RU2288270C2

RU2288270C2 - Способ производства амидного соединения с применением микробного катализатора

Info

Publication number: RU2288270C2
Application number: RU2003122208/13A
Authority: RU
Inventors: Козо МУРАО (JP); Козо МУРАО; Кацуо ИСИИ (JP); Кацуо ИСИИ
Original assignee: Диа-Нитрикс Ко., Лтд.
Priority date: 2000-12-20
Filing date: 2001-12-19
Publication date: 2006-11-27
Also published as: KR20030066720A; IN2003CH01050A; EP1352965A1; US20040048348A1; DE60133130D1; CN1486370A; RU2003122208A; IN209344B; EP1352965A4; EP1352965B1; WO2002050297A1; JPWO2002050297A1; DE60133130T2; KR100547080B1; CN1296487C; JP4708677B2; US7749739B2

Abstract

Изобретение относится к производству амидного соединения из нитрильного соединения с применением микробных клеток, обладающих нитрилгидратазной активностью. Согласно указанному способу микробные клетки приводят в контакт с нитрильным соединением в водной среде, при непрерывном добавлении нитрильного соединения и без иммобилизации клеток захватом, с получением концентрации амидного соединения в среде 20% и больше. Применение изобретения позволяет повысить производительность способа производства амидного соединения за счет получения большей концентрации амидного соединения в среде за более короткий промежуток времени. 5 з.п.ф-лы.

Description

Техническая область

Данное изобретение относится к способу производства амидного соединения из нитрильного соединения с применением микроорганизма с нитрилгидратазной активностью.

Предпосылки создания

В настоящее время способ синтеза соединений с применением биокатализаторов используют для производства различных соединений вследствие таких преимуществ, как умеренные условия реакции, упрощенные процессы реакции и высокая чистота продуктов реакции, обусловленная малым количеством побочных продуктов.

Со времени открытия нитрилгидратазы - фермента, который превращает нитрильное соединение в амидное соединение, активно изучали применение биокатализатора в производстве амидных соединений (патентная публикация Японии (Kokai) № 11-123098, патентная публикация Японии (Kokai) №7-265091, патентная публикация Японии (Kokoku) № 56-38118, патентная публикация Японии (Kokai) № 11-89575).

В настоящее время микроорганизм, имеющий нитрилгидратазную активность, применяют для производства акриламида, никотинамида или подобных им соединений в промышленном масштабе ввиду превосходных характеристик реакционного процесса с точки зрения удобства при использовании, безопасности, экономической эффективности и других факторов.

До настоящего времени было найдено значительное количество микроорганизмов, имеющих нитрилгидратазную активность. Их примеры включают микроорганизмы, принадлежащие родам Nocardia, Corynebacterium, Bacillus, Pseudomonas, Micrococcus, Rhodococcus, Acinetobacter, Xanthobacter, Streptomyces, Rhizobium, Klebsiella, Enterobacter, Erwinia, Aeromonas, Citrobacter, Achromobacter, Agrobacterium и Pseudonocardia.

Среди них роды Pseudomonas, Bacillus, Rhodococcus и Pseudonocardia производят нитрилгидратазу, имеющую очень высокий уровень активности и стабильности. Таким образом, их используют в промышленном масштабе или в масштабе, близком к нему.

Кроме того, для культивирования указанных микроорганизмов, известно, что микробную клетку, имеющую высокую нитрилгидратазную активность, получают способом добавления нитрилов или амидов (патентная публикация Японии (Kokoku) Nos. 61-43996 и 61-43999), способом добавления аминокислоты (патентная публикация Японии (Kokoku) Nos. 61-43997 и 61-43998), способом добавления некоторых видов ионов металлов (патентная публикация Японии (Kokai) № 61-162193, патентная публикация Японии (Kokoku) № 6-55148 и патентная публикация Японии (Kokai) № 8-187092) или подобными способами.

В противоположность этому биокатализатор имеет низкую стабильность по отношению к теплу, и, таким образом, реакции должны проводиться при низких температурах. В результате скорость реакции в расчете на катализатор уменьшается. Следовательно, при производстве соединения с применением биокатализатора в промышленном масштабе концентрация катализатора в реакционной емкости должна быть повышенной.

Известные в настоящее время промышленные способы производства амидного соединения из нитрильного соединения с применением биокатализатора сходным образом проводят путем иммобилизации микробных клеток для получения их в виде микрочастиц, повышения концентрации катализатора в реакционной емкости и облегчения отделения катализатора (смотри Kagaku to Kogyo (Chemistry and Chemical Industry) том 43, № 7, стр. 1098-1101 (1990), патентная публикация Японии (Kokai) № 54-143593 и 54-144889). Кроме того, изучали способ иммобилизации клеток (смотри патентные публикации Японии (Kokai) №№ 57-39792 и 62-294083). Если иметь в виду эффективное производство амидного соединения в промышленном масштабе, то, как было рассмотрено, является важной иммобилизация клеток при высокой концентрации (смотри патентную публикацию Японии (Kokai) № 7-203964).

Однако авторы данного изобретения иммобилизовывали путем захвата микробные клетки, которые обладают высокой нитрилгидратазной активностью, и использовали их в реакции. В результате было подтверждено, что нитрильное соединение, как субстрат реакции и/или амидное соединение, как продукт реакции, вызывали дефекты диффузии в иммобилизованных захватом частицах, и скорость реакции значительно снижалась.

Например, согласно сравнению начальных скоростей реакции для иммобилизованных захватом клеток и неиммобилизованных клеток, скорость реакции заметно снижалась на одну десятую или менее, в зависимости от условий реакции. Заметно снижается не только начальная скорость реакции, но также понижается и активность фермента в иммобилизованном захватом катализаторе, который не полностью участвует в реакции, что вызвано дефектом диффузии. Это также уменьшает количество амидного соединения, получаемого в расчете на единицу количества клеток.

В частности, сниженная скорость реакции или уменьшенное количество амидного соединения, произведенного на единицу количества клеток, как отмечено выше, приводит к неблагоприятным условиям. В указанных условиях требуется длительное время, чтобы аккумулировать целевое количество, если производство амидного соединения осуществляют посредством периодической реакции, и размер устройства должен быть увеличен в случае непрерывной реакции.

Соответственно, целью данного изобретения является решение проблем, возникающих в способе производства амидного соединения из нитрильного соединения с применением биокатализатора, таких как снижение скорости реакции или уменьшение количества амидного соединения, произведенного на единицу количества клеток. Указанные проблемы вызваны использованием иммобилизованных микробных клеток с повышенной нитрилгидратазной активностью.

Чтобы достичь вышеуказанной цели, авторы настоящего изобретения провели тщательное исследование, касающееся более подходящей формы катализатора, чем иммобилизованный катализатор. В результате они обнаружили, что амидное соединение может быть более эффективно произведено, если использовать микробные клетки, которые проявляют высокую нитрилгидратазную активность 50 U или выше на мг сухих клеток при 10°С, и проводить в контакт микробные клетки с нитрильным соединением, суспендированным в водной среде, чем в случае иммобилизации клеток. Это привело к созданию данного изобретения.

Более конкретно, данное изобретение относится к способу получения амидного соединения из нитрильного соединения с применением микробного катализатора, в котором микробные клетки, имеющие нитрилгидратазную активность 50 U или выше на мг сухих клеток при температуре реакции 10°С, приводят в контакт с нитрильным соединением в водной среде без их иммобилизации.

Данное изобретение далее описано подробно.

В данном изобретении могут быть использованы любые микроорганизмы, которые имеют нитрилгидратазную активность 50 U или выше на мг сухих клеток при температуре реакции 10°С. Примерами предпочтительных микроорганизмов являются принадлежащие к родам Bacillus, Bacteridium, Micrococcus, Brevibacterium (патентное описание Японии (Kokoku) № 62-21519), Corynebacterium, Nocardia (патентное описание Японии (Kokoku) № 56-17918), Pseudomonas (патентное описание Японии (Kokoku) № 59-37951), Microbacterium (патентное описание Японии (Kokoku) № 4-4873), Rhodococcus (патентное описание Японии (Kokoku) № 4-4873, 6-55148 и 7-40948), Achromobacter (патентное описание Японии (Kokai) № 6-225780) и Pseudonocardia (патентное описание Японии (Kokai) № 9-275978). Бактерии рода Rhodococcus более предпочтительны.

В качестве альтернативы могут быть использованы трансформированные клетки. Их готовят путем получения вышеупомянутого нитрилгидратазного гена, полученного из микроорганизма, и введения гена как такового или его искусственно модифицированной формы в произвольного хозяина.

Примерами трансформированных клеток являются E. coli MT 10770 (FERM P-14756), трансформированная нитрилгидратазой рода Achromobacter (патентное описание Японии (Kokai) № 8-266277), E. coli MT10822 (FERM BP-5785), трансформированная нитрилгидратазой рода Pseudonocardia (патентное описание Японии (Kokai) № 9-275978), или микроорганизм, трансформированный нитрилгидратазой рода Rhodococcus rhodochrous (патентное описание Японии (Kokai) № 4-211379).

Единица "U" активности фермента, использованная в данном изобретении, означает, что 1 мкмоль соответствующего амидного соединения производится из нитрильного соединения за минуту. Использованный здесь термин "активность фермента" относится к активности фермента, измеренной по расходу нитрильного соединения, который использован в производстве.

Активность фермента измеряют, помещая 5 мл 50 мМ фосфатного буфера, отрегулированного на оптимальное значение рН (например, рН 7) в тестовую трубку диаметром 30 мм, суспендируют 2 мг культурированных и промытых клеток (сухой вес) и встряхивают трубку в емкости с водой при 10°С. Примерно через 5 минут приготовленный заранее фосфатный буфер, содержащий от 1 до 5% нитрильного соединения, добавляют при 10°С и доводят значение рН до оптимального. Концентрацию амидного соединения, выработанного за произвольное время реакции, измеряют с применением аналитического оборудования, такого как оборудование для газовой хроматографии или жидкостной хроматографии, определяя тем самым активность фермента.

Время реакции определяют таким образом, чтобы нитрильное соединение в реакционном растворе сохранялось в концентрации, при которой скорость реакции не снижается, а концентрация выработанного амидного соединения становится достаточно высокой, чтобы быть точно измеренной в конце реакции.

Данное изобретение эффективно, если используют микробные клетки, имеющие ферментативную активность 50 U или выше на мг сухих клеток при 10°С. Оно более эффективно при использовании микробных клеток, имеющих ферментативную активность 80 U или выше, и еще более эффективно при активности 100 U или выше.

Нитрильное соединение согласно данному изобретению превращают в соответствующее амидное соединение под действием нитрилгидратазы. Его примеры включают: алифатические насыщенные нитрилы, примерами которых являются ацетонитрил, пропионитрил, сукцинонитрил и адипонитрил; алифатические ненасыщенные нитрилы, примерами которых являются акрилонитрил и метакрилонитрил; ароматические нитрилы, примерами которых являются бензонитрил и фталодинитрил; и гетероциклические нитрилы, примерами которых являются 3-цианопиридин и 2-цианопиридин. Вследствие химических и физических свойств нитрильного соединения, субстратной специфичности фермента нитрилгидратазы и с промышленной точки зрения предпочтительными соединениями в качестве объекта данного изобретения являются акрилонитрил и цианопиридин.

В данном изобретении форма катализатора без иммобилизации захватом такова, что мембраны микробных клеток находятся в непосредственном контакте с реакционным раствором. Примером такого катализатора является форма катализатора, с которой имеют дело в способе с иммобилизацией захватом, но где клетки не захвачены высокомолекулярными веществами, такими как полиакриламид, поливиниловый спирт, каррагинан, агар, желатин или альгиновая кислота.

Более конкретно "катализатор, который не иммобилизован захватом" согласно данному изобретению, представляет собой микробные клетки сами по себе, которые культивируют и, возможно, подвергают промывке или другому виду обработки, микробные клетки, химически обработанные веществом, имеющим полифункциональную группу, таким как глутаровый альдегид, или микробные клетки, химически связанные на поверхности стеклянных бусин, смолы, силикагеля или тому подобного.

Использование клеток, химически обработанных глутаровым альдегидом, в качестве катализатора особенно предпочтительно с точки зрения повышения стабильности каталитической активности фермента.

Операция приведения микробных клеток в контакт с нитрильным соединением в водной среде относится к процессу, при котором микробные клетки, имеющие нитрилгидратазную активность, приводят в контакт с нитрильным соединением в воде или водной среде, полученной, например, растворением в воде стабилизатора ионной силы, емкости рН-буфера или активности нитрилгидратазы. Эта операция может быть проведена в периодической системе или в непрерывной системе. Форму реакции выбирают в зависимости от свойств субстрата реакции, реакционного раствора, целевого соединения и тому подобного или от масштаба производства, и реакционную аппаратуру конструируют, исходя из этого.

Предпочтительно условия реакции, такие как температура реакции и рН, контролируют так, чтобы они были оптимальными для производства амидного соединения в меньшем масштабе или за более короткое время.

С промышленной точки зрения концентрация амидного соединения, аккумулированного вышеуказанным способом, предпочтительно равна 20% или выше и более предпочтительно 50% или выше.

Указанное описание включает часть или все содержание, как предложено в описании патентной заявки Японии № 2000-387537, которая является приоритетным документом для данной заявки.

Наилучший способ выполнения изобретения

Данное изобретение далее описано более подробно со ссылкой на следующие примеры, которые, однако, не ограничивают его. В следующих примерах "%" является массовым, если не указано иначе.

Пример 1. Получение акриламида с применением микробных клеток в водной среде

(1) Культивирование клеток

(i) Условия предварительного культивирования:

(Состав среды)

2% фруктозы, 5% полипептона (Nihon Pharmaceutical Co., Ltd.), 0,3% экстракта дрожжей (Oriental Yeast Co., Ltd.), 0,1% KH₂PO₄, 0,1% K₂HPO₄, 0,1% MgSO₄·7H₂O, рН 7.

(Способ культивирования)

Среду (100 мл) фракционировали в коническую колбу емкостью 500 мл, колбу затыкали ватой и затем стерилизовали в автоклаве при 121°С 20 минут. Инокулировали Rhodococcus rhodochrous J1 (FERM BP-1478) и встряхивали культуру при 30°С 48 часов.

(ii) Условия для основного культивирования:

(Состав среды)

Начальная среда: 0,2% экстракта дрожжей, 0,1% KH₂PO₄, 0,1% K₂HPO₄, 0,1% MgSO₄·7H₂O, 0,002% CoCl₂·6H₂O, 0,025% сульфата аммония, 2% фруктозы, 2% мочевины, 0,4% этанола, 0,1% плуроник L61 (Asahi Denka Co., Ltd.), рН 7.

Среда, добавленная позднее: 20% фруктозы, 5% этанола, 6% сульфата аммония, рН 6,5.

(Способ культивирования)

Начальную среду (2 литра) фракционировали в 3-литровый мини-ферментер и стерилизовали в автоклаве при 121°С 20 минут. Отдельно фильтровали в асептических условиях фруктозу, этанол и мочевину через 0,45-микронную фильтровальную бумагу (Advantec Toyo Kaisha, Ltd.) и добавляли к среде.

Культивирование проводили в условиях под давлением внутри емкости 0,098 МПа, скорости перемешивания 600 об./мин, скорости пропускания воздуха 1 vvm, рН 7 и температуре 30°С. Культивировавние завершали, когда наступала максимальная активность фермента. После этого продукт культивирования промывали 50 мМ фосфатным буфером (рН 7,7) и получали суспензию клеток (вес сухих клеток: 15%).

(2) Измерение нитрилгидратазной активности

50 мМ фосфатный буфер (4,98 мл, рН 7,7) и 20 мкл суспензии клеток добавляли и смешивали в тестовой трубке диаметром 30 мм и трубку встряхивали в емкости при 10°С 5 минут. Затем добавляли 50 мМ фосфатный буфер (5 мл, рН 7,7), содержащий 5,0% акрилонитрила, который предварительно готовили при 10°С, продукт оставляли реагировать на 10 минут, клетки отделяли фильтрованием и образованный акриламид количественно определяли газовой хроматографией (GC-14B, SHIMADZU CORPORATIO). Анализ производили с применением 1 м стеклянной колонки, наполненной Parabox PS (наполнитель колонки Waters) при температуре колонки 230°С, и определение с помощью ДИП осуществляли при 250°С. Результаты показали, что образовалось 1,2% акриламида. Если определена величина активности в "1U", как активность, при которой происходит превращение 1 микромоля акрилонитрила в акриламид при температуре реакции 10°С за время реакции 1 минуту, активность клетки для превращения акрилонитрила в акриламид была 56 U на мг сухой клетки при 10°С.

(3) Конверсия акрилонитрила в акриламид

50 мМ TRIS-буфера (гидрохлорид 2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропандиола) (664 г, рН 7,7) помещали в 1-литровую отделяемую колбу с рубашкой. Добавляли суспензию клеток, полученную выше, в таком количестве, чтобы масса сухих клеток составила 90 мг. Акрилонитрил добавляли непрерывно, чтобы поддерживать концентрацию акрилонитрила на уровне 2% при скорости перемешивания 180 об./мин при 18°С.

В результате концентрация акриламида, продуцированного за 25 часов после начала прибавления акрилонитрила, достигла уровня 45%.

Сравнительный пример 1. Получение акриламида с применением иммобилизованных захватом микробных клеток

(1) Иммобилизация клеток

Суспензию клеток, полученную в примере 1, имеющую активность 56 U по превращению акрилонитрила в акриламид, добавляли к эквивалентному количеству водного раствора тщательно растворенного 3% альгината натрия (Kanto Kagaku) и затем тщательно перемешивали. Смесь добавляли по каплям к водному раствору 1М хлорида кальция через силиконовую трубку, имеющую внутренний диаметр 2 мм. Таким образом получали частицы иммобилизованных клеток с диаметром частиц около 3 мм. Частицы иммобилизованных клеток промывали 50 мМ TRIS-гидрохлоридного буфера (отрегулированного до рН 7,7) для получения иммобилизованных клеток.

(2) Конверсия акрилонитрила в акриламид

50 мМ TRIS-гидрохлоридный буфер (664 г, рН 7,7) помещали в 1-литровую отделяемую колбу с рубашкой. Туда добавляли иммобилизованные клетки, полученные выше, так, чтобы вес сухих клеток достиг 90 мг. Непрерывно прибавляли акрилонитрил так, чтобы поддерживать концентрацию акрилонитрила 2% и перемешивали со скоростью 180 об./мин. при 18°С.

В результате концентрацию акриламида не удалось поднять до целевого уровня 45% даже через 50 часов после начала прибавления акрилонитрила.

Пример 2. Получение акриламида с применением микробных клеток в водной среде

(1) Культивирование клеток

Клетки Pseudomonas chlororaphis B23 (FERM BP-187) культивировали по способу, описанному в примере патентной публикации Японии (Kokai) No, 2-177883. Активность указанных клеток для превращения акрилонитрила в акриламид измеряли тем же способом, что и в примере 1 при рН 7,7. В результате активность составляла 90 U на мг сухой клетки при 10°С.

(2) Конверсия акрилонитрила в акриламид

50 мМ фосфатный буфер (850 мл, рН 7,7) и 0,4 г клеток (на сухой основе) добавляли в отделяемую колбу с рубашкой (внутренний объем: 1 литр). Реакцию проводили путем непрерывного прибавления акрилонитрила при перемешивании при 3°С, поддерживая концентрацию акрилонитрила 2%.

Концентрация акриламида достигла целевого уровня 20% через три часа.

Сравнительный пример 2. Получение акриламида с применением иммобилизованных захватом микробных клеток

(1) Иммобилизация захватом клеток

Готовили водный раствор мономерной смеси таким образом, чтобы она содержала 30%, 1% и 4% акриламида, метиленбисакриламида и 2-диметиламинопропилметакриламида соответственно.

Суспензию клеток с активностью превращения акрилонитрила в акриламид 90 U, полученную в примере 2, водный мономерный раствор, водный раствор 10% N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамина и водный раствор 10% персульфата аммония подвергали смешению в трубке в соотношении 50:20:1:1. Вытекающий продукт помещали в емкость размером 300×300×30 мм и полимеризовали в ней.

Полученный лист клеточно-иммобилизованного геля резали ножом на куски примерно 0,5 мм², получая частицы клеток, мобилизованных захватом на полиакриламиде. Частицы иммобилизованных клеток перед использованием промывали окунанием в водный раствор 0,1% акрилата натрия (с рН, доведенным до 7 гидроксидом натрия).

(2) Конверсия акрилонитрила в акриламид

Акрилонитрил превращали в акриламид, используя способ и аппаратуру, описанные в примере 2.

Концентрация акриламида не достигала целевого уровня 20% через восемь часов.

Сравнительный пример 3. Получение акриламида с применением микробных клеток, имеющих слабую нитрилгидратазную активность

(1) Культивирование клеток и получение катализатора

Тем же способом, что и в примере 1, культивировали клетки Rhodococcus rhodochrous J1 (FERM BP-1478). Когда активность клеток для превращения акрилонитрила в акриламид, которую измеряли по способу измерения активности, как описано в примере 1, достигала 20U на мг сухих клеток при 10°С, культивирование заканчивали. После этого культивированный продукт промывали 50 мМ фосфатным буфером (рН 7,7) и получали суспензию клеток (вес сухих клеток: 15%).

(2) Конверсия акрилонитрила в акриламид

В соответствии со способом, описанным в сравнительном примере 2, сначала готовили суспензию иммобилизованных захватом клеток на полиакриламиде.После этого вышеуказанную суспензию иммобилизованных клеток или суспензию неиммобилизованных клеток использовали в качестве микроорганизмов в количестве 225 мг в расчете на массу сухих клеток, превращая акрилонитрил в акриламид. В результате концентрация акриламида достигала целевого уровня 45% примерно через 100 часов при использовании суспензии либо иммобилизованных, либо неиммобилизованных клеток.

В частности, не существует заметного различия между иммобилизованными клетками и неиммобилизованными клетками, если клетки обладают активностью 20 U.

Пример 4. Измерение нитрилгидратазной активности вырабатывающего нитрилгидратазу трансформанта из штамма Rhodococcus Rhodochrous ATCC12674

(1) Трансформант

Из штамма Rhodococcus Rhodochrous ATCC12674 в соответствии со способом, описанным в выложенной заявке на патент Японии №2004-222538, получали обладающий нитрилгидратазной активностью трансформант, содержащий плазмиду pSJ034, несущую нитрилгидратазный ген J1 Rhodococcus Rhodochrous. Используемую для последующего измерения клеточную массу получали культивированием указанного трансформанта.

(2) Измерение нитрилгидратазной активности

Активность по превращению акрилонитрила в акриламид при 10°С измеряли в соответствии со способом, описанным ранее в настоящей заявке.

(3) Результаты измерения активности

Было найдено, что активность по превращению акрилонитрила в акриламид составляет 62 U на мг в расчете на массу сухих клеток.

Рассмотрение полученного экспериментального результата подтверждает, что вышеупомянутый трансформант может использоваться в способе согласно настоящему изобретению. Подтверждено также, что трансформант, имеющий нитрилгидратазную активность, составляющую 50 U на мг в расчете на массу сухих клеток при 10°С, позволяет получать амидное соединение из нитрила без его полной иммобилизации.

Все публикации, патенты и патентные описания, процитированные здесь, включены здесь в качестве ссылок во всей их полноте.

Применимость в промышленности

В способе согласно данному изобретению микробные клетки, которые обладают высокой нитрилгидратазной активностью, используют в реакции без иммобилизации захватом. Так, амидное соединение может быть эффективно получено из нитрильного соединения без проблем уменьшения скорости реакции или малого количества продукта, произведенного на единицу количества клеток, которые возникают при иммобилизации захватом. Соответственно, амидное соединение может быть получено за очень короткий период времени в случае периодической реакции и с очень маломасштабными устройствами в случае непрерывной реакции.

Claims

1. Способ получения амидного соединения из нитрильного соединения с применением микробного катализатора, где микробные клетки, имеющие нитрилгидратазную активность 50 U или выше на 1 мг сухих клеток при температуре реакции 10°С, приводят в контакт с нитрильным соединением в водной среде при непрерывном добавлении нитрильного соединения в водную среду без иммобилизации клеток захватом с получением тем самым концентрации амидного соединения в среде 20% и больше.

2. Способ получения амидного соединения по п.1, где микробные клетки, имеющие нитрилгидратазную активность 50 U или выше на 1 мг сухих клеток при температуре реакции 10°С, относятся, по меньшей мере, к одному из членов группы, состоящей из родов Nocardia, Corynebacterium, Bacillus, Pseudomonas, Micrococcus, Rhodococcus, Acinetobacter, Xanthobacter, Streptomyces, Rhizobiwn, Klebsiella, Enterobacter, Erwinia, Aeromonas, Citrobacter, Achromobacter, Agrobacterium и Pseudonocardia.

3. Способ получения амидного соединения по п.1, где микробные клетки, имеющие нитрилгидратазную активность 50 U или выше на 1 мг сухих клеток при температуре реакции 10°С, являются трансгенными микроорганизмами, которые экспрессируют ген нитрилгидратазы по меньшей мере одного микроорганизма, выбранного из группы, состоящей из родов Nocardia, Corynebacterium, Bacillus, Pseudomonas, Micrococcus, Rhodococcus, Acinetobacter, Xanthobacter, Streptomyces, Rhizobium, Klebsiella, Enterobacter, Erwinia, Aeromonas, Citrobacter, Achromobacter, Agrobacterium и Pseudonocardia.

4. Способ получения амидного соединения по п.1, где микробные клетки, имеющие нитрилгидратазную активность 50 U или выше на 1 мг сухих клеток при температуре реакции 10°С, представляют собой клетки рода Pseudomonas или Rhodococcus.

5. Способ получения амидного соединения по п.1, где микробные клетки, имеющие нитрилгидратазную активность 50 U или выше на 1 мг сухих клеток при температуре реакции 10°С, представляют собой клетки Rhodococcus rhodochrous, штамм FERM ВР-1478 или клетки Pseudomonas chlororaphis, штамм FERM BP-187.

6. Способ получения амидного соединения по любому из пп.1-5, где нитрильным соединением является акрилонитрил или цианопиридин.