RU2268062C1 - Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения дилятационной кардиомиопатии - Google Patents
Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения дилятационной кардиомиопатии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2268062C1 RU2268062C1 RU2004116840/15A RU2004116840A RU2268062C1 RU 2268062 C1 RU2268062 C1 RU 2268062C1 RU 2004116840/15 A RU2004116840/15 A RU 2004116840/15A RU 2004116840 A RU2004116840 A RU 2004116840A RU 2268062 C1 RU2268062 C1 RU 2268062C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- fetal
- biograft
- thymus
- bone marrow
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 title abstract description 8
- 230000010339 dilation Effects 0.000 title abstract 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 61
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 14
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims abstract description 10
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000022379 skeletal muscle tissue development Effects 0.000 claims abstract description 4
- 206010056370 Congestive cardiomyopathy Diseases 0.000 claims description 16
- 201000010046 Dilated cardiomyopathy Diseases 0.000 claims description 16
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 claims description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 13
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 11
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 11
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims description 8
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 7
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 6
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 6
- 230000004070 myogenic differentiation Effects 0.000 claims description 6
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 6
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 6
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 4
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims description 3
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 3
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 3
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 3
- 229940082569 selenite Drugs 0.000 claims description 3
- MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L selenite(2-) Chemical compound [O-][Se]([O-])=O MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003956 Fibroblast growth factor 8 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000368 Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 claims description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 8
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 7
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 7
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000004683 skeletal myoblast Anatomy 0.000 description 5
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 3
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 3
- 230000003483 hypokinetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 206010001541 Akinesia Diseases 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010007558 Cardiac failure chronic Diseases 0.000 description 2
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 description 2
- 206010067171 Regurgitation Diseases 0.000 description 2
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 2
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 2
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 2
- 210000001196 cardiac muscle myoblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- QTCANKDTWWSCMR-UHFFFAOYSA-N costic aldehyde Natural products C1CCC(=C)C2CC(C(=C)C=O)CCC21C QTCANKDTWWSCMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- ISTFUJWTQAMRGA-UHFFFAOYSA-N iso-beta-costal Natural products C1C(C(=C)C=O)CCC2(C)CCCC(C)=C21 ISTFUJWTQAMRGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 2
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000591 tricuspid valve Anatomy 0.000 description 2
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010008479 Chest Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010011703 Cyanosis Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 241000288140 Gruiformes Species 0.000 description 1
- 206010019842 Hepatomegaly Diseases 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 206010030124 Oedema peripheral Diseases 0.000 description 1
- 208000007888 Sinus Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000009729 Ventricular Premature Complexes Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047924 Wheezing Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 201000002064 aortic valve insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002555 auscultation Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 1
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000008828 contractile function Effects 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000002586 coronary angiography Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 229940030606 diuretics Drugs 0.000 description 1
- 238000002565 electrocardiography Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002344 fibroplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004115 mitral valve Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001114 myogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000000718 qrs complex Methods 0.000 description 1
- 206010037833 rales Diseases 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000002325 super-antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 208000003663 ventricular fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биофармакологии и касается биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, содержащий мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального или донорского материала, при этом ткань дезагрегируют, далее культивируют в виде прикрепленных колоний в ростовой среде, содержащей эмбриональную телячью сыворотку и глутамин, затем неоднократно пассируют в низкой плотности с изменением состава среды, а культивирование ведут избегая накопления в культуре клеток зрелой стромы, в качестве фетального материала используют ткани на сроках гестации: печень 5-8 недель, тимус 18-20 недель, костный мозг 17-20 недель, подкожная жировая ткань 17-19 недель, в качестве донорского материала используют костный мозг, подкожную жировую ткань, тимус (у детей 6 лет), которые забирают у пациента для последующей аутотрансплантации и аллотрансплантации, а также способ его получения. Биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, содержащий фетальные миобласты, полученные из скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности, и включает не менее 80% клеток, экспрессирующих маркеры раннего миогенеза (Myo D-1) и способ его получения и способ лечения с использованием указанного биотрансплантата. Изобретение обеспечивает получение биотрансплантата и способа лечения с наиболее эффективным (комплексным) воздействием. 5 н. и 9 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к области медицины и касается приготовления генетически немодифицированной культуры мезенхимальных стволовых клеток человека и способа лечения кардиомиопатии.
Заболевания сердечной мышцы, или кардиомиопатии (от cardio - сердце, myo - мышца и pathos - заболевание), нарушают насосную функцию сердца, уменьшают его способность эффективно перекачивать кровь и представляет серьезную опасность для здоровья человека. Кардиомиопатии входят в группу четырех наиболее распространенных заболеваний сердца. Кардиомиопатию трудно распознать, она часто поражает молодых людей и часто заканчивается трагически.
При дилятационной кардиомиопатии (ДКМП) разрушается мышечная ткань миокарда, причем ослабляется сократительная способность всех камер сердца. У пациентов с критическим снижением массы жизнеспособного миокарда вследствие диффузного некроза и/или апоптоза ни хирургические, ни тем более терапевтические мероприятия не эффективны, поскольку сердце относится к нерегенерируемым органам. Кардиомиоциты перестают делиться сразу после рождения человека и в дальнейшем, при их повреждении преобладают не пролиферативные процессы в паренхиме, а фибропластические реакции стромы, которые почти необратимы [3]. В подобных случаях единственным альтернативным методом лечения является лишь способ создания новых сократительных элементов путем трансплантации в миокард клеток для замещения функции погибших кардиомиоцитов или трансплантация целого органа.
Клеточная трансплантация обладает рядом важных преимуществ по сравнению с пересадкой целого органа (сердца) [2]:
заместительная клеточная терапия позволяет культуральными методами избавиться от примеси сверхантигенных донорских клеток, которые в первую очередь вовлекаются в процесс иммунного отторжения;
подсадку клеток можно регулировать по дозам и многократно повторять;
стоимость клеточной трансплантации значительно ниже, чем пересадки органа.
В настоящее время предпринимаются попытки трансплантации клеток костного мозга или специфически дифференцированных (кардиомиобласты, скелетные миобласты) клеток для улучшения сократительной функции миокарда при кардиомиопатии. Несмотря на значительное количество накопленных к настоящему времени данных, результаты пересадок противоречивы. С одной стороны, описана трансдифференцировка различных клеточных типов в кардиомиобласты, другими авторами показана невозможность нормального функционирования трансплантата, возникновение дополнительных очагов фиброза или элиминация донорских клеток.
Большинство исследователей предпочитают аутогенные клетки (костный мозг, скелетные миобласты, клетки периферической крови). Преимущества аутотрансплантатов не вызывают сомнений, однако имеется ряд ограничений по их применению. В частности, длительность выращивания клеточных культур - более 2 месяцев, может являться критической для ряда пациентов; клетки, полученные от пожилых и тяжелобольных людей, обладают низкой способностью к пролиферации и самообновлению.
В сравнении с аутологичным клеточным трансплантационным материалом донорские (в том числе фетальные) клетки обладают рядом преимуществ [4]:
фетальные клетки имеют больший потенциал роста и пролиферации, выраженную способность к дифференцировке и функционально более активны, продуцируют факторы роста и регенерации;
пересаженные фетальные клетки стимулируют ангиогенез [5];
эмбриональные и фетальные клетки и ткани лучше переносят гипоксию и холодовую консервацию;
культуры донорских клеток могут быть приготовлены заранее и использоваться по первому требованию.
Наиболее выраженным терапевтическим потенциалом при патологиях миокарда обладают мезенхимальные стволовые клетки (МСК), способные не только заместить погибшие кардиомиоциты, но и обеспечить реваскуляризацию зоны фиброза. Кардиомиоциты человека, в основном, прекращают делиться вскоре после рождения. Однако недавние исследования показали, что в сердце взрослого человека сохраняется небольшая популяция кардиомиоцитов, способная к пролиферации. Являясь уникальной «фабрикой» цитокинов и факторов роста, донорские МСК обеспечивают активизацию собственных резервов организма.
Мезенхимальные стволовые клетки, в основном, получают из донорского костного мозга, однако существуют и другие источники - скелетные мышцы, подкожная жировая ткань, фетальные органы гемопоэза (печень, тимус, селезенка). МСК из фетальных органов гемопоэза и методики их получения практически не изучены. Описанные методики выращивания МСК из костного мозга и липоаспиратов позволяют получить гетерогенные популяции клеток стромы, лишь небольшой процент которых являются стволовыми. Клетки зрелой стромы не обладают свойством дифференцироваться в различные клеточные линии и, таким образом, терапевтически неэффективны. После трансплантации стромальные клетки мигрируют преимущественно в соединительную ткань и там накапливаются.
При стандартном пассировании в высоких посевных дозах доля зрелых стромальных клеток быстро увеличивается.
Использование в качестве трансплантата гомогенной (не менее 80%) популяции плюрипотентных МСК позволяет повысить эффективность лечения, увеличить воспроизводимость результатов и избежать нежелательных эффектов.
В настоящее время существует два основных способа трансплантации клеточного материала в сердце: интрамиокардиальный и интракоронарный. При интрамиокардиальном введении часть клеток (до 45%) гибнет от ишемии, поскольку уровень васкуляризации в месте введения может оказаться недостаточным [7].
Интрамиокардиальный способ введения не может обеспечить равномерного распределения клеточного материала в толще миокарда [6].
При использовании интрамиокардиального способа большинство исследователей отмечают у своих пациентов повышенную склонность к развитию различного рода аритмий в послеоперационном периоде (от желудочковой экстрасистолии до фибрилляции желудочков). Опыт свидетельствует об очень упорном течении этих аритмий и их рефрактерности к медикаментозной терапии. Подобных недостатков лишен метод интракоронарного введения клеточного трансплантата.
Задачей настоящего изобретения является получение биотрансплантата для наиболее эффективного (комплексного) воздействия на миокард человека и разработка наиболее эффективного способа введения при дилятационной кардиомиопатии.
Для решения поставленной задачи предложена группа изобретений, объединенная общим изобретательским замыслом.
Биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, содержащий мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального или донорского материала, при этом ткань дезагрегируют, далее культивируют в виде прикрепленных колоний в ростовой среде, содержащей эмбриональную телячью сыворотку и глутамин, затем неоднократно пассируют в низкой плотности с изменением состава среды, а культивирование ведут избегая накопления в культуре клеток зрелой стромы.
В качестве фетального материала используют ткани на сроках гестации: печень 5-8 недель, тимус 18-20 недель, костный мозг 17-20 недель, подкожная жировая ткань 17-19 недель.
В качестве донорского материала используют костный мозг, подкожную жировую ткань, тимус (у детей 6 лет), которые забирают у пациента для последующей аутотрансплантации и аллотрансплантации.
Предложен способ получения биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, заключающийся в том, что МСК выращивают в виде прикрепленных колоний на ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки, селектированной для выращивания клеток в низкой плотности, 2 мМ глутамина, 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фиобластов - 2 и 8 U/мл гепарина, при этом отбирают плотные колонии мелких клеток (диаметром 7-10 мкм) с большим количеством митозов, а выращивание колоний ведут из плотности 10-50 клеток на см2, при этом используют МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке, выделенные из фетальных (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань) тканей человека, и МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке, выделенные из тканей пациента (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань).
Предложен биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, содержащий фетальные миобласты, полученные из скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности, и включает не менее 80% клеток, экспрессирующих маркеры раннего миогенеза (Myo D-1).
Предложен также способ получения биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, заключающийся в том, что ткань скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности отмывают, измельчают, далее дезагрегируют в растворе, содержащем раствор коллагеназы II типа и трипсина в течение 40-90 минут, полученную суспензию диссициированных клеток культивируют до достижения конфлюэнтного монослоя, затем осуществляют пассирование, дезагрегацию монослоя раствором трипсина, при этом процесс культивирования ведут 18-25 дней при 37°С в атмосфере 9-10% CO2.
Суспензию клеток засевают на среду, содержащую ростовую среду ДМЕМ/F12, 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% ИТС (инсулин, трансферин, селенит) и 5 нг/мл фактора роста эпидермиса и клетки засевают с плотностью не менее 1×10 кл/мл.
Среду в процессе культивирования неоднократно меняют.
Способ лечения дилятационной кардиомиопатии заключается в том, что ранее указанные биотрансплантаты вводят в коронарную артерию и/или аортокоронарный шунт соответственно в виде суспензии в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн клеток на 1 кг веса пациента.
Биотрансплантат вводят с объемной скоростью, которая предотвращает вымывание клеток в аортальной кровоток.
Мезенхимальные стволовые клетки и фетальные миобласты берут в соотношениях от 1:1 до 1:15.
Мезенхимальные стволовые клетки (МСК).
МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке выделяются из фетальных (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань) или донорских (костный мозг, жировая ткань, тимус) тканей. Биоматериал от доноров получают как для аутотрансплантаций, так и для аллопересадок. Для успешного выделения МСК забирают не менее 5 мл аспирата костного мозга, от 1 см2 подкожной жировой клетчатки или от 1 см2 тимуса (у детей до 6 лет). Для выделения фетальных клеток используют абортивный материал, полученный при искусственном прерывании беременности у здоровых женщин, предварительно обследованных на наличие вирусных и бактериальных инфекций. Наиболее эффективное выделение миогенных МСК из фетального биоматериала достигается на следующих сроках гестации: печень - 5-8 недель, тимус - 18-20 недель, костный мозг - 17-20 недель, подкожная жировая ткань - 17-19 недель. Если выделение клеток производится не из аспиратов (костный мозг, липоаспират), а из плотных тканей, например тимуса, орган предварительно измельчают и ферментативно дезагрегируют. Суспензию фильтруют через мелкоячеистое сито из нержавеющей стали. Клеточную суспензию (аспират) разводят 1:1 солевым раствором Хэнкса, центрифугируют в режиме 1, 500×g, 10 минут и ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки, селектированной для выращивания клеток в низкой плотности, 2 мМ глутамина. Суспензию клеток высевают на пластиковые чашки Петри с диаметром 100 мм. Плотность посева первичной клеточной суспензии составляет 1-20 миллионов мононуклеарных клеток на 1 см2 в зависимости от источника выделения. Через 1 сутки неприкрепившиеся клетки удаляют, ростовую среду заменяют. Культуры инкубируют при 37°С в атмосфере 5% СО2. Через 6 дней наблюдают рост гетерогенных клеточных популяций. По достижении культурой 50% конфлуентности монослой трипсинизируют и пересевают на новые чашки с плотностью 10-30 клеток на 1 см2 в ростовой среде, дополнительно содержащей 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 U/мл гепарина. Через 7-10 дней отбирают плотные колонии мелких клеток (диаметром 7-10 мкм) с большим количеством митозов. Отобранные колонии рассевают в новые чашки с плотностью 20 клеток/см2 и выращивают до состояния преконфлуентности. Замену среды производят через каждые 2 дня. Последующие пассажи производят в том же режиме. В плотнорастущих колониях возможно появление многоядерных симпластов (миотубов), что подтверждает правильность соблюдения режима культивирования. Увеличение посевной дозы или изменение состава ростовой среды приводит к быстрому накоплению в культуре клеток зрелой стромы.
Экспериментально подобранные условия, объединяющие критерии отбора исходного материала и режим культивирования, являются оптимальными для достижения следующих результатов:
система отбора источников получения МСК позволяет получить культуры клеток с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке;
режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют при многократном пассировании максимально наращивать гомогенную клеточную культуру недифференцированных клеток;
режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют сохранить плюрипотентность клеточных культур;
режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют получить большое количество клеток для трансплантации (серию), что обеспечивает воспроизводимость результатов лечения.
Фетальные миобласты из скелетных мышц.
Культура получена из скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности и содержит не менее 80% клеток, экспрессирующих маркеры раннего миогенеза (Myo D-1) и не более 20% примесных клеток (фибробластов и эндотелиальных клеток).
Способ получения культуры скелетных миобластов характеризуется тем, что мышечную ткань фетусов человека 1-2 триместра беременности отмывают, механически измельчают и подвергают ферментативной дезагрегации в течение 40-90 минут в растворе, содержащем 0,01-0,1% раствор коллагеназы II типа, 0,25% раствор трипсина. Суспензию первичных диссоциированных клеток засевают с плотностью не менее 1×106 кл./мл и культивируют в среде, содержащей ростовую среду DMEM/F12, 20% эмбриональной телячьей сыворотки с добавлением 1% ИТС (инсулин, трансферин, селенит, НПП «ПанЭко») и фактора роста эпидермиса EGF (5-10 нг/мл).
Среду неоднократно меняют. При достижении клеточной культуры конфлюэнтного состояния осуществляют пассирование с использованием раствора трипсина для дезагрегации монослоя. Плотность посева - 5×105 кл./мл.
Клетки культивируют 18-25 дней при 37°С в атмосфере 9-10% углекислого газа.
Трансплантацию осуществляют в условиях стерильной рентгеноперационной путем введения гомогенной взвеси клеток в нативные коронарные артерии и/или аортокоронарные шунты. Взвесь суспендирована в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов, предотвращающей их быструю агрегацию.
В процессе выполнения процедуры необходимо постоянное перемешивание суспензии для поддержания клеток во взвешенном состоянии.
Доступ к коронарным артериям и/или аортокоронарным шунтам осуществляется по стандартной методике через бедренную артерию с использованием катетеров Judkins и Sones. После выполнения коронаро- и/или шунтографии по стандартной методике, оценивается объем миокарда левого желудочка, кровоснабжаемого каждым из коронарных сосудов и/или аортокоронарных шунтов. Распределение общей дозы клеток для введения в каждый из коронарных сосудов и/или аортокоронарных шунтов производится прямо пропорционально этому объему. Введение клеток осуществляют стерильным шприцом.
Введение клеточного трансплантата осуществляется в три этапа:
1. Первый этап - установка катетера в устье коронарной артерии. На этом этапе следует подобрать такой диаметр катетера, который позволял бы установить его кончик на расстояние не менее 4-5 мм дистальнее устья коронарной артерии или аортокоронарного шунта без значимого нарушения коронарного кровообращения (т.е. при отсутствии у пациента загрудинных болей).
2. Второй этап - подбор оптимальной объемной скорости введения клеточной взвеси. Для этого в установленный согласно п.1 катетер хирург с помощью инфузомата вводит контрастное вещество. Объемная скорость введения подбирается такой, какая предотвращает вымывание контраста в аортальный кровоток.
3. Третий этап - собственно введение клеточной взвеси с помощью инфузомата с объемной скоростью, определенной на этапе 2.
Окончание процедуры не отличается от такового после рутинной коронарографии.
В течение 16 часов после операции пациента наблюдают в отделении интенсивной терапии с мониторингом электрокардиограммы и артериального давления. Выписка на 2-е сутки с рекомендацией контрольного осмотра через 1 месяц.
По предложенному способу лечения в Самарском областном кардиологическом диспансере проведено 3 операции интракоронарного введения аллогенных фетальных скелетных миобластов и МСК пациентам, с дилатационной кардиомиопатией.
В период проведения исследования все пациенты получали стабильную медикаментозную терапию средними терапевтическими дозами ингибиторов АПФ, β-адреноблокаторами, диуретиками.
В группу больных (средний возраст 48±4,5 года) с ДКМП включены пациенты с неясной (неалкогольной, нетоксической) этиологией заболевания, с хронической сердечной недостаточностью 2б функционального класса (3-4 класса по NYHA).
На протяжении всего исследования пациенты не получали иммуносупрессивной терапии.
В контрольную группу включены пациенты с аналогичным диагнозом, с хронической сердечной недостаточностью 2б функционального класса, получающие соответствующую стабильную медикаментозную терапию - 6 пациентов с ДКМП.
Во время исследования проводилось динамическое обследование пациентов: общий анализ крови, мочи, биохимический анализ крови, ЭКГ, ЭхоКГ, ангиокардиография, в том числе по методике Centraline.
Имплантацию осуществляли в условиях стерильной рентгеноперационной путем введения суспензии аллогенных скелетных миобластов 10 млн кл./кг массы тела в 100 мл физиологического раствора в аортокоронарные шунты. Доступ к коронарным артериям и аортокоронарным шунтам осуществляли по стандартной методике через бедренную артерию. В течение 16 часов после операции пациента наблюдают в отделении интенсивной терапии с мониторингом электрокардиограммы и артериального давления.
В раннем послеоперационном периоде ни у одного из пациентов не наблюдалось каких-либо реакций, побочных эффектов или осложнений, связанных с процедурой.
Через 1-3 месяца после имплантации все пациенты отмечали улучшение самочувствия, объективно наблюдалось улучшение общего состояния, повышение толерантности к физическим нагрузкам, уменьшение одышки, периферических отеков, гепатомегалии, при инструментальном обследовании выявлено незначительное уменьшение объемов сердца, размеров зон гипокинетичного миокарда, увеличение ФВ ЛЖ. В контрольной группе, в условиях стабильной медикаментозной терапии, состояние и клинико-лабораторные показатели пациентов не изменились или отмечалась отрицательная динамика.
Больная Ф., 36 лет, поступила в Самарский областной клинический кардиологический диспансер с жалобами на выраженную общую слабость, быструю утомляемость, одышку при незначительной физической нагрузке, отеки на нижних конечностях, доходящие до уровня верхней трети голеней, чувство дискомфорта в области правого подреберья.
При объективном исследовании отмечен цианоз кожи и видимых слизистых оболочек, похолодание кожи конечностей. Аускультативно в легких - на фоне жесткого дыхания в нижних отделах выслушиваются влажные мелкопузырчатые хрипы. Тоны сердца глухие, ритм неправильный. ЧСС 90-96 в 1 мин. Печень выступает из-под края реберной дуги на 5 см, болезненна при пальпации, гладкая, край ее закруглен.
ЭКГ: синусовая тахикардия, горизонтальное положение ЭОС, гипертрофия ЛЖ с изменениями комплекса QRS, гипертрофия ПЖ.
ЭхоКГ: Регургитация на митральном клапане 2 ст. Диаметр основания аорты 35 мм. Регургитация на аортальном клапане. Градиент между ЛЖ и аортой 12 мм рт.ст. Регургитация на трехстворчатом клапане 1 ст. Систолический градиент на трехстворчатом клапане 48 мм рт.ст. Диаметр легочной артерии 30 мм. Давление в легочной артерии 43 мм рт.ст. Переднезадний размер ЛП 50 мм. Медиально-латеральный размер ЛП 49 мм. Верхненижний размер ЛП 62 мм. КДРЛЖ 78 мм, КСРЛЖ 65 мм, КДОЛЖ 170 мл, КСОЛЖ 98 мл, ФВ 31%. Гипокинезия апикально-латерального сегмента, апикального сегмента предсердной стенки. Акинезия верхушки, апикально-септального сегмента.
Ангиокардиография: КДО 320 мл, КСО 242 мл, УО 60 мл, ФВ 25%. При исследовании по методике Centraline 50% сегментов миокарда асинергичны с явлениями гипо- и акинезии, а уровень сократимости остальных 50% миокарда находился на нижней границе нормы.
15 декабря 2003 года пациентке проведена операция коронаровентрикулография с интракоронарным введением клеточного биотрансплантата.
В течение 16 часов после операции пациентка наблюдалась в отделении интенсивной терапии с мониторингом электрокардиограммы и артериального давления. Послеоперационное течение гладкое. Больная выписана на 2-е сутки.
При контрольном осмотре через 8 месяцев пациентка отмечает значительное улучшение состояния, уменьшение слабости, утомляемости. Одышка возникает только при физической нагрузке. Отеков нет.
При осмотре кожа и видимые слизистые обычной окраски. Аускультативно в легких дыхание жесткое, хрипов нет. Тоны сердца глухие, ритм правильный. ЧСС 88 в 1 мин, печень выступает из-под края реберной дуги на 1,5 см.
Лабораторные показатели крови без существенной динамики.
ЭхоКГ: ФВ возросла на 15%, КДОЛЖ уменьшился на 3%, ангиокардиография - КДО - 190 мл, КСО - 136 мл. УО - 112 мл, ФВ 38%. При исследовании по методике Centraline 25% сегментов миокарда асинергичны с явлениями гипокинезии, уровень сократимости 25% миокарда на нижней границе нормы, а сократимость 45% сегментов миокарда была нормальной.
Источники информации:
1. В.Ю. Мареев, Ю.Н. Беленков, Перспективы в лечении хронической сердечной недостаточности.
2. Репин В.С., Сухих Г.Т. Медицинская клеточная биология. М., РАМН: БЭБиМ, 1998. - 200 с.
3. Саркисов Д.С. Регенерация и ее клиническое значение. М., Медицина, 1979. - 284 с.
4. Сухих Г.Т. Трансплантация фетальных тканей и клеток: настоящее и будущее. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 1998; 126 (приложение 1): 3-13.
5. Leor J., Patterson М., Qumones M.J. et al. Transplantation of Fetal Myocardial Tissue Into the Infarcted Myocardium of Rat A Potential Method for Repair of Infarcted Myocardium? Circulation 1996; 94 [suppl II]: II-332-II-336.
6. Suzuki K., Brand N.J., Morrison K.J. et al. Development of a Novel Method for Cell Transplantation via Coronary Artery. Circulation 1999; 100 (suppl I): I-164.
7. Zhang М., Murry C.E. Death of Grafted Cardiomyoctyes Limits Formation of New Myocardium in Injured Hearts. Circulation 1999; 100 (suppl I): I-837.
Claims (14)
1. Биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что он содержит мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального или донорского материала, при этом ткань дезагрегируют, далее культивируют в виде прикрепленных колоний в ростовой среде, содержащей эмбриональную телячью сыворотку и глутамин, затем неоднократно пассируют в низкой плотности с изменением состава среды, а культивирование ведут, избегая накопления в культуре клеток зрелой стромы.
2. Биотрансплантат по п.1, где в качестве фетального материала используют ткани на сроках гестации: печень 5-8 недель, тимус 18-20 недель, костный мозг 17-20 недель, подкожная жировая ткань 17-19 недель.
3. Биотрансплантат по п.1, где в качестве донорского материала используют костный мозг, подкожную жировую ткань, тимус (у детей 6 лет), которые забирают у пациента для последующей аутотрансплантации.
4. Способ получения биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что МСК выращивают в виде прикрепленных колоний на ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки, селектированной для выращивания клеток в низкой плотности, 2 мМ глутамина, 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 U/мл гепарина, при этом отбирают плотные колонии мелких клеток (диаметром 7-10 мкм) с большим количеством митозов, а выращивание колоний ведут из плотности 10-50 клеток на 1 см2.
5. Способ по п.4, где используют МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке, выделенные из фетальных (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань) тканей человека.
6. Способ по п.4, где используют МСК с преимущественной способностью к миогенной дифференцировке, выделенные из тканей пациента (костный мозг, тимус, печень, жировая ткань).
7. Биотрансплантат для лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что он содержит фетальные миобласты, полученные из скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности, и включает не менее 80% клеток, экспрессирующих маркеры раннего миогенеза (Myo D-1).
8. Способ получения биотрансплантата для лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что ткань скелетных мышц фетусов человека 1-2 триместра беременности отмывают, измельчают, далее дезагрегируют в растворе, содержащем раствор коллагеназы II типа и трипсина, в течение 40-90 мин, полученную суспензию диссоциированных клеток культивируют до достижения конфлюэнтного монослоя, затем осуществляют пассирование, дезагрегацию монослоя раствором трипсина, при этом процесс культивирования ведут 18-25 дней при 37°С в атмосфере 9-10% CO2.
9. Способ по п.8, где суспензию клеток засевают на среду, содержащую ростовую среду ДМЕМ/Р12, 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% ИТС (инсулин, трансферин, селенит) и 5 нг/мл фактора роста эпидермиса.
10. Способ по п.8, где клетки засевают с плотностью не менее 1×10 кл/мл.
11. Способ по п.4, где среду в процессе культивирования неоднократно меняют.
12. Способ лечения дилятационной кардиомиопатии, характеризующийся тем, что биотрансплантат по п.1 и/или 7 вводят в коронарную артерию и/или аортокоронарный шунт соответственно в виде суспензии в физиологическом растворе с концентрацией клеточных элементов 1-15 млн клеток на 1 кг веса пациента.
13. Способ по п.12, где биотрансплантат вводят с объемной скоростью, которая предотвращает вымывание клеток в аортальной кровоток.
14. Способ по п.12, где мезенхимальные стволовые клетки и фетальные миобласты берут в соотношениях от 1:1 до 1:15.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004116840/15A RU2268062C1 (ru) | 2004-06-04 | 2004-06-04 | Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения дилятационной кардиомиопатии |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004116840/15A RU2268062C1 (ru) | 2004-06-04 | 2004-06-04 | Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения дилятационной кардиомиопатии |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004116840A RU2004116840A (ru) | 2005-11-10 |
| RU2268062C1 true RU2268062C1 (ru) | 2006-01-20 |
Family
ID=35865305
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004116840/15A RU2268062C1 (ru) | 2004-06-04 | 2004-06-04 | Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения дилятационной кардиомиопатии |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2268062C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2573946C2 (ru) * | 2010-06-08 | 2016-01-27 | Роберто ПАРРАВИЧИНИ | Устройство для желудочка сердца |
| RU2574364C2 (ru) * | 2010-05-07 | 2016-02-10 | Юниверсити Оф Норт Каролина Эт Чепел Хилл | Способ трансплантации клеток из плотных тканей |
| RU2722669C1 (ru) * | 2019-07-01 | 2020-06-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр Российской Федерации - Институт медико-биологических проблем Российской академии наук (ГНЦ РФ - ИМБП РАН) | Способ получения ассоциатов гемопоэтических и стромальных клеток-предшественников, способных подавлять активацию и пролиферацию аллогенных лимфоцитов |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2000109319A (ru) * | 1997-10-10 | 2003-02-20 | Эд Гейштлих Зёне Аг Фюр Хемише Индустрие | Мембрана для использования при направленной регенерации тканей |
| RU2209641C2 (ru) * | 2001-05-22 | 2003-08-10 | Научно-исследовательский институт патологии кровообращения | Способ лечения дилятационной кардиомиопатии |
| RU2214256C2 (ru) * | 2001-02-09 | 2003-10-20 | Седов Валерий Михайлович | Средство для стимуляции пролиферации клеток, состав для стимуляции пролиферации клеток и способ лечения ран, ожогов и язв различной этиологии |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9721585D0 (en) * | 1997-10-10 | 1997-12-10 | Geistlich Soehne Ag | Chemical product |
-
2004
- 2004-06-04 RU RU2004116840/15A patent/RU2268062C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2000109319A (ru) * | 1997-10-10 | 2003-02-20 | Эд Гейштлих Зёне Аг Фюр Хемише Индустрие | Мембрана для использования при направленной регенерации тканей |
| RU2214256C2 (ru) * | 2001-02-09 | 2003-10-20 | Седов Валерий Михайлович | Средство для стимуляции пролиферации клеток, состав для стимуляции пролиферации клеток и способ лечения ран, ожогов и язв различной этиологии |
| RU2209641C2 (ru) * | 2001-05-22 | 2003-08-10 | Научно-исследовательский институт патологии кровообращения | Способ лечения дилятационной кардиомиопатии |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Suzuki К. et al. Circulation, 1999; 100 (Suppl. I): 1-104. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2574364C2 (ru) * | 2010-05-07 | 2016-02-10 | Юниверсити Оф Норт Каролина Эт Чепел Хилл | Способ трансплантации клеток из плотных тканей |
| RU2573946C2 (ru) * | 2010-06-08 | 2016-01-27 | Роберто ПАРРАВИЧИНИ | Устройство для желудочка сердца |
| RU2722669C1 (ru) * | 2019-07-01 | 2020-06-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр Российской Федерации - Институт медико-биологических проблем Российской академии наук (ГНЦ РФ - ИМБП РАН) | Способ получения ассоциатов гемопоэтических и стромальных клеток-предшественников, способных подавлять активацию и пролиферацию аллогенных лимфоцитов |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2004116840A (ru) | 2005-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7658951B2 (en) | Method of improving cardiac function of a diseased heart | |
| US9439931B2 (en) | Administering umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells to treat nerve injury | |
| US11821005B2 (en) | Umbilical cord mesenchymal stem cells (MSCs) and culture method and application thereof | |
| DE69937888T2 (de) | Verfahren zur Herstellung mesenchymaler Stammzellen | |
| US6251383B1 (en) | Method for ex-vivo expansion of hematopoietic cells | |
| CN108865986B (zh) | 用于修复关节软骨损伤/缺损的间充质干细胞制剂及其制备方法和应用 | |
| Globus | Neurotrophic contribution to a proposed tripartite control of the mitotic cycle in the regeneration blastema of the newt, Notophthalmus (Triturus) viridescens | |
| KR20120095022A (ko) | 간엽줄기세포 및 면역조절 ｔ 세포를 유효성분으로 포함하는 이식편대숙주질환 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물 | |
| JP2012513782A (ja) | 個々の移植物としての操作された組織および足場の迅速な調製および使用 | |
| AU2007265862A1 (en) | Soft tissue filler composition comprising autologous dermis-derived cell culture product and hyaluronic acid | |
| US20110177170A1 (en) | implantable neuroendoprosthetic system, a method of production thereof and a method of reconstructive neurosurgical operation | |
| CN107858329A (zh) | 从脂肪中分离脂肪间充质干细胞的方法和使用的试液 | |
| MXPA06013985A (es) | Tecnicas in vitro para utilizarse con celulas germinales. | |
| RU2323252C1 (ru) | Способ культивирования мезенхимальных стволовых клеток человека ex vivo | |
| US20220347346A1 (en) | Mesenchymal stem cell sheet and use thereof | |
| RU2268061C1 (ru) | Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения ишемической болезни сердца | |
| CN105456293A (zh) | 一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法 | |
| JP2019026573A (ja) | 育毛剤 | |
| RU2299073C1 (ru) | Биотрансплантат и способ лечения хронической сердечной недостаточности (варианты) | |
| RU2268062C1 (ru) | Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения дилятационной кардиомиопатии | |
| RU2428996C2 (ru) | Биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей (варианты), способ получения биотрансплантата (варианты) и способ коррекции дефектов мягких тканей | |
| RU2265442C1 (ru) | Биотрансплантат и способ лечения остеопороза | |
| RU2418571C1 (ru) | Биотрансплантат, способ его получения и способ лечения заболеваний пародонта | |
| CN108066824A (zh) | 一种制备表皮缺损治疗药物的新方法 | |
| RU2265443C1 (ru) | Биотрансплантат и способ лечения сахарного диабета i и ii типа (варианты) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE Effective date: 20120126 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150605 |