RU2251429C2 - Pharmaceutical composition for treating ischemic insult and method for therapy - Google Patents
Pharmaceutical composition for treating ischemic insult and method for therapy Download PDFInfo
- Publication number
- RU2251429C2 RU2251429C2 RU2002135455/15A RU2002135455A RU2251429C2 RU 2251429 C2 RU2251429 C2 RU 2251429C2 RU 2002135455/15 A RU2002135455/15 A RU 2002135455/15A RU 2002135455 A RU2002135455 A RU 2002135455A RU 2251429 C2 RU2251429 C2 RU 2251429C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- heptapeptide
- patients
- stroke
- drug
- pro
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title abstract description 7
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 18
- AFEHBIGDWIGTEH-AQRCPPRCSA-N semax Chemical group C([C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CNC=N1 AFEHBIGDWIGTEH-AQRCPPRCSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 10
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 48
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 49
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 46
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 43
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 37
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 19
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000007971 neurological deficit Effects 0.000 description 12
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 9
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 8
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 7
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 6
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 6
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 230000034994 death Effects 0.000 description 6
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 6
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 6
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 5
- 210000004004 carotid artery internal Anatomy 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 5
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 5
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 4
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001168 carotid artery common Anatomy 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 4
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 3
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 3
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 3
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 3
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000022540 Consciousness disease Diseases 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010027925 Monoparesis Diseases 0.000 description 2
- 208000019430 Motor disease Diseases 0.000 description 2
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 208000007542 Paresis Diseases 0.000 description 2
- 108700019404 Pro-Gly-Pro- ACTH (4-7) Proteins 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000010513 Stupor Diseases 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004227 basal ganglia Anatomy 0.000 description 2
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 2
- 210000002932 cholinergic neuron Anatomy 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 229940094678 diasorb Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006266 hibernation Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- PGYPOBZJRVSMDS-UHFFFAOYSA-N loperamide hydrochloride Chemical compound Cl.C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(C(=O)N(C)C)CCN(CC1)CCC1(O)C1=CC=C(Cl)C=C1 PGYPOBZJRVSMDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 2
- 230000001777 nootropic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 241000586555 Aulacaspis rosae Species 0.000 description 1
- 208000007774 Broca Aphasia Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010053398 Clonic convulsion Diseases 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 206010015995 Eyelid ptosis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010020802 Hypertensive crisis Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000008457 Neurologic Manifestations Diseases 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 208000014306 Trophic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000141 anti-hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000009426 cardioembolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002566 clonic effect Effects 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012729 immediate-release (IR) formulation Substances 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000011859 neuroprotective therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002664 nootropic agent Substances 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 201000003004 ptosis Diseases 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 102200027050 rs121908278 Human genes 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 231100000216 vascular lesion Toxicity 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к исследованию и применению пептидной последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (гептапептид А) на нейропротекторную активность и созданию фармацевтической композиции с нейропротективным действием. Лекарственное средство на этой основе может быть использовано при различных неврологических заболеваниях, связанных с поражением мозга, при сосудистых поражениях мозга, при прогрессирующих заболеваниях центральной нервной системы в том числе и наследственных.The invention relates to medicine, namely to the study and use of the peptide sequence Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (heptapeptide A) on neuroprotective activity and the creation of a pharmaceutical composition with a neuroprotective effect. A drug on this basis can be used for various neurological diseases associated with brain damage, vascular brain damage, and progressive diseases of the central nervous system, including hereditary ones.
Актуальность разработки различных нейропротекторных средств, средств защиты центральной нервной системы за счет активизации различных метаболических процессов мозга, определяется потребностями современного здравоохранения. Достаточно, например, сказать, что смертность от инсульта в нашей стране вышла на второе место после сердечно-сосудистых заболеваний. Одним из перспективных направлений нейропротекторной терапии в условиях ишемии является усиление нейротрофического обеспечения мозга, что препятствует развитию как апоптозных, так и некротических изменений нейронов.The relevance of developing various neuroprotective agents, means of protecting the central nervous system by activating various brain metabolic processes, is determined by the needs of modern healthcare. It is enough, for example, to say that mortality from stroke in our country came in second place after cardiovascular diseases. One of the promising areas of neuroprotective therapy in conditions of ischemia is the strengthening of the neurotrophic supply of the brain, which prevents the development of both apoptotic and necrotic changes in neurons.
Современные представления о пластичности центральной нервной системы позволяют предполагать значительные возможности для восстановления ее функций, нарушаемых в результате патологических воздействий, таких как травма, инсульт, ишемия и др. Считается, что при данных воздействиях клетки нервной системы претерпевают гибель по механизмам некроза и программированной клеточной смерти (апоптоза). Вокруг некротического очага развивается область, клетки которой входят в состояние апоптоза. Отличительной особенностью апоптоза является его обратимость, что означает возможность восстановления нормального состояния нервных клеток при действии на них так называемых нейропротективных факторов. В настоящее время выделен и изучен ряд таких факторов, защищающих нейроны от повреждающих воздействий, в частности Фактор роста нервов (NGF) и Нейротрофический фактор мозга (BDNF) и другие. Более того, показано увеличение уровня синтеза нейротрофического Фактора мозга вслед за ишемическим повреждением мозга. В связи с этим существует возможность предотвращения последствий патологических воздействий на центральную нервную систему с помощью подобных нейропротективных факторов. Существует, однако, принципиальная сложность их использования в клинической практике, связанная со способом введения данных веществ в мозг, вследствие непроницаемости для них гематоэнцефалического барьера. В связи с этим представляется важным синтез коротких пептидных соединений, которые были бы способны стимулировать синтез нейротрофических факторов в мозге in vivo, особенно после интраназального введения таких пептидных соединений.Modern ideas about the plasticity of the central nervous system suggest significant opportunities for the restoration of its functions that are impaired as a result of pathological effects, such as trauma, stroke, ischemia, etc. It is believed that under these effects, cells of the nervous system undergo death by the mechanisms of necrosis and programmed cell death (apoptosis). Around the necrotic focus, an area develops whose cells enter the state of apoptosis. A distinctive feature of apoptosis is its reversibility, which means the ability to restore the normal state of nerve cells under the influence of the so-called neuroprotective factors. Currently, a number of such factors protecting neurons from damaging effects have been isolated and studied, in particular, Nerve Growth Factor (NGF) and Neurotrophic Brain Factor (BDNF) and others. Moreover, an increase in the level of synthesis of neurotrophic Brain Factor following ischemic brain damage has been shown. In this regard, it is possible to prevent the effects of pathological effects on the central nervous system using similar neuroprotective factors. However, there is a fundamental difficulty in their use in clinical practice, associated with the method of introducing these substances into the brain, due to the impermeability of the blood-brain barrier for them. In this regard, it seems important to synthesize short peptide compounds that would be able to stimulate the synthesis of neurotrophic factors in the brain in vivo, especially after intranasal administration of such peptide compounds.
Известен гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в качестве стимулятора памяти пролонгированного действия (Патент СССР № 939440, С 07 С 103/52, А 61 К 37/02, приоритет от 6 января 1981) [1], который является основой ноотропного средства и фармацевтической композицией ноотропного действия (Патент РФ № 2045958, С 16 А 61 К 38/08, 1994) [2].Known heptapeptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro as a stimulant of long-acting memory (USSR Patent No. 939440, C 07 C 103/52, A 61 K 37/02, priority dated January 6, 1981) [1] , which is the basis of a nootropic agent and a pharmaceutical composition of nootropic action (RF Patent No. 2045958, C 16 A 61 K 38/08, 1994) [2].
Известен способ лечения инсульта с использованием гептапептида А для больных средней тяжести и при тяжелых инсультах в суточной дозе соответственно 9-13 и 15-24 мг (Патент РФ № 2124365, С1 А 61 К 38/08) [3]. Гептапептид А в случае лечения инсульта средней тяжести и при тяжелых инсультах используется в виде 4-5% раствора (Патент РФ № 2124365, С1 А 61 К 38/08). Этот патент является прототипом.A known method for the treatment of stroke using heptapeptide A for moderate patients with severe strokes in a daily dose of 9-13 and 15-24 mg, respectively (RF Patent No. 2124365, C1 A 61 K 38/08) [3]. Heptapeptide A in the case of the treatment of moderate stroke and in severe strokes is used in the form of a 4-5% solution (RF Patent No. 2124365, C1 A 61 K 38/08). This patent is a prototype.
Однако использование 4-5% раствора при вышеуказанных дозах предполагает введение по 1 капле в каждый носовой ход 2 раза в сутки в случае инсульта средней тяжести и по 1 капле 4 раза (или по 2 капли 2 раза) в сутки в случае тяжелого инсульта. Введение в носовой ход одной капли препарата резко снижает эффективность его использования, так как лишь малая часть лекарства смачивает слизистую оболочку носа. Это является главным недостатком прототипа, так как в случае лечения неврологических заболеваний препарат целесообразно вводить по 2-3 капли в каждый носовой ход для лучшего смачивания слизистой оболочки носовой полости через 2-4 часа. Кроме того, предложенный в прототипе состав не определяет фармакологической композиции лекарственного средства, от которой зависит гарантированный срок сохранности препарата.However, the use of a 4-5% solution at the above doses involves the introduction of 1 drop in each nasal passage 2 times a day in case of moderate stroke and 1 drop 4 times (or 2 drops 2 times) per day in case of severe stroke. The introduction into the nasal passage of one drop of the drug dramatically reduces the effectiveness of its use, since only a small part of the drug moistens the nasal mucosa. This is the main disadvantage of the prototype, since in the case of the treatment of neurological diseases, it is advisable to administer 2-3 drops in each nasal passage for better wetting of the nasal mucosa after 2-4 hours. In addition, the composition proposed in the prototype does not determine the pharmacological composition of the drug, on which the guaranteed shelf life of the drug depends.
Техническим результатом, достигаемым при реализации данного изобретения, является возможность создания нового лекарственного препарата для лечения различных патологий мозга (инсульт, ишемии, травмы и т.д.).The technical result achieved by the implementation of this invention is the ability to create a new drug for the treatment of various brain pathologies (stroke, ischemia, trauma, etc.).
Достигается это тем, что известный гептапептид, общей формулы Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro применяется в качестве нейропротекторного средства в следующей фармацевтической композиции:This is achieved by the fact that the known heptapeptide of the general formula Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro is used as a neuroprotective agent in the following pharmaceutical composition:
Гептапептид А, вода дистиллированная и в качестве консервирующего вещества нипагин при следующем соотношении компонентов, г/л:Heptapeptide A, distilled water and nipagin as a preservative in the following ratio of components, g / l:
гептапептид указанной формулы 9,5-10,6heptapeptide of the specified formula 9.5-10.6
нипагин 0,90-1,10nipagin 0.90-1.10
дистиллированная вода до 1 лdistilled water up to 1 l
Следующие примеры подтверждают нейропротекторные свойства гептапептида А, нейропротективные свойства лекарственного средства и фармацевтическую композицию.The following examples confirm the neuroprotective properties of heptapeptide A, the neuroprotective properties of the drug, and the pharmaceutical composition.
Пример 1:Example 1:
Проводили исследование способности вышеприведенной пептидной последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (гептапептид А) увеличивать выживаемость культивируемых нервных клеток после гибернации эмбрионального мозга. Нелинейных белых крыс со сроком беременности 16-18 дней забивали путем углекислотной асфиксии. Из мозга эмбрионов выделяли базальные ядра переднего мозга, которые диссоциировали на отдельные клетки. Полученную клеточную суспензию переносили в культуральную среду MEM/F-12 (1:1), содержащюю 6 г/л D-глюкозы, 25 мг/л инсулина, 100 мг/л трансферрина, 20 нМ прогестерона, 100 нМ путресцина и 30 нМ селенита натрия и высевали на 96-луночные планшеты, предварительно обработанные D-полилизином. Плотность клеток составляла 30-50 тысяч клеток на лунку. После прикрепления клеток к подложке добавляли растворы гептапептида А и Фактора роста нервов (положительный контроль) в культуральной среде указанного состава до конечной концентрации 10 мкМ и 100 нг/мл соответственно. В качестве контроля использовалась среда, не содержащая гептапептид А и Фактор роста нервов. Клетки культивировали в СО2-инкубаторе (5% СO2) при 37° С, затем оценивали количество живых клеток с помощью окрашивания МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-тетразолий-бромид). Гептапептид А и Фактор роста нервов не влияли на выживаемость клеток через 24 часа после начала культивирования при немедленном выделении базальных ядер переднего мозга из эмбрионального мозга. Однако достоверно увеличивали выживаемость при предварительной инкубации выделенного целого мозга в растворе Хэнкса при 4-6° С в течение 24 часов (фиг.1). Таким образом, гептапептид А замедляет гибель части культивируемых клеток базальных ядер переднего мозга, вызванную гибернацией эмбрионального мозга, и проявляет нейропротективный эффект, сравнимый с действием Фактора роста нервов.A study was made of the ability of the above peptide sequence Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (heptapeptide A) to increase the survival of cultured nerve cells after hibernation of the embryonic brain. Nonlinear white rats with a gestational age of 16-18 days were killed by carbon dioxide asphyxiation. The basal nuclei of the forebrain, which dissociated into individual cells, were isolated from the brain of the embryos. The resulting cell suspension was transferred to MEM / F-12 (1: 1) culture medium containing 6 g / L D-glucose, 25 mg / L insulin, 100 mg / L transferrin, 20 nM progesterone, 100 nM putrescine and 30 nM selenite sodium and plated on 96-well plates pretreated with D-polylysine. The cell density was 30-50 thousand cells per well. After the cells were attached to the substrate, solutions of heptapeptide A and Nerve Growth Factor (positive control) were added in the culture medium of the indicated composition to a final concentration of 10 μM and 100 ng / ml, respectively. As control, a medium that did not contain heptapeptide A and nerve growth factor was used. Cells were cultured in a CO 2 incubator (5% CO 2 ) at 37 ° C, then the number of living cells was evaluated by staining with MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl-tetrazolium- bromide). Heptapeptide A and Nerve Growth Factor did not affect cell survival 24 hours after the start of cultivation with immediate release of the basal forebrain nuclei from the embryonic brain. However, the survival rate was significantly increased during preliminary incubation of the isolated whole brain in Hanks solution at 4-6 ° C for 24 hours (Fig. 1). Thus, heptapeptide A slows down the death of part of the cultured cells of the basal forebrain nuclei caused by hibernation of the embryonic brain and exhibits a neuroprotective effect comparable to the action of Nerve Growth Factor.
Пример 2:Example 2:
Проводили исследование способности гептапептида А увеличивать выживаемость культивируемых в течение длительного времени нервных клеток. Культуры получали и культивировали, как описано в примере 1. После прикрепления клеток к подложке добавляли раствор гептапептида А в культуральной среде указанного состава до конечной концентрации 10 мкМ. В качестве контроля использовалась среда, не содержащая гептапептид А. Через 7 дней после начала культивирования клетки фиксировали 4% раствором параформальдегида в фосфатно-солевом буфере и проводили визуализацию холинэргических нейронов с помощью цитохимического окрашивания клеток на ацетилхолинэстеразу согласно методике, приведенной в (Hefti F., Hartikka J., et. Al.Sanchez-Ramos J.//A Dissection and Tissue Culture Manual of the Nervous System./eds.: Shahar A., de Vellis J./Wiley-Liss, New-York. 1989. P.172-182.) [4]. Результаты данных экспериментов приведены на фиг.2. Гептапептид А достоверно увеличивал количество холинэргичесских нейронов.A study was made of the ability of heptapeptide A to increase the survival of cultured nerve cells for a long time. Cultures were prepared and cultured as described in Example 1. After the cells were attached to the substrate, a solution of heptapeptide A in the culture medium of the indicated composition was added to a final concentration of 10 μM. Heptapeptide A-free medium was used as a control. 7 days after the start of cultivation, the cells were fixed with a 4% solution of paraformaldehyde in phosphate-buffered saline and the cholinergic neurons were visualized by cytochemical staining of the cells with acetylcholinesterase according to the procedure described in (Hefti F., Hartikka J., et. Al. Sanchez-Ramos J. // A Dissection and Tissue Culture Manual of the Nervous System./eds .: Shahar A., de Vellis J./ Wiley- Liss, New York. 1989. P .172-182.) [4]. The results of these experiments are shown in figure 2. Heptapeptide A significantly increased the number of cholinergic neurons.
Пример 3:Example 3:
Проводили исследование способности гептапептида А влиять на пролиферацию глиальных клеток. Культуру глиальных клеток базальных ядер переднего мозга крысы получали из новорожденных крыс по стандартной методике. Клетки культивировали в среде MEM с 15% эмбриональной сыворотки (ЭС) в СО2-инкубаторе (5% CO2) при 37° С. Включение [3H]тимидина в ДНК глиальных клеток определяли согласно общепринятой методике. Глиальные клетки высевали на 24-луночные планшеты с плотностью 70 тыс. клеток на лунку, выдерживали 1 день в бессывороточной среде MEM в СО2-инкубаторе (5% СО2) при 37° С, затем добавляли указанные на фиг.2 соединения и [3H]тимидин (1мкКюри/мл) или только [3H]тимидин (контроль). Инкубацию с добавленными соединениями и [3H]тимидином проводили в течение 24 часов при аналогичных условиях. Не было обнаружено достоверного уменьшения или увеличения включения [3H]тимидина в ДНК глиальных клеток (фиг.3), что указывает на отсутствие у гептапептида А способности подавлять или стимулировать пролиферацию глиальных клеток.A study was made of the ability of heptapeptide A to influence the proliferation of glial cells. The glial cell culture of rat forebrain basal nuclei was obtained from newborn rats by a standard technique. Cells were cultured in MEM medium with 15% fetal serum (ES) in a CO 2 incubator (5% CO 2 ) at 37 ° C. The incorporation of [ 3 H] thymidine in glial cell DNA was determined according to a standard technique. Glial cells were plated on 24-well plates with a density of 70 thousand cells per well, kept for 1 day in serum-free MEM medium in a CO 2 incubator (5% CO 2 ) at 37 ° C, then the compounds indicated in FIG. 2 and [ 3 H] thymidine (1 µc Curie / ml) or only [ 3 H] thymidine (control). Incubation with added compounds and [ 3 H] thymidine was performed for 24 hours under similar conditions. There was no significant decrease or increase in the incorporation of [ 3 H] thymidine in the DNA of glial cells (Fig. 3), which indicates that heptapeptide A lacks the ability to suppress or stimulate proliferation of glial cells.
Пример 4:Example 4:
Изучалась способность пептидной последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (гептапептид А) стимулировать синтез нейротрофического фактора выделенного из мозга (BDNF) в гиппокампе мозга крыс in vivo. В работе были использованы самцы крыс линии Вистар, массой 300-350 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария со свободным доступом к воде и пище и 12-ти часовым циклом освещения. Пептид вводили животным интраназально в объеме 100 мкл/кг массы тела животного однократно. Контрольным животным вводили эквивалентный объем дистиллированной воды. Использованные дозы соответствуют тем, которые были эффективны в поведенческих тестах. В каждой группе было по 3 животных. Для определения уровня экспрессии BDNF в отделах мозга гептапептид вводили интраназально в дозах 50 и 250 мкг/кг. Экспериментальных животных декапитировали через 3 и 24 час после введения пептида. Соответствующие отделы мозга (гиппокамп) отделяли и замораживали в жидком азоте. Приготовление экстрактов из выделенных отделов и дальнейшее количественное определение уровня BDNF с помощью иммуноферментного анализа осуществляли согласно протоколу фирмы "Promega" США. Для каждой экспериментальной точки использовали 4 параллели. Достоверность полученных результатов оценивали по критерию Стьюдента с помощью программы Sigma Plot 2.01.The ability of the peptide sequence Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (heptapeptide A) to stimulate the synthesis of neurotrophic factor isolated from the brain (BDNF) in the hippocampus of rat brain was studied in vivo. We used male Wistar rats weighing 300-350 g. The animals were kept in standard vivarium conditions with free access to water and food and a 12-hour lighting cycle. The peptide was administered to animals intranasally in a volume of 100 μl / kg of animal body weight once. Control animals were injected with an equivalent volume of distilled water. The doses used correspond to those that were effective in behavioral tests. In each group there were 3 animals. To determine the level of BDNF expression in the brain, heptapeptide was administered intranasally at doses of 50 and 250 μg / kg. Experimental animals were decapitated 3 and 24 hours after administration of the peptide. The corresponding parts of the brain (hippocampus) were separated and frozen in liquid nitrogen. The preparation of extracts from the selected departments and further quantitative determination of the level of BDNF using enzyme-linked immunosorbent assay was carried out according to the protocol of the company "Promega" USA. For each experimental point, 4 parallels were used. The reliability of the results was evaluated by student's test using the Sigma Plot 2.01 program.
Из результатов, представленных на фиг.4, видно, что гептапептид увеличивает уровень BDNF в гиппокампе мозга экспериментальных животных. Следует отметить, что уровень BDNF увеличивался уже через 3 час после введения гептапептида. Эффект гептапептида выявлялся в гиппокампе и через 24 час после его введения. Повышенный по отношению к контролю уровень BDNF наблюдался как при введении гептапептида в дозе 50, так и 250 мкг/кг веса животного.From the results presented in figure 4, it is seen that the heptapeptide increases the level of BDNF in the hippocampus of the brain of experimental animals. It should be noted that the level of BDNF increased 3 hours after the introduction of the heptapeptide. The effect of the heptapeptide was detected in the hippocampus and 24 hours after its administration. The BDNF level increased relative to the control was observed both with the introduction of a heptapeptide at a dose of 50 and 250 μg / kg of animal weight.
Пример 5:Example 5:
Изучалась эффективность пептидной последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (гептапептид A) in vivo на модели глобальной ишемии мозга у животных с необратимой двусторонней окклюзией общих сонных артерий. Под влиянием гептапептида А достоверно уменьшалась выраженность неврологического дефицита и отмечалась тенденция увеличения выживаемости животных, что связано с нейропротекторным действием препарата (фиг.5).We studied the effectiveness of the peptide sequence Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (heptapeptide A) in vivo in a model of global brain ischemia in animals with irreversible bilateral occlusion of the common carotid arteries. Under the influence of heptapeptide A, the severity of neurological deficit was significantly reduced and there was a tendency to increase animal survival, which is associated with the neuroprotective effect of the drug (Fig. 5).
Рандомизированное слепое исследование было проведено на 40 самцах крыс линии Вистар, весом от 80 до 110 г. Необратимая двусторонняя окклюзия общих сонных артерий осуществлялась под эфирным наркозом с использованием хирургического доступа и одномоментной перевязки артерий шелковой лигатурой. Операция на каждом животном проводилась стандартно и занимала не более 7-10 минут, затем крысы быстро восстанавливались после эфирного наркоза.A randomized blind study was conducted on 40 male Wistar rats weighing from 80 to 110 g. Irreversible bilateral bilateral occlusion of the common carotid arteries was performed under ether anesthesia using surgical access and simultaneous ligation of the arteries with silk ligature. The operation on each animal was carried out as standard and took no more than 7-10 minutes, then the rats quickly recovered after ether anesthesia.
Все исследованные субстанции, приведенные ниже, вводились в виде внутрибрюшинных инъекций (суточная доза в 1 мл раствора). В эксперимент были включены группы животных, получавших гептапептид последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (гептапептид А), церебролизин, физиологический раствор (контроль), а также ложнооперированные животные. В основную группу входили 10 животных, получавших гептапептид А из расчета 300 мкг/кг/сут, дробно через 15, 60, 120 минут и 5 часов после момента окклюзии. Доза и дробное назначение препарата были выбраны на основании клинических и экспериментальных данных, продемонстрировавших ноотропный эффект малых доз гептапептида А (3-30 мкг/кг) и антигипоксическое и нейротрофическое действие высоких доз препарата (150-300 мкг/кг) [5,6,7]. Группу сравнения составили 10 животных, получавших церебролизин. Активным действующим началом препарата являются низкомолекулярные пептиды, обладающие ярко выраженным нейротрофическим эффектом [8]. Церебролизин вводился в дозе 2,5 мл/кг/сут через 15 и 60 минут от момента окклюзии. 10 животных контрольной группы после окклюзии получали физиологический раствор по 0,5 мл через 15 и 60 минут после ишемии. В группе ложнооперированных животных под тем же наркозом был осуществлен хирургический доступ к общим сонным артериям без их перевязки, и внутрибрюшинно вводился физиологический раствор. Оценка неврологического дефицита осуществлялась слепо (без информации о распределении крыс по группам) через каждые 30 минут в течение суток по шкалам балльной оценки: определение Stroke-Index no C.P.McGrow [9] и неврологической шкале Rudolphi et al. [10]. По шкале C.P.McGrow [9] Stroke-Index возрастает с появлением отдельных признаков неврологического дефицита, по шкале Rudolphi et al. [10] неврологический балл изменяется от 9 (норма) до 0 (смерть). Основные признаки неврологического дефицита включали ограничение подвижности животного, птоз (дву- или односторонний), кружение, гиперактивное поведение, вращательные судороги, тонические и клонические судороги, кому со слабым болевым ответом или его отсутствием.All investigated substances listed below were administered as intraperitoneal injections (daily dose in 1 ml of solution). The experiment included groups of animals that received the heptapeptide sequence Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (heptapeptide A), cerebrolysin, saline (control), as well as mock-operated animals. The main group consisted of 10 animals that received heptapeptide A at the rate of 300 μg / kg / day, fractionally after 15, 60, 120 minutes and 5 hours after the moment of occlusion. The dose and fractional purpose of the drug were selected based on clinical and experimental data that demonstrated the nootropic effect of small doses of heptapeptide A (3-30 μg / kg) and the antihypoxic and neurotrophic effect of high doses of the drug (150-300 μg / kg) [5,6, 7]. The comparison group consisted of 10 animals treated with cerebrolysin. The active active principle of the drug is low molecular weight peptides with a pronounced neurotrophic effect [8]. Cerebrolysin was administered at a dose of 2.5 ml / kg / day after 15 and 60 minutes from the moment of occlusion. After occlusion, 10 animals of the control group received 0.5
Для статистического анализа полученных данных по динамике неврологического дефицита использовался дисперсионный факторный анализ ANOVA. Для оценки летальности и отдельных неврологических проявлений применялся тест Fisher.For statistical analysis of the data on the dynamics of neurological deficit, ANOVA analysis of variance was used. To assess mortality and individual neurological manifestations, the Fisher test was used.
В контрольной группе животных в первые 3 часа после окклюзии общих сонных артерий вращательные и клонические судороги были зарегистрированы у 80% животных. В группах животных, получавших гептапептид А и церебролизин, у 40% (р=0,08) и 50% (р=0,17), соответственно.In the control group of animals, in the first 3 hours after occlusion of the common carotid arteries, rotational and clonic convulsions were recorded in 80% of the animals. In groups of animals treated with heptapeptide A and cerebrolysin, 40% (p = 0.08) and 50% (p = 0.17), respectively.
При оценке неврологического дефицита в течение суток выявлено, что введение церебролизина не оказывало заметного влияния на динамику изменения балла по шкалам оценки Mc Grow [9] и Rudolphi et al. [10] при сравнении с контрольной группой (фиг.5). В группе животных, получавших гептапептид А, на протяжении суток сохранялись более низкие значения среднего балла по шкале Mc Grow [8] и более высокие значения по Rudolphi et al. [7] по сравнению с контрольной группой животных и группой животных, получавших церебролизин. Достоверные отличия были найдены в период от 1,5 до 6,5 часов (р=0,03, ANOVA) между контрольной группой и группой животных, получавших гептапептид А.When assessing neurological deficit during the day, it was revealed that the administration of cerebrolysin did not significantly affect the dynamics of the score according to Mc Grow [9] and Rudolphi et al. [10] when compared with the control group (figure 5). In the group of animals treated with heptapeptide A, lower values of the average score on the Mc Grow scale [8] and higher values according to Rudolphi et al. [7] compared with the control group of animals and the group of animals treated with cerebrolysin. Significant differences were found in the period from 1.5 to 6.5 hours (p = 0.03, ANOVA) between the control group and the group of animals treated with heptapeptide A.
При оценке досуточной летальности необходимо отметить, что 50% летальных случаев в контрольной группе и в группе животных, получавших церебролизин, наблюдались в течение первых 7 часов от момента окклюзии, тогда как в группе животных, получавших гептапептид А, до 7 часов не было зарегистрировано ни одного смертельного исхода. 50% летальных случаев в группе животных, получавших гептапептид А, наблюдались в интервале от 8 до 10 часов от момента ишемии. При оценке летальности к концу первых суток после глобальной ишемии мозга получены следующие показатели: 100% животных в контрольной группе, 90% - в группе животных, получавших церебролизин, и 70% - в группе животных, получавших гептапептид А (р>0,05). Средняя продолжительность жизни в контрольной группе составила 9,1±1,7 часа, в группе животных, получавших церебролизин, - 11,5±2,3 часа и в группе животных, получавших гептапептид А, - 14,2±2,5 часа. Значения среднего балла на момент смерти по шкале С.Р. McGrow [7] во всех группах были сопоставимы: 19,4±0,9 в контрольной группе, 19,9±0,5 в группе животных, получавших церебролизин, и 20±1,1 в группе животных, получавших гептапептид А. Необходимо отметить, что к концу суток в группе животных, получавших гептапептид А, средний балл по шкале Mc Grow [7] был на 10 пунктов выше, чем в группе животных, получавших церебролизин, что свидетельствовало о выживании на фоне гептапептида А даже животных с выраженным неврологическим дефицитом.When assessing the daily mortality rate, it should be noted that 50% of fatal cases in the control group and in the group of animals treated with cerebrolysin were observed during the first 7 hours from the moment of occlusion, while in the group of animals treated with heptapeptide A, no one death. 50% of fatal cases in the group of animals treated with heptapeptide A were observed in the range from 8 to 10 hours from the time of ischemia. When assessing mortality by the end of the first day after global cerebral ischemia, the following indicators were obtained: 100% of the animals in the control group, 90% in the group of animals treated with cerebrolysin, and 70% in the group of animals treated with heptapeptide A (p> 0.05) . The average life expectancy in the control group was 9.1 ± 1.7 hours, in the group of animals treated with cerebrolysin, 11.5 ± 2.3 hours, and in the group of animals treated with heptapeptide A, 14.2 ± 2.5 hours . The mean score at the time of death on the S.R. scale McGrow [7] in all groups were comparable: 19.4 ± 0.9 in the control group, 19.9 ± 0.5 in the group of animals treated with cerebrolysin, and 20 ± 1.1 in the group of animals treated with heptapeptide A. note that by the end of the day in the group of animals treated with heptapeptide A, the average score on the Mc Grow scale [7] was 10 points higher than in the group of animals treated with cerebrolysin, which indicated the survival of heptapeptide A even in animals with pronounced neurological deficit.
Проведенные экспериментальные исследования показали, что применение гептапептида А при глобальной ишемии мозга у животных оказывает определенный положительный эффект, уменьшая выраженность неврологического дефицита в течение первых 6,5 часов, при сравнении с контрольной группой и группой животных, получавших церебролизин. Наблюдаемая тенденция увеличения выживаемости животных, удлинения периода до первого смертельного исхода также могут быть обусловлены нейропротекторными свойствами гептапептида А.Experimental studies have shown that the use of heptapeptide A in global brain ischemia in animals has a certain positive effect, reducing the severity of neurological deficit during the first 6.5 hours, when compared with the control group and the group of animals treated with cerebrolysin. The observed tendency to increase animal survival, lengthening the period to the first death can also be due to the neuroprotective properties of heptapeptide A.
Пример 6:Example 6:
Срок хранения препарата “Семакс - 1,0% раствор” определяли методом ускоренного старения. Раствор лекарственной формы препарата, представляющий собой водный раствор гептапептида А (1,0%) с добавлением 0,1% консерванта нипагина, был в стерильных условиях разлит во флаконы с пластмассовой пробкой-пипеткой по 3 мл во флакон. Произведено 3 серии препарата по 75 флаконов в каждой.The shelf life of the drug “Semax - 1.0% solution” was determined by accelerated aging. A solution of the drug dosage form, which is an aqueous solution of heptapeptide A (1.0%) with the addition of 0.1% nipagin preservative, was poured under sterile conditions into bottles with a 3 ml plastic pipette stopper in a vial. Produced 3 series of the drug with 75 vials in each.
Был осуществлен входной контроль препарата по следующим критериям: описание раствора, его цветность, прозрачность, рН, стерильность, определение количественного содержания основного вещества и нипагина. Количественное содержание проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.An input control of the drug was carried out according to the following criteria: solution description, its color, transparency, pH, sterility, quantitative determination of the main substance and nipagin. Quantification was carried out by high performance liquid chromatography.
2 мкл препарата “Семакс-1,0% раствор” анализировали на любом жидкостном хроматографе высокого давления, оснащенном ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором на 210-230 нм и термостатом колонок.2 μl of the preparation “Semax-1.0% solution” was analyzed on any high-pressure liquid chromatograph equipped with an ultraviolet spectrophotometric detector at 210-230 nm and a column thermostat.
Для анализа использовали аналитическую колонку (например, размером 4· 150 мм), заполненную обращенно-фазным (С8, С 16 или C18) сорбентом (типа Nucleosil C8, Диасорб С8Т, Диасорб C16T, Zorbax ODS и др.), с размером зерна 5-7 мкм. Для увеличения срока службы колонки использовали предколонку, заполненную тем же сорбентом. Подвижная фаза - элюент А. Элюент А получали следующим образом: К 670 мл буфера А прибавляли 330 мл метанола для жидкостной хроматографии. Элюент фильтровали через фильтр с размером пор 0.45 мкм. Перед употреблением элюент дегазировали фильтрацией под вакуумом, пропусканием гелия или другим подходящим методом. Срок годности элюента - 1 месяц при комнатной температуре в плотно закрытой таре. Скорость подачи элюента 800 мкл/мин. Хроматографию проводили в следующих условиях: Объем вводимой пробы - 2 мкл.For analysis, we used an analytical column (for example, 4 × 150 mm in size) filled with a reversed-phase (C8, C 16 or C18) sorbent (such as Nucleosil C8, Diasorb C8T, Diasorb C16T, Zorbax ODS, etc.), with a grain size of 5 -7 microns. To increase the life of the column, a pre-column filled with the same sorbent was used. The mobile phase is eluent A. Eluent A was prepared as follows: 330 ml of methanol were added to 670 ml of buffer A for liquid chromatography. The eluent was filtered through a filter with a pore size of 0.45 μm. Before use, the eluent was degassed by filtration under vacuum, passing helium or another suitable method. The shelf life of the eluent is 1 month at room temperature in a tightly closed container. The flow rate of the eluent is 800 μl / min. Chromatography was performed under the following conditions: The volume of the injected sample was 2 μl.
Детектирование на длине волны 210 нм. Температура колонки 35°С. Масштаб регистрации - 2 е.о.п.Detection at a wavelength of 210 nm.
Для определения гептапептида А и нипагина в растворе проводили трехкратный анализ соответствующего раствора. Ориентировочное время удерживания гептапептида А и нипагина в указанных условиях анализа составляет 9,1 мин и 18 мин соответственно. Искомая концентрация гептапептида А и нипагина в растворе (Сi,гепт и Сi,нип) определяется по формулам:To determine heptapeptide A and nipagin in solution, a three-fold analysis of the corresponding solution was performed. The estimated retention time of heptapeptide A and nipagin under the indicated assay conditions is 9.1 min and 18 min, respectively. The desired concentration of heptapeptide A and nipagin in solution (C i, hept and C i, nip ) is determined by the formulas:
Ci,гепт=Ai,гепт · Кгепт/Vi [мг/мл],C i, hept = A i, hept · K hept / V i [mg / ml],
Ci,нип=Ai,нип · Книп/Vi [мг/мл],C i, nip = A i, nip · K nip / V i [mg / ml],
где Аi, гепт и Аi, нип - площади пиков гептапептида А и нипагина на i-й хроматограмме;where A i, hept and A i, nip are the peak areas of heptapeptide A and nipagin in the i-th chromatogram;
К гепт и Книп - средние значения градуировочного коэффициента для гептапептидаK hept and K nip - average values of the calibration coefficient for heptapeptide
А и нипагина, полученные в результате калибровки.A and nipagin obtained by calibration.
Vi - объем введенной пробы, мкл (Vi = 5 мкл).V i - the volume of the injected sample, μl (V i = 5 μl).
Средние значения концентраций гептапептида А и нипагина в препаратеThe average concentrations of heptapeptide A and nipagin in the drug
“Семакс-1,0% раствор”“Semax-1.0% solution”
(Ср,гепт и Сср,нип):(C r, hept and C cf, nip ):
Ci,гепт=Σ (Сi,гепт)/3; Ci,нип=Σ (Сi,нип_/3 [мг/мл].C i, hept = Σ (C i, hept ) / 3; C i, nip = Σ (C i, nip _ / 3 [mg / ml].
Содержание нипагина в препарате должно быть не менее 0,90 и не более 1,10 г/л. Содержание гептапептида А в препарате должно быть не менее 9,5 и не более 10,6 г/л. Значения среднего квадратичного отклонения для гептапептида А и нипагина в серии из трех анализов не должны быть больше чем 0,02 (2%).The content of nipagin in the drug should be at least 0.90 and not more than 1.10 g / l. The content of heptapeptide A in the preparation should be at least 9.5 and not more than 10.6 g / l. The mean square deviation for heptapeptide A and nipagin in a series of three analyzes should not be more than 0.02 (2%).
Образцы препарата “Семакс- 1,0% раствор” (3 серии по 75 флаконов) подвергали ускоренному старению, что достигалось выдерживанием их в термостате при постоянной температуре 60°С в течение определенного срока.Samples of the preparation “Semax-1.0% solution” (3 series of 75 vials) were subjected to accelerated aging, which was achieved by keeping them in a thermostat at a constant temperature of 60 ° C for a certain period.
Метод ускоренного старения для определения срока хранения препарата основан на том, что сохранность веществ при ускоренном старении (хранение в термостате при Т=60° С). Эти сроки составляли 5; 11; 23; 34 и 46 дней, что соответствует 1 мес; 6 мес; 1 год; 1,5 года; 2 года хранения препарата в холодильной камере при Т=8-10° С. По истечении каждого срока ускоренного старения проводилась серия исследований по тем же критериям, что и входной контроль. Количественное содержание гептапептида А и нипагина определяли методом ВЭЖХ в тех же хроматографических условиях, что и при входном контроле препарата.The method of accelerated aging to determine the shelf life of the drug is based on the fact that the safety of substances during accelerated aging (storage in a thermostat at T = 60 ° C). These terms were 5; eleven; 23; 34 and 46 days, which corresponds to 1 month; 6 months 1 year; 1.5 years 2 years of storage of the drug in a refrigerator at T = 8-10 ° C. At the end of each period of accelerated aging, a series of studies was conducted according to the same criteria as the input control. The quantitative content of heptapeptide A and nipagin was determined by HPLC under the same chromatographic conditions as with the input control of the drug.
Использовался метод абсолютной градуировки по стандарту (в данном случае - метод расчета количества вещества по калибровочной таблице, соответствующей хроматограмме образца препарата, который не подвергался ускоренному старению). На основании результатов, полученных при количественном определении гептапептида А и нипагина в установленные сроки ускоренного старения с учетом качественной оценки сохранности препарата по всем необходимым критериям, установлен срок годности для лекарственного препарата “Семакс - 1,0% раствор” - 2 года.The method of absolute calibration according to the standard was used (in this case, the method of calculating the amount of substance according to the calibration table corresponding to the chromatogram of a sample of the drug that did not undergo accelerated aging). Based on the results obtained by the quantitative determination of heptapeptide A and nipagin in the established accelerated aging terms, taking into account the qualitative assessment of the preservation of the drug according to all necessary criteria, the shelf life for the drug “Semax - 1.0% solution” is set to 2 years.
Экспериментальные результаты анализов сохранности лекарственного препарата “Семакс- 1,0% раствор” методом ускоренного старения приведены в таблице 1.The experimental results of the safety analyzes of the drug “Semax-1.0% solution” by accelerated aging are shown in table 1.
Пример 7:Example 7
В данном примере приведены обобщенные результаты клинического использования лекарственного препарата “Семакс- 1,0% раствор” в одной из клиник.This example shows the generalized results of the clinical use of the drug “Semax-1.0% solution” in one of the clinics.
Было обследовано 80 больных (38 мужчин, 42 женщин, средний возраст 68,3±1,98 лет) с острым ишемическим полушарным инсультом. Все пациенты были госпитализированы в клинику в течение первых 12 часов с момента развития инсульта. У 42 пациента было диагностировано острое нарушение мозгового кровообращения в системе левой внутренней сонной артерии, у 38 - в системе правой внутренней сонной артерии.80 patients (38 men, 42 women, average age 68.3 ± 1.98 years) with acute ischemic hemispheric stroke were examined. All patients were hospitalized in the clinic during the first 12 hours after the development of a stroke. 42 patients were diagnosed with acute cerebrovascular accident in the system of the left internal carotid artery, in 38 - in the system of the right internal carotid artery.
Основным этиологическим фактором развития инсульта у 56 (70 %) пациентов явилось сочетание атеросклероза с артериальной гипертонией. У 14 (17,5%) больных инсульт развился на фоне артериальной гипертензии, на высоте гипертонического криза. Сочетание сахарного диабета, атеросклероза и гипертензии наблюдалось в 2 случаях (2,5%), 72 (90%) больных имели признаки ишемической болезни сердца, 16 в прошлом перенесли инфаркт миокарда. У 1 больной острое нарушение мозгового кровообращения развилось на фоне острого инфаркта миокарда (кардиоцеребральный синдром), 22 (27,5%) пациентов имели постоянную форму мерцательной аритмии неревматической природы, у 4 больных инсульт развился на фоне пароксизма мерцания предсердий (5%).The main etiological factor in the development of stroke in 56 (70%) patients was a combination of atherosclerosis with arterial hypertension. In 14 (17.5%) patients, stroke developed on the background of arterial hypertension, at the height of a hypertensive crisis. A combination of diabetes mellitus, atherosclerosis and hypertension was observed in 2 cases (2.5%), 72 (90%) patients had signs of coronary heart disease, 16 had myocardial infarction in the past. In 1 patient, acute cerebrovascular accident developed against the background of acute myocardial infarction (cardiocerebral syndrome), 22 (27.5%) patients had a constant form of atrial fibrillation of non-rheumatic nature, 4 patients developed a stroke against paroxysm of atrial fibrillation (5%).
У всех больных клиническая картина соответствовала локализации очага поражения головного мозга разной степени тяжести. На момент поступления состояние у 44 больных (55%) было средней тяжести, так как в клинической картине превалировали очаговые неврологические нарушения умеренной выраженности. У 36 больных (45%) состояние оценивалось как тяжелое (таблица 2). У этих больных имелись расстройства сознания и другие общемозговые проявления, вегетативно-трофические нарушения, а также признаки грубого неврологического дефекта. Оценка состояния больных осуществлялась по трем взаимообогащающим по информативности клиническим шкалам балльной оценки неврологического дефицита (шкалы - оригинальная (Е.И.Гусев, В.И.Скворцова, 1992), Оргогозо (1986), Скандинавская (1985)) на момент поступления больных, 3-и, 5-е и 21-е сутки инсульта. Это позволило унифицировать критерии тяжести состояния, выраженности общемозговой симптоматики и неврологического дефицита для проведения сравнительного анализа, статистической и корреляционной обработки полученного материала. Сравнительный анализ эффективности терапии проводили на 5-е (в конце острейшего периода) и 21-е (в конце острого периода) сутки инсульта.In all patients, the clinical picture corresponded to the localization of the lesion of the brain with varying severity. At the time of admission, the condition in 44 patients (55%) was of moderate severity, since focal neurological disorders of moderate severity prevailed in the clinical picture. In 36 patients (45%), the condition was assessed as serious (table 2). These patients had impaired consciousness and other cerebral manifestations, vegetative-trophic disorders, as well as signs of a gross neurological defect. Assessment of the condition of patients was carried out according to three mutually enriching clinical information scales for scoring the neurological deficit (scales - original (E.I. Gusev, V.I. Skvortsova, 1992), Orgogozo (1986), Scandinavian (1985)) at the time of admission of patients, 3rd, 5th and 21st day of a stroke. This made it possible to unify the criteria for the severity of the condition, the severity of cerebral symptoms and neurological deficit for comparative analysis, statistical and correlation processing of the obtained material. A comparative analysis of the effectiveness of therapy was performed on the 5th (at the end of the acute period) and 21st (at the end of the acute period) day of a stroke.
Контрольную группу составили 40 больных, которым в остром периоде инсульта проводилась комплексная, максимально унифицированная терапия, направленная на коррекцию нарушений центральной и церебральной гемодинамики, гемореологических показателей, борьбу с отеком мозга. Нейропротективные препараты не применялись. 40 пациентам с первых часов заболевания на фоне комплексной базисной терапии вводили “Семакс-1,0% раствор” по 2 капле каждый носовой ход 5-6 раз в сутки в случае инсульта средней тяжести и по 3 капли в каждый носовой ход 7 раз в сутки при тяжелом инсульте. Это позволило провести оценку эффективности включения лекарственного препарата “Семакс-1,0% раствор” в лечение острого периода полушарного ишемического инсульта, а также уточнить метаболические аспекты патогенеза ишемического инсульта и механизм действия лекарственного препарата. Препарат “Семакс-1,0% раствор” вводили эндоназально в течение 10 первых дней заболевания.The control group consisted of 40 patients who underwent a comprehensive, maximally unified therapy in the acute period of a stroke, aimed at correcting disorders of central and cerebral hemodynamics, hemorheological parameters, and fighting brain edema. Neuroprotective drugs have not been used. From the first hours of the disease, 40 patients received “Semax-1.0% solution”, 2 drops each nasal passage 5-6 times a day in case of moderate stroke and 3 drops in each nasal passage 7 times a day from the first hours of the disease with severe stroke. This allowed us to evaluate the effectiveness of the inclusion of the drug “Semax-1.0% solution” in the treatment of the acute period of hemispheric ischemic stroke, as well as to clarify the metabolic aspects of the pathogenesis of ischemic stroke and the mechanism of action of the drug. The drug "Semax-1.0% solution" was administered endonasally during the first 10 days of the disease.
По этиологическим факторам, особенностям дебюта заболевания, срокам заболевания, возрастному и половому составу все анализируемые группы были сопоставимы.According to the etiological factors, the characteristics of the onset of the disease, the duration of the disease, age and gender composition, all analyzed groups were comparable.
При сопоставлении клинической динамики в группе с применением препарата “Семакс-1,0% раствор” и в контроле было обнаружено достоверное улучшение восстановительных процессов на фоне лечения препаратом “Семакс-1,0% раствор”. У больных со среднетяжелым (р<0,01-0,05) и тяжелым инсультом (р<0,001-0,05). Данные приведены в таблице 3.When comparing the clinical dynamics in the group with the use of the drug “Semax-1.0% solution” and in the control, a significant improvement in recovery processes was detected during treatment with the drug “Semax-1.0% solution”. In patients with moderate (p <0.01-0.05) and severe stroke (p <0.001-0.05). The data are shown in table 3.
У 87,5 % больных, получавших препарат “Семакс-1,0% раствор”, течение инсульта было регредиентным, со стабильным регрессом неврологических нарушений, ни в одном случае не отмечалось прогрессирования инсульта. К концу острого периода инсульта у 84% больных наблюдалось хорошее восстановление нарушенных функций с регрессом двигательных нарушений до минимального монопареза, сохранением минимальных элементов моторной афазии и полным регрессом расстройств чувствительности.In 87.5% of patients receiving the preparation “Semax-1.0% solution”, the course of the stroke was regredient, with a stable regression of neurological disorders, in no case was the progression of a stroke. By the end of the acute period of stroke, 84% of patients had a good restoration of impaired functions with regression of motor disorders to minimal monoparesis, preservation of minimal elements of motor aphasia and complete regression of sensitivity disorders.
При тяжелом инсульте применение в первые часы и дни препарата “Семакс-1,0% раствор” позволило достоверно ускорить регресс не только очаговых, но и общемозговых и вегетативных симптомов. У всех больных, поступивших в состоянии оглушения, к концу 2-х суток вернулось ясное сознание, сознание 4 больных, находившихся в сопоре, ко 2-м суткам вышло на стадию оглушения, только в одном случае сопор сохранялся до конца 3-х суток заболевания. К 5-м суткам инсульта у 78% больных расстройства сознания и менингеальные симптомы регрессировали полностью. Количественная оценка динамики средних значений суммарного клинического балла показала статистически значимое опережение темпов восстановления нарушенных функций на фоне применения препарата “Семакс-1,0% раствор” по всем трем использованным шкалам, при этом различия с контролем были более выраженными, чем в группе больных со средней тяжестью заболевания. Как и в группе инсультов средней тяжести наиболее выраженным и достоверным (р<0,05) было ускорение регресса двигательных нарушений. В группе пролеченных препаратом “Семакс-1,0% раствор” тяжелых больных в 78% случаев определялось регредиентное течение заболевания (в контрольной группе - у 32,0%), у остальных больных течение острого периода инсульта было реммитирующим. В группе с применением препарата “Семакс-1,0% раствор” летальность при тяжелом инсульте составила 8,7%, тогда как в контрольной группе - 22,3% (р=0,07 по критерию Фишера). К концу острого периода у 5% обследованных регистрировалось хорошее восстановление нарушенных функций (в контроле - у 1,3%), у 64% - умеренное ограничение функций (в контроле - у 17,4%), тяжелый очаговый дефект сохранялся у 31% больных (в контроле у 81,3%).In severe stroke, the use of the drug “Semax-1.0% solution” in the first hours and days made it possible to significantly accelerate the regression of not only focal, but also cerebral and autonomic symptoms. In all patients who arrived in a state of stunning, by the end of 2 days, clear consciousness returned, the consciousness of 4 patients who were in stupor reached the stage of stunning by the 2nd day, only in one case the stupor remained until the end of 3 days of illness . By the 5th day of a stroke, 78% of patients with consciousness disorders and meningeal symptoms regressed completely. A quantitative assessment of the dynamics of the average values of the total clinical score showed a statistically significant advance in the rate of restoration of impaired functions on the background of the use of the drug “Semax-1.0% solution” on all three scales used, while the differences with control were more pronounced than in the group of patients with an average the severity of the disease. As in the group of moderate strokes, the most pronounced and reliable (p <0.05) was the acceleration of the regression of motor disorders. In the group of severe patients treated with the Semax-1.0% Solution, in 78% of cases the regredient course of the disease was determined (in the control group - in 32.0%), in the remaining patients the course of the acute period of the stroke was remitting. In the group with the use of the drug “Semax-1.0% solution”, mortality in severe stroke was 8.7%, while in the control group it was 22.3% (p = 0.07 according to Fisher's test). By the end of the acute period, 5% of the examined showed a good restoration of impaired functions (in the control - in 1.3%), in 64% - a moderate restriction of functions (in the control - in 17.4%), a severe focal defect persisted in 31% of patients (in control, 81.3%).
Сопоставление эффективности разных доз препарата “Семакс-1,0% раствор” (фиг.6) выявило в группе больных со средней тяжестью инсульта большую эффективность суточной дозы 12 мг (в среднем 150 мкг/кг) по сравнению с более низкими дозами. В то же время в группе тяжелобольных большая выраженность положительной клинической динамики заболевания имела место при лечении суточной дозой 20 мг (270 мкг/кг).Comparison of the effectiveness of different doses of the drug “Semax-1.0% solution” (Fig.6) revealed in the group of patients with moderate severity of stroke greater efficacy of a daily dose of 12 mg (an average of 150 μg / kg) compared to lower doses. At the same time, in the group of seriously ill patients, a greater degree of positive clinical dynamics of the disease occurred during treatment with a daily dose of 20 mg (270 mcg / kg).
Пример 8:Example 8:
В данном примере приведены обобщенные результаты клинического использования лекарственного препарата “Семакс-1,0% раствор” в другой клинике. Для исследования были отобраны 80 больных (44 мужчин, 36 женщин, средний возраст 69,8±2,04 лет) с острым ишемическим полушарным инсультом, поступивших в клинику в течение первых 12 часов с момента развития инсульта (таблица 4). У 46 больных было диагностировано острое нарушение мозгового кровообращения в системе левой внутренней сонной артерии, у 34 - в системе правой внутренней сонной артерии. Основным этиологическим фактором развития инсульта у 64 (80%) пациентов явилось сочетание атеросклероза с артериальной гипертензией, сочетание сахарного диабета, атеросклероза и гипертензии наблюдалось в 4 случаях (5%), у 8 больных инсульт имел кардиоэмболический характер, пациенты страдали постоянной формой мерцательной аритмии (10%), у 4 больных инсульт развился на фоне пароксизма мерцания предсердий (5%). У всех больных клиническая картина соответствовала корково-подкорковой локализации очага поражения головного мозга разной степени тяжести. На момент поступления состояние у 48 больных (60%) было средней тяжести, в клинической картине превалировали очаговые неврологические нарушения умеренной выраженности, у 32 больных (40%) состояние оценивалось как тяжелое, у этих больных имелись расстройства сознания и другие общемозговые проявления, вегетативно-трофические нарушения, а также признаки грубого неврологического дефекта. Оценка состояния больных осуществлялась по трем взаимообогащающим по информативности клиническим шкалам балльной оценки неврологического дефицита (шкалы - оригинальная (Е.И.Гусев, В.И.Скворцова, 1992), Оргогозо (1986), Скандинавская (1985) на момент поступления больных, 3-и, 5-е и 21-е сутки инсульта. Это позволило унифицировать критерии тяжести состояния, выраженности общемозговой симптоматики и неврологического дефицита для проведения сравнительного анализа, статистической и корреляционной обработки полученного материала. Сравнительный анализ эффективности терапии проводили на 5-е (в конце острейшего периода) и 21-е (в конце острого периода) сутки инсульта.This example summarizes the clinical results of the clinical use of the drug “Semax-1.0% solution” in another clinic. For the study, 80 patients (44 men, 36 women, average age 69.8 ± 2.04 years) with acute ischemic hemispheric stroke who were admitted to the clinic within the first 12 hours from the development of the stroke were selected (table 4). In 46 patients, an acute violation of cerebral circulation in the system of the left internal carotid artery was diagnosed, in 34 - in the system of the right internal carotid artery. The main etiological factor in the development of stroke in 64 (80%) patients was a combination of atherosclerosis with arterial hypertension, a combination of diabetes mellitus, atherosclerosis and hypertension was observed in 4 cases (5%), in 8 patients the stroke had a cardioembolic character, patients suffered from a constant form of atrial fibrillation ( 10%), in 4 patients a stroke developed against a background of paroxysm of atrial fibrillation (5%). In all patients, the clinical picture corresponded to the cortical-subcortical localization of the lesion of the brain with varying severity. At the time of admission, the condition in 48 patients (60%) was moderate, focal neurological disorders of moderate severity prevailed in the clinical picture, in 32 patients (40%) the condition was assessed as severe, in these patients there were impaired consciousness and other cerebral manifestations, vegetative trophic disturbances, as well as signs of a gross neurological defect. Patients were assessed according to three mutually enriching clinical information scales for scoring neurological deficits (original scales (E.I. Gusev, V.I.Skvortsova, 1992), Orgogozo (1986), Scandinavian (1985) at the time of patient admission, 3 On the 5th, 21st and 21st days of the stroke, this made it possible to unify the criteria for the severity of the condition, the severity of cerebral symptoms and neurological deficit for comparative analysis, statistical and correlation processing of the obtained material. Therapy efficacy was performed on the 5th (after the acute period) and 21 (at the end of the acute period) per day stroke.
Контрольную группу составили 40 больных, которым в остром периоде инсульта проводилась комплексная, максимально унифицированная терапия, направленная на коррекцию нарушений центральной и церебральной гемодинамики, гемореологических показателей, борьбу с отеком мозга, без включения нейропротективных препаратов. 40 пациентам с первых часов заболевания на фоне комплексной базисной терапии вводили препарат “Семакс-1,0% раствор” в дозах и по схеме предыдущего примера. Это позволило провести оценку эффективности включения препарата “Семакс-1,0% раствор” в лечение острого периода полушарного ишемического инсульта, а также уточнить метаболические аспекты патогенеза ишемического инсульта и механизм действия препарата. Препарат “Семакс-1,0% раствор” вводили эндоназально в течение 10 первых дней заболевания.The control group consisted of 40 patients who underwent complex, maximally unified therapy in the acute period of a stroke, aimed at correcting disorders of central and cerebral hemodynamics, hemorheological parameters, combating cerebral edema, without including neuroprotective drugs. From the first hours of the disease, 40 patients were given the drug “Semax-1.0% solution” in doses and according to the scheme of the previous example against the background of complex basic therapy. This allowed us to evaluate the effectiveness of the inclusion of the drug “Semax-1.0% solution” in the treatment of the acute period of hemispheric ischemic stroke, as well as to clarify the metabolic aspects of the pathogenesis of ischemic stroke and the mechanism of action of the drug. The drug "Semax-1.0% solution" was administered endonasally during the first 10 days of the disease.
По этиологическим факторам, особенностям дебюта заболевания, срокам заболевания, возрастному и половому составу все анализируемые группы были сопоставимы.According to the etiological factors, the characteristics of the onset of the disease, the duration of the disease, age and gender composition, all analyzed groups were comparable.
Сопоставление клинической динамики в группе с применением препарата “Семакс-1,0% раствор” и в контроле обнаружило достоверное улучшение восстановительных процессов на фоне лечения препаратом “Семакс-1,0% раствор” у больных со среднетяжелым (р<0,01-0,05) и тяжелым инсультом (р<0,001-0,05) (таблица 5).Comparison of clinical dynamics in the group using the drug “Semax-1.0% solution” and in the control revealed a significant improvement in recovery processes during treatment with the drug “Semax-1.0% solution” in patients with moderate (p <0.01-0 , 05) and severe stroke (p <0.001-0.05) (table 5).
При ишемическом инсульте средней тяжести с преобладанием в клинической картине очаговых неврологических симптомов эффективность препарата “Семакс-1,0% раствор” проявлялась с первых суток заболевания и выражалась в общей активизации больных, статистически достоверном ускорении регресса очаговой симптоматики к 5-м и 21 суткам заболевания. У 88% больных, получавших препарат “Семакс-1,0% раствор”, течение инсульта было регредиентным со стабильным регрессом неврологических нарушений, что значительно превышало аналогичный показатель в контрольной группе (55,2%). К концу острого периода инсульта у 80% больных констатировано хорошее восстановление нарушенных функций (до минимального монопареза или рефлекторной асимметрии), причем у 36% пациентов регресс очаговых симптомов был полным (варианты “малого” инсульта). При тяжелом инсульте применение в первые часы и дни препарата “Семакс-1,0% раствор” позволило достоверно ускорить регресс не только очаговых, но и общемозговых и вегетативных симптомов. У всех больных, поступивших в состоянии оглушения, к концу 2-х суток вернулось ясное сознание. К 5-м суткам инсульта у 80% больных расстройства сознания и менингеальные симптомы регрессировали полностью. У 82% больных, леченных препаратом “Семакс-1,0% раствор”, определялось регредиентное течение заболевания (в контрольной группе - у 58%). В группе с применением препарата “Семакс-1,0% раствор” летальность при тяжелом инсульте составила 10%, тогда как в контрольной группе - 28,9% (р=0,07 по критерию Фишера). К концу острого периода у 21% обследованных регистрировалось хорошее восстановление нарушенных функций (в контроле - у 5,1%), у 40% - умеренное ограничение функций (в контроле - у 14,4%), тяжелый очаговый дефект сохранялся у 39% больных (в контроле - у 57,1%).In moderate ischemic stroke with a predominance of focal neurological symptoms in the clinical picture, the effectiveness of the drug “Semax-1.0% solution” was manifested from the first day of the disease and expressed in the general activation of patients, statistically significant acceleration of regression of focal symptoms by the 5th and 21st days of the disease . In 88% of patients receiving the drug “Semax-1.0% solution”, the course of the stroke was regredient with a stable regression of neurological disorders, which significantly exceeded the similar indicator in the control group (55.2%). By the end of the acute period of stroke, 80% of patients showed a good restoration of impaired functions (up to minimal monoparesis or reflex asymmetry), and in 36% of patients the regression of focal symptoms was complete (variants of a "small" stroke). In severe stroke, the use of the drug “Semax-1.0% solution” in the first hours and days made it possible to significantly accelerate the regression of not only focal, but also cerebral and autonomic symptoms. In all patients who arrived in a state of stunning, by the end of 2 days a clear consciousness returned. By the 5th day of a stroke, in 80% of patients, consciousness disorders and meningeal symptoms regressed completely. In 82% of patients treated with the drug "Semax-1.0% solution", the regredient course of the disease was determined (in the control group - in 58%). In the group with the use of the drug “Semax-1.0% solution”, mortality in severe stroke was 10%, while in the control group it was 28.9% (p = 0.07 according to Fisher's test). By the end of the acute period, 21% of the examined showed a good restoration of impaired functions (in the control - in 5.1%), in 40% - a moderate restriction of functions (in the control - in 14.4%), a severe focal defect persisted in 39% of patients (in the control - in 57.1%).
Сопоставление эффективности разных доз препарата “Семакс-1,0% раствор” выявило в группе больных со средней тяжестью инсульта большую эффективность суточной дозы 12 мг (в среднем 150 мкг/кг) по сравнению с более низкими дозами. В то же время в группе тяжелобольных большая выраженность положительной клинической динамики заболевания имела место при лечении суточной дозой 20 мг (270 мкг/кг).Comparison of the effectiveness of different doses of the drug “Semax-1.0% solution” revealed in the group of patients with moderate severity of stroke greater efficacy of a daily dose of 12 mg (an average of 150 μg / kg) compared to lower doses. At the same time, in the group of seriously ill patients, a greater degree of positive clinical dynamics of the disease occurred during treatment with a daily dose of 20 mg (270 mcg / kg).
Вышеприведенные примеры подтверждают нейропротективные свойства пептидной последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и эффективность предложенной фармацевтической композиции.The above examples confirm the neuroprotective properties of the peptide sequence Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) and the effectiveness of the proposed pharmaceutical composition.
ЛитератураLiterature
1. Пономарева-Степная М.А., Незавибатько В.Н., Ашмарин И.П., Каменский А.А., Антонова Л.В. (1982). Патент СССР № 939440, С 07 С 103/52, А 61 К 37/02, приоритет от 6 января 1981.1. Ponomareva-Stepnaya MA, Nezavibatko VN, Ashmarin IP, Kamensky AA, Antonova LV (1982). USSR patent No. 939440, C 07 C 103/52, A 61 K 37/02, priority dated January 6, 1981.
2. Л.А.Андреева, И.П.Ашмарин, А.А.Каменский, Н.Ф.Мясоедов, В.Н.Незавибатько, Т.В.Рясина (1994). Патент РФ № 2045958, С 16 А 61 К 38/08. Приоритет изобретения от 28 марта 1994 г.2. L.A. Andreeva, I.P. Ashmarin, A.A. Kamensky, N.F. Myasoedov, V.N. Nesavibatko, T.V. Ryasina (1994). RF patent No. 2045958, C 16 A 61 K 38/08. Priority of the invention of March 28, 1994
3. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Журавлева Е.Ю., Андреева Л.А., Незавибатько В.Н., Гривенников И.А., Мясоедов Н.Ф. (1999). Патент РФ № 2124365 С1 А 61 К 38/08. Приоритет изобретения от 13 мая 1997 г.3. Gusev E.I., Skvortsova V.I., Zhuravleva E.Yu., Andreeva L.A., Nezavibatko V.N., Grivennikov I.A., Myasoedov N.F. (1999). RF patent No. 2124365 C1 A 61 K 38/08. Priority of the invention of May 13, 1997
4. Hefti F., Hartikka J., Sanchez-Ramos J.//A Dissection and Tissue Culture Manual of the Nervous System./eds.: Shahar A., de Vellis J./Wiley-Liss, New-York. 1989. P.172-182.4. Hefti F., Hartikka J., Sanchez-Ramos J. // A Dissection and Tissue Culture Manual of the Nervous System./eds .: Shahar A., de Vellis J./ Wiley- Liss, New York. 1989. P.172-182.
5. Ашмарин И.П., Незавибатько В.Н., Мясоедов Н.Ф., Каменский А.А., Гривенников И.А., Пономарева-Степная М.А., Андреева Л.А., Каплан А.Я., Кошелев В.Б., Рясина Т.В. (1997). Журнал высшей нервной деятельности. Т. 47, Вып. 2, С.420-430.5. Ashmarin I.P., Nezavibatko V.N., Myasoedov N.F., Kamensky A.A., Grivennikov I.A., Ponomareva-Stepnaya M.A., Andreeva L.A., Kaplan A.Ya ., Koshelev V.B., Ryasina T.V. (1997). Journal of Higher Nervous Activity. T. 47, no. 2, C.420-430.
6. Волков А.В., Заржецкий Ю.В., Постнов А.Ю., Болякина Г.Н., Каменский А.А., Муравьев О.Б., Мишарина Г.В., Геренко А.Н. (1992). Результаты применения регуляторных пептидов при реанимации после остановки сердца в эксперименте. Терминальные состояния и постреанимационная патология организма: патофизиология, клиника, профилактика и лечение. М., Институт общей реаниматологии РАМН. С.69-76.6. Volkov A.V., Zarzhetsky Yu.V., Postnov A.Yu., Bolyakina G.N., Kamensky A.A., Muravyov O. B., Misharina G.V., Gerenko A.N. (1992). The results of the use of regulatory peptides during resuscitation after cardiac arrest in the experiment. Terminal conditions and postresuscitative pathology of the body: pathophysiology, clinic, prevention and treatment. M., Institute of General Reanimatology RAMS. S.69-76.
7. Kaplan A.Ya., Kochetova A.G., Nezavibathko V.N., Rjasina T.V., Ashmarin I.P. Neuroscience Research Communications. (1996). Vol. 19, № 2, P.115-123.7. Kaplan A.Ya., Kochetova A.G., Nezavibathko V.N., Rjasina T.V., Ashmarin I.P. Neuroscience Research Communications. (1996). Vol. 19, No. 2, P.115-123.
8. Windrisch M. et al. Advances in the Biosciences.(1993). Vol. 87.- P. 355-357.8. Windrisch M. et al. Advances in the Biosciences. (1993). Vol. 87.- P. 355-357.
9. Dag K.J.E. Von Lubitz, R.C.-S. Lin et al. Eur J Pharm.(1992). Vol. 219, P.153-158.9. Dag K.J.E. Von Lubitz, R.C.-S. Lin et al. Eur J Pharm. (1992). Vol. 219, P.153-158.
10. Mc Grow P. Arch Neurol. (1977). Vol. 34.- P. 334-336.10. Mc Grow P. Arch Neurol. (1977). Vol. 34.- P. 334-336.
Группы больныхAge (years)
Patient groups
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002135455/15A RU2251429C2 (en) | 2002-12-30 | 2002-12-30 | Pharmaceutical composition for treating ischemic insult and method for therapy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002135455/15A RU2251429C2 (en) | 2002-12-30 | 2002-12-30 | Pharmaceutical composition for treating ischemic insult and method for therapy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2002135455A RU2002135455A (en) | 2004-07-27 |
| RU2251429C2 true RU2251429C2 (en) | 2005-05-10 |
Family
ID=35747098
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002135455/15A RU2251429C2 (en) | 2002-12-30 | 2002-12-30 | Pharmaceutical composition for treating ischemic insult and method for therapy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2251429C2 (en) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2314115C1 (en) * | 2006-04-27 | 2008-01-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО СибГМУ) | Nootropic agent possessing anti-hypoxic activity |
| RU2383619C1 (en) * | 2009-03-12 | 2010-03-10 | Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН (ИМГ РАН) | Method for assessment of neurotrophin genes expression |
| RU2383615C1 (en) * | 2009-03-12 | 2010-03-10 | Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН (ИМГ РАН) | Method of screening pharmacological compounds according to neuroprotective activity |
| RU2429007C2 (en) * | 2005-08-19 | 2011-09-20 | АНАБАСИС С.р.л. | Application of nerve growth factor in eye drops for treatment of central nervous system pathologies such as alzheimer's and parkinson diseases |
| WO2012028965A2 (en) | 2010-08-16 | 2012-03-08 | Градстейн Инвестментс Лимитед | Pharmaceutical composition with antihypoxic neuroprotective, and antiamnesic action and with ability to improve physical efficiency |
| RU2465002C1 (en) * | 2011-08-08 | 2012-10-27 | Градстейн Инвестментс Лимитед | Agent possessing neuroprotective, antiamnestic, antihypoxic, antioxidant and antiischemic activity, and method for preventing and treating acute and chronic disturbed cerebral circulation |
| RU2464977C2 (en) * | 2006-08-23 | 2012-10-27 | Тзе Юнивесити Оф Монтана | Method of reducing demage to nervous cells |
| RU2468813C1 (en) * | 2011-08-08 | 2012-12-10 | Градстейн Инвестментс Лимитед | Agent for prevention and treatment of acute and chronic cerebrovascular disease, use and method of treating |
| RU2584234C1 (en) * | 2015-06-17 | 2016-05-20 | Закрытое акционерное общество "Инновационный научно-производственный центр "Пептоген" | Using preparation "semax" as means of activation of adaptive immunity |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4396762A (en) * | 1981-08-24 | 1983-08-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Heparinase derived anticoagulants |
| US4826827A (en) * | 1979-10-05 | 1989-05-02 | Choay S.A. | Short chained oligosaccharides having biological properties, a process for making the same and the use thereof as drugs |
| RU2045958C1 (en) * | 1994-03-28 | 1995-10-20 | Институт молекулярной генетики РАН | Nootropic drug and pharmaceutical nootropic composition |
| RU2124365C1 (en) * | 1997-05-13 | 1999-01-10 | Институт молекулярной генетики РАН | Method for treating the cases of ischemic insult |
-
2002
- 2002-12-30 RU RU2002135455/15A patent/RU2251429C2/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4826827A (en) * | 1979-10-05 | 1989-05-02 | Choay S.A. | Short chained oligosaccharides having biological properties, a process for making the same and the use thereof as drugs |
| US4396762A (en) * | 1981-08-24 | 1983-08-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Heparinase derived anticoagulants |
| RU2045958C1 (en) * | 1994-03-28 | 1995-10-20 | Институт молекулярной генетики РАН | Nootropic drug and pharmaceutical nootropic composition |
| RU2124365C1 (en) * | 1997-05-13 | 1999-01-10 | Институт молекулярной генетики РАН | Method for treating the cases of ischemic insult |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| М.Д. МАШКОВСКИЙ. Лекарственные средства. Ч.1. - М.: Медицина, 1993, с.131, 132-134. * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2429007C2 (en) * | 2005-08-19 | 2011-09-20 | АНАБАСИС С.р.л. | Application of nerve growth factor in eye drops for treatment of central nervous system pathologies such as alzheimer's and parkinson diseases |
| RU2314115C1 (en) * | 2006-04-27 | 2008-01-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО СибГМУ) | Nootropic agent possessing anti-hypoxic activity |
| RU2464977C2 (en) * | 2006-08-23 | 2012-10-27 | Тзе Юнивесити Оф Монтана | Method of reducing demage to nervous cells |
| RU2383619C1 (en) * | 2009-03-12 | 2010-03-10 | Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН (ИМГ РАН) | Method for assessment of neurotrophin genes expression |
| RU2383615C1 (en) * | 2009-03-12 | 2010-03-10 | Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН (ИМГ РАН) | Method of screening pharmacological compounds according to neuroprotective activity |
| WO2012028965A2 (en) | 2010-08-16 | 2012-03-08 | Градстейн Инвестментс Лимитед | Pharmaceutical composition with antihypoxic neuroprotective, and antiamnesic action and with ability to improve physical efficiency |
| RU2465002C1 (en) * | 2011-08-08 | 2012-10-27 | Градстейн Инвестментс Лимитед | Agent possessing neuroprotective, antiamnestic, antihypoxic, antioxidant and antiischemic activity, and method for preventing and treating acute and chronic disturbed cerebral circulation |
| RU2468813C1 (en) * | 2011-08-08 | 2012-12-10 | Градстейн Инвестментс Лимитед | Agent for prevention and treatment of acute and chronic cerebrovascular disease, use and method of treating |
| RU2584234C1 (en) * | 2015-06-17 | 2016-05-20 | Закрытое акционерное общество "Инновационный научно-производственный центр "Пептоген" | Using preparation "semax" as means of activation of adaptive immunity |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Emili et al. | Treatment with the flavonoid 7, 8-Dihydroxyflavone: a promising strategy for a constellation of body and brain disorders | |
| Ruether et al. | Sustained improvements in patients with dementia of Alzheimer's type (DAT) 6 months after termination of Cerebrolysin therapy | |
| McLoughlin et al. | Muscle pains and biochemical changes following suxamethonium administration after six pretreatment regimens | |
| Li et al. | Elevating sestrin2 attenuates endoplasmic reticulum stress and improves functional recovery through autophagy activation after spinal cord injury | |
| JP5639029B2 (en) | Use of 2,5-dihydroxybenzenesulfonic acid in the manufacture of a medicament for the treatment of vascular dependent diseases such as cancer and psoriasis | |
| RU2251429C2 (en) | Pharmaceutical composition for treating ischemic insult and method for therapy | |
| US6248732B1 (en) | Ophthalmological composition comprising activated vitamin D | |
| Chao et al. | Dendrobium nobile Lindley and its bibenzyl component moscatilin are able to protect retinal cells from ischemia/hypoxia by dowregulating placental growth factor and upregulating Norrie disease protein | |
| Kaur et al. | Efficacy and safety of topical cysteamine in corneal cystinosis: a systematic review and meta-analysis | |
| MEYER et al. | Hippocampal acetylcholine increases during eyeblink conditioning in the rabbit | |
| US20230285468A1 (en) | Effects of cell-free fat liquid extract on macrophage polarization modulation and disease treatment | |
| US20250345344A1 (en) | Novel nrf2 activator and use thereof | |
| RU2307654C2 (en) | 7-hydroxyepiandrosteron with neuroprotective activity | |
| KR102773595B1 (en) | Composition for senomorphics or preventing skin aging | |
| Li et al. | Effects of l-dopa methyl ester on visual cortex injury induced by amblyopia and its underlying mechanism | |
| EA022275B1 (en) | USE OF PINCEMBRIN RACEMATS FOR OBTAINING MEDICINES FOR THE TREATMENT OF STROKE | |
| EP4173630A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising stem cell-conditioned medium and exosome isolated therefrom as active ingredient for prevention or treatment of ocular disease | |
| KR100535266B1 (en) | Scrophularia buergeriana extract with anti-aging activity and a composition containing the extract | |
| US9833424B2 (en) | Application of fluoxetine to treatment of depigmentation diseases | |
| CN106176696A (en) | Asaricin or the purposes in preparation promotes cell proliferation of nerve cord medicine of the material containing asaricin | |
| EP3811948B1 (en) | Glycosides for use in preventing and treating diabetic complications | |
| Hagino et al. | Vascular change of hippocampal capillary is associated with vascular change of retinal capillary in aging | |
| CN107890469A (en) | A kind of biological active constituents from natural medicines composition of anti-cerebral ischemia reperfusion injury and preparation method and application | |
| CN108969512A (en) | A pharmaceutical composition of R-fluoxetine or racemic fluoxetine salt type and its application | |
| Jia et al. | Edaravone promotes motoneuron survival and functional recovery after brachial plexus root avulsion and reimplantation in rats: Involvement of SIRT1/TFEB pathway |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20051021 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| QZ41 | Official registration of changes to a registered agreement (patent) |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20051021 Effective date: 20150811 |