Claims (45)
1. Геннотерапевтический вектор, содержащий экспрессионную кассету, которая содержит трансген, кодирующий изоформу ассоциированного с лизосомами мембранного белка 2 (LAMP-2) или ее функциональный вариант, причем указанный трансген оптимизирован для экспрессии в человеческой клетке-хозяине.1. A gene therapy vector containing an expression cassette that contains a transgene encoding an isoform of lysosome-associated membrane protein 2 (LAMP-2) or a functional variant thereof, wherein said transgene is optimized for expression in a human host cell.
2. Геннотерапевтический вектор по п. 1, характеризующийся тем, что указанный трансген кодон-оптимизирован для экспрессии в человеческой клетке-хозяине.2. The gene therapy vector according to claim 1, characterized in that said transgene is codon-optimized for expression in a human host cell.
3. Геннотерапевтический вектор по п. 1, характеризующийся тем, что последовательность указанного трансгена обладает по меньшей мере 95% идентичностью с или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 2–5.3. The gene therapy vector according to claim 1, characterized in that the sequence of said transgene has at least 95% identity with or is at least 99% identical to the sequence selected from SEQ ID NO: 2-5.
4. Геннотерапевтический вектор по любому из пп. 1–3, характеризующийся тем, что указанная экспрессионная кассета содержит консенсусную оптимальную последовательность Козак, которая необязательно содержит SEQ ID NO: 6.4. Gene therapy vector according to any one of paragraphs. 1-3, characterized in that said expression cassette contains a consensus optimal Kozak sequence, which optionally contains SEQ ID NO: 6.
5. Геннотерапевтический вектор по любому из пп. 1–4, характеризующийся тем, что указанная экспрессионная кассета содержит полноразмерную (поли)А-последовательность, которая необязательно содержит SEQ ID NO: 7.5. Gene therapy vector according to any one of paragraphs. 1-4, characterized in that said expression cassette contains a full-length (poly)A sequence, which optionally contains SEQ ID NO: 7.
6. Геннотерапевтический вектор по любому из пп. 1–5, характеризующийся тем, что указанная экспрессионная кассета не содержит в направлении 5′ от трансгена стартового сайта, способного давать альтернативные мРНК.6. Gene therapy vector according to any one of paragraphs. 1–5, characterized in that said expression cassette does not contain a start site in the 5′ direction from the transgene capable of producing alternative mRNAs.
7. Геннотерапевтический вектор по любому из пп. 1–6, характеризующийся тем, что указанная экспрессионная кассета содержит в направлении от 5′- к 3′-концу: первый инвертированный концевой повтор, энхансерную/промоторную область, интроны, консенсусную оптимальную последовательность Козак, трансген, нетранслируемую 3′-область, включающую полноразмерную (поли)А-последовательность, и второй инвертированный концевой повтор.7. Gene therapy vector according to any one of paragraphs. 1–6, characterized in that said expression cassette contains, in the direction from the 5′ to the 3′ end: a first inverted terminal repeat, an enhancer/promoter region, introns, a consensus optimal Kozak sequence, a transgene, an untranslated 3′ region, including a full-length (poly)A sequence, and a second inverted terminal repeat.
8. Геннотерапевтический вектор по п. 7, характеризующийся тем, что указанная энхансерная/промоторная область содержит в направлении от 5′- к 3′-концу энхансер средних и ранних генов цитомегаловируса (CMV IE) и промотор бета-актина курицы, и при этом необязательно энхансерная/промоторная область дополнительно содержит первый экзон и первый интрон гена бета-актина курицы и акцептор сплайсинга гена бета-глобина кролика. 8. The gene therapy vector according to claim 7, characterized in that said enhancer/promoter region contains, in the direction from the 5′- to 3′-end, the enhancer of the middle and early genes of cytomegalovirus (CMV IE) and the chicken beta-actin promoter, and at the same time Optionally, the enhancer/promoter region further comprises the first exon and first intron of the chicken beta-actin gene and a splice acceptor of the rabbit beta-globin gene.
9. Геннотерапевтический вектор по любому из пп. 1–8, характеризующийся тем, что последовательность указанной экспрессионной кассеты обладает по меньшей мере 95% идентичностью с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 8–10.9. Gene therapy vector according to any one of paragraphs. 1-8, characterized in that the sequence of the specified expression cassette has at least 95% identity with the sequence selected from SEQ ID NO: 8-10.
10. Геннотерапевтический вектор по любому из пп. 1–9, характеризующийся тем, что указанный вектор представляет собой вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV) .10. Gene therapy vector according to any one of paragraphs. 1-9, characterized in that said vector is an adeno-associated virus (AAV)-based vector.
11. Геннотерапевтический вектор по п. 10, характеризующийся тем, что AAV представляет собой AAVrh74.11. Gene therapy vector according to claim 10, characterized in that the AAV is AAVrh74.
12. Геннотерапевтический вектор по п. 10, характеризующийся тем, что AAV представляет собой AAV9.12. Gene therapy vector according to claim 10, characterized in that the AAV is AAV9.
13. Фармацевтическая композиция, содержащая геннотерапевтический вектор по любому из пп. 1– 12.13. Pharmaceutical composition containing a gene therapy vector according to any one of paragraphs. 1–12.
14. Способ лечения или предотвращения болезни Данона или другого аутофагического нарушения у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение указанному субъекту геннотерапевтического вектора по любому из пп. 1–12 или фармацевтической композиции по п. 13.14. A method of treating or preventing Danon disease or other autophagic disorder in a subject in need thereof, comprising administering to said subject a gene therapy vector according to any one of claims. 1–12 or the pharmaceutical composition according to claim 13.
15. Способ по п. 14, характеризующийся тем, что указанный вектор или фармацевтическую композицию вводят путем, выбранным из группы, состоящей из внутривенного, внутриартериального, внутрисердечного, интракоронарного, интрамиокардиального, внутрипочечного, внутриуретрального, эпидурального и внутримышечного введения.15. The method according to claim 14, characterized in that the specified vector or pharmaceutical composition is administered by a route selected from the group consisting of intravenous, intraarterial, intracardiac, intracoronary, intramyocardial, intrarenal, intraurethral, epidural and intramuscular administration.
16. Способ по п. 14 или п. 15 для лечения или предупреждения болезни Данона.16. The method according to claim 14 or claim 15 for the treatment or prevention of Danon disease.
17. Способ по п. 14 или п. 15 для лечения аутофагического нарушения, выбранного из группы, состоящей из терминальной сердечной недостаточности, инфаркта миокарда, лекарственных токсичностей, диабета, терминальной почечной недостаточности и старения.17. The method of claim 14 or claim 15 for treating an autophagic disorder selected from the group consisting of end-stage heart failure, myocardial infarction, drug toxicities, diabetes, end-stage renal failure and aging.
18. Способ по любому из пп. 14–17, характеризующийся тем, что указанный субъект представляет собой человека.18. Method according to any one of paragraphs. 14–17, characterized in that said subject is a human.
19. Способ по любому из пп. 14–18, характеризующийся тем, что у указанного субъекта наблюдаются симптомы болезни Данона или другого аутофагического нарушения.19. Method according to any one of paragraphs. 14-18, characterized in that said subject exhibits symptoms of Danon disease or other autophagic disorder.
20. Способ по любому из пп. 14–19, характеризующийся тем, что указанный субъект был идентифицирован как имеющий пониженную или недетектируемую экспрессию LAMP-2.20. Method according to any one of paragraphs. 14-19, characterized in that said subject has been identified as having reduced or undetectable expression of LAMP-2.
21. Способ по любому из пп. 14–20, характеризующийся тем, что указанный субъект был идентифицирован как имеющий мутированный ген LAMP-2.21. Method according to any one of paragraphs. 14-20, characterized in that said subject has been identified as having a mutated LAMP-2 gene.
22. Способ по любому из пп. 14–21, характеризующийся тем, что введение указанного геннотерапевтического вектора приводит к повышению экспрессии полинуклеотида LAMP-2B и/или белка LAMP-2B в сердце по сравнению с его экспрессией у не получавшего лечения субъекта.22. Method according to any one of paragraphs. 14-21, characterized in that the administration of said gene therapy vector results in increased expression of LAMP-2B polynucleotide and/or LAMP-2B protein in the heart compared to its expression in an untreated subject.
23. Способ по любому из пп. 14–22, характеризующийся тем, что введение указанного геннотерапевтического вектора приводит по меньшей мере приблизительно к 1,2-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,3-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,4-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,5-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,6-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,7-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,8-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,9-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,0-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,2-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,3-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,4-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,5-кратному, по меньшей мере приблизительно 3-кратному или по меньшей мере приблизительно 4-кратному повышению экспрессии полинуклеотида LAMP-2B и/или белка LAMP-2B в сердце по сравнению с его экспрессией у не получавшего лечения субъекта.23. Method according to any one of paragraphs. 14–22, characterized in that the introduction of said gene therapy vector results in at least about 1.2-fold, at least about 1.3-fold, at least about 1.4-fold, at least about 1. 5 times, at least about 1.6 times, at least about 1.7 times, at least about 1.8 times, at least about 1.9 times, at least about 2, 0-fold, at least about 2.2-fold, at least about 2.3-fold, at least about 2.4-fold, at least about 2.5-fold, at least about 3-fold a fold or at least approximately 4-fold increase in the expression of LAMP-2B polynucleotide and/or LAMP-2B protein in the heart compared to its expression in an untreated subject.
24. Способ по любому из пп. 14–23, характеризующийся тем, что введение указанного геннотерапевтического вектора приводит к максимум приблизительно 1,1-кратному, максимум приблизительно 1,2-кратному, максимум приблизительно 1,3-кратному, максимум приблизительно 1,4-кратному или максимум приблизительно 1,5-кратному повышению экспрессии полинуклеотида LAMP-2B и/или белка LAMP-2B в печени по сравнению с экспрессией в печени не получавшего лечения субъекта.24. Method according to any one of paragraphs. 14-23, characterized in that administration of said gene therapy vector results in a maximum of about 1.1-fold, a maximum of about 1.2-fold, a maximum of about 1.3-fold, a maximum of about 1.4-fold, or a maximum of about 1, A 5-fold increase in the expression of LAMP-2B polynucleotide and/or LAMP-2B protein in the liver compared to expression in the liver of an untreated subject.
25. Способ экспрессии LAMP-2B у субъекта, включающий системное введение вектора на основе аденоассоциированного вируса (AAV) указанному субъекту, характеризующийся тем, что указанный AAV-вектор содержит экспрессионную кассету, кодирующую LAMP-2B, трансген, функционально связанный с энхансерной/промоторной областью, причем системное введение AAV-вектора указанному субъекту приводит к повышению экспрессии LAMP-2B по сравнению с экспрессией LAMP-2B до введения AAV-вектора или экспрессией LAMP-2B у не получавшего лечения контрольного субъекта.25. A method of expressing LAMP-2B in a subject, comprising systemically administering an adeno-associated virus (AAV) vector to said subject, characterized in that said AAV vector contains an expression cassette encoding LAMP-2B, a transgene operably linked to an enhancer/promoter region wherein systemic administration of the AAV vector to the subject results in increased expression of LAMP-2B compared to the expression of LAMP-2B before administration of the AAV vector or the expression of LAMP-2B in an untreated control subject.
26. Способ по п. 25, характеризующийся тем, что системное введение включает внутривенное введение.26. The method according to claim 25, characterized in that systemic administration includes intravenous administration.
27. Способ по п. 25 или п. 26, характеризующийся тем, что AAV представляет собой AAVrh74.27. The method according to claim 25 or claim 26, characterized in that the AAV is AAVrh74.
28. Способ по п. 25 или п. 26, характеризующийся тем, что AAV представляет собой AAV9.28. The method according to claim 25 or claim 26, characterized in that the AAV is AAV9.
29. Способ по любому из пп. 25-28, характеризующийся тем, что указанный AAV-вектор вводят в дозе от приблизительно 1×1012 до 5×1014 векторных геномов (вг) AAV-вектора на килограмм (кг) общей массы тела субъекта (вг/кг).29. Method according to any one of paragraphs. 25-28, characterized in that said AAV vector is administered at a dose of about 1 x 1012 to 5 x 1014 vector genomes (vg) of the AAV vector per kilogram (kg) of the subject's total body weight (vg/kg).
30. Способ по п. 29, характеризующийся тем, что указанный AAV-вектор вводят в дозе от приблизительно 1×1013 до 5×1014 вг/кг.30. The method of claim 29, characterized in that said AAV vector is administered at a dose of about 1×1013 to 5×1014 vg/kg.
31. Способ по п. 29, характеризующийся тем, что указанный AAV-вектор вводят в дозе от приблизительно 5×1013 до 3×1014 вг/кг.31. The method of claim 29, characterized in that said AAV vector is administered at a dose of approximately 5×1013 to 3×1014 vg/kg.
32. Способ по п. 29, характеризующийся тем, что указанный AAV-вектор вводят в дозе от приблизительно 5×1013 до 1×1014 вг/кг.32. The method of claim 29, characterized in that said AAV vector is administered at a dose of approximately 5×1013 to 1×1014 vg/kg.
33. Способ по любому из пп. 25–32, характеризующийся тем, что указанная энхансерная/промоторная область содержит в направлении от 5′- к 3′-концу энхансер средних и ранних генов цитомегаловируса (CMV IE) и промотор бета-актина курицы, и при этом необязательно энхансерная/промоторная область дополнительно содержит первый экзон и первый интрон гена бета-актина курицы и акцептор сплайсинга гена бета-глобина кролика.33. Method according to any one of paragraphs. 25-32, characterized in that the specified enhancer/promoter region contains in the direction from the 5′- to 3′-end the enhancer of the middle and early genes of cytomegalovirus (CMV IE) and the chicken beta-actin promoter, and optionally the enhancer/promoter region additionally contains the first exon and first intron of the chicken beta-actin gene and a splice acceptor of the rabbit beta-globin gene.
34. Способ по любому из пп. 25–33, характеризующийся тем, что указанная экспрессионная кассета содержит консенсусную оптимальную последовательность Козак, функционально связанную с трансгеном, причем необязательно указанная консенсусная оптимальная последовательность Козак содержит SEQ ID NO: 6.34. Method according to any one of paragraphs. 25-33, characterized in that said expression cassette contains a consensus optimal Kozak sequence operably linked to the transgene, wherein optionally said consensus optimal Kozak sequence comprises SEQ ID NO: 6.
35. Способ по любому из пп. 25–34, характеризующийся тем, что указанная экспрессионная кассета содержит полноразмерную (поли)А-последовательность, функционально связанную с трансгеном, причем указанная полноразмерная (поли)А-последовательность необязательно содержит SEQ ID NO: 7.35. Method according to any one of paragraphs. 25-34, characterized in that said expression cassette contains a full-length (poly)A sequence operably linked to the transgene, wherein said full-length (poly)A sequence optionally contains SEQ ID NO: 7.
36. Способ по любому из пп. 25–35, характеризующийся тем, что указанная экспрессионная кассета не содержит в направлении 5′ от трансгена стартового сайта, способного давать альтернативные мРНК.36. Method according to any one of paragraphs. 25–35, characterized in that the specified expression cassette does not contain a start site in the direction 5′ from the transgene capable of producing alternative mRNAs.
37. Способ по любому из пп. 25–36, характеризующийся тем, что указанная экспрессионная кассета содержит в направлении от 5′- к 3′-концу функционально связанные первый инвертированный концевой повтор, энхансерную/промоторную область, интроны, консенсусную оптимальную последовательность Козак, трансген, нетранслируемую 3′-область, включающую полноразмерную (поли)А-последовательность и второй инвертированный концевой повтор, при этом указанная экспрессионная кассета не содержит стартового кодона в направлении 5′ относительно стартового кодона указанного трансгена.37. Method according to any one of paragraphs. 25–36, characterized in that said expression cassette contains, in the direction from the 5′ to the 3′ end, a functionally linked first inverted terminal repeat, an enhancer/promoter region, introns, a consensus optimal Kozak sequence, a transgene, an untranslated 3′ region, comprising a full-length (poly)A sequence and a second inverted terminal repeat, wherein said expression cassette does not contain a start codon in the 5′ direction relative to the start codon of said transgene.
38. Способ по любому из пп. 25–37, характеризующийся тем, что указанный субъект представляет собой примата.38. Method according to any one of paragraphs. 25-37, characterized in that said subject is a primate.
39. Способ по любому из пп. 25–38, характеризующийся тем, что указанный субъект был идентифицирован как характеризующийся или предположительно имеющий пониженную или недетектируемую экспрессию LAMP-2.39. Method according to any one of paragraphs. 25-38, characterized in that said subject has been identified as having or suspected of having reduced or undetectable expression of LAMP-2.
40. Способ по любому из пп. 25–39, характеризующийся тем, что у указанного субъекта имеется мутированный ген LAMP-2.40. Method according to any one of paragraphs. 25-39, characterized in that said subject has a mutated LAMP-2 gene.
41. Способ по любому из пп. 25–40, характеризующийся тем, что у указанного субъекта наблюдаются симптомы болезни Данона.41. Method according to any one of paragraphs. 25-40, characterized in that said subject exhibits symptoms of Danon's disease.
42. Способ по любому из пп. 25–41, характеризующийся тем, что указанный субъект страдает болезнью Данона или у него имеется риск развития болезни Данона.42. Method according to any one of paragraphs. 25-41, characterized in that said subject suffers from Danon's disease or is at risk of developing Danon's disease.
43. Способ по любому из пп. 25–42, характеризующийся тем, что введение указанного геннотерапевтического вектора приводит к повышению экспрессии полинуклеотида LAMP-2B и/или белка LAMP-2B в сердце по сравнению с не получавшим лечения субъектом.43. Method according to any one of paragraphs. 25-42, characterized in that administration of said gene therapy vector results in increased expression of LAMP-2B polynucleotide and/or LAMP-2B protein in the heart compared to an untreated subject.
44. Способ по любому из пп. 25–43, характеризующийся тем, что введение указанного геннотерапевтического вектора приводит по меньшей мере приблизительно к 1,2-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,3-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,4-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,5-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,6-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,7-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,8-кратному, по меньшей мере приблизительно 1,9-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,0-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,2-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,3-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,4-кратному, по меньшей мере приблизительно 2,5-кратному, по меньшей мере приблизительно 3-кратному или по меньшей мере приблизительно 4-кратному повышению экспрессии полинуклеотида LAMP-2B и/или белка LAMP-2B в сердце по сравнению с его экспрессией у не получавшего лечения субъекта.44. Method according to any one of paragraphs. 25–43, characterized in that the introduction of the specified gene therapy vector leads to at least about 1.2-fold, at least about 1.3-fold, at least about 1.4-fold, at least about 1, 5 times, at least about 1.6 times, at least about 1.7 times, at least about 1.8 times, at least about 1.9 times, at least about 2, 0-fold, at least about 2.2-fold, at least about 2.3-fold, at least about 2.4-fold, at least about 2.5-fold, at least about 3-fold a fold or at least approximately 4-fold increase in the expression of LAMP-2B polynucleotide and/or LAMP-2B protein in the heart compared to its expression in an untreated subject.
45. Способ по любому из пп. 25–44, характеризующийся тем, что введение указанного геннотерапевтического вектора приводит к максимум приблизительно 1,1-кратному, максимум приблизительно 1,2-кратному, максимум приблизительно 1,3-кратному, максимум приблизительно 1,4-кратному или максимум приблизительно 1,5-кратному повышению экспрессии полинуклеотида LAMP-2B и/или белка LAMP-2B в печени по сравнению с экспрессией в печени не получавшего лечения субъекта.45. Method according to any one of paragraphs. 25-44, characterized in that administration of said gene therapy vector results in a maximum of about 1.1-fold, a maximum of about 1.2-fold, a maximum of about 1.3-fold, a maximum of about 1.4-fold, or a maximum of about 1, A 5-fold increase in the expression of LAMP-2B polynucleotide and/or LAMP-2B protein in the liver compared to expression in the liver of an untreated subject.