[go: up one dir, main page]

RU2021614C1 - Method of differential diagnosis of alimentary toxicoinfections - Google Patents

Method of differential diagnosis of alimentary toxicoinfections Download PDF

Info

Publication number
RU2021614C1
RU2021614C1 SU5021963A RU2021614C1 RU 2021614 C1 RU2021614 C1 RU 2021614C1 SU 5021963 A SU5021963 A SU 5021963A RU 2021614 C1 RU2021614 C1 RU 2021614C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
aflatoxicosis
toxicoinfections
blood
diagnosis
aflatoxin
Prior art date
Application number
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Г.Р. Бестужева
Н.В. Новикова
Е.М. Кубрак
Д.А. Адамбеков
К.Т. Абазбекова
Original Assignee
Киргизский государственный медицинский институт
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Киргизский государственный медицинский институт filed Critical Киргизский государственный медицинский институт
Priority to SU5021963 priority Critical patent/RU2021614C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2021614C1 publication Critical patent/RU2021614C1/en

Links

Images

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: blood of patient is mixed with conjugated antigen prepared on the basis aflatoxin B1, incubated, and potassium leakage to supernatant is determined at leucocyte damage. Aflatoxicosis is diagnosed at this index 50% and above. EFFECT: refinement of aflatoxicosis diagnosis. 2 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунохимической диагностике афлатоксикоза в структуре недиагностируемых пищевых токсикоинфекций. The invention relates to medicine, namely to the immunochemical diagnosis of aflatoxicosis in the structure of undiagnosed foodborne toxic infections.

Известен клинический способ дифференциальной диагностики пищевых токсикоинфекций, который должен быть подтвержден бактериологическими и серологическими методами исследования. A clinical method for differential diagnosis of foodborne toxicoinfections is known, which must be confirmed by bacteriological and serological research methods.

Клиническая диагностика типична и субъективна, бактериологические методы не столь эффективны, серологические методы не всегда можно использовать из-за практического отсутствия стандартных антигенов. Поэтому примерно 30% пищевых токсикоинфекций, энтероколитов остаются нерасшифрованными, а диагноз афлатоксикоз практически не выставляется. Clinical diagnosis is typical and subjective, bacteriological methods are not so effective, serological methods can not always be used due to the practical lack of standard antigens. Therefore, approximately 30% of foodborne toxicoinfections, enterocolitis remain undecrypted, and the diagnosis of aflatoxicosis is practically not made.

Афлатоксин В1 (АТ В1) - вторичный метаболит микроскопических плесневых грибов рода Aspergillus, развивающихся на пищевых продуктах при неправильном их хранении (при высокой температуре и влажности). Употребление продуктов питания, загрязненных АТ В1 вызывает заболевание афлатоксикоз, для которого характерно нарушение деятельности желудочно-кишечного тракта, поражение печени, почек, центральной нервной системы. Кроме того, АТ В1 обладает мутагенным, тератогенным, канцерогенным, ангиопаралитическим действием, поэтому загрязнение им пищевых продуктов представляет значительный гигиенический риск для человека. До настоящего времени нет надежных способов обезвреживания продуктов питания, загрязненных АТ В1.Aflatoxin B 1 (AT B 1 ) is a secondary metabolite of microscopic mold fungi of the genus Aspergillus, which develop on food products when stored improperly (at high temperature and humidity). The use of food contaminated with AT B 1 causes aflatoxicosis, which is characterized by a violation of the gastrointestinal tract, damage to the liver, kidneys, and central nervous system. In addition, AT B 1 has a mutagenic, teratogenic, carcinogenic, angioparalytic effect, therefore contamination of food products by it poses a significant hygienic risk to humans. To date, there are no reliable ways of neutralizing food contaminated with AT B 1 .

Согласно современным представлениям защита организма от неблагоприятных воздействий обеспечивается формированием иммунитета не только к высокомолекулярным субстратам (молекулы, клетки, ткани), но и к низкомолекулярным соединениям. Низкомолекулярные вещества могут трансформироваться в печени в высокореакционно-способные соединения, которые легко соединяются с альбуминами печени. Известно, что АТ В1 трансформируется в эпоксид, который вступает в соединение с альбуминами с образованием конъюгата АТ В1-альбумин, обладающего антигенными свойствами. Наличие специфических антител и сенсибилизированных клеток рассматривается как свидетельство сенсибили- зации организма АТ В1 с последующим развитием афлатоксикоза. Практически на сегодняшний день нет методов диагностики афлатоксикоза.According to modern concepts, the body is protected from adverse effects by the formation of immunity not only to high molecular substrates (molecules, cells, tissues), but also to low molecular weight compounds. Low molecular weight substances can be transformed in the liver into highly reactive compounds that readily bind to liver albumin. It is known that AT B 1 is transformed into an epoxide, which enters into a compound with albumin to form an AT B 1 -albumin conjugate with antigenic properties. The presence of specific antibodies and sensitized cells is considered as evidence of the sensitization of the organism AT B 1 with the subsequent development of aflatoxicosis. Practically today there are no diagnostic methods for aflatoxicosis.

Цель изобретения - дифференциация афлатоксикоза в структуре нерасшифрованных токсических отравлений. The purpose of the invention is the differentiation of aflatoxicosis in the structure of unencrypted toxic poisoning.

Сущность способа состоит в том, что кровь больного смешивают с конъюгированным антигеном на основе афлатоксина В1, инкубируют, далее по известной методике определяют выход калия в надосадочной жидкости, и при показателе повреждения лейкоцитов по калию (ППЛ-К), равном и более 50% устанавливают афлатоксикоз.The essence of the method lies in the fact that the patient’s blood is mixed with a conjugated antigen based on aflatoxin B 1 , incubated, then the potassium yield in the supernatant is determined by a known method, and with a leukocyte damage index of potassium (PPL-K) equal to more than 50% establish aflatoxicosis.

В качестве антигена впервые использован конъюгированный афлатоксин В1 в дозе 0,4 мг/мл, полученный в лаборатории микотоксикологии Кыргызского научно-исследовательского института профилактики и медицинской экологии Минздрава Республики Кыргызстан.For the first time, conjugated aflatoxin B 1 at a dose of 0.4 mg / ml, obtained in the mycotoxicology laboratory of the Kyrgyz Research Institute of Prevention and Medical Ecology of the Ministry of Health of the Republic of Kyrgyzstan, was used as an antigen.

Способ осуществляется следующим образом. В центрифужную пробирку помещают 0,02 мл конъюгированного АТ В1, разведенного 5%-ным цитратом натрия. Для контроля в другую пробирку наливают 0,02 мл цитрата натрия. В обе пробирки добавляют 0,08 мл крови больного, взятой микропипеткой из пальца, смесь тщательно перемешивают и инкубируют 2 ч в термостате при 37оС, встряхивают пробы через час. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, содержимое перемешивают, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин, и 0,5 мл надосадочной жидкости отсасывают во флакон, где содержится 1,5 мл дистиллированной воды. В жидкости с помощью пламенного фотометра определяют содержание калия. Диагностический коэффициент (ДК) рассчитывают по формуле
ДК =

Figure 00000001
· 100 % , где О - содержание калия в опытной пробе;
К - содержание калия в контрольной пробе.The method is as follows. 0.02 ml of conjugated AT B 1 diluted with 5% sodium citrate are placed in a centrifuge tube. For control, 0.02 ml of sodium citrate is poured into another tube. In both tubes was added 0.08 ml of patient's blood taken from a finger micropipet and the mixture is thoroughly mixed and incubated for 2 hours in a thermostat at 37 ° C, the sample is shaken in an hour. Then, 0.9 ml of an isotonic sodium chloride solution is added to each tube, the contents are mixed, centrifuged for 10 min at 1500 rpm, and 0.5 ml of the supernatant is aspirated into a vial containing 1.5 ml of distilled water. In a liquid, a potassium content is determined using a flame photometer. Diagnostic coefficient (DC) is calculated by the formula
DK =
Figure 00000001
· 100%, where O is the potassium content in the experimental sample;
K is the potassium content in the control sample.

Для клинического исследования были привлечены больные (62 человека) с диагнозом: пищевая токсикоинфекция. Данные лица были разделены на 2 подгруппы: А - с подозрением на афлатоксикоз (22 человека). Это больные, связывающие свое заболевание с употреблением продуктов, пораженных плесневыми грибами, либо продуктов, которые могли содержать афлатоксин. Клинически заболевание протекало с дисфункцией кишечника, сопровождалось болями в животе, жидким стулом, интоксикацией, отсутствием температуры. For a clinical study, patients (62 people) were involved with a diagnosis of foodborne toxicoinfection. These individuals were divided into 2 subgroups: A - with suspected aflatoxicosis (22 people). These are patients who associate their disease with the use of products affected by molds, or products that may contain aflatoxin. Clinically, the disease proceeded with intestinal dysfunction, was accompanied by abdominal pain, loose stools, intoxication, lack of temperature.

Б - больные с расшифрованной этиологией пищевого отравления. B - patients with deciphered etiology of food poisoning.

Кроме этого способ испытан на модели экспериментального афлатоксикоза у кроликов и у лиц, имеющих постоянный контакт с АТ В1 (исследователи, работающие в лаборатории микотоксикологии).In addition, the method was tested on a model of experimental aflatoxicosis in rabbits and in individuals who have constant contact with AT B 1 (researchers working in the mycotoxicology laboratory).

Контролем служили здоровые доноры. The control was served by healthy donors.

Результаты исследования на афлатоксикоз приведены в табл.1. The results of a study on aflatoxicosis are given in table 1.

Из таблицы видно, что ППЛ - К у больных с подозрением на афлатоксикоз достоверно превышает аналогичный показатель по сравнению с другими группами (р < 0,001). Поэтому повышение ППЛ - К у больных с этиологически нерасшифрованной дисфункцией кишечника в реакции со специфическим антигеном может служить диагностическим признаком афлатоксикоза. The table shows that PPL - K in patients with suspected aflatoxicosis significantly exceeds the same indicator compared to other groups (p <0.001). Therefore, an increase in PPL - K in patients with etiologically undecided bowel dysfunction in reaction with a specific antigen can serve as a diagnostic sign of aflatoxicosis.

Исследователи, работающие с АТ В1, имеют выраженную сенсибилизацию к конъюгированному АТ В1 (р < 0,001) по сравнению с контролем, но значительно низкий уровень ППЛ - К по сравнению с группой больных с подозрением на афлатоксикоз (р < 0,001). Эти лица отмечают периодические дисфункции кишечника при обычной диете. Наличие повышенной сенсибилизации клеток крови к афлатоксину остается у них в клинически компенсированной форме.Researchers working with AT B 1 have a pronounced sensitization to conjugated AT B 1 (p <0.001) compared with the control, but significantly low levels of PPL - K compared with a group of patients with suspected aflatoxicosis (p <0.001). These individuals report periodic bowel dysfunctions with a normal diet. The presence of increased sensitization of blood cells to aflatoxin remains in their clinically compensated form.

Афлатоксикоз в эксперименте вызывали на кроликах. С этой целью кроликам перорально вводили АТ В1 в дозе 0,4 мг на 1 кг веса 10 раз с интервалом в 2 дня. До затравки (фон) и после нее определяли ППЛ - К в динамике на 6, 10, 15, 20, 30-й дни. Параллельно проводили клинические наблюдения за животными, регистрировали летальность.Aflatoxicosis was experimentally induced in rabbits. To this end, rabbits were orally administered with AT B 1 at a dose of 0.4 mg per 1 kg of body weight 10 times with an interval of 2 days. Before the seed (background) and after it, PPL - K was determined in dynamics on the 6th, 10th, 15th, 20th, 30th days. In parallel, clinical observations of animals were carried out, mortality was recorded.

Результаты представлены в табл.2. The results are presented in table.2.

При расчете доверительных интервалов при р ≅0,05 за диагностическую границу были взяты величины ППЛ - К≥50%. When calculating the confidence intervals at p ≅ 0.05, the values of PPL - K≥50% were taken for the diagnostic boundary.

П р и м е р 1. Больная Р., 38 лет, работает кассиром в столовой. Диагноз: пищевая токсикоинфекция. Заболевание связывала с употреблением в пищу старого сыра с запахом плесени. У больной на 5-й день заболевания была взята кровь из пальца. 0,08 мл крови смешали с 0,02 мл конъюгированного афлатоксина В1 на 5%-ном растворе лимоннокислого натрия (опыт). Такое же количество крови смешивали с цитратом натрия без антигена (контроль). Пробирки 2 ч инкубировали в термостате при 37оС, затем добавляли в них по 0,9 мл физиологического раствора. Далее пробирки центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин, отсасывали 0,5 мл надосадочной жидкости и смешивали с 1,5 мл дистиллированной воды. Затем в пробах определяли содержание калия на пламенном фотометре в соответствии с инструкцией к прибору.PRI me R 1. Patient R., 38 years old, works as a cashier in the dining room. Diagnosis: foodborne toxicosis. The disease was associated with eating old cheese with a smell of mold. The patient took blood from a finger on the 5th day of the disease. 0.08 ml of blood was mixed with 0.02 ml of conjugated aflatoxin B 1 in a 5% solution of sodium citrate (experiment). The same amount of blood was mixed with sodium citrate without antigen (control). The tubes were incubated for 2 hours in a thermostat at 37 ° C, then added to them 0.9 ml of saline. Then the tubes were centrifuged for 10 min at 1500 rpm, 0.5 ml of supernatant was aspirated, and mixed with 1.5 ml of distilled water. Then, the potassium content in the flame photometer was determined in the samples in accordance with the instructions for the device.

Результаты: опытная проба - 29, контрольная проба - 16. Показатель повреждения лейкоцитов по калию
ППЛ - К =

Figure 00000002
· 100 % = 81.3 %
Диагноз: афлатоксикоз.Results: experimental test - 29, control test - 16. Potassium leukocyte damage index
PPL - K =
Figure 00000002
100% = 81.3%
Diagnosis: aflatoxicosis.

П р и м е р 2. Больная Г., 22 лет, работает на фабрике, отравилась в столовой. Клинически заболевание сопровождалось жидким стулом, слабостью, кратковременной рвотой, тошнотой, ознобом, повышением температуры. Кровь больной исследовали описанным способом. PRI me R 2. Patient G., 22 years old, works in a factory, was poisoned in the dining room. Clinically, the disease was accompanied by loose stools, weakness, short-term vomiting, nausea, chills, fever. The patient’s blood was examined as described.

Результаты: опытная проба - 44,5, контрольная проба - 34,5
ППЛ - К =

Figure 00000003
· 100 % = 29 %
Диагноз: пищевая токсикоинфекция подтвержденной сальмонеллезной этилогии.Results: experimental sample - 44.5, control sample - 34.5
PPL - K =
Figure 00000003
100% = 29%
Diagnosis: foodborne toxicoinfection of confirmed salmonella etilogy.

П р и м е р 3. Исследователь К. 35 лет, работающий с АТ В1 в течение 5 лет. Кровь, взятую из пальца, исследовали приведенным способом.PRI me R 3. Researcher K. 35 years old, working with AT In 1 for 5 years. Blood taken from a finger was examined using the above method.

Результаты: опытная проба - 10, контрольная проба - 7
ППЛ - К =

Figure 00000004
· 100 % = 42.8 %
Диагноз: клинически здорова. Однако периодически отмечает кратковременное расстройство желудочно-кишечного тракта.Results: experimental test - 10, control test - 7
PPL - K =
Figure 00000004
100% = 42.8%
Diagnosis: clinically healthy. However, periodically notes a short-term upset gastrointestinal tract.

П р и м е р 4. Здоровый донор, 26 лет. Из пальца взята кровь 0,08 мл и смешана с 0,02 мл конъюгированного АТ В1 на 5%-ном растворе цитрата натрия. Такое же количество крови смешали с 0,02 мл цитрата натрия без антигена. В дальнейшем реакцию выполняли по описанной методике.PRI me R 4. Healthy donor, 26 years. Blood was taken from a finger of 0.08 ml and mixed with 0.02 ml of conjugated AT B 1 in a 5% solution of sodium citrate. The same amount of blood was mixed with 0.02 ml of sodium citrate without antigen. Subsequently, the reaction was carried out according to the described procedure.

Результаты: опытная проба - 11,5, контрольная проба - 9,5
ППЛ - К =

Figure 00000005
· 100 % = 21 %
Таким образом, способ позволяет впервые в клинике провести дифференциальный диагноз афлатоксикоза, улучшить расшифровку пищевых токсикоинфекций и предложить новый диагностический показатель афлатоксикоза, ранее не известный в практике. К тому же впервые использован новый конъюгированный антиген (3) и отработан с ним в клинике лаборатоpный способ дифференциальной диагностики афлатоксикоза.Results: experimental test - 11.5, control test - 9.5
PPL - K =
Figure 00000005
100% = 21%
Thus, the method allows for the first time in the clinic to conduct a differential diagnosis of aflatoxicosis, to improve the decoding of foodborne toxic infections, and to propose a new diagnostic indicator of aflatoxicosis, previously unknown in practice. In addition, a new conjugated antigen was used for the first time (3) and a laboratory method for the differential diagnosis of aflatoxicosis was worked out with him in the clinic.

Из примеров, таблиц и при расчете доверительного интервала при р≅0,05 видно, что при показателе равном и более 50% пищевая токсикоинфекция вызвана афлатоксинами. Показатели менее 50% характерны для пищевых токсикоинфекций другой этиологии (сальмонеллезной, стафилококковой). Пpедложенный способ позволяет пpовести этиологическую pасшифpовку не только пищевых токсикоинфекций, но и гепатитов, токсических поpажений почек и т.д., дать лабоpатоpный высокоспецифичный, эффективный метод для пpактического здpавоохpанения, котоpый позволяет в 94 случаев поставить диагноз - афлатоксикоз. From the examples, tables, and when calculating the confidence interval at p≅0.05, it can be seen that with an indicator of equal and more than 50%, foodborne toxicosis is caused by aflatoxins. Indicators of less than 50% are characteristic of foodborne toxicoinfections of another etiology (salmonella, staphylococcal). The proposed method allows the etiological interpretation of not only foodborne toxicoinfections, but also hepatitis, toxic kidney injuries, etc., to provide a laboratory highly specific, effective method for practical health care, which makes it possible to diagnose aflatoxicosis in 94 cases.

Claims (1)

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ путем исследования крови, отличающийся тем, что , с целью уточнения пищевого отравления афлатоксином, исследуемую кровь смешивают с коньюгированным антигеном афлатоксина В, инкубируют и определяют показатель выхода калия в надосадочной жидкости при повреждении лейкоцитов и при показателе, равном и более 50%, диагностируют афлатоксикоз. METHOD FOR DIFFERENTIAL DIAGNOSTICS OF FOOD TOXICOINFECTIONS by blood testing, characterized in that, in order to clarify food poisoning with aflatoxin, the test blood is mixed with conjugated aflatoxin B antigen, incubated and the potassium output in the supernatant is equal and if damaged, %, aflatoxicosis is diagnosed.
SU5021963 1992-01-09 1992-01-09 Method of differential diagnosis of alimentary toxicoinfections RU2021614C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU5021963 RU2021614C1 (en) 1992-01-09 1992-01-09 Method of differential diagnosis of alimentary toxicoinfections

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU5021963 RU2021614C1 (en) 1992-01-09 1992-01-09 Method of differential diagnosis of alimentary toxicoinfections

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2021614C1 true RU2021614C1 (en) 1994-10-15

Family

ID=21594315

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU5021963 RU2021614C1 (en) 1992-01-09 1992-01-09 Method of differential diagnosis of alimentary toxicoinfections

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2021614C1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2140085C1 (en) * 1998-01-05 1999-10-20 Пермская государственная медицинская академия Method for diagnosing alimentary allergy
RU2363952C1 (en) * 2007-12-19 2009-08-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Way of estimation of intoxication degree of patients with salmonellosis
RU2534732C1 (en) * 2013-07-26 2014-12-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Национальный исследовательский Томский политехнический университет" Method for quantitative determination of aflatoxin b1 by differential voltammetry

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Зубик Т.М. и др. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней. 1991. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2140085C1 (en) * 1998-01-05 1999-10-20 Пермская государственная медицинская академия Method for diagnosing alimentary allergy
RU2363952C1 (en) * 2007-12-19 2009-08-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Way of estimation of intoxication degree of patients with salmonellosis
RU2534732C1 (en) * 2013-07-26 2014-12-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Национальный исследовательский Томский политехнический университет" Method for quantitative determination of aflatoxin b1 by differential voltammetry

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mccracken JR et al. Relation between Escherichia coli K1 capsular polysaccharide antigen and clinical outcome in neonatal meningitis
Sánchez et al. Evaluation of molecular methodologies and rabbit infectivity testing for the diagnosis of congenital syphilis and neonatal central nervous system invasion by Treponema pallidum
Theakston et al. Micro-ELISA for detecting and assaying snake venom and venom-antibody
Farrow et al. Autoantibodies and the hepatitis-associated antigen in acute infective hepatitis
Michaels Immunologic aspects of congenital rubella
Shainhouse et al. Complement fixation antibody test for human nocardiosis
Robbins et al. An evaluation of the test for antihemagglutinin in the diagnosis of infections by the mumps virus
Meyer et al. The value of the complement fixation test in the diagnosis of psittacosis
RU2021614C1 (en) Method of differential diagnosis of alimentary toxicoinfections
Smith et al. Infantile gastro-enteritis with special reference to the specific serological type O55 B5 H6 (Beta type) of Bacterium coli
Saksouk et al. Acute suppurative thyroiditis caused by Escherichia coli
Becker The epidemiology of herpesvirus infection in three racial communities in Cape Town
Heymans et al. Giardiasis in childhood: an unnecessarily expensive diagnosis
RU2008684C1 (en) Method for diagnosis of yersiniosis
Berrocal Prevalence of Toxocara canis in babies and in adults as determined by the ELISA test
Nicoletti et al. A comparison of the tube agglutination and card tests for the diagnosis of Brucella melitensis infection in humans
Donald Diagnosis of Whooping-cough
Svenungsson et al. Acute suppurative salmonella thyreoiditis: clinical course and antibody response
Greenwood et al. Antigen-negative meningitis due to group A Neisseria meningitidis
Yoshida et al. The first report on human cases serologically diagnosed as Japanese encephalitis in Indonesia
Short et al. Campylobacter jejuni enteritis and reactive arthritis
RU2137137C1 (en) Method of identification of mycobacterium leprae in patients with disease regression
SU1755099A1 (en) Method for determining bacteriemia
Duncan et al. Further studies of the fluorescent treponemal antibody-cerebrospinal fluid (FTA-CSF) test with a monospecific anti-IgM conjugate
Myers et al. The gonococcal complement fixation test in the blood and synovial fluid of patients with arthritis