RU2144378C1 - Virus-vaccine against mareck's disease and method of its preparing - Google Patents
Virus-vaccine against mareck's disease and method of its preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2144378C1 RU2144378C1 RU99113465A RU99113465A RU2144378C1 RU 2144378 C1 RU2144378 C1 RU 2144378C1 RU 99113465 A RU99113465 A RU 99113465A RU 99113465 A RU99113465 A RU 99113465A RU 2144378 C1 RU2144378 C1 RU 2144378C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- strain
- arriah
- vaccine
- infected
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 85
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 59
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 58
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 31
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 30
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 29
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims abstract description 25
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 241001502481 Meleagrid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims abstract description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 92
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 24
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 23
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims description 11
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 10
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 5
- 208000006758 Marek Disease Diseases 0.000 claims description 4
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 claims description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 22
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 101150029683 gB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000009191 jumping Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000009374 poultry farming Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 239000000273 veterinary drug Substances 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретения относятся к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и могут быть использованы при разработке и изготовлении средств специфической профилактики болезни Марека. The invention relates to veterinary virology and biotechnology and can be used in the development and manufacture of means of specific prophylaxis of Marek's disease.
Болезнь Марека (БМ) - высококонтагиозное, лимфопролиферативное, злокачественное, вирусное заболевание птиц. БМ регистрируется во всех странах мира, где развито промышленное птицеводство, в том числе и в нашей стране, вызывая большие экономические потери. БМ характеризуется образованием единичных (в начальной стадии) и множественных опухолей во внутренних органах, коже, мышцах, а также изменениями центральной и периферической нервной системы. Вирус болезни Марека (ВБМ) повреждает иммунокомпетентные органы (селезенку, тимус, клоакальную сумку) и обладает таким образом иммунодепрессивной активностью, что приводит к снижению общей резистентности птиц и повышению их чувствительности к другим болезням. В связи с этим БМ довольно часто протекает в ассоциации с другими заболеваниями. Важным средством предупреждения БМ и снижения потерь от заболевания является вакцинопрофилактика. Для специфической профилактики используют вакцины трех типов: из аттенуированных штаммов ВБМ (серотип 1), из природноослабленного непатогенного ВБМ (серотип 2) и из штаммов вируса герпеса индеек (серотип 3). Marek's disease (BM) is a highly contagious, lymphoproliferative, malignant, viral disease of birds. BM is registered in all countries of the world where industrial poultry farming is developed, including in our country, causing large economic losses. BM is characterized by the formation of single (in the initial stage) and multiple tumors in the internal organs, skin, muscles, as well as changes in the central and peripheral nervous system. Marek’s disease virus (VBM) damages immunocompetent organs (spleen, thymus, cloacal sac) and thus has immunosuppressive activity, which leads to a decrease in the overall resistance of birds and increase their sensitivity to other diseases. In this regard, BM often occurs in association with other diseases. An important way to prevent BM and reduce losses from the disease is vaccination. For specific prophylaxis, three types of vaccines are used: from attenuated VBM strains (serotype 1), from a naturally attenuated non-pathogenic VBM (serotype 2), and from turkey herpes virus strains (serotype 3).
Известна вирусвакцина против БМ, содержащая суспензию клеток фибробластов СПФ-эмбрионов кур (ФЭК), инфицированных штаммом CV1988 ВБМ 1 серотипа, сыворотку крови КРС и диметилсульфоксид (ДМСО) в качестве криопротектора (1). Known virus vaccine against BM containing a suspension of fibroblast cells of SPF chicken embryos (FEC) infected with
Недостаток данной вакцины состоит в том, что она не устраняет носительства вирулентного вируса и сохраняет умеренную вирулентность для высокочувствительных линий цыплят. The disadvantage of this vaccine is that it does not eliminate the carriage of the virulent virus and maintains moderate virulence for highly sensitive chick lines.
Известна вирусвакцина против БМ, содержащая суспензию клеток ФЭК, инфицированных штаммом SB-1 вируса герпеса кур (ВГК) 2 серотипа, сыворотку крови КРС и ДМСО (2). Known virus vaccine against BM, containing a suspension of FEC cells infected with strain SB-1 of herpes simplex virus (HCV) 2 serotypes, serum of cattle and DMSO (2).
Недостаток данной вакцины состоит в том, что она также не устраняет носительства вирулентного вируса и опасность поражения лимфатических органов птиц высоковирулентными онкогенными штаммами ВБМ. The disadvantage of this vaccine is that it also does not eliminate the carriage of the virulent virus and the risk of damage to the lymphatic organs of birds by highly virulent oncogenic VBM strains.
Известна вирусвакцина против БМ, содержащая суспензию клеток ФЭК, инфицированных штаммом "ВНИВИП" ВБМ, сыворотку крови КРС и ДМСО (3). Known virus vaccine against BM containing a suspension of cells of FEC infected with the strain "VNIVIP" VBM, serum of cattle and DMSO (3).
Недостаток данной вакцины состоит в том, что она не обладает достаточно высокой иммуногенной активностью в хозяйствах с высоким уровнем заболеваемости БМ. The disadvantage of this vaccine is that it does not have a sufficiently high immunogenic activity in farms with a high incidence of BM.
Наиболее широкое распространение во всем мире получила вакцина на основе ВГИ (штамм FC-126), поскольку вирус не требовал аттенуации, не опасен в плане риверсии и подвергается стабилизации во внеклеточном состоянии. На основе ВГИ готовят 2 типа вакцин: свободную от клеток (сухую) и клеточно-ассоциированную (нативную). The VGI-based vaccine (FC-126 strain) is the most widespread worldwide because the virus did not require attenuation, is not dangerous in terms of reversion, and undergoes stabilization in the extracellular state. Two types of vaccines are prepared on the basis of VGI: cell-free (dry) and cell-associated (native).
Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вирусвакцина против БМ, содержащая суспензию клеток ФЭК, инфицированных штаммом FC-126 ВГИ 3 серотипа, сыворотку крови КРС и ДМСО в следующем соотношении, мас.%:
суспензия инфицированных клеток - 80,0- 90,0
сыворотка КРС - 5,0-10,0
ДМСО - 5,0-10,0 (4).The closest to the invention according to the set of essential features is a virus vaccine against BM, containing a suspension of FEC cells infected with strain FC-126
suspension of infected cells - 80.0 - 90.0
cattle serum - 5.0-10.0
DMSO - 5.0-10.0 (4).
Недостаток вакцины-прототипа состоит в ее низкой иммуногенной активности. The disadvantage of the prototype vaccine is its low immunogenic activity.
Известен способ изготовления вирусвакцины против БМ, включающий инфицирование культуры клеток ФЭК штаммом CV1988 ВБМ 1 серотипа, инкубирование зараженной культуры, сбор вируссодержащей клеточной массы, добавление криопротектора и получение целевого продукта (1). A known method of manufacturing a virus vaccine against BM, including infection of cell culture FEC strain CV1988 VBM 1 serotype, incubation of the infected culture, collecting virus-containing cell mass, adding a cryoprotectant and obtaining the target product (1).
Известен способ изготовления вирусвакцины против БМ, включающий инфицирование культуры клеток ФЭК штаммом SB-1 ВГК 2 серотипа, инкубирование зараженной культуры, сбор вируссодержащей клеточной массы, добавление криопротектора и получение целевого продукта (2). A known method of manufacturing a virus vaccine against BM, including infection of the cell culture of FEC strain SB-1 of
Известен способ изготовления вирусвакцины против БМ, включающий инфицирование культуры клеток ФЭК штаммом "ВНИВИП" ВБМ, инкубирование зараженной культуры, сбор вируссодержащей клеточной массы, добавление криопротектора и получение целевого продукта (3). A known method of manufacturing a virus vaccine against BM, including infection of the cell culture FEK strain VNIVIP "VBM, incubation of the infected culture, collecting virus-containing cell mass, adding a cryoprotectant and obtaining the target product (3).
Недостатком известных способов изготовления вирусвакцин против БМ состоит в том, что полученные вакцины не обладают достаточно высокой иммуногенной активностью в хозяйствах с высоким уровнем заболеваемости БМ. A disadvantage of the known methods for the manufacture of anti-BM virus vaccines is that the vaccines obtained do not have sufficiently high immunogenic activity in farms with a high incidence of BM.
Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является способ изготовления вирусвакцины против БМ, включающий инфицирование культуры клеток ФЭК штаммом FC-126 ВГИ 3 серотипа, сбор вируссодержащей клеточной массы, добавление криопротектора и получение целевого продукта (4)
Недостаток способа-прототипа состоит в том, что полученная вакцина также не обладает высокой иммуногенной активностью в хозяйствах с высоким уровнем заболеваемости БМ.The closest to the invention according to the set of essential features is a method of manufacturing a virus vaccine against BM, including infection of the cell culture FEC strain FC-126 VGI 3 serotypes, the collection of virus-containing cell mass, the addition of cryoprotectant and obtaining the target product (4)
The disadvantage of the prototype method is that the resulting vaccine also does not have high immunogenic activity in farms with a high incidence of BM.
В задачу создания группы настоящих изобретений входила разработка вирусвакцины против БМ на основе нового штамма ВГИ 3 серотипа, обладающей более высокой иммуногенной активностью по сравнению с вакциной-прототипом, и способа ее изготовления. The task of creating the group of the present inventions was to develop a vaccine against BM based on a new strain of
Технический результат от использования группы предлагаемых изобретений заключается в повышении иммуногенной активности целевого продукта. The technical result from the use of the group of the proposed inventions is to increase the immunogenic activity of the target product.
Указанный технический результат достигнут созданием группы изобретений, образующих единый изобретательский замысел. В группу включены изобретения, одно из которых предназначено для получения другого. The specified technical result is achieved by creating a group of inventions that form a single inventive concept. The group includes inventions, one of which is intended to obtain the other.
Указанный технический результат достигнут созданием вирусвакцины против БМ, охарактеризованной следующей совокупностью признаков:
1) вирусвакцина против БМ;
2) суспензия клеток, инфицированных штаммом ВГИ 3 серотипа;
3) из штаммов 3 серотипа вакцина содержит штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ;
4) штамм "ВНИИЗЖ/N110" взят в эффективном количестве;
5) вирусвакцина содержит штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ с биологической активностью не ниже 1•105 ФОЕ/см3;
6) в качестве клеточного субстрата вирусвакцина содержит культуру клеток ФЭК:
7) сыворотка крови КРС;
8) ДМСО в качестве криопротектора;
9) вирусвакцина содержит суспензию клеток ФЭК, инфицированных штаммом "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ, сыворотку крови КРС и ДМСО в следующем соотношении, мас. %:
суспензия инфицированных клеток - 60,0-80,0
сыворотка крови КРС - 15,0-25,0
ДМСО - 5,0-15,0
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:
1) вирусвакцина против БМ;
2) суспензия клеток, инфицированных штаммом ВГИ 3 серотипа;
3) из штаммов 3 серотипа вирусвакцина содержит штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ;
4) штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ взят в эффективном количестве;
5) сыворотка крови КРС.The specified technical result is achieved by the creation of a virus vaccine against BM, characterized by the following set of features:
1) vaccine against BM;
2) a suspension of cells infected with a strain of
3) of the strains of
4) the strain "ARRIAH / N110" taken in an effective amount;
5) the virus vaccine contains the strain "ARRIAH / N110" VGI with biological activity not lower than 1 • 10 5 IU / cm 3 ;
6) as a cell substrate, the virus vaccine contains a cell culture FEC:
7) blood serum of cattle;
8) DMSO as a cryoprotectant;
9) the virus vaccine contains a suspension of cells FEC infected with strain "ARRIAH / N110" VGI, serum of cattle and DMSO in the following ratio, wt. %:
suspension of infected cells - 60.0-80.0
cattle blood serum - 15.0-25.0
DMSO - 5.0-15.0
The present invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is sought:
1) vaccine against BM;
2) a suspension of cells infected with a strain of
3) from
4) strain "ARRIAH / N110" VGI taken in an effective amount;
5) serum of cattle.
6) ДМСО. 6) DMSO.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими признаками, выражающими конкретные формы его выполнения или особые условия использования:
1) в качестве клеточного субстрата вирусвакцина содержит культуру клеток ФЭК;
2) вирусвакцина содержит штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ с биологической активностью не менее 1•105 ФОЕ/см3;
3) вирусвакцина содержит суспензию клеток ФЭК, инфицированных штаммом "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ, сыворотку крови КРС и ДМСО в следующем соотношении, мас. %:
суспензия инфицированных клеток - 60,0-80,0
сыворотка крови КРС - 15,0-25,0
ДМСО - 5,0-15,0
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вирусвакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1) вирусвакцина против БМ;
2) суспензия клеток, инфицированных штаммом ВГИ 3 серотипа;
3) сыворотка крови КРС;
4) ДМСО.The present invention is also characterized by other features expressing specific forms of its implementation or special conditions of use:
1) as a cell substrate, the virus vaccine contains a cell culture FEC;
2) the virus vaccine contains the strain "ARRIAH / N110" VGI with biological activity of at least 1 • 10 5 IU / cm 3 ;
3) the virus vaccine contains a suspension of FEC cells infected with the strain "ARRIAH / N110" VGI, blood serum of cattle and DMSO in the following ratio, wt. %:
suspension of infected cells - 60.0-80.0
cattle blood serum - 15.0-25.0
DMSO - 5.0-15.0
The signs of the invention, characterizing the proposed virus vaccine and coinciding with the signs of the prototype, including the generic concept, reflecting the purpose, are:
1) vaccine against BM;
2) a suspension of cells infected with a strain of
3) serum of cattle;
4) DMSO.
По сравнению с вирусвакциной-прототипом существенным отличительным признаком является то, что из штаммов 3 серотипа предлагаемая вирусвакцина содержит штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ, взятый в эффективном количестве. Compared with the prototype virus vaccine, an essential distinguishing feature is that of the
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы его выполнения или особые условия использования:
1) в качестве клеточного субстрата вирусвакцина содержит культуру клеток ФЭК;
2) вирусвакцина содержит штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ с биологической активностью не ниже 1•105 ФОЕ/см3;
3) вирусвакцина содержит суспензию клеток ФЭК, инфицированных штаммом "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ, сыворотку крови КРС и ДМСО в следующем соотношении, мас. %:
суспензия инфицированных клеток - 60,0-80,0
сыворотка крови КРС - 15,0-25,0
ДМСО - 5,0-15,0
Предлагаемая вирусвакцина обладает более высокой иммуногенной активностью по сравнению с вирусвакциной - прототипом.The present invention is also characterized by other distinctive features expressing specific forms of its implementation or special conditions of use:
1) as a cell substrate, the virus vaccine contains a cell culture FEC;
2) the virus vaccine contains the strain "ARRIAH / N110" VGI with biological activity not lower than 1 • 10 5 IU / cm 3 ;
3) the virus vaccine contains a suspension of FEC cells infected with the strain "ARRIAH / N110" VGI, blood serum of cattle and DMSO in the following ratio, wt. %:
suspension of infected cells - 60.0-80.0
cattle blood serum - 15.0-25.0
DMSO - 5.0-15.0
The proposed virus vaccine has a higher immunogenic activity compared to the virus vaccine prototype.
Штамм "ВНИИЗЖ/N110" является новым, ранее неизвестным вариантом ВГИ. The strain "ARRIAH / N110" is a new, previously unknown version of the VGI.
Указанный технический результат достигнут также созданием способа изготовления вирусвакцины против БМ, охарактеризованного следующей совокупностью признаков:
1) способ изготовления вирусвакцины против БМ;
2) инфицирование культуры клеток штаммом ВГИ 3 серотипа;
3) в качестве клеточного субстрата используют культуру клеток ФЭК;
4) из штаммов 3 серотипа используют штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ в эффективном количестве;
5) штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ используют с биологической активностью не ниже 1•105 ФОЕ/см3;
6) инкубирование зараженной культуры;
7) сбор вируссодержащей клеточной массы;
8) добавление криопротектора;
9) суспензию клеток ФЭК, инфицированных штаммом "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ, сыворотку крови КРС и ДМСО берут в соотношении 12:16 - 3:5 - 1:3 соответственно;
10) получение целевого продукта.The specified technical result was also achieved by the creation of a method of manufacturing a virus vaccine against BM, characterized by the following set of features:
1) a method of manufacturing a virus vaccine against BM;
2) infection of the cell culture with a strain of
3) as a cell substrate using cell culture FEC;
4) from strains of 3 serotypes use the strain "ARRIAH / N110" VGI in an effective amount;
5) the strain "ARRIAH / N110" VGI used with biological activity not lower than 1 • 10 5 FOE / cm 3 ;
6) incubation of the infected culture;
7) collection of virus-containing cell mass;
8) the addition of cryoprotectant;
9) a suspension of FEK cells infected with the strain ARRIAH / N110 VGI, blood serum of cattle and DMSO taken in the ratio of 12:16 - 3: 5 - 1: 3, respectively;
10) obtaining the target product.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:
1) способ изготовления вирусвакцины против БМ;
2) инфицирование культуры клеток штаммом "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ 3 серотипа;
3) инкубирование зараженной культуры;
4) сбор вируссодержащей клеточной массы;
5) добавление криопротектора;
6) получение целевого продукта.The present invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is sought:
1) a method of manufacturing a virus vaccine against BM;
2) infection of cell culture with strain "ARRIAH / N110"
3) incubation of the infected culture;
4) collection of virus-containing cell mass;
5) the addition of a cryoprotectant;
6) obtaining the target product.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими признаками, выражающими конкретные формы использования:
1) в качестве клеточного субстрата используют культуру клеток ФЭК;
2) штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ используют с биологической активностью не ниже 1•105 ФОЕ/см3;
3) суспензию клеток ФЭК, инфицированных штаммом "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ, сыворотку крови КРС и ДМСО берут в соотношении 12:16 - 3:5 - 1:3 соответственно.The present invention is also characterized by other features expressing specific forms of use:
1) as a cell substrate using cell culture FEC;
2) the strain "ARRIAH / N110" VGI used with biological activity of not less than 1 • 10 5 FOE / cm 3 ;
3) a suspension of FEK cells infected with the strain “ARRIAH / N110” VGI, serum of cattle and DMSO are taken in the ratio of 12:16 - 3: 5 - 1: 3, respectively.
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемый способ и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1) способ изготовления вирусвакцины против БМ;
2) инфицирование культуры клеток штаммом ВГИ 3 серотипа;
3) инкубирование зараженной культуры;
4) сбор вируссодержащей клеточной массы;
5) добавление криопротектора;
6) получение целевого продукта.The signs of the invention, characterizing the proposed method and coinciding with the signs of the prototype, including the generic concept, reflecting the purpose, are:
1) a method of manufacturing a virus vaccine against BM;
2) infection of the cell culture with a strain of
3) incubation of the infected culture;
4) collection of virus-containing cell mass;
5) the addition of a cryoprotectant;
6) obtaining the target product.
По сравнению со способом-прототипом существенным отличительным признаком изобретения является использование в составе вирусвакцины нового штамма "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ в эффективном количестве. Compared with the prototype method, an essential distinguishing feature of the invention is the use of a new strain of VGIIZZh / N110 VGI in the vaccine composition in an effective amount.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы его выполнения или особые условия использования:
1) в качестве клеточного субстрата используют культуру клеток ФЭК;
2) штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ используют с биологической активностью не ниже 1•105 ФОЕ/см3;
3) суспензию клеток ФЭК, инфицированных штаммом "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ, сыворотку крови КРС и ДМСО берут в соотношении 12:16 - 3:5 - 1:3 соответственно.The present invention is also characterized by other distinctive features expressing specific forms of its implementation or special conditions of use:
1) as a cell substrate using cell culture FEC;
2) the strain "ARRIAH / N110" VGI used with biological activity of not less than 1 • 10 5 FOE / cm 3 ;
3) a suspension of FEK cells infected with the strain “ARRIAH / N110” VGI, serum of cattle and DMSO are taken in the ratio of 12:16 - 3: 5 - 1: 3, respectively.
Вирусвакцина, полученная предлагаемым способом, обладает более высокой иммуногенной активностью по сравнению с аналогичным препаратом, полученным способом-прототипом. Virus vaccine obtained by the proposed method has a higher immunogenic activity compared to a similar drug obtained by the prototype method.
Достижение технического результата от использования предлагаемого способа объясняется тем, что при изготовлении вирусвакцины используют новый штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ, обладающий по сравнению со штаммом FC-126 ВГИ более высокой иммуногенной активностью. The achievement of the technical result from the use of the proposed method is explained by the fact that in the manufacture of the vaccine, a new strain of ARRIAH / N110 VGI is used, which has a higher immunogenic activity compared to the FC-126 VGI strain.
Исходный вирус для получения штамма "ВНИИЗЖ/N110" был выделен в 1998 году из эпителия перьевых фолликулов СПФ-цыплят, иммунизированных вируссодержащим материалом из штамма FC-126 ВГИ. Производственный штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ получен методом перемежающихся пассажей через организм СПФ-цыплят и культуру клеток фибробластов СПФ-эмбрионов кур. Штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ представляет собой апатогенный генетически однородный вирусный материал, легко культивируемый в культуре куриных эмбриональных фибробластов с высокой биологической активностью (титр вируса 2,0-3,0•106 ФОЕ/см3) и вызывающий напряженный иммунитет по сравнению со штаммом FC-126 у привитой птицы.The original virus for obtaining strain "ARRIAH / N110" was isolated in 1998 from the epithelium of feather follicles of SPF chickens immunized with virus-containing material from strain FC-126 VGI. The production strain "ARRIAH / N110" VGI obtained by the method of alternating passages through the body of SPF chickens and cell culture of fibroblasts of SPF chicken embryos. The strain "ARRIAH / N110" VGI is a pathogenic genetically homogeneous viral material that is easily cultivated in a culture of chicken embryonic fibroblasts with high biological activity (virus titer 2.0-3.0 • 10 6 CFU / cm 3 ) and causing intense immunity compared with strain FC-126 in a vaccinated bird.
Штамм "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) 18.12.98 г. под регистрационным номером "ВНИИЗЖ/N 110-ДЕП". The strain "ARRIAH / N110" VGI was deposited in the collection of microorganisms of the All-Russian State Research Institute for Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines (VGNKI) on December 18, 1998 under the registration number "ARRIAH / N 110-DEP".
По сравнению со штаммом FC-126 штамм "ВНИИЗЖ/N 110" обладает более высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде. Экспериментально подтверждена его возможность использования для приготовления вакцины против БМ. Штамм "ВНИИЗЖ/N 110" ВГИ обеспечивает получение живой вакцины против БМ, создающей защиту птиц против указанного возбудителя заболевания. Compared with the FC-126 strain, the strain "ARRIAH / N 110" has a higher biological, antigenic and immunogenic activity in its native form. It has been experimentally confirmed that it can be used to prepare a vaccine against BM. The strain "ARRIAH / N 110" VGI provides a live vaccine against BM, which protects birds against the specified pathogen.
Сущность изобретения пояснена на графическом материале (см. чертеж), на котором представлена нуклеотидная последовательность фрагмента гена gB 966-1296 штамма "ВНИИЗЖ/N 110" ВГИ (жирным шрифтом отмечены его нуклеотидные отличия от штамма FC-126). The invention is illustrated in graphic material (see drawing), which shows the nucleotide sequence of the gene fragment gB 966-1296 strain "ARRIAH / N 110" VGI (bold indicates its nucleotide differences from strain FC-126).
Штамм "ВНИИЗЖ/N 110" ВГИ характеризуется следующими признаками и свойствами. The strain "ARRIAH / N 110" VGI is characterized by the following features and properties.
Морфологические признаки
Штамм "ВНИИЗЖ/N 110" ВГИ относится к семейству Herpesviridae, роду Herpesvirus, серотипу 3. На основании сравнительного электронно-микроскопического изучения производственного штамма FC-126 ВГИ и штамма "ВНИИЗЖ/N 110" при репродукции их в культурах клеток установлена идентичность характеристик обоих штаммов. Эти вирусы проходили онтогенетический цикл развития в нуклеоплазме, а в цитоплазме - завершающие стадии морфогенеза. Внутриядерный цикл развития включает стадии виропласта, нуклеотида, сборку нуклеокапсида, формирование наружной суперкапсидной мембраны. Наиболее частой формой, присутствующей на всех стадиях культивирования, является нуклеокапсид с нуклеотидом, представленным плотным образованием, заключенным в капсидную белковую оболочку. При электронно-микроскопическом исследовании штамм "ВНИИЗЖ/N 110" представлен типичными для вирусов герпеса группами В вирионами, имеющими икосаэдрическую форму, нуклеокапсид содержит 2-нитевую ДНК. В ядре пораженной клетки вирион имеет величину 90-100 нм, в цитоплазме размер его увеличивается за счет белковой оболочки до 180-200 нм. Оболочка состоит из 162 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.Morphological features
The strain "ARRIAH / N 110" VGI belongs to the family Herpesviridae, the genus Herpesvirus,
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм "ВНИИЗЖ/N 110" ВГИ относится к серотипу 3. При введении в организм вызывает латентно протекающую вирусемию. Антитела к данному вирусу обнаруживают в крови цыплят к 14-21-дневному сроку с дальнейшим нарастанием к 40-60 дню. При вакцинации вирус индуцирует образование специфических антител, выявляемых в РДП и ИФА. Активность в РСК не установлена. Концентрированный антиген "ВНИИЗЖ/N 110" реагирует в РДП со специфическими сыворотками ВГИ и ВБМ. Выявляются общие антигены с ВБМ в прямой и непрямой РИФ. При разрушении клетки вступает в реакцию с антителами к ВГИ и ВБМ в РН. В ИФА вступает в реакцию с антителами к ВГИ и ВБМ.Antigenic properties
According to its antigenic properties, the strain "ARRIAH / N 110" VGI belongs to serotype 3. When introduced into the body, it causes latent viremia. Antibodies to this virus are found in the blood of chickens by 14-21 days with a further increase by 40-60 days. During vaccination, the virus induces the formation of specific antibodies detected in RDP and ELISA. Activity in the CSC has not been established. The concentrated antigen "ARRIAH / N 110" reacts in RDP with specific serum VGI and VBM. Common antigens with VBM in the direct and indirect RIF are detected. When the cell is destroyed, it reacts with antibodies to VGI and VBM in the pH. The ELISA reacts with antibodies to HBV and VBM.
Биотехнологические характеристики
Штамм "ВНИИЗЖ/N 110" активно размножается в СПФ-эмбрионах кур и в первично-трипсинизированной культуре фибробластов СПФ-эмбрионов кур. Трипсинизацию эмбрионов и культивирование фибробластов проводят по общепринятым методикам с использованием смеси сред на основе ГЛА, Игла и 199, взятых в равных частях, с добавлением 10% эмбриональной сыворотки КРС. Клетки фибробластов выращивают во флаконах емкостью 50 см3 и 100 см3 (Повицкого), в матрасах емкостью 1,5 дм3 и в роллерных 3-литровых сосудах. Посевная концентрация для флаконов и матрасов составляет 400-500 кл/см3, для роллерных сосудов от 1,2 до 1,5 млн. кл/см3. При размножении в культуре фибробластов вирус проявляет ярко выраженный цитопатический эффект - образование характерных фокусов, состоящих из рефрактильных округлых клеток (поликариоцитов). Размеры фокуса достигают 0,1-0,2 мм. При проведении последовательных пассажей в культуре фибробластов СПФ-эмбрионов кур инфекционный титр вируса увеличивался и достигал 2,0-3,0•106 ФОЕ/см3 (фокусообразующих единиц).Biotechnological characteristics
The strain "ARRIAH / N 110" actively propagates in SPF-embryos of chickens and in the primary trypsinized culture of fibroblasts of SPF-embryos of chickens. Trypsinization of embryos and cultivation of fibroblasts is carried out according to standard methods using a mixture of media based on GLA, Needle and 199, taken in equal parts, with the addition of 10% fetal bovine serum. Fibroblast cells are grown in bottles with a capacity of 50 cm 3 and 100 cm 3 (Povitsky), in mattresses with a capacity of 1.5 dm 3 and in roller 3-liter vessels. The seed concentration for bottles and mattresses is 400-500 cells / cm 3 , for roller vessels from 1.2 to 1.5 million cells / cm 3 . When propagating in a culture of fibroblasts, the virus exhibits a pronounced cytopathic effect - the formation of characteristic foci consisting of rounded refractile cells (polykaryocytes). Focus sizes reach 0.1-0.2 mm. During consecutive passages in the culture of fibroblasts of SPF chicken embryos, the infectious titer of the virus increased and reached 2.0-3.0 • 10 6 CFU / cm 3 (focus-forming units).
При заражении 6-суточных СПФ-эмбрионов кур в желточный мешок штамм "ВНИИЗЖ/N 110" вызывает их гибель до 20% на 3-5 сутки инкубации. У павших эмбрионов отмечают отставание в росте, гепатиты, увеличение селезенки и почек. На хориоаллантоисной оболочке образуются мелкие бляшки серовато-белого цвета звездчатой формы размером до 1 мм в небольших количествах. У эмбрионов развивается гепатит. Штамм "ВНИИЗЖ/N 110" ВГИ предназначен для использования в качестве сырья для изготовления живой вакцины против БМ. When 6-day-old SPF embryos of chickens are infected in the yolk sac, the strain “ARRIAH / N 110” causes their death up to 20% on 3-5 days of incubation. In fallen embryos, growth retardation, hepatitis, an increase in the spleen and kidneys are noted. On the chorioallantoic membrane, small grayish-white star-shaped plaques up to 1 mm in size are formed in small amounts. Embryos develop hepatitis. The strain "ARRIAH / N 110" VGI is intended for use as a raw material for the manufacture of a live vaccine against BM.
Результаты определения репродуктивной способности штамма "ВНИИЗЖ/N 110" в культуре клеток фибробластов СПФ-эмбрионов кур представлены в таблице 1. The results of determining the reproductive ability of strain "ARRIAH / N 110" in cell culture of fibroblasts of SPF chicken embryos are presented in table 1.
Хемо- и генотаксономическая характеристика
Штамм "ВНИИЗЖ/N 110" является ДНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 108-120•106 Д. Нуклеиновая кислота представлена двуцепочечной линейной молекулой. Содержание G+C - 46%. Вирион состоит из нуклеотида, икосаэдрического капсида, асимметрично расположенного вокруг капсида электронноплотного материала, обозначаемого как тегумент, и липопротеидной оболочки. Вирионная ДНК участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники в свою очередь расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Основными антигенными белками являются гликопротеины А (gA) и В (gB). Гликопротеин В играет важную роль в индукции защитного иммунитета и является высококонсервативным среди герпесвирусов. Он представляет собой комплекс трех гликопротеинов: gp 49, gp 60 и gp 100.Chemo- and genotaxonomic characterization
The strain "ARRIAH / N 110" is a DNA-containing virus with a molecular weight of 108-120 • 10 6 D. Nucleic acid is a double-stranded linear molecule. The content of G + C is 46%. The virion consists of a nucleotide, an icosahedral capsid, asymmetrically located around the capsid of electron-dense material, designated as tegument, and a lipoprotein membrane. Virionic DNA is involved in the formation of precursor proteins in infected cells. The precursors, in turn, cleave to form more stable structural and non-structural virus polypeptides. The main antigenic proteins are glycoproteins A (gA) and B (gB). Glycoprotein B plays an important role in the induction of protective immunity and is highly conserved among herpes viruses. It is a complex of three glycoproteins: gp 49, gp 60 and
Проведено определение первичной структуры фрагмента гена gB вируса с помощью полимеразно-цепной реакции (ПЦР) и секвенирования амплифицированного фрагмента. Изучение нуклеотидной последовательности генома штамма "ВНИИЗЖ/N 110" методом секвенирования по Сенсеру показало, что фрагмент гена gB 966-1296H имеет 2 нуклеотидные замены в позициях 1038Н "С" на "Т", 1200Н "А" на "G" и одну замену в позиции 1175Н с "Т" на "C" в отличие от штамма FC-126, представленного в международном ген-банке. Таким образом, штамм "ВНИИЗЖ/N 110" отличается от штамма FC-126 по трем нуклеотидным основаниям, однако все три мутации не приводят к заменам соответствующих аминокислот. Гомология нуклеотидной структуры исследованного фрагмента штаммов FC-126 и "ВНИИЗЖ/N 110" составляет 99,1%. Результаты исследований представлены на прилагаемом графическом материале. The primary structure of the virus gB gene fragment was determined using the polymerase chain reaction (PCR) and amplified fragment sequencing. The study of the nucleotide sequence of the genome of strain ARRIAH / N 110 by Senser sequencing showed that the gene fragment gB 966-1296H has 2 nucleotide substitutions at positions 1038H "C" with "T", 1200H "A" with "G" and one change in position 1175Н from "T" to "C" in contrast to strain FC-126, presented in the international gene bank. Thus, the strain "ARRIAH / N 110" differs from the strain FC-126 in three nucleotide bases, however, all three mutations do not lead to substitutions of the corresponding amino acids. The homology of the nucleotide structure of the studied fragment of the FC-126 and ARRIAH / N 110 strains is 99.1%. The research results are presented on the attached graphic material.
Устойчивость к внешним факторам
Устойчивость штамма "ВНИИЗЖ/N 110" ВГИ к физическим и химическим факторам характеризуется следующими данными. Центрифугирование при 50000 g осаждает вирус в течение 1 час. В пределах pH 4-10 вирус чувствителен к эфиру.Resistance to external factors
The resistance of the strain "ARRIAH / N 110" VGI to physical and chemical factors is characterized by the following data. Centrifugation at 50,000 g precipitates the virus for 1 hour. In the range of pH 4-10, the virus is sensitive to ether.
Вирус выдерживает неоднократное замораживание - оттаивание и воздействие ультразвуком в течение 10 мин. Полная термоинактивация вируса происходит при 4oC через 2 недели хранения, при 20-25oC - через 4 дня, при 37oC - через 18 часов и при 60oC - за 10 мин.The virus can withstand repeated freezing - thawing and exposure to ultrasound for 10 minutes. Complete thermal inactivation of the virus occurs at 4 o C after 2 weeks of storage, at 20-25 o C after 4 days, at 37 o C after 18 hours and at 60 o C in 10 minutes.
Хранение и консервирование
Вирус сохраняется в клеточно-ассоциированном виде в смеси из равных объемов сред на основе гидролизата лактальбумина (ГЛА), Игла и 199 с 20% сыворотки КРС и 10% диметилсульфоксида в герметически запаянных ампулах в жидком азоте при - 196oС в течение 24 месяцев.Storage and preservation
The virus is stored in a cell-associated form in a mixture of equal volumes of media based on a lactalbumin hydrolyzate (GLA), Needle and 199 with 20% cattle serum and 10% dimethyl sulfoxide in hermetically sealed ampoules in liquid nitrogen at - 196 ° C for 24 months.
Патогенные свойства
Не вызывает инфекции у птиц, контагиозность не установлена. Лабораторные и домашние животные к вирусу не чувствительны.Pathogenic properties
It does not cause infection in birds; contagiousness has not been established. Laboratory and domestic animals are not sensitive to the virus.
Иммуногенность штамма
Штамм вызывает иммунитет в дозе 1000 ФОЕ у 90-98% цыплят в производственных условиях. Иммуногенность не меняется в течение 5 последовательных пассажей.The immunogenicity of the strain
The strain induces immunity at a dose of 1000 IU in 90-98% of chickens in a production environment. Immunogenicity does not change for 5 consecutive passages.
Дополнительные признаки и свойства
Штамм "ВНИИЗЖ/N 110" ВГИ свободен от контаминации бактериальной и грибковой флорой, чужеродными вирусами и микоплазмами, безвреден в 10-кратной дозе для суточных цыплят.Additional features and properties
The strain "ARRIAH / N 110" VGI is free from contamination by bacterial and fungal flora, foreign viruses and mycoplasmas, harmless in a 10-fold dose for daily chickens.
На основании полученных данных можно утверждать, что штамм "ВНИИЗЖ/N 110" ВГИ является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным изолятом ВГИ. Based on the data obtained, it can be argued that the strain "ARRIAH / N 110" VGI is an original, taxonomically new, previously unknown isolate of VGI.
В таблице 2 приведены результаты сравнительного изучения признаков и свойств штамма "ВНИИЗЖ/N 110" и штамма FC-126. Table 2 shows the results of a comparative study of the characteristics and properties of the strain "ARRIAH / N 110" and strain FC-126.
Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемых изобретений, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам предлагаемых изобретений. Определение из перечня выявленных аналогов прототипов, как наиболее близких по совокупности признаков, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вирусвакцины и способа ее изготовления, изложенных в независимых пунктах формулы. The analysis of the prior art by the applicant, including a search by patent and scientific and technical sources of information, and the identification of sources containing information about analogues of the proposed inventions, made it possible to establish that the applicant did not find sources characterized by features that are identical (identical) to all the essential features of the proposed inventions. The determination from the list of identified analogues of prototypes as the ones closest in the totality of features made it possible to establish the set of salient features of the proposed virus vaccine and the method for its manufacture, as set forth in the independent claims, that are seen by the applicant as the technical result.
Следовательно, заявляемые изобретения соответствуют условию патентоспособности "новизна". Therefore, the claimed invention meets the condition of patentability "novelty."
Для проверки соответствия предлагаемых решений условию патентоспособности "изобретательский уровень" проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительные части независимых пунктов формулы. Результаты поиска показали, что предлагаемые решения не вытекают для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемых изобретений), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемых изобретений преобразований для достижения технического результата. To check the compliance of the proposed solutions with the patentability condition "inventive step", an additional search for known solutions was carried out to identify features included in the distinctive parts of the independent claims. The search results showed that the proposed solutions do not follow explicitly for the specialist from the prior art set forth in the corresponding section of the description (no solutions having features matching the distinguishing features of the proposed inventions have been identified), and the effect of the transformations provided for by the essential features of the proposed inventions has not been identified to achieve a technical result.
Следовательно, предлагаемая вакцина и способ ее изготовления соответствуют условию патентоспособности "изобретательский уровень". Therefore, the proposed vaccine and method of its manufacture meet the condition of patentability "inventive step".
Сущность предлагаемых изобретений пояснена примерами их исполнения. The essence of the proposed invention is illustrated by examples of their implementation.
Пример 1. Example 1
Вакцину готовят следующим образом. Вакцинный штамм "ВНИИЗЖ/N110" хранят в сосудах Дьюара с жидким азотом (- 196oC). При изготовлении вакцины производят рассев расплодки в культуре куриных эмбриональных фибробластов. Для этого берут 3-7 ампул с вакцинным штаммом вируса, титр которого должен быть не менее 1•105 ФОЕ/см3. После извлечения из азота ампулы немедленно помещают в воду с температурой 35-37oC до полного оттаивания. После оттаивания содержимого ампул горлышки ампул тщательно обтирают спиртом, обжигают и отбивают запаянные концы стерильным корнцангом. Пипеткой аккуратно берут содержимое ампул, объединяют и разводят (или используют без разведения) питательной средой, содержащей смесь сред на основе ГЛА, Игла и 199, взятых в равном соотношении, из расчета, чтобы в каждом 1 см3 содержалось 10000 ФОЕ. Затем сливают из роллерных флаконов с 24-48-часовой культурой клеток ростовую среду и заменяют ее поддерживающей с 2% сыворотки КРС. В поддерживающую среду вносят вируссодержащую суспензию в количестве 100-150 ФОЕ/см3 площади флакона. Флаконы с зараженной культурой помещают в роллерную установку со скоростью вращения 8-10 об/час в термальной комнате (термостате) при температуре 39-40oC на 3 суток. К моменту съема клеток типичные фокусные поражения на культуре клеток должны быть отчетливо видны под микроскопом.The vaccine is prepared as follows. The vaccine strain "ARRIAH / N110" is stored in Dewar vessels with liquid nitrogen (-196 o C). In the manufacture of the vaccine, the seed is sieved in chicken embryonic fibroblast culture. To do this, take 3-7 ampoules with a vaccine strain of the virus, the titer of which must be at least 1 • 10 5 FOU / cm 3 . After extraction from nitrogen, the ampoules are immediately placed in water at a temperature of 35-37 o C until completely thawed. After thawing the contents of the ampoules, the necks of the ampoules are thoroughly wiped with alcohol, burned and the sealed ends are beaten with a sterile forceps. The contents of the ampoules are carefully taken with a pipette, combined and diluted (or used without dilution) with a nutrient medium containing a mixture of media based on GLA, Needle and 199, taken in equal proportions, so that each 1 cm 3 contains 10,000 CFU. Then the growth medium is drained from the roller bottles with a 24-48-hour cell culture and replaced with cattle supporting it with 2% serum. Virus-containing suspension is added to the support medium in an amount of 100-150 IU / cm 3 of the vial area. Vials with infected culture are placed in a roller unit with a rotational speed of 8-10 rpm in a thermal room (thermostat) at a temperature of 39-40 o C for 3 days. By the time the cells are harvested, typical focal lesions on the cell culture should be clearly visible under the microscope.
Поддерживающую среду удаляют осторожно, не допуская смывания клеток со стекла, в сосуды вносят подогретый до 30-37oC 0,125-0,25% раствор трипсина из расчета 0,07-0,1 см3/см2 площади флакона. Монослой смачивают раствором трипсина 2-3 мин, затем раствор трипсина сливают, флаконы вращают со скоростью до 20 об/мин при комнатной температуре 5-7 мин, после чего в сосуды в тех же объемах вносят поддерживающую питательную среду без сыворотки. Энергичным покачиванием клетки отслаивают от стекла и суспендируют в среде, после чего проводят 2 пассаж. С этой целью инфицированными клетками, собранными с одного роллерного флакона, заражают свежий монослой из расчета 1:5-1: 10, т.е. 5-10 роллерных флаконов, и культивируют монослой до съема вируса и проведения 3 пассажа 48 часов. Сосуды с клеточными культурами, зараженными вирусом первого пассажа, помещают в роллерные установки в термальной комнате при 39-40oC. Характер специфического вирусного поражения монослоя, зараженного вирусом первого пассажа, несколько отличается от поражений, вызываемых вирусом второго пассажа. При культивировании вируса первого пассажа отмечают очаговое (фокусное) поражение монослоя. Вирус второго пассажа поражает гораздо большую часть клеток: в культуре клеток на 50-70% монослоя образуются симпласты и поликариоциты (крупные многоядерные клетки), которые легко можно увидеть под микроскопом. Сбор клеток, инфицированных вирусом второго пассажа, осуществляется методом, описанным для вируса первого пассажа. Клеточносвязанным вирусом второго пассажа заражают монослойные культуры клеток (3 пассаж вируса) из расчета 1:50-1:100 и затем их инкубируют 48-72 часа. По окончании периода инкубации в термальной комнате при 39-40oC проводят сбор инфицированных клеток. Для этого инфицированные монослои обрабатывают 0,125-0,25% раствором трипсина, т.е. так же, как и при съеме вируса первого и второго пассажей. После удаления трипсина во флаконы вносят поддерживающую среду с 20% сыворотки крови КРС и 10% ДМСО. Объем среды для сбора и суспендирования клеток составляет 0,02-0,04 см3/см2 площади флакона. Собранные суспензии инфицированных клеток объединяют в общем объеме. Концентрация клеток в суспензии должна быть 5-10 млн/см3. Собранную суспензию инфицированных клеток разливают по 1-2 см3 в предварительно маркированные ампулы, которые закрывают стерильной ватой, запаивают в пламени газовой горелки и помещают в холодильник (2-4oC) на 40-60 мин. Затем ампулы выдерживают 40-60 мин при -40oC, после этого ампулы с вакциной немедленно погружают в жидкий азот.The supporting medium is carefully removed, preventing the cells from being washed off the glass, and 0.125-0.25% trypsin solution is added to the vessels at a rate of 0.07-0.1 cm 3 / cm 2 of the vial area heated to 30-37 ° C. The monolayer is moistened with a trypsin solution for 2-3 minutes, then the trypsin solution is drained, the bottles are rotated at a speed of up to 20 rpm at room temperature for 5-7 minutes, after which a supportive nutrient medium without serum is introduced into the vessels in the same volumes. Vigorous shaking of the cells is peeled off from the glass and suspended in the medium, after which 2 pass is carried out. To this end, infected cells collected from a single roller bottle infect a fresh monolayer at a rate of 1: 5-1: 10, i.e. 5-10 roller bottles, and cultivate a monolayer prior to virus removal and 3
Полученную таким образом вакцину контролируют на стерильность и инфекционную активность. Титр вируса в вакцине должен быть не ниже 1•105 ФОЕ/см3. По титру устанавливают количество иммунизирующих доз в 1 см3. За одну прививную дозу принимают 1000 ФОЕ. Срок годности вакцины при условии хранения ее в жидком азоте 12 месяцев. Вирусвакцина жидкая культуральная применяется с профилактической целью. Вакцинируют цыплят в первые часы после выборки из выводных шкафов непосредственно в инкубатории. Вакцину в дозе 1000 ФОЕ/0,2 см3 вводят цыплятам внутримышечно в верхнюю треть бедра.The vaccine thus obtained is monitored for sterility and infectious activity. The titer of the virus in the vaccine should not be lower than 1 • 10 5 IU / cm 3 . The titer set the number of immunizing doses in 1 cm 3 . For one vaccination dose, 1000 IU are taken. The shelf life of the vaccine, provided that it is stored in liquid nitrogen for 12 months. Virus vaccine liquid culture is used for prophylactic purposes. Chicks are vaccinated in the first hours after sampling from hatchers directly in the hatchery. The vaccine at a dose of 1000 IU / 0.2 cm 3 is administered intramuscularly to chickens in the upper third of the thigh.
Полученная вирусвакцина против БМ имеет оптимальный компонентный состав, мас.%:
Суспензия клеток ФЭК, инфицированных штаммом "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ - 60,0 - 80,0
Сыворотка крови КРС - 15,0 - 25,0
ДМСО - 5,0-15,0
Пример 2
Проведены испытания предлагаемой вирусвакцины против БМ, содержащей, мас.%:
Суспензия клеток ФЭК, инфицированных штаммом "ВНИИЗЖ/N110" ВГИ - 70,0
Сыворотка крови КРС - 20,0
ДМСО - 10,0
Сравнительная оценка эффективности вирусвакцины из штамма "ВНИИЗЖ/N110" и вирусвакцины из штамма FC-126 проведена на суточных цыплятах. Для этого было сформировано 4 группы цыплят. Цыплят 1 группы в количестве 50 голов вакцинировали вакциной из штамма "ВНИИЗЖ/N110" в дозе 1000 ФОЕ/0,2 см3. Цыплят 2 группы в количестве 50 голов вакцинировали вакциной из штамма-прототипа FC-126 в дозе 1000 ФОЕ/0,2 см3. Цыплят в 3 группе в количестве 51 головы заражали вирулентным штаммом "Конкур". Цыплят 4 группы в количестве 48 голов использовали в качестве контроля содержания опыта. Через 14 дней цыплят в 1 и 2 группах заражали вирулентным штаммом "Конкур". Результаты опыта приведены в таблице 3.The resulting anti-BM virus vaccine has an optimal component composition, wt.%:
Suspension of FEC cells infected with strain "ARRIAH / N110" VGI - 60.0 - 80.0
Serum of cattle - 15.0 - 25.0
DMSO - 5.0-15.0
Example 2
Tests of the proposed virus vaccine against BM containing, wt.%:
Suspension of FEC cells infected with strain "ARRIAH / N110" VGI - 70.0
Serum of cattle - 20.0
DMSO - 10.0
A comparative assessment of the effectiveness of the virus vaccine from strain "ARRIAH / N110" and the virus vaccine from strain FC-126 was carried out on day old chickens. For this, 4 groups of chickens were formed. Chickens of the 1st group in the amount of 50 animals were vaccinated with a vaccine from the strain "ARRIAH / N110" at a dose of 1000 FOU / 0.2 cm 3 . Chickens of 2 groups in the amount of 50 animals were vaccinated with the vaccine from the prototype strain FC-126 at a dose of 1000 FOE / 0.2 cm 3 . Chickens in the 3rd group in the amount of 51 heads were infected with the virulent strain "Jumping". Chickens of 4 groups in the amount of 48 goals were used as a control of the content of the experiment. After 14 days, chickens in
Приведенные в таблице 3 данные свидетельствуют о возможности изготовления вакцины против БМ из штамма "ВНИИЗЖ/N110" для специфической профилактики БМ. The data presented in table 3 indicate the possibility of manufacturing a vaccine against BM from strain "ARRIAH / N110" for specific prevention of BM.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемых изобретений следующей совокупности условий:
- вирусвакцина против БМ и способ ее изготовления, воплощающие предлагаемые изобретения, предназначены для использования в сельском хозяйстве, а именно, в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
- для группы предлагаемых изобретений в том виде, как они охарактеризованы в независимых пунктах формулы изобретения, подтверждена возможность их осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
- при использовании предлагаемых вирусвакцины против БМ на основе штамма "ВНИИЗЖ/N110" и способа ее изготовления достигается технический результат, предусмотренный задачей создания изобретения.Thus, the above information indicates the fulfillment of the following set of conditions when using the proposed inventions:
- virus vaccine against BM and the method of its manufacture embodying the proposed invention, are intended for use in agriculture, namely, in veterinary virology and biotechnology;
- for the group of proposed inventions in the form as described in the independent claims, the possibility of their implementation using the means and methods described in the application or known prior to the priority date is confirmed;
- when using the proposed virus vaccines against BM on the basis of the strain "ARRIAH / N110" and the method of its manufacture, the technical result provided by the task of creating the invention is achieved.
Следовательно, предлагаемая группа изобретений соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость". Therefore, the proposed group of inventions meets the condition of patentability "industrial applicability".
Литература:
1. Ветеринарные препараты. Справочник. Сост. Осидзе Д.Ф.-М.- Колос.- 1981. - С. 140-144.Literature:
1. Veterinary drugs. Directory. Comp. Osidze D.F.-M.- Kolos. - 1981. - S. 140-144.
2. Сюрин В.Н. и др. Вирусные болезни животных / М. - ВНИТИБП. - 1988. - С. 689-721. 2. Syurin V.N. and other Viral diseases of animals / M. - VNITIBP. - 1988 .-- S. 689-721.
3. Пат. России N 2059404, А 61 К 39/255, 10.05.96 г. 3. Pat. Russia N 2059404, A 61 K 39/255, 05/10/96.
4. Временная инструкция по изготовлению и контролю клеточной культуральной вирусвакцины против БМ из штамма FC-126 ВГИ. Утверждена ГУВ МСХ СССР 04.06.84 г. (прототип). 4. Temporary instructions for the manufacture and control of cell culture virus vaccine against BM from strain FC-126 VGI. Approved GUV Ministry of Agriculture of the USSR 06.06.84 g. (Prototype).
5. Коровин P. Н., Зеленский В.М. Опухолевые болезни птиц/ М. - Колос.- 1984. - 223 с. 5. Korovin P. N., Zelensky V. M. Tumor diseases of birds / M. - Kolos. - 1984. - 223 p.
6. Пат. ЕПВ N 0496135, А 61 К 39/255, 27.07.94 г. 6. Pat. EPO N 0496135, A 61 K 39/255, 07.27.94
7. Пат. ЕПВ N 0703294; А 61 К 39/255; C 12 N 7/00, 27.03.96 г. 7. Pat. EPO N 0703294; A 61 K 39/255; C 12
Claims (8)
Суспензия клеток, инфицированных штаммом ВГНКИ "ВНИИЗЖ/ 110-ДЕП" - 60 - 80
Сыворотка крови крупного рогатого скота - 15 - 25
Диметилсульфоксид - 5 - 15
5. Способ изготовления вирусвакцины против болезни Марека, включающий инфицирование культур штаммом вируса герпеса индеек 3 серотипа, инкубирование зараженной культуры, сбор вируссодержащей суспензии клеток, добавление криопротектора и получение целевого продукта, отличающийся тем, что из штаммов 3 серотипа используют штамм вируса герпеса индеек, сем.Herpesviridae, род Herpesvirus ВГНКИ "ВНИИЗЖ/ 110-ДЕП" в эффективном количестве.4. Virus vaccine according to claim 1, characterized in that the virus vaccine contains a suspension of cells infected with a strain of VGNKI ARRIAH / 110-DEPT, blood serum of cattle and dimethyl sulfoxide in the following ratio, wt.%:
Suspension of cells infected with strain VGNKI "ARRIAH / 110-DEPT" - 60 - 80
Cattle blood serum - 15 - 25
Dimethyl sulfoxide - 5 - 15
5. A method of manufacturing a vaccine against Marek’s disease, including infection of cultures with a strain of turkey herpes virus 3 serotypes, incubating the infected culture, collecting a virus-containing suspension of cells, adding a cryoprotectant and obtaining the target product, characterized in that the turkey herpes virus strain is used from serotype 3 strains .Herpesviridae, genus Herpesvirus VGNKI "ARRIAH / 110-DEPT" in an effective amount.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99113465A RU2144378C1 (en) | 1999-06-28 | 1999-06-28 | Virus-vaccine against mareck's disease and method of its preparing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99113465A RU2144378C1 (en) | 1999-06-28 | 1999-06-28 | Virus-vaccine against mareck's disease and method of its preparing |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2144378C1 true RU2144378C1 (en) | 2000-01-20 |
Family
ID=20221665
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99113465A RU2144378C1 (en) | 1999-06-28 | 1999-06-28 | Virus-vaccine against mareck's disease and method of its preparing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2144378C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2410117C1 (en) * | 2009-06-29 | 2011-01-27 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ") | Viral vaccine against marek's disease |
| CN118356484A (en) * | 2024-04-19 | 2024-07-19 | 华南农业大学 | A MD vaccine and preparation method thereof |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1452344A (en) * | 1973-02-09 | 1976-10-13 | Rit Rech Ind Therapeut | Stable viral preparations |
| US5565202A (en) * | 1994-08-12 | 1996-10-15 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Low enhancement serotype 2 vaccine for marek's disease |
| US5686287A (en) * | 1994-07-14 | 1997-11-11 | Akzo Nobel N.V. | Marek's disease virus vaccine |
| RU96111000A (en) * | 1995-06-12 | 1998-10-10 | Дюфар Интернэшнл Рисерч Б.В. | VACCINE AGAINST MARECA'S DISEASE |
-
1999
- 1999-06-28 RU RU99113465A patent/RU2144378C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1452344A (en) * | 1973-02-09 | 1976-10-13 | Rit Rech Ind Therapeut | Stable viral preparations |
| US5686287A (en) * | 1994-07-14 | 1997-11-11 | Akzo Nobel N.V. | Marek's disease virus vaccine |
| US5565202A (en) * | 1994-08-12 | 1996-10-15 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Low enhancement serotype 2 vaccine for marek's disease |
| RU96111000A (en) * | 1995-06-12 | 1998-10-10 | Дюфар Интернэшнл Рисерч Б.В. | VACCINE AGAINST MARECA'S DISEASE |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2410117C1 (en) * | 2009-06-29 | 2011-01-27 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ") | Viral vaccine against marek's disease |
| CN118356484A (en) * | 2024-04-19 | 2024-07-19 | 华南农业大学 | A MD vaccine and preparation method thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110218706B (en) | Construction and application of recombinant turkey herpes virus expressing HA protein of H7N9 subtype highly pathogenic avian influenza virus | |
| JP2017526737A (en) | Recombinant serotype 9 avian adenovirus vector vaccine | |
| CN113491767A (en) | Triple inactivated vaccine for duck circovirus disease, novel duck reovirus disease and duck viral hepatitis and preparation method thereof | |
| CN107296956A (en) | Gene recombination live vector vaccine | |
| CN119193507B (en) | A novel attenuated strain of goose parvovirus and its construction method and application | |
| RU2144378C1 (en) | Virus-vaccine against mareck's disease and method of its preparing | |
| RU2144562C1 (en) | Turkey herpes virus strain "vniizzh/n 110" for preparing vaccine against mareck's disease | |
| CN119530299A (en) | A recombinant vector, a recombinant baculovirus, and preparation method and application thereof | |
| RU2144376C1 (en) | Dry virus-vaccine against mareck's disease and method of its preparing | |
| RU2140452C1 (en) | Foot and mouth virus disease type a strain n 1707 "armenia-98" used for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| CN110484515B (en) | A kind of vaccine carrier for preventing FAdV-4 and NDV and its preparation method and application | |
| RU2144377C1 (en) | Bivalent vaccine against mareck's disease and method of its preparing | |
| RU2127602C1 (en) | Strain "bg" of avian infection bursitis virus and vaccine against avian infection bursitis | |
| RU2242513C1 (en) | Foot and mouth disease virus strain a(georgia)1999/ 1721 type a for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2205660C2 (en) | Virus vaccine against marek's disease | |
| RU2294760C2 (en) | Sorbed inactivated vaccine against foot-and-mouth disease of type a | |
| RU2410117C1 (en) | Viral vaccine against marek's disease | |
| RU2209635C2 (en) | Method for preparing virus-vaccine against mareck's disease | |
| RU2127604C1 (en) | Vaccine against avian infectious bursitis | |
| RU2682876C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever | |
| RU2336303C1 (en) | Industrial strain "vladimir" of turkey herpesvirus for viral vaccine for marek's disease | |
| RU2199583C1 (en) | Mareck's disease virus strain 3004/ 109 for vaccine preparation preparing | |
| RU2266326C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2191825C1 (en) | "bio-92" viral strain of infectious bursal poultry disease for manufacturing vaccines, diagnostic and other biopreparations | |
| RU2266327C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120629 |