of example 1, a study was conducted on the effect of the claimed composition, including natural IL-1 beta, or the drug "Betaleikin" on the healing of acid stomach ulcers.
Влияние природного ИЛ-1 бета или препарата «Беталейкин» на площадь язв СОЖtable 2
The effect of natural IL-1 beta or Betaleukin on the area of coolant ulcers
Как следует из представленных данных, при применении заявленной композиции, включавшей природный ИЛ-1 бета, наблюдалось значительное снижение площадей язв в опытной группе по сравнению с контролем (более чем в 3 раза), которое было статистически достоверным. Использование препарата «Беталейкин» также снижало площадь язв в среднем на треть, но не наблюдали достоверных отличий от плацебо.As follows from the data presented, when applying the claimed composition, including natural IL-1 beta, there was a significant decrease in the area of ulcers in the experimental group compared with the control (more than 3 times), which was statistically significant. The use of Betaleikin also reduced the area of ulcers on average by a third, but no significant differences from placebo were observed.
Пример 3. Получение природного препарата ИЛ-1 проводили путем стимуляции клеток человека. Выделение клеток проводили следующим образом (Boyum А., Scand. 1. Clin. Invest., 1968, V.21, S.97, p.77-89). К 10 мл свежей венозной крови, взятой на гепарине (20 МЕ/мл) в стерильную пробирку, добавляли 1 мл 10%-ного раствора желатины, перемешивали и инкубировали при 37°С в течение 30 мин. Затем проводили центрифугирование в градиенте плотности Histopaque ("Sigma"). Для этого 6 мл полученной лейковзвеси наслаивали на 3 мл градиента плотности и центрифугировали в течение 40 минут при 450 g и +40 С°. Образовавшееся в интерфазе "кольцо" мононуклеаров снимали пипеткой, полученную клеточную взвесь трижды отмывали 0,9%-ным раствором NaCl. Жизнеспособность клеток, которую определяли по методу окрашивания трипановым синим, составляла не менее 95%. Клетки ресуспендировали в концентрации 5×106 клеток /мл в среде RPMI 1640 с добавлением 2 мМ глутамина и 80 мкг/мл гентамицина. Для приготовления рабочего раствора продигиозана смешивали 2,4 мл среды RPMI 1640 и 800 мкл 0,005%-ного раствора продигиозана, при этом в 100 мкл полученного раствора содержалось 1,0 мкг продигиозана. В 96-луночный планшет для культивирования клеток ("COSTAR") вносили индуктор по 100 мкл на лунку, затем во все лунки добавляли по 100 мкл разведенных клеток. Культивирование проводили при 37°С в 5% СО2 в течение 24 часов, после чего осторожно отбирали супернатанты и доводили содержание ИЛ-1 до нужной концентрации.Example 3. Obtaining a natural preparation of IL-1 was carried out by stimulation of human cells. Cell isolation was carried out as follows (Boyum A., Scand. 1. Clin. Invest., 1968, V.21, S.97, p.77-89). To 10 ml of fresh venous blood taken on heparin (20 IU / ml) in a sterile tube, 1 ml of a 10% gelatin solution was added, mixed and incubated at 37 ° C for 30 min. A density gradient centrifugation Histopaque ("Sigma") was then performed. For this, 6 ml of the obtained leukomes suspension was layered on a 3 ml density gradient and centrifuged for 40 minutes at 450 g and +40 ° C. The “ring” of mononuclear cells formed in the interphase was pipetted, and the resulting cell suspension was washed three times with 0.9% NaCl solution. Cell viability, which was determined by the method of staining with trypan blue, was at least 95%. Cells were resuspended at a concentration of 5 × 10 6 cells / ml in RPMI 1640 medium supplemented with 2 mM glutamine and 80 μg / ml gentamicin. To prepare a working solution of prodigiosan, 2.4 ml of RPMI 1640 medium and 800 μl of a 0.005% solution of prodigiosan were mixed, while 100 μl of the resulting solution contained 1.0 μg of prodigiosan. An inducer of 100 μl per well was added to a 96-well cell culture plate ("COSTAR"), then 100 μl of diluted cells were added to all wells. Cultivation was carried out at 37 ° C in 5% CO 2 for 24 hours, after which supernatants were carefully selected and the content of IL-1 was adjusted to the desired concentration.
В экспериментах использовали самки крыс Wistar массой 150-200 гр. У крыс индуцировали язву желудка путем введения в полость желудка уксусной кислоты (Tsuki-mi У., et al., Gastroenterology Hepatology, 1994, V.9, p.60). На 3 день после операции происходило формирование язвенного дефекта, что было подтверждено гистологическим исследованием. На каждую точку были исследованы по четыре-пять животных, при этом у каждого животного образовывалось по две язвы. На 4 и 5 дни после операции у опытных групп вводили через зонд в желудок 1 мл 6%-ного раствора бикарбоната, содержащего ИЛ-1 в дозе 100 нг/мл, ПВП в дозе 0,1 мг/мл. Животные контрольной группы на те же сроки получали плацебо. На 8 день эксперимента проводился забор крови из хвостовой вены, после чего животных забивали, вскрывали желудок и измеряли площадь поверхности язв. Подсчет абсолютного количества лейкоцитов проводили в камере Горяева, а формулу крови просчитывали на мазках, окрашенных по методу Романовского-Гимза. Статистическую обработку проводили по критерию Стьюдента. Результаты измерения площадей язв представлены в таблице 3.In the experiments, female Wistar rats weighing 150-200 g were used. Gastric ulcer was induced in rats by introducing acetic acid into the gastric cavity (Tsuki-mi U., et al., Gastroenterology Hepatology, 1994, V.9, p.60). On the 3rd day after the operation, the formation of a ulcerative defect occurred, which was confirmed by histological examination. Four to five animals were examined at each point, with each ulcer forming two ulcers. On 4 and 5 days after surgery, 1 ml of a 6% bicarbonate solution containing IL-1 at a dose of 100 ng / ml and PVP at a dose of 0.1 mg / ml were injected into the stomach in the experimental groups through a tube. Animals of the control group received placebo for the same periods. On day 8 of the experiment, blood was taken from the tail vein, after which the animals were sacrificed, the stomach was opened, and the surface area of the ulcers was measured. The absolute number of leukocytes was calculated in the Goryaev chamber, and the blood formula was calculated on smears stained according to the Romanovsky-Giemsa method. Statistical processing was performed according to student criterion. The results of measuring the area of ulcers are presented in table 3.
Влияние концентрации ИЛ-1 на площадь язвTable 3
The effect of IL-1 concentration on the area of ulcers
Как следует из представленных данных, наблюдалось значительное снижение площадей язв в опытной группе по сравнению с контролем (более чем в 3 р~а), которое было статистически достоверным.As follows from the data presented, there was a significant decrease in the area of ulcers in the experimental group compared with the control (more than 3 p ~ a), which was statistically significant.
Количество лейкоцитов и формула крови у крыс, получавших ИЛ-1Table 4
White blood cell count and blood count in rats treated with IL-1
Результаты подсчетов абсолютного и относительного количества лейкоцитов показали отсутствие достоверных различий между контрольной и опытной группами (таблица 4). Это позволяет судить об отсутствии значительного системного воздействия ИЛ-1 при его введении в желудок, что подтверждает повысившуюся безопасность новой композиции.The results of calculating the absolute and relative number of leukocytes showed the absence of significant differences between the control and experimental groups (table 4). This allows us to judge the absence of significant systemic effects of IL-1 when it is introduced into the stomach, which confirms the increased safety of the new composition.
Пример 4. Язва желудка индуцировалась, как описано в примере 3. На 4, 5 и 6-й дни после операции животным опытных групп вводили через зонд в желудок различные композиции, содержавшие препарат рекомбинантного ИЛ-1а в дозе 100 нг/мл. Животные контрольной группы на те же сроки получали 1 мл плацебо. На каждую точку были исследованы по пять животных, при этом у каждого животного образовывалось по две язвы. На 8-й день эксперимента проводился забор крови из хвостовой вены, после чего животных забивали, вскрывали желудок и измеряли площадь поверхности язв. Подсчет абсолютного количества лейкоцитов проводили в камере Горяева. Статистическую обработку проводили по критерию Стьюдента. Результаты измерения площадей язв представлены в таблице 5.Example 4. A gastric ulcer was induced as described in Example 3. On days 4, 5, and 6 after the operation, the animals of the experimental groups were injected into the stomach with various compositions containing a recombinant IL-1a preparation at a dose of 100 ng / ml. Animals of the control group received 1 ml of placebo at the same time. Five animals were examined at each point, with two ulcers forming in each animal. On the 8th day of the experiment, blood was drawn from the tail vein, after which the animals were sacrificed, the stomach was opened, and the surface area of the ulcers was measured. The calculation of the absolute number of leukocytes was carried out in the Goryaev’s chamber. Statistical processing was performed according to student criterion. The results of measuring the area of ulcers are presented in table 5.
Влияние состава композиции на площадь язв СОЖTable 5
The effect of composition on the area of coolant ulcers
Лучшие результаты достигались при содержании ПВП - 1×10-2-1×10-3 %, бикарбоната натрия - 4-10 мас.%.The best results were achieved with a PVP content of 1 × 10 -2 -1 × 10 -3 %, sodium bicarbonate - 4-10 wt.%.
Пример 5. Язва желудка индуцировалась так же, как описано в примере 2. На 4, 5 и 6-й дни после операции животным опытных групп вводили через зонд в желудок композицию, содержавшую препарат рекомбинантного ИЛ-1а в дозе 100 нг/мл, ПВП - 10-3 мас.%, бикарбоната натрия - 2 мас.%. Животные контрольной группы на те же сроки получали 1 мл плацебо. На каждую точку были исследованы по пять-восемь животных, при этом у каждого животного образовывалось по две язвы. На 8-й день эксперимента проводился забор крови из хвостовой вены, после чего животных забивали, вскрывали желудок и измеряли площадь поверхности язв. Подсчет абсолютного количества лейкоцитов проводили в камере Горяева. Статистическую обработку проводили по критерию Стьюдента. Результаты измерения площадей язв представлены в таблице 5.Example 5. A gastric ulcer was induced in the same manner as described in example 2. On days 4, 5 and 6 after the operation, the animals of the experimental groups were injected through a tube into the stomach with a composition containing a recombinant IL-1a preparation at a dose of 100 ng / ml, PVP - 10 -3 wt.%, Sodium bicarbonate - 2 wt.%. Animals of the control group received 1 ml of placebo at the same time. Five to eight animals were examined at each point, with two ulcers forming in each animal. On the 8th day of the experiment, blood was drawn from the tail vein, after which the animals were sacrificed, the stomach was opened, and the surface area of the ulcers was measured. The calculation of the absolute number of leukocytes was carried out in the Goryaev’s chamber. Statistical processing was performed according to student criterion. The results of measuring the area of ulcers are presented in table 5.
Влияние ИЛ-1а на площадь язв СОЖTable 6
The effect of IL-1a on the area of coolant ulcers
Как следует из представленных данных, трехкратное курсовое введение в желудок препарата ИЛ-1а приводило к значительному, статистически достоверному снижению площадей язв по сравнению с контролем.As follows from the data presented, three-course administration of IL-1a into the stomach led to a significant, statistically significant reduction in the area of ulcers compared with the control.
Количество лейкоцитов у крыс на фоне терапии ИЛ-1аTable 5
The number of leukocytes in rats during treatment with IL-1A
Результаты подсчетов абсолютного количества лейкоцитов показали отсутствие различий между контрольной и опытной группами (таблица 6). Это также позволяет сказать об отсутствии значительного системного воздействия ИЛ-1а при местном использовании.The results of the calculation of the absolute number of leukocytes showed the absence of differences between the control and experimental groups (table 6). This also allows us to say that there is no significant systemic effect of IL-1a with local use.
Таким образом, в ходе проведенных экспериментов было показано, что пероральное применение композиции, содержащей ИЛ-1, оказывает выраженное ранозаживляющее действие, стимулирует местный иммунитет слизистой и не имеет системного действия.Thus, during the experiments it was shown that oral administration of a composition containing IL-1 has a pronounced wound healing effect, stimulates local mucosal immunity and does not have a systemic effect.
Композиция показала эффективность, безвредность и свою перспективность для лечения воспалительных, инфекционных и стрессорных поражений, механических повреждений и ран слизистой оболочки ЖКТ.The composition has shown efficacy, harmlessness and its promise for the treatment of inflammatory, infectious and stressful lesions, mechanical damage and wounds of the gastrointestinal mucosa.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007125265/15A RU2361606C2 (en) | 2007-07-04 | 2007-07-04 | Composition for treatment of damages of gi tract mucosa |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007125265/15A RU2361606C2 (en) | 2007-07-04 | 2007-07-04 | Composition for treatment of damages of gi tract mucosa |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007125265A RU2007125265A (en) | 2009-01-10 |
| RU2361606C2 true RU2361606C2 (en) | 2009-07-20 |
Family
ID=40373944
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007125265/15A RU2361606C2 (en) | 2007-07-04 | 2007-07-04 | Composition for treatment of damages of gi tract mucosa |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2361606C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2432170C2 (en) * | 2009-03-26 | 2011-10-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ЦИТОКИН" | Interleukin composition (versions) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2143278C1 (en) * | 1998-11-03 | 1999-12-27 | Санкт-Петербургский государственный научно-исследовательский институт скорой помощи им.И.И.Джанелидзе | Method of treatment of acute surgical diseases of abdominal cavity organs |
-
2007
- 2007-07-04 RU RU2007125265/15A patent/RU2361606C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2143278C1 (en) * | 1998-11-03 | 1999-12-27 | Санкт-Петербургский государственный научно-исследовательский институт скорой помощи им.И.И.Джанелидзе | Method of treatment of acute surgical diseases of abdominal cavity organs |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ДОЛГУШИНА А.И. Оценка клинико-иммунологической эффективности беталейкина при лечении больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, автореферат диссертации на соискание степени кандидата медицинских наук. - Челябинск, 2003. БЕТАЛЕЙКИН, Р №000222/01-2001, 25.01.2001, инструкция по применению. ДОСОН Р., ЭЛИОТ Д. и др. Справочник биохимика. - М.: Мир, 1991, с.367. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2432170C2 (en) * | 2009-03-26 | 2011-10-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ЦИТОКИН" | Interleukin composition (versions) |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007125265A (en) | 2009-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102079794B (en) | Mucoadhesive xyloglucan-containing formulations useful in medical devices and in pharmaceutical formulations | |
| EP3421594B1 (en) | Novel highly-stable recombinant superoxide dismutase and application thereof | |
| JPH10503522A (en) | Protective prostaglandins for use with chemotherapeutic agents | |
| CN117187096A (en) | Coli strain for improving intestinal barrier function and application thereof | |
| CN110099690B (en) | Compound preparation suitable for treating non-alcoholic fatty liver disease and/or non-alcoholic steatohepatitis and/or hepatic steatosis | |
| US20220054561A1 (en) | Lachnospiraceae mitigates against radiation-induced hematopoietic/gastrointestinal injury and death, and promotes cancer control by radiation | |
| CN1090506C (en) | New applications of lysozyme dimer | |
| RU2361606C2 (en) | Composition for treatment of damages of gi tract mucosa | |
| WO2010021514A2 (en) | Pharmaceutical composition containing glutamine for treating atopic dermatitis | |
| RU2198673C2 (en) | Medicinal preparation for optimization of mucus viscosity and stimulation of intestine function | |
| JPH10504279A (en) | Pharmaceutical compositions for prevention and / or treatment of viral infections and possibly inflammation and methods of treating them | |
| AU2031800A (en) | Interferon-alpha mediated upregulation of aquaporin expression | |
| RU2355415C2 (en) | Method of treating mucosal lesions of gastrointestinal tract | |
| RU2264819C2 (en) | Pharmaceutical anti-herpetic composition and method for obtaining medicinal form upon its basis | |
| JP2011190274A (en) | Method and composition for treating mammalian nasal and sinus diseases caused by inflammatory response | |
| US20060159658A1 (en) | Methods of treating disease with glycosylated interferon | |
| Kusumawardani et al. | The effect of ethanolic extract of propolis on skin manifestation and skin tissue necrosis in cutaneous anthrax animal model | |
| KR20000010882A (en) | Stimulation of host defense mechanisms against viral challenges | |
| JP2002179588A (en) | Inflammation prophylactic or therapeutic agent comprising polypeptide belonging to thioredoxin family | |
| CN110917138A (en) | Two-cavity nasal spray containing oxymetazoline hydrochloride for treating rhinitis | |
| CN117562921A (en) | Application of molybdenum nanodots in preparation of medicine for treating acute lung injury/acute respiratory distress syndrome | |
| US20080057113A1 (en) | Pharmaceutical Anti-Herpetic Composition, Method for Producing a Dosage Form Based Thereon and Method for the Use Thereof | |
| CN101229362A (en) | Application of serum thymus factor in preparing antitumor medicine and protective medicine for physical and chemical tumor treating medicine | |
| CN120586065A (en) | Application of ferroptosis inhibitors in the preparation of drugs for treating colitis-related intestinal cancer | |
| AU5818698A (en) | Method of treating herpes infections |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140705 |