RU2142470C1 - Tetrapeptide trp-nle-asp-phenh-ch(ch3)2 showing antialcoholic activity - Google Patents
Tetrapeptide trp-nle-asp-phenh-ch(ch3)2 showing antialcoholic activity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2142470C1 RU2142470C1 RU98123484A RU98123484A RU2142470C1 RU 2142470 C1 RU2142470 C1 RU 2142470C1 RU 98123484 A RU98123484 A RU 98123484A RU 98123484 A RU98123484 A RU 98123484A RU 2142470 C1 RU2142470 C1 RU 2142470C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tetrapeptide
- activity
- antialcoholic
- asp
- nle
- Prior art date
Links
- 230000002075 anti-alcohol Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 14
- 230000000338 anxiogenic effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 abstract 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 abstract 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 26
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 20
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108010012944 Tetragastrin Proteins 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- RGYLYUZOGHTBRF-BIHRQFPBSA-N tetragastrin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)CCSC)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 RGYLYUZOGHTBRF-BIHRQFPBSA-N 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- XYXYXSKSTZAEJW-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 XYXYXSKSTZAEJW-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010001605 Alcohol poisoning Diseases 0.000 description 2
- -1 Boc-amino Chemical group 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100039813 Inactive tyrosine-protein kinase 7 Human genes 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- QVQLCTNNEUAWMS-UHFFFAOYSA-N barium oxide Chemical compound [Ba]=O QVQLCTNNEUAWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940094678 diasorb Drugs 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical group CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PGYPOBZJRVSMDS-UHFFFAOYSA-N loperamide hydrochloride Chemical compound Cl.C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(C(=O)N(C)C)CCN(CC1)CCC1(O)C1=CC=C(Cl)C=C1 PGYPOBZJRVSMDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 102200027050 rs121908278 Human genes 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQGKMKBNHAFRBV-IBGZPJMESA-N (4-nitrophenyl) (2s)-3-(1h-indol-3-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound O=C([C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)OC(C)(C)C)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LQGKMKBNHAFRBV-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- TVENQUPLPBPLGU-NRFANRHFSA-N (4-nitrophenyl) (2s)-3-phenyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoate Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC(=O)[C@@H](NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 TVENQUPLPBPLGU-NRFANRHFSA-N 0.000 description 1
- HYBVISCYJVVEDX-UHFFFAOYSA-N 4-(4-aminophenyl)-3-chloroaniline Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1Cl HYBVISCYJVVEDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CSDQQAQKBAQLLE-UHFFFAOYSA-N 4-(4-chlorophenyl)-4,5,6,7-tetrahydrothieno[3,2-c]pyridine Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C1C(C=CS2)=C2CCN1 CSDQQAQKBAQLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700023286 8-sulfocholecystokinin octapeptide Proteins 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 101800001982 Cholecystokinin Proteins 0.000 description 1
- 102100025841 Cholecystokinin Human genes 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229940107137 cholecystokinin Drugs 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 1
- 230000003533 narcotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к органической химии, а именно к синтезу пептидов, обладающих антиалкогольной активностью. The invention relates to organic chemistry, namely to the synthesis of peptides with anti-alcohol activity.
Известен пептид формулы Asp-Туr(SE)-Met-Gly-Trp-Met- Asp-PheNH2 (CCK-8S), обладающий способностью снижать потребление этанола у хронически алкоголизированных животных при его центральном (в желудочки мозга) введении (В журнале "Нейрохимия", 1996 г., N 2, с. 149). Недостатками этого пептида являются неприемлемость центрального способа введения для практической медицины, а также трудоемкость и высокие экономические затраты при его получении.A known peptide of the formula Asp-Tur (SE) -Met-Gly-Trp-Met-Asp-PheNH 2 (CCK-8S), which has the ability to reduce the consumption of ethanol in chronically alcoholized animals with its central (in the ventricles of the brain) introduction (In the journal " Neurochemistry ", 1996,
Известен пептид - эндогенный тетрапептид холецистокинина Trp- Met-Asp-PheNH2 (ССК-4, или тетрагастрин) (В журнале "European Neuropsychopharmacology", 1996, v. 6, p. 263). Недостатком этого тетрапептида является его анксиогенная активность, что ограничивает его использование в качестве лекарственного средства. При введении тетрагастрина у здоровых людей в 17% случаев наблюдаются признаки тревоги или паники, а у больных с паническим состоянием в 90% случаев регистрируется увеличение выраженности панических признаков (В журнале "J. Psychiatry-Neuroscience", 1991, v. 16, N 2, p. 91).A known peptide is the endogenous tetrapeptide of cholecystokinin Trp-Met-Asp-PheNH 2 (CCK-4, or tetra-gastrin) (In the journal "European Neuropsychopharmacology", 1996, v. 6, p. 263). The disadvantage of this tetrapeptide is its anxiogenic activity, which limits its use as a medicine. With the introduction of tetragastrin in healthy people in 17% of cases there are signs of anxiety or panic, and in patients with a panic state in 90% of cases an increase in the severity of panic symptoms is recorded (In the journal J. Psychiatry-Neuroscience, 1991, v. 16, No. 2 , p. 91).
Техническим результатом изобретения является создание тетрапептида Trp-Nle-Asp-PheNH -CH(CH3)2, который обладает антиалкогольной активностью и не оказывает анксиогенного действия при периферическом способе введения, а также удешевление способа его получения.The technical result of the invention is the creation of the tetrapeptide Trp-Nle-Asp-PheNH-CH (CH 3 ) 2 , which has anti-alcohol activity and does not have anxiogenic effects in the peripheral route of administration, as well as the cheaper way to obtain it.
Этот результат достигается синтезом тетрапептида формулы:
Trp-Nle-Asp-Phe-NH-CH(CH3)2
He вытекает из известного уровня техники, что сокращение пептидной цепочки и замена остатка метионина на остаток норлейцина и C-концевой амидной группы на изопропиламидную в структуре эндогенного ССК-4 будет способствовать наличию антиалкогольной активности и отсутствию анксиогенного эффекта, что делает возможным использование заявляемого тетрапептида в качестве основы для разработки лекарственных средств, обладающих антиалкогольной активностью.This result is achieved by the synthesis of a tetrapeptide of the formula:
Trp-Nle-Asp-Phe-NH-CH (CH 3 ) 2
It follows from the prior art that the reduction of the peptide chain and the replacement of the methionine residue by the residue of norleucine and the C-terminal amide group with an isopropylamide group in the structure of endogenous CCK-4 will contribute to the presence of anti-alcohol activity and the absence of anxiogenic effect, which makes it possible to use the claimed tetrapeptide as the basis for the development of drugs with anti-alcohol activity.
Данный пептид представляет собой белый порошок, растворимый в воде с 20% этанола или ацетонитрила, уксусной кислоте, нерастворимый в гексане, эфире. Пептид гомогенен по данным тонкослойной хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии, охарактеризован данными количественного аминокислотного анализа и ядерно-магнитного резонанса (ЯМР). This peptide is a white powder, soluble in water with 20% ethanol or acetonitrile, acetic acid, insoluble in hexane, ether. The peptide is homogeneous according to thin layer chromatography, high performance liquid chromatography, characterized by quantitative amino acid analysis and nuclear magnetic resonance (NMR).
Синтез пептида осуществляют классическим методом в растворе путем последовательного наращивания пептидной цепи по одной аминокислоте, начиная с C-конца, с использованием активированных эфиров Z, Boc-аминокислот. Боковая карбоксильная функция аспарагиновой кислоты защищалась трет-бутильной группой. Деблокирование Boc-, But-защищенного тетрапептида проводят действием трифторуксусной кислоты (ТФА) с добавкой 5% деионизованной воды и 5% этандитиола. Очистку целевого продукта проводят с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Ниже приведен пример получения заявляемого препарата.The peptide synthesis is carried out by the classical method in solution by successively building up the peptide chain of one amino acid, starting from the C-terminus, using activated Z, Boc-amino acid esters. Lateral carboxy function of aspartic acid was protected by a tert-butyl group. The release of the Boc-, Bu t -protected tetrapeptide is carried out by trifluoroacetic acid (TFA) with the addition of 5% deionized water and 5% ethanedithiol. Purification of the target product is carried out using high performance liquid chromatography (HPLC). The following is an example of obtaining the claimed drug.
В работе используют L-аминокислоты и их производные фирм Reanal (Венгрия), Bachem, Fluka (Швейцария). L-amino acids and their derivatives Reanal (Hungary), Bachem, Fluka (Switzerland) are used in the work.
Тонкослойную хроматографию (ТСХ) осуществляют на хроматографических пластинках Kieselgel 60 (Merck, Германия) в системах растворителей: хлороформ - метанол - 50% уксусная кислота 90:10:2 (А); этилацетат - гексан 1:1 (Б), хлороформ - метанол - 50% уксусная кислота 85:15:2 (В), хлороформ - метанол - 32% уксусная кислота 15:4:1 (Г). Вещества обнаруживают на пластинках с помощью хлорбензидинового реагента. Гидрирование пептидов проводят в присутствии 10% Pd/C (палладий на угле) фирмы Fluka или Merck (5-10% по весу). Thin layer chromatography (TLC) was carried out on Kieselgel 60 chromatographic plates (Merck, Germany) in solvent systems: chloroform — methanol — 50% acetic acid 90: 10: 2 (A); ethyl acetate - hexane 1: 1 (B), chloroform - methanol - 50% acetic acid 85: 15: 2 (C), chloroform - methanol - 32% acetic acid 15: 4: 1 (D). Substances are detected on plates using a chlorobenzidine reagent. Hydrogenation of the peptides is carried out in the presence of 10% Pd / C (palladium on carbon) from Fluka or Merck (5-10% by weight).
Приведенные температуры плавления (не скорректированы) определяют на нагревательном столике Boetius (Германия). The indicated melting points (not adjusted) are determined on a Boetius heating table (Germany).
N, N-диметилформамид (DMF) перегоняют над нингидрином и окисью бария, хлористый метилен промывают концентрированной серной кислотой и водой, сушат над CaCl2, перегоняют над CaCl2, затем над гидридом кальция.N, N-dimethylformamide (DMF) was distilled over ninhydrin and barium oxide, methylene chloride was washed with concentrated sulfuric acid and water, dried over CaCl 2 , distilled over CaCl 2 , then over calcium hydride.
Для экстракции из водных растворов, кристаллизации применяют растворители марок ч. и х.ч., для ВЭЖХ - ацетонитрил (Technofarm, Россия). For extraction from aqueous solutions and crystallization, solvents of the pure and pure parts are used; for HPLC, acetonitrile (Technofarm, Russia).
Аминокислотный анализ пептидов, гидролизованных 6 н. HCl с 2% тиогликолевой кислоты при 110oC в течение 24 ч, проводят на автоматическом анализаторе Biotronik LC 5001 (Германия).Amino acid analysis of peptides hydrolyzed 6 N. HCl with 2% thioglycolic acid at 110 ° C for 24 hours is carried out on a Biotronik LC 5001 automated analyzer (Germany).
Аналитическую ВЭЖХ целевого продукта проводят на приборе Gilson (Франция) на колонке (4.6х250мм) Beckman (Ultrasphere ODS) в условиях градиентной элюции буфером Б (80% ацетонитрила + 20% буфера А) в буфере А (0.1% водная трифторуксусная кислота). Детекцию осуществляют при длине волны 220 нм. Препаративную ВЭЖХ тетрапептида проводят на колонке Диасорб 130 С16Т (24х250 мм). Analytical HPLC of the target product was carried out on a Gilson instrument (France) on a Beckman column (4.6x250 mm) (Ultrasphere ODS) under gradient elution with buffer B (80% acetonitrile + 20% buffer A) in buffer A (0.1% aqueous trifluoroacetic acid). Detection is carried out at a wavelength of 220 nm. Preparative HPLC of the tetrapeptide is carried out on a Diasorb 130 C16T column (24x250 mm).
Растворы упаривают на роторном испарителе Buchi (Швейцария) при 40oC.The solutions are evaporated on a Buchi rotary evaporator (Switzerland) at 40 o C.
Z-Phe-NH-CH(CH3)2 (I). К раствору 1.26 г (3 ммоль) Z-Phe-ONp в 10 мл метанола прибавляют 10 мл 5% раствора изопропиламина в хлороформе, выдерживают 12 ч, упаривают досуха, продукт переосаждают из изопропилового спирта гексаном. Получено 1,0 г (96.7%) соединения (I). Rf 0.86 (А), 0.94 (Г). Т. пл. 154-155oC.Z-Phe-NH-CH (CH 3 ) 2 (I). To a solution of 1.26 g (3 mmol) of Z-Phe-ONp in 10 ml of methanol was added 10 ml of a 5% solution of isopropylamine in chloroform, held for 12 hours, evaporated to dryness, the product was reprecipitated from isopropyl alcohol with hexane. Obtained 1.0 g (96.7%) of compound (I). R f 0.86 (A), 0.94 (D). T. pl. 154-155 o C.
Z-Asp(OBut)-Phe-NH-CH(CH3)2 (II). 0.50 г (1.5 ммоль) соединения (I) гидрируют в 5 мл смеси метанола, этанола и воды в присутствии Pd/C. Катализатор отфильтровывают, промывают метанолом, фильтрат упаривают. Остаток растворяют в 5 мл DMF, к полученному раствору прибавляют 0.53 г (1.2 ммоль) Z- Asp(OBut)ONp. Через 16 ч реакционную смесь концентрируют в вакууме, к остатку добавляют 50 мл 5% раствора NaCO3. Выпавший белый осадок отфильтровывают, промывают на фильтре водой до нейтральной реакции, переосаждают из изопропилового спирта гексаном. Получено 0.60 г (98%) соединения (II). Rf 0.89 (А), 0.50 (Б).Z-Asp (OBu t ) -Phe-NH-CH (CH 3 ) 2 (II). 0.50 g (1.5 mmol) of compound (I) is hydrogenated in 5 ml of a mixture of methanol, ethanol and water in the presence of Pd / C. The catalyst is filtered off, washed with methanol, and the filtrate is evaporated. The residue was dissolved in 5 ml of DMF, 0.53 g (1.2 mmol) of Z-Asp (OBu t ) ONp was added to the resulting solution. After 16 hours, the reaction mixture was concentrated in vacuo, 50 ml of 5% NaCO 3 solution was added to the residue. The precipitated white precipitate is filtered off, washed on the filter with water until neutral, reprecipitated from isopropyl alcohol with hexane. Obtained 0.60 g (98%) of compound (II). R f 0.89 (A), 0.50 (B).
Z-Nle-Asp(OBut)-Phe-NH-CH(CH3)2 (III). 0.60 г соединения (II) растворяют в 5 мл этанола и гидрируют аналогично соединению (I). Полученный в виде масла продукт гидрирования растворяют в 5 мл DMF, к раствору прибавляют 0.46 г (1.2 ммоль) Z-Nle-ONp. Через 16 ч реакционную смесь обрабатывают аналогично соединению (II). Получено 0.58 г (77%) соединения (III). Rf 0.75 (А), 0.30 (Б).Z-Nle-Asp (OBu t ) -Phe-NH-CH (CH 3 ) 2 (III). 0.60 g of compound (II) is dissolved in 5 ml of ethanol and hydrogenated in a similar manner to compound (I). The hydrogenation product obtained as an oil is dissolved in 5 ml of DMF, 0.46 g (1.2 mmol) of Z-Nle-ONp are added to the solution. After 16 hours, the reaction mixture was treated analogously to compound (II). Obtained 0.58 g (77%) of compound (III). R f 0.75 (A), 0.30 (B).
Boc-Trp-Nle-Asp(OBut)-Phe-NH-CH(CH3)2 (IV). 0.30 г (0.48 ммоль) соединения (III) гидрируют в этаноле аналогично соединениям (I) и (II). Полученный в виде масла продукт растворяют в 3 мл DMF, к раствору прибавляют 0.21 г (0.5 ммоль) Boc-Trp-ONp. Через 16 ч реакционную смесь обрабатывают аналогично соединениям (II) и (III). Получено 0.28 г (71.8%) соединения (IV). Rf 0.34 (А), 0.57 (В).Boc-Trp-Nle-Asp (OBu t ) -Phe-NH-CH (CH 3 ) 2 (IV). 0.30 g (0.48 mmol) of compound (III) is hydrogenated in ethanol similarly to compounds (I) and (II). The product obtained as an oil is dissolved in 3 ml of DMF, 0.21 g (0.5 mmol) of Boc-Trp-ONp is added to the solution. After 16 hours, the reaction mixture was treated analogously to compounds (II) and (III). Obtained 0.28 g (71.8%) of compound (IV). R f 0.34 (A), 0.57 (B).
Trp-Nle-Asp-Phe-NH-CH(CH3)2 (V). 0.16 г (0.21 ммоль) соединения (IV) растворяют в охлажденной до 0oC смеси 9 мл трифторуксусной кислоты, 0.5 мл деионизованной воды и 0.5 мл этандитиола. Через 1 ч реакционную смесь концентрируют в вакууме, пептид осаждают холодным сухим эфиром. Сырой продукт деблокирования очищают методом препаративной ВЭЖХ на обращенной фазе в условиях: колонка Диасорб 130 С16Т (24х250 мм), градиентная элюция буфером Б в буфере А (А - 0.1% ТФА, Б-80% ацетонитрила в А) со скоростью 0.5% в мин, скорость потока 4 мл/мин, детекция при 220 нм. Получено 0.11 г (75%) соединения (V) в виде лиофилизата. Rf 0.28 (В), 0.55 (Г). Rt 18.8 мин в условиях: колонка Beckman (Ultrasphere ODS 4.6 x 250), градиентная элюция буфером Б в буфере А от 20 до 80% в течение 30 мин (буфер А-0.1% ТФА, буфер Б - 80% ацетонитрила в буфере А). Т.пл. 132 -140oC.Trp-Nle-Asp-Phe-NH-CH (CH 3 ) 2 (V). 0.16 g (0.21 mmol) of compound (IV) is dissolved in a mixture of 9 ml of trifluoroacetic acid, 0.5 ml of deionized water and 0.5 ml of ethanedithiol, cooled to 0 ° C. After 1 h, the reaction mixture was concentrated in vacuo, the peptide was precipitated with cold dry ether. The crude release product is purified by preparative reverse phase HPLC under the conditions: a Diasorb 130 C16T column (24x250 mm), gradient elution with buffer B in buffer A (A - 0.1% TFA, B-80% acetonitrile in A) at a rate of 0.5% per minute , flow rate 4 ml / min, detection at 220 nm. Received 0.11 g (75%) of compound (V) as a lyophilisate. R f 0.28 (V), 0.55 (D). R t 18.8 min under conditions: Beckman column (Ultrasphere ODS 4.6 x 250), gradient elution with buffer B in buffer A from 20 to 80% for 30 min (buffer A-0.1% TFA, buffer B - 80% acetonitrile in buffer A ) Mp 132 -140 o C.
Пример 1. Крыс (самцов) породы Вистар начальной массы 100-120 г подвергают хронической алкоголизации путем предоставления животным на протяжении 7 месяцев 10% раствора этанола в качестве единственного источника жидкости при отсутствии ограничений в потреблении стандартного брикетированного корма. После 7 месяцев алкоголизации животных предварительно (в течение 10 дней) тестируют на потребление 10% раствора этанола при одновременном предоставлении животным воды в условиях свободного выбора, как описано в Методических рекомендациях Фармакологического комитета Минздрава по экспериментальному (фармакологическому) изучению препаратов, предлагаемых для клинической апробации в качестве средств для лечения и профилактики алкоголизма (В книге "Руководящие методические материалы по экспериментальному и клиническому изучению новых лекарственных средств". Часть 3, Москва, 1981, с. 95. ). После тестирования животные случайным образом разделяют на подгруппы по 10 крыс в каждой. С использованием слепого контроля животным одной группы вводят заявляемый тетрапептид, а другой плацебо - 0,9% раствор NaCl. Инъекцию препарата проводят внутрибрюшинно, ежедневно в течение 5 дней в дозах 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/кг веса животного. Животных тестируют на предпочтительное потребление алкоголя, как описано выше. Результаты определений, проводившихся с использованием слепого контроля, приведены в таблице 1. Example 1. Rats (males) of Wistar breed with an initial weight of 100-120 g are subjected to chronic alcoholization by providing the animals for 7 months with a 10% ethanol solution as the only source of fluid in the absence of restrictions on the consumption of standard briquetted feed. After 7 months of alcoholization, the animals are pre-tested (within 10 days) for consumption of a 10% ethanol solution while simultaneously providing animals with water under free choice, as described in the Methodological Recommendations of the Pharmacological Committee of the Ministry of Health for the experimental (pharmacological) study of drugs proposed for clinical testing in quality of funds for the treatment and prevention of alcoholism (In the book "Guiding methodological materials for experimental and clinical study of new drugs rstvennyh means. "Part 3, Moscow, 1981, p. 95). After testing, animals are randomly divided into subgroups of 10 rats each. Using blind control, the animals of one group are administered the claimed tetrapeptide, and the other placebo - 0.9% NaCl solution. The injection of the drug is carried out intraperitoneally, daily for 5 days in doses of 0.5, 1.0 and 2.0 μg / kg of animal weight. Animals are tested for preferred alcohol consumption as described above. The results of the determinations carried out using blind control are shown in table 1.
Как следует из результатов, представленных в таблице 1, снижение дозы потребляемого алкоголя у контрольных животных в период введения заявляемого тетрапептида в дозах 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/кг было незначительное. As follows from the results presented in table 1, the reduction in the dose of alcohol consumed in control animals during the administration of the inventive tetrapeptide at doses of 0.5, 1.0, and 2.0 μg / kg was insignificant.
Напротив, введение тетрапептида животным с моделью хронической алкогольной интоксикации сопровождается достоверным снижением дозы потребляемого алкоголя, наиболее выраженным при введении тетрапептида в дозе 2,0 мкг/кг веса. In contrast, administration of a tetrapeptide to animals with a model of chronic alcohol intoxication is accompanied by a significant reduction in the dose of alcohol consumed, most pronounced when the tetrapeptide was administered at a dose of 2.0 μg / kg body weight.
Пример 2. В эксперименте исследуют способность заявляемого тетрапептида потенцировать действие наркотической дозы этанола (4 г/кг веса внутрибрюшинно). Показателем активности соединения служит изменение "бокового положения" крыс в опытных группах по сравнению с контрольными животными. Опыты проводят на интактных и хронически алкоголизированных животных. Моделирование хронической алкогольной интоксикации проводят способом, аналогичным приведенному в примере 1. Заявляемый тетрапептид вводят внутрибрюшинно в дозе 2,0 мкг/г веса за 15 минут до введения этанола. В качестве плацебо, как и прежде, используют 0,9% раствор NaCl. Example 2. In an experiment, the ability of the claimed tetrapeptide to potentiate the effect of a narcotic dose of ethanol (4 g / kg ip) is investigated. An indicator of the activity of the compound is the change in the "lateral position" of rats in the experimental groups compared with control animals. The experiments are carried out on intact and chronically alcoholized animals. Modeling of chronic alcohol intoxication is carried out in a manner similar to that described in example 1. The inventive tetrapeptide is administered intraperitoneally at a dose of 2.0 μg / g weight 15 minutes before the introduction of ethanol. As a placebo, as before, use a 0.9% solution of NaCl.
Результаты определений приведены в таблице 2. Как следует из представленных в таблице 2 данных, заявляемый тетрапептид не изменяет продолжительность "бокового положения" у контрольных животных и достоверно сокращает его продолжительность у хронически алкоголизированных крыс. The determination results are shown in table 2. As follows from the data presented in table 2, the claimed tetrapeptide does not change the duration of the "lateral position" in control animals and significantly reduces its duration in chronically alcoholized rats.
Пример 3. В эксперименте исследуют наличие у заявляемого соединения анксиогенного эффекта. Для решения этого вопроса используют два поведенческих теста: тест "светлая-темная" камера (В журнале "Pharmacol Biochem Behav", 1980, v. 13, p. 167) и тест конфликтной ситуации, или тест Вогеля (В журнале "Psychopharmacol.", 1971, v. 21, p. 1). Example 3. In the experiment, the presence of the claimed compound has an anxiogenic effect. Two behavioral tests are used to solve this problem: the light-dark test (In the journal Pharmacol Biochem Behav, 1980, v. 13, p. 167) and the conflict test, or the Vogel test (In the journal Psychopharmacol. , 1971, v. 21, p. 1).
Перед тестированием в тесте "светлая-темная" камера у животных в течение 5 минут регистрируют двигательную активность. Затем животных помещают в центр темной камеры и наблюдают в течение 5 минут, регистрируя время нахождения в светлой камере (t в светлой камере в сек) и количество переходов между темной и светлой камерой. Заявляемый тетрапептид вводят внутрибрюшинно за 30 минут до тестирования в дозе 2 мкг/кг веса животного. Уменьшение длительности нахождения животных в светлой камере по сравнению с контрольными животными, получавшими 0,9% раствор NaCl, является показателем наличия у исследуемого соединения анксиогенной активности. Before testing in the test "light-dark" chamber in animals for 5 minutes register motor activity. Then the animals are placed in the center of the dark chamber and observed for 5 minutes, recording the time spent in the light chamber (t in the light chamber in sec) and the number of transitions between the dark and light chamber. The inventive tetrapeptide is administered intraperitoneally 30 minutes before testing at a dose of 2 μg / kg of animal weight. The decrease in the duration of animals in the light chamber compared with control animals receiving a 0.9% NaCl solution is an indicator of the presence of anxiogenic activity in the test compound.
Тестирование животных в тесте Вогеля проводят с использованием камеры "Lick supression test". За 72 часа до эксперимента животных лишают воды при избытке стандартного брикетированного корма. За 24 часа до введения заявляемого тетрапептида животные обучаются навыку обнаружения источника воды. Затем животным внутрибрюшинно вводят заявляемый тетрапептид в дозе 2 мкг/кг веса и через 30 минут в условиях подключения электрического тока силой 0,5 мА к электродному полу камеры и поилке с водой регистрируют количество подходов к поилке и количество шоков, получаемых животным во время нахождения у поилки. Уменьшение количества этих показателей в опытной группе животных по сравнению с контрольной группой, получавшей 0,9% раствор NaCl, является показателем наличия у исследуемого соединения анксиогенной активности. Testing animals in the Vogel test is carried out using the camera "Lick supression test". 72 hours before the experiment, the animals are deprived of water with an excess of standard briquetted feed. 24 hours before the introduction of the inventive tetrapeptide, animals learn the skill of detecting a water source. Then, the inventive tetrapeptide is administered intraperitoneally to the animal at a dose of 2 μg / kg body weight and after 30 minutes, under the conditions of connecting an electric current of 0.5 mA to the electrode floor of the chamber and the drinker with water, the number of approaches to the drinker and the number of shocks received by the animal while being drinkers. The decrease in the number of these indicators in the experimental group of animals compared with the control group receiving a 0.9% NaCl solution is an indicator of the presence of anxiogenic activity in the test compound.
Полученные в эксперименте результаты представлены в таблице 3. The results obtained in the experiment are presented in table 3.
Можно видеть, что при введении заявляемого тетрапептида время нахождения животных в светлой камере, а также количество подходов к поилке и количество шоков, получаемых в период нахождения животных у поилки, не отличается от аналогичных показателей в контрольной группе. Эти результаты свидетельствуют, что при периферическом введении заявляемого тетрапептида в дозе 2 мкг/кг веса у исследуемого соединения не регистрируется анксиогенного эффекта. It can be seen that with the introduction of the inventive tetrapeptide, the time spent by the animals in the light chamber, as well as the number of approaches to the drinker and the number of shocks received during the period the animals were at the drinker, does not differ from those in the control group. These results indicate that with the peripheral administration of the inventive tetrapeptide at a dose of 2 μg / kg body weight, the anxiogenic effect is not recorded in the test compound.
Заявляемый тетрапептид Trp-Nle-Asp-PheNH -CH(CH3)2 имеет преимущества перед известными пептидными соединениями, заключающиеся в наличии антиалкогольной активности и отсутствии анксиогенного эффекта при периферическом способе введения, а также удешевлении способа его получения, что позволяет использовать это соединение в качестве основы для разработки лекарственного средства, обладающего антиалкогольной активностью.The inventive tetrapeptide Trp-Nle-Asp-PheNH-CH (CH 3 ) 2 has advantages over the known peptide compounds, which include the presence of anti-alcohol activity and the absence of anxiogenic effect in the peripheral route of administration, as well as the cheaper way to obtain it, which allows the use of this compound in as the basis for the development of a drug with anti-alcohol activity.
Claims (1)
Trp-Nle-Asp-PheNH-CH(CH3)2,
обладающий антиалкогольной активностью.Tetrapeptide
Trp-Nle-Asp-PheNH-CH (CH 3 ) 2 ,
possessing anti-alcohol activity.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98123484A RU2142470C1 (en) | 1998-12-22 | 1998-12-22 | Tetrapeptide trp-nle-asp-phenh-ch(ch3)2 showing antialcoholic activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98123484A RU2142470C1 (en) | 1998-12-22 | 1998-12-22 | Tetrapeptide trp-nle-asp-phenh-ch(ch3)2 showing antialcoholic activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2142470C1 true RU2142470C1 (en) | 1999-12-10 |
Family
ID=20213905
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98123484A RU2142470C1 (en) | 1998-12-22 | 1998-12-22 | Tetrapeptide trp-nle-asp-phenh-ch(ch3)2 showing antialcoholic activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2142470C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2213572C2 (en) * | 2001-04-26 | 2003-10-10 | Научно-исследовательский институт наркологии | Agent potentiating morphine hydrochloride analgetic effect |
| RU2397990C2 (en) * | 2008-10-31 | 2010-08-27 | Федеральное государственное учреждение "Национальный научный центр наркологии" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ | CHLOROHYDRATE OF TETRAPEPTIDE Trp-Nle-Asp-Phe-NH-CH(CH3)2, INHIBITING MORBID ATTRACTION TO MORPHINE |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0207680A3 (en) * | 1985-06-21 | 1989-01-18 | Isf Societa Per Azioni | Chemical compounds chemical compounds |
| EP0246753A3 (en) * | 1986-04-22 | 1989-06-07 | The Salk Institute For Biological Studies | Fibroblast growth factor antagonists |
-
1998
- 1998-12-22 RU RU98123484A patent/RU2142470C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0207680A3 (en) * | 1985-06-21 | 1989-01-18 | Isf Societa Per Azioni | Chemical compounds chemical compounds |
| EP0246753A3 (en) * | 1986-04-22 | 1989-06-07 | The Salk Institute For Biological Studies | Fibroblast growth factor antagonists |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2213572C2 (en) * | 2001-04-26 | 2003-10-10 | Научно-исследовательский институт наркологии | Agent potentiating morphine hydrochloride analgetic effect |
| RU2397990C2 (en) * | 2008-10-31 | 2010-08-27 | Федеральное государственное учреждение "Национальный научный центр наркологии" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ | CHLOROHYDRATE OF TETRAPEPTIDE Trp-Nle-Asp-Phe-NH-CH(CH3)2, INHIBITING MORBID ATTRACTION TO MORPHINE |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4522752A (en) | Retro-inverso analogues of the bradykinin potentiating peptide BPP5a and methods for their preparation | |
| JP2000501382A (en) | Novel amino acid derivatives, their preparation methods and pharmaceutical compositions containing these compounds | |
| DK147851B (en) | NONAPEPTIDAMIDE DERIVATIVES FOR USE IN DIAGNOSTICATION OF HYPOPHYPHENIC FUNCTION AND GONADOTROPINE DEFICIENCY AND REGULATION OF NORMAL ANIMAL PREPARATION | |
| PT2225271E (en) | New non-selective somatostatin analogues | |
| Rodriguez et al. | Synthesis and biological activities of pseudopeptide analogs of the C-terminal heptapeptide of cholecystokinin. On the importance of the peptide bonds | |
| US5298491A (en) | Derivatives of endogenous mediators, their salts, method of preparation, applications and compositions in which they are present | |
| Szirtes et al. | Synthesis of thyrotropin-releasing hormone analogs. 2. Tripeptides structurally greatly different from TRH with high central nervous system activity | |
| PT94537A (en) | Process for the preparation of novel peptides | |
| SK2094A3 (en) | Somatostatine polypeptides, method of their preparing and using | |
| US4407746A (en) | Cyclohexyl and phenyl substituted enkephalins | |
| RU2142470C1 (en) | Tetrapeptide trp-nle-asp-phenh-ch(ch3)2 showing antialcoholic activity | |
| US4299821A (en) | Tripeptides acting on the central nervous system and a process for the preparation thereof | |
| US4518527A (en) | Polypeptides related to the pre-acetylcholine receptor-α of the electric organ of Torpedo californica | |
| Flouret et al. | Synthesis of the thyrotropin-releasing hormone enantiomer and some diastereoisomers and in vitro studies of their biological activity | |
| US3931139A (en) | Tripeptides having an antidepressive and prolactin-releasing action | |
| RU2142813C1 (en) | Tetrapeptide trp-nle-asp-phenh-ch(ch3)2 with anxiolytic activity | |
| WO1993000359A1 (en) | Modified peptides transportable into the central nervous system | |
| EP0080283B1 (en) | N-carboxyalkylproline-containing tripeptides | |
| Olma et al. | The biological consequences of replacing hydrophobic amino acids in deltorphin I with amphiphilic α‐hydroxymethylamino acids | |
| US20060104907A1 (en) | Biologically potent analogues of the Dmt-Tic pharmacophore and methods of use | |
| JP2004501932A (en) | Peptide having tissue-specific activity and method for obtaining pharmaceutical composition based on the peptide | |
| CH654841A5 (en) | APPETIZING TRIPEPTIDES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF. | |
| Amblard et al. | Synthesis and biological evaluation of cholecystokinin analogs in which the Asp-Phe-NH2 moiety has been replaced by a 3-amino-7-phenylheptanoic acid or a 3-amino-6-(phenyloxy) hexanoic acid | |
| JP2004526702A (en) | Tripeptides and tripeptide derivatives for the treatment of diseases after nervous system injury | |
| Elliott et al. | Tetrapeptide CCK agonists: structure-activity studies on modifications at the N-terminus |