RU2263516C2 - Композиция для оплодотворения in vitro - Google Patents
Композиция для оплодотворения in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2263516C2 RU2263516C2 RU2002109794/15A RU2002109794A RU2263516C2 RU 2263516 C2 RU2263516 C2 RU 2263516C2 RU 2002109794/15 A RU2002109794/15 A RU 2002109794/15A RU 2002109794 A RU2002109794 A RU 2002109794A RU 2263516 C2 RU2263516 C2 RU 2263516C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cholest
- composition
- mas
- dimethyl
- solution
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 3
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 239000012265 solid product Substances 0.000 claims abstract description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims abstract 6
- 239000006104 solid solution Substances 0.000 claims abstract 2
- LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 4,4-dimethyl-5alpha-cholesta-8,14,24-trien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC=C21 LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 0.000 claims description 31
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 23
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 23
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 6
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 claims description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Hydroxy-10r.13c-dimethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexyl)-(5tH)-Delta8.14-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AWBZPJQUWZBRII-CXDHQSPESA-N 5alpha-cholesta-8,14-dien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-CXDHQSPESA-N 0.000 claims description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 2
- MCKLJFJEQRYRQT-YGDKQAQQSA-N (8s,9s,10r,13s,14s,17s)-17-[(2s)-2-hydroxy-6-methylheptan-2-yl]-10,13-dimethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C=C2CC(O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@@](C)(O)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 MCKLJFJEQRYRQT-YGDKQAQQSA-N 0.000 abstract 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 abstract 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 abstract 1
- 150000003432 sterols Chemical group 0.000 abstract 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 35
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 2
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 2
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 2
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 108010006578 follitropin alfa Proteins 0.000 description 1
- -1 for example Chemical class 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 1
- 229940057854 gonal f Drugs 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 210000004508 polar body Anatomy 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Предложено: композиция для оплодотворения in vitro, система ее доставки (устройство). Композиция содержит стероид в количестве менее 5% (мас./мас.), а именно: 4,4-диметил-5α-холеста-8,14,24-триен-3β-ол, гемисукцинат 4,4-диметил-5α-холест-8,14,24-триен-3β-ола; 5α -холест-8,14-диен-3β-ол; гемисукцинат 5α-холест-8,14-диен-3β-ола; (20S)-холест-5-ен-3β,20-диол; N-(метионин)амид 3β-гидрокси-4,4-диметил-5α-хола-8,14-диен-24-овой кислоты или холест-5-ен-16β-ол, а также добавку (водорастворимый белок или фосфоглицерид). Система доставки имеет одно углубление или одну полость, содержащую указанную композицию в виде твердого продукта или раствора. Изобретение отличается тем, что композиция стеролов не содержит составных частей, отрицательно влияющих на ооциты, и может растворяться в водной среде без физического воздействия (т.е. нагревания, перемешивания, или обработки ультразвуком). 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 табл.
Description
Настоящее изобретение относится к твердому продукту, который может быть использован в связи с оплодотворением in vitro.
Предпосылки к созданию изобретения
Было обнаружено несколько веществ, активирующих мейоз (в данном тексте указанные вещества обозначены как MAS). Когда MAS находятся в среде, содержащей ооциты, они становятся более способными к оплодотворению. Однако основная проблема, связанная с применением MAS, заключается в том, что они имеют очень низкую растворимость.
Краткое описание сущности изобретения
Одной из целей данного изобретения является разработка композиции, содержащей MAS или их производные, которые могут растворяться в водной среде.
Другой целью изобретения является разработка композиции, содержащей MAS или их производные, которая может растворяться в водной среде без какого-либо физического воздействия, такого как нагревание, перемешивание или обработка ультразвуком.
Подробное описание настоящего изобретения
Растворимость предпочтительных MAS, т.е. FF-MAS, в воде является очень низкой, т.е. приблизительно 20 пикограмм/мл (соответственно 2×10-5 мкг/мл), а в этаноле растворимость значительно выше, т.е. приблизительно 4 мг/мл. Согласно предварительным исследованиям самая высокая растворимость FF-MAS в смеси этанола и воды (1:2,5) составляет приблизительно 0,4 мг/мл. Несколько других MAS имеют подобную низкую растворимость в воде.
Неожиданно было обнаружено, что твердая композиция, содержащая MAS и добавку, хорошо растворяется в воде. Добавки представляют собой компоненты, добавление которых к MAS приводит к такой композиции, которая может быть использована для приготовления водного раствора, содержащего MAS.
Примерами добавок являются водорастворимые белки, такие как сывороточный альбумин, например сывороточный альбумин человека (обозначенный в данном тексте как HSA), необязательно в рекомбинантном виде, ферменты и фосфоглицериды, как, например, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозит.
Предпочтительно, когда композиции согласно настоящему изобретению имеют содержание воды ниже 10%, предпочтительно ниже 5%, более предпочтительно ниже 1% (мас./мас.).
Предпочтительно, когда композиции согласно настоящему изобретению имеют содержание органического растворителя ниже 10%, предпочтительно ниже 5%, более предпочтительно ниже 1% (мас./мас.).
Предпочтительно, когда композиции согласно настоящему изобретению имеют содержание MAS ниже 1%, предпочтительно ниже 0,1%, более предпочтительно ниже 0,05% (мас./мас.).
Предпочтительно, когда композиции согласно настоящему изобретению имеют содержание добавки выше, чем 99%, более предпочтительно выше, чем 99,9%.
Предпочтительными композициями согласно настоящему изобретению являются такие, которые могут быть обработаны водной средой, не содержащей органический растворитель или содержащей его только в низких концентрациях, что приводит к раствору, содержащему MAS. Предпочтительно, когда указанная водные среда содержит менее чем 1%, предпочтительно менее чем 0,5%, более предпочтительно менее чем 0,1% органического растворителя (мас./мас.).
Предпринятые ранее попытки приготовить композиции, удовлетворяющие указанному требованию, оказались неудачными.
В данном тексте термин «вещества, активирующие мейоз» (MAS), означает соединения, которые опосредованно вызывают мейоз ооцитов. Точнее сказать, MAS являются соединениями, при испытании которых в примере 1, описанном ниже, распад зародышевого пузырька (в данном тексте обозначен как GVB), выраженный в процентах, был в значительной степени выше распада в контроле. Предпочтительными MAS являются такие вещества, которые способствуют GVB, составляющему, по крайней мере, 50%, предпочтительно, по крайней мере, 80%. Примерами предпочтительных MAS являются 4,4-диметил-5α-холеста-8,14,24-триен-3β-ол (в данном тексте обозначен как FF-MAS); гемисукцинат 4,4-диметил-5α-холест-8,14,24-триен-3β-ола; 5α-холест-8,14-диен-3β-ол; гемисукцинат 5α-холест-8,14-диен-3β-ола; (20S)-холест-5-ен-3β,20-диол; N-(метионин) амид 3β-гидрокси-4,4-диметил-5α-хола-8,14-диен-24-овой кислоты и холест-5-ен-16β-ол. Следующие примеры MAS упомянуты в WO 96/00235, 96/27658, 97/00884, 98/28323, 98/54965 и 98/55498, точнее сказать, в пункте 1 формулы изобретения.
Один из способов приготовления композиций согласно данному изобретению заключается в том, что смешивают раствор MAS в органическом растворителе, таком как этанол, с водным раствором добавки и после этого оставляют смесь до тех пор, пока растворитель не испарится. Испарение может быть ускорено применением устройства постоянного обдува над продуктом с помощью вакуума или любых других возможных способов удаления растворителя. Товарный продукт может представлять собой систему доставки, имеющую одно углубление или одну полость или более. Эти углубленные полости являются взаимно обозначенными полостями. По крайней мере, одна из этих полостей содержит композицию согласно настоящему изобретению. Подходящий способ заключения твердой композиции в полость включает вначале внесение раствора, содержащего MAS и добавку, в полость и после этого выпаривание раствора. В этом способе остаток после выпаривания, т.е. композиция согласно настоящему изобретению, находится прямо в полости указанного устройства (система доставки).
Поскольку композицию согласно настоящему изобретению предполагается использовать для обработки ооцитов, важным фактором является то, что данная композиция не содержит составных частей, отрицательно влияющих на ооциты.
Один из способов применения композиций согласно настоящему изобретению заключается в растворении композиции в водной среде, такой как вода, и затем, если желательно, добавлении составных частей, которые могут оказывать благоприятное воздействие на созревание ооцитов.
Другим способом применения композиции является растворение ее в среде, которая обычно используется для созревания in vitro.
Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами, которые, однако, не должны истолковываться как ограничивающие объем защиты изобретения. Свойства, раскрытые в описании изобретения и в примерах, в любых их комбинациях, могут быть использованы для осуществления изобретения в его разнообразных видах.
Пример 1
Метод определения того, является ли вещество MAS или нет
Ооциты были получены от недоразвившихся самок мышей (C 57 BL/6J × DBA/2J Fl, Bomholtgaard, Denmark) весом 13-16 грамм, которых содержали при контролируемой температуре (20-22°С), освещении (освещение с 06.00 до 18.00) и относительной влажности (50-70%). Мышам внутрибрюшинно вводили 0,2 мл гонадотропинов (Gonal-F, Serono), содержащих 20 международных единиц (IU) фолликулостимулирующего гормона (FSH), и через 48 часов животных убивали путем сдвига шейных позвонков. Яичники удаляли, и ооциты изолировали в Нх-среду (см. ниже) под стереомикроскопом путем мануального разрыва фолликул, используя пару игл размером 27. Сферические ооциты, обнаруживающие интактный зародышевый пузырек (в тексте обозначен как GV), были разделены на ооциты, окруженные яйценосным бугорком (в данном тексте обозначены как СЕО), и голые ооциты (в данном тексте обозначены как NO) и помещали в α-минимальную поддерживающую essential среду (α-МЕМ без рибонуклеозидов, Gibco BRL, Cat. No. 22561), дополненную 3 мг/мл сывороточного альбумина крупного рогатого скота (BSA, Sigma Cat. No. A-7030), 5 мг/мл сывороточного альбумина человека (HSA, State Serum Institute, Denmark), 0,23 ммоль пирувата (Sigma, Cat. No. S-8636), 2 ммоль глутамина (Flow, Cat. No. 16-801), 100 IU/мл пеницилина и 100 мкг/мл стрептомицина (Flow, Cat №16-700). Эту среду дополняли 3 ммоль гипоксантина (Sigma, Cat. No. H-9377) и обозначали как Нх-среда.
Ооциты промывали три раза в Нх-среде и однородные по размеру ооциты разделяли на группы СЕО и NO. СЕО и NO культивировали в 4-луночных планшетах (Nunclon, Denmark), в которых каждая лунка содержала 0,4 мл Нх-среды и испытуемое соединение в концентрации 10 мкмоль. Одну контрольную лунку (т.е. 35-45 ооцитов культивировали в идентичной среде без добавления испытуемого соединения) всегда содержали в условиях культивирования одновременно с 3 опытными лунками (35-45 ооцитов на лунку с добавленным испытуемым соединением).
Ооциты культивировали в увлажненной атмосфере воздуха, содержащей 5% СО2, в течение 24 часов при 37°С. В конце периода культивирования число ооцитов с GV, GVB и полярными тельцами (в тексте обозначены как РВ) соответственно подсчитывали с помощью стереомикроскопа (Wildt, Leica MZ 12). Процент GVB, обозначенный как процент ооцитов, претерпевших GVB, на общее число ооцитов в указанной лунке, был рассчитан следующим образом:
%GVB=((число GVB + число РВ)/общее число ооцитов) × 100.
Пример 2
Метод определения того, можно ли использовать соединение в качестве добавки в композициях согласно настоящему изобретению или нет
Добавки для композиций, содержащих FF-MAS, характеризуются тем, что:
улучшают растворимость FF-MAS в смеси этанол/вода (1:2,5 об./об.);
способствуют тому, что раствор FF-MAS остается прозрачным после воссоздания композиции в α-МЕМ среде.
Полученный в результате исследований уровень GVB составил, по крайней мере, 50%, предпочтительно 80%, при испытании соединения на ооцитах, полученных от недоразвившихся самок мышей.
Приготовляли насыщенный раствор FF-MAS в этаноле. Смешивали с водным раствором добавки в отношении 1:2,5. Путем визуального осмотра контролировали, чтобы раствор содержал избыточное количество FF-MAS. Перемешивали раствор в течение 24 часов при комнатной температуре. Фильтровали раствор через фильтр с размером пор 0,22 мкм, определяли содержание FF-MAS с помощью ВЭЖХ и рассчитывали растворимость. Переносили 350 мкл раствора в 4-луночный планшет и оставляли выпаривать досуха при комнатной температуре. Добавляли 500 мкл альфа-МЕМ среды (Gibcobal). Если в течение получаса образовывался прозрачный раствор, то композицию испытывали на ооцитах, полученных от недоразвивишихся самок мышей. Полученный в результате исследований уровень GVB составлял, по крайней мере, 50%, предпочтительно 80%, см. пример 1.
Пример 3
Композиция, содержащая сывороточный альбумин человека (HSA)
В данном примере были получены три продукта. Как видно из таблицы, представленной ниже, основной раствор FF-MAS использовали для продукта 1, 2 и 3, содержащего 50, 500 и 3330 мкг/мл соответственно. Для каждого из продуктов основной раствор HSA содержал 20% HSA. Количество указанных используемых основных растворов представлено в таблице. Например, для продукта 1 основной раствор FF-MAS в количестве 400 мкл смешивали с 1000 мкл основного раствора HSA. После смешивания указанных основных растворов растворы были прозрачными и в них не наблюдали выпадение осадка. После перемешивания количество растворов, указанное в таблице, переносили в 4-луночные планшеты (Nuclon, Denmark). Например, для продукта 1 смесь в количестве 350 мкл переносили в планшет. Наконец, растворы выпаривали досуха при комнатной температуре. После выпаривания некоторые из продуктов образовывали опалесцирующую прозрачную пленку в планшетах, другие были невидны для человеческого глаза. Самая высокая концентрация FF-MAS, растворенного в данном примере, составляла 0,95 мг/мл.
Перед использованием 500 мкл альфа-МЕМ среды (Gibcobal) добавляли и получали прозрачный раствор FF-MAS и HSA в течение получаса при комнатной температуре.
| 4-луночный планшет No. 1 | 4-луночный планшет No. 2 | 4-луночный планшет No. 3 | |
| Раствор FF-MAS в этаноле, 50 мкг/мл | 400 мкл | - | - |
| Раствор FF-MAS в этаноле, 500 мкг/мл | - | 400 мкл | - |
| Раствор FF-MAS в этаноле, 3,33 мг/мл | - | - | 450 мкл |
| Раствор HSA в воде, 20% | 1000 мкл | 1000 мкл | 1125 мкл |
| Количество, перенесенное в планшет | 350 мкл | 350 мкл | 525 мкл |
| Соотношение между FF-MAS и HSA | 1:10000 | 1:1000 | 1:150 |
| Внешний вид раствора до выпаривания | Прозрачные бесцветные растворы без осадка | ||
Пример 4
Композиции, содержащие сывороточный альбумин человека (HSA)
Аналогично описанному в предыдущем примере способу растворы FF-MAS в смеси вода/этанол, содержащие HSA, были получены в указанных ниже концентрациях путем простого смешивания при комнатной температуре. После приготовления растворы были прозрачными и осадка не наблюдалось. Растворы были перенесены в 4-луночные планшеты (Nuclon, Denmark). Наконец, растворы выпаривали досуха при комнатной температуре.
Перед использованием 500 мкл альфа-МЕМ среды (Gibcobal) добавляли и в течение получаса при комнатной температуре получали прозрачный раствор FF-MAS и HSA.
Композиции испытывали на ооцитах, полученных от недоразвившихся самок мышей. Уровни GVB, выраженные в процентах, для соответствующей композиции указаны в таблице ниже.
| 4-луночный планшет No. 1 | 4-луночный планшет No. 2 | 4-луночный планшет No. 3 | |
| Раствор FF-MAS в этаноле, 5,22 мкг/мл | 100 мкл | - | - |
| Раствор FF-MAS в этаноле, 26,1 мкг/мл | - | 100 мкл | - |
| Раствор FF-MAS в этаноле, 261 мг/мл | - | - | 100 мкл |
| Раствор HSA в воде, 20% | 250 мкл | 250 мкл | 250 мкл |
| Соотношение между FF-MAS и HSA | 1:10000 | 1:2000 | 1:200 |
| Теоретическое количество FF- MAS на лунку | 0,5 мкг | 2, 5 мкг | 25 мкг |
| % GVB | 72 | 93 | 91 |
Пример 5
Композиции, содержащие сывороточный альбумин человека (HSA)
Аналогично описанному в предыдущем примере способу растворы FF-MAS в смеси вода/этанол, содержащие HSA, были получены в указанных ниже концентрациях путем простого смешивания при комнатной температуре. После приготовления растворы были прозрачными и осадка не наблюдалось. Растворы были перенесены в 4-луночные планшеты (Nuclon, Denmark). Наконец, растворы выпаривали досуха при комнатной температуре.
Перед использованием 500 мкл альфа-МЕМ среды (Gibcoba-l) добавляли и в течение получаса при комнатной температуре получали прозрачный раствор FF-MAS и HSA.
Концентрацию FF-MAS после воссоздания определяли с помощью ВЭЖХ, полученные результаты указаны в таблице ниже.
Claims (8)
1. Композиция, активирующая мейоз ооцитов для оплодотворения in vitro, содержащая стероид и добавку, отличающаяся тем, что активирующие мейоз стероиды содержатся в количестве менее 5% (мас./мас.) и представляют собой 4,4-диметил-5α-холеста-8,14,24-триен-3β-ол, гемисукцинат 4,4-диметил-5α-холест-8,14,24-триен-3β-ола; 5α-холест-8,14-диен-3β-ол; гемисукцинат 5α-холест-8,14-диен-3β-ола; (2OS)-холест-5-ен-3β,20-диол; N-(метионин)амид 3β-гидрокси-4,4-диметил-5α-хола-8,14-диен-24-овой кислоты или холест-5-ен-16β-ол, а добавкой является водорастворимый белок или фосфоглицерид.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что стероидом является 4,4-диметил-5а-холеста-8,14,24-триен-3β-ол.
3. Композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что она может быть использована для приготовления водного раствора.
4. Композиция по п.1, 2 или 3, отличающаяся тем, что представляет собой водный раствор, в котором содержанием стероида составляет, по крайней мере, 0,001 мкг/мл, предпочтительно, по крайней мере, 0,01 мкг/мл, более предпочтительно, по крайней мере, 0,1 мкг/мл, наиболее предпочтительно, по крайней мере, 0,5 мкг/мл.
5. Композиция по пп.1, 2, 3 или 4, отличающаяся тем, что содержание стероида в водном растворе составляет не более чем 0,1 г/мл, предпочтительно не более чем 0,01 г/мл.
6. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что дополнительно содержит органический растворитель в количестве менее чем 0,1%, предпочтительно менее чем 0,05%, наиболее предпочтительное менее чем 0,01%.
7. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что добавкой является сывороточный альбумин человека, необязательно в рекомбинантном виде.
8. Устройство, представляющее собой систему доставки, имеющее одно углубление или одну полость, содержащую композицию в виде твердого продукта или раствора по любому из предшествующих пунктов.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA199901308 | 1999-09-16 | ||
| DKPA199901308 | 1999-09-16 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2002109794A RU2002109794A (ru) | 2003-11-27 |
| RU2263516C2 true RU2263516C2 (ru) | 2005-11-10 |
Family
ID=8103409
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002109794/15A RU2263516C2 (ru) | 1999-09-16 | 2000-09-11 | Композиция для оплодотворения in vitro |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6844313B1 (ru) |
| EP (1) | EP1216059B1 (ru) |
| JP (1) | JP2003509365A (ru) |
| KR (1) | KR100757909B1 (ru) |
| CN (1) | CN1222319C (ru) |
| AT (1) | ATE306942T1 (ru) |
| AU (1) | AU781994B2 (ru) |
| BR (1) | BR0014058A (ru) |
| CA (1) | CA2382908A1 (ru) |
| CZ (1) | CZ2002591A3 (ru) |
| DE (1) | DE60023324T2 (ru) |
| ES (1) | ES2252048T3 (ru) |
| HU (1) | HUP0202630A3 (ru) |
| IL (1) | IL148234A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA02002439A (ru) |
| NO (1) | NO323694B1 (ru) |
| PL (1) | PL202224B1 (ru) |
| RU (1) | RU2263516C2 (ru) |
| UA (1) | UA78183C2 (ru) |
| WO (1) | WO2001019354A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA200201383B (ru) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MXPA01008657A (es) * | 1999-02-26 | 2003-06-24 | Novo Nordisk As | Aumento de la proporcion de implante por esterol que activa la meiosis. |
| RU2263516C2 (ru) | 1999-09-16 | 2005-11-10 | Ново Нордиск А/С | Композиция для оплодотворения in vitro |
| EP1257279A2 (en) * | 2000-02-25 | 2002-11-20 | Schering Aktiengesellschaft | Improvement of implantation rate using ff-mas |
| US6988613B2 (en) | 2001-02-06 | 2006-01-24 | Novo Nordisk A/S | Composition for IVF |
| EP1245572A1 (en) | 2001-03-26 | 2002-10-02 | Schering Aktiengesellschaft | Aminosterol compounds, their use in the preparation of meiosis-regulating medicaments and method for their preparation |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998028323A1 (en) * | 1996-12-20 | 1998-07-02 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
| US5830757A (en) * | 1995-03-06 | 1998-11-03 | Novo Nordisk A/S | Stimulation of Meiosis |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4175074A (en) | 1976-08-23 | 1979-11-20 | Deshmukh Arvind D | Serum-soluble cholesterol compounds and method for their preparation |
| US4751219A (en) | 1985-02-05 | 1988-06-14 | Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek | Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides |
| WO1990003429A1 (en) * | 1988-09-23 | 1990-04-05 | Cetus Corporation | Lipid microemulsions for culture media |
| DE4221880A1 (de) | 1992-07-03 | 1994-01-05 | Alfatec Pharma Gmbh | Feste und flüssige Lösungen von schwer wasserlöslichen Arzneistoffen |
| EP1013270A3 (en) * | 1992-12-02 | 2001-03-28 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Controlled release growth hormone containing microspheres |
| US5716777A (en) | 1994-06-23 | 1998-02-10 | Novo Nordisk A/S | Regulation of meiosis using sterols |
| US6281015B1 (en) * | 1994-12-16 | 2001-08-28 | Children's Medical Center Corp. | Localized delivery of factors enhancing survival of transplanted cells |
| CA2224866A1 (en) | 1995-06-23 | 1997-01-09 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
| GB9625175D0 (en) * | 1996-12-04 | 1997-01-22 | Medi Cult As | Serum-free cell culture media |
| WO1998055498A1 (en) | 1997-06-04 | 1998-12-10 | Akzo Nobel N.V. | 17β-ALLYLOXY(THIO)ALKYL-ANDROSTANE DERIVATIVES FOR THE MODULATION OF MEIOSIS |
| HUP9701554D0 (en) | 1997-09-18 | 1997-11-28 | Human Oltoanyagtermeloe Gyogys | Pharmaceutical composition containing plazma proteins |
| WO1999061010A2 (en) | 1998-05-26 | 1999-12-02 | Schering Aktiengesellschaft | Treatment of infertility with cam-increasing compounds alone or in combination with at least one meiosis-stimulating compound |
| MXPA01008657A (es) * | 1999-02-26 | 2003-06-24 | Novo Nordisk As | Aumento de la proporcion de implante por esterol que activa la meiosis. |
| RU2263516C2 (ru) | 1999-09-16 | 2005-11-10 | Ново Нордиск А/С | Композиция для оплодотворения in vitro |
-
2000
- 2000-09-11 RU RU2002109794/15A patent/RU2263516C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 KR KR1020027003526A patent/KR100757909B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-11 IL IL14823400A patent/IL148234A0/xx unknown
- 2000-09-11 PL PL353968A patent/PL202224B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 CA CA002382908A patent/CA2382908A1/en not_active Abandoned
- 2000-09-11 EP EP00958274A patent/EP1216059B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-11 AT AT00958274T patent/ATE306942T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 MX MXPA02002439A patent/MXPA02002439A/es active IP Right Grant
- 2000-09-11 AU AU69850/00A patent/AU781994B2/en not_active Ceased
- 2000-09-11 JP JP2001522989A patent/JP2003509365A/ja active Pending
- 2000-09-11 HU HU0202630A patent/HUP0202630A3/hu unknown
- 2000-09-11 WO PCT/DK2000/000500 patent/WO2001019354A2/en not_active Ceased
- 2000-09-11 CZ CZ2002591A patent/CZ2002591A3/cs unknown
- 2000-09-11 BR BR0014058-9A patent/BR0014058A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-09-11 DE DE60023324T patent/DE60023324T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-11 ES ES00958274T patent/ES2252048T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-11 CN CNB008128820A patent/CN1222319C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-14 US US09/661,696 patent/US6844313B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-09 UA UA2002032077A patent/UA78183C2/uk unknown
-
2002
- 2002-02-19 ZA ZA200201383A patent/ZA200201383B/en unknown
- 2002-03-15 NO NO20021309A patent/NO323694B1/no not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5830757A (en) * | 1995-03-06 | 1998-11-03 | Novo Nordisk A/S | Stimulation of Meiosis |
| WO1998028323A1 (en) * | 1996-12-20 | 1998-07-02 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| реферат АБД Medline: Grondahl C et al. Meiosis-activating sterol promotes resumption of meiosis in mouse oocytes cultured in vitro in contrast to related oxysterols. Biol Reprod. 1998 May; 58(5): 1297-302. реферат из АБД Medline: Li X et al, Oocyte activation and parthenogenetic development of bovine oocytes following intracytoplasmic sperm injection Zygote. 1999 Aug; 7(3):233-7. АЖГИХИН И.С. Технология лекарств. М.: Медицина, 1975 с.160, 393. W0 97/00883 A1 09.01.1997. W0 98/28431 A1 02.07.1998. реферат из АБД Medline: Byskov AG et al. Meiosis-activating sterols: background, discovery, and possible use. J Mol Med. 1998 Nov-Dec; 76(12):818-23. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2382908A1 (en) | 2001-03-22 |
| MXPA02002439A (es) | 2002-07-30 |
| CN1222319C (zh) | 2005-10-12 |
| HUP0202630A2 (hu) | 2002-12-28 |
| ES2252048T3 (es) | 2006-05-16 |
| CN1373675A (zh) | 2002-10-09 |
| AU6985000A (en) | 2001-04-17 |
| WO2001019354A2 (en) | 2001-03-22 |
| NO20021309D0 (no) | 2002-03-15 |
| HUP0202630A3 (en) | 2004-06-28 |
| UA78183C2 (en) | 2007-03-15 |
| WO2001019354A3 (en) | 2001-06-14 |
| PL202224B1 (pl) | 2009-06-30 |
| KR20020032593A (ko) | 2002-05-03 |
| EP1216059B1 (en) | 2005-10-19 |
| ZA200201383B (en) | 2002-11-27 |
| AU781994B2 (en) | 2005-06-23 |
| KR100757909B1 (ko) | 2007-09-11 |
| ATE306942T1 (de) | 2005-11-15 |
| IL148234A0 (en) | 2002-09-12 |
| BR0014058A (pt) | 2004-03-30 |
| NO20021309L (no) | 2002-03-15 |
| US6844313B1 (en) | 2005-01-18 |
| CZ2002591A3 (cs) | 2002-08-14 |
| JP2003509365A (ja) | 2003-03-11 |
| NO323694B1 (no) | 2007-06-25 |
| DE60023324D1 (de) | 2005-11-24 |
| EP1216059A2 (en) | 2002-06-26 |
| DE60023324T2 (de) | 2006-07-20 |
| PL353968A1 (en) | 2003-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Therien et al. | Major proteins of bovine seminal plasma modulate sperm capacitation by high-density lipoprotein | |
| OIKAWA et al. | Block of hamster fertilization by anti-ovary antibody | |
| EP0509761A1 (en) | Transdermal composition containing selegiline | |
| Klinkspoor et al. | Model bile and bile salts accelerate mucin secretion by cultured dog gallbladder epithelial cells | |
| DD298053A5 (de) | Verfahren zum herstellen einer stabilen zubereitung eines pharmazeutischen peptides | |
| AU2794000A (en) | Treatment of infertility | |
| Wislocki et al. | The cytology, histochemistry and electron microscopy of the granular cells of the metrial gland of the gravid rat | |
| RU2263516C2 (ru) | Композиция для оплодотворения in vitro | |
| Jain et al. | Development of a liposome based contraceptive system for intravaginal administration of progesterone | |
| Fujikura et al. | Progesterone and estradiol regulate sperm hyperactivation and in vitro fertilization success in mice | |
| Richter et al. | Specificity of inhibition by steroids of porcine oocyte maturation in vitro | |
| US20090036384A1 (en) | Increasing pregnancy rates | |
| DE69105114T2 (de) | Methode zur erhöhung der fruchtbarkeit weiblicher säuger. | |
| US6988613B2 (en) | Composition for IVF | |
| Ahmed et al. | Effect of incubation conditions, inhibitors and seminal plasma on protein synthesis in ram spermatozoa | |
| EP1359881A1 (en) | Process and container with low oxygen content and further containing mas | |
| Yokoyama et al. | Some fine-structural findings on the thyroid gland in Apc 1638T/1638T mice that express a C-terminus lacking truncated Apc | |
| Jagiello et al. | A meiotic cytogenetic study in mice of a commonly used tranquilizer reported to concentrate in mammalian follicular fluid | |
| Kayser | The effects of uterine-spermatozoa co-culture on equine uterine protein synthesis and stallion spermatozoal maturation | |
| Richter | A STUDY OF THE REGULATION OF MAMMALIAN OOCYTE MATURATION. | |
| Halis et al. | Could a combined administration of dexamethasone and 3, 5-dimethyl-3′-isopropyl-l-thyronine (DIMIT) be a more effective alternative to dexamethasone alone in the prevention of RDS? | |
| Otto | Development of a protocol for control of gonadal differentiation through sex steroid administration in the Arctic char (Salvelinus alpinus) | |
| Stein | The Effect of Various Chemical Compounds on Golden Hamster Sperm-Egg Interaction In Vitro | |
| McNutt | The influence of oviduct and follicular fluid on bovine spermatozoa during in vitro capacitation | |
| Wininger | Development of a scanning electron microscopic technique for evaluation of oocytes and its utilization in the study of prolactin interaction with porcine zona pellucida |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090912 |