RU2107098C1 - Method of preparing high-deuterated nucleosides and nucleotides - Google Patents
Method of preparing high-deuterated nucleosides and nucleotides Download PDFInfo
- Publication number
- RU2107098C1 RU2107098C1 RU95118778A RU95118778A RU2107098C1 RU 2107098 C1 RU2107098 C1 RU 2107098C1 RU 95118778 A RU95118778 A RU 95118778A RU 95118778 A RU95118778 A RU 95118778A RU 2107098 C1 RU2107098 C1 RU 2107098C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- labeled
- medium
- nucleosides
- nucleotides
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 title claims abstract description 19
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims abstract description 17
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 13
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 claims abstract description 11
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 claims abstract description 8
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims abstract description 7
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 claims abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-MICDWDOJSA-N deuteriomethanol Chemical compound [2H]CO OKKJLVBELUTLKV-MICDWDOJSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract 2
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 claims description 17
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 16
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 abstract description 6
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 5
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPXZQMKKFWMMGK-KQYNXXCUSA-K IDP(3-) Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 JPXZQMKKFWMMGK-KQYNXXCUSA-K 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical class OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000010224 hepatic metabolism Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к области микробиологии и касается способа получения высокодейтерированных нуклеозидов и нуклеотидов. The present invention relates to the field of microbiology and relates to a method for producing highly deuterated nucleosides and nucleotides.
Нуклеозиды и нуклеотиды широко используются в медицине для лечения ряда заболеваний, связанных с нарушениями в деятельности сердца, печени, клеточного метаболизма. Так, лекарственный препарат рибоксин, созданный на основе препарата инозина, оказывает стимулирующее действие на окислительно-восстановительные процессы в клетке, улучшает ее энергетический баланс (Европ. пат. N 0 423 617, Европ. пат. N 0 423 618, патент ГДР N 296 687). Nucleosides and nucleotides are widely used in medicine for the treatment of a number of diseases associated with disorders in the activity of the heart, liver, and cellular metabolism. So, the drug riboxin, created on the basis of the inosine preparation, has a stimulating effect on the redox processes in the cell, improves its energy balance (European Pat. Pat. N 0 423 617, European Pat. Pat. N 0 423 618, patent GDR N 296 687).
Дейтериймеченные аналоги этих соединений необходимы для разнопрофильных биохимических, фармакокинетических и других исследований, в частности для структурно-функциональных исследований нуклеиновых кислот методами ЯМР. Для данных целей применяют препараты нуклеозидов и нуклеотидов, в которых не менее половины атомов водорода в молекуле должны быть замещены на дейтерий. Поскольку высокодейтерированные нуклеозиды и нуклеотиды используют при получении меченных диагностических лекарственных препаратов (АМФ, АТФ и др.), то разработка путей наиболее экономичного получения этих соединений в препаративных количествах является весьма актуальной задачей. Deuterium-labeled analogues of these compounds are necessary for diverse biochemical, pharmacokinetic and other studies, in particular for structural-functional studies of nucleic acids by NMR. For these purposes, nucleoside and nucleotide preparations are used in which at least half of the hydrogen atoms in the molecule must be replaced by deuterium. Since highly deuterated nucleosides and nucleotides are used in the preparation of labeled diagnostic drugs (AMP, ATP, etc.), the development of ways for the most economical preparation of these compounds in preparative quantities is a very urgent task.
К настоящему времени меченные стабильными изотопами нуклеозиды и нуклеотиды получают химическими многостадийными методами (Европ. пат. N 0 203 696, Авт. свид. СССР N 1251509). Из биотехнологических методов получения таких соединений следует отметить метод, основанный на гидролизе и химической трансформации компонентов ДНК биомассы микроводорослей, например, Chlorela vulgaris, выращиваемых в жидких средах с тяжелой водой с уровнем дейтерирования до 9,9% (Заявка N 62-6793, Япония, Европ. пат. N 0 220 951). Поскольку присутствие высоких концентраций оксида дейтерия в среде ингибирует рост и развитие большинства видов микроорганизмов, концентрации целевых продуктов в биологическом материале очень низкие. To date, nucleosides and nucleotides labeled with stable isotopes are obtained by chemical multistage methods (Europ. Pat. N 0 203 696, Auth. Certificate. USSR N 1251509). Among the biotechnological methods for the preparation of such compounds, a method based on the hydrolysis and chemical transformation of the DNA components of the microalgae biomass, for example, Chlorela vulgaris, grown in liquid media with heavy water with a deuteration level of up to 9.9% (Application N 62-6793, Japan, European Pat. N 0 220 951). Since the presence of high concentrations of deuterium oxide in the medium inhibits the growth and development of most types of microorganisms, the concentrations of the target products in the biological material are very low.
С дальнейшим развитием вида биотехнологических подходов появилась возможность усовершенствовать стандартные методы для получения меченных нуклеозидов и нуклеотидов, однако эти методы применяли для получения меченных радиоактивных тритием соединений. Так, в патентной литературе описаны химико-ферментационные методы получения тритилированных нуклеозидов с помощью экстрактов клеток и самих клеток микроорганизмов, обладающих ферментационной активностью (Авт. свид. Чехословакии N 267 846). With the further development of the type of biotechnological approaches, it became possible to improve standard methods for producing labeled nucleosides and nucleotides, however, these methods were used to obtain tritium-labeled compounds. So, in the patent literature describes chemical-fermentation methods for producing tritylated nucleosides using extracts of cells and the cells of microorganisms themselves with fermentation activity (Auth. Certificate. Czechoslovakia N 267 846).
В ряде патентов сообщают о методах получения сайт-специфично меченных тритием полидезоксинуклеотидов (Междунар. заявка N 89/09780). Особенности ныне существующих методов состоят в том, что получение этих соединений почти всегда производят в несколько химико-ферментационных стадий из рибозо-1-фосфатов и других исходных субстратов, специфически меченных радиоактивным тритием в водной среде в присутствии иммобилизованных в полиакридном геле ферментных препаратов, выделяемых из бактерий, например, Esherichia alcalescens и др. A number of patents report methods for producing site-specific tritium-labeled polydeoxynucleotides (International Application N 89/09780). The features of the existing methods are that the preparation of these compounds is almost always carried out in several chemical-fermentation steps from ribose-1-phosphates and other starting substrates specifically labeled with radioactive tritium in an aqueous medium in the presence of enzyme preparations immobilized in a polyacrid gel isolated from bacteria, for example, Esherichia alcalescens, etc.
Заслуживают упоминания также методы получения нуклеотидов, меченных отличными от трития нерадиоактивными дейтериевыми метками (Междунар. заявка N 92/00989, Междунар. заявка N 91/13902, патент ГДР N 295 855). Согласно этим запатентованным способам включение метки в рибонуклеозиды не превышает 40% и таким образом нужные продукты не удовлетворяют требованиям по содержанию метки. Also noteworthy are methods for producing nucleotides labeled with non-radioactive deuterium labels other than tritium (International application N 92/00989, International application N 91/13902, patent GDR N 295 855). According to these patented methods, the inclusion of the label in ribonucleosides does not exceed 40% and thus the desired products do not satisfy the label content requirements.
Основной стратегией биосинтеза дейтерий-меченных продуктов является использование для биотехнологических целей не обычных продуцентов, а заранее адаптированных к высокому содержанию требуемого изотопа форм микроорганизмов. The main strategy for the biosynthesis of deuterium-labeled products is to use, for biotechnological purposes, not ordinary producers, but pre-adapted forms of microorganisms adapted to the high content of the required isotope.
Настоящее изобретение позволяет упростить процедуру получения высокодейтерированных нуклеозидов, в частности инозина и тимидина. The present invention allows to simplify the procedure for producing highly deuterated nucleosides, in particular inosine and thymidine.
Процесс получения высокодейтерированных нуклеозидов и нуклеотидов заключается в том, что штамм-продуцент нуклеотида рода Bacillus культивируют в полностью дейтерированной среде. The process of obtaining highly deuterated nucleosides and nucleotides consists in the fact that the producer strain of the nucleotide of the genus Bacillus is cultivated in a fully deuterated medium.
В качестве полностью дейтерированных компонентов среды могут быть использованы гидролизаты выращенной на дейтероводе и дейтерометаноле биомассы метилотрофных бактерий Brevibacterium methylicum. As fully deuterated components of the medium, hydrolysates of Brevibacterium methylicum biomass grown on deuterium and deuteromethanol can be used.
В качестве полноценной дейтерированной среды может быть также использован гидролизат биомассы штамма-продуцента, выращенного на дейтерированной среде. As a complete deuterated medium, a hydrolyzate of the biomass of the producer strain grown on the deuterated medium can also be used.
Штаммы-продуцент нуклеозида или нуклеотида являются специальными генетически сконструированными штаммами, которые способны продуцировать и секретировать нуклеозиды и нуклеотиды в ферментационную среду. Nucleoside or nucleotide producing strains are special genetically engineered strains that are capable of producing and secreting nucleosides and nucleotides into a fermentation medium.
Культивирование этих штаммов в полностью дейтерированной среде приводит к образованию высокодейтерированных нуклеозидов и нуклеотидов. The cultivation of these strains in a fully deuterated medium leads to the formation of highly deuterated nucleosides and nucleotides.
Так, например, для получения высокодейтерированного инозина может быть использован штамм вида Bacillus subtilis, а для получения меченного тимидина - штамма вида Bacillus amyloliguefaciens,
Преимущество предлагаемого метода получения высокодейтерированных нуклеозидов заключается в том, что генетически сконструированные штаммы B. subtilis и B. amyloliquefaciens способны к росту на средах, содержащих максимальные концентрации оксида дейтерия.So, for example, to obtain highly deuterated inosine, a strain of the species Bacillus subtilis can be used, and to obtain labeled thymidine, a strain of the species Bacillus amyloliguefaciens,
An advantage of the proposed method for producing highly deuterated nucleosides is that genetically engineered strains of B. subtilis and B. amyloliquefaciens are capable of growth on media containing maximum concentrations of deuterium oxide.
Способ позволяет заменить глюкозу и необходимые аминокислоты на гидролизаты дейтерий-меченной биомассы метилотрофных бактерий Brevibacterium methylicum или на гидролизаты дейтерий-меченной биомассы Bacillus subtilis, содержащие в своем составе соединения, которые могут служить источниками углерода и ростовых факторов. The method allows to replace glucose and essential amino acids with hydrolysates of deuterium-labeled biomass of methylotrophic bacteria Brevibacterium methylicum or hydrolysates of deuterium-labeled biomass of Bacillus subtilis containing compounds that can serve as sources of carbon and growth factors.
Способ характеризуется отсутствием большого количества отходов: согласно схеме дейтерия-меченная биомасса базовых штаммов, предварительно гидролизованная в DCl, возвращается в цикл в качестве ростовых факторов. The method is characterized by the absence of a large amount of waste: according to the scheme, deuterium-labeled biomass of the base strains, previously hydrolyzed in DCl, is returned to the cycle as growth factors.
Способ также характеризуется высокой степенью изотопного обогащения дейтерий-меченных нуклеозидов (62,5% атомов водорода в молекуле замещены на дейтерий) и высокими выходами целевых продуктов. The method is also characterized by a high degree of isotopic enrichment of deuterium-labeled nucleosides (62.5% of the hydrogen atoms in the molecule are replaced by deuterium) and high yields of target products.
Пример 1. Example 1
Готовится жидкая посевная среда следующего состава, мас.%:
Глюкоза техническая - 2,0;
Источник ростовых факторов - белково-витаминный концентрат (БВК) - 1,0;
Пептон - 1,0,
NaCl - 0,25,
Тяжелая вода - 100.Preparing a liquid seed medium of the following composition, wt.%:
Technical glucose - 2.0;
The source of growth factors is protein-vitamin concentrate (BVK) - 1.0;
Peptone - 1.0,
NaCl - 0.25,
Heavy water - 100.
Посевной материал выращивают в колбах емкостью 250 мл, содержащих 20 мл среды на качалке, дающей 240 - 260 об/мин при 34oC в течение 24 ч. Посевной материал в количестве 4% переносят в ферментационную среду следующего состава, мас.%:
Глюкоза техническая - 12,0;
Источник ростовых факторов - автолизованная при 0,8 атм (в D2O) дейтерий-меченная биомасса метилотрофных бактерий - 2,5,
NH4NO3 - 3,0,
MgSO4 - 0,5,
Мел - 2,0,
Тяжелая вода - 100.The seed is grown in 250 ml flasks containing 20 ml of medium on a shaker, giving 240 - 260 rpm at 34 o C for 24 hours. The seed in an amount of 4% is transferred to a fermentation medium of the following composition, wt.%:
Technical glucose - 12.0;
The source of growth factors is autolysed at 0.8 atm (in D 2 O) deuterium-labeled biomass of methylotrophic bacteria - 2.5,
NH 4 NO 3 - 3.0,
MgSO 4 - 0.5,
Chalk - 2.0,
Heavy water - 100.
Доводят pH среды 7,0 - 7,2 с помощью 2N раствора KOH (в D2O) перед стерилизацией и стерилизуют при 0,8 атм в течение 30 мин.The pH of the medium was adjusted to 7.0 - 7.2 with a 2N KOH solution (in D 2 O) before sterilization and sterilized at 0.8 atm for 30 minutes.
Клетки штамма B.subtilis N B3157 засевают в титре 2•107 клеток. мл. Процесс ферментации осуществляют в колбах емкостью 750 мл, содержащих 50 мл среды на качалке, дающей 240 - 260 об/мин, что соответствует скорости растворения кислорода 4,0-O2 л/ч при 34oC. После 7 суток ферментации в культуральной жидкости накапливается 8,2 г/л инозина, не менее 60% водорода (связи C-H), в котором замещены на дейтерий (данные ЯМР и МС).The cells of the strain B.subtilis N B3157 are seeded in a titer of 2 • 10 7 cells. ml The fermentation process is carried out in 750 ml flasks containing 50 ml of medium on a shaker, giving 240 - 260 rpm, which corresponds to a dissolution rate of oxygen of 4.0-O 2 l / h at 34 o C. After 7 days of fermentation in the culture fluid 8.2 g / l of inosine accumulate, at least 60% hydrogen (CH bonds), in which they are replaced by deuterium (NMR and MS data).
По завершении ферментации клетки осаждают центрифугированием (5000 об/мин, 20 мин), культуральную жидкость, содержащую дейтерий-меченный инозин упаривают до объема в два раза меньше исходного. Белковые примеси удаляют, осаждая их 2-кратным избытком ацетона, удаляют ацетон упариванием в вакууме при 10 мм рт.ст. Осветление культуральной жидкости проводят адсорбцией на 5 г активированного угля. Затем осветленную культуральную жидкость упаривают в вакууме при 10 мм рт.ст. до сухого остатка. Инозин в виде кристаллов выделяют, осаждая его из насыщенного метанола. Upon completion of the fermentation, the cells are precipitated by centrifugation (5000 rpm, 20 min), the culture fluid containing deuterium-labeled inosine is evaporated to a volume half that of the original. Protein impurities are removed by precipitating them with a 2-fold excess of acetone, acetone is removed by evaporation in vacuo at 10 mm Hg. Clarification of the culture fluid is carried out by adsorption on 5 g of activated carbon. Then the clarified culture fluid is evaporated in vacuo at 10 mm Hg. to dry residue. Inosine is isolated in the form of crystals, precipitating it from saturated methanol.
Пример 2. Example 2
Культура, состав агаризованной среды, количество посевного материала и условия ферментации и выделение инозина из культуральной жидкости те же, что в примере 1. Отличие состоит в составе ферментационной среды, а именно дейтерий-меченная биомасса метилотрофных бактерий заменена на биомассу самого штамма-продуцента B. subtilis, полученную после ферментации на средах, максимально насыщенных оксидом дейтерия. Выход инозина после 7 суток ферментации такой же, как в примере 2. The culture, composition of the agar medium, the amount of seed and fermentation conditions and the release of inosine from the culture fluid are the same as in Example 1. The difference is in the composition of the fermentation medium, namely, deuterium-labeled biomass of methylotrophic bacteria is replaced by the biomass of producer strain B. subtilis obtained after fermentation in media maximally saturated with deuterium oxide. The output of inosine after 7 days of fermentation is the same as in example 2.
Пример 3. Example 3
Состав агаризованной среды, количество посевного материала и условия ферментации те же, что и в примере 1. Отличие состоит в использовании в качестве продуцента тимидина штамма Bacillus amyloliquefaciens N B6843. При культивировании штамма B. amyloliquefaciens на такой среде образуется 3,0 г/л тимидина, меченного дейтерием, с содержанием D не менее 60%. The composition of the agar medium, the amount of seed and the fermentation conditions are the same as in Example 1. The difference is in the use of the Bacillus amyloliquefaciens N B6843 strain as thymidine producer. When cultivating a strain of B. amyloliquefaciens on this medium, 3.0 g / l of thymidine labeled with deuterium is formed with a D content of at least 60%.
Таким образом, заявленный способ позволяет:
упростить процедуру получения дейтерий-меченных нуклеозидов и нуклеотидов, в том числе инозина и тимидина, сведя ее к ферментации и к непосредственному выделению нуклеозидов из среды;
сделать способ получения целевых продуктов экологически более чистым и радиационно безопасным за счет исключения радиоактивных изотопов, в частности трития.Thus, the claimed method allows you to:
to simplify the procedure for producing deuterium-labeled nucleosides and nucleotides, including inosine and thymidine, reducing it to fermentation and to direct isolation of nucleosides from the medium;
make the method of obtaining the target products environmentally friendly and radiation safe by eliminating radioactive isotopes, in particular tritium.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95118778A RU2107098C1 (en) | 1995-11-04 | 1995-11-04 | Method of preparing high-deuterated nucleosides and nucleotides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95118778A RU2107098C1 (en) | 1995-11-04 | 1995-11-04 | Method of preparing high-deuterated nucleosides and nucleotides |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU95118778A RU95118778A (en) | 1997-10-20 |
| RU2107098C1 true RU2107098C1 (en) | 1998-03-20 |
Family
ID=20173474
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95118778A RU2107098C1 (en) | 1995-11-04 | 1995-11-04 | Method of preparing high-deuterated nucleosides and nucleotides |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2107098C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2290938C2 (en) * | 2004-12-15 | 2007-01-10 | МНИИ ГБ им. Гельмгольца | Method for preparing blood with increased content of nucleosides and nucleotides |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0220951A2 (en) * | 1985-10-25 | 1987-05-06 | Celgene Corporation | Biochemicals labelled with stable isotopes |
-
1995
- 1995-11-04 RU RU95118778A patent/RU2107098C1/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0220951A2 (en) * | 1985-10-25 | 1987-05-06 | Celgene Corporation | Biochemicals labelled with stable isotopes |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2290938C2 (en) * | 2004-12-15 | 2007-01-10 | МНИИ ГБ им. Гельмгольца | Method for preparing blood with increased content of nucleosides and nucleotides |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU943282A1 (en) | Process for producing l-treonine | |
| CN101979645B (en) | Method for preparing adenosylmethionine | |
| JPH0670754A (en) | Biotechnological preparation of pseudomonas aeruginosa and l-rhamnose and use thereof | |
| DK148750B (en) | PROCEDURE FOR CONTINUOUS PREPARATION OF ISOMALTULOSE | |
| Zoha et al. | Production of spores by a putrefactive anaerobe | |
| JPH0630599B2 (en) | Process for producing fructose-1,6-diphosphate | |
| RU2107098C1 (en) | Method of preparing high-deuterated nucleosides and nucleotides | |
| JPS62130692A (en) | Biochemical product labelled with stable isotope | |
| Evans et al. | The Nutrition of C. diphtheriæ. Pantothenic Acid as an Essential Growth Factor for Certain Strains of C. diphtheriæ gravis: the Synthesis of some Physiologically Active Compounds by C. diphtheriæ Cultures in Synthetic Media | |
| CN108486162A (en) | A kind of production method of uridine | |
| JPH07114695B2 (en) | Method for producing neuraminidase | |
| JPH01281082A (en) | Neuraminidase isozyme s and production of gangliosides | |
| JP2876416B2 (en) | Method for producing D-psicose | |
| RU2141530C1 (en) | Composition of nutrient medium for culturing acetobacter xylinum for bacterial cellulose preparing (variants) | |
| KR101808429B1 (en) | Device for microorganism isolation culture and re-use method of waste microbial culture medium | |
| WO1991006662A1 (en) | Process for preparing asialo g¿m1? | |
| RU2142506C1 (en) | Nutrient medium for escherichia cells culturing | |
| JP3605153B2 (en) | Method for producing L-fructose | |
| JP2018198580A (en) | Organic acid production promoter, organic acid production method and culture method | |
| RU2687973C1 (en) | Method of producing drug preparation of collalisin®, lyophilizate for preparing solution for local and parenteral application for treating fibroproliferative diseases | |
| SU1206305A1 (en) | Method of producing isoleicine | |
| RU2142508C1 (en) | Method of industrial producing polypeptide showing biological activity of human leukocyte interferon alpha-2 | |
| KR920009514B1 (en) | Method for producing 5'guanylic acid | |
| SU1684335A1 (en) | Method for cultivating cells of biological objects | |
| SU1551743A1 (en) | Method of obtaining levan |