[go: up one dir, main page]

RU2123855C1 - Method of preparing 20-hydroxyecdysone from an ecdysteroids mixture - Google Patents

Method of preparing 20-hydroxyecdysone from an ecdysteroids mixture Download PDF

Info

Publication number
RU2123855C1
RU2123855C1 RU96119887A RU96119887A RU2123855C1 RU 2123855 C1 RU2123855 C1 RU 2123855C1 RU 96119887 A RU96119887 A RU 96119887A RU 96119887 A RU96119887 A RU 96119887A RU 2123855 C1 RU2123855 C1 RU 2123855C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
ecdysone
sorbent
mixture
ecdysteroids
hydroxyecdysone
Prior art date
Application number
RU96119887A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU96119887A (en
Inventor
Л.И. Алексеева
В.В. Володин
В.Г. Лукша
Original Assignee
Институт биологии Коми Научного центра Уральского отделения РАН
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт биологии Коми Научного центра Уральского отделения РАН filed Critical Институт биологии Коми Научного центра Уральского отделения РАН
Priority to RU96119887A priority Critical patent/RU2123855C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2123855C1 publication Critical patent/RU2123855C1/en
Publication of RU96119887A publication Critical patent/RU96119887A/en

Links

Landscapes

  • Epoxy Compounds (AREA)

Abstract

FIELD: pharmaceutical industry. SUBSTANCE: invention relates to methods of isolation of biologically active substances from plant raw. For preparing 20-hydroxyecdysone from ecdysone a mixture of ecdysteroids in water is passed through hydrophobic sorbents up to saturated capacity by ecdysone in eluate at inlet and outlet from sorbent. Then aqueous solution of organic solvents are eluted through a sorbent layer. Solvent is evaporated, products are purified by HPLC-chromatography or recrystallization. EFFECT: increased output of process, retained stage numbers. 4 ex

Description

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и биотехнологии, а именно к способам выделения биологически активных веществ из растительного сырья, в частности к технологии получения индивидуальных фитоэкдистероидов из их смеси. The invention relates to the pharmaceutical industry and biotechnology, and in particular to methods of isolating biologically active substances from plant materials, in particular to a technology for producing individual phytoecdysteroids from a mixture thereof.

Известен способ получения экдизона из смеси экдистероидов, выделенных из растения рода Serratula, который осуществляется путем нанесения смеси экдистероидов на хроматографическую колонку с оксидом алюминия, последующего элюирования смесью органических растворителей, выпарки и перекристаллизации (1). A known method of producing ecdysone from a mixture of ecdysteroids isolated from a plant of the genus Serratula, which is carried out by applying a mixture of ecdysteroids to a chromatographic column with aluminum oxide, followed by elution with a mixture of organic solvents, evaporation and recrystallization (1).

Недостатками указанного способа являются низкая производительность процесса, использование больших объемов органических растворителей и длительность. The disadvantages of this method are the low productivity of the process, the use of large volumes of organic solvents and the duration.

Известен также способ получения экдизона из смеси экдистероидов, выделенных из растения рода Serratula, принятый нами за прототип, который заключается в экстракции экдистероидсодержащего сырья, сорбции водного экстракта на гидрофобных сорбентах, десорбции различными растворителями, выпарки, перекристаллизации и препаративном разделении методом ВЭЖХ-хроматографии на индивидуальные 20-гидроксиэкдизон и экдизон (2). There is also a method of producing ecdysone from a mixture of ecdysteroids isolated from a plant of the genus Serratula, which we adopted as a prototype, which consists in extraction of ecdysteroid-containing raw materials, sorption of an aqueous extract on hydrophobic sorbents, desorption with various solvents, evaporation, recrystallization and preparative separation by individual HPLC chromatography 20-hydroxyecdysone and ecdysone (2).

Недостатками указанного способа являются низкая производительность процесса, а соответственно длительность и трудоемкость. The disadvantages of this method are the low productivity of the process, and accordingly, the duration and complexity.

Задачей предлагаемого изобретения является увеличение производительности процесса при сохранении числа операций по сравнению с прототипом. The task of the invention is to increase the productivity of the process while maintaining the number of operations compared with the prototype.

В этом состоит технический результат, находящийся в причинно-следственной связи с существенными признаками. This is the technical result, which is in a causal relationship with the essential features.

Существенными признаками предлагаемого изобретения являются непрерывность элюирования водного раствора экдистероидов через гидрофобный сорбент до достижения предельной емкости по экдизону, которое контролируется достижением равенства концентрации экдизона в водном растворе на входе и на выходе из сорбента. The essential features of the present invention are the continuity of elution of an aqueous solution of ecdysteroids through a hydrophobic sorbent until the maximum capacity for ecdysone is reached, which is controlled by the achievement of equality of the concentration of ecdysone in the aqueous solution at the inlet and outlet of the sorbent.

Непрерывность элюирования водного раствора экдистероидов через гидрофобный сорбент до выравнивания концентрации экдизона в растворе на входе и выходе из сорбента позволяет повысить производительность процесса в три и более раз. Массовая доля экдизона по сравнению с массовой долей компонента 20-гидроксиэкдизона в смеси фитоэкдистероидов из растений рода Serratula низка. Содержание 20-гидроксиэдизона составляет 76%, содержание экдизона 14%. Поэтому для накопления минора экдизона в значительных количествах согласно прототипу необходимо многократное повторение цикла получения экдизона (сорбция, десорбция, выпарка, перекристаллизация, препаративное разделение методом ВЭЖХ). Изменение режима операции сорбции в предлагаемом способе (проведение процесса сорбции экдистероидов из водного раствора не до достижения предельной емкости по 20-гидроксиэкдизону, которое контролируется проскоком 20-гидроксиэкдизона в элюате на выходе из сорбента, что соответствует прототипу, а до достижения предельной емкости сорбента по экдизону, которое контролируется равенством концентрации экдизона в водном растворе на входе и на выходе из сорбента) позволяет одновременно с процессом сорбции осуществлять концентрирование экдизона непосредственно в слое сорбента и тем самым повысить в 3 и более раз производительность процесса. The continuity of elution of an aqueous solution of ecdysteroids through a hydrophobic sorbent until the concentration of ecdysone in the solution at the inlet and outlet of the sorbent is equalized allows to increase the productivity of the process by three or more times. The mass fraction of ecdysone compared to the mass fraction of the component 20-hydroxyecdysone in the mixture of phytoecdysteroids from plants of the genus Serratula is low. The content of 20-hydroxyedisone is 76%, the content of ecdysone is 14%. Therefore, for the accumulation of minor ecdysone in significant quantities according to the prototype, a multiple repetition of the ecdysone production cycle (sorption, desorption, evaporation, recrystallization, preparative separation by HPLC) is necessary. Changing the mode of sorption operation in the proposed method (the process of sorption of ecdysteroids from an aqueous solution does not reach the maximum capacity for 20-hydroxyecdysone, which is controlled by the slip of 20-hydroxyecdysone in the eluate at the outlet of the sorbent, which corresponds to the prototype, and until the maximum capacity of the sorbent for ecdysone is reached , which is controlled by the equality of the concentration of ecdysone in the aqueous solution at the inlet and at the outlet of the sorbent) allows the concentration of ecdiso to be carried out simultaneously with the sorption process directly in the sorbent layer and thereby increase the productivity of the process by 3 or more times.

Другие миноры экдистероидной смеси, близкие по гидрофобности к экдизону, например 2-дезокси-20-гидроксиэкдизон, 3-дезоксиэкдизон ацетаты и т.п., аналогично экдизону также концентрируются в описанных условиях и могут быть получены этим же способом. Other minors of the ecdysteroid mixture, which are similar in hydrophobicity to ecdysone, for example 2-deoxy-20-hydroxyecdysone, 3-deoxyecdysone acetates and the like, are similarly concentrated in ecdysone under the described conditions and can be obtained in the same way.

Способ осуществляется следующим образом. Смесь экдистероидов, полученная из растительного сырья растения рода Serratula, растворяется в дистиллированной воде. Полученный водный раствор экдистероидов непрерывно пропускают через слой гидрофобного сорбента (например, диасорба, диапака, полисорба, активированного угля) до тех пор, пока не будет достигнута предельная емкость по экдизону, которая контролируется равенством концентрации экдизона в растворе на входе и выходе. Затем через слой элюируют 5 - 85%-ный водный раствор органического растворителя. В качестве органических растворителей используют метанол, этанол, ацетон, смесь этилацетата и этанола и др. Растворитель упаривают, а сырой продукт очищают ВЭЖХ-хроматографией либо перекристаллизацией. The method is as follows. A mixture of ecdysteroids obtained from plant material of a plant of the genus Serratula is dissolved in distilled water. The resulting aqueous solution of ecdysteroids is continuously passed through a layer of a hydrophobic sorbent (e.g., diasorb, diapak, polysorb, activated carbon) until the maximum ecdysone capacity is reached, which is controlled by the equality of the concentration of ecdysone in the solution at the input and output. Then a 5 - 85% aqueous solution of an organic solvent is eluted through the layer. As organic solvents, methanol, ethanol, acetone, a mixture of ethyl acetate and ethanol, etc. are used. The solvent is evaporated, and the crude product is purified by HPLC chromatography or recrystallization.

Пример 1. Example 1

10 г экдистероидной фракции, полученной из растения Serratula coronata, содержащей 1.4 г экдизона, 7.65 г 20-гидроксиэкдизона, растворяют в 5 л дистиллированной воды. В делительную воронку загружают 50 г сорбента ДИАСОРБ C16 - T/130 с химически привитыми алкильными группами (СП "БиоХимМак"). Через слой сорбента пропускают 5 л раствора экдистероидов в воде. Процесс осуществляют до равенства концентраций экдизона на входе и выходе. Десорбцию проводят 0.8 л 60%-ного метанола. Водный элюат упаривают. Получают 0.57 г чистого 20-гидроксиэкдизона. 10 g of the ecdysteroid fraction obtained from the plant Serratula coronata containing 1.4 g of ecdysone, 7.65 g of 20-hydroxyecdysone are dissolved in 5 l of distilled water. 50 g of the sorbent DIASORB C16 - T / 130 with chemically grafted alkyl groups (JV "BioChemMac") are loaded into a separatory funnel. A 5 L solution of ecdysteroids in water is passed through a sorbent layer. The process is carried out until the equal concentration of ecdysone at the input and output. Desorption is carried out by 0.8 l of 60% methanol. The aqueous eluate is evaporated. Obtain 0.57 g of pure 20-hydroxyecdysone.

Водно-метанольный элюат упаривают. Получают смесь экдистероидов, содержащую 2.17 г 20-гидроксиэкдизона и 1.27 г экдизона. Из полученной смеси выделяют экдизон методом ВЭЖХ согласно прототипу. The methanol-water eluate was evaporated. A mixture of ecdysteroids is obtained containing 2.17 g of 20-hydroxyecdysone and 1.27 g of ecdysone. Ecdysone is isolated from the resulting mixture by HPLC according to the prototype.

Пример 2. Example 2

Экдистероидную фракцию растворяют в воде и пропускают через ДИА-СОРБ-С16 аналогично примеру 1 за исключением того, что вместо водно-метанольного раствора используют 80%-ный ацетон. Водно-ацетоновый элюат упаривают и осуществляют препаративное разделение методом ВЭЖХ полученного продукта. Получают 0.9 г экдизона (степень чистоты 97%) и 2.4 г 20-гидроксиэкдизона (степень чистоты 96%). The ecdysteroid fraction is dissolved in water and passed through DIA-SORB-C16 as in Example 1, except that 80% acetone is used in place of the aqueous methanol solution. The water-acetone eluate is evaporated and preparative separation by HPLC of the obtained product is carried out. 0.9 g of ecdysone (purity 97%) and 2.4 g of 20-hydroxyecdysone (96% purity) are obtained.

Пример 3. Example 3

Экдистероидную фракцию растворяют в воде и пропускают через сорбент аналогично примеру 1 за исключением того, что в качестве сорбента используют активированный уголь. Затем через сорбент последовательно пропускают 1.5 л 10%-ного раствора этанола в воде и 1.5 л 70% водно-этанольного раствора. Водно-этанольные элюаты раздельно упаривают. Остатки перекристаллизовывают из смеси этилацетат-метанол (4: 1). Получают два продукта: экдизон и 20-гидроксиэкдизон. Из элюата 10% этанол-вода - 1.8 г 20-гидроксиэкдизона со степенью чистоты 94%, а из элюата 70% этанол-вода - 0.7 г экдизона со степенью чистоты 93%. The ecdysteroid fraction is dissolved in water and passed through a sorbent as in Example 1, except that activated carbon is used as a sorbent. Then 1.5 l of a 10% solution of ethanol in water and 1.5 l of a 70% aqueous-ethanol solution are successively passed through the sorbent. Water-ethanol eluates are separately evaporated. The residues were recrystallized from ethyl acetate-methanol (4: 1). Two products are obtained: ecdysone and 20-hydroxyecdysone. From the eluate 10% ethanol-water, 1.8 g of 20-hydroxyecdysone with a purity of 94%, and from the eluate 70% ethanol-water, 0.7 g of ecdysone with a purity of 93%.

Пример 4. Example 4

Экдистероидную фракцию растворяют в воде и пропускают через сорбент аналогично примеру 1 за исключением того, что в качестве сорбента используют Полисорб-1. Затем через сорбент пропускают 1.2 л смеси этилацетата и этанола (1: 5). Элюат упаривают. Получают 1.5 г 20-гидроксиэкдизона (степень чистоты 96%) и 0.8 г экдизона (степень чистоты 97%). The ecdysteroid fraction is dissolved in water and passed through a sorbent as in Example 1, except that Polysorb-1 is used as the sorbent. Then 1.2 l of a mixture of ethyl acetate and ethanol (1: 5) is passed through the sorbent. The eluate is evaporated. Obtain 1.5 g of 20-hydroxyecdysone (purity 96%) and 0.8 g ecdysone (purity 97%).

Данное изобретение позволяет увеличить производительность процесса при сохранении числа операций по сравнению с прототипом. This invention allows to increase the productivity of the process while maintaining the number of operations compared with the prototype.

Источники информации
1. Авт. свид. N 1146050, МКИ A 61 K 35/78, опубл. 23.03.85.
Sources of information
1. Auth. testimonial. N 1146050, MKI A 61 K 35/78, publ. 03/23/85.

2. Патент N 2063765, МКИ A 61 K 35/78, опубл. 1996 г. 2. Patent N 2063765, MKI A 61 K 35/78, publ. 1996 year

Claims (1)

Способ получения 20-гидроксиэкдизона и экдизона из смеси экдистероидов, включающий сорбцию из водного раствора смеси экдистероидов через гидрофобные сорбенты и десорбцию растворителем, отличающийся тем, что сорбцию проводят непрерывно до достижения предельной емкости сорбента по экдизону, определяемой по выравниванию концентрации экдизона в растворе на входе и выходе из сорбента. A method of producing 20-hydroxyecdysone and ecdysone from a mixture of ecdysteroids, comprising sorption of an ecdysteroids mixture from an aqueous solution through hydrophobic sorbents and desorption with a solvent, characterized in that sorption is carried out continuously until the maximum capacity of the sorbent for ecdysone is determined, which is determined by equalizing the concentration of ecdysone in the solution at the inlet and exit from the sorbent.
RU96119887A 1996-10-03 1996-10-03 Method of preparing 20-hydroxyecdysone from an ecdysteroids mixture RU2123855C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU96119887A RU2123855C1 (en) 1996-10-03 1996-10-03 Method of preparing 20-hydroxyecdysone from an ecdysteroids mixture

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU96119887A RU2123855C1 (en) 1996-10-03 1996-10-03 Method of preparing 20-hydroxyecdysone from an ecdysteroids mixture

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2123855C1 true RU2123855C1 (en) 1998-12-27
RU96119887A RU96119887A (en) 1999-02-10

Family

ID=20186281

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU96119887A RU2123855C1 (en) 1996-10-03 1996-10-03 Method of preparing 20-hydroxyecdysone from an ecdysteroids mixture

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2123855C1 (en)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2151608C1 (en) * 1998-10-02 2000-06-27 Институт нефтехимии и катализа АН республики Башкортостан и Уфимского научного центра РАН Method of preparing ecdysteroids and ecdysterone concentrate from plant raw
RU2151609C1 (en) * 1998-10-02 2000-06-27 Институт нефтехимии и катализа АН республики Башкортостан и Уфимского научного центра РАН Method of preparing ecdysteroid concentrate from plant raw
RU2151598C1 (en) * 1998-10-02 2000-06-27 Институт нефтехимии и катализа АН республики Башкортостан и Уфимского научного центра РАН Method of preparing ecdysterone from vegetable raw
RU2155599C1 (en) * 1999-03-29 2000-09-10 Институт биологии Коми НЦ Уральского отделения РАН Method of isolation of individual compounds from ecdysteroid mixture from plant serratula coronata above-ground part
RU2160115C2 (en) * 1998-10-02 2000-12-10 Институт нефтехимии и катализа АН республики Башкортостан и Уфимского научного центра РАН Method for producing ecdysteroid and ecdysterone condensate from raw vegetable material
RU2246966C1 (en) * 2003-11-04 2005-02-27 Институт нефтехимии и катализа АН РБ и УНЦ РАН METHOD FOR PREPARING α-ECDYSONE

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1146050A1 (en) * 1983-04-13 1985-03-23 Институт биохимии им.А.В.Палладина Method of obtaining beta-ecdizon from plant "serratula"
SU1312774A1 (en) * 1980-07-04 1988-05-07 Институт Химии Растительных Веществ Ан Узсср Tonic
RU2063763C1 (en) * 1993-07-19 1996-07-20 Владимир Витальевич Володин METHOD OF α-- AND β--ECDYSONE PREPARING

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1312774A1 (en) * 1980-07-04 1988-05-07 Институт Химии Растительных Веществ Ан Узсср Tonic
SU1146050A1 (en) * 1983-04-13 1985-03-23 Институт биохимии им.А.В.Палладина Method of obtaining beta-ecdizon from plant "serratula"
RU2063763C1 (en) * 1993-07-19 1996-07-20 Владимир Витальевич Володин METHOD OF α-- AND β--ECDYSONE PREPARING

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2151608C1 (en) * 1998-10-02 2000-06-27 Институт нефтехимии и катализа АН республики Башкортостан и Уфимского научного центра РАН Method of preparing ecdysteroids and ecdysterone concentrate from plant raw
RU2151609C1 (en) * 1998-10-02 2000-06-27 Институт нефтехимии и катализа АН республики Башкортостан и Уфимского научного центра РАН Method of preparing ecdysteroid concentrate from plant raw
RU2151598C1 (en) * 1998-10-02 2000-06-27 Институт нефтехимии и катализа АН республики Башкортостан и Уфимского научного центра РАН Method of preparing ecdysterone from vegetable raw
RU2160115C2 (en) * 1998-10-02 2000-12-10 Институт нефтехимии и катализа АН республики Башкортостан и Уфимского научного центра РАН Method for producing ecdysteroid and ecdysterone condensate from raw vegetable material
RU2155599C1 (en) * 1999-03-29 2000-09-10 Институт биологии Коми НЦ Уральского отделения РАН Method of isolation of individual compounds from ecdysteroid mixture from plant serratula coronata above-ground part
RU2246966C1 (en) * 2003-11-04 2005-02-27 Институт нефтехимии и катализа АН РБ и УНЦ РАН METHOD FOR PREPARING α-ECDYSONE

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5709797A (en) Method of isolating cyclosporins
Oades Gas-liquid chromatography of alditol acetates and its application to the analysis of sugars in complex hydrolysates
EP2040810B1 (en) Improved chromatography process for recovering a substance or a group of substances from a mixture
Holen Rapid separation of free sterols by reversed-phase high performance liquid chromatography
Rembold et al. Convenient method for the determination of picomole amounts of juvenile hormone
KR970002037B1 (en) PROCESS FOR PREPARING Ñß-LINOLEIC ACID FROM PERILLA
Roncari et al. On the chemical nature of the antibiotic edeine
Johnson et al. Comparison of chromatographic systems for triterpenoids from neem (Azadirachta indica) seeds
RU2123855C1 (en) Method of preparing 20-hydroxyecdysone from an ecdysteroids mixture
NO321570B1 (en) Process for the purification of cyclosporin A and related cyclosporins from a cyclosporin-containing extract.
CN101230080B (en) simulated moving bed chromatography separation of 20(S) and 20(R)-ginsenoside Rg3 enantiomer
CN104931627B (en) A kind of solid-phase extraction column and application thereof
Khokhlov et al. Chemical structure of streptothricins
RU2063763C1 (en) METHOD OF α-- AND β--ECDYSONE PREPARING
RU93037260A (en) METHOD FOR PRODUCING ALPHA AND BETA ECDISIS FROM PLANT
Yamamoto et al. Determination of chloramphenicol by gas-liquid chromatography
JPS63112536A (en) Concentrating and purifying method for gamma-linolenic acid
RU2155599C1 (en) Method of isolation of individual compounds from ecdysteroid mixture from plant serratula coronata above-ground part
CN108558983A (en) A kind of method that separation prepares four kinds of active materials of cycloartenyl ferulate
RU2332248C1 (en) Method of chromatographic purification of buserelin
CN110174469B (en) Detection method of three diarrheic shellfish poisoning types OA, DTX1 and DTX2 in seaweed
CN109828038A (en) A kind of application of solid-phase extraction column in tacrolimus formulations impurity analysis
RU98123499A (en) METHOD FOR CLEANING A RAW PRODUCT CONTAINING A CYCLOSPORIN COMPLEX, HIGH PURITY AND A METHOD OF INDUSTRIAL SCALE FOR CLEANING CYCLOSPORIN A
Kastler et al. Group separation of organic nitrates on a new nitric acid ester NP-LC stationary phase
Lee Dual counter-current chromatography—its applications in natural products research