RU2137136C1 - Method of diagnosing malignant tumors utilizing common tumor antigen-specific antiserum - Google Patents
Method of diagnosing malignant tumors utilizing common tumor antigen-specific antiserum Download PDFInfo
- Publication number
- RU2137136C1 RU2137136C1 RU98103027/14A RU98103027A RU2137136C1 RU 2137136 C1 RU2137136 C1 RU 2137136C1 RU 98103027/14 A RU98103027/14 A RU 98103027/14A RU 98103027 A RU98103027 A RU 98103027A RU 2137136 C1 RU2137136 C1 RU 2137136C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antiserum
- tumor
- blood
- animals
- added
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 38
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 29
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 29
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 18
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 18
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 21
- 241000700159 Rattus Species 0.000 abstract description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 abstract 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 208000025036 lymphosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 208000010667 Carcinoma of liver and intrahepatic biliary tract Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000571 Fibrocystic breast disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 101001016849 Mus musculus Heat shock protein HSP 90-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000985444 Mus musculus Heat shock protein HSP 90-beta Proteins 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003135 anti-embryonic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000000624 ear auricle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, более точно к онкологии, и может быть использовано в диагностике злокачественных опухолей. The invention relates to medicine, more specifically to oncology, and can be used in the diagnosis of malignant tumors.
Известные аналогичные способы диагностики опухолей имеют недостаточно высокую чувствительность и даже у наиболее эффективных из них она не превышает 40-60%. Такая низкая чувствительность известных онкологических иммунодиагностических тестов объясняется тем, что используемые в этих реакциях онкомаркеры, строго говоря, таковыми не являются и представляют собой органоспецифические или онкофетальные антигены, присущие в норме отдельным организмам или системам органов. Это приводит к тому, что ожидаемое универсальное иммунологическое выражение особенностей единого механизма опухолеобразования подменяется частным, присущим не опухолевым состояниям (воспаление, коллагенозы). Known similar methods for the diagnosis of tumors are not sufficiently high sensitivity and even in the most effective of them it does not exceed 40-60%. Such a low sensitivity of known oncological immunodiagnostic tests is explained by the fact that the tumor markers used in these reactions, strictly speaking, are not and are organ-specific or oncofetal antigens that are inherent in the norm for individual organisms or organ systems. This leads to the fact that the expected universal immunological expression of the features of a single tumor formation mechanism is replaced by particular, inherent non-tumor states (inflammation, collagenoses).
Известно, что органоспецифические антигены не являются обязательными для опухолевой трансформации клеток, что и дает такой высокий процент ложноположительных результатов при диагностике злокачественных опухолей. It is known that organ-specific antigens are not required for tumor cell transformation, which gives such a high percentage of false-positive results in the diagnosis of malignant tumors.
Краткий обзор иммунодиагностики в онкологии показывает следующее. A brief review of immunodiagnostics in oncology shows the following.
В 1949 г. Л.А.Зильбер впервые показал, а в 1957 г.Т.Прэн и Дж.Мэйн подтвердили, что клеткам злокачественных опухолей присущи собственные антигены. In 1949, L.A. Zilber first showed, and in 1957, T. Pren and J. Mayne confirmed that their own antigens are inherent in cancer cells.
Принято выделять 4 группы антигенов (по Абелеву). It is customary to distinguish 4 groups of antigens (according to Abelov).
1) антигены вирусных опухолей (идентичны для любых вирусных опухолей этого вида);
2) антигены канцерогенных опухолей (строго индивидуальны как для больных, так и для опухоли);
3) изоантигены трансплантационного типа или ТСТА - опухолеспецифические трансплантационные антигены различны во всех индивидуальных опухолях, индуцированных химическими антигенами и тождественны в разных опухолях, вызванных одним вирусом;
4) эмбриональные антигены.1) antigens of viral tumors (identical for any viral tumors of this type);
2) antigens of carcinogenic tumors (strictly individual for both patients and tumors);
3) transplantation isoantigens or TSTA - tumor-specific transplantation antigens are different in all individual tumors induced by chemical antigens and are identical in different tumors caused by one virus;
4) embryonic antigens.
В процессе канцерогенеза клетки подвергаются дедиференцировке, приобретая эмбриональный тип строения. В них часто обнаруживают эмбриональные антигены, специфичные для эмбриональных стадий развития организма. Эти антигены способны иммунизировать организм против опухоли. Наиболее изучены антигены: α- фетопротеин и раковоэмбриональный антиген (РЭА). I-й обнаруживают при первичной карциномии печени, II - при аденокарциноме кишечника, желудка, пищевода или поджелудочной железы. In the process of carcinogenesis, cells undergo de-differentiation, acquiring an embryonic type of structure. They often find embryonic antigens specific for the embryonic stages of the development of the body. These antigens are able to immunize the body against the tumor. The most studied antigens are: α-fetoprotein and cancer embryonic antigen (CEA). I-th is found in primary liver carcinoma, II - with adenocarcinoma of the intestine, stomach, esophagus or pancreas.
У детей с нейробластомой, лимфосаркомой или опухолями мозга обнаруживается α2-фетопротеин, при раке желудка- фетальный сульфогликопротеин. Эти антигены локализованы в клеточных мембранах или циркулируют в крови.In children with neuroblastoma, lymphosarcoma, or brain tumors, α 2 -fetoprotein is detected; in gastric cancer, fetal sulfoglycoprotein. These antigens are localized in cell membranes or circulate in the blood.
Существует специфическая группа антигенов, так называемые гетероспецифические антигены. Их нельзя отнести к чужеродным для данного организма, так как помимо опухоли они присутствуют в других нормальных тканях. К числу их относится почечный антиген, который присутствует в норме в почке и в опухоли печени-гепатоме. There is a specific group of antigens, the so-called heterospecific antigens. They can not be attributed to foreign to this organism, since in addition to the tumor, they are present in other normal tissues. Among them is the renal antigen, which is normally present in the kidney and in a hepatoma liver tumor.
Аденокарцинома почки содержит антиген легких и печени. Kidney adenocarcinoma contains antigen of the lungs and liver.
Иммунодиагностика злокачественных опухолей основана на индикации в крови больных вышеперечисленных антигенов, антител к ним и выявлении сенсибилизированных к опухолевым антигенам лимфоцитов. The immunodiagnosis of malignant tumors is based on the indication in the blood of patients of the above antigens, antibodies to them and the detection of lymphocytes sensitized to tumor antigens.
На обнаружении α- фетопротеина основаны методы диагностики лимфосаркомы, нейробластомы (см. На обнаружении антител к РЭА -способ по патенту РФ N2077725, кл.С 01 N 33/53, к вирусу лейкоза - способ по авторскому свидетельству N 1641443, G 01 N 33/53). Diagnosis of lymphosarcoma, neuroblastoma is based on the detection of α-fetoprotein (see Detection of antibodies to CEA according to RF patent N2077725, class C 01 N 33/53, for leukemia virus - the method according to copyright certificate N 1641443, G 01 N 33 / 53).
На обнаружении гетерогенных антигенов патент РФ N2063768, 1991 г., А 61 K 39/00, патент РФ N 2025734, МПК G 01 N 33/53, авт.свид. СССР N1589215, G 01 N 33/53, авт. свид. N 1704087, G 01 N 33/53, авт.свид.N 170922, авт.свид. N 1589215. On the detection of heterogeneous antigens RF patent N2063768, 1991, A 61 K 39/00, RF patent N 2025734, IPC G 01 N 33/53, autosvid. USSR N1589215, G 01 N 33/53, ed. testimonial. N 1704087, G 01 N 33/53, author certificate N 170922, author certificate N 1589215.
В авт. свид. N1805392 (G 01 N 33/53) описан способ диагностики рака по антигенам (HLA-B35) лимфоцитов.In auth. testimonial. N1805392 (G 01 N 33/53) describes a method for diagnosing cancer by antigens (H LA-B 35) of lymphocytes.
Однако существующий уровень диагностики таков, что, по сути дела, ни один из тестов не является универсальным. Обнаружение в крови антител является наименее достоверным тестом, т.к. у человека в крови существует очень широкий спектр противоопухолевых и тканевых антител. Не существует методов по выявлению специфического универсального антигена опухолей. However, the current level of diagnosis is such that, in fact, none of the tests is universal. Detection of antibodies in the blood is the least reliable test, because in humans, a very wide spectrum of antitumor and tissue antibodies exists in the blood. There are no methods for identifying a specific universal tumor antigen.
В этом плане перспективно выявление сенсибилизированных лимфоцитов, которые ингибируют рост колоний опухолевых клеток. Однако они активны только против "своего" вида опухоли. In this regard, the identification of sensitized lymphocytes that inhibit the growth of tumor cell colonies is promising. However, they are active only against "their" type of tumor.
Таким образом, используемые методы иммунодиагностики опухолей слабо удовлетворяют требованиям первичной диагностики опухолей, совершенно неудовлетворительны в целях скрининга злокачественных новообразований и групп повышенного риска и могут быть применены с известными ограничениями лишь в иммуномониторинге лечения злокачественных опухолей. Thus, the methods used for the immunodiagnostics of tumors poorly satisfy the requirements of the initial diagnosis of tumors, are completely unsatisfactory for screening malignant neoplasms and high-risk groups, and can be used with known limitations only in immunomonitoring the treatment of malignant tumors.
Предлагаемый метод обнаружения онкомаркера принципиально отличается от ныне используемых тем, что определяет универсальный, высоко специфический антигенный маркер опухолевого роста, сохраняющийся на всех этапах опухолевой прогрессии. The proposed method for detecting an oncomarker is fundamentally different from those currently used in that it defines a universal, highly specific antigenic marker of tumor growth, which remains at all stages of tumor progression.
Метод основан на результатах общетеоретических и экспериментальных работ автора, в которых установлено, что в любых, гистологически различных клетках злокачественных опухолей функционирует устойчивый в опухолевой прогрессии процесс Т-клеточного иммунологического распознавания поверхностных эмбриоспецифических антигенов и что указанный механизм лежит в основе феноменов опухолеобразования (иммортализация и прогрессия). The method is based on the results of general theoretical and experimental works of the author, in which it was found that in any histologically different cells of malignant tumors, a process of T-cell immunological recognition of surface embryospecific antigens that is stable in tumor progression functions and that this mechanism underlies the phenomena of tumor formation (immortalization and progression )
Прототипом заявленного способа выбран способ по патенту РФ N2063768, 1991, МПК А 61 К 39/00, который включает извлечение тканей опухоли у умерших лиц, замораживание ее, диспергирование, декантирование клеток, экстрация антигена из надосадочной жидкости, иммунизация животных экстрактом, получение антисыворотки, постановка иммунологической реакции иммунодиффузии, по результатам которой выносят суждение о наличии или отсутствии опухоли, т.е. проводят диагностику. The prototype of the claimed method selected method according to RF patent N2063768, 1991, IPC A 61 K 39/00, which includes the extraction of tumor tissue from deceased persons, freezing it, dispersing, decanting cells, extracting antigen from the supernatant, immunizing animals with extract, obtaining antiserum, formulation of the immunological reaction of immunodiffusion, according to the results of which they judge the presence or absence of a tumor, i.e. carry out diagnostics.
Заявленный способ в отличие от известного позволяет получить антисыворотку к идиотопу Т-клеточного рецептора, функционирующего в клетках злокачественных опухолей, то есть антиидиотипической антиэмбриональной сыворотки, что обеспечивает диагностику всех видов опухолей независимо от их генеза и расположения. The claimed method, in contrast to the known one, allows to obtain an antiserum to the idiotope of a T-cell receptor that functions in cancer cells, that is, anti-idiotypic anti-embryonic serum, which ensures the diagnosis of all types of tumors regardless of their genesis and location.
Для осуществления способа необходимо выделить эмбрион в стадии Fetus у генетически однородных животных, диспергировать его. Клеточной взвесью провести иммунизацию животного той же генетической линии. Затем необходимо у иммунизированного животного извлечь клетки селезенки, выделить из них лимфоциты в градиенте плотности фиколл-верографина (1,065-1,079). Этими лимфоцитами следует провести многократную иммунизацию сингенных интактных животных и получить у них стандартным образом антисыворотку. Эту антисыворотку следует профильтровать через миллипоровые фильтры с диаметром пор 20 мкм и ввести фильтрат в иммунологическую реакцию с тканями обследуемого, а затем по реакции иммунофлуоресценции или СОЭ диагностировать опухоль. В качестве тканей могут быть использованы ткани опухолей в реакции иммунофлуоресценции или кровь больного в реакции СОЭ. To implement the method, it is necessary to isolate the embryo in the Fetus stage in genetically homogeneous animals, to disperse it. Cell suspension should be used to immunize an animal of the same genetic line. Then, it is necessary to extract spleen cells from the immunized animal, to isolate lymphocytes from them in the density gradient of ficoll-verographin (1,065-1,079). With these lymphocytes, multiple immunization of syngeneic intact animals should be carried out and an antiserum should be obtained from them in a standard manner. This antiserum should be filtered through millipore filters with a pore diameter of 20 μm and the filtrate introduced into the immunological reaction with the tissues of the subject, and then the tumor is diagnosed by immunofluorescence or ESR. As tissues, tumor tissues in the immunofluorescence reaction or blood of a patient in the ESR reaction can be used.
Диагноз опухоли устанавливают при статистически достоверных различиях результатов реакций между опытной и контрольной пробами. The tumor diagnosis is established with statistically significant differences in the results of reactions between the experimental and control samples.
При этом в случае проведения реакции СОЭ для вычисления различий между опытной и контрольной пробами используют следующую расчетную формулу
где α - - диагностический коэффициент, который при наличии опухоли составляет ≥ 1,5
A - величина СОЭ в опытной пробе (к цитратной крови обследуемого добавлена антисыворотка к антигену опухоли)
B1 и В2 - величина СОЭ в контрольных пробах (к цитратной крови обследуемого добавлена антисыворотка того же вида животного, который использовался для получения антисыворотки)
X - наибольшее значение СОЭ в анализе (или в пробе А или среднее B1 и B2, т. е.(B1 + B2)/2].In this case, in the case of the ESR reaction, the following calculation formula is used to calculate the differences between the experimental and control samples
where α - is the diagnostic coefficient, which in the presence of a tumor is ≥ 1.5
A - ESR value in the experimental sample (antiserum to the tumor antigen was added to the citrated blood of the subject)
B 1 and B 2 - ESR value in control samples (the antiserum of the same animal species that was used to obtain the antiserum was added to the citrated blood of the subject)
X is the highest ESR value in the analysis (or in sample A or the average of B 1 and B 2 , ie (B 1 + B 2 ) / 2].
Пример осуществления способа. An example implementation of the method.
У крыс линии Wistar весом 300-500 г извлечен эмбрион в стадии Fetus. Ткани его диспергированы в воде в соотношении объемов ткань: вода 1:5. Полученной взвесью осуществлялась еженедельная иммунизация интактных крыс линии Wistar. Через 1,5 месяца у забитых крыс извлечена селезенка, диспергирована и в градиенте фиколл- верографина 1,077 получены Т лимфоциты. In Wistar rats weighing 300-500 g, an embryo in the Fetus stage was removed. Its tissues are dispersed in water in a ratio of tissue: water volumes of 1: 5. The suspension was carried out weekly immunization of intact Wistar rats. After 1.5 months, the spleen was removed from the slaughtered rats, dispersed, and T lymphocytes were obtained in a ficoll-verographin 1.077 gradient.
Из них приготовили взвесь 1:1, которую вводили еженедельно другим интактным крысам. После 5 иммунизаций крысы забиты, у них взята кровь, "осветлена", получена из нее сыворотка, профильтрована, с указанной сывороткой поставлена реакция СОЭ у нижеприведенных групп больных. При постановке реакции СОЭ использовали стандартный капилляр с внутренним диаметром 0,8 мм. К 200 мкл 5% забуференного раствора цитрата натрия добавляют 800 мкл цельной свежей венозной крови, взятой в момент проведения анализа, не позже, чем через 20 сек после забора. От момента смешивания крови с консервантом до проведения анализа не должно пройти более 1 часа. При наличии гемолиза или свертывания анализ ставить нельзя. Из этой крови берут 3 порции по 70 мкл каждая в 3 отдельные пробирки. В одну из них добавляют рабочую (с антителами) в 2 другие -контрольные (без антител) сыворотки по 20 мкл каждая. Сыворотки вводят непосредственно в кровь с консервантом, а не на стенки. Капилляры должны быть одного размера. Смеси перемешивают и заполняют ими капилляры до отметки 5/0. Выдерживают 1 час. Через 1 час снимают показатели и обсчитывают их по вышеприведенной математической формуле. A 1: 1 suspension was prepared from them, which was administered weekly to other intact rats. After 5 immunizations, the rats were killed, their blood was taken, “clarified”, the serum was obtained from it, filtered, the ESR reaction was performed with the indicated serum in the following groups of patients. When setting up the ESR reaction, a standard capillary with an inner diameter of 0.8 mm was used. To 200 μl of a 5% buffered sodium citrate solution, add 800 μl of whole fresh venous blood taken at the time of analysis, no later than 20 seconds after collection. From the moment of mixing blood with a preservative to the analysis should not pass more than 1 hour. In the presence of hemolysis or coagulation, the analysis cannot be set. From this blood take 3 servings of 70 μl each in 3 separate tubes. One of them is added working (with antibodies) in 2 other control (without antibodies) serum of 20 μl each. Serum is injected directly into the blood with a preservative, and not on the wall. Capillaries should be the same size. The mixture is mixed and filled with capillaries to the level of 5/0. Stand for 1 hour. After 1 hour, indicators are taken and calculated according to the above mathematical formula.
Указанным способом была получена на крысах линии Wistar антисыворотка, которая использовалась в диагностике заболеваний у конкретных больных. In this way, an antiserum was obtained on Wistar rats, which was used in the diagnosis of diseases in specific patients.
В анализе с кровью больной К-овой, 1942 г. рождения, d-s: рак прямой кишки получены следующие результаты:
A=25, B1=28, B2=28
По математической формуле найден коэффициент α:
1/7 > 1,5, т.е. диагноз злокачественная опухоль подтверждается
В анализ крови больного с фибромой мочки уха получены следующие результаты:
D-s: рак прямой кишки получены следующие результаты:
A=10, B1=12, B2=12
По математической формуле найден коэффициент α:
α < 1/5, т.е. диагноз незлокачественная опухоль подтверждается,
Ниже даны результаты исследований на группе больных злокачественными опухолями.In the analysis with the blood of the patient K-ova, born in 1942, ds: colorectal cancer, the following results were obtained:
A = 25, B 1 = 28, B 2 = 28
The mathematical formula found the coefficient α:
1/7> 1.5, i.e. the diagnosis of malignant tumor is confirmed
The following results were obtained in a blood test of a patient with fibroids of the earlobe:
Ds: colorectal cancer obtained the following results:
A = 10, B 1 = 12, B 2 = 12
The mathematical formula found the coefficient α:
α <1/5, i.e. a diagnosis of a malignant tumor is confirmed,
Below are the results of studies on a group of patients with malignant tumors.
Рак молочной железы - 125 больных, чувствительность - 83,2%;
Рак легкого - 247 больных, чувствительность - 98,1%;
Рак желудка - 156 больных, чувствительность - 85,2%;
Рак ободочной кишки - 23 больных, чувствительность - 82,5%;
Рак прямой кишки - 27 больных, чувствительность - 92,5%;
Рак щитовидной железы - 58 больных, чувствительность - 79,5%;
Рак почки - 38 больных, чувствительность - 78,6%;
Рак тела матки - 412 больных, чувствительность - 75,08%;
Рак шейки матки - 41 больной, чувствительность - 81,8%,
Контрольная группа -
Практически здоровые - 400 человек, чувствительность - 5,1%;
Кистозно-фиброзная мастопатия - 221 человек, чувствительность - 8,3%;
Гастрит - 120 человек, чувствительность - 6,2%;
Язвенная болезнь желудка - 62 человека, чувствительность - 8,3%;
Коллагенозы - 40 человек, чувствительность - 6,5%;
Воспаление легких - 60 человек, чувствительность - 7,2%; (остр. и хрон.)
Простатиты - 18 человек, чувствительность - 2,1%;
Хронические колиты - 115 человек, чувствительность - 4,2%.Breast cancer - 125 patients, sensitivity - 83.2%;
Lung cancer - 247 patients, sensitivity - 98.1%;
Stomach cancer - 156 patients, sensitivity - 85.2%;
Colon cancer - 23 patients, sensitivity - 82.5%;
Colorectal cancer - 27 patients, sensitivity - 92.5%;
Thyroid cancer - 58 patients, sensitivity - 79.5%;
Kidney cancer - 38 patients, sensitivity - 78.6%;
Cancer of the uterus - 412 patients, sensitivity - 75.08%;
Cervical cancer - 41 patients, sensitivity - 81.8%,
Control group -
Almost healthy - 400 people, sensitivity - 5.1%;
Cystic fibrous mastopathy - 221 people, sensitivity - 8.3%;
Gastritis - 120 people, sensitivity - 6.2%;
Peptic ulcer - 62 people, sensitivity - 8.3%;
Collagenoses - 40 people, sensitivity - 6.5%;
Inflammation of the lungs - 60 people, sensitivity - 7.2%; (sharp and chron.)
Prostatitis - 18 people, sensitivity - 2.1%;
Chronic colitis - 115 people, sensitivity - 4.2%.
Заключение: предлагаемый метод имеет чувствительность - 85,9% и специфичность - 92,4%, то есть является высокоэффективным диагностическим тестом. Conclusion: the proposed method has a sensitivity of 85.9% and specificity of 92.4%, that is, it is a highly effective diagnostic test.
Для диагностики опухоли в реакции иммунофлуоресценции использовали общие приемы присущие этим методам и широко известные в биологии (см. например. Добровольцев Г. Е. "Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов" М.,1989 г.) For the diagnosis of a tumor in the immunofluorescence reaction, common techniques inherent in these methods and widely known in biology were used (see, for example, G. E. Dobrovoltsev "Fluorescent probes in the study of cells, membranes and lipoproteins" M., 1989)
Claims (2)
где α - диагностический коэффициент, который при наличии опухоли составляет 1,5;
A - величина СОЭ в опытной пробе (к цитратной крови обследуемого добавлена антисыворотка к антигену опухоли);
B1 и B2 - величина СОЭ в контрольных пробах (к цитратной крови обследуемого добавлена антисыворотка того же вида животного, который использовался для получения антисыворотки);
X - наибольшее значение СОЭ в анализе (или в пробе A, или среднее B1 и B2, т.е. (B1 + B2) / 2).2. The method according to claim 1, characterized in that the ESR reaction is calculated by the mathematical formula
where α is the diagnostic coefficient, which in the presence of a tumor is 1.5;
A - ESR value in the experimental sample (antiserum to the tumor antigen was added to the citrated blood of the subject);
B 1 and B 2 - ESR value in control samples (the antiserum of the same animal species that was used to obtain the antiserum was added to the citrated blood of the subject);
X is the highest ESR value in the analysis (or in sample A, or the average of B 1 and B 2 , i.e. (B 1 + B 2 ) / 2).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98103027/14A RU2137136C1 (en) | 1998-02-27 | 1998-02-27 | Method of diagnosing malignant tumors utilizing common tumor antigen-specific antiserum |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98103027/14A RU2137136C1 (en) | 1998-02-27 | 1998-02-27 | Method of diagnosing malignant tumors utilizing common tumor antigen-specific antiserum |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2137136C1 true RU2137136C1 (en) | 1999-09-10 |
Family
ID=20202474
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98103027/14A RU2137136C1 (en) | 1998-02-27 | 1998-02-27 | Method of diagnosing malignant tumors utilizing common tumor antigen-specific antiserum |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2137136C1 (en) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2154830C1 (en) * | 1999-11-30 | 2000-08-20 | Москаленко Екатерина Петровна | Method for diagnosing the cases of benign and malignant tumors |
| RU2159437C1 (en) * | 1999-11-23 | 2000-11-20 | Пермский научно-исследовательский клинический институт детской экопатологии | Method for determining ecological situation influence upon population predisposition to oncological diseases |
| RU2205410C2 (en) * | 2000-05-19 | 2003-05-27 | Пантелеев Дмитрий Юрьевич | Method for obtaining antiidiotypical serum for predicting malignant tumors |
| WO2006022572A1 (en) * | 2004-08-23 | 2006-03-02 | Ivakhnenko, Igor Nikolaevich | Method for diagnosticating malignant tumors |
| RU2276672C2 (en) * | 2000-04-10 | 2006-05-20 | Институт Биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской Академии Наук | Antibody raised to hldf, method for it preparing (variants), peptide showing antigenic and nucleic acid-hydrolyzing property and method for diagnosis of human cell anaplastic state |
| RU2452501C2 (en) * | 2010-08-31 | 2012-06-10 | Александр Владимирович Балюра | Sensitin for erythrocytic diagnosticum for diagnosis of malignant growths and method for making it, erythrocytic diagnosticum for diagnosis of malignant growths and method for making it and diagnostic technique for presence of malignant growths with using such erythrocytic diagnosticum |
| RU2607954C1 (en) * | 2015-10-01 | 2017-01-11 | Юрий Евгеньевич Никольский | Method of evaluating state of the patient's kidney for the presence of cancer |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1589215A1 (en) * | 1987-09-30 | 1990-08-30 | Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Method of predicting recurrencies of acute lymphoblastic leukosis |
| RU2063768C1 (en) * | 1991-08-14 | 1996-07-20 | Валентин Александрович Фигурнов | Method of preliminary tumor tissue treatment for cancerous tumor antigen preparing |
-
1998
- 1998-02-27 RU RU98103027/14A patent/RU2137136C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1589215A1 (en) * | 1987-09-30 | 1990-08-30 | Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Method of predicting recurrencies of acute lymphoblastic leukosis |
| RU2063768C1 (en) * | 1991-08-14 | 1996-07-20 | Валентин Александрович Фигурнов | Method of preliminary tumor tissue treatment for cancerous tumor antigen preparing |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2159437C1 (en) * | 1999-11-23 | 2000-11-20 | Пермский научно-исследовательский клинический институт детской экопатологии | Method for determining ecological situation influence upon population predisposition to oncological diseases |
| RU2154830C1 (en) * | 1999-11-30 | 2000-08-20 | Москаленко Екатерина Петровна | Method for diagnosing the cases of benign and malignant tumors |
| RU2276672C2 (en) * | 2000-04-10 | 2006-05-20 | Институт Биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской Академии Наук | Antibody raised to hldf, method for it preparing (variants), peptide showing antigenic and nucleic acid-hydrolyzing property and method for diagnosis of human cell anaplastic state |
| RU2205410C2 (en) * | 2000-05-19 | 2003-05-27 | Пантелеев Дмитрий Юрьевич | Method for obtaining antiidiotypical serum for predicting malignant tumors |
| WO2006022572A1 (en) * | 2004-08-23 | 2006-03-02 | Ivakhnenko, Igor Nikolaevich | Method for diagnosticating malignant tumors |
| RU2277242C2 (en) * | 2004-08-23 | 2006-05-27 | Александр Владимирович Балюра | Method for diagnosing tumors |
| EA009007B1 (en) * | 2004-08-23 | 2007-10-26 | Кораблин, Виталий Викторович | Method for diagnosticating of malignant tumors |
| RU2452501C2 (en) * | 2010-08-31 | 2012-06-10 | Александр Владимирович Балюра | Sensitin for erythrocytic diagnosticum for diagnosis of malignant growths and method for making it, erythrocytic diagnosticum for diagnosis of malignant growths and method for making it and diagnostic technique for presence of malignant growths with using such erythrocytic diagnosticum |
| RU2607954C1 (en) * | 2015-10-01 | 2017-01-11 | Юрий Евгеньевич Никольский | Method of evaluating state of the patient's kidney for the presence of cancer |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3699399B2 (en) | Methods for determining response to cancer treatment | |
| Ballesta et al. | Carcinoembryonic antigen in staging and follow-up of patients with solid tumors | |
| Yabuki et al. | Immunohistochemical study of DNA topoisomerase II in human gastric disorders | |
| US11366117B2 (en) | Application of exosome TβRII protein as a marker in the preparation of breast cancer detection kit | |
| Sheen-Chen et al. | Circulating soluble Fas in patients with breast cancer | |
| RU2149023C1 (en) | Method for producing specific antiserum to general tumor antigen and method for diagnosing malignant tumors using the antiserum | |
| WO1996009551A1 (en) | Detection and treatment of cancer | |
| EP2156184A2 (en) | Methods for diagnosing and treating prostate and lung cancer | |
| Barr et al. | Are pancarcinoma T and Tn differentiation antigens? | |
| Van Es et al. | Molecular markers for diagnostic cytology of neoplasms in the head region of the pancreas: mutation of K-ras and overexpression of the p53 protein product. | |
| RU2137136C1 (en) | Method of diagnosing malignant tumors utilizing common tumor antigen-specific antiserum | |
| RU98106976A (en) | METHOD FOR PRODUCING SPECIFIC ANTI-SERUM FOR UNIVERSAL TUMOR ANTIGEN AND METHOD FOR DIAGNOSTIC OF MALIGNANT TUMORS USING THIS ANTI-SERUM | |
| Gold et al. | Tests for carcinoembryonic antigen: Role in diagnosis and management of cancer | |
| WO2002047613A2 (en) | Immunogenic cancer peptides and uses thereof | |
| EP0080259B1 (en) | Method and compositions for carcinoma diagnosis | |
| CN113092761A (en) | Peripheral blood TCR marker of diffuse large B cell lymphoma and detection kit and application thereof | |
| Vider et al. | Carcinoembryonic antigen (CEA) monitoring in the management of radiotherapeutic patients | |
| RU2277242C2 (en) | Method for diagnosing tumors | |
| RU2383891C1 (en) | Method of qualitative preliminary express-diagnostics of oncological diseases | |
| JP3524536B2 (en) | Novel methods for diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating cancer | |
| TW201030337A (en) | Method and kit for detecting cancers | |
| RU2205410C2 (en) | Method for obtaining antiidiotypical serum for predicting malignant tumors | |
| SCHWARTZ | Detection of Tumor-Associated Antigens in Plasma or Serum | |
| Thomson | The Features of Malignant Melanoma Organ-Specific Neoantigens Recognized by the Antitumor Immune Response of the Human Host | |
| Galbiati et al. | Carcinoembryonic antigen: its role in malignant extraintestinal neoplasms |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NF4A | Reinstatement of patent | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090228 |