[go: up one dir, main page]

RU2296575C2 - Composition for bone tissue treatment in damages of inflammation etiology - Google Patents

Composition for bone tissue treatment in damages of inflammation etiology Download PDF

Info

Publication number
RU2296575C2
RU2296575C2 RU2004126518/15A RU2004126518A RU2296575C2 RU 2296575 C2 RU2296575 C2 RU 2296575C2 RU 2004126518/15 A RU2004126518/15 A RU 2004126518/15A RU 2004126518 A RU2004126518 A RU 2004126518A RU 2296575 C2 RU2296575 C2 RU 2296575C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
composition
bone
embryo
diploid
Prior art date
Application number
RU2004126518/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2004126518A (en
Inventor
Тамара Дмитриевна Колокольцова (RU)
Тамара Дмитриевна Колокольцова
Елена Августовна Нечаева (RU)
Елена Августовна Нечаева
Ольга Павловна Болгова (RU)
Ольга Павловна Болгова
Ирина Федоровна Радаева (RU)
Ирина Федоровна Радаева
Виталий Викторович Павлов (RU)
Виталий Викторович Павлов
Original Assignee
Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) filed Critical Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора)
Priority to RU2004126518/15A priority Critical patent/RU2296575C2/en
Publication of RU2004126518A publication Critical patent/RU2004126518A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2296575C2 publication Critical patent/RU2296575C2/en

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, traumatology, orthopedics.
SUBSTANCE: claimed composition contains nutrient medium, 10 % serum of cow embryo, human fibroblast diploid cells and gel filler in the next component ratio (in 1 ml): nutrient medium 0,01-0,9; 10 % serum of cow embryo 0,001-0,2; suspension of human fibroblast diploid cells 1x105- 5x109 cells; and balance: gel filler. As human fibroblast diploid cells composition contains human fibroblast diploid cell strain from embryo lung tissue for substitutive therapy or human fibroblast diploid cell strain from embryo skin-muscle tissue for substitutive therapy. As gel filler 5 % polyethylene oxide may be used.
EFFECT: accelerated and prolonged remission of chronic disease.
2 cl, 5 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии. В травматологии и ортопедии существует категория патологий, связанная с локальным проявлением остеодистрофических изменений в костях скелета, обусловленных нарушениями или репаративной или физиологической регенерации в связи с повышением процессов резорбции костной ткани, а именно:The invention relates to medicine, namely to traumatology and orthopedics. In traumatology and orthopedics, there is a category of pathologies associated with a local manifestation of osteodystrophic changes in the bones of the skeleton due to disturbances or reparative or physiological regeneration due to an increase in bone resorption processes, namely:

несовершенный костный регенерат, формирующийся при сращении кости; кисты кости; асептический некроз головки бедренной кости.imperfect bone regenerate, formed during bone fusion; bone cysts; aseptic necrosis of the femoral head.

Для нормализации структуры костного органа в подавляющем большинстве случаев требуются оперативные вмешательства. Для успеха восстановительных процессов в кости, помимо этого, в настоящее время разрабатываются стимулирующие средства, вводимые в очаг поражения. Одним из таких материалов, обладающих остеоиндуктивными свойствами, является деминерализованный костный матрикс (Савельев В.И., Корнилов Н.В., Сивков С.Н. Опыт клинического применения деминерализованных костных аллотрансплантатов в травматологии и ортопедии // Ортопед., - травматол, 1989, № 9, с.23). В эксперименте доказано, что при заполнении дефектов костной ткани порошкообразным матриксом костеобразование лучше, чем при пластике цельными аутотрансплантатами (Aspenberg P. Wittbjer F., Thomgren K.G. Pulverised Bone Matrix as an injectable Bone Craftin Rabbit Radius Deffects // Clinical Orthopaecs, 1988, № 236, p.261-269). По мнению авторов, у измельченного костного матрикса с размером частиц 70-420 мкм остеогенетический потенциал выше, чем у аутокости.In the overwhelming majority of cases, surgical interventions are required to normalize the structure of the bone organ. For the success of restoration processes in the bone, in addition, stimulants introduced into the lesion focus are currently being developed. One of these materials with osteoinductive properties is the demineralized bone matrix (Savelyev V.I., Kornilov N.V., Sivkov S.N. Experience in the clinical use of demineralized bone allografts in traumatology and orthopedics // Orthopedist., - traumatol, 1989 , No. 9, p.23). In the experiment, it was proved that when filling defects in bone tissue with a powdery matrix, bone formation is better than with plastic autografts (Aspenberg P. Wittbjer F., Thomgren KG Pulverized Bone Matrix as an injectable Bone Craftin Rabbit Radius Deffects // Clinical Orthopaecs, 1988, No. 236 , p. 261-269). According to the authors, in the crushed bone matrix with a particle size of 70-420 microns, the osteogenetic potential is higher than in autologous bone.

Из литературных источников также известно, что гликозаминогликаны являются на ранних стадиях активными стимуляторами регенерации костной ткани (Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань. М.: Медицина, 1981, 312 с.). В качестве источника гликозаминогликанов было предложено использовать консервированную в 0,5% растворе формалина пуповину, содержащую высокий процент гликозаминогликанов. Пуповина обладает важными для пластического материала свойствами: малое содержание клеточных элементов, незрелость антигенных структур, отсутствие признаков гистонесовместимости, биостимулирующим действием на регенеративные процессы (Петров И.А. Профилактика и лечение рубцово-спаечного процесса при застарелых травматических повреждениях сухожилий сгибателей пальцев кисти на уровне костно-фиброзных каналов // Автореф. дисс.(канд. мед. наук. - Ташкент, 1994, 15 с.; Ахмедов О.Т. Болезнь Дюпюитрена и ее хирургическое лечение // Автореф. дисс.(канд. мед. наук. - Ташкент, 1994, 15 с.).From literary sources it is also known that glycosaminoglycans in the early stages are active stimulants of bone tissue regeneration (Serov V.V., Shekhter A.B. Connective tissue. M: Medicine, 1981, 312 p.). It was proposed to use an umbilical cord preserved in a 0.5% formalin solution containing a high percentage of glycosaminoglycans as a source of glycosaminoglycans. The umbilical cord possesses important properties for plastic material: low content of cellular elements, immaturity of antigenic structures, lack of histocompatibility, biostimulating effect on regenerative processes (Petrov I.A.Prevention and treatment of scar-adhesions in chronic traumatic injuries of the flexors of the flexors of the fingers of the hand at the bone and bone -fibrous channels // Abstract of thesis (Ph.D. in Medical Sciences - Tashkent, 1994, 15 pp .; Akhmedov OT Dupuytren's disease and its surgical treatment // Abstract of diss. Doctor of Medical Sciences. - Tashkent, 1994, 15 pp.).

Для оптимизации процессов костеобразования было предложено использовать пуповину, консервированную в 0,5% растворе формалина в сочетании с измельченной аллогенной формалинизированной костью (Патент РФ №2071737, МПК А61К 35/32, опубл. 1993 г.).To optimize the processes of bone formation, it was proposed to use the umbilical cord, preserved in a 0.5% formalin solution in combination with crushed allogeneic formalinized bone (RF Patent No. 2071737, IPC A61K 35/32, publ. 1993).

Одним из недостатков вышеуказанных средств является длительный период лечения дефектов костной ткани при повреждениях воспалительной этиологии.One of the disadvantages of the above funds is the long period of treatment of defects in bone tissue with damage to inflammatory etiology.

Другим направлением является большое разнообразие и многочисленность остеопластических материалов, по мнению многих авторов [1-5], универсальный остеопластический материал для заполнения костных полостей отсутствует. В клинической практике известен целый ряд различных способов восстановления поврежденной костной ткани с помощью аутотрансплантации культивированных клеток костного мозга [6] или фетальных остеобластов [7].Another direction is the great diversity and multiplicity of osteoplastic materials, according to many authors [1-5], there is no universal osteoplastic material for filling bone cavities. In clinical practice, there are a number of different methods for repairing damaged bone tissue using autotransplantation of cultured bone marrow cells [6] or fetal osteoblasts [7].

Однако широкому использованию трансплантатов из клеток костного мозга препятствуют довольно существенные технологические недостатки:However, the widespread use of transplants from bone marrow cells is hindered by fairly significant technological disadvantages:

необходимость оперативного вмешательства для забора материала и последующая болезненность донорского участка, сложность культивирования клеток, необходимость использования дорогостоящих питательных сред и ростовых добавок, значительное отдаление сроков лечения клеточным аутотрансплантатом, ограничение в использовании первичных остеобластов связано с невозможностью их полной аттестации.the need for surgical intervention for the collection of material and the subsequent soreness of the donor site, the complexity of cell cultivation, the need to use expensive nutrient media and growth supplements, the significant delay in treatment with a cell autograft, the limitation in the use of primary osteoblasts is associated with the impossibility of their full certification.

Наиболее близким к заявленному изобретению по технологическому исполнению и полученным результатам является средство для лечения костных дефектов с помощью культивированных аутоклеток костного мозга. Согласно данному средству аутокостный мозг получают путем аспирации из подвздошных костей больных, после чего подвергают 5-7-кратному пассированию с добавлением FGFβ. После культивирования клеточную суспензию наносят на гидроксиаппатит и трансплантируют пациенту в место костного дефекта, проводя иммобилизацию кости [9].Closest to the claimed invention for technological execution and the results obtained is a tool for the treatment of bone defects using cultured autologous bone marrow cells. According to this tool, the autocostal brain is obtained by aspiration from the iliac bones of patients, after which it is subjected to 5-7-fold passaging with the addition of FGFβ. After cultivation, the cell suspension is applied to hydroxyappatite and transplanted to the patient at the site of the bone defect, immobilizing the bone [9].

Несмотря на то, что данное средство-прототип зарекомендовало себя как достаточно эффективное при лечении костного дефекта большой протяженности, оно имеет некоторые недостатки. При получении данного средства осуществляют культивирование нестандартизованного клеточного материала, что может привести к непредсказуемым результатам и трудностям в отработке схемы лечения и увеличению сроков лечения. Кроме того, работа с первичной культурой, а также процедура ее предварительной аттестации увеличивают вероятность контаминации клеток и время подготовки клеточного материала до трансплантации. Использование ростовых факторов, таких как FGF(также ведет к удорожанию данного метода.Despite the fact that this prototype tool has established itself as quite effective in treating a long bone defect, it has some disadvantages. Upon receipt of this tool carry out the cultivation of non-standardized cellular material, which can lead to unpredictable results and difficulties in developing a treatment regimen and increase treatment time. In addition, work with the primary culture, as well as the procedure for its preliminary certification, increase the likelihood of cell contamination and the time of preparation of cellular material before transplantation. The use of growth factors, such as FGF (also leads to a rise in the cost of this method.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является упрощение технологии получения лечебной композиции и сокращение сроков лечения заболеваний костной ткани и остеомиелитов.The technical result of the invention is to simplify the technology for obtaining a therapeutic composition and reduce the treatment time for diseases of bone tissue and osteomyelitis.

Указанный технический результат достигается тем, что композиция для лечения дефектов костной ткани при повреждениях воспалительной этиологии на основе культур клеток, согласно изобретению дополнительно содержит компоненты питательной среды и гелевый наполнитель, а в качестве клеточной культуры композиция содержит суспензию культуры диплоидных фибробластов человека при следующем содержании компонентов в 1 мл:The specified technical result is achieved by the fact that the composition for treating bone defects in cases of inflammatory etiology based on cell cultures, according to the invention additionally contains nutrient medium components and a gel filler, and as a cell culture, the composition contains a suspension of human diploid fibroblasts culture with the following components in 1 ml:

суспензия диплоидных фибробластов человекаhuman diploid fibroblast suspension 1×105-5×107 клеток1 × 10 5 -5 × 10 7 cells компоненты питательная средыmedium components 0,01-0,90.01-0.9 гелевый наполнительgel filler остальное до 1 млthe rest is up to 1 ml

В качестве компонентов питательной среды композиция содержит питательную среду Игла MEM и сыворотку крови плодов коровы при следующем содержании всех компонентов в 1 мл:As components of a nutrient medium, the composition contains a nutrient medium MEM needle and blood serum of cow fruits with the following content of all components in 1 ml:

суспензия диплоидных фибробластов человекаhuman diploid fibroblast suspension 1×105-5×107 клеток1 × 10 5 -5 × 10 7 cells питательная среда Игла MEMculture medium Needle MEM 0,01-0,90.01-0.9 сыворотка крови плодов коровыcow blood serum 0,01-0,20.01-0.2 гелевый наполнительgel filler остальное до 1 млthe rest is up to 1 ml

В качестве диплоидных клеток фибробластов человека она содержит штамм диплоидных клеток человека из ткани легкого эмбриона для заместительной терапии ФЭЧ 16-1, зарегистрированный во НИИ клеточных культур Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии "Вектор" под номером НИИМБ-265 или штамм диплоидных клеток человека из кожно-мышечной ткани эмбриона для заместительной терапии ФЭЧ 16-2, зарегистрированый во НИИ клеточных культур Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии "Вектор" под номером НИИМБ-266.As diploid cells of human fibroblasts, it contains a human diploid cell strain from lung embryo tissue for replacement therapy of PEC 16-1 registered at the Vector Scientific Research Institute of Cell Cultures of the State Scientific Center for Virology and Biotechnology under the number NIIBM-265 or a human diploid cell strain from cutaneous -muscular tissue of the embryo for substitution therapy of PEC 16-2 registered in the Research Institute of Cell Cultures of the State Scientific Center for Virology and Biotechnology "Vector" under the number NIIMB-266.

Преимуществом заявляемого изобретения является использование при лечении костных дефектов стандартного клеточного материала, приготовленного и аттестованного заранее, что позволяет исключить этап забора аутоклеток костного мозга, и таким образом, снять стрессовый фактор, исключить донорские раны, значительно сократить сроки подготовки материала и повысить эффективность заживления, стандартизовать метод лечения и снизить время госпитализации.An advantage of the claimed invention is the use in the treatment of bone defects of standard cellular material prepared and certified in advance, which eliminates the stage of harvesting bone marrow autologous cells, and thus removes the stress factor, eliminates donor wounds, significantly reduces the preparation time of the material and improves healing efficiency, standardizes treatment method and reduce hospitalization time.

Для трансплантации используют штаммы диплоидных клеток фибробластов легкого или кожно-мышечной ткани эмбриона человека, посевной и рабочие банки которого были аттестованы в ГНЦ ВБ "Вектор" и в ГИСК им. Л.А.Тарасевича для применения в заместительной терапии [10]. Клетки стандартны, свободны от вирусной, бактериальной, микоплазменной и грибковой контаминации, имеют стабильный кариотип, хорошие культуральные свойства. Показано отсутствие посторонних вирусов и онкогенности. По литературным данным фетальные фибробласты не просто более эффективны в отношении стимуляции деления клеток, но и в отличие от аналогичных клеток взрослого человека активно мигрируют в зоны механического повреждения клеточного слоя [11]. Таким образом, использование для трансплантациии дтплоидных клеток фетальных фибробластов человека, заранее атгестованных и заложенных на хранение в достаточном количестве ампул, свидетельствует о соответствии нашего решения критерию "существенные отличия".For transplantation, strains of diploid cells of fibroblasts of the lung or musculoskeletal tissue of a human embryo are used, the inoculum and working banks of which were certified at the State Research Center of the World Bank "Vector" and at GISK named after L.A. Tarasevich for use in replacement therapy [10]. The cells are standard, free of viral, bacterial, mycoplasma and fungal contamination, have a stable karyotype, good cultural properties. The absence of extraneous viruses and oncogenicity has been shown. According to published data, fetal fibroblasts are not only more effective in stimulating cell division, but also, unlike similar adult cells, actively migrate to areas of mechanical damage to the cell layer [11]. Thus, the use of human fetal fibroblasts for transplantation and Dtloid cells, which were previously certified and stored in a sufficient number of ampoules, indicates that our solution meets the criterion of "significant differences".

Использование альтернативного источника трансплантируемых клеток - фибробластов - дает ряд преимуществ. Помимо того, что нет необходимости в заборе донорского материала и создания дополнительного стрессорного фактора для больного, удлинения сроков подготовки материала из-за культивирования аутоклеток и высокой вероятности контаминации клеток в процессе манипуляций, предлагаемые диплоидные фибробласты стандартны, аттестованы в соответствии с современными требованиям. Показано, что диплоидные фибробласты посредством синтеза компонентов экстрацеллюлярного матрикса стимулируют пролиферативную активность остеобластов, возможна последующая дифференцировка фибробластов в клетки костной ткани [8].The use of an alternative source of transplanted cells - fibroblasts - provides several advantages. In addition to the fact that there is no need for the collection of donor material and the creation of an additional stress factor for the patient, lengthening the preparation time of the material due to the cultivation of autocytes and the high likelihood of cell contamination during manipulations, the proposed diploid fibroblasts are standard, certified in accordance with modern requirements. It has been shown that diploid fibroblasts through the synthesis of extracellular matrix components stimulate the proliferative activity of osteoblasts, and subsequent differentiation of fibroblasts into bone cells is possible [8].

Пример 1. Диплоидные клетки фибробластов человека получают из легкого эмбриона человека с соблюдением правил асептики, закладывают на хранение при температуре жидкого азота посевной и рабочий банки. Банки аттестуют в соответствии с современными требованиями ВОЗ и проводят контроль на стабильность культуральных, морфологических и кариологических свойств. Видовую специфичность подтверждают с помощью контроля подвижности изоферментов электрофоретически, анализируя кариотип клеток; подтверждалось отсутствие туморогенных потенций; отсутствие вирусов, бактерий, грибов и микоплазм методами ПЦР и ИФА анализа, высевом на микробиологические среды. Клетки прошли контрольные испытания в ГИСК им. Л.А.Тарасовича МЗ РФ(Ю). Получено заключение комитета МИБП на использование клеток для заместительной терапии [12].Example 1. Diploid cells of human fibroblasts are obtained from a human lung embryo in compliance with aseptic rules, laid in storage at the temperature of liquid nitrogen inoculum and working cans. Banks certify in accordance with current WHO requirements and monitor the stability of cultural, morphological and karyological properties. Species specificity is confirmed by monitoring the mobility of isoenzymes electrophoretically by analyzing the karyotype of cells; confirmed the absence of tumorigenic potencies; the absence of viruses, bacteria, fungi and mycoplasmas by PCR and ELISA analysis, plating on microbiological media. Cells passed control tests at the GISK them. L.A. Tarasovich of the Ministry of Health of the Russian Federation (Yu). The conclusion of the MIBP committee on the use of cells for replacement therapy was obtained [12].

Пример 2. Для культивирования ампулу с клетками размораживают на водяной бане при температуре 37,5°С, суспензию переносят в культуральный сосуд, инкубируют в питательной среде ИГЛА MEM с добавлением 10% эмбриональной сыворотки плодов коровы при температуре 37,5°С и культивируют до получения необходимого количества клеток. После последнего культивирования клетки смешивают с гелем 5%-ного полиэтиленоксида, питательной средой Игла MEM и сывороткой крови плодов коровы с получением лечебной композиции следующих составов:Example 2. For cultivation, the ampoule with the cells is thawed in a water bath at a temperature of 37.5 ° C, the suspension is transferred to a culture vessel, incubated in a MEM needle culture medium with the addition of 10% fetal bovine serum at a temperature of 37.5 ° C and cultured to getting the required number of cells. After the last cultivation, the cells are mixed with 5% polyethylene oxide gel, MEM needle nutrient medium and blood serum of cow fruits to obtain a therapeutic composition of the following compositions:

Композиция АComposition A

суспензия диплоидных фибробластов человекаhuman diploid fibroblast suspension 1×105 клеток1 × 10 5 cells питательная среда Игла MEMculture medium Needle MEM 0,010.01 сыворотка крови плодов коровыcow blood serum 0,010.01 гелевый наполнительgel filler остальное до 1 млthe rest is up to 1 ml

Композиция БComposition B

суспензия диплоидных фибробластов человекаhuman diploid fibroblast suspension 5×107 клеток5 × 10 7 cells питательная среда Игла MEMculture medium Needle MEM 0,70.7 сыворотка крови плодов коровыcow blood serum 0,20.2 гелевый наполнительgel filler остальное до 1 млthe rest is up to 1 ml

Композиция ВComposition B

суспензия диплоидных фибробластов человекаhuman diploid fibroblast suspension 5×106 клеток5 × 10 6 cells питательная среда Игла MEMculture medium Needle MEM 0,90.9 сыворотка крови плодов коровыcow blood serum 0,010.01 гелевый наполнительgel filler остальное до 1 млthe rest is up to 1 ml

Композиции А, Б и В используют в зависимости от состояния раны больного.Compositions A, B and C are used depending on the condition of the patient’s wound.

Композицию транспортируют до лечебного учреждения. После очистки раны в условиях операционной композицию наносят на рану.The composition is transported to a medical institution. After cleaning the wound under operating conditions, the composition is applied to the wound.

Пример 3. Больной Д. 48 лет, № истории 1182/03 г., обратился в отделение эндопротезирования и эндоскопической хирургии суставов 24.08.03 с жалобами на наличие свища с гнойным отделяемым в области левого тазобедренного сустава.Example 3. Patient D. 48 years old, history No. 1182/03, turned to the department of endoprosthetics and endoscopic joint surgery on 08.24.03 with complaints of a fistula with purulent discharge in the area of the left hip joint.

10.02.02 оперирован в городе N, где произведено тотальное цементное эндопротезирование левого ТБС по поводу посттравматического коксартроза 3 степени.02.10.02 operated in the city of N, where the total cement arthroplasty of the left side was performed for post-traumatic coxarthrosis of the 3rd degree.

с 19.05. по 27.07.03 г.г. проходил курс лечения с диагнозом: Глубокая поздняя раневая инфекция области эндопротеза "Зиммер", левого тазобедренного сустава. Хронический постимплантационный остеомиелит бедренной и подвздошной костей слева, свищевая форма. Выполнено оперативное лечение-ревизия эндопротеза, фенестрация левой бедренной кости, удаление эндопротеза, некрэктомия, секвестрэктомия, дренирование раны. При контрольном обследовании через 2 месяца в области левого ТБС, при фистулографии выявлена полость. При сравнении фистулограмм полость в замерах не уменьшилась. В посевах раневого отделяемого выделены Staphylococus aureus, Pseudomonas. aeruginosae.from 05.19. on July 27, 2003 underwent a course of treatment with a diagnosis of: Deep late wound infection of the endoprosthesis area "Zimmer", the left hip joint. Chronic post-implantation osteomyelitis of the femur and ilium on the left, fistulous form. Surgical treatment-revision of the endoprosthesis, fenestration of the left femur, removal of the endoprosthesis, necrectomy, sequestrectomy, and wound drainage were performed. A follow-up examination after 2 months in the area of the left TBS, with fistulography revealed a cavity. When comparing fistulograms, the cavity in the measurements did not decrease. In the crops of the wound discharge, Staphylococus aureus, Pseudomonas were isolated. aeruginosae.

29.08.03 больному выполнено хирургическое вмешательство: ревизия гнойной полости, иссечение свища, остеонекрэктомия, дренирование и пластика полости мышцей на питающей ножке. В послеоперационном периоде развилось глубокое нагноение раны, с обострением гнойного воспалительного процесса, развитием сепсиса и образованием гнойных затеков по задней поверхности левого бедра. Последние вскрыты и дренированы. Проводилась антибактериальная терапия (тиенам), стимуляция макрофагального звена (полиоксидоний, ликопид), иммуностимуляция пентоглобином и ежедневные перевязки с антисептиками, а также аналгезирующая и физиотерапия. Для коррекции дисбактериоза назначались пробиотики.On 29.08.03, the patient underwent surgery: revision of the purulent cavity, excision of the fistula, osteonecrectomy, drainage and plastic surgery of the cavity with muscle on the feeding leg. In the postoperative period, deep suppuration of the wound developed, with an exacerbation of the purulent inflammatory process, the development of sepsis and the formation of purulent sagging along the posterior surface of the left thigh. The latter are opened and drained. Antibacterial therapy (thienam), macrophage link stimulation (polyoxidonium, lycopid), pentoglobin immunostimulation and daily dressings with antiseptics, as well as analgesic and physiotherapy were carried out. Probiotics were prescribed to correct dysbiosis.

11.09.03 после повторного хирургического вмешательства пункционно непосредственно в полость на дне ацетабулярной впадины вводилась композиция Б фибробластов в гелевой взвеси. Копозиция фибробластов вводилась трижды 11.09.03, 16.09.03 и 23.09.03. В результате лечения на контрольной фистулограмме на 22 сутки отмечено уменьшение полости в 2,5-3 раза и гнойного отделяемого. Перевязки стало возможным выполнять через день. Больной активизирован, обучен ходьбе на костылях и выписан 27.10.03 в удовлетворительном состоянии для лечения по месту жительства. Спустя два месяца свищ закрылся. Получена ремиссия.09/11/03 after repeated surgery, puncture directly into the cavity at the bottom of the acetabular cavity was introduced composition B of fibroblasts in a gel suspension. A coposition of fibroblasts was introduced three times on 09/11/03, 09/16/03, and 09/23/03. As a result of treatment, a control fistulogram on day 22 showed a decrease in the cavity by 2.5-3 times and purulent discharge. Dressings became possible to perform every other day. The patient was activated, trained to walk on crutches and was discharged 10/27/03 in satisfactory condition for treatment at the place of residence. Two months later, the fistula closed. Received remission.

Пример 4. Диплоидные клетки фибробластов человека получают из диплоидных клеток человека, а именно из кожно-мышечной ткани эмбриона для заместительной терапии ФЭЧ 16-2 с соблюдением правил асептики, закладывают на хранение при температуре жидкого азота посевной и рабочий банки. Банки аттестуют в соответствии с современными требованиями ВОЗ и проводят контроль на стабильность культуральных, морфологических и кариологических свойств. Видовую специфичность подтверждают с помощью контроля подвижности изоферментов электрофоретически, анализируя кариотип клеток; подтверждалось отсутствие туморогенных потенций; отсутствие вирусов, бактерий, грибов и микоплазм методами ПЦР и ИФА анализа, высевом на микробиологические среды. Клетки прошли контрольные испытания в ГИСК им. Л.А. Тарасовича МЗ РФ (10). Для культивирования ампулу с клетками размораживают на водяной бане при температуре 37,5°С, суспензию переносят в культуральный сосуд, инкубируют в питательной среде ИГЛА MEM с добавлением 10% эмбриональной сыворотки плодов коровы при температуре 37,5°С и культивируют до получения необходимого количества клеток. После последнего культивирования клетки смешивают с гелем 5%-ного полиэтиленоксида, питательной средой Игла MEM и сывороткой крови плодов коровы с получением лечебной композиции следующего состава:Example 4. Diploid cells of human fibroblasts are obtained from human diploid cells, namely, from the musculoskeletal tissue of the embryo for replacement therapy of PEC 16-2 in compliance with aseptic rules, placed in storage at the temperature of liquid nitrogen inoculum and working banks. Banks certify in accordance with current WHO requirements and monitor the stability of cultural, morphological and karyological properties. Species specificity is confirmed by monitoring the mobility of isoenzymes electrophoretically by analyzing the karyotype of cells; confirmed the absence of tumorigenic potencies; the absence of viruses, bacteria, fungi and mycoplasmas by PCR and ELISA analysis, plating on microbiological media. Cells passed control tests at the GISK them. L.A. Tarasovich Ministry of Health of the Russian Federation (10). For cultivation, the ampoule with cells is thawed in a water bath at a temperature of 37.5 ° C, the suspension is transferred to a culture vessel, incubated in a MEM needle culture medium with the addition of 10% fetal serum of cow fruits at a temperature of 37.5 ° C and cultured to obtain the required amount cells. After the last cultivation, the cells are mixed with a gel of 5% polyethylene oxide, nutrient medium Needle MEM and blood serum of cow fruits to obtain a therapeutic composition of the following composition:

суспензия диплоидных клетокdiploid cell suspension

из кожно-мышечной ткани эмбрионаfrom musculoskeletal tissue of the embryo 1×105 клеток1 × 10 5 cells питательная среда Игла MEMculture medium Needle MEM 0,010.01 сыворотка крови плодов коровыcow blood serum 0,010.01 гелевый наполнитель остальноеgel filler rest до 1 млup to 1 ml

Композицию транспортируют до лечебного учреждения. После очистки раны в условиях операционной композицию наносят на рану.The composition is transported to a medical institution. After cleaning the wound under operating conditions, the composition is applied to the wound.

Пример 5. Больному N выполнено хирургическое вмешательство: ревизия гнойной полости, иссечение свища, остеонекрэктомия, дренирование и пластика полости мышцей на питающей ножке. В послеоперационном периоде развилось глубокое нагноение раны с обострением гнойного воспалительного процесса, развитием сепсиса и образованием гнойных затеков. После хирургического вмешательства пункционно непосредственно в полость на дне ацетабулярной впадины вводилась композиция (по примеру 4) фибробластов в гелевой взвеси. Композиция фибробластов вводилась трижды. В результате лечения на контрольной фистулограмме на 20 сутки отмечено уменьшение полости в 2 раза и гнойного отделяемого. Перевязки стало возможным выполнять через день. Больной активизирован и выписан в удовлетворительном состоянии для лечения по месту жительства. Спустя два месяца свищ закрылся. Получена ремиссия.Example 5. Patient N underwent surgery: revision of the purulent cavity, excision of the fistula, osteonecrectomy, drainage and plastic surgery of the cavity with muscle on the feeding leg. In the postoperative period, deep suppuration of the wound developed with an exacerbation of the purulent inflammatory process, the development of sepsis and the formation of purulent sagging. After surgery, a composition (according to Example 4) of fibroblasts in a gel suspension was injected directly into the cavity at the bottom of the acetabular cavity. The fibroblast composition was administered three times. As a result of treatment on the control fistulogram on day 20, a decrease in the cavity by 2 times and purulent discharge was noted. Dressings became possible to perform every other day. The patient is activated and discharged in satisfactory condition for treatment at the place of residence. Two months later, the fistula closed. Received remission.

Таким образом, приведенные примеры показывают, что данный способ восстановления оказывается эффективным при лечении костных дефектов воспалительной этиологии.Thus, the above examples show that this method of restoration is effective in the treatment of bone defects of inflammatory etiology.

Трансплантируемые фибробласты стимулируют процесс заживления дефекта и сами дифференцируются в клеточные элементы костной ткани.Transplanted fibroblasts stimulate the healing process of the defect and differentiate themselves into cellular elements of bone tissue.

Использование композиции позволяет ускорить наступление ремиссии и увеличить сроки ремиссии хронического заболевания. Для эффективного лечения данный композит вводится пункционно в условиях операционной, трижды с интервалом 3-10 дней.Using the composition allows you to accelerate the onset of remission and increase the duration of remission of a chronic disease. For effective treatment, this composite is injected puncture in the operating room, three times with an interval of 3-10 days.

Источники научно-технической информацииSources of scientific and technical information

1. Безрукова А.П. Хирургическое лечение заболеваний пародонта. - Медицина, 1997, с.1-8.1. Bezrukova A.P. Surgical treatment of periodontal disease. - Medicine, 1997, p.1-8.

2. Зуев В.П., Дмитриева Л.А., Панкратов А.С. и др. Сравнительная характеристика стимуляторов репаративного остеогенеза в лечении заболеваний пародонта. // Стоматология, 1996, - т.75, №5, с.31-34.2. Zuev V.P., Dmitrieva L.A., Pankratov A.S. et al. Comparative characteristics of reparative osteogenesis stimulants in the treatment of periodontal diseases. // Dentistry, 1996, - t. 75, No. 5, p.31-34.

3. 3. Грин Г. Использование культур клеток для лечения болезней. // В мире науки. - 1992, №1, с.52-59.3. 3. Green G. The use of cell cultures for the treatment of diseases. // In the world of science. - 1992, No. 1, p. 52-59.

4. Грудянов А.И., Ерохин А.И. Остеопластические материалы, используемые при хирургическом лечении заболеваний пародонта // Пародонтология, 1998, №1, с.13-23.4. Grudyanov A.I., Erokhin A.I. Osteoplastic materials used in the surgical treatment of periodontal diseases // Periodontology, 1998, No. 1, p.13-23.

5. Грудянов А.И., Ерохин А.И., Бякова С.Ф. Применение препаратов фирмы "Geistlic" / Новое в стоматологии. - №82001, с.72-77.5. Grudyanov A.I., Erokhin A.I., Byakova S.F. The use of drugs company "Geistlic" / New in dentistry. - No. 82001, p. 72-77.

6. M. Marcacci E.kon R. Cancedda, Кутепов C.M., Лавруков A.M., Мухачев В.А. Замещение костных дефектов имплантатами, насыщенными остеогенными стромальными клетками костного мозга // 2 Московский международный конгресс Биотехнология: состояние и перспективы развития, том 1 с.124 2003.6. M. Marcacci E.kon R. Cancedda, Kutepov C.M., Lavrukov A.M., Mukhachev V.A. Substitution of bone defects with implants saturated with osteogenic stromal bone marrow cells // 2 Moscow International Congress Biotechnology: State and Development Prospects, Volume 1 p. 124 2003.

7. Серебряк Т.В. Колосов Н.Г. Стимуляция остеогенеза методом трансплантации эмбриональных клеток костной ткани // Клинические аспекты клеточной и тканевой терапии, 2000, с.171.7. Serebryak T.V. Kolosov N.G. Stimulation of osteogenesis by transplantation of bone tissue embryonic cells // Clinical aspects of cell and tissue therapy, 2000, p.171.

8. AKIRA YAMAGUCHI, TOSHIHISA KOMORI, AND TATSUO SUDA Regulation of Osteoblast Differentiation Mediated by Bone Morphogenetic Proteins, Hedgehogs, and Cbfal // Endocrine Reviews 21 (4): 393-411.8. AKIRA YAMAGUCHI, TOSHIHISA KOMORI, AND TATSUO SUDA Regulation of Osteoblast Differentiation Mediated by Bone Morphogenetic Proteins, Hedgehogs, and Cbfal // Endocrine Reviews 21 (4): 393-411.

9. R.Cancedda, R.Quarto, P.Giannoni, M.Mastrogiacomo & A.Muraglia CELL THERAPY AND BONE REPAIR // European Cells and Materials Vol.5. Suppl. 2, 2003 (pages 2-3).9. R. Cancedda, R. Quarto, P. Giannoni, M. Mastrogiacomo & A. Muraglia CELL THERAPY AND BONE REPAIR // European Cells and Materials Vol. 5. Suppl. 2, 2003 (pages 2-3).

10. Экспертное заключение ГИСК им. Тарасовича по результатам аттестации диплоидных клеток человека для заместительной терапии, представленных ГНЦ ВБ «Вектор» от 26.06.2003.10. Expert opinion GISK them. Tarasovich according to the results of certification of human diploid cells for replacement therapy, presented by SSC WB "Vector" from 06/26/2003.

11. Kondo Hiroshi, Matsuda Rei, Yonezava Yumiko. In Vitro Cell. And Ved. Biol. USA. 1993. V.29, N.12. P.929-935.11. Kondo Hiroshi, Matsuda Rei, Yonezava Yumiko. In Vitro Cell. And ved. Biol. USA 1993. V.29, N.12. P.929-935.

12. Протокол комитета МИБП №6 от 26.06.2003.12. Protocol of the IIBP Committee No. 6 dated 06/26/2003.

Claims (2)

1. Композиция для лечения дефектов костной ткани при повреждениях воспалительной этиологии, содержащая питательную среду Игла MEM, 10%-ную сыворотку плодов коровы и диплоидные клетки фибробластов человека, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит гелевый наполнитель, а в качестве диплоидных клеток фибробластов человека композиция содержит штамм диплоидных клеток фибробластов человека из ткани легкого эмбриона для заместительной терапии ФЭЧ 16-1, зарегистрированный во НИИ клеточных культур Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» под номером НИИМБ-265 или штамм диплоидных клеток человека из кожно-мышечной ткани эмбриона для заместительной терапии ФЭЧ 16-2, зарегистрированный во НИИ клеточных культур Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» под номером НИИМБ-266 при следующем содержании компонентов, 1 мл:1. Composition for the treatment of bone defects in inflammatory etiology injuries, containing nutrient medium Needle MEM, 10% serum of cow fruits and diploid cells of human fibroblasts, characterized in that it additionally contains a gel filler, and composition as diploid cells of human fibroblasts contains a diploid cell strain of human fibroblasts from lung tissue of embryo for replacement therapy of PEC 16-1, registered at the Research Institute of Cell Culture of the State Virus Research Center of biology and biotechnology "Vector" under the number NIIBM-265 or a strain of human diploid cells from the musculoskeletal tissue of the embryo for substitution therapy of PEC 16-2 registered in the Research Institute of cell cultures of the State Scientific Center for Virology and Biotechnology "Vector" under the number NIIBB-266 at the following content of components, 1 ml: Суспензия диплоидных клеток фибробластов человекаHuman fibroblast diploid cell suspension 1·105-5·107 клеток1 · 10 5 -5 · 10 7 cells Питательная среда Игла MEMCulture medium Needle MEM 0,01-0,90.01-0.9 10%-ная сыворотка крови плодов коровы10% cow serum 0,01-0,20.01-0.2 Гелевый наполнительGel filler Остальное до 1 млThe rest is up to 1 ml
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что в качестве гелевого наполнителя используют 5%-ный полиэтиленоксид.2. The composition according to claim 1, characterized in that 5% polyethylene oxide is used as a gel filler.
RU2004126518/15A 2004-09-01 2004-09-01 Composition for bone tissue treatment in damages of inflammation etiology RU2296575C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2004126518/15A RU2296575C2 (en) 2004-09-01 2004-09-01 Composition for bone tissue treatment in damages of inflammation etiology

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2004126518/15A RU2296575C2 (en) 2004-09-01 2004-09-01 Composition for bone tissue treatment in damages of inflammation etiology

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2004126518A RU2004126518A (en) 2006-02-10
RU2296575C2 true RU2296575C2 (en) 2007-04-10

Family

ID=36049758

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004126518/15A RU2296575C2 (en) 2004-09-01 2004-09-01 Composition for bone tissue treatment in damages of inflammation etiology

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2296575C2 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2383564C1 (en) * 2008-11-21 2010-03-10 Астемир Икрамович Шайхалиев Composition - osteoinducer and osteoconductor in treatment of bone pathology in dentistry and oral surgery and method of obtaining composition - osteoinducer and osteoconductor in treatment of bone pathology in dentistry and oral surgery
RU2385744C1 (en) * 2008-09-02 2010-04-10 Андрей Анатольевич Алексеев Deep wound healing technique
RU2795135C2 (en) * 2021-10-18 2023-04-28 Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) Method for cultivation of fetal porcine cells for virology

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2204332C1 (en) * 2001-12-07 2003-05-20 Новикова Ирина Андреевна Surgical method for treating periodontium inflammation diseases
RU2210352C1 (en) * 2001-12-07 2003-08-20 Глинских Нина Поликарповна Composition for treatment of parodontium inflammatory sickness based on cellular cultures
RU2001133504A (en) * 2001-12-07 2004-02-27 Нина Поликарповна Глинских A method of obtaining transplants for filling bone defects in the surgical treatment of inflammatory periodontal diseases
RU2231986C1 (en) * 2002-12-15 2004-07-10 Вольхина Валентина Николаевна Method for surgical treating inflammatory-destructive parodontium diseases

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2204332C1 (en) * 2001-12-07 2003-05-20 Новикова Ирина Андреевна Surgical method for treating periodontium inflammation diseases
RU2210352C1 (en) * 2001-12-07 2003-08-20 Глинских Нина Поликарповна Composition for treatment of parodontium inflammatory sickness based on cellular cultures
RU2001133504A (en) * 2001-12-07 2004-02-27 Нина Поликарповна Глинских A method of obtaining transplants for filling bone defects in the surgical treatment of inflammatory periodontal diseases
RU2231986C1 (en) * 2002-12-15 2004-07-10 Вольхина Валентина Николаевна Method for surgical treating inflammatory-destructive parodontium diseases

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CANCEDDA R. et al. Cell therapy and bone repair. European cell and materials, vol.5. suppl. 2, 2003, p.2-3. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2385744C1 (en) * 2008-09-02 2010-04-10 Андрей Анатольевич Алексеев Deep wound healing technique
RU2383564C1 (en) * 2008-11-21 2010-03-10 Астемир Икрамович Шайхалиев Composition - osteoinducer and osteoconductor in treatment of bone pathology in dentistry and oral surgery and method of obtaining composition - osteoinducer and osteoconductor in treatment of bone pathology in dentistry and oral surgery
RU2795135C2 (en) * 2021-10-18 2023-04-28 Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) Method for cultivation of fetal porcine cells for virology

Also Published As

Publication number Publication date
RU2004126518A (en) 2006-02-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2447878C2 (en) Osteogenesis and chondrogenesis activation
JP6123018B2 (en) Formulations derived from placental substances and methods for producing and using the same
TW201427671A (en) Compositions and methods for recruiting and localizing stem cells
CN105998067A (en) Preparation process, tube and device of wound repair agent composition
KR20160147058A (en) Therapeutic placental compositions, methods of making and methods of use
US20220168356A1 (en) Allografts containing viable cells and methods therof
Bravo et al. Orthobiologics: a comprehensive review of the current evidence and use in orthopedic subspecialties
Zhuang et al. A novel cytotherapy device for rapid screening, enriching and combining mesenchymal stem cells into a biomaterial for promoting bone regeneration
Dilogo et al. Allogeneic umbilical cord-derived mesenchymal stem cells for treating critical-sized bone defects: a translational study
Ashukinа et al. Morphology of the repair of critical size bone defects which filling allogeneic bone implants in combination with mesenchymal stem cells depending on the recipient age in the experiment
US20030202965A1 (en) Methods and compositions for the preparation of cell transplants
Bohlouli et al. Tissue buccal fat pad–stromal vascular fraction as a safe source in maxillofacial bone regeneration: A clinical pilot study
Freitas et al. Freeze-Dried Platelet-Rich Plasma and Stem Cell-Conditioned Medium for Therapeutic Use in Horses
US20120020934A1 (en) Materials and methods for cryopreserved bone constructs
RU2296575C2 (en) Composition for bone tissue treatment in damages of inflammation etiology
RU2545993C2 (en) Method for repairing long bone defects of critical size
Ben-David et al. Autologous cell-coated particles for the treatment of segmental bone defects—a new cell therapy approach
CN115845138A (en) Preparation method and application of high osteogenic activity bone repair material for promoting angiogenesis
Huang et al. The osteoinductive and osseointegration properties of decellularized extracellular matrix bone derived from different sites
US11602579B2 (en) Biomaterial comprising adipose-derived stem cells and method for producing the same
RU2389442C1 (en) Method of treating chronic osteomyelitis with bone defect
Schröter et al. First mid-term results after cancellous allograft vitalized with autologous bone marrow for infected femoral non-union
RU2336841C2 (en) Method for osteoplasty in experiment
Vicente et al. Instant CEMTRO Cell (ICC), high density autologous chondrocytes implantation
Perwira et al. Physiobiochemical and microbiologic stability characteristics of freeze-dried cartilage secretome Adipose Mesenchymal Stem Cell (AdMSC)

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20140902