RU2148638C1 - Synthetic nutrient medium for brucella culturing - Google Patents
Synthetic nutrient medium for brucella culturing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2148638C1 RU2148638C1 RU98112165A RU98112165A RU2148638C1 RU 2148638 C1 RU2148638 C1 RU 2148638C1 RU 98112165 A RU98112165 A RU 98112165A RU 98112165 A RU98112165 A RU 98112165A RU 2148638 C1 RU2148638 C1 RU 2148638C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- agar
- brucella
- potassium phosphate
- medium
- amino acids
- Prior art date
Links
- 241000589562 Brucella Species 0.000 title claims abstract description 25
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title 1
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims abstract description 22
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 claims abstract description 16
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 15
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 15
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 14
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 14
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims abstract description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 claims abstract description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 9
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 9
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 9
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 claims abstract description 9
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims abstract description 9
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 8
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 8
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 8
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims abstract description 8
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims abstract description 8
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 claims abstract description 7
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims abstract description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 claims abstract description 5
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 17
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 8
- -1 Monosubstituted potassium phosphate Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 3
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 claims description 2
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 11
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 241000256766 Lophodermium medium Species 0.000 abstract 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 abstract 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 abstract 1
- 235000021048 nutrient requirements Nutrition 0.000 abstract 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 235000006180 nutrition needs Nutrition 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 5
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 description 4
- 241001148106 Brucella melitensis Species 0.000 description 4
- 241001148111 Brucella suis Species 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- DAQHMCWYXJEOCG-UHFFFAOYSA-N 2-oxopropanoic acid;sodium Chemical group [Na].CC(=O)C(O)=O DAQHMCWYXJEOCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 2
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001509299 Brucella canis Species 0.000 description 1
- 241001148112 Brucella neotomae Species 0.000 description 1
- 241000589568 Brucella ovis Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229940044197 ammonium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N sodium sulfide (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в производстве синтетических питательных сред для выращивания бруцелл, а также в микробиологических, биохимических и генетических исследованиях. The invention relates to microbiology and can be used in the production of synthetic culture media for growing brucella, as well as in microbiological, biochemical and genetic studies.
Являясь паразитирующими в органах и тканях человека и животных микробами, бруцеллы требовательны к составу питательных сред. Being microbes parasitizing in organs and tissues of humans and animals, brucella are demanding on the composition of nutrient media.
К настоящему времени известно несколько вариантов синтетических питательных сред, обеспечивающих рост бруцелл трех классических видов или какого-либо одного из них. Обязательными компонентами таких сред являются источники углерода, минеральные соли, источники азота - аминокислоты, стимуляторы роста - витамины. To date, several variants of synthetic nutrient media are known that ensure the growth of brucella of the three classical species or any one of them. Mandatory components of such environments are carbon sources, mineral salts, nitrogen sources - amino acids, growth stimulants - vitamins.
Известны исследования влияния на рост бруцелл видов B.melitensis, B. abortus, B. suis различных аминокислот и витаминов (Кондратьева О.В., Степанов В. И. "К изучению питательных потребностей бруцелл" Сообщ. 1 // Микробиология и иммунология особо опасных инфекций. - Саратов, 1968. - С. 335-336; Кондратьева О. В., Степанов В.И. "К изучению питательных потребностей бруцелл" Сообщ. 2// Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1969. - С. 154-155). Studies are known on the effect on the growth of brucella of the species B. melitensis, B. abortus, B. suis of various amino acids and vitamins (Kondratieva O.V., Stepanov V.I. "On the study of the nutritional needs of brucella" Report. 1 // Microbiology and immunology dangerous infections. - Saratov, 1968. - S. 335-336; Kondratyev O. V., Stepanov V. I. "To the study of the nutritional needs of brucella" Report. 2 // Problems of especially dangerous infections. - Saratov, 1969. - С . 154-155).
За основу среды была принята среда "А" Д. Ледерберга, включающая глюкозу 1 г/л, двузамещенный фосфорнокислый калий 7 г/л, однозамещенный фосфорнокислый калий 2 г/л, цитрат натрия 0,5 г/л, сернокислый магний 0,1 г/л, сернокислый аммоний 1 г/л. Для уплотнения плотной среды добавляется агар-агар. The medium “A” was adopted by D. Lederberg “A”, including glucose 1 g / l, disubstituted potassium phosphate 7 g / l, monosubstituted potassium phosphate 2 g / l, sodium citrate 0.5 g / l, magnesium sulfate 0.1 g / l, ammonium sulfate 1 g / l. Agar agar is added to compact the solid medium.
К основе "А", которая сама по себе не обеспечивает рост бруцелл, добавляли различные аминокислоты и витамины и исследовали их влияние на рост бруцелл трех видов. Аминокислоты брали в концентрации 0,001 - 0,005 мг/мл, витамины B1, B2, B6, B12 - 0,2 мг/мл, биотин - 0,0001 мг/мл.Various amino acids and vitamins were added to the “A” base, which in itself does not provide brucella growth, and investigated their effect on the growth of three types of brucella. Amino acids were taken at a concentration of 0.001 to 0.005 mg / ml, vitamins B 1 , B 2 , B 6 , B 12 0.2 mg / ml, biotin 0.0001 mg / ml.
Исследования показали, что синтетическая среда "А" при добавлении 6 аминокислот (глутаминовая кислота, α-аланин, лизин, гистидин, метионин, цистеин) обеспечивает рост всех исследуемых видов бруцелл. В то же время B. melitensis, B.abortus, B.suis существенно отличаются между собой по характеру питательных потребностей. Наиболее требовательными к аминокислотному составу являются штаммы B.melitensis. B.abortus хорошо росли только в присутствии цистеина, часть штаммов - при замене цистеина глутаминовой кислотой. Для B. suis обязательно присутствие цистеина. Наиболее выраженное положительное влияние на рост бруцелл оказывали витамины B1, B2, B6, B12 и биотин.Studies have shown that the synthetic medium "A" with the addition of 6 amino acids (glutamic acid, α-alanine, lysine, histidine, methionine, cysteine) ensures the growth of all studied species of brucella. At the same time, B. melitensis, B. abortus, B.suis significantly differ in the nature of their nutritional needs. The most demanding amino acids are B.melitensis strains. B. abortus grew well only in the presence of cysteine, some strains - when replacing cysteine with glutamic acid. B. suis requires cysteine. The most pronounced positive effect on the growth of brucella was exerted by vitamins B 1 , B 2 , B 6 , B 12 and biotin.
Результаты исследований обуславливают необходимость разработки оптимального состава среды, обеспечивающего рост всех видов и биоваров бруцелл с учетом их питательных потребностей. The research results necessitate the development of an optimal composition of the environment, ensuring the growth of all species and biovars of brucella, taking into account their nutritional needs.
Наиболее близкой по составу и назначению является синтетическая питательная среды для выращивания бруцелл (А.С. N 933702, C 12 N 1/20, 07.06.82, Бюл. N 21). Среда содержит агар-агар, источник углерода - натрий пировиноградокислый, аминокислоты - L-метионин, L-аспарагин, витамины - никотиновую кислоту, кальция пантотенат, биотин, минеральные соли - калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий хлористый, натрий сернистокислый, аммоний хлористый и воду при следующем соотношении компонентов, г/л:
Агар - 14,0 - 16,0
Натрий пировиноградокислый - 0,9 - 1,1
L-Метионин - 0,02 - 0,03
L-Аспарагин - 0,09 - 0,11
Никотиновая кислота - 1,5 - 2,5•10-4
Кальция пантотенат - 1,5-2,5•10-4
Биотин - 0,5-1,5•10-7
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,5 - 2,9
Натрий хлористый - 7,3 -7,7
Натрий сернистокислый - 0,09 - 0,11
Аммоний хлористый - 0,9 - 1,1
Данная среда обеспечивает рост 32 штаммов 6 видов бруцелл. Использование этой среды позволяет при одинаковых ростовых условиях изучать влияние различных дополнительных компонентов (мутагены, антибиотики и т.д.) на биологические свойства, в частности на питательные потребности бруцелл.The closest in composition and purpose is a synthetic nutrient medium for growing brucella (A.S. N 933702, C 12
Agar - 14.0 - 16.0
Sodium pyruvic acid - 0.9 - 1.1
L-Methionine - 0.02 - 0.03
L-Asparagine - 0.09 - 0.11
Niacin - 1.5 - 2.5 • 10 -4
Calcium pantothenate - 1.5-2.5 • 10 -4
Biotin - 0.5-1.5 • 10 -7
Potassium phosphate monosubstituted - 2.5 - 2.9
Sodium chloride - 7.3-7.7
Sodium sulfide - 0.09 - 0.11
Ammonium chloride - 0.9 - 1.1
This medium provides the growth of 32 strains of 6 species of brucella. Using this medium, under the same growth conditions, it is possible to study the effect of various additional components (mutagens, antibiotics, etc.) on biological properties, in particular on the nutritional needs of brucella.
Однако среда не обеспечивает в достаточной степени питательные потребности ряда штаммов, что отражается на выходе выращиваемой биомассы и затрудняет проведение микробиологических, биохимических и генетических исследований. However, the environment does not sufficiently provide the nutritional needs of a number of strains, which is reflected in the output of cultivated biomass and makes it difficult to conduct microbiological, biochemical and genetic studies.
Целью изобретения является разработка рецептуры питательной среды, обеспечивающей питательные потребности всех известных видов и биоваров бруцелл и увеличение выходов выращиваемой биомассы. The aim of the invention is to develop a formulation of a nutrient medium that provides the nutritional needs of all known species and biovars of brucella and increase the yields of biomass grown.
Поставленная цель достигается тем, что питательная среда содержит агар-агар, в качестве углеродсодержащего компонента - глюкозу, в качестве минеральных солей - калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, магний сернокислый, аммоний сернокислый, натрий лимоннокислый, в качестве аминокислот - глутаминовую кислоту, цистеин, лизин, гистидин, аланин и метионин, в качестве витаминов - тиамин, никотиновую кислоту, пантотенат кальция, биотин, рибофлавин и пиридоксин при следующем соотношении компонентов, г/л:
Агар-агар - 14,0 - 16,0
Глюкоза - 1,0
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 7,0
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,0
Натрий лимоннокислый - 0,5
Магний сернокислый - 0,1
Аммоний сернокислый - 1,0
L-Глутаминовая кислота - 0,5 - 1,5
L-Цистеин - 0,025-0,05
L-Лизин - 0,025 - 0,05
L-Гистидин - 0,025 - 0,05
L-Аланин - 0,025 - 0,05
L-Метионин - 0,025 - 0,05
Тиамин - 0,0002
Никотиновая кислота - 0,0002
Пантотенат кальция - 0,0002
Рибофлавин - 0,0002
Пиридоксин - 0,0002
Биотин - 0,0000001
По отношению к прототипу заявляемая питательная среда имеет следующие отличительные признаки. Использование глюкозы в качестве углеродсодержащего компонента в совокупности с дополнительным введением калия фосфорнокислого двузамещенного, магния сернокислого, аммония сернокислого, глутаминовой кислоты, цистеина, лизина, гистидина, аланина, рибофлавина, тиамина, пиридоксина обеспечивает питательные потребности и достаточный рост широкого набора штаммов бруцелл всех известных видов, в том числе и вакцинных, по сравнению с прототипом, а также увеличивает выход выращиваемой биомассы.This goal is achieved in that the nutrient medium contains agar-agar, glucose as the carbon-containing component, monosubstituted potassium phosphate, disubstituted potassium phosphate, magnesium sulfate, ammonium sulfate, sodium citrate, and glutamic acid as amino acids. , lysine, histidine, alanine and methionine, as vitamins - thiamine, nicotinic acid, calcium pantothenate, biotin, riboflavin and pyridoxine in the following ratio of components, g / l:
Agar-agar - 14.0 - 16.0
Glucose - 1.0
Potassium phosphate disubstituted - 7.0
Monosubstituted potassium phosphate - 2.0
Sodium citrate - 0.5
Magnesium sulfate - 0.1
Ammonium sulfate - 1.0
L-Glutamic acid - 0.5 - 1.5
L-Cysteine - 0.025-0.05
L-Lysine - 0.025 - 0.05
L-Histidine - 0.025 - 0.05
L-Alanine - 0.025 - 0.05
L-Methionine - 0.025 - 0.05
Thiamine - 0,0002
Niacin - 0.0002
Calcium pantothenate - 0.0002
Riboflavin - 0.0002
Pyridoxine - 0.0002
Biotin - 0.0000001
In relation to the prototype of the claimed nutrient medium has the following distinctive features. The use of glucose as a carbon-containing component in combination with the additional introduction of potassium phosphate disubstituted, magnesium sulfate, ammonium sulfate, glutamic acid, cysteine, lysine, histidine, alanine, riboflavin, thiamine, pyridoxine provides nutritional needs and sufficient growth of a wide variety of known strains of all types of known strains , including vaccines, in comparison with the prototype, and also increases the yield of cultivated biomass.
Возможность практического использования изобретения иллюстрируется конкретным выполнением заявляемой рецептуры. The possibility of practical use of the invention is illustrated by the specific implementation of the claimed formulation.
Пример 1. Готовят среду следующего состава, г/л: глюкоза - 1,0; калий фосфорнокислый двузамещенный - 7,0; калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,0; натрий лимоннокислый - 0,5; магний сернокислый - 0,1; аммоний сернокислый - 1,0; L-глутаминовая кислота - 1,0; L-цистеин - 0,03; L-лизин - 0,03; L-гистидин - 0,03; L-аланин - 0,03; L-метионин - 0,03; никотиновая кислота - 0,0002; тиамин - 0,0002; пантотенат кальция - 0,0002; рибофлавин - 0,0002; пиридоксин - 0,0002; биотин - 0,0000001; и вода дистиллированная - 1000 мл. Среду нагревают при непрерывном помешивании до полного растворения ее компонентов. Для придания плотности вносят агар-агар в количестве 15 г и стерилизуют на водяной бане при 100oC в течение 30 мин. Готовую среду разливают в пробирки по 5 мл и скашивают или в чашки Петри по 25-30 мл. После застывания и подсушивания среду используют в течение 7-15 дней при условии хранения в холодильнике. Плотная среда прозрачная, что позволяет четко наблюдать морфологию колоний. Испытуемые культуры бруцелл выращивают на 2% агаре Альбими, pH 7,2, при температуре 37oC в течение 48 ч. На пластинки агара засевают одну бактериологическую петлю диаметром 2 мм, взвеси в физиологическом растворе двухсуточной агаровой культуры густотой 106 м.к./мл по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича 10 ЕД. Посевы инкубируют в термостате при 37oC. Наличие роста регистрируют визуально через 48-72 ч.Example 1. Prepare a medium of the following composition, g / l: glucose - 1.0; potassium phosphate disubstituted - 7.0; potassium phosphate monosubstituted - 2.0; sodium citrate - 0.5; magnesium sulfate - 0.1; ammonium sulfate - 1.0; L-glutamic acid - 1.0; L-cysteine - 0.03; L-lysine - 0.03; L-histidine - 0.03; L-alanine - 0.03; L-methionine - 0.03; nicotinic acid - 0.0002; thiamine - 0.0002; calcium pantothenate - 0,0002; riboflavin - 0.0002; pyridoxine - 0.0002; biotin - 0.0000001; and distilled water - 1000 ml. The medium is heated with continuous stirring until its components are completely dissolved. To give density, 15 g of agar-agar was added and sterilized in a water bath at 100 ° C. for 30 minutes. The prepared medium is poured into 5 ml tubes and mowed or 25-30 ml into Petri dishes. After solidification and drying, the medium is used for 7-15 days, provided that it is stored in the refrigerator. The dense medium is transparent, which allows you to clearly observe the morphology of the colonies. The test cultures of brucella are grown on 2% Albimi agar, pH 7.2, at a temperature of 37 o C for 48 hours. One bacteriological loop with a diameter of 2 mm is seeded on agar plates, suspended in physiological solution of a two-day agar culture with a density of 10 6 mk. / ml according to the optical turbidity standard GISK im. Tarasevich 10 units. Crops are incubated in an incubator at 37 o C. The presence of growth is recorded visually after 48-72 hours.
Всего изучение 37 штаммов бруцелл шести известных видов - из них 5 штаммов - B. melitensis, 10 - B.abortus, 17 - B.suis, 2 - B. neotomae, 2 - B. ovis, 1 - B.canis. В таблице приведены данные роста бруцелл различных видов на предлагаемой питательной среде. A total of 37 strains of brucella were studied in six known species - 5 of them were B. melitensis, 10 were B. abortus, 17 were B.suis, 2 were B. neotomae, 2 were B. ovis, 1 was B.canis. The table shows the data on the growth of brucella of various species on the proposed nutrient medium.
Результаты испытания ростовых качеств предлагаемой среды показывают, что на среде растут все испытанные штаммы бруцелл различных видов с сохранением типичной морфологии бруцеллезных колоний. The test results of the growth qualities of the proposed medium show that all tested brucella strains of various species grow on the medium, while maintaining the typical morphology of brucellosis colonies.
Пример 2. При необходимости использования жидкой синтетической питательной среды готовят среду следующего состава, г/л: глюкоза - 1,0; калий фосфорнокислый двузамещенный - 7,0; калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,0; натрий лимоннокислый - 0,5; магний сернокислый - 0,1; аммоний сернокислый - 1,0; L-глутаминовая кислота - 1,0; L-цистеин - 0,03; L-лизин - 0,03; L-гистидин - 0,03; L-аланин - 0,03; L-метионин - 0,03; никотиновая кислота - 0,0002; тиамин - 0,0002; пантотенат кальция - 0,0002; рибофлавин - 0,0002; пиридоксин - 0,0002; биотин - 0,0000001 и вода дистиллированная - 1000 мл. Среду нагревают при непрерывном помешивании до полного растворения ее компонентов и стерилизуют на водяной бане при 100oC в течение 30 мин. Готовую среду разливают в пробирки по 10 мл и засевают в них по 0,1 мл взвеси в физиологическом растворе двухсуточных агаровых культур исследуемых штаммов бруцелл различных видов концентраций 1•109 м.к./мл по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича. Посевная доза при этом составляет 1•107 м. к./мл. Учет результатов проводят ежедневно, определяя концентрацию микробных клеток по оптической плотности бактерий при помощи фотоэлектроколориметра (ФЭК-60 Н).Example 2. If necessary, use a liquid synthetic nutrient medium to prepare a medium of the following composition, g / l: glucose - 1.0; potassium phosphate disubstituted - 7.0; potassium phosphate monosubstituted - 2.0; sodium citrate - 0.5; magnesium sulfate - 0.1; ammonium sulfate - 1.0; L-glutamic acid - 1.0; L-cysteine - 0.03; L-lysine - 0.03; L-histidine - 0.03; L-alanine - 0.03; L-methionine - 0.03; nicotinic acid - 0.0002; thiamine - 0.0002; calcium pantothenate - 0,0002; riboflavin - 0.0002; pyridoxine - 0.0002; Biotin - 0.0000001 and distilled water - 1000 ml. The medium is heated with continuous stirring until the components are completely dissolved and sterilized in a water bath at 100 ° C for 30 minutes. The prepared medium is poured into 10 ml test tubes and 0.1 ml of suspension are inoculated into them in physiological solution of two-day agar cultures of the studied strains of brucella of various types of concentrations of 1 • 10 9 m.k. / ml according to the optical turbidity standard GISK named after Tarasevich. The sowing dose in this case is 1 • 10 7 m.k. / ml. The results are taken into account daily, determining the concentration of microbial cells by the optical density of bacteria using a photoelectrocolorimeter (FEK-60 N).
Максимальная конечная концентрация бактерий обычно достигается на 5-7 сут выращивания и составляет величины порядка 0,5-2 • 109 м.к./мл, в зависимости от вида и штамма бруцеллезных бактерий.The maximum final concentration of bacteria is usually achieved on the 5-7th day of cultivation and amounts to the order of 0.5-2 • 10 9 m.k./ml, depending on the type and strain of brucellosis bacteria.
Предельные концентрации компонентов среды оптимально необходимы и достаточны для обеспечения достаточного роста и выхода биомассы представителей шести видов бруцелл. Содержание агар-агара, минеральных солей, углеродсодержащего компонента соответствует классической рецептуре Д.Ледерберга, минимальное содержание аминокислот и витаминов превышают значения у среды по прототипу, увеличения же их концентрации нецелесообразно, т.к. улучшения ростовых свойств среды не происходит. Limit concentrations of the components of the medium are optimally necessary and sufficient to ensure sufficient growth and yield of biomass of representatives of six species of brucella. The content of agar-agar, mineral salts, carbon-containing component corresponds to the classical formulation of D. Lederberg, the minimum content of amino acids and vitamins exceeds the values of the medium according to the prototype, increasing their concentration is inappropriate, because no improvement in the growth properties of the medium occurs.
Таким образом, заявляемая синтетическая среда практически осуществима, применение предлагаемой питательной среды позволяет получить достаточный рост и выход биомассы представителей всех известных видов бруцелл. Thus, the claimed synthetic medium is practicable, the use of the proposed nutrient medium allows to obtain sufficient growth and yield of biomass of representatives of all known species of brucella.
Claims (1)
Агар-агар - 14,0 - 16,0
Глюкоза - 1,0
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 7,0
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,0
Натрий лимоннокислый - 0,5
Магний сернокислый - 0,1
Аммоний сернокислый - 1,0
L-Глутаминовая кислота - 0,5 - 1,5
L-Цистеин - 0,025 - 0,05
L-Лизин - 0,025 - 0,05
L-Гистидин - 0,025 - 0,05
L-Аланин - 0,025 - 0,05
L-Метионин - 0,025 - 0,05
Тиамин - 0,0002
Никотиновая кислота - 0,0002
Пантотенат кальция - 0,0002
Рибофлавин - 0,0002
Пиридоксин - 0,0002
Биотин - 0,0000001A synthetic nutrient medium for growing brucella containing agar-agar, a carbon-containing component, mineral salts - potassium phosphate monosubstituted, amino acids - methionine, vitamins - nicotinic acid, calcium pantothenate, biotin, characterized in that it contains glucose as a carbon source, additionally contains mineral salts - potassium phosphate disubstituted, magnesium sulfate, ammonium sulfate, sodium citrate, amino acids - L-glutamic acid, L-lysine, L-cysteine, L-histidine, L-alanine, Tamina - thiamine, riboflavin, pyridoxine at the following component ratio, g / l distilled water:
Agar-agar - 14.0 - 16.0
Glucose - 1.0
Potassium phosphate disubstituted - 7.0
Monosubstituted potassium phosphate - 2.0
Sodium citrate - 0.5
Magnesium sulfate - 0.1
Ammonium sulfate - 1.0
L-Glutamic acid - 0.5 - 1.5
L-Cysteine - 0.025 - 0.05
L-Lysine - 0.025 - 0.05
L-Histidine - 0.025 - 0.05
L-Alanine - 0.025 - 0.05
L-Methionine - 0.025 - 0.05
Thiamine - 0,0002
Niacin - 0.0002
Calcium pantothenate - 0.0002
Riboflavin - 0.0002
Pyridoxine - 0.0002
Biotin - 0.0000001
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98112165A RU2148638C1 (en) | 1998-06-22 | 1998-06-22 | Synthetic nutrient medium for brucella culturing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98112165A RU2148638C1 (en) | 1998-06-22 | 1998-06-22 | Synthetic nutrient medium for brucella culturing |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU98112165A RU98112165A (en) | 2000-04-27 |
| RU2148638C1 true RU2148638C1 (en) | 2000-05-10 |
Family
ID=20207686
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98112165A RU2148638C1 (en) | 1998-06-22 | 1998-06-22 | Synthetic nutrient medium for brucella culturing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2148638C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2249616C2 (en) * | 2003-06-16 | 2005-04-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Method for reproduction of brucellous bacteriophage |
| RU2263142C2 (en) * | 2003-07-14 | 2005-10-27 | Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока (НИПЧИ Сибири и ДВ) | Method for preparing l-subcultures of brucella abortus, strain i-206 |
| RU2681285C1 (en) * | 2017-12-04 | 2019-03-05 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation |
| RU2688335C1 (en) * | 2017-12-04 | 2019-05-21 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Dense nutrient medium for cultivation of brucellosis agent |
-
1998
- 1998-06-22 RU RU98112165A patent/RU2148638C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Д.Н.Донской и др. Минимальная синтетическая питательная среда для Brucella. Журнал микробиол., эпидемиол., 1983, Москва, N 11, с. 112. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2249616C2 (en) * | 2003-06-16 | 2005-04-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Method for reproduction of brucellous bacteriophage |
| RU2263142C2 (en) * | 2003-07-14 | 2005-10-27 | Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока (НИПЧИ Сибири и ДВ) | Method for preparing l-subcultures of brucella abortus, strain i-206 |
| RU2681285C1 (en) * | 2017-12-04 | 2019-03-05 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation |
| RU2688335C1 (en) * | 2017-12-04 | 2019-05-21 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Dense nutrient medium for cultivation of brucellosis agent |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2433170C1 (en) | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb | |
| RU2148638C1 (en) | Synthetic nutrient medium for brucella culturing | |
| CN108277163A (en) | A method of isolating and purifying Euglena algae | |
| RU2245362C2 (en) | Nutrient medium for culturing plague microorganism vaccine strain | |
| Grobler et al. | Bacterial electrode for L-arginine | |
| RU2681285C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation | |
| US4229541A (en) | In vitro cultivation of horseshoe crab amebocytes | |
| CN109609384A (en) | One chlorella Chlorella sorokinianaTX and its high density fast culture process | |
| RU2106879C1 (en) | Method for culturing slowly growing mycobacteria | |
| RU2841541C1 (en) | Universal culture medium for culturing bacteria based on hydrolyzate of mink carcasses | |
| RU2680702C1 (en) | Nutritional environment for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079 | |
| RU2193061C1 (en) | Nutrient medium for tuberculosis mycobacterium culturing (mbt-broth) | |
| RU2053294C1 (en) | Method of cultivation of bifidobacteria | |
| RU2301256C1 (en) | Liquid nutrient medium for culturing cholera vibrio | |
| Wink | The endosymbionts of Glossina morsitans and G. palpalis: cultivation experiments and some physiological properties | |
| RU2819794C1 (en) | Method of producing violacein fraction during surface solid-phase cultivation of janthinobacterium lividum b-3705d strain | |
| RU2242511C2 (en) | Nutritive medium for isolating and cultivating tubercular mycobacterial l-forms | |
| RU2819768C1 (en) | Thermophilic strain of algae chlorella vulgaris beijer for rapid biotesting of toxicity of aqueous media | |
| Fletcher et al. | Difference in physiology of Vibrio spp. from chickens and man | |
| RU2203939C2 (en) | Nutrient medium for differential diagnosis of clostridium perfringens | |
| RU2827845C1 (en) | Elective nutrient medium for pseudomonas aeruginosa recovery | |
| RU2794804C1 (en) | Culture medium for isolation and cultivation of lactobacillus iners and other representatives of the vaginal microbiota | |
| RU2803258C1 (en) | Method of carbohydrate fermentation by escherichia coli bacteria | |
| RU2722071C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079 | |
| SU1386657A1 (en) | Culture medium for cultivating campilobacteria |