RU2266323C2 - Штамм бактерий sphingobacterium mizutae-32 - продуцент эндонуклеазы рестрикции spmi, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ат'cgat-3' - Google Patents
Штамм бактерий sphingobacterium mizutae-32 - продуцент эндонуклеазы рестрикции spmi, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ат'cgat-3' Download PDFInfo
- Publication number
- RU2266323C2 RU2266323C2 RU2003118019/13A RU2003118019A RU2266323C2 RU 2266323 C2 RU2266323 C2 RU 2266323C2 RU 2003118019/13 A RU2003118019/13 A RU 2003118019/13A RU 2003118019 A RU2003118019 A RU 2003118019A RU 2266323 C2 RU2266323 C2 RU 2266323C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- restriction endonuclease
- enzyme
- nucleotide sequence
- spml
- Prior art date
Links
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims abstract description 8
- 241001136275 Sphingobacterium Species 0.000 title claims abstract description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title abstract description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 6
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 abstract description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 abstract 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 241000190872 Sphingobacterium mizutaii Species 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088237 ATCGAT-specific type II deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241001468186 Caryophanon latum Species 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 102100034330 Chromaffin granule amine transporter Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000701867 Enterobacteria phage T7 Species 0.000 description 1
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 101000641221 Homo sapiens Chromaffin granule amine transporter Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой штамм бактерий Sphingobacterium Mizutae-32, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, названную SpmI, которая узнает и расщепляет последовательность нуклеотидов 5'-AT'CGAT-3'. Штамм выделен из талой воды в результате поиска штаммов-продуцентов эндонуклеазы, способных проявлять высокую активность при низких температурах. Штамм способен расти при температуре 6°С, сохраняет стабильность в течение двух недель хранения при +20°С, а продуцируемый штаммом фермент гидролизует ДНК фага лямбда и Т7 при температуре 6-10°С. Выход фермента из 10 г клеток 300000 ед. акт. 2 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к поиску новых штаммов - продуцентов биологически активных веществ, перспективных для микробиологической промышленности и генной инженерии, и касается получения нового штамма, обладающего свойством роста при низких температурах и продуцирующего сайт-специфическую эндонуклеазу рестрикции, способную узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5'-ATCGAT-3'.
Психрофильные микроорганизмы мало изучены из-за их экстремальных условий обитания и трудности их выделения. Однако в настоящее время они привлекают все больше внимания ученых.
Эндонуклеаза рестрикции данной специфичности используется для исследования первичной структуры ДНК, физического картирования различных геномов и ранее не обнаружена в штаммах рода Sphingobacterium.
В настоящее время в литературе описаны изошизомеры данной эндонуклеазы рестрикции [3]. Однако ни один из них не выделялся из психрофильных микроорганизмов и не проявлял оптимума действия ниже 10°С.
Известны несколько штаммов [2-8], способных продуцировать эндонуклеазу рестрикции (сайт узнавания 5'-ATCGAT-3'). Однако ни один из них не относится к роду Sphingobacterium.
В литературе приводятся данные о выходе ферментов для некоторых изошизомеров [4-7]. Выход фермента ClaI из штамма Caryophanon latum L составляет 400 Е/г [6], BsmI из Bacillus species-12000 Е/г [7], а BspXI из Bacillus sphericus - 42000 Е/г [4]. Однако в последнем штамме содержатся два фермента, а не один, как в нашем штамме. Наличие нескольких эндонуклеаз рестрикции всегда затрудняет процесс выделения чистого препарата фермента.
Наиболее доступным и близким к заявляемому штамму является штамм В. Stearothermophilus 29, продуцирующий рестриктазу Bsa29I [3, 5], прототип.
Штамм культивируется при температуре 50°С. Фермент сохраняет активность от двух до шести месяцев хранения при -20°С. Выход фермента составляет 12000 ед/г препарата.
Недостатком данного штамма является невысокий выход эндонуклеазы рестрикции и отсутствие способности расти при низких температурах.
Технической задачей изобретения является получение штамма, продуцирующего эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую нуклеотидную последовательность 5'-ATCGAT-3', с высоким выходом фермента, стабильного при хранении и способного проявлять высокую активность при низкотемпературных условиях реакции.
Поставленная техническая задача решается выявлением и использованием штамма-продуцента сайт-специфической эндонуклеазы рестрикции SpmI.
В процессе анализа образцов талой воды был выделен штамм Sphingobacterium mizutae, являющийся продуцентом эндонуклеазы рестрикции, названной SpmI согласно общепринятой номенклатуре [1]. Штамм культивируется при низких температурах и является продуцентом эндонуклеазы рестрикции, обладающей высокой активностью при температуре 6-10°С. Фермент является изошизомером известной эндонуклеазы рестрикции ClaI [2], но отличается от выделенных ранее изошизомеров тем, что он более активен при низких температурах и полностью инактивируется при 50°С.
Согласно классификации Бердже этот род был описан еще в 1983 г. и включает 3 вида, выделенные из рода Flavobacterium [8].
Идентификацию проводят общепринятыми методами [9-10].
Штамм обладает следующими свойствами.
Палочки прямые, спор не образуют, грамотрицательные, неподвижные, каталазоположительные. Ферментируют лактозу и сахарозу. Растет на минимальной среде с лактозой. Колонии первоначально белые, непрозрачные, через несколько суток инкубации при комнатной температуре становятся желтыми. Индол не образует, желатину не гидролизует. Образует кислоту из углеводов в результате их окисления, газ не выделяет. Штамм утилизирует рамнозу и характеризуется отсутствием дезоксирибонулеазы; отсутствие образования кислоты при окислении маннитола, этанола и гликогена. Штамм относится к психрофильным микроорганизмам, не растет при 37°С, хорошо растет при температуре 6-20°С.
Вид идентифицирован по определителю [8] как штамм бактерии Sphingobacterium mizutae 32.
Полученный штамм Sphingobacterium mizutae 32 депонирован в НИИ ККМ Государственного Научного Центра вирусологии и биотехнологии "Вектор" под регистрационным номером В-907, а продуцируемая им рестриктаза названа SpmI согласно общепринятой номенклатуре.
Штамм хранится в лиофильном состоянии и в питательной среде с глицерином.
Для культивирования Sphingobacterium mizutae 32 применяют среду следующего состава (г/л): бактотриптон (Difco) 10.0, дрожжевой экстракт (Difco) 5.0, NaCl 5.0, рН 7.0-7.2.
Для получения препарата фермента штамм выращивают в поллитровых колбах в качалке при 200 об/мин и 12-14°С в течение 48 ч или в холодильнике при температуре 6°С. Клетки осаждают центрифугированием при 5000 об/мин и температуре 4-5°С. Выделение проводят путем хроматографической очистки на фосфоцеллюлозе Р-11 ("Whatman", Англия). Все операции по выделению SpmI проводят при температуре 4-5°С. Клетки суспендируют в буфере А (10 мМ калийфосфатный буфер рН 7.5, 7 мМ β-меркаптоэтанол, 0.1 мМ ЭДТА) из расчета 4 мл на 1 г биомассы и разрушают ультразвуком на дезинтеграторе ("MSE", Англия), затем осветляют центрифугированием на центрифуге J-21B ("Bekman", США) со скоростью 18000 об/мин в течение 30 мин. Экстракт наносят на колонку (1.6×14 см) фосфоцеллюлозы Р-11 ("Whatman", Англия), промывают буфером А и смывают фермент в градиенте концентрации NaCl (0.0-0.8 М). Фракции, содержащие рестриктазу, диализуют против буфера В (10 мМ трис-HCl рН 7,5, 1 мМ β-меркаптоэтанол, 0.1 мМ ЭДТА). Фракции с ферментом диализуют против 50%-ного раствора глицерина в буфере А.
Для электрофореза используют агарозу фирмы "Sigma", США. Рестрикционный анализ проводят в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 10 мМ трис рН 7.5, 10 мМ MgCl2, 10 мМ NaCl, 1 мМ дитиотреитол (ДТТ) и 1 мкг ДНК λсI857 при температуре 6-10°С.
Выход фермента из 10 г клеток составляет 300000 ед. акт. За единицу активности (Е) принимают минимальное количество фермента, которое в течение 1 ч при температуре 6-10°С в оптимальных условиях полностью гидролизует 1 мкг ДНК фага λcI857.
Штамм является уникальным не только по наличию данной эндонуклеазы рестрикции, но и имеет дополнительные свойства. Клетки штамма способны расти при низких температурах, а фермент гидролизует ДНК фага лямбда и Т7 при температуре 6-10°С.
Определяющим отличием предлагаемого штамма от штамма-прототипа является:
- штамм относится к роду Sphingobacterium и растет при низких температурах,
- высокая продуктивность штамма, превышающая по данному показателю штамм-прототип,
- высокая стабильность фермента (сохранение активности в течение двух недель хранения при +20°С),
- широкий температурный оптимум работы фермента, в результате чего расширяется температурный спектр его использования в области низких температур.
Для определения узнаваемой последовательности нукпеотидов эндонуклеазой рестрикции SpmI проводят сравнение экспериментально полученных путем электрофореза в 1%-ном агарозном геле фрагментов, образующихся при гидролизе ДНК фага λсI857. Результаты сравнительного анализа позволяют сделать вывод, что данная эндонуклеаза рестрикции узнает последовательность нуклеотидов (5'-CTGCAG-3').
На фиг.1 представлена электрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фага λсI857 ферментом Spml (дор.1), SpmI и Bsa29I (дор.2) Bsa29I (дор.3), (сайт узнавания 5'-ATCGAT-3') (дор.3).
Как видно из представленной фиг.1, идентичность полос расщепления при параллельном и совместном гидролизе подтверждает их изошизомерию.
Интерпретация полученных экспериментальных данных позволяет утверждать, что исследуемая эндонуклеаза рестрикции является изошизомером рестриктазы Bsa29I и может заменить его во всех молекулярно-биологических и генно-инженерных работах. Также установлено, что Bsa29I и SpmI и имеют общую точку расщепления и гидролизуют ДНК между нуклеотидами Т и С. Таким образом, впервые выделена эндонуклеаза рестрикции из психрофильного штамма, относящегося к роду Sphingobacterium, имеющая оптимальную температуру рестрикции 6-10°С.
Поскольку предлагаемый штамм получен впервые и никогда не использовался, можно сделать вывод о соответствии предлагаемого штамма критериям изобретения "новизна" и "изобретательский уровень".
Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.
Пример 1. Получение биомассы и выделение фермента. Перед началом работы клетки штамма-продуцента пересевают бактериологической петлей на агаризованную среду. Косяки помещают в холодильник при температуре 10±2°С. После 42 ч инкубации подросшие клетки пересевают в колбы со свежей питательной средой.
Культивирование проводят в холодильном шкафу "MSE, Англия" при 10±2°С с аэрацией, при перемешивании 200 об/мин. Клетки собирают центрифугированием на центрифуге J-21 при 5000 об/мин и температуре 4-5°С. Дезинтеграцию, выделение и очистку проводят при описанной выше методике.
Пример 2. Определение специфичности и активности фермента. Специфичность фермента определяют по картине параллельного и совместного гидролиза ДНК Фага лямбда (фиг.1). Идентичность картин гидролиза на 1-3 дорожках говорит о том, что эти ферменты узнают и расщепляют одинаковую последовательность нуклеотидов 5'-ATCGAT-3'.
Пример 3. Определение влияния температуры на активность фермента. Гидролиз ДНК фага лямбда проводят в стандартных условиях, но при различных температурах от 6 до 50°С в течение 60 мин. Фермент полностью инактивируется при 50°С, сохраняет свою активность при 37°С, максимальная активность наблюдается при температуре 6-10°С (фиг.2, табл.1).
| Таблица | ||
| Сохранение активности рестриктазы SpmI при разных температурах инкубации | ||
| №п/п | Температура инкубации, °С | Наличие полного гидролиза * |
| 1 | 6 | + |
| 2 | 10 | + |
| 3 | 20 | ± |
| 4 | 37 | ± |
| 5 | 50 | - |
| * - Гидролиз проводят в стандартных условиях с 1 мкг ДНК λсI857, в течение 1 ч | ||
Поскольку эндонуклеаза рестрикции SpmI имеет сайт узнавания AT^CGAT, идентичный сайту узнавания эндонуклеазы рестрикции Bsa29I, которая также является изошизомером ClaI, она может заменить прототип во всех генно-инженерных работах.
Пример 4. Культивирование штамма. Клетки штамма-продуцента пересевают бактериологической петлей на скошенную агаризованную среду. Культуру на скошенном агаре помещают в термостат на 37±2°С. После 48 ч инкубации роста клеток не наблюдают.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Roberts R.J., Belfort M., Bestor Т., Bhagwat A.S., Bickle T.A., Bitinaite J. // Nucleic Acids Res. - 2003. - V.31. - P.1805-1812.
2. Kessler C., Neumaier P.S., Wolf W., (1985) Gene, vol. 33, pp.1-102.
3. Roberts R.J., Vincze Т., Posfai J., Macelis D. // Nucleic Acids Res. - 2003. - V.31 - P.418-420.
4. Zieger M., Patillon M., Roizes G., Lerouge Т., Dupret D., Jeltsch, J.M.// Nucleic Acids Res - 1987. - V.15 - P.3919.
5. Repin V., Lebedev L., Puchkova L., Serov G., Terechenko Т., Chizikov V., Andreeva I.// Gene. - 1995. - V.157. - №1-2. - P.321-322.
6. Mayer, H., Grosschedl, R., Schutte, H., Hobom, G., Nucleic Acids Res., - 1981. - vol.9, p.4833-4845.
7. Суджювене О.Ф., Тарасов А.П. // Мол. генет. микробиол. вирусология, 1987. №4, с.19-22.
8. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т.1; Пер. с англ./ Под ред. Дж.Хоулта, H.Крига, П.Снита, Дж.Стейли, С.Уилльямса. - M.: Мир, 1997. - 432 с.
9. Методы общей бактериологии: Пер. с англ./ Под ред. Ф.Герхардта и др. - M.: Мир, 1984. - 264 с.
10. А.С.Лабинская. Микробиология с техникой микробиологических исследований - M.: Медицина, 1972. - 479 с.
Claims (1)
- Штамм бактерий Sphingobacterium mizutae-32, депонированный в НИИ коллекции культур микроорганизмов ГНЦ ВБ "Вектор" под №В-907 - продуцент эндонуклеазы рестрикции Spml, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-AT'CGAT-3'.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003118019/13A RU2266323C2 (ru) | 2003-06-16 | 2003-06-16 | Штамм бактерий sphingobacterium mizutae-32 - продуцент эндонуклеазы рестрикции spmi, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ат'cgat-3' |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003118019/13A RU2266323C2 (ru) | 2003-06-16 | 2003-06-16 | Штамм бактерий sphingobacterium mizutae-32 - продуцент эндонуклеазы рестрикции spmi, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ат'cgat-3' |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003118019A RU2003118019A (ru) | 2004-12-10 |
| RU2266323C2 true RU2266323C2 (ru) | 2005-12-20 |
Family
ID=35869797
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003118019/13A RU2266323C2 (ru) | 2003-06-16 | 2003-06-16 | Штамм бактерий sphingobacterium mizutae-32 - продуцент эндонуклеазы рестрикции spmi, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ат'cgat-3' |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2266323C2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2593723C1 (ru) * | 2015-05-19 | 2016-08-10 | Общество с ограниченной ответственностью "СибЭнзайм" | ШТАММ БАКТЕРИЙ Plantibacter flavus 3Kz - ПРОДУЦЕНТ МЕТИЛЗАВИСИМОЙ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ PfsI |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1544802A1 (ru) * | 1988-05-04 | 1990-02-23 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм бактерий BacILLUS тнURINGIеNSIS - продуцент рестриктазы изошизомера |
| SU1648976A1 (ru) * | 1989-07-12 | 1991-05-15 | Институт Биологической И Медицинской Химии Амн Ссср | Штамм бактерий АснRомовастеR aGILe - продуцент рестриктазы AaG 525 I |
-
2003
- 2003-06-16 RU RU2003118019/13A patent/RU2266323C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1544802A1 (ru) * | 1988-05-04 | 1990-02-23 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм бактерий BacILLUS тнURINGIеNSIS - продуцент рестриктазы изошизомера |
| SU1648976A1 (ru) * | 1989-07-12 | 1991-05-15 | Институт Биологической И Медицинской Химии Амн Ссср | Штамм бактерий АснRомовастеR aGILe - продуцент рестриктазы AaG 525 I |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ROBERTS R.J. et al. REBASE: restriction enzymes, and methyltrans ferases. Nuelere acids res. 2003, v.31, № 1, p.418-420. REPIN V. et al. New restriction endonucleases from thermophilie soil bacteria. Gene. 1995, v. 157, p.321-322. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2593723C1 (ru) * | 2015-05-19 | 2016-08-10 | Общество с ограниченной ответственностью "СибЭнзайм" | ШТАММ БАКТЕРИЙ Plantibacter flavus 3Kz - ПРОДУЦЕНТ МЕТИЛЗАВИСИМОЙ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ PfsI |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pant et al. | Production, optimization and partial purification of protease from Bacillus subtilis | |
| Rakaz et al. | Isolation, Extraction, Purification, and Molecular Characterization for Thermostable α‐Amylase from Locally Isolated Bacillus Species in Sudan | |
| RU2288263C2 (ru) | Штамм bacillus coagulans sim-7 dsm 14043 для получения l(+)-лактата и способ получения l(+)-лактата | |
| Sneha et al. | Isolation and screening of protease producing bacteria from marine waste | |
| RU2266323C2 (ru) | Штамм бактерий sphingobacterium mizutae-32 - продуцент эндонуклеазы рестрикции spmi, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ат'cgat-3' | |
| RU2073717C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus schlegelii - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5' - ccnnnnnnn gg-3' | |
| Odu et al. | Protease production capabilities of Micrococcus luteus and Bacillus species isolated from abattoir environment | |
| RU2500811C1 (ru) | Рекомбинантный штамм бактерий bacillus subtilis - продуцент фосфолипазы с | |
| RU2115728C1 (ru) | Штамм бактерии bacillus stearothermophilus - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ggtnacc-3' | |
| JPH02255081A (ja) | プロテアーゼ生産菌、該菌体から産生したプロテアーゼ、及びその精製方法 | |
| RU2302459C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИИ Arthrobacter species Mn372-ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ Asi372I, УЗНАЮЩЕЙ И РАСЩЕПЛЯЮЩЕЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ НУКЛЕОТИДОВ 5`-ATGCAT-3` | |
| Mahesh et al. | Optimization for the production of extracellular alkaline phosphatase from Proteus mirabilis | |
| RU2500812C1 (ru) | Рекомбинантный штамм бактерий bacillus licheniformis - продуцент термостабильной липазы | |
| RU2046142C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus pumilus - продуцент эндонуклеазы рестрикции ври 19 1 | |
| RU2135581C1 (ru) | Штамм бактерий streptomyces sp. st-12 - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'- ctgcag -3' | |
| RU2270859C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTILIS - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ Bisi | |
| Kannaiyram et al. | Production and characterization of alkaline phosphatase produced by Bacillus Species | |
| RU2021373C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus pumilus, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5` = cctnagc-3` | |
| RU2057806C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-gatnnnnatc-3' | |
| RU2040540C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент сайт - специфическойй эндокуклазы, способной узнать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5'- ct (a/g) (t/c)ag - 3' | |
| RU2053299C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus badius - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-(a/t)ccgg(a/t)-3' | |
| SU1095645A1 (ru) | Способ получени эндонуклеазы рестрикции | |
| RU2037522C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus species - продуцент эндонуклеазы рестрикции, способной узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5`-(a/g) ccgg (t/c)-3` | |
| SU1694647A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS вRеVIS - продуцент рестриктазы В @ 12 I | |
| RU2054040C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент сайт - специфической эндонуклазы, способной узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5′-ctcttc-3′ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140617 |