RU2205410C2

RU2205410C2 - Method for obtaining antiidiotypical serum for predicting malignant tumors

Info

Publication number: RU2205410C2
Application number: RU2000112397/14A
Authority: RU
Inventors: Д.Ю. Пантелеев; Ю.Г. Шеин
Original assignee: Пантелеев Дмитрий Юрьевич; Шеин Юрий Германович
Priority date: 2000-05-19
Filing date: 2000-05-19
Publication date: 2003-05-27

Abstract

FIELD: medicine, immunology, oncology. SUBSTANCE: in syngeneic system at the first stage the body of reliably syngeneic animal should be introduced with cells of embryonic tissues with a chorion corresponding to 7-12- d-aged embryonic murine tissues obtained from pregnant animal females of the same syngeneic system, at the second stage 5-14 d after introduction of embryonic cells from immunized animal one should sample leucocytes to be introduced into the body of animal being syngeneic to previous one, and 4-12 d after carrying out the last immunization one should obtain serum due to sampling animal blood to be then kept at room temperature till development of dense clot, to be then centrifuged for complete erythrocytes deposition. Serum obtained should be taken, heated up to 60 C, sorbed at excessive cellular homogenate of syngeneic animals followed by centrifuging and filtration. At both stages it is possible to treat introduced cells with antimitotic agents, or introduce them together with immunostimulants, or substitute whole cells by their membranous fraction. EFFECT: higher efficiency and accuracy of diagnostics. 1 cl, 1 tbl

Description

Данное изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и касается способа получения антиэмбриональной антиидиотипической сыворотки, используемой в качестве одного из агентов при тестировании пациента на предмет диагностики злокачественной опухоли. This invention relates to medicine, in particular to immunology, and relates to a method for producing anti-embryonic anti-idiotypic serum, used as one of the agents in testing a patient for the diagnosis of a malignant tumor.

По предварительной гипотезе в процессе опухолевого роста и при эмбриогенезе существует (функционирует) сходный механизм межклеточного (межмембранного) взаимодействия, в подтверждение этой гипотезы предлагается использование антиэмбриональной антиидиотипической сыворотки, действие которой может быть существенно для выявления опухолевого роста и/или опухолевой прогрессии. Аналогичная сыворотка использована при создании способа универсальной диагностики злокачественных опухолей (см. патент СССР 1836640, G 01 N 33/80, опубл. 23.08.93). According to the preliminary hypothesis, a similar mechanism of intercellular (intermembrane) interaction exists (functions) in the process of tumor growth and during embryogenesis; in support of this hypothesis, it is proposed to use anti-embryonic anti-idiotypic serum, the action of which may be essential for detecting tumor growth and / or tumor progression. A similar serum was used to create a universal method for the diagnosis of malignant tumors (see USSR patent 1836640, G 01 N 33/80, publ. 23.08.93).

Известен способ диагностики злокачественной опухоли путем исследования скорости оседания эритроцитов под действием двух агентов - антиэмбриональной антиидиотипической сыворотки и контрольной сыворотки, при этом в качестве первого агента используют крысиную сыворотку, а второго - сыворотку крыс, которым предварительно вводят лимфоциты сингенных животных (см. патент РФ 2111495, G 01 N 33/80, опубл. 20.05.98). Причем диагностика заключается в нахождении минимального и максимального градиентов скорости оседания эритроцитов крови пациента в данных сыворотках и расчете по определенной формуле коэффициента злокачественного роста, величина которого указывает на наличие/отсутствие злокачественной опухоли. There is a method for diagnosing a malignant tumor by examining the erythrocyte sedimentation rate under the action of two agents - anti-embryonic anti-idiotypic serum and control serum, with rat serum being used as the first agent, and rat serum which is previously injected with syngenic lymphocytes (see RF patent 2111495) , G 01 N 33/80, publ. 05.20.98). Moreover, the diagnosis consists in finding the minimum and maximum gradients of the erythrocyte sedimentation rate of the patient’s blood in these sera and calculating the malignant growth coefficient by a certain formula, the value of which indicates the presence / absence of a malignant tumor.

В данном способе антиэмбриональная антиидиотипическая сыворотка используется в качестве агента, изменяющего скорость оседания эритроцитов крови пациента по сравнению с контрольной сывороткой в случае наличия злокачественного опухолевого роста клеток. In this method, anti-embryonic anti-idiotypic serum is used as an agent that changes the erythrocyte sedimentation rate of the patient’s blood compared to the control serum in the case of malignant tumor cell growth.

Настоящее изобретение направлено на решение задачи по созданию антиэмбриональной антиидиотипической сыворотки, свойства которой позволяли бы визуально контролировать наличие роста клеток злокачественных опухолей вне зависимости от гистогенеза, выявляемого при люминесцентной микроскопии. Достигаемый при этом технический результат заключается в повышении эффективности и достоверности диагностики злокачественных опухолевых заболеваний. The present invention is directed to solving the problem of creating an anti-embryonic anti-idiotypic serum, the properties of which would allow to visually monitor the presence of cancer cell growth regardless of histogenesis detected by luminescence microscopy. The technical result achieved in this case is to increase the efficiency and reliability of the diagnosis of malignant tumor diseases.

Указанный технический результат достигается тем, что при получении антиэмбриональной антиидиотипической сыворотки в сингенной системе на первом этапе производят введение в организм достоверно сингенного животного 7-12-дневных клеток эмбриональных тканей с хорионом, полученных от беременных самок, на втором этапе по истечении 5-14 дней после ввода эмбриональных клеток от имунного животного забирают лейкоциты и вводят их в организм другого, сингенного с предыдущим животного, а по истечении 4-12 дней после проведения последней иммунизации при образовании достаточного количества имунного компонента в крови животного получают сыворотку путем забора его крови, которую оставляют при комнатной температуре до образования плотного сгустка, а затем центрифугируют для полного оседания эритроцитов; полученную сыворотку отбирают, прогревают до 60^oС, сорбируют на избытке гомогената клеток сингенных животных с последующим центрифугированием и фильтрацией.The specified technical result is achieved by the fact that upon receipt of the anti-embryonic anti-idiotypic serum in the syngenic system, at the first stage, a authentically syngenic animal is introduced into the body of 7-12-day-old embryonic tissue cells with chorion obtained from pregnant females, at the second stage after 5-14 days after the embryonic cells have been introduced, the leukocytes are taken from the immune animal and introduced into the body of another syngeneous with the previous animal, and after 4-12 days after the last immunization, and formation of a sufficient amount imunnogo component in the animal's blood serum is obtained by sampling of his blood that is left at room temperature to form a dense clot, and then centrifuged for complete erythrocyte sedimentation; the resulting serum is taken, heated to 60 ^o C, sorbed on an excess of homogenate cells of syngeneic animals, followed by centrifugation and filtration.

На обоих этапах возможна обработка вводимых клеток антимитотическими агентами, или введение их с иммуностимуляторами, или замена цельных клеток их мембранной фракцией. At both stages, it is possible to treat the introduced cells with antimitotic agents, or introduce them with immunostimulants, or replace the whole cells with their membrane fraction.

Под "достаточным" количеством иммунного компонента в крови животного подразумевается такая концентрация иммуноглобулинов (класса G и М), которая позволила бы провести описанные ниже диагностические методики. "Достаточность" (или концентрацию иммунных глобулинов класса G и/или М) можно оценивать по иным известным методикам, например:
a) реакция бласттрансформации лимфоцитов, или
b) реакция преципитации, или
c) иммуноферментный анализ, или
d) радиоиммунный анализ и т.д.By "sufficient" amount of the immune component in the blood of an animal is meant a concentration of immunoglobulins (class G and M) that would allow the diagnostic methods described below. "Sufficiency" (or the concentration of immune globulins of class G and / or M) can be evaluated by other known methods, for example:
a) the reaction of blast transformation of lymphocytes, or
b) precipitation reaction, or
c) enzyme immunoassay, or
d) radioimmunoassay, etc.

Предложенный способ предполагает, что конечный продукт, которым является иммунная сыворотка, забирается от иммунного животного на конечном этапе. Например, в случае 2-этапной иммунизации забор крови производится от иммунного животного 2, в случае 3-этапной иммунизации от животного 3 и т.д. The proposed method assumes that the final product, which is the immune serum, is taken from the immune animal at the final stage. For example, in the case of a 2-stage immunization, blood is taken from an immune animal 2, in the case of a 3-stage immunization from an animal 3, etc.

Иммунными компонентами, получаемыми на конечном этапе, могут быть:
a) иммунные лимфоциты, продуцирующие иммунные глобулины классов G и/или М, или
b) моноклональные антитела, созданные на основе указанных лимфоцитов, или
c) собственно иммуноглобулины G и/или М, или
d) Fab фрагменты иммуноглобулинов (С), или
e) цельная сыворотка как простейший вариант.The immune components obtained at the final stage may be:
a) immune lymphocytes producing immune globulins of classes G and / or M, or
b) monoclonal antibodies created on the basis of these lymphocytes, or
c) the actual immunoglobulins G and / or M, or
d) Fab fragments of immunoglobulins (C), or
e) whole whey as the simplest option.

Указанные признаки являются существенными и взаимосвязаны между собой с образованием устойчивой совокупности существенных признаков, достаточной, чтобы получить сыворотку со следующими свойствами:
- в смеси с эритроцитами больных злокачественными опухолями происходит агглютинация эритроцитов в достоверно большом проценте случаев;
- в методе непрямой иммунофлюоресценции выявляется специфическое мембранное (перифирическое) свечение клеток злокачественных опухолей вне зависимости от гистогенеза при люминесцентной микроскопии, что свидетельствует об универсальной тропности (восприимчивости) получаемой сыворотки к опухолевым клеткам и может служить основанием для создания патологоанатомических тест-систем.These signs are significant and interconnected with the formation of a stable set of essential features sufficient to obtain serum with the following properties:
- in a mixture with red blood cells of patients with malignant tumors, red blood cells agglutinate in a significantly large percentage of cases;
- in the method of indirect immunofluorescence, a specific membrane (peripheral) luminescence of malignant tumor cells is detected regardless of histogenesis under luminescent microscopy, which indicates universal tropism (susceptibility) of the obtained serum to tumor cells and can serve as the basis for the creation of pathological anatomical test systems.

Сущность способа получения агента. В строго сингенной системе проводится многоэтапная иммунизация. В простейшем случае ее можно ограничить принципиально двумя этапами. На первом из них производится введение в организм достоверно сингенного животного клеток, полученных от беременных самок на определенном сроке беременности. Вводимые клетки содержат как клетки собственно эмбриона, так и клетки хориона. По истечении необходимого периода времени от имунного животного забираются любыми способами лейкоциты и вводятся в организм другого, сингенного с предыдущим животного. На обоих этапах допускается обработка вводимых клеток антимитотическими агентами, введение их с иммуностимуляторами (адьювантами) или без них или замена цельных клеток их мембранной фракцией. Сыворотка (или ее иммунный компонент) забирается от животных последней группы по истечении времени, необходимого для образования достаточного количества имунного компонента в крови животного после проведения второго этапа иммунизации. The essence of the method of obtaining the agent. In a strictly syngeneic system, multi-stage immunization is carried out. In the simplest case, it can be limited in principle to two stages. The first of them introduces into the body a reliably syngenic animal cells obtained from pregnant females at a certain period of pregnancy. The introduced cells contain both the cells of the embryo itself and the cells of the chorion. After the required period of time, leukocytes are taken by any means from the immune animal and introduced into the body of another, syngeneous with the previous animal. At both stages, it is allowed to treat the introduced cells with antimitotic agents, introduce them with or without immunostimulants (adjuvants), or replace the whole cells with their membrane fraction. Serum (or its immune component) is taken from the animals of the last group after the time necessary for the formation of a sufficient amount of the immune component in the blood of the animal after the second stage of immunization.

Могут использоваться любые системы сингенных животных, предпочтительно использование мышей. Any syngeneic system may be used, preferably using mice.

Антиидиотипическую сыворотку получают следующим образом. Anti-idiotypic serum is prepared as follows.

1. Получение 12-дневных эмбриональных клеток мышей линии BALB (с) и проведение первой иммунизации. 1. Obtaining 12-day embryonic cells of BALB mice (c) and conducting the first immunization.

На 12 день беременных самок забивают тракцией шейного отдела позвоночника или другим доступным способом. Переднюю стенку живота обрабатывают 95%-ным этанолом, вскрывают по всей передней поверхности. Два рога матки отделяют от подводящих сосудов (перерезается брыжейка), матку перерезают у ее влагалищного отдела и переносят в избыток холодного раствора Версена. Матку разрезают по длиннику, браншами отделяют в раствор эмбриональные ткани вместе с тканями хориона. Избыток раствора Версена удаляют пастеровской пипеткой, остатки маток удаляют. Эмбриональные ткани с хорионом тонко измельчают ножницами и в избытке свежего холодного раствора Версена переносят на магнитную мешалку в стерильном пенициллиновом флаконе на 25-30 мин. Спустя указанное время, взвесь фильтруют через двухслойный марлевый фильтр, клетки трижды отмывают избытком холодного раствора Хэнкса (при 1500 об/мин 3-4 мин). Концентрацию живых клеток в растворе подсчитывают в камере Горячева по известной методике. Предварительно осадив клетки центрифугированием при 1500 об/мин, удаляют избыток раствора Хэнкса, а к клеточному осадку вносят НАФ (НАФ - неполный Адьювант Фрейда) из расчета 10 млн. клеток - 0,1 мл НАФ. Смесь ресуспендируют до образования устойчивой эмульсии и вводят покапельно в область спины сингенным животным из расчета 0,1 мл эмульсии на одного. On day 12, pregnant females are killed by traction of the cervical spine or in another accessible way. The front wall of the abdomen is treated with 95% ethanol, opened over the entire front surface. Two uterine horns are separated from the delivery vessels (the mesentery is cut), the uterus is cut at its vaginal section and transferred to an excess of cold Versen solution. The uterus is cut along a long line, the branches embryonic tissues together with the chorion tissues are separated in jaws. Excess Versen's solution is removed with a Pasteur pipette, the remains of the uterus are removed. Chorionic embryonic tissue is finely chopped with scissors and in excess of fresh cold Versen solution is transferred to a magnetic stirrer in a sterile penicillin vial for 25-30 minutes. After the indicated time, the suspension is filtered through a two-layer gauze filter, the cells are washed three times with an excess of cold Hanks solution (at 1500 rpm for 3-4 minutes). The concentration of living cells in the solution is calculated in the Goryachev chamber by a known method. After preliminarily precipitating the cells by centrifugation at 1500 rpm, the excess Hanks solution is removed, and NAF (NAF - Freud's incomplete Adjuvant) is added to the cell pellet at the rate of 10 million cells - 0.1 ml of NAF. The mixture is resuspended until a stable emulsion is formed and is introduced dropwise into the back region of syngeneic animals at the rate of 0.1 ml of emulsion per one.

2. Проведение второй иммунизации. 2. Conducting a second immunization.

Спустя 14 дней после окончания первого этапа, имунных животных забивают, проводят предварительную обработку и разрез аналогично указанным выше. Удаляют селезенки и переносят их в гомогенизатор с 4 мл раствора Версена. Полученный гомогенат фильтруют через двухслойный марлевый фильтр, смесь отмывают однократно в растворе Хэнкса и наслаивают на смесь фиколл-верографин (плотность - 1077). Выделение спленоцитов (т.е. лейкоцитов, добытых из селезенки) в градиенте плотности производят при 2000 об/мин в течение 20-25 мин (в зависимости от объема исходной взвеси) и продолжают до получения ясно различимого "кольца", расположенного на границе растворов. Спленоциты ("кольцо") отбирают тонко оттянутой пастеркой, однократно отмывают в растворе Хэнкса, взвесь облучают. Доза облучения составляет 50 Гр (т.е. 5000 рад). Производят подсчет клеток и добавляют к трижды отмытым после облучения клеткам неполный Адьювант Фрейда из того же расчета, что и в п.1. Эмульсию вводят внутрибрюшинно сингенным животным из расчета 0,1 мл на одного. 14 days after the end of the first stage, the immune animals are killed, pre-treatment and incision are carried out similarly to the above. The spleens are removed and transferred to a homogenizer with 4 ml of Versen's solution. The resulting homogenate is filtered through a two-layer gauze filter, the mixture is washed once in a Hanks solution and layered on a ficoll-verographin mixture (density - 1077). Density of splenocytes (ie leukocytes extracted from the spleen) in the density gradient is performed at 2000 rpm for 20-25 min (depending on the volume of the initial suspension) and continue until a clearly distinguishable “ring” is located at the boundary of the solutions . Splenocytes ("ring") are selected with a finely drawn paste, washed once in Hanks solution, the suspension is irradiated. The radiation dose is 50 Gy (i.e. 5000 rad). The cells are counted and incomplete Freud's Adjuvant is added to the cells three times washed after irradiation from the same calculation as in item 1. The emulsion is administered intraperitoneally to syngeneic animals at the rate of 0.1 ml per one.

3. Получение сыворотки
Спустя 12 дней после проведения последней иммунизации, производится забор крови из полостей сердца под эфирным наркозом. Полученную кровь оставляют при комнатной температуре до образования плотного сгустка, центрифугируют при 1500 об/мин 2-3 мин для полного оседания эритроцитов. Сыворотку отбирают тонко оттянутой пастеркой, прогревают при 56^oС 15 мин, сорбируют на избытке гомогената клеток печени, почек, селезенки сингенных мышек BALB (с), центрифугируют при 8-9000 об/мин 20 мин, фильтруют миллипоровыми фильтрами (0,22 мкм).3. Getting serum
12 days after the last immunization, blood is taken from the cavities of the heart under ether anesthesia. The resulting blood is left at room temperature until a dense clot forms, centrifuged at 1500 rpm for 2-3 minutes to completely sediment red blood cells. Serum is taken with a thinly drawn paste, heated at 56 ^° C for 15 minutes, sorbed on an excess of homogenate of liver cells, kidneys, spleen of syngenic BALB mice (s), centrifuged at 8-9000 rpm for 20 minutes, filtered with millipore filters (0.22 μm )

4. Тестирование сыворотки. Полученную указанным способом сыворотку проверяют в методе непрямой иммунофлюоресценции на криостатных нефиксированных срезах (6-10 мкм) любого опухолевого штамма (В-16, РШМ-2 и пр.). Сыворотка считается активной, если обнаруживается специфическое мембранное свечение опухолевых клеток в конечном разведении 1:1. 4. Testing serum. The serum obtained by this method is checked in the method of indirect immunofluorescence on cryostatic unfixed sections (6-10 μm) of any tumor strain (B-16, RShM-2, etc.). Serum is considered active if a specific membrane glow of tumor cells is detected at a final dilution of 1: 1.

В частном случае реализации способа возможна обработка вводимых клеток антимитотическими агентами следующим образом:
a) Эмбриональные клетки (в том числе и с клетками хориона) линейного лабораторного животного (например, мышь) берут на определенном гестационном возрасте, обусловленном сроком беременности и особенностями развития эмбриона конкретного вида лабораторного животного.In the particular case of the method, it is possible to treat the introduced cells with antimitotic agents as follows:
a) Embryonic cells (including those with chorion cells) of a linear laboratory animal (for example, a mouse) are taken at a certain gestational age, due to the gestational age and developmental features of the embryo of a particular type of laboratory animal.

b) Клетки, указанные в п.(а), обрабатываются известными антимитотическими агентами (например, митомицин С, гамма-излучение или другими). b) The cells indicated in paragraph (a) are treated with known antimitotic agents (e.g. mitomycin C, gamma radiation or others).

c) Параметры и время обработки клеток в п.(b) определяются достаточностью для достижения остановки их митотической активности и/или метаболизма. c) The parameters and processing time of cells in paragraph (b) are determined by the sufficiency to achieve a stop in their mitotic activity and / or metabolism.

d) Обработанные по п. (с) клетки вводят в организм сингенного с этими клетками лабораторного животного с известными иммуностимуляторами, использующимися в иммунологических методиках (например, Полный Адьювант Фрейнда, неполный Адьювант Фрейнда и др). Способ введения определяется параметрами приготовленного препарата. d) The cells treated according to (c) are introduced into the body of a laboratory animal syngeneic with these cells with known immunostimulants used in immunological methods (for example, Complete Adjuvant Freunda, incomplete Adjuvant Freunda and others). The route of administration is determined by the parameters of the prepared preparation.

e) Количество вводимого иммуностимулятора определяется количеством клеток и видом лабораторного животного и считается оптимальным в каждом конкретном случае, если его применение увеличивает концентрацию иммунных глобулинов в крови иммунного животного за более короткий промежуток времени, чем без его применения, или позволяет получить большую их концентрацию за тот же период времени, что и без его применения. e) The amount of immunostimulant administered is determined by the number of cells and the type of laboratory animal and is considered optimal in each case if its use increases the concentration of immune globulins in the blood of an immune animal in a shorter period of time than without its use, or allows to obtain a higher concentration of them for that same period of time as without its use.

f) От животного, обработанного по пп.(d, e), забираются лейкоциты любыми известными способами по прошествии определенного периода времени. f) From the animal treated according to (d, e), white blood cells are taken by any known means after a certain period of time.

g) Период времени по п. (f) считается достаточным, если концентрация иммунных глобулинов в крови иммунного животного достигает оптимальных значений. Оптимальной концентрацию иммунных глобулинов следует считать, если скорость ее увеличения в крови иммунного животного начинает снижаться. g) The time period under item (f) is considered sufficient if the concentration of immune globulins in the blood of an immune animal reaches optimal values. The optimal concentration of immune globulins should be considered if the rate of its increase in the blood of an immune animal begins to decline.

h) Лейкоциты, полученные по пп.(f, g), обрабатываются антимитотическим агентом аналогично пп.(b, с). h) White blood cells obtained according to (f, g) are treated with an antimitotic agent similarly to (b, c).

i) После проведения обработки лейкоцитов по п.(h) производят их введение с иммуностимуляторами (как и в пп.d, е) в организм сингенного с лейкоцитами животного в количестве и объеме, оптимальном для получения оптимального титра антиидиотипических антител. i) After the treatment of leukocytes in paragraph (h), they are introduced with immunostimulants (as in paragraphs d, f) into the body of an animal syngeneic with leukocytes in an amount and volume that is optimal for obtaining an optimal titer of anti-idiotypic antibodies.

j) Титр антиидиотипических антител считается оптимальным, если позволяет выявлять идиотипы эмбриональных стадиоспецифических антигенов на опухолевых клетках в известных тестовых методиках. j) The titer of anti-idiotypic antibodies is considered optimal if it allows the identification of idiotypes of embryonic stadiospecific antigens on tumor cells in known test methods.

k) По достижении концентрации антиидиотипических антител в крови лабораторного животного, обработанного по п.(i), достаточной по п.(j), производят выделение иммунного компонента, состав которого раскрыт выше. k) Upon reaching a concentration of anti-idiotypic antibodies in the blood of a laboratory animal treated according to (i), sufficient according to (j), the immune component, the composition of which is disclosed above, is isolated.

Вариантом способа является способ, отличающийся по пп.(d, i), где цельные клетки заменяются их биологически активной фракцией (например, их мембранами или др). Замена считается адекватной, если приводит к результату по п. j). A variant of the method is a method that is characterized by claims (d, i), where the whole cells are replaced by their biologically active fraction (for example, their membranes or others). A substitution is considered adequate if it leads to the result in paragraph j).

Антиидиотипическая антиэмбриональная сыворотка испытывалась при реализации РО-теста (TURTEST) - биохимического метода иммунологического распознавания антигенов клеток злокачественных новообразований в крови больного, основанного на способности эритроцитов к агглютинации при взаимодействии с данной сывороткой. Выраженность этой реакции количественно определяют по изменению скорости оседания эритроцитов при взаимодействии с антиидиотипической антиэмбриональной сывороткой по сравнению с их оседанием в результате взаимодействия с контрольной сывороткой. Коэффициент злокачественного роста клеток (К_зр) определяют следующим образом: среднее значение, полученное между двумя контрольными пробами и рабочей пробой с антиидиотипической антиэмбриональной сывороткой, делят на величину 50 и умножают на большую величину из 3-х проб. Если результат будет превышать 1,5, то это свидетельствует о наличии злокачественного опухолевого процесса в организме больного.Anti-idiotypic anti-embryonic serum was tested during the implementation of the PO test (TURTEST), a biochemical method for the immunological recognition of antigens of cancer cells in the patient’s blood, based on the ability of red blood cells to agglutinate when interacting with this serum. The severity of this reaction is quantitatively determined by the change in the erythrocyte sedimentation rate when interacting with anti-idiotypic anti-embryonic serum compared to their sedimentation as a result of interaction with control serum. The coefficient of malignant cell growth (K _sp ) is determined as follows: the average value obtained between two control samples and a working sample with anti-idiotypic anti-embryonic serum is divided by 50 and multiplied by a large value of 3 samples. If the result exceeds 1.5, then this indicates the presence of a malignant tumor process in the patient's body.

Эффективность использования данной сыворотки при диагностике злокачественных опухолей поясняется следующими примерами. The effectiveness of the use of this serum in the diagnosis of malignant tumors is illustrated by the following examples.

Пример 1. Example 1

Пациентка А. с новообразованием в левом предсердии была подвергнута исследованию на РО-тест. К_зр составил 2,3. Это явилось причиной возникшего предположения о наличии злокачественной неоплазмы. После операции гистология подтвердила злокачественное новообразование - фибромиксосаркому левого предсердия.Patient A. with a tumor in the left atrium was examined for a PO test. To _sp was 2.3. This was the reason for the assumption about the presence of malignant neoplasm. After the operation, histology confirmed a malignant neoplasm - fibromyxosarcoma of the left atrium.

Пример 2. Example 2

У больной С. злокачественная опухоль перикарда (злокачественная мезотелиома) была выявлена после биопсии. После РО-теста коэффициент злокачественного роста К_зр составил 2,8, что подтвердило первоначальный диагноз злокачественности новообразования.Patient S. had a pericardial malignant tumor (malignant mesothelioma) was detected after a biopsy. After the PO test, the coefficient of malignant growth K _sp amounted to 2.8, which confirmed the initial diagnosis of malignancy.

Пример 3. Example 3

У четырех больных с миксомами правого предсердия РО-тест был проведен до операции; К_зр составил 0,8. После операции гистология подтвердила доброкачественный характер новообразований.In four patients with mixes of the right atrium, the PO test was performed before surgery; To _sp was 0.8. After surgery, histology confirmed the benign nature of the neoplasms.

Пример 4. Example 4

У трех детей с рабдомиомами в правых отделах сердца РО-тест был проведен до операции. К_зр составил 0,9; 0,96 и 1,1 соответственно. После проведенных операций гистология подтвердила наличие немиксоматозных доброкачественных опухолей сердца - рабдомиом.In three children with rhabdomyomas in the right heart, the PO test was performed before surgery. K _sp amounted to 0.9; 0.96 and 1.1, respectively. After the operations, histology confirmed the presence of non-myxomatous benign heart tumors - rhabdomyomas.

Исследование проведено на более чем 10 000 пациентах в различных клиниках Российской Федерации. В частности, исследования, проведенные в НЦ ССХ им. А. Н. Бакулева РАМН и в МСЧ 9 Министерства здравоохранения РФ, показали следующие результаты (см. таблицу). Из таблицы видно, что чувствительность метода очень высока и достигает практически 100%, подтверждая высокую диагностическую ценность сыворотки, полученной по способу согласно изобретению. The study was conducted on more than 10,000 patients in various clinics of the Russian Federation. In particular, studies conducted in the SC SCX them. A.N. Bakuleva of the Russian Academy of Medical Sciences and in the medical special education system 9 of the Ministry of Health of the Russian Federation showed the following results (see table). The table shows that the sensitivity of the method is very high and reaches almost 100%, confirming the high diagnostic value of the serum obtained by the method according to the invention.

Антиидиотипическая сыворотка, получаемая по предлагаемому способу, эффективна при диагностике новообразований различной локализации и на любой стадии развития опухолевого процесса. Anti-idiotypic serum obtained by the proposed method is effective in the diagnosis of neoplasms of different localization and at any stage of the development of the tumor process.

Claims

1. The method of obtaining anti-idiotypic serum for the diagnosis of malignant tumors, which consists in the fact that in the syngeneic system, at the first stage, the cells of the fetus with chorion corresponding to 7-12-day-old embryonic tissues of mice obtained from pregnant female animals are introduced into the body of a reliably syngenic animal of the same syngeneic system, in the second stage, after 5-14 days after the embryonic cells are introduced, the leukocytes are taken from the immunized animal and introduced into the syngenic organism from the previous by the animal’s animal, and after 4-12 days after the previous immunization, serum is obtained by taking the blood of the animal, which is left at room temperature until a dense clot forms, and then centrifuged to completely sediment the red blood cells, the obtained serum is taken, heated to 60 ^o C, sorbed on an excess of homogenate of cells of syngeneic animals, followed by centrifugation and filtration.

2. The method according to p. 1, characterized in that at both stages the treated cells are treated with antimitotic agents, or administered with immunostimulants, or the whole cells are replaced with their membrane fraction.