RU2108100C1 - Immunomodulating agent - Google Patents
Immunomodulating agent Download PDFInfo
- Publication number
- RU2108100C1 RU2108100C1 RU93016671A RU93016671A RU2108100C1 RU 2108100 C1 RU2108100 C1 RU 2108100C1 RU 93016671 A RU93016671 A RU 93016671A RU 93016671 A RU93016671 A RU 93016671A RU 2108100 C1 RU2108100 C1 RU 2108100C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- effect
- mice
- cells
- dose
- mitogen
- Prior art date
Links
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 title claims description 5
- 150000002391 heterocyclic compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 4
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 claims description 3
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 13
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001917 lymphotoxic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 17
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 12
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 6
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 6
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 6
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 6
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010000 Agranulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006313 Delayed Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010012434 Dermatitis allergic Diseases 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- LAZPBGZRMVRFKY-HNCPQSOCSA-N Levamisole hydrochloride Chemical compound Cl.C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 LAZPBGZRMVRFKY-HNCPQSOCSA-N 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к иммуномодуляторам и может быть использовано в медицине для профилактики и лечения заболеваний, связанных с нарушением иммунитета. The invention relates to immunomodulators and can be used in medicine for the prevention and treatment of diseases associated with impaired immunity.
В настоящее время существуют данные о том, что одним из ведущих механизмов развития аутоиммунных нарушений является активация T-клеток хелперов, сопровождающаяся увеличением продукции ростовых факторов для B-клеток, синтезом аутоантител, развитием иммунокомплексных нарушений в органах [1]. При этом представляется, что целенаправленная иммунокоррекция аутоиммунного синдрома должна быть связана с нормализацией функций T хелперов. Именно с избирательным T-лимфотропным действием связан терапевтический эффект левамизола - гетероциклического соединения (-)2,3,5,6-тетрагидро-6-финилимидазо-[2,1-b] -тиазола гидрохлорида, который может выполнять функцию иммуномодулятора, способного усиливать слабую реакцию клеточного иммунитета, ослаблять сильную и не действовать на нормальную. Левамизол как иммуностимулирующий препарат применяется с осторожностью, так как возможно не только иммуностимулирующее, но и иммунодепрессивное действие. Currently, there is evidence that one of the leading mechanisms for the development of autoimmune disorders is the activation of helper T cells, accompanied by an increase in the production of growth factors for B cells, synthesis of autoantibodies, and the development of immunocomplex disorders in organs [1]. It seems that targeted immunocorrection of autoimmune syndrome should be associated with the normalization of the functions of T helpers. The therapeutic effect of levamisole, a heterocyclic compound of (-) 2,3,5,6-tetrahydro-6-phenylimidazo [2,1-b] thiazole hydrochloride, which can serve as an immunomodulator that can enhance weak reaction of cellular immunity, weaken the strong and not act on the normal. Levamisole as an immunostimulating drug is used with caution, since not only an immunostimulating, but also an immunosuppressive effect is possible.
Кроме того, препарат может вызывать различные побочные явления вплоть до аллергических кожных реакций и агранулоцитоза [2]. In addition, the drug can cause various side effects up to allergic skin reactions and agranulocytosis [2].
Цель изобретения - поиск новых соединений, обладающих способностью регулировать клеточные механизмы иммунной системы. The purpose of the invention is the search for new compounds with the ability to regulate the cellular mechanisms of the immune system.
Задачей изобретения является установление иммуномодулирующих свойств нового гетероциклического соединения трис-(2-гидроксиэтил) аммоний индолил-3-тиоацетат формулы
или препарат ВМ-2-84.The objective of the invention is to establish the immunomodulating properties of a new heterocyclic compound tris- (2-hydroxyethyl) ammonium indolyl-3-thioacetate of the formula
or the drug BM-2-84.
Препарат получен взаимодействием индолил-3-тиоуксусной кислоты с триэтаноламином в этаноле при 70oC и соотношении реагентов 1:1 при нагревании в течение 5 мин по схеме
Исследуемое соединение представляет собой слегка окрашенное в желтоватый цвет кристаллическое вещество со слабым запахом, неограниченно растворяющееся в воде, растворяется в спирте, ацетоне и диоксане водных, не растворяется в эфире, углеводородах.The preparation was prepared by reacting indolyl-3-thioacetic acid with triethanolamine in ethanol at 70 ° C and a reagent ratio of 1: 1 when heated for 5 minutes according to the scheme
The test compound is a crystalline substance slightly colored in a yellowish color with a faint odor, soluble unlimitedly in water, soluble in alcohol, acetone and aqueous dioxane, insoluble in ether, hydrocarbons.
Состав и строение его доказаны методом ИК-спектроскопии, элементным анализом. В ИК-спектре ВМ-2-84 содержатся полосы поглощения в области 1610(COO-), 3230(NH-гетерил), 3300 (N+H), 2990(CH-алкил), 3430(OH) см-1.Its composition and structure are proved by IR spectroscopy, elemental analysis. The IR spectrum of BM-2-84 contains absorption bands in the region of 1610 (COO - ), 3230 (NH-heteryl), 3300 (N + H), 2990 (CH-alkyl), 3430 (OH) cm -1 .
Способ получения заявленного соединения основан на доступном промышленном сырье - крупнотоннажном продукте-триэтаноламине и доступной индидолил-3-тиоуксусной кислоте, являющейся полупродуктом для синтеза практически ценных соединений. Он прост в исполнении, не требует применения катализаторов, специального оборудования, растворителей дорогих и дефицитных, выделение целевого продукта осуществляется известными приемами с высоким выходом. Способ получения легко может быть воспроизведен в промышленном масштабе. The method of obtaining the claimed compound is based on available industrial raw materials - large-capacity product-triethanolamine and available indidolyl-3-thioacetic acid, which is an intermediate for the synthesis of practically valuable compounds. It is simple to perform, does not require the use of catalysts, special equipment, expensive and scarce solvents, the selection of the target product is carried out by known methods with a high yield. The production method can easily be reproduced on an industrial scale.
Пример 1. Синтез трис-(2-гидроксиэтил) аммоний индоли-3-тиоацетата. Example 1. Synthesis of tris- (2-hydroxyethyl) ammonium indole-3-thioacetate.
20,7 г (0,01 моль) индолил-3-тиоуксусной кислоты растворяют в 100 мл сухого этилового спирта и к раствору приливают раствор триэтаноламина 14,9 г (0,1 моль) в 15 мл спирта. При этом наблюдается саморазогревание. Затем реакционную смесь нагревают до кипения 70oC, выдерживают при 70oC мин и охлаждают до 15oC. К охлажденному раствору приливают при перемешивании 200 мл сухого эфира и перемешивание продолжают до полной выкристаллизации целевого продукта. Выход 32,04 г (90%). T плавления 92-93oC. Найдено, %:C 53,90; H 7,10; N 7,76; S 9,02. C16H24N2O5S. Вычислено, %:C 53,91; H 6,79; N 7,86; S 8,99.20.7 g (0.01 mol) of indolyl-3-thioacetic acid was dissolved in 100 ml of dry ethyl alcohol, and a solution of triethanolamine 14.9 g (0.1 mol) in 15 ml of alcohol was added to the solution. In this case, self-heating is observed. Then the reaction mixture is heated to a boil of 70 o C, kept at 70 o C min and cooled to 15 o C. To the cooled solution, 200 ml of dry ether are added with stirring and stirring is continued until the desired product crystallizes out completely. Yield 32.04 g (90%). T melting point 92-93 o C. Found,%: C 53.90; H 7.10; N, 7.76; S 9.02. C 16 H 24 N 2 O 5 S. Calculated,%: C 53.91; H 6.79; N, 7.86; S 8.99.
Изучение токсичности ВМ-2-84;б проведено на беспородных белых мышах весом 20 - 22 г при внутрибрюшинном, внутрижелудочном введении препарата. Изучалось резорбтивное действие препарата и хроническая токсичность. При внутрибрюшинном введении LD5--3000 мг/кг, при введении через рот LD5--4466 (3937 - 5001) кг/кг. Вещество не обладает кожно-нарывным и резорбтивным действием. В хроническом опыте при длительном применении препарата ВМ-2-84 в течение 5 мес в дозах 40 и 70 мг/кг отмечены определенные изменения в тканях сердца, печени, легких, почках, которые менее заметны в структурах коры головного мозга и селезенке белых мышей при сравнении с контролем.The study of the toxicity of BM-2-84; b was performed on outbred white mice weighing 20-22 g with intraperitoneal, intragastric administration of the drug. The resorptive effect of the drug and chronic toxicity were studied. With intraperitoneal administration of LD 5- -3000 mg / kg, with oral administration of LD 5- -4466 (3937 - 5001) kg / kg. The substance does not have a blistering and resorptive effect. In a chronic experiment with prolonged use of the drug BM-2-84 for 5 months at doses of 40 and 70 mg / kg, certain changes were noted in the tissues of the heart, liver, lungs, and kidneys, which are less noticeable in the structures of the cerebral cortex and spleen of white mice with comparison with control.
В хроническом опыте при введении препарата в дозе 10 мг/кг не выявлено отклонений в тканях органов животных. In a chronic experiment, when the drug was administered at a dose of 10 mg / kg, no abnormalities were found in the tissues of animal organs.
Таким образом, предлагаемое соединение относится к практически нетоксичным соединениям. Thus, the proposed compound relates to practically non-toxic compounds.
Иммуномодулирующий эффект ВМ-2-84 изучали на лимфоидных клетках мышей разных генотипов, клетках крови здоровых людей по способности влиять на:
спонтанную, митоген- и антигениндуцированную пролиферацию T и B-лимфоцитов мышей и людей в культуре in vitro;
IgM антителообразование in vivo;
гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ).The immunomodulating effect of BM-2-84 was studied on the lymphoid cells of mice of different genotypes, blood cells of healthy people by their ability to influence:
spontaneous, mitogen- and antigen-induced proliferation of T and B lymphocytes of mice and humans in vitro;
In vivo IgM antibody formation;
delayed hypersensitivity (HRT).
I. Митоген-индуцированную пролиферацию T-лимфоцитов мышей и человека оценивали по ответу на конканавалин A Con A, антиген-индуцированную пролиферацию T-лимфоцитов мышей - в однонаправленной смешанной культуре лимфоцитов MLC. Пролиферацию B спленоцитов оценивали по ответу на ЛПС, B лимфоцитов людей - по ответу на митоген лаконоса (МЛ)
Для постановки культуры клеток in viteo стерильно готовили суспензию клеток тимуса и селезенки мышей, содержащую 2•106 клеток/мл в полной культуральной среде, состоящей из RPMI 1640, дополненной 10% фетальной сыворотки, 10 мМ HEPES, 0,04 мМ 2-меркаптоэтанола, 2 мМ глютамина, 50 мкг/мл гентамицина. Реакцию проводили в 96-лучных планшетах (Ленинградский з-д мед. полимеров). Каждая проба выполнялась в триплетах. Конечная концентрация Con A (Pharmacia) составила 5, 10, 25 мкг/мл, использовали и субоптимальные дозы митогена - 0,5 и 1 мкг/мл. Конечная концентрация ЛПС E.Colli В5:055 составила 50, 100, 200 мкг/мл. Растворы ВМ-2-84 готовили на RPMI 1640 и вносили в культуру одновременно с Con A через 4, 24, и 48 ч от начала культивирования в конечных концентрациях 5, 50 и 250 мкг/мл. Результаты пролиферации на Т-клеточный митоген оценивали через 72 ч, на В клеточный митоген - через 120 ч по включению 3H тимидина, вносимого в дозе 1 мкКи/лунку за 4 ч до окончания культивирования. Оценку данных проводили как в абсолютных значениях (имп/мин), так и по индексу стимуляции (ИС):опыт им/мин/контроль имп/мин.I. Mitogen-induced proliferation of mouse and human T-lymphocytes was evaluated by response to concanavalin A Con A, antigen-induced proliferation of mouse T-lymphocytes in unidirectional mixed culture of MLC lymphocytes. Proliferation of B splenocytes was evaluated by response to LPS, B of human lymphocytes by response to mitogen of laconia (ML)
To establish an in viteo cell culture, a suspension of mouse thymus and spleen cells containing 2 x 10 6 cells / ml in a complete culture medium consisting of RPMI 1640 supplemented with 10% fetal serum, 10 mM HEPES, 0.04 mM 2-mercaptoethanol was sterile prepared. , 2 mM glutamine, 50 μg / ml gentamicin. The reaction was carried out in 96-beam tablets (Leningrad plant of medical polymers). Each sample was performed in triplets. The final concentration of Con A (Pharmacia) was 5, 10, 25 μg / ml, and suboptimal doses of mitogen were used - 0.5 and 1 μg / ml. The final LPS concentration of E. Colli B5: 055 was 50, 100, 200 μg / ml. VM-2-84 solutions were prepared on RPMI 1640 and introduced into the culture simultaneously with Con A at 4, 24, and 48 hours from the start of cultivation at final concentrations of 5, 50, and 250 μg / ml. The proliferation results for T-cell mitogen were evaluated after 72 hours, for B-cell mitogen - after 120 hours by incorporation of 3 H thymidine introduced at a dose of 1 μCi / well 4 hours before the end of cultivation. Data were evaluated both in absolute values (imp / min) and by stimulation index (IP): im / min experience / imp / min control.
При этом установлено, что ВМ-2-84 подавляет спонтанную (на 35 - 45%) и Con A индуцированную пролиферацию спленоцитов. Подавление митоген-индуцированной пролиферации спленоцитов при оптимальной дозе митогена (10 мкг/мкг) носило дозозависимый характер (фиг. 1). Подавление спонтанной и митоген-индуцированной пролиферации при оптимальной дозе митогена наблюдали на тимоцитах и спленоцитах мышей гибридов F1 двух видов: (C57BL/6•DBA/2)F1 и (CBA•C57BL/6)F1 (фиг. 2). Отчетливые иммунодепрессивные свойства ВМ-2-84 обнаружены в отношении антиген-индуцированной пролиферации Т-клеток в MLC (фиг. 3). It was found that BM-2-84 inhibits spontaneous (by 35 - 45%) and Con A-induced proliferation of splenocytes. Suppression of mitogen-induced proliferation of splenocytes at the optimal dose of mitogen (10 μg / μg) was dose-dependent (Fig. 1). The suppression of spontaneous and mitogen-induced proliferation at the optimal mitogen dose was observed on the thymocytes and splenocytes of mice of F1 hybrids of two types: (C57BL / 6 • DBA / 2) F1 and (CBA • C57BL / 6) F1 (Fig. 2). The distinct immunosuppressive properties of BM-2-84 were detected with respect to antigen-induced proliferation of T cells in MLC (Fig. 3).
Данные о влиянии ВМ-2-84 на спонтанную и Con A-индуцированную пролиферацию Т клеток крови здоровых лиц представлены в табл. 1. Data on the effect of BM-2-84 on spontaneous and Con A-induced proliferation of T blood cells of healthy individuals are presented in table. one.
Как видно из данных таблицы, ВМ-2-84 оказывает достоверное ингибирующее влияние на митоген-индуцированную пролиферацию Т-лимфоцитов здоровых людей. As can be seen from the table, BM-2-84 has a significant inhibitory effect on the mitogen-induced proliferation of T-lymphocytes in healthy people.
В описанных выше опытах препарат вносили in vitro в культуру клеток человека и мышей. Как видно из данных, представленных на фиг. 2, наблюдали также подавление спонтанной и митген-индуцированной пролиферации тимоцитов и спленоцитов мышей после введения ВМ-2-84 in vivo (внутрибрюшного) в дозе 50 мг/кг. In the experiments described above, the drug was introduced in vitro into the culture of human and mouse cells. As can be seen from the data presented in FIG. 2, suppression of the spontaneous and mitgen-induced proliferation of thymocytes and splenocytes of mice was also observed after administration of BM-2-84 in vivo (intraperitoneal) at a dose of 50 mg / kg.
Данные о влиянии ВМ-2-84 на пролиферацию В-клеток крови здоровых лиц под действием МЛ представлены в табл. 2. Data on the effect of BM-2-84 on the proliferation of blood B-cells of healthy individuals under the influence of ML are presented in table. 2.
Как видно из данных табл.2, ВМ-2-84 не оказывает существенного влияния на митоген-индуцированную пролиферацию Т-клеток крови здоровых лиц. As can be seen from the data in Table 2, BM-2-84 does not significantly affect the mitogen-induced proliferation of blood T-cells in healthy individuals.
Как видно из фиг. 5, ВМ-2-84 либо не оказывает влияния на ЛПС-стимулированную пролиферацию В спленоцитов (при оптимальной дозе митогена), либо стимулирует ее (при субоптимальной дозе ЛПС). As can be seen from FIG. 5, BM-2-84 either does not affect LPS-stimulated proliferation of B splenocytes (at the optimal dose of mitogen), or stimulates it (at a suboptimal dose of LPS).
Таким образом, анализируя представленные данные о влиянии ВМ-2-84 на пролиферацию Т- и В-лимфоцитов мышей и людей, можно отметить отчетливое действие препарата. Важно отметить, что подавление пролиферации Т-клеток ВМ-2-84 не связано с нарушением жизнеспособности этих клеток. Thus, analyzing the data presented on the effect of BM-2-84 on the proliferation of T and B lymphocytes in mice and humans, a distinct effect of the drug can be noted. It is important to note that the suppression of proliferation of T-cells BM-2-84 is not associated with a violation of the viability of these cells.
Авторами установлено:
жизнеспособность Т лимфоцитов мышей под действием ВМ-2-84 не снижается;
в опытах по определению лимфотоксического действия ВМ-2-84 на модели инактивации эндогенных стволовых кроветворных клеток аллогенными Т-лимфоцитами установлено, что ВМ-2-84 не обладает лимфотоксическими свойствами.The authors found:
the viability of T lymphocytes of mice under the influence of VM-2-84 is not reduced;
In experiments to determine the lymphotoxic effect of BM-2-84 on a model of inactivation of endogenous hematopoietic stem cells by allogeneic T-lymphocytes, it was found that BM-2-84 does not have lymphotoxic properties.
II. Влияние ВМ-2-84 на первичный гуморальный иммунный ответ (АОК) оценивали методом локального гемолиза по способности клеток селезенки продуцировать IgM антитела к эритроцитам барана (ЭБ) у интактных мышей линии С57BL/6 и (С57BL/6•DBA/2)F1 6 - 8-недельного возраста, полученных из питомника "Столбовая". Контрольные и опытные группы состояли не менее, чем из 10 мышей. ВМ-2-84 вводили в различных внутрибрюшинно, контрольным мышам в таком же объеме вводили растворитель (воду). Через 2 ч после последнего введения препарата мышей иммунизировали внутривенно 2•108ЭБ в объеме 0,5 мл. На 4-е сут после иммунизации животных забивали и определяли количество АОК по числу гемолитических бляшек модифицированным методом локального гемолиза в полужидкой среде [7]. Результаты исследований представлены в табл. 3.II. The effect of BM-2-84 on the primary humoral immune response (AOK) was evaluated by local hemolysis by the ability of spleen cells to produce IgM antibodies to ram erythrocytes (EB) in intact C57BL / 6 and (C57BL / 6 • DBA / 2)
Как видно из табл. 3, введение мышам С57BL/6 и B6D2F1 препарата ВМ-2-84 обнаруживает дозозависимое стимулирующее действие на гуморальный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген. As can be seen from the table. 3, the administration of BM-2-84 preparation to C57BL / 6 and B6D2F1 mice shows a dose-dependent stimulating effect on the humoral immune response to the thymus-dependent antigen.
III. Влияние соединения ВМ-2-84 на клеточный иммунный ответ оценивали по степени выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ): величины отека лапы после введения разрешающей дозы ЭБ сенсибилизированным животным, которым до сенсибилизации вводили ВМ-2-84. При этом оценивали эффект соединения на продуктивную фазу ГЗТ. Для сенсибилизации мышам вводили внутрибрюшинно 0,5 мл 0,5%-ного р-ра ЭБ. На 4-е сут под апоневроз задней лапы вводили разрешающую дозу ЭБ - 0,05 мл 50% ЭБ, в противоположную лапу - 0,05 мл среды 199. Через 24 ч производили учет реакции по отечности стопы в мм. III. The effect of compound BM-2-84 on the cellular immune response was assessed by the severity of the delayed-type hypersensitivity reaction (HRT): paw edema after administration of an allowable dose of EB to sensitized animals, which were injected with VM-2-84 before sensitization. In this case, the effect of the compound on the productive phase of HRT was evaluated. For sensitization, mice were injected intraperitoneally with 0.5 ml of a 0.5% solution of EB. On the 4th day, under the aponeurosis of the hind paw, a resolving dose of EB was introduced - 0.05 ml of 50% EB, and in the opposite paw - 0.05 ml of medium 199. After 24 hours, the reaction was recorded for the swelling of the foot in mm.
При этом было установлено, что трехкратное введение ВМ-2-84 интактным мышам B6D2F1 в дозе 50 мг/кг вызывает более, чем двухкратное подавление ГЗТ; выраженность отека лапы, в которую вводили разрешающую дозу антигена, у контрольных животных составила 47%, у мышей, предварительно получавших ВМ-2-84, выраженность отека составила 21,9%. It was found that a three-time administration of BM-2-84 to intact B6D2F1 mice at a dose of 50 mg / kg causes more than a two-fold suppression of HRT; the severity of paw edema, into which the resolving dose of antigen was introduced, was 47% in control animals, and in mice previously treated with BM-2-84, the severity of edema was 21.9%.
Таким образом, анализируя данные о влиянии ВМ-2-84 на интактных мышей B6D2F1, необходимо отметить его оппозитное влияние на АОК и ГЗТ; в дозе 50 мг/кг он стимулирует АОК и подавляет ГЗТ, что косвенно можно расценить как преимущественное влияние на выработку Th1 и/или Th2 соответственно цитокинов ИЛ-2 (определяющего развитие клеточного иммунного ответа) и/или ИЛ-4 (определяющего антителообразование). Thus, analyzing the data on the effect of VM-2-84 on intact B6D2F1 mice, it is necessary to note its opposite effect on AOK and HRT; at a dose of 50 mg / kg, it stimulates AOK and suppresses HRT, which can indirectly be regarded as a predominant effect on the production of Th1 and / or Th2, respectively, of IL-2 cytokines (which determines the development of the cellular immune response) and / or IL-4 (which determines antibody formation).
Таким образом, на основе доступного химического сырья синтетическим путем с высоким выходом получен водорастворимый высокоактивный, нетоксичный новых иммуномодулятор - трис-(2-гидрооксиэтил) аммоний индолил-3-тиоацетат. Учитывая его избирательное Т-лимфотропное действие, предлагаемый препарат может быть использован для создания лекарственного средства для лечения широкого круга заболеваний, связанных с нарушением иммунитета. Thus, based on the available chemical raw materials, a water-soluble, highly active, non-toxic new immunomodulator tris- (2-hydroxyethyl) ammonium indolyl-3-thioacetate was synthesized in high yield using a high yield. Given its selective T-lymphotropic effect, the proposed drug can be used to create a medicinal product for the treatment of a wide range of diseases associated with impaired immunity.
Литература
1. Hahn B.K., Ando D. et. ak. Amer. J. Immunol., 1988, 85, 32 - 34.Literature
1. Hahn BK, Ando D. et. ak. Amer. J. Immunol., 1988, 85, 32-34.
2. Машковский М. Д. Лекарственные средства, М., Медицина, 1988, ч. 2, 169-170. 2. Mashkovsky M. D. Medicines, M., Medicine, 1988,
3. Заявка Великобритании N 2093693, кл. A 61 K 31/205; C 07 C 59/64; C 07 D 209/128. Ciba-Geigy АО (Великобритания), приор. 24.02.81. 3. British application N 2093693, CL A 61 K 31/205; C 07 C 59/64; C 07 D 209/128. Ciba-Geigy AO (UK), prior. 02.24.81.
4. Заявка США N 4556672, кл. A 61 K 31/40; C 07 D 209/304, Pfizer Inc. (США), приор. 19.03.84. 4. US Application N 4556672, cl. A 61 K 31/40; C 07 D 209/304, Pfizer Inc. (USA), prior. 03/19/84.
5. Заявка СССР N 1401850, кл. A 61 K 31/40; C 07 D 209/30. Иркутский институт органической химии СО АН СССР, приор. 18.07.86. 5. Application of the USSR N 1401850, cl. A 61 K 31/40; C 07 D 209/30. Irkutsk Institute of Organic Chemistry, Siberian Branch of the Academy of Sciences of the USSR, prior. 07/18/86.
6. Kimball P.M., Kerman R.H. et. al. Transplantation. 1991, 52, 2, 486 - 490. 6. Kimball P.M., Kerman R.H. et. al. Transplantation. 1991, 52, 2, 486-490.
7. Cunningham A.J., Szenberg A. Immuunol. 1968, 15, 559 - 606.0 7. Cunningham A.J., Szenberg A. Immuunol. 1968, 15, 559 - 606.0
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93016671A RU2108100C1 (en) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | Immunomodulating agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93016671A RU2108100C1 (en) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | Immunomodulating agent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU93016671A RU93016671A (en) | 1995-05-10 |
| RU2108100C1 true RU2108100C1 (en) | 1998-04-10 |
Family
ID=20139569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU93016671A RU2108100C1 (en) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | Immunomodulating agent |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2108100C1 (en) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2228178C1 (en) * | 2002-12-23 | 2004-05-10 | Лимонов Виктор Львович | Immunodepressant |
| RU2240794C1 (en) * | 2003-12-02 | 2004-11-27 | Лимонов Виктор Львович | Immunomodulating agent |
| RU2240793C1 (en) * | 2003-12-02 | 2004-11-27 | Лимонов Виктор Львович | Anti-tumor agent |
| RU2252760C1 (en) * | 2003-12-08 | 2005-05-27 | Лимонов Виктор Львович | Method for treating autoimmune diseases |
| RU2253448C1 (en) * | 2003-12-02 | 2005-06-10 | Лимонов Виктор Львович | Immunosupressor |
| RU2257216C2 (en) * | 2003-06-11 | 2005-07-27 | Ханис Александр Юрьевич | Immunomodulating agent "ribotab" |
| RU2296761C2 (en) * | 2005-04-28 | 2007-04-10 | Федеральное государственное унитирное предприятие Государственный научно-исследовательский институт органической химии и технологии (ФГУП ГосНИИОХТ) | 1-hexadecyl-r-(-)-3-oxy-1-azoniabicyclo[2.2.2]octane bromide as immunomodulator with antitumor, bacteriostatic and anti-aggregation properties and method for its preparing |
| WO2007073231A1 (en) * | 2005-12-23 | 2007-06-28 | Victor Lvovoch Limonov | Agent for treating tumoral diseases, a method for the production thereof and a method for treating tumoral diseases |
| RU2321589C2 (en) * | 2005-08-19 | 2008-04-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт органической химии и технологии "(ФГУП "ГосНИИОХТ" ) | Method for preparing 1-hexadecyl-r-(-)-3-hydroxy-1-azoniabicyclo[2.2.2]octane bromide - immunomodulator eliciting antitumor, bacteriostatic and anti-aggregative properties |
| RU2642778C2 (en) * | 2016-04-04 | 2018-01-26 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук | Method for obtaining of 1-r-indole-3-ylsulfanylacetates of (2-hydroxyethyl)ammonium |
-
1993
- 1993-03-31 RU RU93016671A patent/RU2108100C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Hahn B.K., Ando D. et. al. Amer.J.Immunol. 1988, 85, p. 32 - 34. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1988, т. 2, с. 169 - 170. Cunningham A.J., Szenberg A. Immunol., 1968, 15, p. 559 - 606. * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2228178C1 (en) * | 2002-12-23 | 2004-05-10 | Лимонов Виктор Львович | Immunodepressant |
| RU2257216C2 (en) * | 2003-06-11 | 2005-07-27 | Ханис Александр Юрьевич | Immunomodulating agent "ribotab" |
| RU2240794C1 (en) * | 2003-12-02 | 2004-11-27 | Лимонов Виктор Львович | Immunomodulating agent |
| RU2240793C1 (en) * | 2003-12-02 | 2004-11-27 | Лимонов Виктор Львович | Anti-tumor agent |
| RU2253448C1 (en) * | 2003-12-02 | 2005-06-10 | Лимонов Виктор Львович | Immunosupressor |
| RU2252760C1 (en) * | 2003-12-08 | 2005-05-27 | Лимонов Виктор Львович | Method for treating autoimmune diseases |
| RU2296761C2 (en) * | 2005-04-28 | 2007-04-10 | Федеральное государственное унитирное предприятие Государственный научно-исследовательский институт органической химии и технологии (ФГУП ГосНИИОХТ) | 1-hexadecyl-r-(-)-3-oxy-1-azoniabicyclo[2.2.2]octane bromide as immunomodulator with antitumor, bacteriostatic and anti-aggregation properties and method for its preparing |
| RU2321589C2 (en) * | 2005-08-19 | 2008-04-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт органической химии и технологии "(ФГУП "ГосНИИОХТ" ) | Method for preparing 1-hexadecyl-r-(-)-3-hydroxy-1-azoniabicyclo[2.2.2]octane bromide - immunomodulator eliciting antitumor, bacteriostatic and anti-aggregative properties |
| WO2007073231A1 (en) * | 2005-12-23 | 2007-06-28 | Victor Lvovoch Limonov | Agent for treating tumoral diseases, a method for the production thereof and a method for treating tumoral diseases |
| RU2642778C2 (en) * | 2016-04-04 | 2018-01-26 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук | Method for obtaining of 1-r-indole-3-ylsulfanylacetates of (2-hydroxyethyl)ammonium |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH03504122A (en) | Antiviral, antitumor, antimetastatic, immune system enhancing nucleosides and nucleotides | |
| JPS62240619A (en) | Anticancer | |
| EP1061932B1 (en) | Pharmaceutical composition containing extracts of cervus nippon antlers having growth-stimulating activities of hematopoietic stem cells and megakaryocytes | |
| RU2108100C1 (en) | Immunomodulating agent | |
| FI89369B (en) | For the preparation of active pharmaceutical ingredients Active 3-L-pyroglutamoyl-L-thiazolidine-4-carboxylic acid | |
| US7846939B2 (en) | Salts and mixture of 9-oxoacridine-10-acetic acid with 1-alkylamino-1-desoxy-polyols, pharmaceutical compositions containing said agents and treatment methods | |
| US4843092A (en) | Immunosuppressive agent | |
| RU2084449C1 (en) | 1-benzyl-2-oxotryptamine hydrochloride and its derivatives showing hepatoprotective activity | |
| DE3217769A1 (en) | MITOMYCON ANALOG CONNECTIONS | |
| US4737521A (en) | Suramin sodium for use as an immunostimulant | |
| DE69626548T2 (en) | MACROCYCLIC COMPOUNDS CONSISTING OF CARBON SUBOXI GROUPS | |
| US4883808A (en) | Condensation products of cyclic diketones and ascorbic acid as immunomodulatory agents | |
| FI75802B (en) | FRAMEWORK FOR FRAMSTAELLNING AV SAOSOM IMMUNOSTIMULERANDE AEMNEN ANVAENDBARA BIS- OCH POLYDISULFIDER. | |
| PT1443943E (en) | Process for reacting alkaloids and use of the reaction products in the preparation of medicaments | |
| DE69624236T2 (en) | SELECTED SOLUBLE ESTERS OF INDOLCARBAZOLES CONTAINING HYDROXYL | |
| EP0123446B1 (en) | 2-furylbutyrolactone derivatives, their preparation, compositions containing them, and their use for the modulation of the immune system in mammals | |
| SU1069385A1 (en) | Bromide of 2-amino-(1-adamantylcarbonylmethyl)-1-(beta-piperidinoethyl)-benzimidazolium displaying immuno-suppression activity | |
| RU2228178C1 (en) | Immunodepressant | |
| US5098933A (en) | Pharmaceutically useful Michael addition products of unsaturated aldehydes and ketones and ascorbic acid | |
| CA1326020C (en) | Pharmaceutically useful michaels' addition products of unsaturated aldehydes and ketones with ascorbic acid | |
| US4518611A (en) | 2-Furylbutyrolactone modulation of the immune system in mammals | |
| RU2074856C1 (en) | Orotate of n, п,п'-diaminodiphenyl sulfone having antileprosous and immunotropic activity | |
| RU2165926C2 (en) | 2-methyl-4-amino-6-hydroxypyrimidine and methods of its synthesis (variants) | |
| RU2245142C1 (en) | Immunomodulating agent | |
| JP2535633B2 (en) | Ethyl 6-bromo-5-oxy-4-dimethylaminomethyl-1-methyl-2-phenylthiomethylindole-3-carboxylate hydrochloride monohydrate, its preparation method and antiviral properties containing it Of drugs with inflammatory, interferon-inducing and immunomodulating effects |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070401 |