Claims (17)
1. Нуклеотидная последовательность, содержащая последовательность, выбранную из группы, состоящей из:1. A nucleotide sequence comprising a sequence selected from the group consisting of:
i. последовательности, образованной посредством мутации, возникшей в 1049-м основании кодирующей последовательности гена deoB дикого типа, представленной в SEQ ID NO: 1, иi. a sequence generated by a mutation occurring at base 1049 of the wild-type deoB gene coding sequence shown in SEQ ID NO: 1, and
ii. промоторной нуклеотидной последовательности, образованной посредством мутации, возникшей в -67-м основании выше по нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 13.ii. a promoter nucleotide sequence formed by a mutation occurring at the -67th base upstream of the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 13.
2. Нуклеотидная последовательность по п. 1, отличающаяся тем, что2. Nucleotide sequence according to claim 1, characterized in that
i. мутация состоит в том, что гуанин (G) заменен на аденин (А) в 1049-м основании в SEQ ID NO: 1, и предпочтительно мутированная нуклеотидная последовательность представлена в SEQ ID NO: 2; илиi. the mutation is that guanine (G) is replaced by adenine (A) at the 1049th base in SEQ ID NO: 1, and preferably the mutated nucleotide sequence is represented in SEQ ID NO: 2; or
ii. мутация состоит в том, что аденин (А) заменен на гуанин (G) в -67-м основании в SEQ ID NO: 13, и предпочтительно мутированная нуклеотидная последовательность представлена в SEQ ID NO: 14.ii. the mutation is that adenine (A) is replaced by guanine (G) at the -67th base in SEQ ID NO: 13, and preferably the mutated nucleotide sequence is represented in SEQ ID NO: 14.
3. Экспрессионная кассета, содержащая промоторную нуклеотидную последовательность ii по п. 1 и кодирующую нуклеотидную последовательность гена rhtA, где предпочтительно кодирующая нуклеотидная последовательность гена rhtA содержит нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15.3. An expression cassette containing the promoter nucleotide sequence ii according to claim 1 and the coding nucleotide sequence of the rhtA gene, where preferably the coding nucleotide sequence of the rhtA gene contains the nucleotide sequence presented in SEQ ID NO: 15.
4. Рекомбинантный белок, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4; при этом предпочтительно рекомбинантный белок кодируется нуклеотидной последовательностью i по п. 1.4. A recombinant protein containing the amino acid sequence presented in SEQ ID NO: 4; wherein preferably the recombinant protein is encoded by nucleotide sequence i according to claim 1.
5. Рекомбинантный вектор, содержащий нуклеотидную последовательность по п. 1.5. Recombinant vector containing the nucleotide sequence according to claim 1.
6. Рекомбинантный вектор по п. 5, отличающийся тем, что рекомбинантный вектор сконструирован путем введения нуклеотидной последовательности в плазмиду.6. Recombinant vector according to claim 5, characterized in that the recombinant vector is constructed by introducing a nucleotide sequence into a plasmid.
7. Рекомбинантный штамм, содержащий нуклеотидную последовательность по п. 1.7. Recombinant strain containing the nucleotide sequence according to claim 1.
8. Рекомбинантный штамм по п. 7, отличающийся тем, что рекомбинантный штамм образован путем введения рекомбинантного вектора по п. 5 в штамм-хозяин; штамм-хозяин выбран из Escherichia coli; например, штамм-хозяин представляет собой Е. coli K12, его производный штамм Е. coli K12 (W3110) или штамм Е. coli K12 CGMCC 7.232.8. Recombinant strain according to claim 7, characterized in that the recombinant strain is formed by introducing the recombinant vector according to claim 5 into the host strain; the host strain is selected from Escherichia coli; for example, the host strain is E. coli K12, its derivative strain E. coli K12 (W3110), or E. coli K12 strain CGMCC 7.232.
9. Способ конструирования рекомбинантного штамма по п. 7, включающий следующие этапы:9. A method for constructing a recombinant strain according to claim 7, including the following steps:
(1) модификация нуклеотидной последовательности гена дикого типа, представленного в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 13 для получения мутированной нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 14;(1) modifying the nucleotide sequence of a wild type gene shown in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 13 to obtain a mutated nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 14;
(2) лигирование мутированной нуклеотидной последовательности с плазмидой для конструирования рекомбинантного вектора, где предпочтительно плазмида представляет собой плазмиду pKOV; и(2) ligating the mutated nucleotide sequence to a plasmid to construct a recombinant vector, where preferably the plasmid is a pKOV plasmid; And
(3) введение рекомбинантного вектора в штамм-хозяин для получения рекомбинантного штамма.(3) introducing the recombinant vector into the host strain to obtain a recombinant strain.
10. Применение нуклеотидной последовательности по п. 1, экспрессионной кассеты по п. 3, рекомбинантного белка по п. 4, рекомбинантного вектора по п. 5 или рекомбинантного штамма по п. 7 в ферментативном получении L-треонина.10. The use of the nucleotide sequence according to claim 1, the expression cassette according to claim 3, the recombinant protein according to claim 4, the recombinant vector according to claim 5 or the recombinant strain according to claim 7 in the enzymatic production of L-threonine.