RU2265051C1 - Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l, pkkk(p) 679d - producer of monoclonal antibody with specificity to protein-polysaccharide antigen from yersinia enterocolitica o3 and o9 serovars - Google Patents
Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l, pkkk(p) 679d - producer of monoclonal antibody with specificity to protein-polysaccharide antigen from yersinia enterocolitica o3 and o9 serovars Download PDFInfo
- Publication number
- RU2265051C1 RU2265051C1 RU2004107171/13A RU2004107171A RU2265051C1 RU 2265051 C1 RU2265051 C1 RU 2265051C1 RU 2004107171/13 A RU2004107171/13 A RU 2004107171/13A RU 2004107171 A RU2004107171 A RU 2004107171A RU 2265051 C1 RU2265051 C1 RU 2265051C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- serovars
- strain
- enterocolitica
- hybridoma
- protein
- Prior art date
Links
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 title claims abstract description 33
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 8
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 title claims description 3
- 229940098232 yersinia enterocolitica Drugs 0.000 title claims description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 title 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 5
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 abstract description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 6
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 abstract description 3
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 abstract description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 abstract 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 206010048249 Yersinia infections Diseases 0.000 description 5
- 208000025079 Yersinia infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 101000651298 Homo sapiens TRAF-interacting protein with FHA domain-containing protein A Proteins 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102100027651 TRAF-interacting protein with FHA domain-containing protein A Human genes 0.000 description 3
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfoxide Natural products CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 241000607149 Salmonella sp. Species 0.000 description 2
- 241000607758 Shigella sp. Species 0.000 description 2
- 241000607477 Yersinia pseudotuberculosis Species 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- VMSLCVRQGOXNRA-UHFFFAOYSA-N 2,14-dimethyl-6,10-dimethylidenepentadeca-1,14-diene Chemical compound C=C(C)CCCC(CCCC(CCCC(C)=C)=C)=C VMSLCVRQGOXNRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 208000025087 Yersinia pseudotuberculosis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности гибридомной биотехнологии, и представляет собой штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L. РККК (П) 679D, продуцирующий в культуральных средах и брюшной полости сингенных животных моноклональные антитела (МКА) к возбудителю кишечного иерсиниоза Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров, и может быть использовано при создании диагностических тест-систем для идентификации штаммов Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров в целях лабораторной диагностики в здравоохранении, ветеринарии и для проведения научных исследований.The invention relates to biotechnology, in particular hybridoma biotechnology, and is a strain of hybrid cultured animal cells of Mus musculus L. RKKK (P) 679D producing monoclonal antibodies (MCA) to the pathogen of intestinal yersiniosis Y.enterocolitica O3 in culture media and the abdominal cavity of syngenic animals and O9 serovars, and can be used to create diagnostic test systems for identifying strains of Y.enterocolitica O3 and O9 serovars for laboratory diagnostics in healthcare, veterinary medicine, and for conducting scientific research.
Кишечный иерсиниоз характеризуется полиморфизмом клинических проявлений, в результате чего постановка клинического диагноза весьма затруднена. Из-за длительности выделения возбудителя снижена эффективность и бактериологических методов исследования, особенно при остром течении заболевания. Для экспресс-диагностики кишечного иерсиниоза наиболее целесообразно применение иммунологических методов идентификации возбудителя с использованием тест-систем на основе МКА, имеющих ряд преимуществ перед поликлональными диагностическими сыворотками.Intestinal yersiniosis is characterized by polymorphism of clinical manifestations, as a result of which making a clinical diagnosis is very difficult. Due to the duration of pathogen isolation, the effectiveness of bacteriological research methods is also reduced, especially in the acute course of the disease. For rapid diagnosis of intestinal yersiniosis, it is most advisable to use immunological methods for identifying the pathogen using test systems based on MCA, which have a number of advantages over polyclonal diagnostic sera.
Большинство эпидемически опасных циркулирующих в природе на европейской территории штаммов Y.enterocolitica относится к O3 и O9 сероварам /1/.The majority of epidemically dangerous strains of Y.enterocolitica circulating in nature on the European territory belong to O3 and O9 serovars / 1 /.
Известны штаммы гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела к Y.enterocolitica O9 серовара /2/, на основе которых сконструированы иммунофлуоресцентные диагностические тест-системы, предназначенные для идентификации штаммов Y.enterocolitica O9 серовара.Known strains of hybrid cells producing monoclonal antibodies to Y.enterocolitica O9 serovar / 2 /, on the basis of which immunofluorescence diagnostic test systems are designed to identify strains of Y.enterocolitica O9 serovar.
Иммуноглобулиновые кишечноиерсиниозные диагностические препараты, предназначенные для идентификации обоих сероваров, как поликлональные, так и моноклональные в настоящее время отсутствуют.Immunoglobulin enteric diagnostic agents designed to identify both serovars, both polyclonal and monoclonal, are currently absent.
Задача изобретения - получение штамма гибридомы - продуцента моноклональных антител к белково-полисахаридному антигену Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров, используемых для идентификации штаммов Y.enterocolitica указанных сероваров.The objective of the invention is to obtain a hybridoma strain - a producer of monoclonal antibodies to the protein-polysaccharide antigen Y.enterocolitica O3 and O9 of serovars used to identify strains of Y.enterocolitica of these serovars.
Сущность изобретения состоит в том, что в результате слияния мышиной плазмоцитомы Sp2/0-Ag.8 и В-лимфоцитов селезенки мыши инбредной линии BALB/c, иммунизированной белково-полисахаридным комплексом (БПК), выделенным из биомассы бактерий Y.enterocolitica 908 O3 серовара уксуснокислым гидролизом по Р.В.White |3| в модификации Е.Э.Бахрах с соавт. /4/ в присутствии 0,1 н уксусной кислоты 1 ч при 100°С, при использовании в качестве сливающего агента 50% раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ) (Merck) с молекулярной массой (м.м.) 4000 кДа и последующего клонирования и реклонирования методом предельных разведений получена габридома Y.ent. O3.O9.C10, продуцирующая МКА к Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров. Экспериментальная иммуноферментная тест-система на основе указанных МКА позволяет идентифицировать штаммы Y.enterocolitica двух сероваров. Разрешающая способность тест-системы составляет (3,7·104-6,2·104) м.к./мл чистой культуры в сэндвич-варианте иммуноферментного анализа (ИФА), (6,2·104-1,2·105) м.к./мл в дот-иммуноанализе (ДИА).The essence of the invention lies in the fact that as a result of the fusion of mouse plasmacytoma Sp2 / 0-Ag.8 and B-lymphocytes of the spleen of the mouse inbred line BALB / c, immunized with a protein-polysaccharide complex (BOD) isolated from the biomass of bacteria Y.enterocolitica 908 O3 serovar acetic hydrolysis according to RVWhite | 3 | as modified by E.E. Bahrakh et al. / 4 / in the presence of 0.1 n acetic acid for 1 h at 100 ° C, when 50% polyethylene glycol solution (PEG) (Merck) with a molecular weight (m.m.) of 4000 kDa and subsequent cloning and reclining is used as a merging agent the method of limiting dilutions obtained gabridoma Y.ent. O3.O9.C10 producing MCA for Y.enterocolitica O3 and O9 serovars. An experimental enzyme immunoassay system based on these MCAs allows the identification of Y.enterocolitica strains of two serovars. The resolution of the test system is (3.7 · 10 4 -6.2 · 10 4 ) mk / ml of pure culture in the sandwich version of the enzyme immunoassay (ELISA), (6.2 · 10 4 -1.2 · 10 5 ) mk / ml in dot immunoassay (DIA).
Штамм гибридомы получают путем слияния миеломных клеток со спленоцитами мыши, иммунизированной БПК. В первый день иммунизации вводят внутрибрюшинно 25 мкг БПК, разведенного в 0,25 мл физиологического раствора, с добавлением 0,25 мл полного адъюванта Фрейнда (ПАФ), на 14, 28, 42 сутки вводят БПК в дозе 50 мкг без ПАФ. Через 3 суток после последней иммунизации извлекают селезенку мыши и проводят гибридизацию 1·107 спленоцитов мыши с 3·106 клетками миеломной линии в присутствии 1 мл ПЭГ 4000 в течение 1 мин.The hybridoma strain is obtained by fusion of myeloma cells with splenocytes from a mouse immunized with BOD. On the first day of immunization, 25 μg of BOD diluted in 0.25 ml of physiological saline is injected intraperitoneally with 0.25 ml of Freund's complete adjuvant (PAF) added; on days 14, 28, 42, BOD is administered in a dose of 50 μg without PAF. 3 days after the last immunization, the mouse spleen is removed and 1 · 10 7 mouse splenocytes are hybridized with 3 · 10 6 cells of the myeloma line in the presence of 1 ml of PEG 4000 for 1 min.
После отмывки полиэтиленгликоля клетки высевают на 96-луночные планшеты на слой фидерных клеток (лимфоцитов), выделенных из селезенки мыши аутбредной линии. Селекцию гибридных клеток проводят на селективной среде с содержанием гипоксантина-аминоптерина-тимидина (ГАТ). Через 21 сутки клетки культивируют на среде ГТ без аминоптерина. В последующем культивирование проводят на среде RPMI-1640, не содержащей селективных компонентов. 2-кратное клонирование проводят методом лимитирующих разведений в 96-луночных планшетах на слое фидерных клеток. Выход позитивных клонов 100%.After washing the polyethylene glycol, the cells are plated on 96-well plates on a layer of feeder cells (lymphocytes) isolated from the spleen of an outbred mouse. Selection of hybrid cells is carried out on a selective medium containing hypoxanthine-aminopterin-thymidine (GAT). After 21 days, the cells were cultured in HT medium without aminopterin. Subsequently, the cultivation is carried out on RPMI-1640 medium that does not contain selective components. 2-fold cloning is carried out by the method of limiting dilutions in 96-well plates on a layer of feeder cells. The yield of positive clones is 100%.
Для скрининга антителопродуцирующих клонов гибридом использовали твердофазный иммуноферментный анализ (ТИФА), антивидовые иммунопероксидазные конъюгаты и клетки типовых 34 сероваров Y.enterocolitica и других микроорганизмов. Отобран клон (Y.ent. O3.O9.C10), продуцирующий МКА к антигенам Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров.For screening antibody-producing clones of hybridomas, enzyme-linked immunosorbent assay (TIFA), anti-species immunoperoxidase conjugates and cells of type 34 serovars of Y.enterocolitica and other microorganisms were used. A clone (Y.ent. O3.O9.C10) was selected that produces MCA for serovars Y.enterocolitica O3 and O9 antigens.
Штамм депонирован в Специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур под номером РККК (П) 679D.The strain is deposited in the Specialized collection of vertebrate cell cultures of the Russian collection of cell cultures under the number RKKK (P) 679D.
Заявляемый штамм гибридом обладает следующими характеристиками:The inventive strain of hybridomas has the following characteristics:
1. Кариологическая характеристика.1. Karyological characteristics.
Модальный класс для родительской миеломной линии Sp2/0-Ag.8 - 72 хромосомы.The modal class for the parent myeloma line Sp2 / 0-Ag.8 is 72 chromosomes.
2. Морфологическая характеристика.2. Morphological characteristics.
Культура гибридных клеток состоит из слабоприкрепленных к подложке округлых клеток, отличающихся от исходной миеломной клетки меньшими размерами.The hybrid cell culture consists of round cells weakly attached to the substrate, which are smaller in size from the initial myeloma cell.
3. Культуральные свойства.3. Cultural properties.
Культивирование штамма гибридомы ведут при температуре (37,0±0,1)°С в атмосфере, содержащей (5,0±0,1) % углекислого газа. Средой культивирования является среда RPMI-1640 (Flow Laboratories), содержащая 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 2% L-глутамина, 2% Hepes, 10% МаНСОз, 1% пенициллина (5000 IU/ml) /стрептомицина (5000 мкг/мл). Клетки поддерживают в стационарной фазе роста в пластиковых флаконах (Costar), в 96-12 луночных планшетах.The hybridoma strain is cultured at a temperature of (37.0 ± 0.1) ° C in an atmosphere containing (5.0 ± 0.1)% carbon dioxide. The cultivation medium is RPMI-1640 medium (Flow Laboratories) containing 10% fetal calf serum, 2% L-glutamine, 2% Hepes, 10% MAHCO3, 1% penicillin (5000 IU / ml) / streptomycin (5000 μg / ml) . Cells are maintained in the stationary phase of growth in plastic bottles (Costar), in 96-12 well plates.
Пассирование клеток гибридомы проводят 2 раза в неделю с кратностью разведения 1:2. Посевная концентрация клеток составляет 2·105-3·105 в 1 мл среды. Гибридный клон не теряет способности синтеза антител при пассировании in vitro в течение 5 месяцев (срок наблюдения).Passage of hybridoma cells is carried out 2 times a week with a dilution ratio of 1: 2. Inoculum cell concentration is 2 · 10 5 -3 · 10 5 in 1 ml of medium. The hybrid clone does not lose the ability to synthesize antibodies when passaged in vitro for 5 months (observation period).
4. Культивирование гибридомы в организме животного.4. The cultivation of hybridomas in the body of the animal.
Вид животного - инбредные мыши линии BALB/c. Доза клеток при прививке составляет 1,5·106 на одну мышь. За 10 суток до введения клеток гибридомы мышам внутрибрюшинно вводят 0,5 мл 2, 6, 10, 14 - тетраметиленпентадекана (пристана). Иммуноасцитическая жидкость образуется на 10-12 сутки в объеме 5-7 мл. Перевиваемость 100%. Гибридный клон сохраняет способность продукции антител на одном уровне при перевивании клеток на животных (in vivo) на протяжении 6 пассажей (срок наблюдения).Animal species - inbred mice of the BALB / c line. The dose of cells during vaccination is 1.5 · 10 6 per mouse. 10 days before the introduction of hybridoma cells, mice were intraperitoneally injected with 0.5 ml of 2, 6, 10, 14 - tetramethylene pentadecane (pristan). Immunoascitic fluid is formed on 10-12 days in a volume of 5-7 ml. Digestibility 100%. The hybrid clone retains the ability to produce antibodies at the same level when transplanting cells in animals (in vivo) for 6 passages (observation period).
Число пассажей к моменту паспортизации и депонирования - 3.The number of passages at the time of certification and deposit - 3.
5. Контаминация штамма.5. The contamination of the strain.
Контаминанты гибридной линии, включая бактерии, дрожжи, грибы, не выявлены. Микоплазмы не определяли.Hybrid line contaminants, including bacteria, yeast, fungi, were not detected. Mycoplasmas were not determined.
6. Биотехнологическая характеристика полезного продукта.6. Biotechnological characteristics of a useful product.
Штамм продуцирует моноклональные антитела класса IgG. Они специфичны к микробным клеткам штаммов Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров.The strain produces monoclonal antibodies of the IgG class. They are specific to microbial cells of strains of Y.enterocolitica O3 and O9 serovars.
Средний геометрический титр МКА в ИФА в культуральной жидкости (КЖ) составляет 1:80 x/:2, в иммуноасцитической жидкости (ИАЖ) - 1:102400 x/:2. Концентрация МКА в КЖ составляет (28±2) мкг/мл, в ИАЖ - (7±2) мг/мл. Титр МКА, выделенных из ИАЖ, составляет 1:512000 x/:2.The geometric mean titer of MCA in ELISA in the culture fluid (QOL) is 1:80 x /: 2, in the immunoascetic fluid (IAG) - 1: 102400 x /: 2. The concentration of MCA in QOL is (28 ± 2) μg / ml, in IAI - (7 ± 2) mg / ml. The titer of MCA isolated from the IAH is 1: 512000 x /: 2.
Специфичность МКА проверяют в ТИФА с цельными клетками гетерогенных микроорганизмов: Y.enterocolitica, Y.pseudotuberculosis, Y.pestis, E.coli, Shigella sp., Salmonella sp., Br.abortus, Fr.tularensis.The specificity of MCA is checked in TIFA with whole cells of heterogeneous microorganisms: Y.enterocolitica, Y. pseudotuberculosis, Y. pestis, E. coli, Shigella sp., Salmonella sp., Br.abortus, Fr.tularensis.
Результаты исследования представлены в табл.1. Оценку результатов производят визуально.The results of the study are presented in table 1. Evaluation of the results is done visually.
Данные таблицы показывают, что МКА штамма РККК (П) 679D специфически взаимодействуют в ИФА с бактериальными клетками Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров и не взаимодействуют с другими микроорганизмами.The data in the table show that the MCA of the strain RKKK (P) 679D specifically interact in ELISA with bacterial cells of Y.enterocolitica O3 and O9 of serovars and do not interact with other microorganisms.
7. Иммунохимическая характеристика полезного продукта.7. Immunochemical characteristics of a useful product.
Методом иммуноблоттинга установлено, что МКА, продуцируемые штаммом РККК (П) 679Д, взаимодействуют с белково-полисахаридным антигеном (гликопротеином) Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров м.м. (16±2) кДа.By the method of immunoblotting, it was found that MCAs produced by the strain RKKK (P) 679D interact with the protein-polysaccharide antigen (glycoprotein) of Y.enterocolitica O3 and O9 of serovars m.m. (16 ± 2) kDa.
8. Способ криоконсервации.8. The method of cryopreservation.
Среда криоконсервирования содержит 90% эмбриональной телячьей сыворотки и 10% криопротектора - диметилсульфоксида (ДМСО) (Serva).The cryopreservation medium contains 90% fetal calf serum and 10% cryoprotectant - dimethyl sulfoxide (DMSO) (Serva).
Режим замораживания и отогрева. Клетки в количестве 2·106-3·106 в среде для криоконсервирования разливают в пластиковые ампулы по 1 см3 и помещают на 3 часа в пары жидкого азота (минус 120°С), скорость замораживания при этом составляет ~1° в мин, после чего пробирки опускают в жидкий азот (минус 196°С). Клетки замораживают на 3-5 пассаже in vivo. Восстановление клеток после размораживания: быстрое размораживание в водяной бане при 37°С до полного оттаивания, клетки разводят в 10 мл среды RPMI-1640 с 1 мл лошадиной сыворотки и осаждают центрифугированием при 150 g 10 мин. Жизнеспособность клеток после криоконсервирования составляет (70±5)%.The mode of freezing and heating. Cells in an amount of 2 · 10 6 -3 · 10 6 in a cryopreservation medium are poured into plastic ampoules of 1 cm 3 and placed for 3 hours in a pair of liquid nitrogen (minus 120 ° C), the freezing rate is ~ 1 ° per min then the tubes are dipped in liquid nitrogen (minus 196 ° C). Cells are frozen at passage 3-5 in vivo. Cell recovery after thawing: rapid thawing in a water bath at 37 ° C until completely thawed, the cells are diluted in 10 ml of RPMI-1640 medium with 1 ml of horse serum and precipitated by centrifugation at 150 g for 10 min. Cell viability after cryopreservation is (70 ± 5)%.
Пример 1. Использование штамма РККК (П) 679D.Example 1. The use of strain RKKK (P) 679D.
Штамм РККК (П) 679Д выращивают in vitro до конечной концентрации 1·106-1,5·106 кл в 1 мл среды. Клетки осаждают центрифугированием при 150 g 10 мин и вводят внутрибрюшинно мышам линии BALB/c, предварительно обработанных пристаном, по 1,5·106 клеток в объеме 0,5 мл. После формирования асцитной опухоли осуществляют забор иммуноасцитической жидкости. Клетки осаждают из ИАЖ центрифугированием при 150 g 10 мин и используют для последующего пассажа in vitro и in vivo.Strain RKKK (P) 679D is grown in vitro to a final concentration of 1 · 10 6 -1.5 · 10 6 cells in 1 ml of medium. Cells are pelleted by centrifugation at 150 g for 10 min and injected intraperitoneally to BALB / c mice pretreated with marin, 1.5 × 10 6 cells in a volume of 0.5 ml. After the formation of an ascites tumor, immuno-ascitic fluid is sampled. Cells are precipitated from the IAH by centrifugation at 150 g for 10 min and used for subsequent passage in vitro and in vivo.
Супернатант, содержащий МКА, используют в ИФА для идентификации штаммов Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров, либо применяют в качестве полуфабриката для выделения моноклональных антител путем двукратного осаждения раствором сульфата аммония 45% и 40% насыщения, более пригодных для длительного хранения при температуре минус 20°С, не теряя специфической активности в течение 2 лет (срок наблюдения), которые могут использоваться при разработке иммуноглобулиновых препаратов и тест-систем для лабораторной диагностики кишечного иерсиниоза.The supernatant containing MCA is used in ELISA to identify strains of Y.enterocolitica O3 and O9 of serovars, or is used as a semi-finished product for isolation of monoclonal antibodies by double precipitation with a solution of ammonium sulfate 45% and 40% saturation, more suitable for long-term storage at a temperature of minus 20 ° C, without losing specific activity for 2 years (observation period), which can be used in the development of immunoglobulin preparations and test systems for laboratory diagnosis of intestinal yersiniosis.
Пример 2. Использование продукта штамма.Example 2. The use of the product of the strain.
Для проведения непрямого варианта ИФА в лунки 96-луночного планшета отечественного производства вносят по 100 мкл взвеси выделенной чистой культуры Y.enterocolitica в концентрации 1·109 м.к./мл, приготовленной в забуференном физиологическом растворе (ЗФР), рН 7,2, и помещают в термостат при температуре 37°С на 2 ч, либо выдерживают при 4°С в течение 18-20 ч. Затем в каждую лунку вносят по 150 мкл 0,5% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА) в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS), рН 7,2, и инкубируют при температуре 37°С 30 мин. Лунки трижды отмывают PBS по 200 мкл. Во все лунки планшета вносят МКА (или иммуноасцитическую жидкость), продуцируемые штаммом гибридомы РККК (П) 679Д, в установленном рабочем разведении в объеме 100 мкл и инкубируют при 37°С в течение 2 ч. После этого лунки планшета трижды отмывают PBS и в каждую лунку вносят антитела против иммуноглобулинов мыши, меченные пероксидазой хрена (НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи) в рабочем разведении. Планшет выдерживают при температуре 37°С 1 ч, затем лунки планшета отмывают 6 раз PBS. Во все лунки вносят по 100 мкл раствора хромогена (2,2'-азино-ди-[3-этилбензтиазолинсульфонат]а (ABTS)) и инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Реакцию оценивают визуально по появлению зеленого окрашивания продуктов распада Н2О2 в присутствии хромогена. При необходимости реакцию останавливают добавлением в лунки 3 М NaOH. Положительная реакция свидетельствует о принадлежности идентифицируемого штамма к O3 либо к O9 серовару Y.enterocolitica.To perform an indirect ELISA, 100 μl of a suspension of isolated pure Y.enterocolitica culture at a concentration of 1 · 10 9 m.k./ ml prepared in buffered physiological solution (PBS), pH 7.2, is added to the wells of a 96-well plate of domestic production and placed in a thermostat at a temperature of 37 ° C for 2 hours, or kept at 4 ° C for 18-20 hours. Then, 150 μl of a 0.5% solution of bovine serum albumin (BSA) in phosphate-saline are added to each well buffer solution (PBS), pH 7.2, and incubated at 37 ° C for 30 minutes. Wells are washed three times with 200 μl PBS. MCA (or immuno-ascitic fluid) produced by a strain of hybridoma RKKK (P) 679D is added to all wells of the plate in the established working dilution in a volume of 100 μl and incubated at 37 ° C for 2 hours. After this, the wells of the tablet are washed three times with PBS and in each antibodies are added to the well against mouse immunoglobulins labeled with horseradish peroxidase (NIIEM named after N.F. Gamalei) in working dilution. The tablet is kept at a temperature of 37 ° C for 1 h, then the wells of the tablet are washed 6 times with PBS. 100 μl of a chromogen solution (2,2'-azino-di- [3-ethylbenzothiazolin sulfonate] a (ABTS)) was added to all wells and incubated for 30 min at room temperature. The reaction is evaluated visually by the appearance of green staining of the decomposition products of H 2 O 2 in the presence of a chromogen. If necessary, the reaction is stopped by adding 3 M NaOH to the wells. A positive reaction indicates that the identified strain belongs to O3 or to O9 serovar Y.enterocolitica.
Отличительная особенность заявляемого штамма гибридомы заключается в том, что он продуцирует моноклональные антитела как к O9, так и к O3 сероварам Y.enterocolitica.A distinctive feature of the inventive hybridoma strain is that it produces monoclonal antibodies to both O9 and O3 serovars of Y.enterocolitica.
На основе МКА была сконструирована экспериментальная диагностическая иммуноферментная тест-система, апробированная на 55 штаммах Y.enterocolitica Государственной коллекции патогенных бактерий "Микроб" (г. Саратов). Результаты исследований подтвердили высокую специфичность сконструированной тест-системы (табл.1).Based on the MCA, an experimental diagnostic enzyme immunoassay test system was tested, tested on 55 strains of Y.enterocolitica of the State collection of pathogenic bacteria "Microbe" (Saratov). The research results confirmed the high specificity of the designed test system (table 1).
Таким образом, штамм гибридных культивируемых клеток мыши продуцирует моноклональные антитела к белково-полисахаридному антигену Y.enterocolitica O3 и O9 сероваров, позволяющие идентифицировать штаммы Y.enterocolitica указанных сероваров, наиболее часто выделяемых на европейской территории от больных людей, сельскохозяйственных животных и из объектов внешней среды и представляющих наибольшую эпидемическую опасность среди циркулирующих в природе кишечноиерсиниозных бактерий.Thus, the strain of hybrid cultured mouse cells produces monoclonal antibodies to the protein polysaccharide antigen of Y.enterocolitica O3 and O9 of serovars, allowing identification of Y.enterocolitica strains of these serovars, most often isolated in Europe from sick people, farm animals, and environmental objects and representing the greatest epidemic hazard among enteric bacteria circulating in nature.
Источники информацииSources of information
1. Ценева Г.Я. Иерсиниоз и псевдотуберкулез (Пособие для врачей). - Санкт-Петербург. - 1992. - 58 с.1. Tseneva G.Ya. Yersiniosis and pseudotuberculosis (Manual for doctors). - St. Petersburg. - 1992. - 58 p.
2. Алексеева Л.П., Матяш Е.В., Чемисова О.С., Смоликова Л.М. Моноклональные антитела к Yersinia enterocolitica O9 и их диагностическое значение // Диагностика, лечение и профилактика инф. заболеваний. Биотехнология. Ветеринария. Мат. юбилейной научн. конф., посв. 50-летию Центра военно-технич. проблем биологич. защиты НИИ микробиологии МО РФ (30 апр. - 1 июня 1999 г.). - Екатеринбург, 1999. - С.5-6.2. Alekseeva L.P., Matyash E.V., Chemisova O.S., Smolikova L.M. Monoclonal antibodies to Yersinia enterocolitica O9 and their diagnostic value // Diagnostics, treatment and prevention inf. diseases. Biotechnology. Veterinary Medicine Mat. anniversary scientific Conf. 50th anniversary of the Center for Military Technical. Biological problems. Defense Research Institute of Microbiology of the Ministry of Defense of the Russian Federation (April 30 - June 1, 1999). - Yekaterinburg, 1999. - P.5-6.
3. White P.В. Observation on the polisaccharide complex and variants of Vibrio cholerae // Brit. J. exp. Pathol. - 1936. - V.17. - P.229-234.3. White P.V. Observation on the polisaccharide complex and variants of Vibrio cholerae // Brit. J. exp. Pathol. - 1936. - V.17. - P.229-234.
4. Бахрах Е.Э., Коробкова Е.И., Павлова Л.П. Полисахаридсодержащая фракция чумного микроба как аллерген для выявления активного иммунитета у морских свинок // Тр. Ин-та "Микроб". - Саратов, 1960. - Вып.4. - С.63-65.4. Bahrakh E.E., Korobkova E.I., Pavlova L.P. Polysaccharide-containing fraction of the plague microbe as an allergen for detecting active immunity in guinea pigs // Tr. Inst "Microbe". - Saratov, 1960 .-- Issue 4. - S. 63-65.
+ - наличие реакции
- - отсутствие реакцииNote:
+ - the presence of a reaction
- - lack of reaction
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004107171/13A RU2265051C1 (en) | 2004-03-10 | 2004-03-10 | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l, pkkk(p) 679d - producer of monoclonal antibody with specificity to protein-polysaccharide antigen from yersinia enterocolitica o3 and o9 serovars |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004107171/13A RU2265051C1 (en) | 2004-03-10 | 2004-03-10 | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l, pkkk(p) 679d - producer of monoclonal antibody with specificity to protein-polysaccharide antigen from yersinia enterocolitica o3 and o9 serovars |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004107171A RU2004107171A (en) | 2005-10-10 |
| RU2265051C1 true RU2265051C1 (en) | 2005-11-27 |
Family
ID=35850600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004107171/13A RU2265051C1 (en) | 2004-03-10 | 2004-03-10 | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l, pkkk(p) 679d - producer of monoclonal antibody with specificity to protein-polysaccharide antigen from yersinia enterocolitica o3 and o9 serovars |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2265051C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2358764C1 (en) * | 2008-01-24 | 2009-06-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ) | Method of preparing diagnostic agglutinating serum for pathogenic yersinia strains |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2460788C1 (en) * | 2011-07-28 | 2012-09-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Hybrid cell strain of mus musculus 13f8 animals - producer of monoclonal antibodies specific to capsular f1 antigen yersinia pestis |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2203090C1 (en) * | 2001-12-03 | 2003-04-27 | Смирнов Игорь Владимирович | Method for obtaining diagnostic serum with agglutinins to virulent yersinia (vys) |
-
2004
- 2004-03-10 RU RU2004107171/13A patent/RU2265051C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2203090C1 (en) * | 2001-12-03 | 2003-04-27 | Смирнов Игорь Владимирович | Method for obtaining diagnostic serum with agglutinins to virulent yersinia (vys) |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| АЛЕКСЕЕВА Л.П. и др. Моноклональные антитела к Y.enterocolitica 09 и их диагностическое значение. Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария. Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 50-летию Центра военно-технических проблем биологической защиты НИИ микобиологии МО РФ, 30 апреля - 1 июня 1999 г. Екатеринбург, 1999, с.5-6. * |
| г. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2358764C1 (en) * | 2008-01-24 | 2009-06-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ) | Method of preparing diagnostic agglutinating serum for pathogenic yersinia strains |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2004107171A (en) | 2005-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS62500173A (en) | Monoclonal antibodies and their uses | |
| RU2265051C1 (en) | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l, pkkk(p) 679d - producer of monoclonal antibody with specificity to protein-polysaccharide antigen from yersinia enterocolitica o3 and o9 serovars | |
| RU2113475C1 (en) | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibodies showing specificity to brucella protein preparation of molecular mass 18 and 38 kda | |
| RU2566553C1 (en) | STRAIN OF HYBRID CELLS OF ANIMALS Mus musculus 3F11 - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO BOTULINUS TOXIN TYPE B | |
| RU2663003C1 (en) | Strain of cultivated animal hybrid cells mus musculus-producer of monoclonal antibody to the membrane protein, which is common for tcp + the strains of cholera vibrios of the o1 and o139 serogroups | |
| RU2535982C1 (en) | Strain of cultivated hybrid animal cells mus musculus l cchfv vd-1-producer of monoclonal antibody 4g4/b6 to virus of crimean-congo hemorrhagic fever (cchf) | |
| RU2525663C1 (en) | STRAIN OF HYBRID CULTURED ANIMAL CELLS Mus musculus 2F9-PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC FOR LYSOSTAPHIN AND INHIBITING ITS LYTIC ACTIVITY | |
| RU2425875C1 (en) | CULTIVATED HYBRID CELL STRAIN OF Mus Musculus L ANIMALS - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO LPS OF CHOLERA VIBRIO 0139 SEROGROUP | |
| RU2768838C1 (en) | Strain of hybrid cultured cells mus musculus 365e11 producing monoclonal antibodies to shiga-like toxin type ii | |
| WO1986002355A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| RU2785463C1 (en) | Strain of cultured animal hybrid cells mus. musculus - producer of monoclonal antibodies to the membrane protein common to typical and atypical serogroup 01 cholera vibrios | |
| RU2380413C1 (en) | STRAIN OF HYBRID CULTIVATED ANIMAL CELLS Mus musculus A 6G2-PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO HEAT SHOCK PROTEIN 70 | |
| RU2117042C1 (en) | Strain of cultured hybrid cells of animal mus musculus - producer of monoclonal antibodies to thermostable component of capsule-like substance of meliodosis pathogen | |
| SU1604849A1 (en) | Strain of hybride cultivable mus musculus l. cells producing monoclonal antibodies to bacteria of brucella variety | |
| RU2652885C1 (en) | MUS MUSCULUS HYBRID CULTIVATED ANIMAL CELLS STRAIN α - THE PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO THE CANCER-TESTICULAR ANTIGEN OF THE PERSON GAGE | |
| RU2528868C1 (en) | STRAIN OF CULTIVATED HYBRID CELLS OF ANIMAL MUS MUSCULUS L CCHFV Vd-2-PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODY 1E2/E5 TO VIRUS OF CRIMEAN-CONGO HAEMORRHAGIC FEVER | |
| RU2571208C1 (en) | STRAIN OF HYBRID ANIMAL CELLS Mus musculus 1G7 - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC FOR BOTULINUM TOXIN OF TYPE B | |
| RU2003682C1 (en) | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus muscullus l - a producer of monoclonal antibodies to lambda-light chains of human immunoglobulins | |
| RU2528869C1 (en) | STRAIN OF CULTIVATED HYBRID CELLS OF ANIMAL MUS MUSCULUS L CCHFV Vd-3-PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODY 3H6/F2 TO VIRUS OF CRIMEAN-CONGO HAEMORRHAGIC FEVER | |
| SU1661231A1 (en) | Strain of hybridous cultured mammalian cells mus musculus l, producing monoclonal antibodies for surface protein of cattle coronavirus | |
| RU2425874C1 (en) | CULTIVATED HYBRID CELL STRAIN OF Mus musculus L ANIMALS - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO O-ANTIGENE OF CHOLERA VIBRIO SEROGROUP O1 | |
| RU2117043C1 (en) | Strain of cultured hybrid cells of animal mus musculus - producer of monoclonal antibodies to thermostable antigen which is common for glanders and meliodosis pathogens | |
| SU1666532A1 (en) | Strain of hybridous cultured mammalian cells, mus musculcs l. producing monoclonal antibodies for nucleocapside protein or cattle virus | |
| SU1541254A1 (en) | Strain of hybrid cultivable mus musculus cells used for producing monoclonal antibodies to thermally stable o-antigen of cholera germ | |
| RU2265658C2 (en) | Strain of hybrid cells of animal mus musculus l, 9e2, used in preparing monoclonal antibody to west nile virus protein e of strain wnv/leiv-vig99-27889 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060311 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060311 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20080510 |
|
| RZ4A | Other changes in the information about an invention | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120311 |