[go: up one dir, main page]

RU2017101329A - Опосредованная нуклеазой сборка днк - Google Patents

Опосредованная нуклеазой сборка днк Download PDF

Info

Publication number
RU2017101329A
RU2017101329A RU2017101329A RU2017101329A RU2017101329A RU 2017101329 A RU2017101329 A RU 2017101329A RU 2017101329 A RU2017101329 A RU 2017101329A RU 2017101329 A RU2017101329 A RU 2017101329A RU 2017101329 A RU2017101329 A RU 2017101329A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
nucleic acid
cleaved
complementary
nuclease agent
sequence
Prior art date
Application number
RU2017101329A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2707911C2 (ru
RU2017101329A3 (ru
Inventor
Хрис ШЁНГЕРР
Джон МАКУИРТЕР
Кори МОМОНТ
Линн МАКДОНАЛЬД
Эндрю Дж. МЕРФИ
Грегг С. УОРШАУ
Хосе Ф. РОХАС
Ка-Ман Венус ЛАЙ
Дэвид М. ВАЛЕНЦУЭЛА
Кейтлин МОНТАНЬЯ
Original Assignee
Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Регенерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of RU2017101329A publication Critical patent/RU2017101329A/ru
Publication of RU2017101329A3 publication Critical patent/RU2017101329A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2707911C2 publication Critical patent/RU2707911C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
    • C12N15/1031—Mutagenizing nucleic acids mutagenesis by gene assembly, e.g. assembly by oligonucleotide extension PCR
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Claims (72)

1. Способ сборки по меньшей мере двух нуклеиновых кислот, включающий:
(a) контактирование первой нуклеиновой кислоты с первым нуклеазным агентом, причем первый нуклеазный агент расщепляет первую нуклеиновую кислоту в первом целевом сайте с получением первой расщепленной нуклеиновой кислоты с перекрывающимися концевыми последовательностями между первой расщепленной нуклеиновой кислотой и второй нуклеиновой кислотой;
(b) контактирование первой расщепленной нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты с экзонуклеазой для экспонирования комплементарных последовательностей между первой расщепленной нуклеиновой кислотой и второй нуклеиновой кислотой; и
(c) сборку двух фрагментов нуклеиновых кислот, полученных на этапе (b).
2. Способ по п. 1, в котором этап (с) дополнительно включает:
(i) ренатурацию экспонированных комплементарных последовательностей;
(ii) удлинение 3'-концов ренатурированных комплементарных последовательностей; и
(iii) лигирование первой и второй нуклеиновых кислот.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором этап (а) дополнительно включает контактирование второй нуклеиновой кислоты со вторым нуклеазным агентом, причем вторая нуклеиновая кислота не содержит перекрывающейся концевой последовательности, а второй нуклеазный агент расщепляет вторую нуклеиновую кислоту во втором целевом сайте с получением второй расщепленной нуклеиновой кислоты с перекрывающимися концевыми последовательностями между первой расщепленной нуклеиновой кислотой и второй расщепленной нуклеиновой кислотой, и
при этом вторая нуклеиновая кислота из этапа (b) представляет собой вторую расщепленную нуклеиновую кислоту.
4. Способ по п. 3, в котором по меньшей мере один из первого нуклеазного агента и второго нуклеазного агента содержит белок Cas и гидовую РНК (гРНК) (комплекс гРНК-Cas), нуклеазу с «цинковыми пальцами» или эффекторную нуклеазу, подобную активатору транскрипции (TALEN), нацеленные на первый или второй целевой сайт.
5. Способ по п. 4, в котором по меньшей мере один из первого нуклеазного агента и второго нуклеазного агента содержит белок Cas и гидовую РНК (гРНК) (комплекс гРНК-Cas),
причем белок Cas представляет собой белок Cas9, гРНК содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую РНК коротких палиндромных повторов, регулярно расположенных группами (CRISPR) (крРНК), и трансактивирующую CRISPR РНК (тракрРНК), и по меньшей мере один из первого целевого сайта и второго целевого сайта, который непосредственно фланкирован последовательностью мотива, прилежащего к протоспейсеру (РАМ).
6. Способ по п. 5, в котором белок Cas9 содержит домен RuvC и домен HNH, по меньшей мере один из которых не имеет эндонуклеазной активности.
7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором перекрывающаяся концевая последовательность имеет длину в диапазоне от 20 до 200 п. н.
8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором первая нуклеиновая кислота, вторая нуклеиновая кислота или обе нуклеиновые кислоты получены из бактериальной искусственной хромосомы.
9. Способ по п. 8, в котором бактериальная искусственная хромосома содержит человеческую ДНК, ДНК грызунов, синтетическую ДНК, человеческую полинуклеотидную последовательность или их комбинацию.
10. Способ сборки по меньшей мере двух нуклеиновых кислот, включающий:
(а) контактирование первой нуклеиновой кислоты с первым нуклеазным агентом и вторым нуклеазным агентом с получением первой расщепленной нуклеиновой кислоты, причем первый нуклеазный агент создает одноцепочечный разрыв на первой цепи первой нуклеиновой кислоты в первом целевом сайте, а второй нуклеазный агент создает одноцепочечный разрыв на второй цепи первой нуклеиновой кислоты во втором целевом сайте с получением первой расщепленной нуклеиновой кислоты, содержащей нависающую последовательность на одном из ее 5'- или 3'-концов;
(b) ренатурацию первой расщепленной нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность, комплементарную 5'- или 3'-нависающей последовательности; и
(c) лигирование первой расщепленной нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты.
11. Способ по п. 10, в котором этап (b) дополнительно включает удлинение 3'-конца первой цепи с использованием второй цепи в качестве шаблона и удлинение 3'-конца второй цепи с использованием первой цепи в качестве шаблона.
12. Способ по п. 10 или 11, в котором по меньшей мере один из первого нуклеазного агента и второго нуклеазного агента содержит белок Cas9 и гидовую РНК (гРНК) (комплекс гРНК-Cas), нацеленные на первый целевой сайт или второй целевой сайт.
13. Способ по п. 12, в котором белок Cas9 содержит домен RuvC и домен HNH, один из которых не имеет эндонуклеазной активности.
14. Способ по любому из пп. 10-13, в котором первый целевой сайт отделен от второго целевого сайта по меньшей мере 4 п. н.
15. Способ по любому из пп. 10-14, в котором гРНК содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую РНК коротких палиндромных повторов, регулярно расположенных группами (CRISPR) (крРНК), и трансактивирующую CRISPR РНК (тракрРНК), и причем по меньшей мере один из первого целевого сайта и второго целевого сайта непосредственно фланкирован последовательностью мотива, прилежащего к протоспейсеру (РАМ).
16. Способ сборки двух или более нуклеиновых кислот, включающий:
(а) контактирование первой нуклеиновой кислоты с по меньшей мере одним нуклеазным агентом с получением первой расщепленной нуклеиновой кислоты;
(b) контактирование первой расщепленной нуклеиновой кислоты со второй нуклеиновой кислотой, соединительным олигонуклеотидом и экзонуклеазой,
причем соединительный олигонуклеотид содержит:
(i) первую комплементарную последовательность, которая комплементарна первой расщепленной нуклеиновой кислоте;
(ii) спейсер; и
(iii) вторую комплементарную последовательность, которая комплементарна второй нуклеиновой кислоте;
при этом экзонуклеаза экспонирует первую и вторую комплементарные последовательности; и
(c) сборку соединительного олигонуклеотида с первой расщепленной нуклеиновой кислотой и второй нуклеиновой кислотой.
17. Способ по п. 16, в котором сборка на этапе (с) включает:
(i) ренатурацию первой комплементарной последовательности соединительного олигонуклеотида с первой расщепленной нуклеиновой кислотой и второй комплементарной последовательности соединительного олигонуклеотида со второй нуклеиновой кислотой; и
(ii) лигирование соединительного олигонуклеотида с первой расщепленной нуклеиновой кислотой и второй нуклеиновой кислотой.
18. Способ по п. 16 или 17, в котором первая комплементарная последовательность и вторая комплементарная последовательность соединительного олигонуклеотида содержат от 15 до 120 комплементарных оснований.
19. Способ по любому из пп. 16-18, в котором спейсер соединительного олигонуклеотида содержит некомплементарные нуклеиновые кислоты.
20. Способ по любому из пп. 16-18, в котором сборка первой расщепленной нуклеиновой кислоты со второй нуклеиновой кислотой происходит бесшовно.
21. Способ по п. 20, в котором по меньшей мере один нуклеазный агент предназначен для отщепления фрагмента из по меньшей мере 20 п. н. от конца первой нуклеиновой кислоты, на котором будет происходить бесшовная сборка,
причем спейсер соединительного олигонуклеотида содержит последовательность, идентичную фрагменту из по меньшей мере 20 п. н., при этом между первой комплементарной последовательностью и фрагментом из по меньшей мере 20 п. н. нуклеотидные основания отсутствуют, и между второй комплементарной последовательностью и фрагментом из по меньшей мере 20 п. н. нуклеотидные основания отсутствуют,
так что сборка первой нуклеиновой кислоты с соединительным олигонуклеотидом и второй нуклеиновой кислотой восстанавливает фрагмент из по меньшей мере 20 п. н. и обеспечивает бесшовную сборку первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты.
22. Способ по п. 20, в котором по меньшей мере один нуклеазный агент предназначен для отщепления фрагмента из по меньшей мере 20 п. н. от конца второй нуклеиновой кислоты, на котором будет происходить бесшовная сборка,
причем спейсер соединительного олигонуклеотида содержит последовательность, идентичную фрагменту из по меньшей мере 20 п. н., при этом между первой комплементарной последовательностью и фрагментом из по меньшей мере 20 п. н. нуклеотидные основания отсутствуют, и между второй комплементарной последовательностью и фрагментом из по меньшей мере 20 п. н. нуклеотидные основания отсутствуют,
так что сборка первой нуклеиновой кислоты с соединительным олигонуклеотидом и второй нуклеиновой кислотой восстанавливает фрагмент из по меньшей мере 20 п. н. и обеспечивает бесшовную сборку первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты.
23. Способ по п. 21 или 22, в котором спейсер содержит от около 20 до около 120 п. н.
24. Способ по любому из пп. 16-23, в котором этап (а) дополнительно включает контактирование второй нуклеиновой кислоты со вторым нуклеазным агентом и экзонуклеазой, причем второй нуклеазный агент расщепляет вторую нуклеиновую кислоту с получением второй расщепленной нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, комплементарную второй комплементарной последовательности соединительного олигонуклеотида, при этом проводят сборку первой расщепленной нуклеиновой кислоты со второй расщепленной нуклеиновой кислотой.
25. Способ по любому из пп. 16-23, в котором этап (а) дополнительно включает контактирование второй нуклеиновой кислоты с рестрикционным ферментом или мегануклеазой и экзонуклеазой, причем рестрикционный фермент или мегануклеаза расщепляет вторую нуклеиновую кислоту с получением второй расщепленной нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, комплементарную второй комплементарной последовательности в соединительном олигонуклеотиде, при этом проводят сборку первой расщепленной нуклеиновой кислоты со второй расщепленной нуклеиновой кислотой.
26. Способ по п. 24 или 25, в котором этап (b) дополнительно включает удлинение 3'-конца первой расщепленной нуклеиновой кислоты и/или второй расщепленной нуклеиновой кислоты.
27. Способ по любому из пп. 16-26, в котором сборку соединительного олигонуклеотида с первой нуклеиновой кислотой и второй нуклеиновой кислотой выполняют в одной реакции.
28. Способ по любому из пп. 16-26, в котором сборку соединительного олигонуклеотида с первой нуклеиновой кислотой и второй нуклеиновой кислотой выполняют последовательно.
29. Способ по любому из пп. 24-28, в котором по меньшей мере один нуклеазный агент и/или второй нуклеазный агент содержит белок Cas и гидовую РНК (гРНК) (комплекс гРНК-Cas), нуклеазу с «цинковыми пальцами» или эффекторную нуклеазу, подобную активатору транскрипции (TALEN), нацеленные на первый или второй целевой сайт.
30. Способ по п. 29, в котором по меньшей мере один из первого нуклеазного агента и второго нуклеазного агента содержит белок Cas и гидовую РНК (гРНК) (комплекс гРНК-Cas),
причем белок Cas представляет собой белок Cas9, гРНК содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую РНК коротких палиндромных повторов, регулярно расположенных группами (CRISPR) (крРНК), и трансактивирующую CRISPR РНК (тракрРНК), и по меньшей мере один из первого целевого сайта и второго целевого сайта, который непосредственно фланкирован последовательностью мотива, прилежащего к протоспейсеру (РАМ).
31. Способ по п. 30, в котором белок Cas9 содержит домен RuvC и домен HNH, по меньшей мере один из которых не имеет эндонуклеазной активности.
32. Способ по любому из пп. 10-31, в котором первая нуклеиновая кислота, вторая нуклеиновая кислота или обе нуклеиновые кислоты получены из бактериальной искусственной хромосомы.
33. Способ по любому из пп. 10-32, в котором первая нуклеиновая кислота, вторая нуклеиновая кислота или нуклеиновые кислоты содержат человеческую ДНК, ДНК грызунов, синтетическую ДНК или их комбинацию.
34. Способ по любому из пп. 10-33, в котором первая нуклеиновая кислота, вторая нуклеиновая кислота или обе нуклеиновые кислоты содержат по меньшей мере 10 т.п.н.
35. Способ по любому из пп. 16-34, в котором соединительный олигонуклеотид содержит линейный двухцепочечный фрагмент ДНК.
36. Способ по п. 35, в котором линейный двухцепочечный фрагмент ДНК не содержит кассету селекции.
37. Способ сборки двух или более нуклеиновых кислот, включающий:
(a) контактирование первой нуклеиновой кислоты с по меньшей мере одним нуклеазным агентом с получением первой расщепленной нуклеиновой кислоты;
(b) контактирование второй нуклеиновой кислоты со вторым нуклеазным агентом с получением второй расщепленной нуклеиновой кислоты;
(c) контактирование первой расщепленной нуклеиновой кислоты и второй расщепленной нуклеиновой кислоты с соединительным олигонуклеотидом и экзонуклеазой,
причем соединительный олигонуклеотид содержит:
(i) первую комплементарную последовательность, которая комплементарна первой расщепленной нуклеиновой кислоте;
(ii) спейсер; и
(iii) вторую комплементарную последовательность, которая комплементарна второй расщепленной нуклеиновой кислоте;
при этом экзонуклеаза экспонирует первую и вторую комплементарные последовательности; и
(d) сборку соединительного олигонуклеотида с первой расщепленной нуклеиновой кислотой и второй расщепленной нуклеиновой кислотой.
RU2017101329A 2014-06-23 2015-06-23 Опосредованная нуклеазой сборка днк RU2707911C2 (ru)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462015809P 2014-06-23 2014-06-23
US62/015,809 2014-06-23
US201462016400P 2014-06-24 2014-06-24
US62/016,400 2014-06-24
US201462036983P 2014-08-13 2014-08-13
US62/036,983 2014-08-13
PCT/US2015/037199 WO2015200334A1 (en) 2014-06-23 2015-06-23 Nuclease-mediated dna assembly

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017101329A true RU2017101329A (ru) 2018-07-24
RU2017101329A3 RU2017101329A3 (ru) 2019-02-15
RU2707911C2 RU2707911C2 (ru) 2019-12-02

Family

ID=53525285

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017101329A RU2707911C2 (ru) 2014-06-23 2015-06-23 Опосредованная нуклеазой сборка днк

Country Status (25)

Country Link
US (6) US9738897B2 (ru)
EP (3) EP3354732B1 (ru)
JP (4) JP6336140B2 (ru)
KR (2) KR102237151B1 (ru)
CN (2) CN112029787B (ru)
AU (3) AU2015280120B2 (ru)
BR (1) BR112016030145A8 (ru)
CA (1) CA2953499C (ru)
CY (2) CY1120520T1 (ru)
DK (2) DK3155099T3 (ru)
ES (2) ES2666179T3 (ru)
HR (1) HRP20200523T1 (ru)
HU (1) HUE049405T2 (ru)
IL (1) IL249612B (ru)
LT (1) LT3354732T (ru)
MX (2) MX384887B (ru)
NZ (1) NZ765591A (ru)
PL (2) PL3155099T3 (ru)
PT (2) PT3354732T (ru)
RS (1) RS60366B1 (ru)
RU (1) RU2707911C2 (ru)
SG (2) SG11201610481YA (ru)
SI (1) SI3354732T1 (ru)
SM (1) SMT202000174T1 (ru)
WO (1) WO2015200334A1 (ru)

Families Citing this family (107)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013066438A2 (en) 2011-07-22 2013-05-10 President And Fellows Of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
US20150044192A1 (en) 2013-08-09 2015-02-12 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a cas9 nuclease
US9359599B2 (en) 2013-08-22 2016-06-07 President And Fellows Of Harvard College Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof
US9737604B2 (en) 2013-09-06 2017-08-22 President And Fellows Of Harvard College Use of cationic lipids to deliver CAS9
US9388430B2 (en) 2013-09-06 2016-07-12 President And Fellows Of Harvard College Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US9340799B2 (en) 2013-09-06 2016-05-17 President And Fellows Of Harvard College MRNA-sensing switchable gRNAs
US11053481B2 (en) 2013-12-12 2021-07-06 President And Fellows Of Harvard College Fusions of Cas9 domains and nucleic acid-editing domains
MX384887B (es) 2014-06-23 2025-03-14 Regeneron Pharma Ensamblaje de adn mediado por nucleasa.
EP3167071B1 (en) * 2014-07-09 2020-10-07 Gen9, Inc. Compositions and methods for site-directed dna nicking and cleaving
AU2015298571B2 (en) 2014-07-30 2020-09-03 President And Fellows Of Harvard College Cas9 proteins including ligand-dependent inteins
CN107250148B (zh) 2014-12-03 2021-04-16 安捷伦科技有限公司 具有化学修饰的指导rna
WO2016109255A1 (en) * 2014-12-30 2016-07-07 University Of South Florida Methods and compositions for cloning into large vectors
ES2884838T3 (es) 2015-04-06 2021-12-13 Univ Leland Stanford Junior ARN guía químicamente modificados para la regulación génica mediada por CRISPR/CAS
ES2784360T3 (es) 2015-05-29 2020-09-24 Regeneron Pharma Animales no humanos que tienen una interrupción en un locus C9ORF72
US12043852B2 (en) 2015-10-23 2024-07-23 President And Fellows Of Harvard College Evolved Cas9 proteins for gene editing
US9988624B2 (en) 2015-12-07 2018-06-05 Zymergen Inc. Microbial strain improvement by a HTP genomic engineering platform
US11208649B2 (en) 2015-12-07 2021-12-28 Zymergen Inc. HTP genomic engineering platform
KR20180084756A (ko) 2015-12-07 2018-07-25 지머젠 인코포레이티드 코리네박테리움 글루타미컴으로부터의 프로모터
IL260526B2 (en) 2016-01-13 2023-10-01 Regeneron Pharma Rodents having an engineered heavy chain diversity region
IL263160B2 (en) 2016-06-03 2024-01-01 Regeneron Pharma Non-human animals expressing exogenous terminal deoxynucleotidyltransferase
US10767175B2 (en) 2016-06-08 2020-09-08 Agilent Technologies, Inc. High specificity genome editing using chemically modified guide RNAs
WO2018005655A2 (en) 2016-06-30 2018-01-04 Zymergen Inc. Methods for generating a bacterial hemoglobin library and uses thereof
WO2018005793A1 (en) 2016-06-30 2018-01-04 Zymergen Inc. Methods for generating a glucose permease library and uses thereof
US20190330659A1 (en) * 2016-07-15 2019-10-31 Zymergen Inc. Scarless dna assembly and genome editing using crispr/cpf1 and dna ligase
BR112019001783A2 (pt) 2016-07-29 2019-05-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. mamífero não humano, e, métodos para produzir o mamífero não humano e de triagem de um composto.
KR20250103795A (ko) 2016-08-03 2025-07-07 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 아데노신 핵염기 편집제 및 그의 용도
CN109804066A (zh) 2016-08-09 2019-05-24 哈佛大学的校长及成员们 可编程cas9-重组酶融合蛋白及其用途
US11542509B2 (en) 2016-08-24 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
US20180105806A1 (en) * 2016-09-07 2018-04-19 Massachusetts Institute Of Technology Method for rna-guided endonuclease-based dna assembly
US10704082B2 (en) 2016-09-15 2020-07-07 ArcherDX, Inc. Methods of nucleic acid sample preparation
JP6997773B2 (ja) 2016-09-15 2022-01-18 アーチャーディーエックス， エルエルシー 無細胞ｄｎａの分析用の核酸サンプル調製の方法
US10781453B2 (en) 2016-09-30 2020-09-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a hexanucleotide repeat expansion in a C9ORF72 locus
AU2017342543B2 (en) 2016-10-14 2024-06-27 President And Fellows Of Harvard College AAV delivery of nucleobase editors
JP7161991B2 (ja) * 2016-11-02 2022-10-27 アーチャーディーエックス， エルエルシー 免疫レパートリーシーケンシングのための核酸サンプル調製の方法
MA53935A (fr) 2016-11-04 2021-12-22 Regeneron Pharma Animaux non humains ayant un locus à chaîne légère lambda d'immunoglobuline modifiée
CN110291198B (zh) 2016-12-08 2024-11-26 因特利亚治疗公司 经修饰的指导rna
WO2018119359A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 President And Fellows Of Harvard College Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection
TW201839136A (zh) 2017-02-06 2018-11-01 瑞士商諾華公司 治療血色素異常症之組合物及方法
CN110312797A (zh) * 2017-02-10 2019-10-08 齐默尔根公司 组装和编辑用于多个宿主的多个dna构建体的模块化通用质粒设计策略
EP3592853A1 (en) 2017-03-09 2020-01-15 President and Fellows of Harvard College Suppression of pain by gene editing
EP3592381A1 (en) 2017-03-09 2020-01-15 President and Fellows of Harvard College Cancer vaccine
KR20190127797A (ko) 2017-03-10 2019-11-13 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 시토신에서 구아닌으로의 염기 편집제
CA3057192A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 President And Fellows Of Harvard College Nucleobase editors comprising nucleic acid programmable dna binding proteins
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
WO2018222941A1 (en) * 2017-06-01 2018-12-06 Counsyl, Inc. Preparation of concatenated polynucleotides
IL271205B2 (en) * 2017-06-12 2025-02-01 Twist Bioscience Corp Methods for assembling continuous nucleic acids
US10081829B1 (en) * 2017-06-13 2018-09-25 Genetics Research, Llc Detection of targeted sequence regions
CN111094573A (zh) * 2017-07-12 2020-05-01 梅约医学教育与研究基金会 有效靶向敲入或基因置换的材料和方法
CN111801345A (zh) 2017-07-28 2020-10-20 哈佛大学的校长及成员们 使用噬菌体辅助连续进化(pace)的进化碱基编辑器的方法和组合物
KR20200033259A (ko) 2017-07-31 2020-03-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 생체내에서 CRISPR/Cas-매개된 파괴 또는 삭제 및 외인성 도너 핵산과의 CRISPR/Cas-유도된 재조합을 평가하기 위한 방법 및 조성물
KR102780441B1 (ko) 2017-07-31 2025-03-17 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Cas-형질전환 마우스 배아 줄기 세포 및 마우스 및 이것의 용도
MX2020001998A (es) * 2017-08-21 2020-10-05 Univ Tokushima Tecnología de alteración específica de secuencia objetivo utilizando reconocimiento de objetivos del nucleotído.
WO2019139645A2 (en) 2017-08-30 2019-07-18 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising gam
WO2019050948A1 (en) 2017-09-05 2019-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. ADMINISTRATION OF A GENE EDITION SYSTEM HAVING ONLY ONE RETROVIRAL PARTICLE AND METHODS OF GENERATING AND USING
EP3585162B1 (en) 2017-09-29 2023-08-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rodents comprising a humanized ttr locus and methods of use
CA3082251A1 (en) 2017-10-16 2019-04-25 The Broad Institute, Inc. Uses of adenosine base editors
JP7361031B2 (ja) * 2017-11-30 2023-10-13 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ヒト化ｔｒｋｂ遺伝子座を含む非ヒト動物
PL3720279T3 (pl) 2017-12-05 2023-01-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Myszy posiadające zmodyfikowany sposobami inżynierii łańcuch lekki lambda immunoglobuliny oraz ich zastosowania
EP3724214A4 (en) 2017-12-15 2021-09-01 The Broad Institute Inc. SYSTEMS AND METHODS FOR PREDICTING REPAIR RESULTS IN GENETIC ENGINEERING
CN111885915B (zh) 2018-03-19 2023-04-28 瑞泽恩制药公司 使用crispr/cas系统对动物进行转录调制
KR20250121150A (ko) 2018-03-26 2025-08-11 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 치료제를 시험하기 위한 인간화된 설치류
EP3781683A4 (en) * 2018-04-18 2022-02-16 Ligandal, Inc. Methods and compositions for genome editing
WO2019217785A1 (en) * 2018-05-10 2019-11-14 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. High-throughput method for characterizing the genome-wide activity of editing nucleases in vitro
WO2019213910A1 (en) * 2018-05-10 2019-11-14 Syngenta Participations Ag Methods and compositions for targeted editing of polynucleotides
WO2019226953A1 (en) 2018-05-23 2019-11-28 The Broad Institute, Inc. Base editors and uses thereof
IL318469A (en) 2018-06-14 2025-03-01 Regeneron Pharma Non-human animals capable of reorganizing transgenic DH-DH, and their uses
CN112703250A (zh) * 2018-08-15 2021-04-23 齐默尔根公司 CRISPRi在高通量代谢工程中的应用
US12281338B2 (en) 2018-10-29 2025-04-22 The Broad Institute, Inc. Nucleobase editors comprising GeoCas9 and uses thereof
KR20210105914A (ko) 2018-12-20 2021-08-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 뉴클레아제-매개 반복부 팽창
CA3126009A1 (en) 2019-01-07 2020-07-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Small molecule degraders of fkbp12 via recruitment of von hippel-lindau e3 ubiquitin ligase (vhl) e3 ubiquitin ligase, and uses in dtag systems
US12351837B2 (en) 2019-01-23 2025-07-08 The Broad Institute, Inc. Supernegatively charged proteins and uses thereof
DE112020001306T5 (de) 2019-03-19 2022-01-27 Massachusetts Institute Of Technology Verfahren und zusammensetzungen zur editierung von nukleotidsequenzen
AU2020253532B2 (en) 2019-04-04 2024-06-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized coagulation factor 12 locus
ES2923629T3 (es) 2019-04-04 2022-09-29 Regeneron Pharma Métodos para la introducción sin cicatrices de modificaciones dirigidas en vectores de direccionamiento
US12473543B2 (en) 2019-04-17 2025-11-18 The Broad Institute, Inc. Adenine base editors with reduced off-target effects
GB201905651D0 (en) * 2019-04-24 2019-06-05 Lightbio Ltd Nucleic acid constructs and methods for their manufacture
WO2020224987A1 (en) * 2019-05-06 2020-11-12 Dsm Ip Assets B.V. Multipartite crispr donor
WO2020247452A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus with a beta-slip mutation and methods of use
CA3136478A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a limited lambda light chain repertoire expressed from the kappa locus and uses thereof
SG11202111256XA (en) 2019-06-07 2021-11-29 Regeneron Pharma Non-human animals comprising a humanized albumin locus
CN114630910A (zh) 2019-06-25 2022-06-14 伊纳瑞农业技术有限公司 改善的同源依赖修复基因组编辑
CN112175939A (zh) * 2019-07-03 2021-01-05 华大青兰生物科技(无锡)有限公司 一种基于同源序列的核酸拼接方法及其应用
GB201913898D0 (en) * 2019-09-26 2019-11-13 Lightbio Ltd Nucleic acid construct
US12435330B2 (en) 2019-10-10 2025-10-07 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for prime editing RNA
WO2021108363A1 (en) 2019-11-25 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-mediated upregulation of humanized ttr allele
EP4065711A1 (en) * 2019-11-27 2022-10-05 CRISPR Therapeutics AG Methods of synthesizing rna molecules
WO2021138480A1 (en) * 2019-12-30 2021-07-08 The Broad Institute, Inc. Guided excision-transposition systems
JP2023511626A (ja) 2020-01-28 2023-03-20 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ヒト化ｐｎｐｌａ３遺伝子座を含む非ヒト動物および使用方法
WO2021158883A1 (en) 2020-02-07 2021-08-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized klkb1 locus and methods of use
CN111334523A (zh) * 2020-03-13 2020-06-26 天津大学 一种大尺度dna的体内多轮迭代组装方法
EP4125348A1 (en) 2020-03-23 2023-02-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus comprising a v30m mutation and methods of use
JP2023525304A (ja) 2020-05-08 2023-06-15 ザ ブロード インスティテュート，インコーポレーテッド 標的二本鎖ヌクレオチド配列の両鎖同時編集のための方法および組成物
JP7758739B2 (ja) 2020-12-23 2025-10-22 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド アンカー改変型抗体をコードする核酸およびその使用
US20240141399A1 (en) * 2021-03-01 2024-05-02 The Regents Of The University Of California Methods for generating a crispr array
US11884915B2 (en) 2021-09-10 2024-01-30 Agilent Technologies, Inc. Guide RNAs with chemical modification for prime editing
CN113782103B (zh) * 2021-10-26 2024-07-09 大连大学 一种基于组合式酶切机制的dna矩阵处理方法
CN118251491A (zh) 2021-10-28 2024-06-25 瑞泽恩制药公司 用于敲除C5的CRISPR/Cas相关方法及组合物
CA3238939A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Gaurang Patel Mutant myocilin disease model and uses thereof
WO2023147547A1 (en) * 2022-01-31 2023-08-03 Integrated Dna Technologies, Inc. Recombination-based dna assembly methods and compositions
EP4475671A1 (en) 2022-02-07 2024-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for defining optimal treatment timeframes in lysosomal disease
CA3242729A1 (en) 2022-02-11 2023-08-17 Regeneron Pharma Compositions and methods for screening 4r tau targeting agents
WO2023235725A2 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr-based therapeutics for c9orf72 repeat expansion disease
WO2024073679A1 (en) 2022-09-29 2024-04-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Correction of hepatosteatosis in humanized liver animals through restoration of il6/il6r/gp130 signaling in human hepatocytes
WO2025015224A2 (en) * 2023-07-12 2025-01-16 BioSpyder Technologies, Inc. Treatment of samples containing nucleic acids
CN117904069B (zh) * 2024-01-04 2025-07-15 华中农业大学 VirEN蛋白介导的DNA拼接和基因编辑方法
CN117987436B (zh) * 2024-04-03 2024-06-25 南京鸿明生物科技有限公司 一种双链靶dna序列的制备方法
WO2025250495A1 (en) 2024-05-28 2025-12-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Acceleration of human hepatocyte engraftment in humanized liver animals by supplementing paracrine ligands or agonists that activate human liver regeneration signals

Family Cites Families (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6312892B1 (en) 1996-07-19 2001-11-06 Cornell Research Foundation, Inc. High fidelity detection of nucleic acid differences by ligase detection reaction
US6599692B1 (en) 1999-09-14 2003-07-29 Sangamo Bioscience, Inc. Functional genomics using zinc finger proteins
US20030104526A1 (en) 1999-03-24 2003-06-05 Qiang Liu Position dependent recognition of GNN nucleotide triplets by zinc fingers
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7105348B2 (en) 2000-10-31 2006-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6586251B2 (en) 2000-10-31 2003-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7026462B2 (en) 2000-12-07 2006-04-11 Sangamo Biosciences, Inc. Regulation of angiogenesis with zinc finger proteins
US7947469B2 (en) 2001-01-22 2011-05-24 Gendaq, Ltd. Modulation of HIV infection
CA2435394C (en) 2001-01-22 2018-01-09 Sangamo Biosciences, Inc. Modified zinc finger binding proteins
WO2003087341A2 (en) 2002-01-23 2003-10-23 The University Of Utah Research Foundation Targeted chromosomal mutagenesis using zinc finger nucleases
WO2003078619A1 (en) 2002-03-15 2003-09-25 Cellectis Hybrid and single chain meganucleases and use thereof
US20030232410A1 (en) 2002-03-21 2003-12-18 Monika Liljedahl Methods and compositions for using zinc finger endonucleases to enhance homologous recombination
JP2006502748A (ja) 2002-09-05 2006-01-26 カリフォルニア インスティテュート オブ テクノロジー 遺伝子ターゲッティングを誘発するキメラヌクレアーゼの使用方法
WO2004031346A2 (en) 2002-09-06 2004-04-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions concerning designed highly-specific nucleic acid binding proteins
US7888121B2 (en) 2003-08-08 2011-02-15 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for targeted cleavage and recombination
US8409861B2 (en) 2003-08-08 2013-04-02 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted deletion of cellular DNA sequences
EP1591521A1 (en) 2004-04-30 2005-11-02 Cellectis I-Dmo I derivatives with enhanced activity at 37 degrees C and use thereof
AU2005287278B2 (en) 2004-09-16 2011-08-04 Sangamo Biosciences, Inc. Compositions and methods for protein production
WO2006097854A1 (en) 2005-03-15 2006-09-21 Cellectis Heterodimeric meganucleases and use thereof
WO2006097784A1 (en) 2005-03-15 2006-09-21 Cellectis I-crei meganuclease variants with modified specificity, method of preparation and uses thereof
EP2092068B1 (en) 2006-12-14 2014-10-08 Dow AgroSciences LLC Optimized non-canonical zinc finger proteins
DK2255013T3 (en) * 2008-02-15 2016-09-12 Synthetic Genomics Inc Methods for in vitro joining and combinatorial assembly of nucleic acid molecules.
EP2206723A1 (en) 2009-01-12 2010-07-14 Bonas, Ulla Modular DNA-binding domains
US20110239315A1 (en) 2009-01-12 2011-09-29 Ulla Bonas Modular dna-binding domains and methods of use
CA2755192C (en) 2009-03-20 2018-09-11 Sangamo Biosciences, Inc. Modification of cxcr4 using engineered zinc finger proteins
US8772008B2 (en) 2009-05-18 2014-07-08 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for increasing nuclease activity
US20120178647A1 (en) 2009-08-03 2012-07-12 The General Hospital Corporation Engineering of zinc finger arrays by context-dependent assembly
US8518392B2 (en) 2009-08-14 2013-08-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Promoter-regulated differentiation-dependent self-deleting cassette
TR201903376T4 (tr) 2009-10-29 2019-04-22 Regeneron Pharma Çok fonksiyonlu alleller.
CA2783351C (en) 2009-12-10 2021-09-07 Regents Of The University Of Minnesota Tal effector-mediated dna modification
WO2011101696A1 (en) * 2010-02-18 2011-08-25 Cellectis Improved meganuclease recombination system
GB201009732D0 (en) 2010-06-10 2010-07-21 Gene Bridges Gmbh Direct cloning
WO2012051327A2 (en) 2010-10-12 2012-04-19 Cornell University Method of dual-adapter recombination for efficient concatenation of multiple dna fragments in shuffled or specified arrangements
WO2013141680A1 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Vilnius University RNA-DIRECTED DNA CLEAVAGE BY THE Cas9-crRNA COMPLEX
US9637739B2 (en) * 2012-03-20 2017-05-02 Vilnius University RNA-directed DNA cleavage by the Cas9-crRNA complex
FI3597749T3 (fi) 2012-05-25 2023-10-09 Univ California Menetelmiä ja koostumuksia rna-ohjattua kohde-dna-modifikaatiota varten ja rna-ohjattua transkription modulaatiota varten
KR101656236B1 (ko) 2012-10-23 2016-09-12 주식회사 툴젠 표적 DNA에 특이적인 가이드 RNA 및 Cas 단백질을 암호화하는 핵산 또는 Cas 단백질을 포함하는, 표적 DNA를 절단하기 위한 조성물 및 이의 용도
PT3363902T (pt) 2012-12-06 2019-12-19 Sigma Aldrich Co Llc Modificação e regulação de genoma baseadas em crispr
KR20150105956A (ko) 2012-12-12 2015-09-18 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 서열 조작 및 치료적 적용을 위한 시스템, 방법 및 조성물의 전달, 유전자 조작 및 최적화
US8697359B1 (en) 2012-12-12 2014-04-15 The Broad Institute, Inc. CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products
EP4282970A3 (en) 2012-12-17 2024-01-17 President and Fellows of Harvard College Rna-guided human genome engineering
JP2016507244A (ja) 2013-02-27 2016-03-10 ヘルムホルツ・ツェントルム・ミュンヒェン・ドイチェス・フォルシュンクスツェントルム・フューア・ゲズントハイト・ウント・ウムベルト（ゲーエムベーハー）Ｈｅｌｍｈｏｌｔｚ Ｚｅｎｔｒｕｍ ＭｕｅｎｃｈｅｎＤｅｕｔｓｃｈｅｓ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｚｅｎｔｒｕｍ ｆｕｅｒ Ｇｅｓｕｎｄｈｅｉｔ ｕｎｄ Ｕｍｗｅｌｔ （ＧｍｂＨ） Ｃａｓ９ヌクレアーゼによる卵母細胞における遺伝子編集
US10612043B2 (en) 2013-03-09 2020-04-07 Agilent Technologies, Inc. Methods of in vivo engineering of large sequences using multiple CRISPR/cas selections of recombineering events
EP2981617B1 (en) 2013-04-04 2023-07-05 President and Fellows of Harvard College Therapeutic uses of genome editing with crispr/cas systems
US10421957B2 (en) 2013-07-29 2019-09-24 Agilent Technologies, Inc. DNA assembly using an RNA-programmable nickase
EP3988649B1 (en) 2013-09-18 2024-11-27 Kymab Limited Methods, cells and organisms
AU2014368982B2 (en) 2013-12-19 2021-03-25 Amyris, Inc. Methods for genomic integration
US9850525B2 (en) 2014-01-29 2017-12-26 Agilent Technologies, Inc. CAS9-based isothermal method of detection of specific DNA sequence
JP2016006930A (ja) 2014-06-20 2016-01-14 ソニー株式会社 撮像装置および撮像方法
MX384887B (es) 2014-06-23 2025-03-14 Regeneron Pharma Ensamblaje de adn mediado por nucleasa.
EP3167071B1 (en) 2014-07-09 2020-10-07 Gen9, Inc. Compositions and methods for site-directed dna nicking and cleaving
US20160053272A1 (en) 2014-07-18 2016-02-25 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods Of Modifying A Sequence Using CRISPR
CN107429241B (zh) 2014-08-14 2025-10-24 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 Dna敲入系统
JP2017526690A (ja) 2014-08-25 2017-09-14 カーザ グローバル，リミティド ライアビリティ カンパニー Ｎ−アルキルポリアミンの製造方法
CN113584015B (zh) 2014-08-27 2025-05-02 新英格兰生物实验室公司 合成子的形成
CN104357438B (zh) * 2014-09-23 2020-04-24 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种dna组装和克隆的方法
JP6842417B2 (ja) 2014-12-16 2021-03-17 シー３ジェイ セラピューティクス インコーポレイテッド インビトロウイルスゲノム工学のための組成物及びその方法
WO2016109255A1 (en) 2014-12-30 2016-07-07 University Of South Florida Methods and compositions for cloning into large vectors
WO2016130697A1 (en) 2015-02-11 2016-08-18 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Methods and kits for generating vectors that co-express multiple target molecules
US20190330659A1 (en) 2016-07-15 2019-10-31 Zymergen Inc. Scarless dna assembly and genome editing using crispr/cpf1 and dna ligase
US20180105806A1 (en) 2016-09-07 2018-04-19 Massachusetts Institute Of Technology Method for rna-guided endonuclease-based dna assembly

Also Published As

Publication number Publication date
LT3354732T (lt) 2020-04-10
US11932859B2 (en) 2024-03-19
SI3354732T1 (sl) 2020-07-31
SG10201803444YA (en) 2018-06-28
AU2019200094A1 (en) 2019-01-31
DK3354732T3 (da) 2020-04-06
CA2953499A1 (en) 2015-12-30
CY1120520T1 (el) 2019-07-10
CN106715694A (zh) 2017-05-24
US20190194668A1 (en) 2019-06-27
NZ727952A (en) 2021-11-26
CN112029787A (zh) 2020-12-04
AU2015280120B2 (en) 2017-05-25
KR20170020505A (ko) 2017-02-22
US20240229048A1 (en) 2024-07-11
US10273488B2 (en) 2019-04-30
NZ765591A (en) 2022-09-30
MX2016016905A (es) 2017-08-10
PT3354732T (pt) 2020-04-02
HRP20200523T1 (hr) 2020-08-07
JP6737974B1 (ja) 2020-08-12
JP6684241B2 (ja) 2020-04-22
ES2781323T3 (es) 2020-09-01
JP2020202836A (ja) 2020-12-24
AU2015280120A1 (en) 2017-01-19
SMT202000174T1 (it) 2020-05-08
WO2015200334A1 (en) 2015-12-30
EP3708663A1 (en) 2020-09-16
KR20180011858A (ko) 2018-02-02
PL3155099T3 (pl) 2018-08-31
WO2015200334A4 (en) 2016-03-17
EP3354732B1 (en) 2020-01-08
US9738897B2 (en) 2017-08-22
CN106715694B (zh) 2020-10-20
EP3155099A1 (en) 2017-04-19
MX379237B (es) 2025-03-10
AU2017213564B2 (en) 2018-10-18
DK3155099T3 (en) 2018-05-07
KR102237151B1 (ko) 2021-04-07
HK1256688A1 (en) 2019-10-04
RU2707911C2 (ru) 2019-12-02
AU2019200094B2 (en) 2021-06-24
US20180002708A1 (en) 2018-01-04
SG11201610481YA (en) 2017-01-27
CA2953499C (en) 2023-10-24
US9580715B2 (en) 2017-02-28
HUE049405T2 (hu) 2020-09-28
MX2021000857A (es) 2021-07-28
US20200208161A1 (en) 2020-07-02
MX384887B (es) 2025-03-14
PL3354732T3 (pl) 2020-06-15
CY1122962T1 (el) 2021-10-29
EP3354732A1 (en) 2018-08-01
IL249612B (en) 2021-04-29
KR101822902B1 (ko) 2018-01-30
JP2017518757A (ja) 2017-07-13
US20150376628A1 (en) 2015-12-31
BR112016030145A2 (pt) 2018-02-20
ES2666179T3 (es) 2018-05-03
JP7058306B2 (ja) 2022-04-21
RU2017101329A3 (ru) 2019-02-15
JP2017113031A (ja) 2017-06-29
IL249612A0 (en) 2017-02-28
US20160115486A1 (en) 2016-04-28
CN112029787B (zh) 2024-07-19
EP3155099B1 (en) 2018-03-21
RS60366B1 (sr) 2020-07-31
BR112016030145A8 (pt) 2018-12-11
AU2017213564A1 (en) 2017-08-31
JP2020120662A (ja) 2020-08-13
JP6336140B2 (ja) 2018-06-06
US10626402B2 (en) 2020-04-21
PT3155099T (pt) 2018-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2017101329A (ru) Опосредованная нуклеазой сборка днк
Adli The CRISPR tool kit for genome editing and beyond
AU2021212165B2 (en) Genomewide unbiased identification of dsbs evaluated by sequencing (guide-seq)
JP2017113031A5 (ru)
JP2020156485A5 (ru)
JP2016531569A5 (ru)
EP3347467B1 (en) Full interrogation of nuclease dsbs and sequencing (find-seq)
Bennett et al. Library construction for ancient genomics: single strand or double strand?
JP2015523866A5 (ru)
JP2018529326A5 (ru)
MX2018000729A (es) Métodos para amplificar las secuencias de ácido nucleico.
WO2020120711A8 (en) Method of nucleic acid enrichment using site-specific nucleases followed by capture
JP2018535689A5 (ru)
CN104805078A (zh) 用于高效基因组编辑的rna分子的设计、合成及其应用
RU2016106649A (ru) Геномная инженерия
RU2016104056A (ru) Мультиплексная геномная инженерия, направляемая рнк
RU2015143201A (ru) Способы идентификации вариантных сайтов распознавания для редкощепящих сконструированных средств для индукции двунитевого разрыва и композиции с ними, и их применения
RU2016101246A (ru) Направленная интеграция
JP2020517299A5 (ru)
WO2005049848A3 (en) Nucleic acid hybridization methods
WO2018067447A1 (en) Improved methods for identifying double strand break sites
DE602005022443D1 (de) Schnelle synthese von oligonukleotiden
EP4471157A3 (en) Methods of enriching a target sequence from a sequencing library using adaptors
ATE420975T1 (de) Methode zur linearen nicht-selektiven amplifikation von nukleinsäuren