RU2110066C1 - Способ количественного определения ангиогенина в биологическом сырье - Google Patents
Способ количественного определения ангиогенина в биологическом сырье Download PDFInfo
- Publication number
- RU2110066C1 RU2110066C1 RU96124515A RU96124515A RU2110066C1 RU 2110066 C1 RU2110066 C1 RU 2110066C1 RU 96124515 A RU96124515 A RU 96124515A RU 96124515 A RU96124515 A RU 96124515A RU 2110066 C1 RU2110066 C1 RU 2110066C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- angiogenin
- milk
- ribonuclease
- pancreatic
- pancreatic ribonuclease
- Prior art date
Links
- 102100022987 Angiogenin Human genes 0.000 title claims abstract description 43
- 108010072788 angiogenin Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 title 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims abstract description 11
- 102100037968 Ribonuclease inhibitor Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims abstract description 9
- 108010024226 placental ribonuclease inhibitor Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 claims description 13
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 claims description 13
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 7
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 3
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 2
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 2
- 235000020251 goat milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000011138 biotechnological process Methods 0.000 description 1
- YKCWQPZFAFZLBI-UHFFFAOYSA-N cibacron blue Chemical compound C1=2C(=O)C3=CC=CC=C3C(=O)C=2C(N)=C(S(O)(=O)=O)C=C1NC(C=C1S(O)(=O)=O)=CC=C1NC(N=1)=NC(Cl)=NC=1NC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O YKCWQPZFAFZLBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к молочной, мясной отраслям промышленности, ветеринарии, медицинской промышленности, а именно к количественной оценке белковых веществ. Изобретение позволяет разработать достоверный, чувствительный, эффективный способ количественного определения антиогенина в молочном сырье. Молочное сырье обезжиривают центрифугированием, затем подвергают хроматографической очистке от избытка панкреатической РНКазы на колонке, заполненной сорбентом голубая агароза. До и после пропускания обезжиренного молочного сырья через колонку с голубой агарозой контролируют в нем содержание панкреатической рибонуклеазы. Количественное содержание ангиогенина определяют, используя комбинированную пробу конкурентного взаимодействия панкреатической рибонуклеазы и ангиогенина с плацентарным ингибитором РНКазы. 1 табл.
Description
Изобретение относится к молочной, мясной отраслям промышленности, ветеринарии, медицинской промышленности, а именно к количественной оценке белковых веществ.
Ангиогенин - белковый активный фактор роста, впервые получен из культуральной среды клеток человека в 1985 году [1]. Позже обнаружен в различных тканях, сыворотке крови животных и человека, коровьем молоке [2]. Зарубежными исследователями достаточно хорошо изучена структура и биохимические свойства ангиогенина.
Однако количественный метод определения ангиогенина и способы его выделения из молочного сырья являются актуальными, но пока нерешенными задачами.
Известен способ определения ангиогенина в сыворотке крови человека с использованием моноклональных антител [3].
Недостатком его является сложная методика проведения исследований и применение дорогостоящей аппаратуры.
Известен способ определения бычьего ангиогенина в растворах, взятый в качестве прототипа, в котором используется комбинированная проба конкурентного взаимодействия панкреатической рибонуклеазы и ангиогенина с плацентарным ингибитором РНКазы [4]. Необходимым условием применения данного способа является низкая концентрация панкреатической рибонуклеазы.
Однако этот способ не может быть использован для количественного определения ангиогенина в биологических жидкостях с высоким содержанием панкреатической рибонуклеазы, которая высокогомологична ангиогенину. В связи с этим он не может быть применен для анализа на ангиогенин молочного сырья, содержащего высокие концентрации РНКазы, а именно 10-35 мг/л [5].
Задачей изобретения является разработка достоверного, чувствительного и эффективного способа количественного определения ангиогенина в молочном сырье.
Это достигается хроматографической очисткой сырья от избытка РНКазы перед проведением комбинированной пробы конкурентного взаимодействия панкреатической рибонуклеазы и ангиогенина с плацентарным ингибитором РНКазы. Согласно изобретению молочное сырье обезжиривают центрифугированием, т.к. содержащийся в нем жир мешает проведению дальнейших процедур. Следующий этап включает хроматографическую очистку исследуемых проб от РНКазы, содержащихся в них в высоких концентрациях, что не позволяет в присутствии больших количеств эндогенной рибонуклеазы определение ангиогенина с помощью комбинированной пробы конкурентного взаимодействия панкреатической рибонуклеазы и ангиогенина с плацентарным ингибитором РНКазы.
В молоке и в продуктах молочного производства содержание панкреатической РНКазы на порядок выше, чем ангиогенина. Поэтому возникает необходимость снижения концентрации эндогенной рибонуклеазы в молочном сырье до значений, позволяющих при допустимых расходах ингибитора применять комбинированную пробу конкурентного взаимодействия панкреатической рибонуклеазы и ангиогенина с плацентарным ингибитором РНКазы. Для хроматографической очистки молочного сырья от панкреатической РНКазы в качестве сорбента используют голубую агарозу (Cibacron blue GA Agarose). Хроматография на голубой агарозе позволяет значительно очистить молочное сырье от рибонуклеазы. Общую РНКазную активность сырья до хроматографической очистки на голубой агарозе и после нее определяют против субстрата суммарной дрожжевой РНК. После хроматографии на голубой агарозе молочное сырье анализируют на количество ангиогенина, применяя комбинированную пробу конкурентного взаимодействия панкреатической рибонуклеазы и ангиогенина с плацентарным ингибитором РНКазы.
Способ осуществляется следующим образом.
Молочное сырье обезжиривают центрифугированием. Затем подвергают хроматографической очистке от избытка панкреатической рибонуклеазы на колонке, заполненной сорбентом голубая агароза. До и после пропускания обезжиренного молочного сырья через колонку с голубой агарозой контролируют в нем содержание панкреатической рибонуклеазы. Количественное содержание ангиогенина определяют, используя комбинированную пробу конкурентного взаимодействия панкреатической рибонуклеазы и ангиогенина с плацентарным ингибитором РНКазы.
Пример 1. 15 мл коровьего молока обезжиривают центрифугированием (10000 об/мин, 15 мин). Перед хроматографической очисткой определяют общую рибонуклеазную активность При этом используют буфер Трис-HCL, pH 7,0, а в качестве субстрата 1%-ный раствор суммарной дрожжевой РНК. Затем через хроматографическую колонку с внутренним объемом 100 мл, заполненную голубой агарозой, пропускают 2 мл обезжиренного молока. На выходе с колонки получают фракцию, в которой определяют активность остаточной рибонуклеазы против субстрата суммарной дрожжевой РНК. Содержание ангиогенина в молоке определяют, используя комбинированную пробу конкурентного взаимодействия панкреатической рибонуклеазы и ангиогенина с плацентарным ингибитором РНКазы. О концентрации ангиогенина в молоке судят по количеству не связанной с ингибитором РНКазы. Количественное определение ангиогенина проводится в пятикратной повторности. По результатам анализа в исследуемом образце коровьего молока концентрация ангиогенина составляет 1,2 мг/л.
Пример 2. Осуществляется по примеру 1, используя в качестве сырья для количественного определения ангиогенина молозиво. При этом концентрация ангиогенина в молозиве, согласно способа количественного определения ангиогенина в молочном сырье, составляет 2,2 мг/л.
Пример 3. Осуществляется по примеру 1, используя в качестве сырья для количественного определения ангиогенина стародойное молоко. При этом концентрация ангиогенина в стародойном молоке, согласно способа количественного определения ангиогенина в молочном сырье, составляет 1,6 мг/л.
Пример 4. Осуществляется по примеру 1, используя в качестве сырья для определения ангиогенина козье молоко. При этом концентрация ангиогенина в козьем молоке, согласно способа количественного определения ангиогенина в молочном сырье, составляет 0,27 мг/л.
Сравнительная оценка определения количества ангиогенина в различных видах молочного сырья, согласно способа количественного определения ангиогенина, представлена в таблице.
Анализ данных таблицы свидетельствует о том, что метод является достоверным и может быть применен для различных видов молочного сырья. Предложенный способ, включающий очистку молочного сырья от РНКазы, позволяет оценить содержание ангиогенина в биологических жидкостях с высоким содержанием рибонуклеазы, а именно превышающим содержание ангиогенина в 8-20 раз. Нижний предел чувствительности метода составляет сотые доли мг/л. Достоверность измерений соответствует уровню значимости для биотехнологических процессов.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.
1. Fett J. W. , Strydom D.J., Lobb R.R., Aiderman E.V., Bethune J.L., Rioran J.F., Vallee B.L. 1985, Biochemistry, V.24, p.5480-5486.
2. Maes P. , Damart D., Rommens C., e.a., 1988, FEBS Lett, V. 24, p. 41-45.
3. Blaser J. Triebe S., Kopp C., Jscheshe H., 1993, Eur. J. Clin. Chem. Clin. Bio-chem., V.31, p. 513-516.
4. Bond M.D., 1988, Anai Biochemistry, V.173, p.166-173 (прототип).
5. Шидловская В.П. Ферменты молока. M.: Агропромиздат, 1985, с. 152.
Claims (1)
- Способ количественного определения ангиогенина в биологическом сырье путем проведения комбинированной пробы конкурентного взаимодействия панкреатической рибонуклеазы и ангиогенина с плацентарным ингибитором рибонуклеазы, отличающийся тем, что в качестве биологического сырья используют молоко, перед проведением комбинированной пробы конкурентного взаимодействия молоко обезжиривают центрифугированием, затем проводят хроматографическую очистку от избытка панкреатической рибонуклеазы, используя в качестве сорбента голубую агарозу, при этом определяют общую рибонуклеазную активность до хроматографической очистки на голубой агарозе и после нее против субстрата суммарной дрожжевой РНК.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96124515A RU2110066C1 (ru) | 1996-12-27 | 1996-12-27 | Способ количественного определения ангиогенина в биологическом сырье |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96124515A RU2110066C1 (ru) | 1996-12-27 | 1996-12-27 | Способ количественного определения ангиогенина в биологическом сырье |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2110066C1 true RU2110066C1 (ru) | 1998-04-27 |
| RU96124515A RU96124515A (ru) | 1998-09-20 |
Family
ID=20188631
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU96124515A RU2110066C1 (ru) | 1996-12-27 | 1996-12-27 | Способ количественного определения ангиогенина в биологическом сырье |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2110066C1 (ru) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2133464C1 (ru) * | 1998-06-25 | 1999-07-20 | Московский государственный университет прикладной биотехнологии | Способ количественного определения ангиогенина в молочном сырье |
| RU2175195C1 (ru) * | 2000-06-23 | 2001-10-27 | Московский государственный университет прикладной биотехнологии | Способ выделения белковой фракции, обогащенной ангиогенином |
| RU2182791C2 (ru) * | 2000-07-06 | 2002-05-27 | Московский государственный университет прикладной биотехнологии | Стерилизованное молоко, обогащенное ангиогенином |
| EP2293678A4 (en) * | 2008-05-14 | 2011-06-22 | Agriculture Victoria Serv Pty | ANGIOGENIC-ENRICHED MILK FRACTIONS |
| US8551547B2 (en) | 2006-11-10 | 2013-10-08 | Murray Goulburn Co-Operative Co., Limited | Process for the preparation of angiogenin |
| US9789168B2 (en) | 2008-05-14 | 2017-10-17 | Agriculture Victoria Services Pty Ltd | Use of angiogenin or angiogenin agonists for treating diseases and disorders |
| US9839676B2 (en) | 2012-05-10 | 2017-12-12 | Murray Goulburn Co-Operative Co., Limited | Methods of treating cancer using angiogenin or an angiogenin agonist |
-
1996
- 1996-12-27 RU RU96124515A patent/RU2110066C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Bond M.D. Anai Biochemistry. 1988 - v.173, p.166-173. * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2133464C1 (ru) * | 1998-06-25 | 1999-07-20 | Московский государственный университет прикладной биотехнологии | Способ количественного определения ангиогенина в молочном сырье |
| RU2175195C1 (ru) * | 2000-06-23 | 2001-10-27 | Московский государственный университет прикладной биотехнологии | Способ выделения белковой фракции, обогащенной ангиогенином |
| RU2182791C2 (ru) * | 2000-07-06 | 2002-05-27 | Московский государственный университет прикладной биотехнологии | Стерилизованное молоко, обогащенное ангиогенином |
| US8551547B2 (en) | 2006-11-10 | 2013-10-08 | Murray Goulburn Co-Operative Co., Limited | Process for the preparation of angiogenin |
| EP2293678A4 (en) * | 2008-05-14 | 2011-06-22 | Agriculture Victoria Serv Pty | ANGIOGENIC-ENRICHED MILK FRACTIONS |
| US9247766B2 (en) | 2008-05-14 | 2016-02-02 | Murray Goulburn Co-Operative Co., Limited | Angiogenin-enriched milk fractions |
| US9789168B2 (en) | 2008-05-14 | 2017-10-17 | Agriculture Victoria Services Pty Ltd | Use of angiogenin or angiogenin agonists for treating diseases and disorders |
| US10456453B2 (en) | 2008-05-14 | 2019-10-29 | Agriculture Victoria Services Pty Ltd | Use of angiogenin or angiogenin agonists for treating diseases and disorders |
| US9839676B2 (en) | 2012-05-10 | 2017-12-12 | Murray Goulburn Co-Operative Co., Limited | Methods of treating cancer using angiogenin or an angiogenin agonist |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Anema | The use of “lab-on-a-chip” microfluidic SDS electrophoresis technology for the separation and quantification of milk proteins | |
| Bonfatti et al. | Validation of a new reversed-phase high-performance liquid chromatography method for separation and quantification of bovine milk protein genetic variants | |
| Das et al. | Milk adulteration and detection: a review | |
| Erbersdobler et al. | Forty years of furosine–Forty years of using Maillard reaction products as indicators of the nutritional quality of foods | |
| Nouri et al. | Designing a direct ELISA kit for the detection of Staphylococcus aureus enterotoxin A in raw milk samples | |
| Erbersdobler et al. | Determination of furosine in heated milk as a measure of heat intensity during processing | |
| US20040092027A1 (en) | Rapid test for biological substances using ftir | |
| RU2110066C1 (ru) | Способ количественного определения ангиогенина в биологическом сырье | |
| CN108414628A (zh) | 一种牛奶中A2-β-酪蛋白的检测方法 | |
| Veloso et al. | Evaluation of cheese authenticity and proteolysis by HPLC and urea–polyacrylamide gel electrophoresis | |
| Friedman | Comparison of four different silver-staining techniques for salivary protein detection in alkaline polyacrylamide gels | |
| JPH05133938A (ja) | アガロースゲル電気泳動によるグリコシル化ヘモグロビンＨｂ Ａｌｃの分離法 | |
| Jenkins | Clinical application of capillary electrophoresis to unconcentrated human urine proteins | |
| Salazar-García et al. | Impact of chemical preservative in urine samples | |
| NL8200587A (nl) | Werkwijze voor een immunochemische enzymbepaling. | |
| Krizkova et al. | Comparison of Metallothionein Detection by Using Brdicka Reaction and Enzyme‐Linked Immunosorbent Assay Employing Chicken Yolk Antibodies | |
| EP1169647B1 (en) | Method for analyzing the amount of intraabdominal adipose tissue | |
| CN101294148B (zh) | 从心肌中提取纯化高铁肌红蛋白还原酶的方法 | |
| Saud et al. | Identification of chicken meat quality via rapid array isoelectric focusing with extraction of hemoglobin and myoglobin in meat sample | |
| Borgese et al. | Concentration of NADH-cytochrome b5 reductase in erythrocytes of normal and methemoglobinemic individuals measured with a quantitative radioimmunoblotting assay. | |
| Soler et al. | Serum amyloid A3 (SAA3), not SAA1 appears to be the major acute phase SAA isoform in the pig | |
| Arfuso et al. | Comparison of refractometric and biuretic methods for the assay of total protein in horse serum and plasma under various storage conditions | |
| JP4144117B2 (ja) | グルコースの測定方法及び測定装置 | |
| JP3490715B2 (ja) | ヘモグロビン前進性グルコシル化終末産物の検出方法 | |
| NZ525905A (en) | Method to diagnose transmissible spongiform encephalopathy (TSE) by determining amount of hematopoietic cells i.e. erythoid, megakaryocyte or platelet lineage present |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20101228 |