[go: up one dir, main page]

RU2210381C2 - Peptide-containing preparation and method for its preparing - Google Patents

Peptide-containing preparation and method for its preparing Download PDF

Info

Publication number
RU2210381C2
RU2210381C2 RU2001128704A RU2001128704A RU2210381C2 RU 2210381 C2 RU2210381 C2 RU 2210381C2 RU 2001128704 A RU2001128704 A RU 2001128704A RU 2001128704 A RU2001128704 A RU 2001128704A RU 2210381 C2 RU2210381 C2 RU 2210381C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
peptide
sucrose
gelatin
ascorbic acid
polyglucin
Prior art date
Application number
RU2001128704A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
А.И. Кобатов
Н.И. Кузнецов
Ю.В. Тяготин
Original Assignee
Кобатов Алексей Иванович
Кузнецов Николай Ильич
Тяготин Юрий Васильевич
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Кобатов Алексей Иванович, Кузнецов Николай Ильич, Тяготин Юрий Васильевич filed Critical Кобатов Алексей Иванович
Priority to RU2001128704A priority Critical patent/RU2210381C2/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2210381C2 publication Critical patent/RU2210381C2/en

Links

Images

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, peptides, pharmacy. SUBSTANCE: invention relates to the development of novel medicinal forms of biologically active peptide compounds. Preparations comprises an active component peptide and protective medium consisting of sucrose, polyglucin, cacao powder, gelatin and ascorbic acid in the following ratio of components, wt.-% per dry matter: gelatin, 16-20; sucrose, 46-52; polyglucin, 6.0-10.0; ascorbic acid, 2.5-3.5; cacao powder, 6.0-8.0; biologically active peptide, the balance. Interferon, insulin, interleukin can be used as a biologically active peptide. Method for preparing the preparation involves mixing peptide with a mixture of sucrose, polyglucin, cacao powder, gelatin and ascorbic acid followed by placing mixture into matrix and tableting by sublimation drying at temperature from 25 to 35 C under pressure 8-15 Pa for at least 48 h. Proposed technology provides the prolonged retention of preparation activity in storage and high effectiveness in therapeutic using. EFFECT: improved preparing method, valuable medicinal properties of preparation. 5 cl, 2 dwg, 2 tbl, 5 ex

Description

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способам получения новых форм биологически активных пептидных соединений (БАПС), таких как интерферон, интерлейкины и т.п., и может быть использовано в медицине, ветеринарии и смежных отраслях. The invention relates to the field of biotechnology, and in particular to methods for producing new forms of biologically active peptide compounds (BAPS), such as interferon, interleukins, etc., and can be used in medicine, veterinary medicine and related industries.

В настоящее время большинство пептидных препаратов, такие как интерферон, интерлейкины, инсулин, выпускают в ампулах, содержащих раствор или сухой препарат, предназначенный для внутривенного или внутримышечного введения. Однако данная форма введения достаточно неудобна в повседневной практике при назначении длительных курсов лечения, что ставит вопрос о необходимости разработки других форм применения препаратов, в частности, использования аэрозолей, свечей или таблеток, содержащих БАПС. Currently, most peptide preparations, such as interferon, interleukins, insulin, are produced in ampoules containing a solution or a dry preparation intended for intravenous or intramuscular administration. However, this form of administration is quite inconvenient in everyday practice when prescribing long courses of treatment, which raises the question of the need to develop other forms of drug use, in particular, the use of aerosols, suppositories, or tablets containing BAPS.

Так, известны препараты для ректального введения, содержащие смесь интерферона и антиоксиданта - альфа-токоферола ацетата (пат. РФ 2057544, 1996, кл. А 61 К 38/21), аэрозоли, содержащие смесь БАПС, декстранов и буферных растворов (пат. РФ 2095081, 1997, кл. А 61 К 38/21) и т.д. So, there are known preparations for rectal administration containing a mixture of interferon and an antioxidant - alpha-tocopherol acetate (US Pat. RF 2057544, 1996, class A 61 K 38/21), aerosols containing a mixture of BAPS, dextrans and buffer solutions (US Pat. 2095081, 1997, CL A 61 K 38/21), etc.

Наиболее удобной формой применения являются таблетки для перорального применения, однако в случае использования в качестве активного начала БАПС, последние, как правило, теряют значительную часть активности в ходе таблетирования и хранения, что ограничивает спектр применения БАПС. The most convenient form of use is tablets for oral use, however, if BAPS is used as the active principle, the latter, as a rule, lose a significant part of their activity during tabletting and storage, which limits the spectrum of BAPS use.

Одной из наиболее перспективных форм введения пептидных препаратов является сублингвальное введение, в ходе которого они всасываются в кровь наиболее быстрым и щадящим для активного начала образом, однако данная лекарственная форма для таких препаратов в настоящее время еще не отработана. One of the most promising forms of administration of peptide drugs is sublingual administration, during which they are absorbed into the blood in the most rapid and sparing way for an active principle, however, this dosage form for such drugs has not yet been developed.

В настоящее время для получения сухих биопрепаратов в виде таблеток используют в основном методы прессования в связи с большой производительностью и относительно низкой себестоимостью (Технология лекарственных форм./Под ред. Л.А. Ивановой, М., Медицина, т. 2, с.134). Процесс включает в себя получение действующего биоагента, его сублимационное обезвоживание и измельчение, смешивание активного начала со вспомогательными веществами (наполнителями, разрыхлителями, связующими веществами и т.д.), увлажнение и гранулирование полученной смеси и прессование таблеток под давлением 25-250 мПа. Currently, to obtain dry biological products in the form of tablets, mainly pressing methods are used due to their high productivity and relatively low cost (Technology of dosage forms / Ed. By L.A. Ivanova, M., Medicine, vol. 2, p. 134). The process includes obtaining an active bioagent, its freeze-drying and grinding, mixing the active principle with excipients (fillers, disintegrants, binders, etc.), moistening and granulating the resulting mixture, and compressing tablets under a pressure of 25-250 MPa.

К недостаткам данного способа следует отнести его многостадийность, а также значительную инактивацию активного начала. The disadvantages of this method include its multi-stage, as well as significant inactivation of the active principle.

Прототипом заявляемого препарата и способа его получения является технология получения сухого препарата на основе тимопентина (патент США 5036049, 1990 г. , кл. А 61 К 37/02). Препарат получают путем смешения растворов тимопентина с защитной средой, состоящий из углеводов (лактоза, сахароза, раффиноза) и аминокислот (глицин, лизин, аспарагин), последующей сублимационной сушки смеси в ампулах с их последующей запайкой. Полученный после сублимационного высушивания биопрепарат имел достаточно высокую биологическую активность и мог в запаянном виде длительно храниться при температуре 4-8oС без заметного снижения своих первоначальных биологических характеристик.The prototype of the claimed drug and its production method is a technology for producing a dry preparation based on thymopentin (US patent 5036049, 1990, class A 61 K 37/02). The drug is obtained by mixing solutions of thymopentin with a protective environment, consisting of carbohydrates (lactose, sucrose, raffinose) and amino acids (glycine, lysine, asparagine), subsequent freeze-drying of the mixture in ampoules, followed by sealing. The biological product obtained after freeze-drying had a rather high biological activity and could be stored in a sealed form for a long time at a temperature of 4-8 o C without a noticeable decrease in its initial biological characteristics.

Недостатком препарата и технологии его получения является необходимость предварительной регидратации препарата перед использованием, невозможность хранения препарата в присутствии воздуха без существенной потери активности, невозможность применения и хранения препарата в виде таблетки. The disadvantage of the drug and the technology for its preparation is the need for preliminary rehydration of the drug before use, the inability to store the drug in the presence of air without a significant loss of activity, the inability to use and store the drug in tablet form.

Задачей, решаемой авторами, являлась разработка состава таблетки, содержащей пептиды в качестве активного начала, обеспечивающего стабильность БАПС при хранении и технологии его получения, которая может быть использована бублингвально. The problem solved by the authors was the development of a tablet composition containing peptides as an active principle, ensuring the stability of BAPS during storage and the technology for its preparation, which can be used sublingually.

Техническое решение данной задачи было найдено на основе получения таблеток с помощью модифицированного тритурационного способа, используемого для получения таблеток нитроглицерина и т.п. особо опасных химических препаратов. A technical solution to this problem was found on the basis of obtaining tablets using a modified trituration method used to obtain nitroglycerin tablets, etc. highly hazardous chemicals.

Сущность тритурационного способа получения таблеток состоит в получении тонкодисперсных порошков активного начала и вспомогательных веществ, например лактозы или глюкозы, смешении их с растворами этанола до образования пластичной массы, которая затем втирается в матрицу и сушится на воздухе (Технология лекарственных форм./Под ред. Л.А. Ивановой, М., Медицина, т. 2, с. 291). The essence of the trituration method for producing tablets is to obtain fine powders of the active principle and auxiliary substances, for example, lactose or glucose, mixing them with ethanol solutions until a plastic mass is formed, which is then rubbed into the matrix and dried in air (Technology of dosage forms / Ed. L .A. Ivanova, M., Medicine, vol. 2, p. 291).

Способ эффективен для нитроглицерина и т.п. химических соединений, но при переходе на биологические препараты становится неперспективным в связи с трудностями получения тонкодисперсных порошков при сохранении активности биологического агента, а также относительно невысокой производительностью. Кроме того таблетки такого типа могут иметь только ограниченное применение в связи с недостаточной прочностью и высокой гидроскопичностью из-за их высокой пористости. The method is effective for nitroglycerin and the like. chemical compounds, but when switching to biological preparations, it becomes unpromising due to the difficulties in obtaining fine powders while maintaining the activity of the biological agent, as well as relatively low productivity. In addition, tablets of this type can have only limited use due to insufficient strength and high hydroscopicity due to their high porosity.

Указанный метод позволяет проводить процесс приготовления готовой лекарственной формы в наиболее щадящем режиме, сохраняя биологическую активность входящих в нее ингредиентов. The specified method allows the process of preparing the finished dosage form in the most sparing mode, while maintaining the biological activity of its constituent ingredients.

Однако именно это свойство таблеток обеспечивает максимально быстрое усвоение БАВ клетками и позволяет использовать указанные таблетки нетрадиционным образом, в частности, осуществлять введение БАВ в организм сублингвально. However, it is this property of the tablets that ensures the fastest assimilation of biologically active substances by cells and allows the use of these tablets in an unconventional way, in particular, the introduction of biologically active substances into the body sublingually.

Однако при включении в состав таблетки пептидов приходится одновременно решать несколько задач:
- сохранить пористость таблетки и возможность ее сублингвального применения, что практически исключает возможность использования защитной оболочки или капсулы;
- сохранить активность пептидов при хранении в условиях их активного контакта с кислородом и влагой внешней среды.
However, when peptides are included in a tablet, several problems have to be solved simultaneously:
- save the porosity of the tablet and the possibility of its sublingual use, which virtually eliminates the possibility of using a protective shell or capsule;
- to maintain the activity of peptides during storage under conditions of their active contact with oxygen and moisture in the environment.

Для преодоления данной проблемы была разработана рецептура биопрепарата на основе БАПС, обеспечивающая стабильность пространственной конфигурации пептида и тем самым снижающего его инактивацию. To overcome this problem, a biopreparation based on BAPS was developed, which ensures the stability of the spatial configuration of the peptide and thereby reduces its inactivation.

В основу рецептуры было положено установленное авторами свойство полиглюкина и порошка какао при введении в смесь желатины и сахарозы создавать в вязкой среде сетчатую пространственную полифункциональную структуру, в узлах которой, по-видимому, размещаются биполярные молекулы пептидов, дополнительно защищенные от воздействия негативных факторов внешней среды входящим в состав защитной оболочки антиокислителем - аскорбиновой кислотой. The formulation was based on the property of polyglucin and cocoa powder, established by the authors, when gelatin and sucrose were introduced into the mixture, to create a networked spatial multifunctional structure in a viscous medium, at the nodes of which, apparently, bipolar peptide molecules are placed that are additionally protected from the effects of negative environmental factors by in the composition of the protective shell with an antioxidant - ascorbic acid.

Такая структура позволяет осуществлять относительно легкую дегидратацию полученной смеси, что и позволило использовать технологию лиофильной сушки. This structure allows relatively easy dehydration of the resulting mixture, which allowed the use of freeze drying technology.

Полученный в результате препарат имеет следующий состав конечного продукта, мас.%:
Желатина - 16-20
Cахароза - 46-52
Полиглюкин - 6,0-10,0
Аскорбиновая кислота - 2,5-3,5
Порошок какао - 6,0-8,0
Биологически активный пептид - остальное
В качестве пептидов он содержит интерферон, интерлейкины, инсулин и т.п. соединения.
The resulting preparation has the following composition of the final product, wt.%:
Gelatin - 16-20
Sugarose - 46-52
Polyglukin - 6.0-10.0
Ascorbic acid - 2.5-3.5
Cocoa Powder - 6.0-8.0
Biologically active peptide - the rest
As peptides, it contains interferon, interleukins, insulin, etc. connections.

Введение меньших концентраций антиокислителя не гарантирует полноты защиты пептида от действия кислорода, введение больших концентраций экономически нецелесообразно. The introduction of lower concentrations of antioxidant does not guarantee the full protection of the peptide from oxygen, the introduction of large concentrations is not economically feasible.

При выходе концентраций полиглюкина, желатины, сахарозы и какао-порошка за заявляемые параметры нарушается внутренняя структура препарата и либо не образуется таблетка, либо при сушке существенно возрастает инактивация БАПС. When the concentrations of polyglucin, gelatin, sucrose and cocoa powder exceed the declared parameters, the internal structure of the drug is violated and either the tablet does not form, or when drying, BAPS inactivation increases significantly.

Особенностью применяемой технологии получения таблетки является
введение в смесь БАПС с сахарозой смеси полиглюкина желатины и порошка какао с аскорбиновой кислотой и проведения сушки помещенного в матрицы биоматериала методом сублимационного высушивания при температуре от -25 до -35oС и давлении 8-15 Па в течение по крайней мере 48 часов. Полученный в результате сублимационного обезвоживания сухой биопрепарат (таблетки) извлекаются из матриц и подвергаются биологическому тестированию.
A feature of the technology used to obtain tablets is
introducing into the mixture of BAPS with sucrose a mixture of polyglucin gelatin and cocoa powder with ascorbic acid and drying the biomaterial placed in the matrix by freeze-drying at a temperature of from -25 to -35 o C and a pressure of 8-15 Pa for at least 48 hours. Dry biopreparation (tablets) obtained as a result of freeze-drying is extracted from matrices and subjected to biological testing.

Таблетки имели однородные по всему объему структуру и светло-коричневую окраску. Диаметр таблеток - 19.5 мм, высота - 6.6 мм, вес - 0.27 г. При падении на твердую горизонтальную поверхность с высоты 1 м таблетки механически не повреждались, а полностью сохраняя свою первоначальную форму. Органолептически таблетки имели сладковатый вкус с оттенком какао. Полное растворение таблеток в воде происходит за 30 сек. The tablets had a structure homogeneous throughout the volume and a light brown color. The diameter of the tablets is 19.5 mm, the height is 6.6 mm, and the weight is 0.27 g. When dropped onto a solid horizontal surface from a height of 1 m, the tablets were not mechanically damaged, but completely retained their original shape. Organoleptically, the tablets had a sweet taste with a touch of cocoa. Complete dissolution of the tablets in water takes 30 seconds.

В ходе решения данной задачи удалось получить сухую таблетку, обладающую повышенной пористостью, обеспечивающей ее растворение в ротовой полости человека в течение не более 30 сек с последующим всасыванием действующего начала через слизистую рта, что позволяет использовать ее в качестве сублингвального лекарственного препарата. In the course of solving this problem, it was possible to obtain a dry tablet with increased porosity, ensuring its dissolution in the human oral cavity for no more than 30 seconds, followed by absorption of the active principle through the oral mucosa, which allows it to be used as a sublingual drug.

Сублингвальный способ использования лекарственного средства исключает возможность его разрушения пищеварительными ферментами, так как полное растворение и всасывание компонентов таблетки происходит через слизистую ротовой полости. При этом, проведенные прямые эксперименты по изучению возможного инактивирующего влияния слюнной жидкости на биологическую активность заявленных нами таблетированных сублингвальных препаратов показали, что на протяжении часового контакта заключенного в сухие таблетки действующего начала инактивации препарата обнаружено не было. The sublingual method of using the drug eliminates the possibility of its destruction by digestive enzymes, since the complete dissolution and absorption of the components of the tablet occurs through the mucous membrane of the oral cavity. Moreover, direct experiments to study the possible inactivating effect of salivary fluid on the biological activity of the tablet sublingual preparations we claimed showed that during the hour-long contact of the active principle of inactivation of the drug enclosed in dry tablets was not found.

Структура новой таблетки иллюстрируется электронной микрофотографией поперечного разреза края таблетки, полученной методом сканирования поверхности разлома (фиг. 1). Таблетка содержит в своем составе защитные компоненты, приведенные в примере 1 описания, и интерферон концентрацией 3 млн. ME на таблетку. The structure of the new tablet is illustrated by electron micrograph of a cross section of the edge of the tablet obtained by scanning the surface of the fracture (Fig. 1). The tablet contains the protective components shown in example 1 of the description, and interferon concentration of 3 million ME per tablet.

Как видно из электронной микрофотографии, препарату присуща высокая степень пористости, причем магистральные поры направлены не только вертикально (от подложки к поверхности таблетки), но и горизонтально (от периферии таблетки к центру). Появление в таблетке горизонтальной пористости, обусловленно ее составом и технологией получения и позволяет, в результате радиальной усадки препарата, извлекать таблетки, сформированные в процессе высушивания биологических растворов простым вытряхиванием. Возможность такого извлечения возникает в результате того, что при радиальной усадке таблетки между ее наружными боковыми поверхностями и внутренней поверхностью формы возникает просвет, обеспечивающий беспрепятственный выход таблетки из формы. As can be seen from electron micrographs, the drug has a high degree of porosity, and the main pores are directed not only vertically (from the substrate to the surface of the tablet), but also horizontally (from the periphery of the tablet to the center). The appearance in the tablet of horizontal porosity, due to its composition and production technology, and allows, as a result of radial shrinkage of the drug, to remove tablets formed during the drying of biological solutions by simple shaking. The possibility of such an extraction arises as a result of the fact that during radial shrinkage of the tablet between its outer side surfaces and the inner surface of the mold, a lumen appears, which ensures the unhindered exit of the tablet from the mold.

Как следует из вышеизложенного, особенностью заявляемой таблетки является ее структура, обусловленная составом используемых вспомогательных веществ и технологией получения таблетки. Природа используемого пептидного активного начала в данном случае является вторичной, хотя она и обеспечивает достигаемый после всасывания БАВ лекарственный эффект. Достигаемые в результате использования таблеток эффекты в настоящее время изучаются в медицинских центрах С. Петербурга. Наряду с достигаемым при использовании инсулина воздействием на содержание в крови сахара и улучшении состояния иммунитета при использовании препарата с интерлейкином, отмечается большое влияние сублингвального использования интерферона на эффективность лечения гепатита С, превосходящее по уровню использование интерферонсодержащих препаратов, вводимых в организм иными методами, в первую очередь - путем инъекций. Последние результаты получены сотрудниками кафедры инфекционных болезней С.Петербургской медицинской академии последипломного образования при проведении сравнительных испытаний традиционных препаратов, вводимых инъекционно и заявляемой таблетки, вводимой сублингвально в процессе лечения больных вирусным гепатитом С. As follows from the foregoing, a feature of the claimed tablet is its structure, due to the composition of the excipients used and the technology for producing the tablet. The nature of the peptide active principle used in this case is secondary, although it provides a drug effect achieved after absorption of biologically active substances. The effects achieved through the use of tablets are currently being studied at medical centers in St. Petersburg. Along with the effect achieved with the use of insulin on blood sugar and an improvement in the state of immunity when using the drug with interleukin, there is a great influence of sublingual use of interferon on the effectiveness of treatment of hepatitis C, which exceeds the level of use of interferon-containing drugs introduced into the body by other methods, primarily - by injection. The latest results were obtained by the employees of the Department of Infectious Diseases of S. Petersburg Medical Academy of Postgraduate Education during comparative tests of traditional drugs administered by injection and the claimed tablet, administered sublingually in the treatment of patients with viral hepatitis C.

Оценка была проведена в пилотном исследовании на добровольцах, больных вирусным гепатитом С. Перед началом исследования у всех пациентов было получено информированное согласие. Данное исследование было рандомизированное и двойное слепое. Отобранные пациенты методом случайных чисел были разделены на две группы: исследуемую (группа 1) и контрольную (группа 2). В группу 1 вошло 19 человек, в группу 2 - 21 человек. В исследуемой группе пациенты получали препарат, а в контрольной - плацебо. The evaluation was carried out in a pilot study on volunteers with hepatitis C virus. Before the start of the study, all patients received informed consent. This study was randomized and double blind. The randomized patients were divided into two groups: the study (group 1) and the control (group 2). Group 1 included 19 people, group 2 - 21 people. In the study group, patients received the drug, and in the control group, placebo.

Эффективность данной формы препарата и способа применения оценивалась по следующим показателям: активности АлаТ, частоте положительной реакции ПЦР в сыворотке крови и по уровню эндогенного интерферона (определялась индуцированная активность). Курс терапии ИФН составлял 4 месяца ежедневного приема препарата. The effectiveness of this form of the drug and method of use was evaluated by the following indicators: AlaT activity, the frequency of a positive PCR reaction in blood serum and the level of endogenous interferon (the induced activity was determined). The course of IFN therapy was 4 months of daily administration of the drug.

По своим исходным данным обе группы не имели различий. Так активность АлаТ до начала исследования в группе 1 равнялась 120 е/л±5,25 е/л (N=40 е/л), в группе 2-115 е/л±4,5 е/л, реакция ПЦР в 1 группе была положительной у 19 человек, в группе 2 - у 21 человека, показатели индуцированной активности ИФН-α в 1-й группе равнялись 10±0,5 пг/мл и 12,5±0,5 пг/мл соответственно в 2-й группе. Результаты проведенного исследования показали хорошую переносимость препарата, отсутствие побочных реакций, которые возникают при подкожном введении ИФН. Активность АлаТ после курса терапии у пациентов 1-й группы равнялась 45±2,5 е/л, в группе 2 - 51±1,25 е/л. Наиболее важным показателем для оценки эффективности терапии ИФН является определение частоты положительной реакции ПЦР в сыворотке крови, учитывая, что этот показатель характеризует репликативную активность вируса. Положительная ПЦР в сыворотке крови у больных группы 1 после окончания терапии данной формой ИФН при сублингвальном введении определялась в 2 случаях из 19, а группе 2 (контрольной), получавшей плацебо - в 10 из 21 случая. Уровень ИФН у пациентов исследуемой группы (группа 1) возрастал с 10±0,5 пг/мл до 20±1,2 пг/мл, а группе 2 - с 12,5±0,5 пг/мл до 14,5±1 пг/мл. According to their initial data, both groups had no differences. So the activity of AlaT before the start of the study in group 1 was 120 e / l ± 5.25 e / l (N = 40 e / l), in the group 2-115 e / l ± 4.5 e / l, the PCR reaction in 1 the group was positive in 19 people, in group 2 - in 21 people, the indices of the induced activity of IFN-α in the 1st group were 10 ± 0.5 pg / ml and 12.5 ± 0.5 pg / ml, respectively, in 2- th group. The results of the study showed good tolerability of the drug, the absence of adverse reactions that occur with subcutaneous administration of IFN. The activity of AlaT after the course of therapy in patients of the 1st group was 45 ± 2.5 e / L, in group 2 - 51 ± 1.25 e / L. The most important indicator for evaluating the effectiveness of IFN therapy is determining the frequency of a positive PCR reaction in blood serum, given that this indicator characterizes the replicative activity of the virus. Positive serum PCR in patients of group 1 after the end of therapy with this form of IFN with sublingual administration was determined in 2 cases out of 19, and group 2 (control) receiving placebo in 10 out of 21 cases. The IFN level in patients of the study group (group 1) increased from 10 ± 0.5 pg / ml to 20 ± 1.2 pg / ml, and group 2 - from 12.5 ± 0.5 pg / ml to 14.5 ± 1 pg / ml.

. В качестве оборудования могут использоваться сублимационные установки камерного типа фирм "Хох Вакуум" (Германия), Вир-Тис (США ) и подобное им оборудование. . As the equipment can be used sublimation chamber-type installations firms "Hoh Vacuum" (Germany), Vir-Tees (USA) and similar equipment.

Полученный сухой биопрепарат может храниться несколько месяцев при температуре +4 - +40oС практически без потери активности.The resulting dry biological product can be stored for several months at a temperature of +4 - +40 o With almost no loss of activity.

Сущность заявляемой технологии иллюстрируется следующими примерами. The essence of the claimed technology is illustrated by the following examples.

Пример 1. К субстанциям, содержащим интерферон человека с активностью от 0,9•108 ME/мг белка добавляли защитную среду следующего состава ( мас.% в расчете на сухое вещество): желатина - 16, сахароза - 50, полиглюкин - 8, аскорбиновая кислота - 2,5, порошок какао - 8. Соотношение объемов субстанции к защитной среде - 1:19. Полученный раствор проверяли на исходную активность интерферона методом стандартного биологического тестирования на клетках L-68, зараженных вирусом везикулярного стоматита и после проверки активности разливали по стерильным алюминиевым формам диаметром 20 мм и высотой 7 мм. Дозирование осуществляют с помощью дозатора по 2 см.куб. в каждую форму с погрешностью ±5%.Example 1. To substances containing human interferon with activity from 0.9 • 10 8 ME / mg protein was added a protective medium of the following composition (wt.% Calculated on the dry matter): gelatin - 16, sucrose - 50, polyglucin - 8, ascorbic acid - 2.5, cocoa powder - 8. The ratio of the volumes of the substance to the protective environment is 1:19. The resulting solution was checked for the initial activity of interferon by standard biological testing on L-68 cells infected with the vesicular stomatitis virus and, after checking the activity, it was poured into sterile aluminum molds with a diameter of 20 mm and a height of 7 mm. Dosing is carried out using a dispenser of 2 cm3. in each form with an error of ± 5%.

Затем формы с разлитым в них материалом помещали на предварительно охлажденные до минус 25oС полки сублимационной камеры установки ТГ-5 (Германия), где и проводили предварительное замораживание материала до температуры -25±2oС, вакуумирование сублимационной камеры до давления 10 Па и сублимационное обезвоживание препарата интерферона.Then the molds with the material poured into them were placed on the shelves of the sublimation chamber of the TG-5 installation (Germany), previously cooled to minus 25 o С, where they were pre-frozen to a temperature of -25 ± 2 o С, the sublimation chamber was evacuated to a pressure of 10 Pa and sublimation dehydration of the drug interferon.

После достижения материалом конечной влажности 3,2% в камеру вводили аргон до достижения нормального давления и осуществляли выгрузку готовых таблеток интерферона. After the material reached a final moisture content of 3.2%, argon was introduced into the chamber until normal pressure was reached, and finished tablets of interferon were unloaded.

Полученные таблетки повергали повторному тестированию (результат - 0.7•106 МЕ/мг белка) и помещали на хранение. При исходной активности интерферона в таблетке 0.7•106 при хранении 12 месяцев при +4oС она составила 0.8•105, а при хранении 3 месяца при +40oС - 0.6•105.The obtained tablets were subjected to re-testing (the result is 0.7 • 10 6 IU / mg protein) and placed in storage. When the initial activity of interferon in the tablet was 0.7 • 10 6 when stored for 12 months at +4 o С, it was 0.8 • 10 5 , and when stored for 3 months at +40 o С - 0.6 • 10 5 .

Пример 2. В условиях примера 1 при активности исходного интерферона 3.9•107 МЕ/мг белка проводилось таблетирование препарата интерферона при введении в исходную субстанцию защитной среды, содержащей в себе следующие концентрации веществ-протекторов ( мас.% в расчете на сухое вещество): желатина - 20, сахароза - 46, полиглюкин - 7, аскорбиновая кислота - 3.5, порошок какао - 8.Example 2. Under the conditions of Example 1, with the activity of the starting interferon 3.9 • 10 7 IU / mg protein, the preparation of interferon was tabletted with the introduction of a protective medium containing the following concentrations of protective substances (wt.% Based on dry matter) into the starting substance: gelatin - 20, sucrose - 46, polyglucin - 7, ascorbic acid - 3.5, cocoa powder - 8.

В результате сублимационного таблетирования интерферона активность таблетки - 3.0•107 МЕ/мг белка; при хранении 12 месяцев при + 4oС она составила 3.0•107 МЕ/мг белка, а при хранении 3 месяца при + 40oС -3.0•107 МЕ/мг белка, т.е. сохранность белка - 100%
Пример 3. В условиях примера 1 при активности исходного интерферона 0.8•104 МЕ/мг белка проводилось таблетирование препарата интерферона при введении в исходную субстанцию защитной среды, содержащей в себе следующие концентрации веществ-протекторов ( мас.% в расчете на сухое вещество): желатина - 18, сахароза - 46, полиглюкин - 10, аскорбиновая кислота - 3.0, порошок какао - 7.5.
As a result of sublimation tableting of interferon, the activity of the tablet is 3.0 • 10 7 IU / mg protein; when stored for 12 months at + 4 o С, it amounted to 3.0 • 10 7 IU / mg of protein, and when stored for 3 months at + 40 o С -3.0 • 10 7 IU / mg of protein, i.e. protein preservation - 100%
Example 3. Under the conditions of example 1, with the activity of the initial interferon 0.8 • 10 4 IU / mg protein, the preparation of interferon was tabletted with the introduction of a protective medium containing the following concentrations of protective substances (wt.% Based on dry matter) into the initial substance: gelatin - 18, sucrose - 46, polyglucin - 10, ascorbic acid - 3.0, cocoa powder - 7.5.

В результате сублимационного таблетирования интерферона активность таблетки - 0.8•104 МЕ/мг белка; при хранении 12 месяцев при +4oС она составила 0.8•104 МЕ/мг белка, а при хранении 3 месяца при +40oС - 0.6•104 МЕ/мг белка.As a result of sublimation tableting of interferon, the activity of the tablet is 0.8 • 10 4 IU / mg protein; when stored for 12 months at +4 o С, it amounted to 0.8 • 10 4 IU / mg of protein, and when stored for 3 months at +40 o С - 0.6 • 10 4 IU / mg of protein.

Пример 4. К субстанции инсулина из расчета 2.5 мг на таблетку добавляют защитную среду, содержащую в мас.% в расчете на сухой продукт: 48 сахарозы, 20 желатины, 8 полиглюкина, 3 аскорбиновой кислоты при соотношении между объемами субстанции инсулина и защитной среды составляют 1:9. Example 4. To a substance of insulin at the rate of 2.5 mg per tablet, a protective medium containing in wt.% Calculated on a dry product is added: 48 sucrose, 20 gelatine, 8 polyglucin, 3 ascorbic acid with a ratio between the volumes of the substance of insulin and the protective environment are 1 :9.

Полученный раствор проверяют на биологическую активность на животных по снижению уровня глюкозы в крови и по содержанию конформационно активного инсулина методом иммуноферментного анализа (ИФА) по стандартной методике, описанной "Клиническая биохимия", Минск, 1976, с. 117-120. The resulting solution is tested for biological activity in animals by reducing blood glucose and the content of conformationally active insulin by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) according to the standard method described by Clinical Biochemistry, Minsk, 1976, p. 117-120.

После проверки исходных биологических характеристик раствор замораживают и сублимационно высушивают в таблеточных формах по технологии, описанной в примерах 1-3. Результаты испытаний приведены таблице 1. After checking the initial biological characteristics, the solution is frozen and freeze-dried in tablet forms according to the technology described in examples 1-3. The test results are shown in table 1.

Пример 5. К субстанции интерлейкина-8 из расчета 0.3 мг на таблетку добавляют защитную среду, содержащую в мас.% в расчете на сухой продукт: 50 сахарозы, 18 желатины, 8 полиглюкина, 2.8 аскорбиновой кислоты при соотношении между объемами субстанции интерлейкина-8 и защитной среды составляют 1:9. Example 5. To the substance of interleukin-8 at the rate of 0.3 mg per tablet, a protective medium is added containing in wt.% Calculated on the dry product: 50 sucrose, 18 gelatine, 8 polyglucin, 2.8 ascorbic acid with a ratio between the volumes of the substance interleukin-8 and the protective environment is 1: 9.

Полученный раствор проверяют на биологическую активность методом дегрануляции лейкоцитов крови человека и по содержанию конформационно активного интерлейкина методом иммуноферментного анализа (ИФА). The resulting solution is checked for biological activity by degranulation of human blood leukocytes and by the content of conformationally active interleukin by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

После проверки исходных биологических характеристик раствор замораживают и сублимационно высушивают в таблеточных формах по технологии, описанной в примере 1. Результаты испытаний приведены таблице 2. After checking the initial biological characteristics, the solution is frozen and freeze-dried in tablet forms according to the technology described in example 1. The test results are shown in table 2.

Из вышеприведенных примеров следует, что предлагаемая технология позволяет получать таблетку, стабильную при хранении в широком диапазоне температур. From the above examples it follows that the proposed technology allows to obtain a tablet that is stable when stored in a wide temperature range.

Claims (4)

1. Пептидсодержащий препарат, состоящий из активного начала - пептида и защитной среды, содержащей углеводы, отличающийся тем, что в качестве углевода он содержит сахарозу, а в состав защитной среды дополнительно вводят полиглюкин, какао-порошок, желатину и аскорбиновую кислоту при следующем соотношении ингредиентов, мас. % на сухое вещество:
Желатина - 16 - 20
Сахароза - 46 - 52
Полиглюкин - 6,0 - 10,0
Аскорбиновая кислота - 2,5 - 3,5
Порошок какао - 6,0 - 8,0
Биологически активный пептид - Остальное
2. Пептидсодержащий препарат по п. 1, отличающийся тем, что в качестве пептида он содержит интерферон.
1. A peptide-containing preparation consisting of an active principle - a peptide and a protective medium containing carbohydrates, characterized in that it contains sucrose as a carbohydrate, and polyglucin, cocoa powder, gelatin and ascorbic acid are additionally introduced into the protective medium in the following ratio of ingredients wt. % dry matter:
Gelatin - 16 - 20
Sucrose - 46 - 52
Polyglukin - 6.0 - 10.0
Ascorbic acid - 2.5 - 3.5
Cocoa Powder - 6.0 - 8.0
Biologically Active Peptide - Else
2. The peptide-containing preparation according to claim 1, characterized in that it contains interferon as a peptide.
3. Пептидсодержащий препарат по п. 1, отличающийся тем, что в качестве пептида он содержит инсулин. 3. The peptide-containing preparation according to claim 1, characterized in that it contains insulin as a peptide. 4. Пептидсодержащий препарат по п. 1, отличающийся тем, что в качестве пептида он содержит интерлейкин. 4. The peptide-containing preparation according to claim 1, characterized in that it contains interleukin as a peptide. 5. Способ получения пептидсодержащего препарата, включающий подготовку активного начала, его смешение с защитной средой и высушивание, отличающийся тем, что пептид смешивают со смесью сахарозы, полиглюкина, какао-порошка, желатины и аскорбиновой кислоты, после чего полученную смесь помещают в матрицу и таблетируют, подвергая сублимационному высушиванию при температуре от -25 до -35oС и давлении 8-15 Па в течение по крайней мере 48 ч.5. A method of obtaining a peptide-containing preparation, including preparing the active principle, mixing it with a protective medium and drying, characterized in that the peptide is mixed with a mixture of sucrose, polyglucin, cocoa powder, gelatin and ascorbic acid, after which the resulting mixture is placed in a matrix and tabletted by freeze-drying at a temperature of from -25 to -35 o C and a pressure of 8-15 PA for at least 48 hours
RU2001128704A 2001-10-25 2001-10-25 Peptide-containing preparation and method for its preparing RU2210381C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001128704A RU2210381C2 (en) 2001-10-25 2001-10-25 Peptide-containing preparation and method for its preparing

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001128704A RU2210381C2 (en) 2001-10-25 2001-10-25 Peptide-containing preparation and method for its preparing

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2210381C2 true RU2210381C2 (en) 2003-08-20

Family

ID=29245958

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2001128704A RU2210381C2 (en) 2001-10-25 2001-10-25 Peptide-containing preparation and method for its preparing

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2210381C2 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2261623C1 (en) * 2004-05-18 2005-10-10 ФГУП Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (ВНИРО) Method for lyophilic drying of biological preparation
RU2432171C2 (en) * 2008-08-08 2011-10-27 Светлана Федоровна Протасова Immunostimulating drug and method for preparing it

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0745382A4 (en) * 1994-01-31 1997-10-29 Yamanouchi Pharma Co Ltd Intraorally soluble compressed molding and process for producing the same
RU2117488C1 (en) * 1997-07-30 1998-08-20 Институт нефтехимического синтеза им.А.В.Топчиева РАН Solid insulin-containing drug
RU2121350C1 (en) * 1996-06-03 1998-11-10 Стариков Виктор Васильевич Method of preparing an alpha-fetoprotein preparation
RU2152219C1 (en) * 1998-04-08 2000-07-10 Научно-Исследовательский Институт Трансплантологии И Искусственных Органов Peptides showing immunostimulating activity, method of their synthesis, drug based on thereof, splenopid and its using
RU99106516A (en) * 1999-03-30 2001-03-27 Пермское научно-производственное объединение "Биомед" METHOD OF OBTAINING ORAL DRUGS CONTAINING INTERFERON AND ORAL DRUGS CONTAINING INTERFERON IN THE FORM OF TABLETS
RU2164765C1 (en) * 2000-08-11 2001-04-10 Алешкин Владимир Андрианович Biologically active addition

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2175554C2 (en) * 1999-03-30 2001-11-10 Пермское научно-производственное объединение "Биомед" Tableted interferon preparation for oral use

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0745382A4 (en) * 1994-01-31 1997-10-29 Yamanouchi Pharma Co Ltd Intraorally soluble compressed molding and process for producing the same
RU2121350C1 (en) * 1996-06-03 1998-11-10 Стариков Виктор Васильевич Method of preparing an alpha-fetoprotein preparation
RU2117488C1 (en) * 1997-07-30 1998-08-20 Институт нефтехимического синтеза им.А.В.Топчиева РАН Solid insulin-containing drug
RU2152219C1 (en) * 1998-04-08 2000-07-10 Научно-Исследовательский Институт Трансплантологии И Искусственных Органов Peptides showing immunostimulating activity, method of their synthesis, drug based on thereof, splenopid and its using
RU99106516A (en) * 1999-03-30 2001-03-27 Пермское научно-производственное объединение "Биомед" METHOD OF OBTAINING ORAL DRUGS CONTAINING INTERFERON AND ORAL DRUGS CONTAINING INTERFERON IN THE FORM OF TABLETS
RU2164765C1 (en) * 2000-08-11 2001-04-10 Алешкин Владимир Андрианович Biologically active addition

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2261623C1 (en) * 2004-05-18 2005-10-10 ФГУП Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (ВНИРО) Method for lyophilic drying of biological preparation
RU2432171C2 (en) * 2008-08-08 2011-10-27 Светлана Федоровна Протасова Immunostimulating drug and method for preparing it

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100225153B1 (en) Porous solid preparations containing proteinaceous physiologically active substances
KR100334856B1 (en) Freeze-dried foods containing gonadotropin
EP0444692B1 (en) Thrombin composition for oral administration
US5081156A (en) Sustained-release preparation
JP4971160B2 (en) Stable PEGylated interferon formulation
EP2131810B1 (en) Oral administration of a calcitonin
JP2001511114A (en) Novel pharmaceutical composition
RU2123328C1 (en) Liposomal antiviral drug for oral using
RU2210381C2 (en) Peptide-containing preparation and method for its preparing
RU2121350C1 (en) Method of preparing an alpha-fetoprotein preparation
ES2319995T3 (en) PHARMACEUTICAL FORMULATIONS THAT INCLUDE QUITOSANE OR ONE OF ITS DERIVATIVES FOR THE INTRANASAL ADMINISTRATION OF A PROTEIN.
KR20140084354A (en) Oral administration of calcitonin
HK1250147A1 (en) A lyophilised pharmaceutical formulation and its use
EP0920329B1 (en) Stabilization of interferons in aqueous solution by arabic gum
RU2083222C1 (en) Method of preparing the enteral preparation containing alpha-interferon and enteral preparation containing alpha-interferon as tablets
CN110476031A (en) Method and device for producing freeze-dried body
WO1998051328A1 (en) Stabilisation of interferons in aqueous solution for manufacture of sublingually administered tablets
RU2651043C1 (en) Sodium deoxyribonucleate, sublingual orodispersible tablets and method of their obtaining
RU2234939C1 (en) Sublingual tablet medicinal preparation comprising alpha- interferon and method for its preparing
RU2218934C2 (en) Interferon preparation
WO2005017139A1 (en) Thrombin from venom of agkistrodon acutus used as drugs for the treatment of haemorrhage
RU2175554C2 (en) Tableted interferon preparation for oral use
JPS62152816A (en) Molding method of gel polymer
RU2432171C2 (en) Immunostimulating drug and method for preparing it
JP3028274B2 (en) Stabilization method of thrombin solid preparation

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20081026