RU2119353C1

RU2119353C1 - Pharmaceutical compositions of 3-substituted 2-hydroxyindole-1-carboxamides, method of inhibition of collagenase activation, method of inducing analgetic response, method of treatment of patients with inflammatory sicknesses

Info

Publication number: RU2119353C1
Application number: RU95111378A
Authority: RU
Inventors: Ахмед Имран
Original assignee: Пфайзер Инк.
Priority date: 1992-10-07
Filing date: 1993-09-02
Publication date: 1998-09-27
Also published as: PL174170B1; FI934387L; TW438798B; KR950703338A; CA2146448A1; NZ256164A; HUT68533A; FI934387A7; JPH07507809A; HU9302821D0; ZA937405B; NO951350L; WO1994007488A1; AU4839293A; EP0662831A1; JP2721042B2; MX9306222A; MY109680A; CZ282702B6; FI934387A0

Abstract

FIELD: organic chemistry. SUBSTANCE: pharmaceutical composition has: A) at least one triglyceride or propylene glycolic ester of fatty acids from fractionated coconut oil; and B) at least one compound of the formula (I):

where R₁, R₂ and R₃ each means independently hydrogen, fluorine, bromine or chlorine, or its pharmaceutically acceptable salt. Invention proposes also methods of inhibition of collagenase activity, inducing analgetic response and treatment of patients with inflammatory sicknesses by administration of composition at effective amount and therefore can be used in medicine. EFFECT: improved safety, prolonged fitness time. 19 cl, 4 ex, 2 tbl

Description

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим определенные 3-замещенные 2-оксиндол-1-карбоксамиды, триглицериды и сложные пропиленгликолевые диэфиры жирных кислот со средней длиной цепи (C₈-C₁₀). Эти карбоксамиды пригодны для использования в качестве анальгетиков для таких млекопитающих, как человек, и для снятия или облегчения болей после хирургических операций или других травм, или для снятия симптомов таких хронических заболеваний, как воспаления, и болей, связанных с ревматоидными артритами и остеоартритами, что показано в патентах США 4556672 и 5047554. Карбоксамиды полезны также для лечения заболеваний и болезненных состояний, связанных с коллагеназой, таких, как заболевания, связанные с рассасыванием костной ткани, поражениями роговицы, периодонтитом, воспалительными заболеваниями и ранами и ожогами у млекопитающих, что раскрыто в патенте США 5008283.The present invention relates to pharmaceutical compositions comprising certain 3-substituted 2-oxindole-1-carboxamides, triglycerides and medium chain chain fatty acid propylene glycol diesters (C ₈ -C ₁₀ ). These carboxamides are suitable for use as analgesics for mammals such as humans, and to relieve or alleviate pain after surgery or other injuries, or to relieve symptoms of chronic diseases such as inflammation, and pain associated with rheumatoid arthritis and osteoarthritis, which shown in US patents 4556672 and 5047554. Carboxamides are also useful for the treatment of diseases and painful conditions associated with collagenase, such as diseases associated with bone resorption, lesions p cornea, periodontitis, inflammatory diseases and wounds and burns in mammals, as disclosed in US patent 5008283.

Раскрытые в формуле изобретения карбоксамиды формулы I химически нестабильны в воде. Известно, что скорость гидролитического разложения (гидролиза) можно снизить, защищая лабильные лекарства, например, за счет заключения в гидрофобное ядро мицелл, или за счет композиций с носителями на основе неводных растворителей, неактивных в воде, например, в незаменимых маслах. В дополнение к гидролитической нестабильности карбоксамиды также подвержены окислительному разложению в водных носителях, например в воде и в неводных носителях, например в маслах. Окислительную нестабильность можно снизить в насыщенных маслах, например, за счет включения антиоксидантов или за счет создания композиций в ненасыщенных маслах, которые защищают лекарства от их существенного самоокисления. Однако карбоксамиды, описанные в формуле I, нелегко стабилизировать в маслах, которые обычно используют в фармацевтических препаратах, например в кунжутном масле, арахисовом масле, подсолнечном масле и хлопковом масле. The carboxamides of formula I disclosed in the claims are chemically unstable in water. It is known that the rate of hydrolytic decomposition (hydrolysis) can be reduced by protecting labile drugs, for example, by encapsulating micelles in the hydrophobic core, or by compositions with carriers based on non-aqueous solvents that are inactive in water, for example, in essential oils. In addition to hydrolytic instability, carboxamides are also susceptible to oxidative decomposition in aqueous carriers, for example in water, and in non-aqueous carriers, for example, in oils. Oxidative instability can be reduced in saturated oils, for example, by the inclusion of antioxidants or by creating compositions in unsaturated oils that protect drugs from their substantial self-oxidation. However, the carboxamides described in Formula I are not readily stabilized in oils that are commonly used in pharmaceutical preparations, for example, sesame oil, peanut oil, sunflower oil and cottonseed oil.

Краткое содержание изобретения
Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим:
A) по крайней мере один триглицерид или сложный пропиленгликолевый диэфир жирных кислот фракционированного кокосового масла;
B) по крайней мере одно соединение формулы I

где R₁, R₂ и R₃ каждый независимо представляет водород, фтор, бром или хлор, или их фармацевтически приемлемые соли; где весовое отношение A к B находится в интервале от 5,6 до 999.Summary of invention
The present invention relates to pharmaceutical compositions comprising:
A) at least one triglyceride or propylene glycol fatty acid diester of fractionated coconut oil;
B) at least one compound of formula I

where R ₁ , R ₂ and R ₃ each independently represents hydrogen, fluorine, bromine or chlorine, or their pharmaceutically acceptable salts; where the weight ratio of A to B is in the range from 5.6 to 999.

Фармацевтические композиции включают от 85 до 99 вес.% A и от 0,1 до 15 вес.% B. Pharmaceutical compositions include from 85 to 99 wt.% A and from 0.1 to 15 wt.% B.

Предпочтительно, чтобы каждый из R₁, R₂ и R₃ независимо представлял фтор или хлор.Preferably, each of R ₁ , R ₂ and R ₃ independently represents fluorine or chlorine.

Предпочтительные соединения формулы I включают: 5-хлор-2,3-дигидро-2-оксо-(2-тиенилкарбонил)-индолкарбоксамид, 6-хлор-5-фтор-2,3-дигидро-2-оксо-3-(2-тиенилкарбонил)-индолкарбоксамид; и 6-хлор-5-фтор-2,3-дигидро-2-оксо-3-[2-(4-хлор)- тиенилкарбонил]индолкарбоксамид. Preferred compounds of formula I include: 5-chloro-2,3-dihydro-2-oxo- (2-thienylcarbonyl) indolecarboxamide, 6-chloro-5-fluoro-2,3-dihydro-2-oxo-3- (2 thienylcarbonyl) indolecarboxamide; and 6-chloro-5-fluoro-2,3-dihydro-2-oxo-3- [2- (4-chloro) thienylcarbonyl] indolecarboxamide.

Настоящее изобретение также включает способ ингибирования активации колланназы. The present invention also includes a method of inhibiting collannase activation.

Настоящее изобретение включает также способ лечения воспалительных заболеваний. The present invention also includes a method of treating inflammatory diseases.

Настоящее изобретение включает также способ, позволяющий вызвать анальгетическую реакцию. The present invention also includes a method for causing an analgesic reaction.

Подробное описание изобретения
Было обнаружено, что фармацевтические композиции, содержащие карбоксамиды формулы I, и триглицериды и сложные пропиленгликолевые диэфиры C₈-C₁₀ насыщенных жирных кислот, обладают превосходной сохранностью и длительным сроком годности. В результате использования таких композиций карбоксамиды менее подвержены гидролизу и окислению, которые могли бы повредить их и тем самым сделать их неэффективными. Стабилизация этих карбоксамидов в таких препаратах не требует добавления антиоксиданта или других вспомогательных стабилизаторов.DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
It has been found that pharmaceutical compositions containing carboxamides of formula I, and triglycerides and propylene glycol diesters C ₈ -C ₁₀ saturated fatty acids, have excellent safety and extended shelf life. As a result of the use of such compositions, carboxamides are less susceptible to hydrolysis and oxidation, which could damage them and thereby render them ineffective. The stabilization of these carboxamides in such preparations does not require the addition of an antioxidant or other auxiliary stabilizers.

Триглицериды, которые используют в заявленном изобретении, представляют собой нейтральные масла, которые состоят из сложных эфиров жирных кислот со средней длиной цепи (C₈-C₁₀), которые также называют фракционированным кокосовым маслом. Эти жирные кислоты этерифицируют либо глицерином, либо пропиленгликолем и продают под торговой маркой MIGLYOL^® (например, MIGLYOL^®810, MIGLYOL^®812 и MIGLYOL^® 840). MIGLYOL описывают так же как триглицериды жирных кислот фракционированного кокосового масла или триглицериды каприловой кислоты /каприновой кислоты. Фракционированное кокосовое масло получают из фиксированных масел, полученных из высушенных твердых частей эндосперм Cocos nucifera L в результате гидролиза, фракционирования выделенных жирных кислот, и переэтерификации глицерином или пропиленгликолем. Оно состоит из смеси насыщенных жирных кислот с короткими или средней длины цепями, главным образом октановой и декановой кислот. Miglyol^® представляет собой торговую марку для фракционированного кокосового масла или триглицеридов каприловой кислоты/каприновой кислоты от Dynamit Nobel Ltd Germany and UK. Эти носители продемонстрировали стабильность против окисления и прогоркания (порчи), а также прекрасную стабильность и биосовместимость. Более того, так как используют только насыщенные жирные кислоты, масла не создают пероксидов или других свободных радикалов, которые могли бы дестабилизировать содержащиеся в них лекарственные препараты. Низкое содержание воды также сводит к минимуму гидролиз карбоксамидов. В предпочтительной композиции карбоксамид формулы I диспергируют в масляном носителе, содержащем Migliol^®812 и другие маслорастворимые добавки, описываемые далее, при перемешивании до получения гомогенной суспензии лекарственного вещества в масляном носителе.The triglycerides that are used in the claimed invention are neutral oils that consist of medium chain length fatty acid esters (C ₈ -C ₁₀ ), which are also called fractionated coconut oil. These fatty acids are esterified with either glycerin or propylene glycol and are sold under the trademark MIGLYOL ^® (e.g., MIGLYOL ^® 810, MIGLYOL ^® 812 and MIGLYOL ^® 840). MIGLYOL is also described as fractionated coconut oil fatty acid triglycerides or caprylic acid / capric acid triglycerides. Fractionated coconut oil is obtained from fixed oils obtained from the dried solids of Cocos nucifera L endosperm by hydrolysis, fractionation of the isolated fatty acids, and transesterification with glycerol or propylene glycol. It consists of a mixture of short or medium chain saturated fatty acids, mainly octanoic and decanoic acids. Miglyol ^® is a brand name for fractionated coconut oil or caprylic acid / capric acid triglycerides from Dynamit Nobel Ltd Germany and UK. These carriers have demonstrated stability against oxidation and rancidity (spoilage), as well as excellent stability and biocompatibility. Moreover, since they use only saturated fatty acids, oils do not create peroxides or other free radicals that could destabilize the drugs contained in them. A low water content also minimizes the hydrolysis of carboxamides. In a preferred composition of formula I carboxamide dispersed in an oil vehicle containing Migliol ^® 812 and other oil-soluble additives described below under agitation to obtain a homogeneous suspension of the drug in an oil vehicle.

Другие добавки, которые могут присутствовать в фармацевтических препаратах, могут также включать такие агенты, предотвращающие образование осадка, как, например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, глицерин, сорбит, бензиловый спирт, лецитин или стеарат алюминия. Количество агента, предотвращающего образование осадка, может составлять примерно от 0,05 до 5 вес.%. Фармацевтическая композиция может также содержать консервант в количестве от 0,5 до 2,0 вес.%. Такие консерванты могут включать, например, фенол, бензиловый спирт, парабены, хлорбутанол и бензилбензоат. Такие желирующие агенты, как моностеарат алюминия, также могут быть включены в фармацевтические композиции в количестве от 0,5 до 3,0 объемных %. Стабильность этих фармацевтических композиций можно оценить,например,в ужесточенных условиях хранения после того, как суспензию карбоксамидов (6 вес.% лекарственного вещества), помещенную в стеклянные ампулы, подвергают действию высоких температур вплоть до 70^oC в течение вплоть до 9 недель. Во время испытания на стабильность уровень интанктного лекарства, остающегося в препарате, а также содержание продуктов гидролитического и окислительного разложения, определяют количественно с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Для анализа суспензию разбавляют смесью метанол/триэтиламин 100/1/объем/объем до получения окончательной концентрации лекарства от 0,6 до 1,2 мг/мл. Этот растворитель растворяет суспензию лекарства до получения раствора, который можно непосредственно вводить в ВЭЖХ колонку. Мобильной фазой для хроматографиии является смесь метанол/вода 90/10 объем/объем + 1% триэтиламина; колонка представляет обращенную фазу октадекасилана, а скорость потока составляет 1 мл/мин. Лекарство детектируют за счет УФ поглощения на 246 нм. Этот анализ показывает, что в течение девяти недель практически не происходит разложения карбоксамида.Other additives that may be present in pharmaceutical preparations may also include precipitating agents such as, for example, propylene glycol, polyethylene glycol, glycerin, sorbitol, benzyl alcohol, lecithin or aluminum stearate. The amount of sludge preventing agent may be from about 0.05 to 5% by weight. The pharmaceutical composition may also contain a preservative in an amount of from 0.5 to 2.0 wt.%. Such preservatives may include, for example, phenol, benzyl alcohol, parabens, chlorobutanol and benzyl benzoate. Gelling agents such as aluminum monostearate can also be included in pharmaceutical compositions in an amount of from 0.5 to 3.0 volume%. The stability of these pharmaceutical compositions can be evaluated, for example, under tightened storage conditions after a suspension of carboxamides (6 wt.% Drug substance) placed in glass ampoules is exposed to high temperatures up to 70 ^° C. for up to 9 weeks. During a stability test, the level of intact drug remaining in the preparation, as well as the content of hydrolytic and oxidative decomposition products, are quantified using high performance liquid chromatography (HPLC). For analysis, the suspension is diluted with a mixture of methanol / triethylamine 100/1 / volume / volume to obtain a final drug concentration of from 0.6 to 1.2 mg / ml. This solvent dissolves the drug suspension to obtain a solution that can be directly added to the HPLC column. The mobile phase for chromatography is methanol / water 90/10 v / v + 1% triethylamine; the column represents the reversed phase of octadecasilan and the flow rate is 1 ml / min. The drug is detected by UV absorption at 246 nm. This analysis shows that within nine weeks, virtually no decomposition of carboxamide occurs.

Если соединение формулы I или его соль используют для людей, дневная доза обычно определяется практикующим врачом. Более того, доза будет меняться в зависимости от возраста, веса и реакции отдельного пациента, а также от серьезности симптомов пациента и эффективности конкретного соединения, которое вводят. Однако для введения при острых приступах боли эффективная доза в большинстве случаев составляет от 0,01 до 0,25 г по необходимости (например, 1-4 раза в день). Для приема хроническими больными в большинстве случаев эффективная доза составляет от 0,01 до 0,5 г/день и предпочтительно от 0,1 до 0,25 г в день в виде отдельных доз или в единой дозе. С другой стороны, иногда может оказаться необходимым использовать дозы вне этих пределов. If a compound of formula I or a salt thereof is used for humans, the daily dose is usually determined by a healthcare practitioner. Moreover, the dose will vary depending on the age, weight and response of the individual patient, as well as the severity of the patient's symptoms and the effectiveness of the particular compound that is administered. However, for administration in acute attacks of pain, the effective dose in most cases is from 0.01 to 0.25 g, if necessary (for example, 1-4 times a day). For chronic patients, in most cases, the effective dose is from 0.01 to 0.5 g / day and preferably from 0.1 to 0.25 g per day in separate doses or in a single dose. On the other hand, it may sometimes be necessary to use doses outside these limits.

Предпочтительные фармацевтические композиции настоящего изобретения представляют собой парэнтеральные фармацевтические композиции. Фармацевтические композиции настоящего изобретения можно получить, приготавливая соединение формулы I (в качестве активного ингредиента) в единичной дозировочной форме. Некоторые примеры единичных дозировочных форм представляют собой стерильные суспензии для внутримышечных, подкожных, внутрисуставных инъекций, стерильные офтальмологические суспензии для поверхностного нанесения на глаз, капсулы для перорального приема, ректальные суппозитории или лосьоны для поверхностного нанесения на кожу или на область волосяного покрова. Preferred pharmaceutical compositions of the present invention are parenteral pharmaceutical compositions. The pharmaceutical compositions of the present invention can be prepared by preparing a compound of formula I (as an active ingredient) in unit dosage form. Some examples of unit dosage forms are sterile suspensions for intramuscular, subcutaneous, intraarticular injection, sterile ophthalmic suspensions for topical application to the eye, capsules for oral administration, rectal suppositories or lotions for superficial application to the skin or to the area of the hairline.

Примером подходящей фармацевтической дозированной формы для перорального приема могут служить желатиновые капсулы. Суспензии для перорального приема можно поставлять, например, после инкапсулирования суспензии соединения формулы I в масле, например в Miglyol 812, в мягких желатиновых капсулах. Ректальные суппозитории можно получить, диспергируя карбоксамид в нейтральном масле, наряду с совместимыми основаниями суппозиториев, такими, как кокосовое масло или Wlutepsol W35, температура плавления которых выше температуры тела. Продукты для поверхностного нанесения на кожу должна содержать карбоксамид в качестве активного ингредиента, диспергированный в нейтральном масле, например в Miglyol 812, и также содержать один или более из фармацевтически неактивных ингредиентов, таких как: цетиловый спирт, стеариновая кислота, пропиленгликоль, моностеарат алюминия, бензиловый спирт, в качестве разбавителей или консервантов. Парэнтеральные композиции предпочтительно представляют собой суспензию карбоксамида в нейтральном масле, и могут также содержать другие неактивные фармацевтические компоненты, такие, как бензиловый спирт в качестве консерванта, моностеарат алюминия в качестве желирующего агента и пропиленгликоль в качестве диспергирующего агента. Gelatin capsules are an example of a suitable pharmaceutical dosage form for oral administration. Suspensions for oral administration can be delivered, for example, after encapsulating a suspension of a compound of formula I in oil, for example in Miglyol 812, in soft gelatin capsules. Rectal suppositories can be prepared by dispersing carboxamide in a neutral oil, along with compatible suppository bases, such as coconut oil or Wlutepsol W35, whose melting point is higher than body temperature. Products for surface application to the skin should contain carboxamide as an active ingredient dispersed in a neutral oil, for example Miglyol 812, and also contain one or more pharmaceutically inactive ingredients such as cetyl alcohol, stearic acid, propylene glycol, aluminum monostearate, benzyl alcohol, as diluents or preservatives. Parenteral compositions are preferably a suspension of carboxamide in a neutral oil, and may also contain other inactive pharmaceutical components, such as benzyl alcohol as a preservative, aluminum monostearate as a gelling agent, and propylene glycol as a dispersing agent.

Нижеследующие примеры иллюстрируют, как можно приготовить фармацевтические композиции. Коммерческие реагенты можно использовать без дополнительной очистки. The following examples illustrate how pharmaceutical compositions can be prepared. Commercial reagents can be used without further purification.

Пример 1. 800 мг Miglyol 812 нагревают до 45^oC в смесителе, снабженном мешалкой и гомогенизатором. К маслу добавляют 10 г бензилового спирта при перемешивании (около 60-80 об/мин). Масляный раствор стерильно фильтруют в стерильный смеситель, снабженный мешалкой и гомогенизатором. 120 г микронизированного стерильного порошка карбоксамида диспергируют в масляной фазе при перемешивании. Суспензию гомогенизируют с высоким сдвигом в течение 10 минут, а затем оставляют охлаждаться при комнатной температуре при умеренном перемешивании (60-80 об/мин). Суспензию доводят до полного количества 1000 г, добавляя необходимое количество Miglyol 812 г к суспензии для получения окончательной композиции. Эту суспензию в асептических условиях заполняют в 50 см³, типа 1, флинтглассовые ампулы, используя автоматизированный аппарат для заполнения. Ампулы закрывают резиновыми пробками с тефлоновым покрытием и сверху закрывают алюминиевыми оболочками.Example 1. 800 mg of Miglyol 812 are heated to 45 ^° C. in a mixer equipped with a stirrer and homogenizer. 10 g of benzyl alcohol are added to the oil with stirring (about 60-80 rpm). The oil solution is sterile filtered into a sterile mixer equipped with a stirrer and homogenizer. 120 g of micronized sterile carboxamide powder are dispersed in the oil phase with stirring. The suspension is homogenized with high shear for 10 minutes and then allowed to cool at room temperature with moderate stirring (60-80 rpm). The suspension is adjusted to the full amount of 1000 g by adding the required amount of Miglyol 812 g to the suspension to obtain the final composition. Under aseptic conditions, this suspension is filled into 50 cm ³ type 1 flint glass ampoules using an automated filling machine. The ampoules are closed with Teflon-coated rubber stoppers and covered with aluminum shells on top.

Пример 2. 800 мл Miglyol 812 нагревают до 45^oC в смесителе, снабженном мешалкой и гомогенизатором. К маслу добавляют 10 г бензилового спирта при перемешивании (60-80 об/мин). Масляный раствор стерильно фильтруют в стерильный смеситель, снабженный мешалкой и гомогенизатором. К масляной суспензии добавляют 20 г стерильного порошка моностеарат алюминия отдельными порциями при перемешивании до получения геля масла. Желированное масло оставляют остывать до комнатной температуры и оставляют выстаиваться в течение 6 часов без перемешивания. Затем в желированном масле диспергируют при перемешивании 120 г микронизированного стерильного порошка карбоксамида. Полный вес суспензии доводят до 1000 г, добавляя нужное количество стерильной желированной суспензии Miglyol 812 до получения окончательной концентрации 12 вес. % карбоксамида в конечной композиции. Эту суспензию асептически заполняют в 50 см³ типа 1 флинтглассовые ампулы, используя автоматический аппарат для заполнения. Ампулы закрывают резиновыми крышками с тефлоновым покрытием и сверху закрывают алюминиевыми оболочками.Example 2. 800 ml of Miglyol 812 is heated to 45 ^o C in a mixer equipped with a stirrer and homogenizer. 10 g of benzyl alcohol are added to the oil with stirring (60-80 rpm). The oil solution is sterile filtered into a sterile mixer equipped with a stirrer and homogenizer. To the oil suspension, 20 g of sterile aluminum monostearate powder is added in separate portions with stirring until an oil gel is obtained. The gelled oil is allowed to cool to room temperature and allowed to stand for 6 hours without stirring. Then, 120 g of micronized sterile carboxamide powder are dispersed in gelled oil with stirring. The total weight of the suspension is adjusted to 1000 g by adding the right amount of sterile gelled suspension of Miglyol 812 to obtain a final concentration of 12 weight. % carboxamide in the final composition. This suspension is aseptically filled in 50 cm ³ type 1 flint glass ampoules using an automatic filling apparatus. The ampoules are closed with Teflon-coated rubber caps and covered with aluminum shells.

Пример 3. 800 мл Miglyol 812 нагревают до 45^oC в смесителе, снабженном мешалкой и гомогенизатором. К маслу добавляют 10 г бензилового спирта при перемешивании (60-80 об/мин). В масляной фазе при перемешивании диспергируют 120 г микронизированного стерильного порошка карбоксамида. Суспензию гомогенизируют с высоким сдвигом в течение 10 минут, а затем оставляют остывать до комнатной температуры при умеренном перемешивании (60-80 об/мин). Полный вес суспензии доводят до 1000 г при перемешивании, добавляя необходимое количество Miglyol 812 к суспензии, до получения конечной концентрации 12 вес. % карбоксамида в окончательной композиции. Суспензию заполняют в мягкие желатиновые капсулы для перорального применения, используя автоматизированный аппарат для заполнения капсул.Example 3. 800 ml of Miglyol 812 is heated to 45 ^o C in a mixer equipped with a stirrer and homogenizer. 10 g of benzyl alcohol are added to the oil with stirring (60-80 rpm). In the oil phase, 120 g of micronized sterile carboxamide powder are dispersed with stirring. The suspension is homogenized with high shear for 10 minutes, and then left to cool to room temperature with moderate stirring (60-80 rpm). The total weight of the suspension is adjusted to 1000 g with stirring, adding the required amount of Miglyol 812 to the suspension, to obtain a final concentration of 12 weight. % carboxamide in the final composition. The suspension is filled into soft gelatine capsules for oral administration using an automated capsule filling machine.

Пример 4. 200 г Miglyol 812 и 800 г Whitepsol W35 нагревают до 60^oC в смесителе, снабженном мешалкой и гомогенизатором. Порошок карбоксамида диспергируют в полученном масляном растворе при перемешивании. Суспензией заполняют формы для суппозиториев и охлаждают до комнатной температуры.Example 4. 200 g of Miglyol 812 and 800 g of Whitepsol W35 are heated to 60 ^° C. in a mixer equipped with a stirrer and a homogenizer. The carboxamide powder is dispersed in the resulting oil solution with stirring. The suspension is filled into suppository forms and cooled to room temperature.

Использование Migliol позволяет получить наиболее стабильные суспензии. Using Migliol allows you to get the most stable suspension.

Данные по биологической активности соединений I. Data on the biological activity of compounds I.

Способность ингибировать активацию коллагеназы и ингибировать активность миелопероксидазы определяли по описанным ниже методикам. The ability to inhibit collagenase activation and inhibit myeloperoxidase activity was determined by the methods described below.

Цельную человеческую кровь от здоровых добровольцев получали путем венопункции в гепаренизированные шприцы. Большую часть эритроцитов удаляли седиментацией с декстрином и нейтрофилы отделяли центрифугированием в градиенте плотности над гипаковым фиколлом. Фракцию с большим содержанием нейтрофилов промывали и оставшиеся эритроциты удаляли гипотоническим лизисом в соответствии с методикой, описанной Brackburn W.D. и др., Arthritis Rheum. 30: 1006-1014 (1987). Полученные таким образом нейтрофилы использовали в описанных ниже испытаниях и убеждались в жизнеспособности клеток путем определения их способности исключать типановый синий. В каждом испытании жизнеспособность клеток обычно превышала 95%. Whole human blood from healthy volunteers was obtained by venipuncture into heparinized syringes. Most of the erythrocytes were removed by sedimentation with dextrin and neutrophils were separated by density gradient centrifugation over a hypackic ficoll. The neutrophil-rich fraction was washed and the remaining red blood cells were removed by hypotonic lysis in accordance with the procedure described by Brackburn W.D. et al., Arthritis Rheum. 30: 1006-1014 (1987). The neutrophils thus obtained were used in the tests described below and verified the viability of the cells by determining their ability to exclude typan blue. In each trial, cell viability typically exceeded 95%.

Для того чтобы оценить ингибирование выделения активированной коллагеназы нейтрофилами, было проведено следующее испытание. Суспензии нейтрофильных клеток инкубировали при 37^oC в течение 15-30 минут в присутствии различных концентраций тенидапа или другого исследуемого соединения. Тенидап растворяли, разбавляли водой и добавляли непосредственно к клеткам. Другие испытываемые соединения вначале растворяли в 0,1 М NaOH, а затем разбавляли водой перед добавлением к клеткам. После того, как клетки инкубировали в присутствии тенидапа или другого исследуемого соединения, суспензии клеток (5•10⁶ клеток/мл, 125 мкл/лунку) добавляли в покрытые IgG и блокированные бычьим сывороточным альбумином (БСА) лунки титрационных микропланшетов и инкубировали их в течение 45 минут при 37^oC. В качестве контрольных испытаний были проведены подобные инкубации в отсутствие IgG. После инкубации суспензии клетки центрифугировали (750•g) в течение 5 минут при 4^oC. Супернатанты удаляли и добавляли ДФФ (диизопропилфторфосфат) до конечной концентрации 10^-3 М, чтобы инактивировать серинпротеазы.In order to evaluate the inhibition of the release of activated collagenase by neutrophils, the following test was carried out. Suspensions of neutrophilic cells were incubated at 37 ^° C. for 15-30 minutes in the presence of various concentrations of tenadap or other test compound. Tenadap was dissolved, diluted with water and added directly to the cells. Other test compounds were initially dissolved in 0.1 M NaOH and then diluted with water before being added to the cells. After cells were incubated in the presence of tenadap or another test compound, cell suspensions (5 x 10 ⁶ cells / ml, 125 μl / well) were added to IgG coated and bovine serum albumin (BSA) blocked microtiter plate wells and incubated for 45 minutes at 37 ^o C. As a control test, similar incubations were performed in the absence of IgG. After incubation of the suspension, the cells were centrifuged (750 x g) for 5 minutes at 4 ^° C. Supernatants were removed and DPP (diisopropyl fluorophosphate) was added to a final concentration of 10 ^-3 M to inactivate serine proteases.

После этого определяли активность коллагеназы в обработанных ДФФ супернатантах путем инкубирования трех аликвот по 200 мкл супернатанта с меченными ³H восстановленными фибриллами коллагена типа 1 в 7-мм плоскодонных лунках для культуры тканей ( Lindbro^®, Cat #76-032-05, Flow Laboratories McLean, Va), как описано Johnson-Wint, B, Anal. Biochem., 104: 175-181 (1980). Восстановленные фибриллы в каждой лунке содержали 75 мкг смеси меченного ³H и немеченного коллагена с активностью 7000 импульсов в минуту. Для того, чтобы определить суммарную радиоактивность, которая потенциально может выделиться из фибрилл в каждом эксперименте, восстановленные фибриллы также инкубировали со смесью клостридиальной коллагеназы (250 мг/мл ССРХ (сбалансированного солевого раствора Хенка, GIBCO, Grand Island, N.Y.)). Чтобы максимально повысить чувствительность и специфичность анализа, образцы трижды инкубировали в течение восемнадцати часов при 37^oC. В конце инкубационного периода из каждой лунки отбирали супернатант и определяли радиоактивность путем подсчета в сцинтилляционном счетчике. Из лунок, инкубированных с бактериальной коллагеназой, получали более 99% радиоактивности, внесенной в каждую лунку. Среднее число импульсов в минуту из фибрилл, инкубированных только с буфером (ССРХ), вычитали из числа импульсов в минуту, измеренных для каждого супернатанта. Три полученные величины для каждого супернатанта усредняли и делили на среднее число импульсов в минуту, выделяемых бактериальной коллагеназой, для того, чтобы определить процент лизиса фибрилл, происходящего в каждом супернатанте. После этого рассчитывали общее количество активированного коллагена, выделившегося при инкубации в течение восемнадцати часов, и делили его на время инкубирования, чтобы получить значения активности коллагеназы (нг разложившегося коллагена/мин) в каждом супернатанте.After that, collagenase activity was determined in the DFF-treated supernatants by incubating three aliquots of 200 μl of the supernatant with ³ H labeled ³ H reduced type 1 collagen fibrils in flat-bottomed tissue culture wells (Lindbro ^® , Cat # 76-032-05, Flow Laboratories McLean , Va) as described by Johnson-Wint, B, Anal. Biochem. 104: 175-181 (1980). The recovered fibrils in each well contained 75 μg of a mixture of labeled ³ H and unlabeled collagen with an activity of 7000 pulses per minute. In order to determine the total radioactivity that could potentially be released from fibrils in each experiment, the recovered fibrils were also incubated with a mixture of clostridial collagenase (250 mg / ml CCPX (Hank's balanced salt solution, GIBCO, Grand Island, NY)). To maximize the sensitivity and specificity of the analysis, samples were incubated three times for eighteen hours at 37 ^° C. At the end of the incubation period, supernatant was taken from each well and the radioactivity was determined by counting in a scintillation counter. From wells incubated with bacterial collagenase, more than 99% of the radioactivity added to each well was obtained. The average number of pulses per minute from fibrils incubated with buffer only (CCPX) was subtracted from the number of pulses per minute measured for each supernatant. The three obtained values for each supernatant were averaged and divided by the average number of pulses per minute secreted by bacterial collagenase in order to determine the percentage of fibril lysis that occurs in each supernatant. After that, the total amount of activated collagen released during incubation for eighteen hours was calculated and divided by the incubation time to obtain the values of collagenase activity (ng of decomposed collagen / min) in each supernatant.

В параллельных экспериментах определяли выделение всей коллагеназы в супернатантах путем активации латентной коллагеназы в супернатантах с помощью 1.0 мМ мерсалила (Harris, E.D. и Vater, C.A., Methodology of collagenase research: substrate purification, enzyme yctivation and purification. Collagenase in Normal Pathological Connective Tissues. Edited by D.E. Woolley, J. M. Evanson, Chichester, John Wiley & Sons, 1980) перед добавлением супернатантов к меченным радиоактивной меткой коллагеновым фибриллам. Чтобы избежать недооценки общего количества коллагеназы, выделенной вследствие ингибирования протеазной активности окислительными метаболитами, генерируемые во время активации нейтрофилов, используемые для этих определений супернатанты получали из нейтрофилов, активированных в присутствии 1,0 мМ азида натрия (ингибитора миелопероксидазы). Инкубирование и расчет активности коллагеназы в обработанных мерсалилом супернатантах осуществляли так, как было описано выше. In parallel experiments, the release of all collagenase in supernatants was determined by activation of latent collagenase in supernatants using 1.0 mM Mersalil (Harris, ED and Vater, CA, Methodology of collagenase research: substrate purification, enzyme yctivation and purification. Collagenase in Normal Pathological Connective Tissues. Edited by DE Woolley, JM Evanson, Chichester, John Wiley & Sons, 1980) before adding supernatants to radiolabeled collagen fibrils. To avoid underestimating the total amount of collagenase released due to inhibition of protease activity by oxidative metabolites generated during neutrophil activation, the supernatants used for these determinations were obtained from neutrophils activated in the presence of 1.0 mM sodium azide (myeloperoxidase inhibitor). The incubation and calculation of collagenase activity in the Mersalil-treated supernatants was carried out as described above.

С использованием вышеописанного испытания с тенидапом, пироксикамом, индометацином, ибупрофеном и напроксаном, при максимальных концентрациях лекарств получены данные, приведенные ниже в табл. 2. Using the above tests with tenadap, piroxicam, indomethacin, ibuprofen and naproxan, at the maximum concentrations of drugs, the data obtained are shown in the table below. 2.

Как показано в табл.2, ибупрофен и напроксен, которые оба являются ингибиторами циклооксигеназы, не обладали ингибирующим действием на выделение активированной коллагеназы нейтрофилами. Пироксикам и индометацин, которые также являются ингибиторами циклооксигеназы, обладают некоторым ингибирующим действием на выделение активированной коллагеназы, но при концентрациях, превышающих физиологические для данных соединений. Тенидап в концентрациях, соответствующих клиническим, значительно ингибировал выделение активированной коллагеназы из нейтрофилов. As shown in Table 2, ibuprofen and naproxen, both of which are cyclooxygenase inhibitors, did not have an inhibitory effect on the release of activated collagenase by neutrophils. Piroxicam and indomethacin, which are also cyclooxygenase inhibitors, have some inhibitory effect on the release of activated collagenase, but at concentrations higher than physiological for these compounds. Clinical concentrations of tenidap significantly inhibited the release of activated collagenase from neutrophils.

Claims

1. A pharmaceutical composition comprising a 3-substituted 2-oxindole-1-carboxamide and a pharmaceutically acceptable carrier, characterized in that it comprises at least one triglyceride or propylene glycol fatty acid diester of fractionated coconut oil (A) as a pharmaceutically acceptable carrier and as 3-substituted 2-oxindole-1-carboxamide, at least one compound of formula I (B)

where R ₁ , R ₂ and R ₃ each independently represents hydrogen, fluorine, bromine or chlorine,
or its pharmaceutically acceptable salt, where the weight ratio of A and B is in the range from 1: 5.6 to 1: 999.

2. The composition according to claim 1, characterized in that the composition comprises from 85 to 99 wt.% Component A and from 0.1 to 15 wt.% Component B.

3. The composition according to claim 1, characterized in that each of R ₁ , R ₂ and R ₃ independently represents fluorine or chlorine.

4. The composition according to claim 1, characterized in that the compound of formula I is selected from the group consisting of 5-chloro-2,3-dihydro-2-oxo-3- (2-thienylcarbonyl) indolecarboxamide, 6-chloro-5 -fluoro-2,3-dihydro-2-oxo-3- (2-thienylcarbonyl) indolecarboxamide and 6-chloro-5-fluoro-2,3-dihydro-2-oxo-3- [2- (4-chloro ) -thienylcarbonyl] indolecarboxamide.

5. The composition according to p. 1, characterized in that the compound of formula I is 5-chloro-2,3-dihydro-2-oxo-3- (2-thienylcarbonyl) indolecarboxamide.

6. The composition according to p. 1, characterized in that the compound of formula I is 6-chloro-5-fluoro-2,3-dihydro-2-oxo-3- (2-thienylcarbonyl) indolecarboxamide.

7. The composition according to p. 1, characterized in that the compound of formula I is 6-chloro-5-fluoro-2,3-dihydro-2-oxo-3- [2- (4-chloro) thienylcarbonyl] indolecarboxamide.

8. The composition according to claim 1, characterized in that said coconut fatty acids include C ₈ to C ₁₀ fatty acids.

9. The composition of claim 8, wherein said coconut fatty acids include caprylic acid, capric acid, lauric acid and linoleic acid.

10. The composition according to claim 1, characterized in that it further comprises from 0.05 to 5 wt.% Agent, preventing the formation of sediment.

11. The composition according to p. 10, characterized in that said sludge inhibitor is propylene glycol, polyethylene glycol, glycerin, sorbitol, benzyl alcohol, lecithin, or aluminum stearite.

12. The composition of claim 10, characterized in that it further comprises from 0.5 to 2.0 wt.% Preservative.

13. The composition according to p. 12, characterized in that the preservative is a phenol, benzyl alcohol, paraben, chlorobutanol or benzyl benzoate.

14. The composition according to claim 1, characterized in that the pharmaceutical composition is presented in a form suitable for oral, topical, ophthalmic, parenteral or rectal administration.

15. The composition according to claim 1, characterized in that the pharmaceutical composition comprises from 0.01 to 1.0 g of a compound of formula I.

16. The composition according to p. 15, characterized in that the pharmaceutical composition comprises from 20 to 250 mg of the compounds of formula I.

17. A method of inhibiting collagenase activation in a mammal in need thereof, comprising administering a pharmaceutical composition comprising 3-substituted 2-oxindole-1-carboxamide, characterized in that it comprises administering to said mammal a pharmaceutical composition according to claim 1 in an effective amount.

18. A method of inducing an analgesic reaction in a mammal, comprising administering a pharmaceutical composition comprising a 3-substituted 2-oxindole-1-carboxamide, characterized in that it comprises administering to said mammal a pharmaceutical composition according to claim 1 in an effective amount.

19. A method of treating inflammatory diseases in mammals, comprising administering a pharmaceutical composition comprising 3-substituted 2-oxindole-1-carboxamide, characterized in that it comprises administering to said mammal a pharmaceutical composition according to claim 1 in an effective amount.