RU2210985C2 - Аллерген для прижизненной диагностики трихинеллеза у свиней - Google Patents
Аллерген для прижизненной диагностики трихинеллеза у свиней Download PDFInfo
- Publication number
- RU2210985C2 RU2210985C2 RU2000108972/13A RU2000108972A RU2210985C2 RU 2210985 C2 RU2210985 C2 RU 2210985C2 RU 2000108972/13 A RU2000108972/13 A RU 2000108972/13A RU 2000108972 A RU2000108972 A RU 2000108972A RU 2210985 C2 RU2210985 C2 RU 2210985C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- allergen
- trichinosis
- diagnostics
- trichinella
- farms
- Prior art date
Links
- 239000013566 allergen Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 206010044608 Trichiniasis Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 208000003982 trichinellosis Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 201000007588 trichinosis Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 title 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims abstract description 3
- 241000243774 Trichinella Species 0.000 claims description 11
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 241001439624 Trichina Species 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 1
- 206010040914 Skin reaction Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000004826 seaming Methods 0.000 description 1
- 230000035483 skin reaction Effects 0.000 description 1
- 231100000430 skin reaction Toxicity 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к сельскому хозяйству, ветеринарии, конкретно к способам диагностики трихинеллеза свиней. Аллерген представляет собой полисахаридные комплексы мышечных личинок трихинелл, выделенные путем механической гомогенизации и воздействия ультразвука. Аллерген может быть использован для массовых эпизоотологических обследований в хозяйствах, неблагополучных по трихинеллезу. Аллерген можно использовать в условиях фермы, результат получить в течение нескольких часов, при этом специфичность диагностики превышает показатели аналога более чем в 2 раза. 1 табл.
Description
Предлагаемое изобретение относится к сельскому хозяйству, ветеринарии, конкретно к способам диагностики трихинеллеза свиней.
Методическими указаниями (1998) по лабораторной диагностике трихинеллеза и действующей инструкцией о мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболевания животных гельминтозами (1999) предусмотрены посмертная и прижизненная диагностики трихинеллеза.
Посмертная: (микроскопический способ-КП) компрессориумная трихинеллоскопия (и биохимический) переваривание в искусственном желудочном соке (ИП). Прижизненная: - иммуноферментный анализ (ИФА); применялся длительное время кислотно-растворимый антиген БелНИИЭМ (инструкцией не предусмотрен). Они неравнозначны по эффективности. Так, в реферативном журнале "Ветеринария" РжВИНИТИ, 1985, 2,2.82.208. при сравнении специфичность КП не превышала 22%, а ИП=40%, ИФА (В.К. Бережко с соавторами, 1996) пишет о получении положительных результатов без указания процента специфичности, имеются данные до 40%. Следует отметить, что ИФА сложный, дорогой, требующий довольно длительного времени исследования и дающий неустойчивые результаты. Эффективность кислотно-растворимого аллергена БелНИИЭМ в сравнительном испытании с предлагаемыми нами тоже не превышала 40%.
В связи с резким обострением эпизоотической и эпидемиологической ситуации по трихинеллезу (групповые вспышки заболевания людей более 10 тыс. одновременно) для успешной локализации инвазии необходим доступный, эффективный аллергический метод диагностики трихинеллеза. А.С. Бессонов (1975) писал: "внутрикожная реакция является надежным методом выявления спонтанного трихинеллеза у свиней и может быть рекомендована для массовых эпизоотологических обследований в хозяйствах, неблагополучных или подозреваемых в неблагополучии по трихинеллезу". То есть, практике ветеринарии необходим простой, эффективный, моментальный по выполнению, дешевый способ прижизненной диагностики трихинеллеза, который можно применить непосредственно на ферме. По нашему мнению, это способ предлагаемого нами изобретения.
Поставленная цель достигается тем, что при создании аллергена использованы новейшие методики исследований, получен очищенный аллерген от балластных белков.
Пример осуществления способа.
Пассирование личинок трихинелл проводят на белых крысах. Через рот им с помощью шприца емкостью 2 мл дугообразно изогнутой медицинской трубчатой иглой с тупым концом вводят внутрь по 2 мл стандартной суспензии трихинелл (30-35 личинок на 1 г массы тела). Для стабилизации суспензии трихинелл используют 30%-ный раствор глицерина. Через 45-60 суток после заражения крыс убивают, снимают шкуры, удаляют внутренние органы, тушки обжигают горящим спиртовым факелом. Полученный костно-мышечный материал пропускают через стерильную мясорубку с диаметром решетки 1-1,5 мм. Фарш помещают в стерильные химические стаканы.
Переваривание костно-мышечного материала.
Искусственный желудочный сок подогревают до 37oС. Отвешивают 18 г фарша, помещают его в предварительно подогретый до 37oС химический стакан объемом 250 мл, заливают подогретым желудочным соком объемом 150 мл. Затем помещают в пластмассовый стакан микроизмельчителя тканей, между стаканами наливают подогретую до 47oС воду. Систему стаканов помещают в микроизмельчитель тканей. Перемешивание массы проводят при скорости вращения ножей 5 тыс. об/мин, затем добавляют стерильный фосфатно-буферный раствор рН 7,3 до 500 мл и оставляют на 30 минут с целью осаждения трихинелл. Затем проводят отмывание трихинелл до полного просветления надосадочной жидкости, но не менее 10 раз. Промытый фосфатно-буферным раствором осадок, содержащий личинки трихинелл, центрифугируют на холодовой центрифуге при 0oС 6000 об/мин в течение 40 минут.
Извлечение водорастворимых белков из живых или замороженных личинок трихинелл проводится механической гомогенизацией в стеклянном микрогомогенизаторе типа Поттера-Эльвагейма с тефлоновым пестиком в течение 10 минут при 0oС и 2000 об/мин. В дальнейшем фрагменты разрушаются ультразвуком с амплитудой колебания волновода 30+10 мкм в три приема по 30 сек с интервалом в 1 минуту. Затем гомогенат в соотношении 1:5 осадка к раствору в 0,25%-ном растворе трипсина при 37oС выдерживают в термостате в течение 2-х часов. Отмывают фосфатно-солевым раствором рН 7,3 и центрифугируют при 0oС 6000 об/мин в течение 40 минут. Затем массу помещают в искусственный желудочный сок в соотношении 1:2 для переваривания в термостате при температуре 37oС на 18 часов.
Осадок отмывают стерильным фосфатносолевым буфером трижды, центрифугируя его при 6000 об/мин, при температуре 0oС в течение 40 минут. Объем осадка определяют в мерном цилиндре, разводят его стерильным фосфатно-солевым буфером рН 7,3 в 200 раз. Полученную эмульсию разводят по объему двойным количеством стерильного 8%-ного раствора сахарозы, разливают по стерильным флакончикам по 10-20 мл. В каждый флакончик добавляют по 1 мл среды высушивания, замораживают в жидком азоте.
Подготовленные таким образом флаконы с препаратом в замороженном состоянии помещают в камеру для лиофильной сушки. Лиофилизацию проводят в вакууме по соответствующей схеме, флаконы с высушенным препаратом закрывают резиновыми пробками, покрывают алюминиевыми колпачками и закрывают на закаточной машине.
Готовый препарат представляет собой сухую аморфную массу белого цвета, состоящую из полисахаридных комплексов, выделенных из мышечных личинок трихинелл. Консистенция его - аморфная, сухая.
При внутрикожном введении инжекторным способом в разведении 1:10 при помощи безигольного инъектора аллерген у зараженных трихинеллами животных вызывает положительную кожную реакцию.
Стерильность препарата определяется согласно "Методическим указаниям по бактериологическому контролю стерильности биологических препаратов". Пробы из каждой серии высевают на МПБ, МПА (аэробы), тиогликолиевую среду (аэробы). Посевы культивируются в термостате при 37oС в течение 5-7 суток и в течение этого срока должны быть стерильными.
На безвредность аллерген проверяется на белых мышах (3-5), вводится им через иглу внутрибрюшинно в дозе 1 мл на голову. В процессе наблюдения все мыши должны остаться живыми.
Специфичность проверяется на зараженных трихинеллами свиньях внутрикожным инжекторным введением аллергена в дозе 0,2 мл в верхнюю поверхность ушной раковины. Реакцию учитывают через 30, 60, 90 и 120 минут после введения. Местная реакция проявляется первые 15-20 минут (реакция немедленного типа) и сохраняется до 120 минут. Положительной реакция считается при значительном покраснении участка кожи на месте введения и папула размером 10•10 мм и больше.
В условиях производства в трех хозяйствах Ростовской области и Краснодарского края нами комиссионно на 325 свиньях разных возрастов неблагополучных по трихинеллезу хозяйств, подозреваемых в заражении трихинеллами, проведено испытание непосредственно в условиях ферм. Место инъекции дезинфицировали по общепринятым правилам. Перед применением препарата проверяли этикетку, где указано название аллергена, номер серии, количество доз, срок годности. Препарат разводили перед применением раствором хлорида натрия 0,9%-ного в соотношении 1:10. Во всех случаях аллерген показал специфичность в различных хозяйствах и на разных возрастных группах от 33,3 до 66,6, 100%. В том числе обследовали 10 свиноматок в Краснодарском крае, которые ранее были обследованы по методу ИФА и шесть из них показали сомнительный результат. Нами у всех 10 свиноматок аллерген дал отрицательный результат, достоверность которого подтверждена методом переваривания в искусственном желудочном соке.
При получении сомнительных результатов кожную пробу следует повторить через 2-3 дня (после стихания местной реакции на предыдущее тестирование). Неиспользованный в течение дня разведенный препарат подлежит утилизации (см. таблицу - схема учета реализации).
Технико-экономическая эффективность предлагаемого технического решения задачи по сравнению с прототипом.
Достигается 33,3-100%-ная диагностическая эффективность аллергена на зараженных трихинеллами животных. В отличие от прототипа - кислоторастворимого аллергена БелНИИЭВ, показавшего при сравнительном испытании эффективность, не превышающую 40%.
Предлагаемый нами аллерген может быть рекомендован для массовых эпизоотологических обследований в хозяйствах, неблагополучных по трихинеллезу.
Claims (1)
- Аллерген для прижизненной диагностики трихинеллеза у свиней, представляющий собой полисахаридные комплексы мышечных личинок трихинелл, выделенные путем механической гомогенизации и воздействия ультразвука.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000108972/13A RU2210985C2 (ru) | 2000-04-10 | 2000-04-10 | Аллерген для прижизненной диагностики трихинеллеза у свиней |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000108972/13A RU2210985C2 (ru) | 2000-04-10 | 2000-04-10 | Аллерген для прижизненной диагностики трихинеллеза у свиней |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000108972A RU2000108972A (ru) | 2003-06-20 |
| RU2210985C2 true RU2210985C2 (ru) | 2003-08-27 |
Family
ID=29245169
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000108972/13A RU2210985C2 (ru) | 2000-04-10 | 2000-04-10 | Аллерген для прижизненной диагностики трихинеллеза у свиней |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2210985C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2339038C2 (ru) * | 2006-08-15 | 2008-11-20 | Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина (ВИГИС) | Способ прижизненной диагностики трихинеллеза плотоядных и всеядных животных |
| RU2384299C1 (ru) * | 2008-11-10 | 2010-03-20 | Государственное научное учреждение (ГНУ) Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина (ВИГИС) | Способ диагностики трихинеллеза у экспериментально зараженных лабораторных животных |
-
2000
- 2000-04-10 RU RU2000108972/13A patent/RU2210985C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| БЕССОНОВ А.С. Диагностика трихинеллеза, часть II, 1975, с.43. БЕССОНОВ А.С. Иммунитет и диагностика трихинеллеза в кн.: Трихинеллез. - М.: Колос, 1976, с.58. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2339038C2 (ru) * | 2006-08-15 | 2008-11-20 | Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина (ВИГИС) | Способ прижизненной диагностики трихинеллеза плотоядных и всеядных животных |
| RU2384299C1 (ru) * | 2008-11-10 | 2010-03-20 | Государственное научное учреждение (ГНУ) Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина (ВИГИС) | Способ диагностики трихинеллеза у экспериментально зараженных лабораторных животных |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Twort et al. | A method for isolating and cultivating the mycobacterium enteritidis chronicæ pseudotuberculosæ bovis, Jöhne, and some experiments on the preparation of a diagnostic vaccine for pseudo-tuberculous enteritis of bovines | |
| Chauhan | Poultry diseases, diagnosis and treatment | |
| Nicolau et al. | Borna disease and enzootic encephalo-myelitis of sheep and cattle | |
| RU2178711C1 (ru) | Способ прогнозирования заболеваний копытец у коров после отела | |
| CN108030925B (zh) | 一种冻干保护剂和冻干疫苗制品及其制备方法 | |
| RU2210985C2 (ru) | Аллерген для прижизненной диагностики трихинеллеза у свиней | |
| CN105770892A (zh) | 一种防治鸡心包积液-肝炎综合征生物兽药的制备方法 | |
| CN1509765A (zh) | 卵黄抗体冻干制剂及其制备方法 | |
| US3318775A (en) | Production of viral antigens with n-acetyl-ethyleneimine | |
| CN110559421B (zh) | 胎盘转移因子的医药用途及其制备方法 | |
| CN1132631C (zh) | 抗鸭传染性浆膜炎兽药的制备方法 | |
| CN114042152A (zh) | 一种鸭肠炎沙门氏菌病灭活疫苗及其制备方法 | |
| Bulatov et al. | Biochemical Analysis of the Blood of Cattle after Vaccination with a Heterologous Vaccine for Lumpy Skin Disease | |
| NO118229B (ru) | ||
| RU2725248C1 (ru) | Способ активирования онкосфер цестод для лабораторной наработки антигена | |
| US1924968A (en) | Process for the manufacture of vaccines | |
| RU2057535C1 (ru) | Способ получения растворимого в воде порошка фибрина | |
| Кісера et al. | Educational and methodological manual for conducting laboratory classes on special epizootology on infectious diseases common to several species of animals | |
| Abdusattarov et al. | Ways to increase the effectiveness of hyperimmune serum against colibacteriosis, salmonellosis and pasteureellosis of lambs | |
| RU2233175C2 (ru) | Вакцинный препарат для профилактики аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур | |
| SU132772A1 (ru) | Способ изготовлени тканевого биостимул тора | |
| Maberly | THE RINDERPEST IN SOUTH AFRICA. | |
| CN109481672A (zh) | 一种增强藏羊口蹄疫疫苗免疫效果的免疫制剂及提取方法 | |
| White | Bovine pediatrics | |
| Mettam | On certain septicæmias and some other infections of young animals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050411 |