[go: up one dir, main page]

RU2188664C2 - Method of preparing agent used for celiaca diagnosis - Google Patents

Method of preparing agent used for celiaca diagnosis Download PDF

Info

Publication number
RU2188664C2
RU2188664C2 RU2000125612A RU2000125612A RU2188664C2 RU 2188664 C2 RU2188664 C2 RU 2188664C2 RU 2000125612 A RU2000125612 A RU 2000125612A RU 2000125612 A RU2000125612 A RU 2000125612A RU 2188664 C2 RU2188664 C2 RU 2188664C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
gliadin
diagnosis
lymphocytes
phagocytosis
cells
Prior art date
Application number
RU2000125612A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
И.В. Кумаланина
Т.А. Черкасова
М.Ф. Болотова
Н.И. Аверьянова
Ю.И. Шилов
Original Assignee
Пермская государственная медицинская академия
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пермская государственная медицинская академия filed Critical Пермская государственная медицинская академия
Priority to RU2000125612A priority Critical patent/RU2188664C2/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2188664C2 publication Critical patent/RU2188664C2/en

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, clinical immunology. SUBSTANCE: method involves preparing gluten by hydrolysis of wheat flour proteins with water. Hydrolyzate is settled for 10 min, supernatant fraction is inactivated at 53 C to obtain a dried powder and the latter is extracted with 70% solution of ethyl alcohol. The solution is centrifuged at 1000 rev/min for 10 min and supernatant liquid is inactivated at 53 C to obtain gliadin-containing dry powder. EFFECT: decreased cost of diagnosis process. 5 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и касается способа получения средства, которое используется в нагрузочных иммунологических тестах для диагностики целиакии. The invention relates to medicine, namely to clinical immunology, and relates to a method for producing an agent that is used in immunological load tests for the diagnosis of celiac disease.

В доступной патентной и медицинской литературе не описан способ получения средства для диагностики целиакии. Available patent and medical literature does not describe a method of obtaining a means for the diagnosis of celiac disease.

Известен способ диагностики целиакии с помощью иммуноферментного анализа на основе Швейцарских тест-систем на выявление антител (в венозной крови) к глиадину (Ю. Г. Мухина, С.В. Бельмер, Т.В. Гасилина и др. Определение антиглиадиновых антител при целиакии у детей //Педиатрия. - 5. -1995. - С.9-12). A known method for the diagnosis of celiac disease using enzyme-linked immunosorbent assay based on the Swiss test systems for the detection of antibodies (in venous blood) to gliadin (Yu. G. Mukhina, SV Belmer, TV Gasilina and others. Determination of antigliadin antibodies in celiac disease in children // Pediatrics. - 5. -1995. - S.9-12).

Недостатки: способ дорогостоящий, многоэтапный, требует специального оборудования (мультискан). Disadvantages: the method is expensive, multi-stage, requires special equipment (multiscan).

Изобретение направлено на решение задачи: упрощение, удешевление диагностики целиакии путем создания средства для этой цели. The invention is aimed at solving the problem: simplification, cheaper diagnosis of celiac disease by creating means for this purpose.

Указанная задача достигается путем экстрагирования глютена, полученного путем гидролиза белков клейковины пшеницы, 70%-ным раствором этилового спирта, центрифугирования полученного раствора в течение 10 мин при 1000 об. /мин, инактивации надосадочной жидкости при 53oС до получения сухого кристаллического порошка, содержащего глиадин. Полученный глиадин используют в концентрации 0,5 мкг/мл в иммунологических нагрузочных тестах для диагностики целиакии и при угнетении Т-клеточного звена иммунитета и фагоцитарной функции лейкоцитов определяют данное заболевание.This task is achieved by extracting gluten obtained by hydrolysis of wheat gluten proteins, 70% ethyl alcohol, centrifuging the resulting solution for 10 min at 1000 rpm. / min, inactivation of the supernatant at 53 o C to obtain a dry crystalline powder containing gliadin. The resulting gliadin is used at a concentration of 0.5 μg / ml in immunological load tests for the diagnosis of celiac disease and in case of inhibition of the T-cell immunity and phagocytic function of leukocytes, this disease is determined.

Способ осуществляют следующим образом. The method is as follows.

Рассчитанное количество пшеничной муки соединяют с дистиллированной водой, перемешивают и отстаивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем надосадочную жидкость, свободную от балластных веществ, разливают в чашки Петри и инактивируют при 53oС до получения сухого вещества, которое содержит глютен, экстрагируют его 70%-ным раствором этилового спирта, полученный раствор центрифугируют 10 мин при 1000 об./мин. Полученную надосадочную жидкость разливают в чашки Петри, инактивируют при 53oС до получения сухого кристаллического бесцветного порошка, содержащего глиадин. Глиадин используют в концентрации 0,5 мкг/мл в иммунологических нагрузочных тестах: тотального Е-розеткообразования, в реакциях определения фагоцитарной функции лейкоцитов.The calculated amount of wheat flour is combined with distilled water, stirred and left to stand at room temperature for 10 minutes. Then, the ballast-free supernatant is poured into Petri dishes and inactivated at 53 ° C until a dry substance that contains gluten is obtained, it is extracted with 70% ethyl alcohol, the resulting solution is centrifuged for 10 min at 1000 rpm. The resulting supernatant is poured into Petri dishes, inactivated at 53 ° C. until a dry crystalline colorless powder containing gliadin is obtained. Gliadin is used at a concentration of 0.5 μg / ml in immunological load tests: total E-rosette formation, in the reactions determining the phagocytic function of leukocytes.

Примеры конкретного выполнения. Examples of specific performance.

Пример 1. 90,0 г пшеничной муки высшего сорта помещают в емкость, заливают 500 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и отстаивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Надосадочную жидкость разливают в 5 чашек Петри, инактивируют при 53oС до получения сухого вещества, содержащего плотен (белок клейковины пшеницы). Полученное вещество экстрагируют 96 мл 70%-ным этиловым спиртом, раствор центрифугируют в течение 10 мин при 1000 об. /мин. Надосадочную жидкость разливают в 5 чашек Петри и инактивируют при 53oС до получения 485 мг сухого бесцветного кристаллического порошка, содержащего глиадин. Глиадин в концентрации 0,5 мкг/мл используют в нагрузочных иммунологических тестах. Рабочую концентрацию глиадина 0,5 мкг/мл получают следующим образом. 3,0 мг сухого кристаллического глиадина разводят 3 мл буфера рН 7,2 до полного растворения. 0,5 мл полученного раствора разводят 4,5 мл буфера (рН 7,2). Готовую рабочую концентрацию глиадина 0,5 мкг/мл в объеме 0,05 мкл используют в иммунологических нагрузочных тестах: тотального Е-розеткообразования и реакциях фагоцитоза с гепаринизированной венозной кровью больных целиакией.Example 1. 90.0 g of premium wheat flour is placed in a container, pour 500 ml of distilled water, mix thoroughly and assert at room temperature for 10 minutes. The supernatant is poured into 5 Petri dishes, inactivated at 53 ° C. until a dry substance containing dense (wheat gluten protein) is obtained. The resulting substance was extracted with 96 ml of 70% ethyl alcohol, the solution was centrifuged for 10 min at 1000 vol. / min The supernatant is poured into 5 Petri dishes and inactivated at 53 ° C. to obtain 485 mg of a dry, colorless crystalline powder containing gliadin. Gliadin at a concentration of 0.5 μg / ml is used in load immunological tests. A working concentration of gliadin of 0.5 μg / ml is prepared as follows. 3.0 mg of dry crystalline gliadin is diluted with 3 ml of pH 7.2 buffer until completely dissolved. 0.5 ml of the resulting solution was diluted with 4.5 ml of buffer (pH 7.2). The finished working gliadin concentration of 0.5 μg / ml in a volume of 0.05 μl is used in immunological load tests: total E-rosette formation and phagocytosis reactions with heparinized venous blood of patients with celiac disease.

Клинические примеры использования полученного средства глиадина в иммунологических нагрузочных тестах. Clinical examples of the use of the obtained gliadin in immunological load tests.

Пример 1. Больная Б., 4 года. Example 1. Patient B., 4 years.

Жалобы на отсутствие прибавок в массе тела в течение 2 лет, разжиженный стул со зловонным запахом до 4 раз в сутки, плохо смывающийся с горшка, вздутие живота, пониженный аппетит. Complaints about the lack of weight gain over 2 years, liquefied stools with a fetid odor up to 4 times a day, poorly washed off the pot, bloating, decreased appetite.

Объективно: бледность кожных покровов, хейлит, рахитические изменения грудной клетки, гипотония мышц брюшного пресса, истончение подкожно-жирового слоя, дефицит массы тела 15%, вздутие живота. Objectively: pallor of the skin, cheilitis, rickets of the chest, hypotension of the abdominal muscles, thinning of the subcutaneous fat layer, 15% body mass deficiency, bloating.

В реакциях тотального Е-розеткообразования, реакциях фагоцитоза без применения нагрузки глиадином составило:
относительное количество Т-лимфоцитов -44 (на 100 клеток);
абсолютное количество Т-лимфоцитов -2018 клеток (2,0•103 мкл);
процент фагоцитоза -71%.
In the reactions of total E-rosette formation, phagocytosis reactions without the use of gliadin load amounted to:
the relative number of T-lymphocytes -44 (per 100 cells);
the absolute number of T-lymphocytes -2018 cells (2.0 • 10 3 μl);
the percentage of phagocytosis is -71%.

После применения нагрузки глиадином с целью диагностики:
относительное количество Т-лимфоцитов -30 (на 100 клеток);
абсолютное количество Т-лимфоцитов 1376 клеток (1,37•103 мкл);
процент фагоцитоза -53%.
After applying the load with gliadin for the purpose of diagnosis:
the relative number of T-lymphocytes -30 (per 100 cells);
the absolute number of T-lymphocytes is 1376 cells (1.37 • 10 3 μl);
the percentage of phagocytosis is 53%.

При проведении нагрузочных иммунологических тестов с глиадином выявлено достоверно значимое угнетение со стороны Т-лимфоцитов и процента фагоцитоза. Учитывая полученные данные, больной выставлен диагноз: Целиакия, типичная форма, средней степени тяжести. When conducting immunological load tests with gliadin, significantly significant inhibition of T-lymphocytes and the percentage of phagocytosis were revealed. Given the data, the patient was diagnosed with Celiac disease, a typical form, moderate.

Пример 2. Больная Б., 8 лет. Example 2. Patient B., 8 years old.

Жалобы на отсутствие прибавок в массе, росте, сниженный аппетит, периодически неустойчивый стул. Complaints about the lack of weight gain, growth, decreased appetite, periodically unstable stool.

Объективно: задержка физического развития с дефицитом массы II степени. Признаки полигипоавитаминоза (хейлит, глоссит, расслоение ногтей), множественный кариес зубов. Objectively: delayed physical development with a deficit of mass of the II degree. Signs of polyhypoavitaminosis (cheilitis, glossitis, stratification of nails), multiple tooth decay.

В реакциях тотального Е-розеткообразования, реакциях фагоцитоза без применения нагрузки глиадином составило:
относительное количество Т-лимфоцитов -59 (на 100 клеток);
абсолютное количество Т-лимфоцитов -2303 клеток (2,3•103 мкл);
процент фагоцитоза -50%.
In the reactions of total E-rosette formation, phagocytosis reactions without the use of gliadin load amounted to:
the relative number of T-lymphocytes -59 (per 100 cells);
the absolute number of T-lymphocytes is -2303 cells (2.3 • 10 3 μl);
the percentage of phagocytosis is 50%.

После применения нагрузки глиадином с целью диагностики:
относительное количество Т-лимфоцитов -48 (на 100 клеток);
абсолютное количество Т-лимфоцитов -1874 клеток (1,87•103 мкл);
процент фагоцитоза -32%.
After applying the load with gliadin for the purpose of diagnosis:
the relative number of T-lymphocytes -48 (per 100 cells);
the absolute number of T-lymphocytes is 1874 cells (1.87 • 10 3 μl);
the percentage of phagocytosis is 32%.

При использовании иммунологических нагрузочных тестов с глиадином выявлено угнетение со стороны Т-клеточного звена иммунитета и снижение процента фагоцитоза. На основании полученных данных больной был выставлен диагноз: Целиакия, атипичная форма. When using immunological load tests with gliadin, inhibition of T-cell immunity and a decrease in the percentage of phagocytosis were detected. Based on the obtained data, the patient was diagnosed with Celiac disease, atypical form.

Таким образом, проведение нагрузочных тестов с глиадином в реакциях тотального Е-розеткообразования, фагоцитарных реакциях показало, что у больных целиакией происходит достоверное угнетение со стороны Т-лимфоцитов и фагоцитоза, что не отмечается у здоровых детей. Thus, conducting load tests with gliadin in reactions of total E-rosette formation, phagocytic reactions showed that in patients with celiac disease there is significant inhibition of T-lymphocytes and phagocytosis, which is not observed in healthy children.

Пример 3. Здоровый ребенок К., 4 года. Example 3. Healthy child K., 4 years.

Жалоб нет. There are no complaints.

В реакциях тотального Е-розеткообразования, реакциях фагоцитоза без применения нагрузки глиадином составило:
относительное количество Т-лимфоцитов -38 (на 100 клеток);
абсолютное количество Т-лимфоцитов -1356 клеток (1,35•103 мкл);
процент фагоцитоза -82%.
In the reactions of total E-rosette formation, phagocytosis reactions without the use of gliadin load amounted to:
the relative number of T-lymphocytes -38 (per 100 cells);
the absolute number of T-lymphocytes is 1356 cells (1.35 • 10 3 μl);
the percentage of phagocytosis is -82%.

После применения нагрузки глиадином с целью диагностики:
относительное количество Т-лимфоцитов -39 (на 100 клеток);
абсолютное количество Т-лимфоцитов -1392 клеток (1,39•103 мкл);
процент фагоцитоза -84%.
After applying the load with gliadin for the purpose of diagnosis:
the relative number of T-lymphocytes -39 (per 100 cells);
the absolute number of T-lymphocytes is 1392 cells (1.39 • 10 3 μl);
the percentage of phagocytosis is -84%.

Диагноз: Целиакия не обнаружена. Diagnosis: Celiac disease is not detected.

Угнетения со стороны Т-лимфоцитов и снижение процента фагоцитоза не обнаружено. Inhibition of T-lymphocytes and a decrease in the percentage of phagocytosis were not detected.

Пример 4. Здоровый ребенок Г., 9 лет. Example 4. Healthy child G., 9 years old.

Жалоб не предъявляет. No complaints.

В реакциях тотального Е-розеткообразования, реакциях фагоцитоза без применения нагрузки глиадином составило:
относительное количество Т-лимфоцитов -56 (на 100 клеток);
абсолютное количество Т-лимфоцитов -2311 клеток (2,3•103 мкл);
процент фагоцитоза -75%.
In the reactions of total E-rosette formation, phagocytosis reactions without the use of gliadin load amounted to:
the relative number of T-lymphocytes -56 (per 100 cells);
the absolute number of T-lymphocytes is 2311 cells (2.3 • 10 3 μl);
the percentage of phagocytosis is 75%.

После применения нагрузки глиадином с целью диагностики:
относительное количество Т-лимфоцитов -54 (на 100 клеток);
абсолютное количество Т-лимфоцитов -2229 клеток (2,2•103 мкл);
процент фагоцитоза -81%.
After applying the load with gliadin for the purpose of diagnosis:
the relative number of T-lymphocytes -54 (per 100 cells);
the absolute number of T-lymphocytes is 2229 cells (2.2 • 10 3 μl);
the percentage of phagocytosis is -81%.

Диагноз: Целиакии не обнаружено. Diagnosis: Celiac disease is not detected.

Угнетения со стороны Т-лимфоцитов и снижение процента фагоцитоза не выявлено. Oppression from T-lymphocytes and a decrease in the percentage of phagocytosis were not detected.

Положительный эффект от использования предлагаемого способа состоит в удешевлении и упрощении способа диагностики целиакии при высокой достоверности. Впервые создано доступное средство для диагностики заболевания. The positive effect of using the proposed method is to reduce the cost and simplify the method of diagnosis of celiac disease with high reliability. For the first time, an affordable tool for diagnosing the disease was created.

Claims (1)

Способ получения средства для диагностики целиакии, отличающийся тем, что получают глютен путем гидролиза белков пшеничной муки, которую соединяют с водой, отстаивают в течение 10 мин, надосадочную жидкость инактивируют при 53oС до получения сухого порошка, который экстрагируют 70%-ным раствором этилового спирта, полученный раствор центрифугируют 10 мин при 1000 об. /мин, повторно инактивируют надосадочную жидкость при 53oС до получения сухого порошка, содержащего глиадин.A method of obtaining a tool for the diagnosis of celiac disease, characterized in that gluten is obtained by hydrolysis of wheat flour proteins, which are combined with water, settled for 10 minutes, the supernatant is inactivated at 53 ° C. until a dry powder is obtained, which is extracted with a 70% ethyl solution alcohol, the resulting solution is centrifuged for 10 min at 1000 vol. / min, re-inactivate the supernatant at 53 ° C. until a dry powder containing gliadin is obtained.
RU2000125612A 2000-10-11 2000-10-11 Method of preparing agent used for celiaca diagnosis RU2188664C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000125612A RU2188664C2 (en) 2000-10-11 2000-10-11 Method of preparing agent used for celiaca diagnosis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000125612A RU2188664C2 (en) 2000-10-11 2000-10-11 Method of preparing agent used for celiaca diagnosis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2188664C2 true RU2188664C2 (en) 2002-09-10

Family

ID=20240881

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2000125612A RU2188664C2 (en) 2000-10-11 2000-10-11 Method of preparing agent used for celiaca diagnosis

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2188664C2 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2061954C1 (en) * 1992-04-08 1996-06-10 Римарчук Галина Владимировна Method for diagnosing hereditary and acquired diseases of the small intestine
RU2129609C1 (en) * 1990-03-23 1999-04-27 Гист-Брокейдс Н.В. Method of catalysis of a substrate fermentation reaction, a method of improvement of food ration intake by animal, plasmid pmog413, plasmid pmog429 and plasmid pmog227

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2129609C1 (en) * 1990-03-23 1999-04-27 Гист-Брокейдс Н.В. Method of catalysis of a substrate fermentation reaction, a method of improvement of food ration intake by animal, plasmid pmog413, plasmid pmog429 and plasmid pmog227
RU2061954C1 (en) * 1992-04-08 1996-06-10 Римарчук Галина Владимировна Method for diagnosing hereditary and acquired diseases of the small intestine

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Химическая энциклопедия /Под ред. Н.С.Зефирова. - М.: Большая Российская Энциклопедия, 1995, т.4, с.99. МУХИНА Ю.Г. и др. Определение антиглиадиновых антител при целиакии у детей. Педиатрия. - 1995, № 5, с.9-12. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Foegh et al. Urine i-TXB2 in renal allograft rejection
Sjoerdsma et al. Hydroxyproline and Collagen Metabolism: Combined Clinical Staff Conference at the National Institutes of Health
JP2644767B2 (en) Methods and agents for removing advanced glycosylation end products
RU2170084C1 (en) Method of dna tablet making
BG108227A (en) Immunotherapeutic combinations for the treatment of tumours that overexpress gangliosides
KR100686364B1 (en) Immunosorbents for Use in the Treatment of Sepsis
WO2014090184A1 (en) Biologically active polypeptide qepvl and preparation and use thereof
Hutchcraft et al. Agglutination of complement-coated erythrocytes by serum amyloid P-component.
RU2188664C2 (en) Method of preparing agent used for celiaca diagnosis
Skovbjerg et al. Immunoelectrophoretic studies on human small intestinal brush border proteins--amount of lactase protein in adult-type hypolactasia.
EP0313156A1 (en) SnRNP-A antigen and fragments thereof
Makita et al. Importance of glycation in the acceleration of low density lipoprotein (LDL) uptake into macrophages in patients with diabetes mellitus
Hachimura et al. Differential inhibition of T and B cell responses to individual antigenic determinants in orally tolerized mice
CN108659115A (en) A kind of synthetic method of blood group antigens trisaccharide A analog BSA derivatives and application
RU2143920C1 (en) Construction and preparation of vaccine
JP7373225B2 (en) Cell therapy for patients
James et al. Waldenström's macroglobulinaemia in a bird breeder: a case history with pulmonary involvement and antibody activity of the monoclonal IgM to canary's droppings
CN101602794A (en) A kind of human MGF polypeptide and its antibody preparation method
WOODS STUDIES OF NITROGEN PARTITION IN THE BLOOD AND SPINAL FLUID: WITH ESPECIAL REFERENCE TO THE POSSIBLE CAUSATION OF ALBUMINURIC RETINITIS
CN107814840B (en) Bioactive polypeptide PKYPVEPF as well as preparation method and application thereof
RU2627652C1 (en) Application of selective immunosorbent for removal of antibodies to type 3 desmoglein from blood serum of patients with vesicular fever
RU2050003C1 (en) Method for diagnosing keratoacanthoma transformation into scuamous cell carcinoma of the skin
WO1996019999A1 (en) Thrombolytic enzyme and method of obtaining same
RU2304000C1 (en) Method for producing diagnostic allergen
RU2222336C2 (en) Method for immunorehabilitation in patients with chronic bronchitis