RU2011367C1

RU2011367C1 - Method of diagnosis of helminthiasis in animals

Info

Publication number: RU2011367C1
Authority: RU
Inventors: А.Н. Островский; М.Н. Кувичкин
Original assignee: Донской сельскохозяйственный институт
Priority date: 1991-07-15
Filing date: 1991-07-15
Publication date: 1994-04-30

Abstract

FIELD: veterinary. SUBSTANCE: feces are mixed with flotation liquid following by filtration and microscopic examination of suspension. The source of flotation liquid: saturated solution of sodium chloride and ammonium nitrate taken at ratio 1: 1, density is 1.242. Before microscopic examination 30% solution of glycerol is added. EFFECT: improved method of diagnosis.

Description

Изобретение относится к сельскому хозяйству, направлено на совершенствование методов диагностики гельминтозов животных и может быть использовано в ветеринарии для своевременного выявления больных животных с целью проведения оздоровительных мероприятий и предотвращения убытков в животноводстве. The invention relates to agriculture, is aimed at improving methods for the diagnosis of helminthiasis of animals and can be used in veterinary medicine for the timely detection of sick animals in order to conduct recreational activities and prevent losses in animal husbandry.

Одним из первоначальных методов обнаружения яиц гельминтов является метод Дарлинга (1911). В стакане с водой размешивают 3 г фекалий, процеживают в центрифужные пробирки, центрифугируют 1-2 мин, после чего верхний слой жидкости сливают, а к осадку добавляют смесь равных частей насыщенного раствора соли и глицерина. Смесь взбалтывают и вновь центрифугируют 1-2 мин. Проволочной петлей снимают поверхностную пленку и исследуют на предметном стекле под микроскопом [1] . One of the initial methods for detecting helminth eggs is the Darling method (1911). 3 g of feces is stirred in a glass of water, filtered into centrifuge tubes, centrifuged for 1-2 minutes, after which the upper layer of liquid is drained, and a mixture of equal parts of a saturated solution of salt and glycerol is added to the precipitate. The mixture is shaken and centrifuged again for 1-2 minutes. A surface film is removed with a wire loop and examined on a microscope slide [1].

Недостатком этого метода является двойное центрифугирование, что увеличивает длительность исследования, приводит к механической потере частиц яиц гельминтов. Кроме того флотационные свойства используемой смеси низки в отношении яиц отдельных гельминтов. The disadvantage of this method is double centrifugation, which increases the duration of the study, leads to mechanical loss of particles of helminth eggs. In addition, the flotation properties of the mixture used are low in relation to eggs of individual helminths.

Известны также методы флотации с растворами нитрата свинца, гранулированной или обычной амиачной селитры, модификации метода Дарлинга по Котельникову и Хренову [2] . Also known are flotation methods with solutions of lead nitrate, granular or conventional ammonium nitrate, and modifications of the Darling method according to Kotelnikov and Khrenov [2].

Пробы фекалий (3 г) тщательно размешивают в стаканчиках, добавляя в них порциями воду. Взвесь каждой пробы фильтруют через ситечко с ячейками 0,5 х 0,5 мм в другой стаканчик и отстаивают 5 мин. Верхний слой сливают, оставляя осадок с надосадочной жидкостью в таком количестве, чтобы он поместился в обычную центрифужную пробирку. Взболтав осадок, переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 1-2 мин при 1000-1500 об/мин. Затем воду до осадка сливают, а к осадку добавляют раствор аммиачной селитры, взбалтывают и центрифугируют при том же режиме. После этого петлей снимают 3 капли с поверхности взвеси на предметное стекло и микроскопируют. Samples of feces (3 g) are thoroughly mixed in cups, adding water in portions. The suspension of each sample is filtered through a strainer with cells of 0.5 x 0.5 mm into another cup and left to stand for 5 minutes. The top layer is drained, leaving a precipitate with the supernatant in such an amount that it fits into a conventional centrifuge tube. Shaking the precipitate, transfer to a centrifuge tube and centrifuge for 1-2 minutes at 1000-1500 rpm. Then the water is drained to the precipitate, and a solution of ammonium nitrate is added to the precipitate, shaken and centrifuged under the same regime. After this, 3 drops are removed from the surface of the suspension on a glass slide using a loop and microscopic.

Недостатками указанных методов являются: продолжительность исследований, так как предусматривается либо отстаивание взвеси фекалий (5-20 мин) с последующим центрифугированием, либо двойное центрифугирование с последующим наложением на поверхность взвеси обезжиренного предметного стекла. Кроме того, при использовании насыщенного раствора нитрата свинца, имеющего плотность 1,5, наблюдается деформация яйцевых элементов, и в поле зрения появляются примеси, затрудняющие исследования. The disadvantages of these methods are: the duration of the studies, since it is envisaged either to sediment suspension of feces (5-20 min), followed by centrifugation, or double centrifugation, followed by the application of a fat-free glass slide onto the surface of the suspension. In addition, when using a saturated solution of lead nitrate with a density of 1.5, deformation of egg elements is observed, and impurities appear in the field of view, which impede research.

Цель изобретения - улучшение диагностической эффективности предлагаемого метода в результате сокращения времени и повышения точности исследования. The purpose of the invention is to improve the diagnostic efficiency of the proposed method as a result of reducing time and improving the accuracy of the study.

Цель достигается тем, что в качестве флотационной жидкости используется смесь насыщенных растворов поваренной соли и гранулированной аммиачной селитры в соотношении 1: 1, плотностью 1,242, а также тем, что в исследуемый материал, взятый металлической петлей, добавляется 30% -ный водный раствор глицерина 1: 1. The goal is achieved by the fact that a mixture of saturated solutions of sodium chloride and granular ammonium nitrate in a ratio of 1: 1, density 1.242 is used as a flotation liquid, as well as by adding a 30% aqueous solution of glycerin 1 to the test material taken with a metal loop : 1.

Применяемая флотационная жидкость позволяет обнаруживать яйца гельминтов уже через 1 мин после центрифугирования взвеси фекалий при 1000-1500 об/мин. Это объясняется тем, что она имеет достаточно высокий удельный вес (1,242). Такая плотность выше, чем у насыщенного раствора поваренной соли (уд. вес 1,2), что повышает эффективность флотации, но ниже, чем у насыщенного раствора гранулированной аммиачной селитры (уд. вес 1,3), что снижает количество примесей в исследуемом материале и повышает точность обнаружения яиц гельминтов, не вызывает их деформацию. Добавление 30% -ного водного раствора глицерина приводит к коагуляции частиц примесей, просветляет препарат, предотвращает кристаллизацию и высыхание материала в жаркое время года. The flotation fluid used makes it possible to detect helminth eggs within 1 min after centrifugation of the fecal suspension at 1000-1500 rpm. This is because it has a fairly high specific gravity (1.242). Such a density is higher than that of a saturated solution of sodium chloride (specific gravity 1.2), which increases the flotation efficiency, but lower than that of a saturated solution of granular ammonium nitrate (specific gravity 1.3), which reduces the amount of impurities in the test material and increases the accuracy of detection of helminth eggs, does not cause their deformation. Adding a 30% aqueous solution of glycerol leads to coagulation of particles of impurities, enlightens the drug, prevents crystallization and drying of the material in the hot season.

Способ осуществляют следующим образом. The method is as follows.

Навеску фекалий 3 г помещают в фарфоровую ступку, растирают пестиком и порциями при постоянном помешивании добавляют флотационную жидкость (смесь насыщенных растворов поваренной соли и гранулированной аммиачной селитры в соотношении 1: 1, плотностью 1,242) до объема 50 мл. Смесь фильтруют через ситечко с величиной сторон ячеек 0,25-0,3 мм в стаканчик, наливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 1 мин при 1000-1500 об/мин. Затем копрологической петлей диаметром 8-10 мм снимают 3 капли поверхностной пленки, переносят на предметное стекло, добавляют в каждую из них по капле 30% -ного раствора глицерина и микроскопируют. A portion of feces 3 g is placed in a porcelain mortar, triturated with a pestle and flotation liquid (a mixture of saturated solutions of sodium chloride and granular ammonium nitrate in a ratio of 1: 1, density 1.242) is added in portions with constant stirring to a volume of 50 ml. The mixture is filtered through a strainer with a cell side size of 0.25-0.3 mm in a cup, poured into centrifuge tubes and centrifuged for 1 min at 1000-1500 rpm. Then 3 drops of the surface film are removed with a coprological loop with a diameter of 8-10 mm, transferred to a glass slide, a drop of a 30% glycerol solution is added to each of them and microscopic.

Предлагаемый метод сокращает время и повышает качество исследований. The proposed method reduces time and improves the quality of research.

П р и м е р 1. Взято 45 проб фекалий лошадей в возрасте 5-6 лет. Из них 15 проб первого контроля исследовали по методу Дарлинга, 15 проб второго контроля - по методу Дарлинга в модификации Котельникова и Хренова с насыщенным раствором гранулированной аммиачной селитры и 15 опытных проб - по предлагаемому способу. При этом в одной капле поверхностной пленки первого контроля обнаруживалось 46 яиц стронгилят, второго контроля - 63, опыта - 74, т. е. в 1,17-1,6 раза больше. При этом поле зрения в опытных образцах было более светлым и свободным от постронних примесей. На исследование одной пробы первого контроля затрачивалось 9-10 мин, второго - 14-15 мин, а опыта - 4-5 мин, т. е. в 2-3 раза меньше контрольных. PRI me R 1. Taken 45 samples of feces of horses aged 5-6 years. Of these, 15 samples of the first control were studied by the Darling method, 15 samples of the second control — by the Darling method in the modification of Kotelnikov and Khrenov with a saturated solution of granular ammonium nitrate and 15 experimental samples — by the proposed method. At the same time, 46 eggs of strongilates were found in one drop of the surface film of the first control, 63 eggs of the second control, 74 experiments, i.e. 1.17-1.6 times more. In this case, the field of view in the experimental samples was lighter and free from foreign impurities. The study of one sample of the first control took 9-10 minutes, the second - 14-15 minutes, and the experiment - 4-5 minutes, i.e., 2-3 times less than the control.

П р и м е р 2. Взято 90 проб фекалий овец в возрасте от 1 года до 2 лет. Из них 30 проб первого контроля исследовали по методу Дарлинга, 30 проб второго контроля - по методу Дарлинга в модификации Котельникова и Хренова с насыщенным раствором гранулированной аммиачной селитры и 30 опытных проб по предлагаемому способу. Получены следующие результаты: при исследовании по методу Дарлинга в одной капле поверхностной пленки обнаруживалось в среднем по 3 яйца стронгилят, модификации Котельникова и Хренова - по 5, а по нашей методике - 7, т. е. в 1,4-2,33 раза больше. При этом поле зрения в опытных образцах было более светлым и без посторонних примесей. Длительность исследования была аналогичной примеру 1. PRI me R 2. Taken 90 samples of feces of sheep aged from 1 year to 2 years. Of these, 30 samples of the first control were studied by the Darling method, 30 samples of the second control — by the Darling method in the modification of Kotelnikov and Khrenov with a saturated solution of granular ammonium nitrate and 30 experimental samples by the proposed method. The following results were obtained: in the Darling study, in one drop of the surface film, an average of 3 eggs each were found each, 5 Kotelnikov and Khrenov modifications, and 7 according to our method, i.e. 1.4-2.33 times more. At the same time, the field of view in the experimental samples was brighter and without impurities. The duration of the study was similar to example 1.

Предлагаемый способ повышает диагностическую эффективность за счет сокращения в 2-3 раза времени исследования, увеличения количества обнаруженных яиц гельминтов у лошадей в 1,17-1,6 раза, овец - 1,4-2,33 раза. При этом не установлено деформации яйцевых элементов, а поле зрения становится более светлым и свободным от посторонних примесей. The proposed method improves diagnostic efficiency by reducing 2-3 times the study time, increasing the number of detected helminth eggs in horses by 1.17-1.6 times, sheep - 1.4-2.33 times. In this case, no deformation of the egg elements was established, and the field of view becomes lighter and free from impurities.

Claims

METHOD FOR DIAGNOSTIC OF ANIMAL HELMINTOSIS, including taking feces, rubbing and mixing them with flotation liquid, filtering the suspension, centrifuging, removing eggs, microscopy, characterized in that, in order to increase accuracy and reduce the time of investigation, a saturated sodium chloride solution is used as flotation liquid and ammonium nitrate, taken in a 1: 1 ratio with a density of 1.242, and after removing the eggs, a 30% aqueous glycerol solution is added to the test material before microscopy.