RU2295357C1 - A dry associated culture virus vaccine against avian newcastle disease and smallpox - Google Patents
A dry associated culture virus vaccine against avian newcastle disease and smallpox Download PDFInfo
- Publication number
- RU2295357C1 RU2295357C1 RU2005119828/13A RU2005119828A RU2295357C1 RU 2295357 C1 RU2295357 C1 RU 2295357C1 RU 2005119828/13 A RU2005119828/13 A RU 2005119828/13A RU 2005119828 A RU2005119828 A RU 2005119828A RU 2295357 C1 RU2295357 C1 RU 2295357C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- smallpox
- strain
- vaccine
- newcastle disease
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 46
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 34
- 241000271566 Aves Species 0.000 title claims abstract description 20
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 title claims abstract description 16
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 8
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 22
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 claims description 6
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 21
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 4
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000045500 Diseae Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000006758 Marek Disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к получению ассоциированной культуральной вакцины при совместном культивировании штамма "М-ВНИИВВиМ" вируса ньюкаслской болезни (НБ) и штамма «ВГНКИ-3» вируса оспы птиц (ОП).The invention relates to the field of veterinary virology, in particular to the production of an associated culture vaccine during co-cultivation of the M-VNIIIVViM strain of the Newcastle disease virus (NB) and the VGNKI-3 strain of avian pox virus (OP).
Для профилактики инфекционных болезней птиц нарабатывается большое количество как живых, так и инактивированных вакцин, в т.ч. против НБ и ОП, которые применяются в виде монопрепаратов, что увеличивает трудозатраты. В связи с этим, для сокращения числа прививок и трудозатрат, а также снижения стрессов в процессе вакцинации, отрицательно влияющих на здоровье и продуктивность птицы, актуален вопрос о целесообразности применения ассоциированных вакцин.For the prevention of infectious diseases of birds, a large number of both live and inactivated vaccines are being developed, including against NB and OP, which are used in the form of single drugs, which increases labor costs. In this regard, to reduce the number of vaccinations and labor costs, as well as reduce stress during the vaccination process, adversely affecting the health and productivity of birds, the question of the appropriateness of using associated vaccines is relevant.
Эффективность комплексной иммунизации эмбрион-вакцинами против ньюкаслской болезни и оспы птиц показана рядом исследователей как в экспериментальных, так и полевых условиях при внутрикожной аппликации [2, 3, 5, 6].The effectiveness of complex immunization with embryo vaccines against Newcastle disease and smallpox birds has been shown by a number of researchers in both experimental and field conditions with intradermal application [2, 3, 5, 6].
Известны комбинированные генно-инженерные вакцины против гриппа А птиц и оспы, НБ и оспы, созданные на основе вектора вируса оспы птиц (США). Живых ассоциированных культуральных вакцин против оспы птиц и ньюкаслской болезни до настоящего времени не создано.Known combined genetic engineering vaccines against influenza A of birds and smallpox, NB and smallpox, created on the basis of the vector of smallpox virus of birds (USA). Live associate culture vaccines against smallpox birds and Newcastle disease have not yet been created.
Ассоциированный метод вакцинации, например, против НБ и ларинготрахеита [1], болезни Марека и Гамборо заключается в одновременном введении препаратов в организм птиц [4]. Однако положительных результатов одновременного накопления (репродукции) вирусов НБ и ларинготрахеита при совместном культивировании в одной биосистеме и даже в куриных эмбрионах (КЭ) не получено.An associated vaccination method, for example, against NB and laryngotracheitis [1], Marek’s disease and Gamboro’s disease, consists in the simultaneous administration of drugs into the body of birds [4]. However, positive results of the simultaneous accumulation (reproduction) of NB viruses and laryngotracheitis during co-cultivation in the same biosystem and even in chicken embryos (CE) have not been obtained.
Профилактику ньюкаслской болезни птиц в основном проводят путем вакцинации препаратами, изготовленными на КЭ из лентогенных штаммов - Ла Сота, Бор-74 ВГНКИ и мезогенных штаммов парамиксовируса 1 - "Н", ГАМ-61. Эти штаммы при различных способах введения вызывают образование вирусспецифических антител (более 3 log2) и защищают от заболевания более 80% птицы.Prevention of Newcastle disease of birds is mainly carried out by vaccination with drugs made on TBE from tapeogenic strains - La Sota, Bor-74 VGNKI and mesogenic strains of paramyxovirus 1 - "N", GAM-61. These strains with various methods of administration cause the formation of virus-specific antibodies (more than 3 log 2 ) and protect against disease more than 80% of the bird.
Вакцины из лентогенных штаммов обладают хорошей иммуногенностью, не реактогенны, вакцинацию можно проводить различными методами, но иммунитет формируется через 14-21 сутки после иммунизации.Vaccines from lentogenic strains have good immunogenicity, are not reactogenic, vaccination can be carried out by various methods, but immunity is formed 14-21 days after immunization.
Отличительной особенностью вакцин из мезогенных штаммов является то, что они защищают птицу на 3-8 сутки, но при этом обладают остаточной реактогенностью.A distinctive feature of vaccines from mesogenic strains is that they protect the bird for 3-8 days, but at the same time they have residual reactogenicity.
Вирусным сырьем для изготовления вакцин из лентогенных и мезогенных штаммов является экстраэмбриональная жидкость зараженных вирусом развивающихся КЭ, причем для получения вакцин необходимо использовать только СПФ эмбрионы, стоимость которых в несколько раз дороже обычных, а их производство в России не налажено.The viral raw material for the manufacture of vaccines from streptogenic and mesogenic strains is the extraembryonic fluid of virus infected developing CEs, and to obtain vaccines it is necessary to use only SPF embryos, the cost of which is several times more expensive than conventional ones, and their production in Russia is not adjusted.
Исходя из вышеизложенного, для изготовления ассоциированной вакцины использована культура клеток КФ и мезогенный штамм «М-ВНИИВВиМ», хорошо накапливающийся в этой клеточной системе.Based on the foregoing, for the manufacture of the associated vaccine used cell culture KF and the mesogenic strain M-VNIIVViM, which accumulates well in this cell system.
Наиболее близким аналогом предлагаемого изобретения является «Вакцина против оспы птиц и способ ее изготовления» [7]. Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и касается культуральной вакцины из аттенуированного штамма вируса оспы кур и способа ее изготовления. Вакцина имеет следующий состав, %: вируссодержащий материал из штамма "К" вируса оспы кур с биологической активностью вируса 7,0-7,5 lg ТЦД 50/мл или 4,0-4,5 lg ИД для птиц - 65,0-70,0; пептон - 5,7-7,0, лактоза - 5,7-7,0, буфер фосфатный - остальное. В вакцину добавляют антибиотики: пенициллин - 100-200 ЕД/мл и стрептомицин - 100-200 мкг/мл.The closest analogue of the invention is the "Vaccine against smallpox birds and the method of its manufacture" [7]. The invention relates to veterinary virology and relates to a culture vaccine from an attenuated strain of chicken pox virus and a method for its manufacture. The vaccine has the following composition,%: virus-containing material from strain K of chicken pox virus with biological activity of the virus 7.0-7.5 lg TCD 50 / ml or 4.0-4.5 lg ID for birds - 65.0- 70.0; peptone - 5.7-7.0, lactose - 5.7-7.0, phosphate buffer - the rest. Antibiotics are added to the vaccine: penicillin - 100-200 U / ml and streptomycin - 100-200 μg / ml.
Способ изготовления этой вакцины заключается в следующем: суспензию трипсинизированных клеток кожи эмбрионов кур (КЭК) заражают вирусом оспы кур (штамм "К") и культивируют в течение 72-96 ч, после чего подвергают замораживанию - оттаиванию. Полученный вируссодержащий материал смешивают со стабилизатором, расфасовывают в ампулы и лиофилизируют.A method of manufacturing this vaccine is as follows: a suspension of trypsinized skin cells of chicken embryos (KEK) is infected with chicken pox virus (strain K) and cultured for 72-96 hours, after which it is frozen and thawed. The resulting virus-containing material is mixed with a stabilizer, packaged in ampoules and lyophilized.
Однако совместное культивирование вирусов ОП и НБ не получено, а соответственно и не разработана ассоциированная вакцина.However, co-cultivation of the viruses OP and NB has not been obtained, and accordingly, the associated vaccine has not been developed.
Целью настоящего изобретения является получение ассоциированной культуральной вирусвакцины против ньюкаслской болезни и оспы птиц, обладающей высокой иммуногенностью против этих заболеваний.The aim of the present invention is to provide an associated culture virus vaccine against Newcastle disease and smallpox birds, with high immunogenicity against these diseases.
Указанная цель достигается тем, что вируссодержащий материал, полученный при совместном культивировании на культуре клеток куриных фибробластов, содержит вирус оспы птиц штамм «ВГНКИ-3» и вирус ньюкаслской болезни штамм «М-ВНИИИВВиМ», при этом содержание вируса в культуре клеток составляет 0,02-0,04 и 0,02-0,08 ТЦД/кл соответственно.This goal is achieved by the fact that the virus-containing material obtained by co-cultivation of chicken fibroblast cells on a culture contains chicken pox virus strain VGNKI-3 and Newcastle disease virus strain M-VNIIIVViM, while the virus content in the cell culture is 0, 02-0.04 and 0.02-0.08 TCD / cell, respectively.
Используемый штамм "М-ВНИИВВиМ" вируса НБ не патогенен для цыплят. Инокуляция 20%-ной суспензии селезенки от павших цыплят в разведении 1·10-3 вызывала гибель куриных эмбрионов через 60-84 часа. Штамм был идентифицирован как мезогенный. Инфекционный титр его составляет 8,5-9,0 lg ЭЛД 50/см3, а гемагглютинирующий титр - 1:256-1:512 (8,0-9,0 log2).Used strain "M-VNIIVViM" virus NB is not pathogenic for chickens. Inoculation of a 20% suspension of spleen from dead chickens at a dilution of 1 · 10 -3 caused the death of chicken embryos after 60-84 hours. The strain has been identified as mesogenic. Its infectious titer is 8.5-9.0 lg ELD 50 / cm 3 and the hemagglutinating titer is 1: 256-1: 512 (8.0-9.0 log 2 ).
После первых 6 пассажей вируса в клетках КФ наблюдается четко выраженное цитопатическое действие, вирус накапливается в титрах 6,5-7,0 lg ТЦД 50/см3, а гемагглютинирующий титр увеличился с 1:4 в первом пассаже до 1:32 в шестом пассаже. Начиная с пятого пассажа, накопление вируса в клетках стабилизируется и составляет 6,5-7,0 lg ТЦД 50/см3, при гемагглютинирующем титре 1:16-1:32.After the first 6 passages of the virus, a pronounced cytopathic effect is observed in CF cells, the virus accumulates in titers of 6.5-7.0 lg TCD 50 / cm 3 , and the hemagglutinating titer increased from 1: 4 in the first passage to 1:32 in the sixth passage . Starting from the fifth passage, the accumulation of the virus in the cells stabilizes and is 6.5-7.0 lg TCD 50 / cm 3 , with a hemagglutinating titer of 1: 16-1: 32.
Используемый штамм «ВГИКИ-3» вируса ОП безвреден и ареактогенен для цыплят суточного возраста и старше. Инфекционная активность этого штамма колеблется в пределах 6,5-7,5 lg ТЦД 50/см3, а на птице - 5,0-6,0 lg ИД 50/см3 или 3,0-4,0 lg ИД 50/0,015 см3 при заражении методом прокола перепонки крыла (Гуненков В.В. Чистова З.Я. и др. 1991, 1998 гг.).The strain VGIKI-3 of the OD virus used is harmless and areactogenic for chickens of one day old and older. Infectious activity of this strain ranges from 6.5-7.5 lg TCD 50 / cm 3 , and on a bird - 5.0-6.0 lg ID 50 / cm 3 or 3.0-4.0 lg ID 50 / 0.015 cm 3 when infected by the method of puncture of the membrane of the wing (Gunenkov V.V. Chistova Z.Ya. et al. 1991, 1998).
Для адаптации штамма «ВГНКИ-3» вируса оспы кур к культуре клеток КФ проводят в ней несколько пассажей, применяя суспензионный вариант заражения. В чашки Карреля вносили суспензию культуры клеток КФ с последующим внесением вируссодержащего материала в разведении 1:10 (0,02 ТЦД50/кл). Срок культивирования вируссодержащего материала составляет 6-7 суток. Ежедневно производится микроскопический контроль культуры клеток и контроль уровня рН среды (7,2-7,4). Вируссодержащий материал 3-го пассажа используют для совместного культивирования.To adapt the strain “VGNKI-3” of chicken pox virus to the culture of CF cells, several passages are carried out in it using the suspension variant of infection. A suspension of CF cell culture was added to Carrel plates, followed by a virus-containing material diluted 1:10 (0.02 TCD 50 / cell). The period of cultivation of the virus-containing material is 6-7 days. Daily microscopic control of cell culture and control of the pH level of the medium (7.2-7.4) are performed. The virus-containing material of the 3rd passage is used for co-cultivation.
Одновременное культивирование вирусов ньюкаслской болезни и оспы птиц в культуре клеток КФ предполагает внесение вначале штамма «ВГНКИ-3» вируса ОП в дозе 0,02-0,04 ТЦД/кл., а затем штамма «М-ВНИИВВиМ» вируса НБ в дозе 0,02-0,08 ТЦД/кл., при ежедневном визуальном контроле. Использована питательная среда Игла с 10% сыворотки КРС и поддерживающая среда Игла с 2% сыворотки КРС. Когда поражение клеток монослоя достигает примерно 80% от общей площади, культивирование прекращают, а матрасы подвергают замораживанию при -20°С.The simultaneous cultivation of the Newcastle disease viruses and smallpox in the culture of CF cells involves first introducing the strain VGNKI-3 of the OD virus at a dose of 0.02-0.04 TCD / cell, and then the strain M-VNIIVViM of the NB virus at a dose of 0 , 02-0.08 TCD / cell, with daily visual inspection. The nutrient medium Eagle with 10% cattle serum and the supporting medium Eagle with 2% serum cattle were used. When the damage to the monolayer cells reaches approximately 80% of the total area, the cultivation is stopped and the mattresses are frozen at -20 ° C.
В качестве стабилизирующей среды использовали защитную среду на основе пептона, которую готовили согласно технологическому регламенту «Среда защитная (СПЛФ-жидкая)». Лиофильную сушку проводили по методике для культуральных вакцинных препаратов. Иммунизацию цыплят ассоциированной вакциной проводили внутрикожно (в перепонку крыла) по 0,015 см3 стерильным двухигольным инъектором. Проверку напряженности иммунитета против НБ и ОП проводили путем контрольного заражения цыплят вирулентными штаммами этих вирусов на 21 сутки после вакцинации.As a stabilizing medium, a protective medium based on peptone was used, which was prepared according to the technological regulations "Protective medium (SPLF-liquid)." Freeze drying was carried out according to the method for culture vaccine preparations. Immunization of chickens with the associated vaccine was carried out intradermally (into the membrane of the wing) at 0.015 cm 3 with a sterile two-needle injector. Checking the intensity of immunity against NB and OP was carried out by controlling infection of chickens with virulent strains of these viruses on day 21 after vaccination.
Пример 1. Для получения вакцины в качестве посевного вируса ньюкаслской болезни используют мезогенный штамм «М-ВНИИВВиМ», полученный на уровне 5-15 пассажей с инфекционным титром - 7,75 lg ТЦЦ 50/см3 и гемагглютинирующим титром - 1:32, вирус оспы птиц штамм "ВГНКИ-3" третьего пассажа с инфекционным титром - 6,5 lg ТЦЦ 50/см.Example 1. To obtain the vaccine as the inoculum virus of the Newcastle disease using the mesogenic strain M-VNIIVViM, obtained at the level of 5-15 passages with an infectious titer of 7.75 lg TCC 50 / cm 3 and a hemagglutinating titer of 1:32, the virus smallpox of birds strain "VGNKI-3" of the third passage with an infectious titer of 6.5 lg MCC 50 / cm.
При одновременном культивировании вирусов ньюкаслской болезни и оспы птиц в культуру клеток КФ вносят сначала штамм "ВГНКИ-3" в дозе 0,02 ТЦД/кл, а затем штамм «М-ВНИИВВиМ» в дозе 0,08 ТЦД/кл. При наступлении 80% ЦПД инфицированную культуру в матрасах замораживают и хранят при - 20°С до сушки.With the simultaneous cultivation of Newcastle disease viruses and smallpox of birds, the VGNKI-3 strain at a dose of 0.02 TCD / cell is introduced into the CF cell culture, and then the M-VNIIVViM strain at a dose of 0.08 TCD / cell. At the onset of 80% CPD, the infected culture in the mattresses is frozen and stored at -20 ° C until drying.
В качестве стабилизатора используют защитную среду на основе пептона, которую готовили согласно технологическому регламенту «Среда защитная (СПЛФ-жидкая)».As a stabilizer, a protective medium based on peptone is used, which was prepared according to the technological regulations "Protective medium (SPLF-liquid)."
Вируссодержащий материал смешивают с защитной средой в соотношении 1/1, разливают в ампулы по 1,0 см3 и проводят сушку на сублимационном аппарате, предварительно заморозив смесь до температуры минус 50°С. Камеру сублиматора предварительно обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом и готовят сублиматор по следующим параметрам:The virus-containing material is mixed with a protective medium in a ratio of 1/1, poured into ampoules of 1.0 cm 3 and dried on a freeze-drying apparatus, after freezing the mixture to a temperature of minus 50 ° C. The sublimator chamber is pretreated with 70% ethanol and the sublimator is prepared according to the following parameters:
- температура полок не выше минус 40°С;- the temperature of the shelves is not higher than minus 40 ° C;
- температура конденсатора не выше минус 70°С.- the temperature of the condenser is not higher than minus 70 ° C.
После загрузки камеры подключают датчик контроля температуры материала, камеру герметизируют и вакуумируют до остаточного давления 80-100 мм рт. столба. Затем включают циркуляционный насос, и в течение первых 10-14 часов сушки нагрев полок проводится за счет естественного нагрева до минус 20°С. Температура материала в течение первых 9-12 часов не должна превышать минус 30°С. Далее нагрев полок ступенчато (по 2-3 часа) повышают до минус 15, 10, 5 и плюс 5, 10 и 30°С. Конечная температура полок (+30°С) поддерживается в течение 3 часов, при этом температура материала не должна превышать 20°С.After loading the camera, a sensor for controlling the temperature of the material is connected, the camera is sealed and vacuum to a residual pressure of 80-100 mm RT. pillar. Then turn on the circulation pump, and during the first 10-14 hours of drying, the shelves are heated by natural heating to minus 20 ° C. The temperature of the material during the first 9-12 hours should not exceed minus 30 ° C. Next, the heating of the shelves in steps (2-3 hours) is increased to minus 15, 10, 5 and plus 5, 10 and 30 ° C. The final temperature of the shelves (+ 30 ° C) is maintained for 3 hours, while the temperature of the material should not exceed 20 ° C.
Досушивание вакцины проводят при температуре материала плюс 15-20°С в течение 5 часов. Продолжительность сушки составляла 32 часа, при влажности готового продукта 2-3%.Dosage of the vaccine is carried out at a temperature of the material plus 15-20 ° C for 5 hours. The drying time was 32 hours, with a moisture content of the finished product of 2-3%.
Лиофилизированный препарат оценивают визуально, определяют влажность, стерильность, безвредность и иммуногенность для цыплят.Lyophilized preparation is evaluated visually, moisture, sterility, harmlessness and immunogenicity for chickens are determined.
Контроль стерильности культуральной вакцины проводят на бактериальных средах: МПА, МПБ при 37°С и средах Сабуро при комнатной температуре в течение 10 суток. Материал считают стерильным и пригодным для дальнейшего применения, если видимых изменений в средах не выявленоThe sterility of the culture vaccine is monitored on bacterial media: MPA, MPB at 37 ° C and Saburo media at room temperature for 10 days. The material is considered sterile and suitable for further use if no visible changes in the media are detected.
Контроль вакцины на безвредность проводят на 10 интактных цыплятах 60-суточного возраста. Для испытания используют 3 ампулы вакцины, из которых в стерильных условиях стерильным шприцем отбирают по 0,5 см препарата и объединяют их в одну пробу. Инъекцию проводят внутрикожно (в перепонку крыла) по 0,015 см3 двухигольным инъектором троекратно. За привитой птицей наблюдают в течение 10 суток.The vaccine is tested for safety in 10 intact chickens of 60 days of age. For the test, 3 vaccine ampoules are used, of which, under sterile conditions, 0.5 cm of the drug is taken with a sterile syringe and combined into one sample. The injection is carried out intradermally (into the membrane of the wing) at 0.015 cm 3 with a two-needle injector three times. The vaccinated bird is observed for 10 days.
Вакцина признана безвредной, т.к. все 10 цыплят в течение указанного времени остались живы, без клинических признаков переболевания и на месте введения вакцины выявлены оспины.The vaccine is recognized as harmless, because all 10 chickens remained alive during the indicated time, without clinical signs of the disease and smallpox was detected at the injection site.
Для проверки иммуногенной активности вакцины используют 10 цыплят 60-суточного возраста, свободных от антител к вирусам НБ и ОП (после проверки их сывороток крови в РЗГА и РДП соответственно). Иммунизацию цыплят ассоциированной вакциной проводят внутрикожно (в перепонку крыла) по 0,015 см3 стерильным двухигольным инъектором, место введения вакцины дезинфицируют 70%-ным этиловым спиртом.To test the immunogenic activity of the vaccine, 10 chickens of 60 days old, free of antibodies to NB and OD viruses, are used (after checking their blood serum in RHCA and RDP, respectively). Immunization of chickens with an associated vaccine is carried out intradermally (into the membrane of the wing) with 0.015 cm 3 of a sterile two-needle injector; the injection site is disinfected with 70% ethanol.
Эффективность антигена вируса НБ в ассоциированной вакцине определяют по титру антигемагглютинирующих антител к вирусу НБ в реакции задержки гемагглютинации (РЗГА). Титр антител у 90% вакцинированных цыплят через 21 сутки после вакцинации был выше, чем 1:16, а эффективность вируса определяли по наличию местной реакции на введение вакцины, которая была выявлена в месте введения вакцины на 5-7 сутки после вакцинации у 80% птицы.The effectiveness of the NB virus antigen in the associated vaccine is determined by the titer of anti-hemagglutinating antibodies to the NB virus in the hemagglutination inhibition reaction (RHCA). The antibody titer in 90% of vaccinated chickens 21 days after vaccination was higher than 1:16, and the effectiveness of the virus was determined by the presence of a local response to the vaccine, which was detected at the injection site 5-7 days after vaccination in 80% of the bird .
Для проверки напряженности иммунитета против НБ провели контрольное заражение цыплят на 21 сутки после вакцинации вирулентным штаммом Т-53 вируса НБ. Всех цыплят, включая контрольную группу, заражали внутримышечно по 0,5 см3 в дозе 105 ЭЛД 50. Наблюдение за птицей проводили в течение 10 дней. Цыплята контрольной группы погибли, а выживаемость среди вакцинированных составила 90%.To check the intensity of immunity against NB, a control infection of chickens was carried out on day 21 after vaccination with a virulent strain T-53 of the NB virus. All chickens, including the control group, were intramuscularly infected with 0.5 cm 3 at a dose of 10 5 ELD 50. Birdwatching was performed for 10 days. The chickens of the control group died, and the survival rate among vaccinees was 90%.
Проверку напряженности иммунитета против ОП также проводили путем контрольного заражения цыплят вирулентным штаммом на 21 сутки после вакцинации. Всех цыплят, включая контрольную группу, заражали штаммом «Кучинский» вируса ОП внутрикожно по 0,015 см3 в дозе 1000 ИД50. Наблюдение за птицей проводили в течение 15 дней. У цыплят контрольной группы выявлены клинические признаки, характерные для оспы птиц (оспины), а у вакцинированных в 80% случаев клиника не проявилась.Checking the intensity of immunity against OP was also carried out by control infection of chickens with a virulent strain on 21 days after vaccination. All chickens, including the control group, were infected with the Kuchinsky strain of the OD virus intracutaneously at 0.015 cm 3 at a dose of 1000 ID 50 . Bird observation was carried out for 15 days. Clinical signs characteristic of smallpox of birds (smallpox) were revealed in chickens of the control group, and the clinic did not show up in vaccinated in 80% of cases.
ЛитератураLiterature
1. Дутко Ю.С. Аэрозольная вакцинация птиц одновременно против инфекционного ларинготрахеита, болезни Ньюкасла и оспы // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Покров, ВНИИВиМ, 1977.1. Dutko Yu.S. Aerosol vaccination of birds at the same time against infectious laryngotracheitis, Newcastle disease and smallpox // Abstract of dissertation for the degree of candidate of veterinary sciences Pokrov, VNIIViM, 1977.
2. Кадымов Р.А., Сафаров Ю.Б. / Ассоциированная и комплексная вакцинация птиц. // М.: «Колос», 1974, с.183-203.2. Kadymov R.A., Safarov Yu.B. / Associated and comprehensive vaccination of birds. // M .: Kolos, 1974, p. 183-203.
3. Качахидзе А.В., и др. / Ассоциированная иммунизация против оспы и псевдочумы птиц. // Болезни птиц. Труды ВНИИБП, 118-125.3. Kachakhidze A.V. et al. / Associated immunization against smallpox and pseudo-plague of birds. // Diseases of birds. Proceedings of VNIIBP, 118-125.
4. Сирии В.Н. Псевдочума птиц (ньюкаслская болезнь). - М.: 304 с.4. Syria V.N. Pseudo-plague of birds (Newcastle disease). - M .: 304 s.
5. Saini S.S., Sodhi S.S., Maiti N.K. and Sharma. Jmmume pesponse of chicks to oral vaccination against Neucastle disease and Foul pox. Comp. Jmmun. Microbiol. Infect. Dis. Vol.13, 11, рр.1-6, 1990.5. Saini SS, Sodhi SS, Maiti NK and Sharma. Jmmume pesponse of chicks to oral vaccination against Neucastle disease and Foul pox. Comp. Jmmun. Microbiol. Infect. Dis. Vol.13, 1 1, pp. 1-6, 1990.
6. Tripathy D.W., Cunningam C.H. /Avian Pox/ B кн. Diseaes of Poultry, 1984, p.524-534.6. Tripathy D.W., Cunningam C.H. / Avian Pox / B Prince Diseaes of Poultry, 1984, p. 544-534.
7. Гуненков В.В., Чистова З.Я., Кузнецова Г.Д., Яременко Л.И. Опыт создания противооспенных вакцин для овец кроликов и домашних птиц. Мат.международной н-п конференции поев. 40-летию ВНИИВВиМ, 1998, с.297-299.7. Gunenkov VV, Chistova Z.Ya., Kuznetsova GD, Yaremenko L.I. The experience of creating anti-vaccine vaccines for sheep rabbits and poultry. Mat. International Conference of singing. 40th anniversary of VNIIVViM, 1998, p. 297-299.
8. Гуненков В.В., Чистова З.Я., Кузнецова Г.Д., Ходосевич Н.Ф. // Свойства сухой культуральной вакцины ВГНКИ против оспы птиц. // Ветеринария, №6, 1991, с.22-24.8. Gunenkov VV, Chistova Z.Ya., Kuznetsova GD, Khodosevich N.F. // Properties of dry culture vaccine VGNKI against smallpox birds. // Veterinary medicine, No. 6, 1991, p.22-24.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005119828/13A RU2295357C1 (en) | 2005-06-28 | 2005-06-28 | A dry associated culture virus vaccine against avian newcastle disease and smallpox |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005119828/13A RU2295357C1 (en) | 2005-06-28 | 2005-06-28 | A dry associated culture virus vaccine against avian newcastle disease and smallpox |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005119828A RU2005119828A (en) | 2007-01-10 |
| RU2295357C1 true RU2295357C1 (en) | 2007-03-20 |
Family
ID=37760797
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005119828/13A RU2295357C1 (en) | 2005-06-28 | 2005-06-28 | A dry associated culture virus vaccine against avian newcastle disease and smallpox |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2295357C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3419965A (en) * | 1961-04-07 | 1969-01-07 | Madden Ernest Francis | Profile transferring device |
| RU2236255C1 (en) * | 2003-01-15 | 2004-09-20 | ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Cultural virus-vaccine against newcastle disease |
-
2005
- 2005-06-28 RU RU2005119828/13A patent/RU2295357C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3419965A (en) * | 1961-04-07 | 1969-01-07 | Madden Ernest Francis | Profile transferring device |
| RU2236255C1 (en) * | 2003-01-15 | 2004-09-20 | ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Cultural virus-vaccine against newcastle disease |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ГУНЕНКОВ В.В., ЧИСТОВА З.Я., КУЗНЕЦОВА Г.Д., ЯРЕМЕНКО Л.И. Опыт создания противооспенных вакцин для овец, кроликов и домашних птиц. Мат. Международной научно-практической конференции, посвященной 40-летию ВНИИВВиМ, 1998, с.297-299. ГУНЕНКОВ В.В., ЧИСТОВА З.Я., КУЗНЕЦОВА Г.Д., ХОДОСЕВИЧ Н.Ф. Свойства сухой культуральной вакцины ВГНКИ против оспы птиц. Ветеринария, 1991, №6, с.22-24. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2005119828A (en) | 2007-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101880651B (en) | Preparation method of Muscovy duck parvo novel vaccines | |
| NO144005B (en) | SKISTOEVEL. | |
| CN102492661B (en) | Preparation method and application of immune preparation for preventing and treating new duck reovirus disease | |
| HU183765B (en) | Process for producing lyophilized vaccine against duck hepatitis | |
| CN105153303A (en) | Egg yolk antibody for preventing and controlling duck parvovirus and preparation method thereof | |
| CN103224913B (en) | Duck plague live vaccine and preparation method thereof | |
| CN103341164B (en) | Infectious bursal disease antigen-antibody complex as well as preparation and preparation method thereof | |
| RU2451745C2 (en) | A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A | |
| CA1159366A (en) | Vaccine against newcastle fowl disease and method for preparing same | |
| RU2295357C1 (en) | A dry associated culture virus vaccine against avian newcastle disease and smallpox | |
| CN106267176B (en) | Infectious coryza vaccine composition, preparation method and application thereof | |
| KR102656435B1 (en) | Novel fowl adenovirus and Fowl adenovirus polyvalent vaccine comprising the same as effective component | |
| CN113121679B (en) | High-immunity yolk antibody for pigeon Newcastle disease and preparation method and application thereof | |
| RU2220744C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing | |
| CN116375850A (en) | Preparation method and application of duck tembusu virus disease and duck viral hepatitis virus bivalent trivalent egg yolk antibody | |
| RU2236255C1 (en) | Cultural virus-vaccine against newcastle disease | |
| RU2294760C2 (en) | Sorbed inactivated vaccine against foot-and-mouth disease of type a | |
| Taylor et al. | History of vaccines and vaccination | |
| CN107881154B (en) | Raccoon parvovirus attenuated vaccine strain and application thereof in preparation of raccoon parvovirus attenuated vaccine | |
| RU2221040C1 (en) | Cattle infectious rhinotracheitis virus strain "vniizzh" for preparing vaccine and diagnostic preparations | |
| RU2304447C1 (en) | Culture vaccine against poultry pox out of hen's virus (ospovac) (variants) | |
| RU2284193C1 (en) | Dry cultural virus vaccine against plague in small ruminant animals | |
| RU2147892C1 (en) | Method of preparing preparation based on virus-bacterial strains from local focus for preparing mixed vaccine or polyvalent hyperimmune serum against cattle disease | |
| RU2424823C1 (en) | Method of specific prevention of rhinopneumonia and salmonellosis abortion in horses by associated vaccine under conditions of herd keeping | |
| RU2777479C1 (en) | Method for specific prevention of rhinopneumonia and strangles in horses using an associated vaccine in herding conditions |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070629 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090629 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20100610 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140629 |